JPH0662834A - 白血球細胞溶解剤を含む微生物標品に関する輸送培地 - Google Patents
白血球細胞溶解剤を含む微生物標品に関する輸送培地Info
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- JPH0662834A JPH0662834A JP12163293A JP12163293A JPH0662834A JP H0662834 A JPH0662834 A JP H0662834A JP 12163293 A JP12163293 A JP 12163293A JP 12163293 A JP12163293 A JP 12163293A JP H0662834 A JPH0662834 A JP H0662834A
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 ヒトおよび動物の体液試料用の輸送培地を提
供する。 【構成】 改良された輸送培地は非イオン性の界面活性
剤、好適にはサポニンが含まれている。というのも哺乳
動物の体の各部からの微生物学的試料の輸送において白
血球の溶解が利用されるからである。本改良輸送培地は
試料中に存在する白血球（微生物及びその抗原部位を破
壊し得る）を急速に溶解する溶解剤、好適にはサポニン
を含んでいる。微生物の生育能力が保持されるべきなら
ば、本改良培地には、微生物学的試料の生存を可能にす
る適当な緩衝液と炭素源も含まれるべきである。本発明
における用途に適した好適な輸送培地は以下の培地の
（サポニンの添加による）改変物を含んでいる：（１）
チャコール（Ｃｈａｒｃｏａｌ）の入っていないアミー
ズ（Ａｍｉｅｓ）輸送培地、（２）チャコールの入った
アミーズ輸送培地、および（３）スチュアート（Ｓｔｕ
ａｒｔ）輸送培地。
供する。 【構成】 改良された輸送培地は非イオン性の界面活性
剤、好適にはサポニンが含まれている。というのも哺乳
動物の体の各部からの微生物学的試料の輸送において白
血球の溶解が利用されるからである。本改良輸送培地は
試料中に存在する白血球（微生物及びその抗原部位を破
壊し得る）を急速に溶解する溶解剤、好適にはサポニン
を含んでいる。微生物の生育能力が保持されるべきなら
ば、本改良培地には、微生物学的試料の生存を可能にす
る適当な緩衝液と炭素源も含まれるべきである。本発明
における用途に適した好適な輸送培地は以下の培地の
（サポニンの添加による）改変物を含んでいる：（１）
チャコール（Ｃｈａｒｃｏａｌ）の入っていないアミー
ズ（Ａｍｉｅｓ）輸送培地、（２）チャコールの入った
アミーズ輸送培地、および（３）スチュアート（Ｓｔｕ
ａｒｔ）輸送培地。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトおよび動物の体の
様々な部位からの試料を採取し、配送し、そして遅延加
工するための、サポニンなどの適当な溶解剤を含む輸送
培地に関する。該輸送培地は、試料中の白血球が検定前
に下記微生物を破壊することなく、臨床試料の微生物を
分離および同定する目的に有用である。
様々な部位からの試料を採取し、配送し、そして遅延加
工するための、サポニンなどの適当な溶解剤を含む輸送
培地に関する。該輸送培地は、試料中の白血球が検定前
に下記微生物を破壊することなく、臨床試料の微生物を
分離および同定する目的に有用である。
【０００２】
【従来の技術】ヒトまたは動物の体の各部からの試料の
採取、輸送および遅延加工は、疾病に関連する微生物の
存在に関してその試料を検定することにおいて重要であ
る。試料は、研究所での検定のために試料を保存または
輸送している間に微生物が死んだり抗原（化学）活性能
を失わないように、輸送培地において適当な栄養素およ
び炭素源で維持されなければならない。しかしながら、
しばしば食細胞（白血球）が試料中の多くの微生物を破
壊し、検定によって試料中に本来存在していた微生物の
最初の濃度の正確な指標が提供されないことになる。
採取、輸送および遅延加工は、疾病に関連する微生物の
存在に関してその試料を検定することにおいて重要であ
る。試料は、研究所での検定のために試料を保存または
輸送している間に微生物が死んだり抗原（化学）活性能
を失わないように、輸送培地において適当な栄養素およ
び炭素源で維持されなければならない。しかしながら、
しばしば食細胞（白血球）が試料中の多くの微生物を破
壊し、検定によって試料中に本来存在していた微生物の
最初の濃度の正確な指標が提供されないことになる。
【０００３】微生物標品に関する種々の輸送培地は、疾
病に関連する微生物の分離のために、試料の採取、配送
および遅延加工に広く利用されている。例えば、アミエ
ス（Ａｍｉｅｓ），Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉｃ．Ｈｅａ
ｌｔｈ，５８，２９６（１９６７）；スチュアート（Ｓ
ｔｕａｒｔ）ら、Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉｃ．Ｈｅａｌ
ｔｈ，４５，７３（１９５４）；アイセンベルグ（Ｉｓ
ｅｎｂｅｒｇ）ら，Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃ
ａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；レネッテ（Ｌｅｎｎ
ｅｔｔｅ）ら，（編），第４版，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓ
ｏｃｉｅｔｙｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ワシン
トン，Ｄ．Ｃ．（１９８５）；ベイリー（Ｂａｉｌｅ
ｙ）ら，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ，”Ｓｐｅｃｉｍｅｎ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ ａ
ｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ”，２６−２
７，Ｔｈｅ Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｂｙ Ｃｏ．，ミズーリ
州、セントルイス（１９７４）；および、マクファジン
（ＭａｃＦａｄｄｉｎ），”Ｍｅｄｉａ ｆｏｒ Ｉｓ
ｏｌａｔｉｏｎ−Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ Ｉｄｅｎｔ
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ”，１，Ｗｉｌｌｉ
ａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，メリーランド州、バ
ルチモア（１９８５）参照；また、”Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ ＢＢＬ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ”，第６版，パワー
（Ｐｏｗｅｒ）ら（編），Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎ
ｓｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，
メリーランド州、コックスビレ（１９８８）も参照。こ
れら各々の開示は本明細書中では参考文献として引用さ
れている。微生物標品に関するこれらの輸送培地は病
院、診療所、医療事業所、他の健康医院において、そし
て微生物標品に関する一般的な採取および輸送装置にお
いて広く利用されている。
病に関連する微生物の分離のために、試料の採取、配送
および遅延加工に広く利用されている。例えば、アミエ
ス（Ａｍｉｅｓ），Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉｃ．Ｈｅａ
ｌｔｈ，５８，２９６（１９６７）；スチュアート（Ｓ
ｔｕａｒｔ）ら、Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉｃ．Ｈｅａｌ
ｔｈ，４５，７３（１９５４）；アイセンベルグ（Ｉｓ
ｅｎｂｅｒｇ）ら，Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃ
ａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；レネッテ（Ｌｅｎｎ
ｅｔｔｅ）ら，（編），第４版，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓ
ｏｃｉｅｔｙｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ワシン
トン，Ｄ．Ｃ．（１９８５）；ベイリー（Ｂａｉｌｅ
ｙ）ら，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ，”Ｓｐｅｃｉｍｅｎ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ ａ
ｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ”，２６−２
７，Ｔｈｅ Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｂｙ Ｃｏ．，ミズーリ
州、セントルイス（１９７４）；および、マクファジン
（ＭａｃＦａｄｄｉｎ），”Ｍｅｄｉａ ｆｏｒ Ｉｓ
ｏｌａｔｉｏｎ−Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ Ｉｄｅｎｔ
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ”，１，Ｗｉｌｌｉ
ａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，メリーランド州、バ
ルチモア（１９８５）参照；また、”Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ ＢＢＬ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ”，第６版，パワー
（Ｐｏｗｅｒ）ら（編），Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎ
ｓｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，
メリーランド州、コックスビレ（１９８８）も参照。こ
れら各々の開示は本明細書中では参考文献として引用さ
れている。微生物標品に関するこれらの輸送培地は病
院、診療所、医療事業所、他の健康医院において、そし
て微生物標品に関する一般的な採取および輸送装置にお
いて広く利用されている。
【０００４】従って、検定研究所までの保存および輸送
中において、試料中の微生物を成育可能なまま維持し、
あるいはその微生物の抗原部位の活性能を維持する微生
物輸送培地の提供が求められていると考えられる。
中において、試料中の微生物を成育可能なまま維持し、
あるいはその微生物の抗原部位の活性能を維持する微生
物輸送培地の提供が求められていると考えられる。
【０００５】サポニンは、その溶解作用が赤血球、白血
球および血小板などの血液試料中の哺乳動物細胞の代謝
活性によって生じるバックグラウンド干渉を減らすこと
から、放射分析の細菌学的な培養系において用いられる
増殖培地への添加物として有用なものと記載されてい
る。例えば、米国特許第３，８５８，０４５号および米
国特許第４，９９４，３７８号（バックグラウンド干渉
を減少させるためにサポニンとリン脂質を混合して細菌
増殖培地に添加している）を参照。これら特許の両方の
開示は本明細書中では参考文献として引用されている。
サポニンを含む菌類増殖培地を記載したドルン（Ｄｏｒ
ｎ）らの米国特許第４，１４４，１３３号も参照された
い。
球および血小板などの血液試料中の哺乳動物細胞の代謝
活性によって生じるバックグラウンド干渉を減らすこと
から、放射分析の細菌学的な培養系において用いられる
増殖培地への添加物として有用なものと記載されてい
る。例えば、米国特許第３，８５８，０４５号および米
国特許第４，９９４，３７８号（バックグラウンド干渉
を減少させるためにサポニンとリン脂質を混合して細菌
増殖培地に添加している）を参照。これら特許の両方の
開示は本明細書中では参考文献として引用されている。
サポニンを含む菌類増殖培地を記載したドルン（Ｄｏｒ
ｎ）らの米国特許第４，１４４，１３３号も参照された
い。
【０００６】最近の研究では、ＢＡＣＴＥＣ ６６０
標準血液培養増殖培地がサポニンを含む同じ培地と比較
されている。その研究の結果の要旨がジャンキンド（Ｊ
ｕｎｇｋｉｎｄ）らにより、ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＳＯＣ
ＩＥＴＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ−ＡＢＳＴ
ＲＡＣＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＡＮＮＵＡＬ ＭＥＥＴＩ
ＮＧ−１９９０，Ｃ−２７７，３９０（１９９０）にお
いて報告されており、その開示は本明細書中では参考文
献として引用されている。サポニンは血液細胞代謝によ
るバックグラウンドシグナルを減らし、白血球から食作
用を受けた細菌を解放し、その結果、微生物の検出を改
善させるために培養（増殖）培地に用いられた。この研
究の結果は実施例１および２に更に詳細に記載されてい
る。
標準血液培養増殖培地がサポニンを含む同じ培地と比較
されている。その研究の結果の要旨がジャンキンド（Ｊ
ｕｎｇｋｉｎｄ）らにより、ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＳＯＣ
ＩＥＴＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ−ＡＢＳＴ
ＲＡＣＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＡＮＮＵＡＬ ＭＥＥＴＩ
ＮＧ−１９９０，Ｃ−２７７，３９０（１９９０）にお
いて報告されており、その開示は本明細書中では参考文
献として引用されている。サポニンは血液細胞代謝によ
るバックグラウンドシグナルを減らし、白血球から食作
用を受けた細菌を解放し、その結果、微生物の検出を改
善させるために培養（増殖）培地に用いられた。この研
究の結果は実施例１および２に更に詳細に記載されてい
る。
【０００７】サポニンを用いた細菌学的培養系は米国特
許第４，１３１，５１２号に記載されている。サポニン
は、微生物病原体を遠心操作により血液試料から分離さ
せるという、溶解作用の点から用いられている。放出さ
れた病原体は試料の遠心操作中に懸濁液から出てきて緩
衝剤と血液試料の間の界面に隣接した層に回収されるか
あるいは緩衝剤に入る。この微生物病原体は緩衝剤中お
よび緩衝剤上に分離することができ、以降の培養および
分析に用いられる。
許第４，１３１，５１２号に記載されている。サポニン
は、微生物病原体を遠心操作により血液試料から分離さ
せるという、溶解作用の点から用いられている。放出さ
れた病原体は試料の遠心操作中に懸濁液から出てきて緩
衝剤と血液試料の間の界面に隣接した層に回収されるか
あるいは緩衝剤に入る。この微生物病原体は緩衝剤中お
よび緩衝剤上に分離することができ、以降の培養および
分析に用いられる。
【０００８】食細胞を破裂させるサポニンを用いた微生
物および菌類感染の迅速な検出法は米国特許第５，０４
３，２６７号に記載されている。この方法は宿主の食細
胞により食作用を受け部分的に消化された病原体に関す
るものである。該方法には、食細胞を含む細胞集団を含
む宿主検定試料からの分離、食細胞を破裂させることは
できるが食作用を受けていない病原体は破裂させること
のできないサポニンと細胞集団の接触による病原体の少
なくとも１つの可溶性成分の放出；消化された病原体の
少なくとも１つの可溶性成分の食作用を受けていない病
原体からの分離；可溶性成分に対する生物特異的な結合
相手と可溶性成分との接触；および結合の度合いの測定
が含まれる。この特許には輸送培地に関する組成物につ
いては何の開示もなされていない。
物および菌類感染の迅速な検出法は米国特許第５，０４
３，２６７号に記載されている。この方法は宿主の食細
胞により食作用を受け部分的に消化された病原体に関す
るものである。該方法には、食細胞を含む細胞集団を含
む宿主検定試料からの分離、食細胞を破裂させることは
できるが食作用を受けていない病原体は破裂させること
のできないサポニンと細胞集団の接触による病原体の少
なくとも１つの可溶性成分の放出；消化された病原体の
少なくとも１つの可溶性成分の食作用を受けていない病
原体からの分離；可溶性成分に対する生物特異的な結合
相手と可溶性成分との接触；および結合の度合いの測定
が含まれる。この特許には輸送培地に関する組成物につ
いては何の開示もなされていない。
【０００９】サポニンを利用して喀啖試料の粘性を減少
させ微生物学的病原体を試料中に均一に分散させるｉｎ
ｖｉｔｒｏ診断技術は米国特許第４，０５３，３６３
号に記載されている。この特許は、サポニンが白血球計
数に影響することなく赤血球を溶解する、強力な溶血剤
（赤血球溶解剤）であることを開示している（３段目、
１６−２３行を参照）。
させ微生物学的病原体を試料中に均一に分散させるｉｎ
ｖｉｔｒｏ診断技術は米国特許第４，０５３，３６３
号に記載されている。この特許は、サポニンが白血球計
数に影響することなく赤血球を溶解する、強力な溶血剤
（赤血球溶解剤）であることを開示している（３段目、
１６−２３行を参照）。
【００１０】サポニンを含む増殖培地は、テイラー（Ｔ
ａｙｌｏｒ）ら、”Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉａｌ Ｙｉｅｌｄ ｆｒｏｍ Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ Ｄｉ
ａｌｙｓｉｓ Ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ Ｅｆｆｌｕｅ
ｎｔ ａｆｔｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｏｒ Ｐｈｙｓ
ｉｃａｌ Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈａｇｏｃ
ｙｔｅｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２５（３），５８０−５
８３（１９８７）に報告されたように、連続的な巡回式
腹膜透析排出物の研究所診断用に微生物を増殖させるこ
とにおいて用いられる。テイラーらは、臨床腹膜炎排出
物標品が冷やされた透析バッグで研究所に配達され、サ
ポニンを含む増殖培地で培養される前に超音波処理され
ることを報告した。この方法は、慣例の培地上での標準
的な培養に比べて有意に多数のコロニーが増殖する結果
を得た。ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０、サポニン ジギ
トニン、他のポリオキシエチレン付加物、またはトリト
ン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘが、血液培養における細菌への毒
性効果が最小で且つ溶血作用を促進するために血液培養
培地に添加される系を記載した、ジアート（Ｚｉｅｒｄ
ｔ）”Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｌｙｓｅｄ−Ｂｌｏｏｄ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”，Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ，２３（３），４５２−４５５（１９８６）も参照。
ａｙｌｏｒ）ら、”Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉａｌ Ｙｉｅｌｄ ｆｒｏｍ Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ Ｄｉ
ａｌｙｓｉｓ Ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ Ｅｆｆｌｕｅ
ｎｔ ａｆｔｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｏｒ Ｐｈｙｓ
ｉｃａｌ Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈａｇｏｃ
ｙｔｅｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２５（３），５８０−５
８３（１９８７）に報告されたように、連続的な巡回式
腹膜透析排出物の研究所診断用に微生物を増殖させるこ
とにおいて用いられる。テイラーらは、臨床腹膜炎排出
物標品が冷やされた透析バッグで研究所に配達され、サ
ポニンを含む増殖培地で培養される前に超音波処理され
ることを報告した。この方法は、慣例の培地上での標準
的な培養に比べて有意に多数のコロニーが増殖する結果
を得た。ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０、サポニン ジギ
トニン、他のポリオキシエチレン付加物、またはトリト
ン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘが、血液培養における細菌への毒
性効果が最小で且つ溶血作用を促進するために血液培養
培地に添加される系を記載した、ジアート（Ｚｉｅｒｄ
ｔ）”Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｌｙｓｅｄ−Ｂｌｏｏｄ
Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”，Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ，２３（３），４５２−４５５（１９８６）も参照。
【００１１】以上をまとめると、関連分野の何れもサポ
ニンを含む輸送培地の組成物、あるいは試料中の微生物
の生存力またはその抗原部位の活性能を維持したまま食
細胞を溶解するのに適当な濃度での輸送培地におけるサ
ポニンの利用を記載していない。
ニンを含む輸送培地の組成物、あるいは試料中の微生物
の生存力またはその抗原部位の活性能を維持したまま食
細胞を溶解するのに適当な濃度での輸送培地におけるサ
ポニンの利用を記載していない。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の求め
る目的は、培地中の白血球が微生物学的標品を攻撃し破
壊するのを防ぐ一方で、微生物学的標品の生存能力を保
持する成分を含む輸送培地を提供することである。
る目的は、培地中の白血球が微生物学的標品を攻撃し破
壊するのを防ぐ一方で、微生物学的標品の生存能力を保
持する成分を含む輸送培地を提供することである。
【００１３】もう一つの目的は、試料中の微生物の抗原
部位の活性能を保持する輸送培地の提供である。
部位の活性能を保持する輸送培地の提供である。
【００１４】
【課題を解決するための手段】これらおよび他の目的
は、非イオン性溶解剤、好ましくは白血球を溶解するサ
ポニン、を含む改善された輸送培地を提供する本発明に
より達成される。改良された輸送培地は微生物およびそ
の抗原部位を破壊し得る、試料中に存在する白血球を急
速に溶解する好適な溶解剤、サポニンを含んでいる。好
適な溶解剤であるサポニンは、約０．１ｍｇから約１０
ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地、好適には約０．５ｍｇか
ら約２ｍｇまでのサポニン／ｍｌ輸送培地、より好適に
は約０．７５ｍｇから約２ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培
地、そして最も好適には約１ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培
地の濃度で存在する。さらに、これらの界面活性溶解剤
は輸送培地において、サポニンを保護する混合ミセルを
形成するリン脂質、適切にはＬ−ａ レシチン（Ｌｅｃ
ｉｔｈｉｎ）（ホスファチジルコリン）と混合してもよ
い。他のリン脂質としては、ホスファチジルセリン、ホ
スファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミ
ンおよびスフィンゴミエリンが含まれる。微生物の成育
能力が保持されるならば、改良輸送培地には微生物学的
試料の生存可能な適した緩衝液や炭素源も含まれるべき
である。本発明に適した好適な輸送培地は、サポニン修
飾された（１）チャコールの入っていないアミーズ輸送
培地（Ａｍｉｅｓ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ｍｅｄｉｕ
ｍ）、（２）チャコールの入ったアミーズ輸送培地、お
よび（３）スチュアート輸送培地（Ｓｔｕａｒｔ Ｔｒ
ａｎｓｐｏｒｔ Ｍｅｄｉｕｍ）である。
は、非イオン性溶解剤、好ましくは白血球を溶解するサ
ポニン、を含む改善された輸送培地を提供する本発明に
より達成される。改良された輸送培地は微生物およびそ
の抗原部位を破壊し得る、試料中に存在する白血球を急
速に溶解する好適な溶解剤、サポニンを含んでいる。好
適な溶解剤であるサポニンは、約０．１ｍｇから約１０
ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地、好適には約０．５ｍｇか
ら約２ｍｇまでのサポニン／ｍｌ輸送培地、より好適に
は約０．７５ｍｇから約２ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培
地、そして最も好適には約１ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培
地の濃度で存在する。さらに、これらの界面活性溶解剤
は輸送培地において、サポニンを保護する混合ミセルを
形成するリン脂質、適切にはＬ−ａ レシチン（Ｌｅｃ
ｉｔｈｉｎ）（ホスファチジルコリン）と混合してもよ
い。他のリン脂質としては、ホスファチジルセリン、ホ
スファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミ
ンおよびスフィンゴミエリンが含まれる。微生物の成育
能力が保持されるならば、改良輸送培地には微生物学的
試料の生存可能な適した緩衝液や炭素源も含まれるべき
である。本発明に適した好適な輸送培地は、サポニン修
飾された（１）チャコールの入っていないアミーズ輸送
培地（Ａｍｉｅｓ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ｍｅｄｉｕ
ｍ）、（２）チャコールの入ったアミーズ輸送培地、お
よび（３）スチュアート輸送培地（Ｓｔｕａｒｔ Ｔｒ
ａｎｓｐｏｒｔ Ｍｅｄｉｕｍ）である。
【００１５】本発明のよりよい理解のために、以下の説
明と実施例およびそれに付随する表を記載し、本発明の
範囲を特許請求の範囲に示す。
明と実施例およびそれに付随する表を記載し、本発明の
範囲を特許請求の範囲に示す。
【００１６】本発明は、白血球を溶解する非イオン性界
面活性剤（好適にはサポニン）を含む、哺乳動物の体の
各部からの微生物学的試料の輸送に用いられる改良され
た輸送培地を提供する。改良輸送培地には、微生物およ
びその抗原部位を破壊しうる、試料中に存在する食細胞
（白血球）を急速に溶解する好適な溶解剤であるサポニ
ンが含まれている。好適な溶解剤であるサポニンは、約
０．１ｍｇから約１０ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地の濃
度で、好適には約０．５ｍｇから約２ｍｇサポニン／ｍ
ｌ輸送培地の濃度で、より好適には約０．７５ｍｇから
約１ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地、そして最も好適には
約１ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地の濃度で存在する。改
良輸送培地が放出される微生物の抗原部位の完全性を維
持するためにのみ必要とされる場合は、炭素源および緩
衝液は必要ない。
面活性剤（好適にはサポニン）を含む、哺乳動物の体の
各部からの微生物学的試料の輸送に用いられる改良され
た輸送培地を提供する。改良輸送培地には、微生物およ
びその抗原部位を破壊しうる、試料中に存在する食細胞
（白血球）を急速に溶解する好適な溶解剤であるサポニ
ンが含まれている。好適な溶解剤であるサポニンは、約
０．１ｍｇから約１０ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地の濃
度で、好適には約０．５ｍｇから約２ｍｇサポニン／ｍ
ｌ輸送培地の濃度で、より好適には約０．７５ｍｇから
約１ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地、そして最も好適には
約１ｍｇサポニン／ｍｌ輸送培地の濃度で存在する。改
良輸送培地が放出される微生物の抗原部位の完全性を維
持するためにのみ必要とされる場合は、炭素源および緩
衝液は必要ない。
【００１７】微生物の成育能力が保持されるべき場合に
は、改良輸送培地には微生物試料の生存を可能にするの
に適した緩衝液および炭素源も含まれるべきである。好
ましくは、サポニンは以下に記載された適当な輸送培地
処方に添加される：アミーズ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉ
ｃ Ｈｅａｌｔｈ，５８，２９６（１９６７）；スチュ
アートら，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，
４５，７３（１９５４）；Ｉｓｅｎｂｅｒｇ Ｍａｎｕ
ａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ，レネッテら（編），第４版，ＡＳＭ，ワシント
ン，Ｄ．Ｃ．（１９８５）；ベイリーら，Ｄｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ：”Ｓｐｅｃｉｍ
ｅｎ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｔ
ｒａｎｓｐｏｒｔ”，２６−２７，Ｔｈｅ Ｃ．Ｖ．Ｍ
ｏｓｂｙ Ｃｏ．，ミズーリ州，セントルイス（１９７
４）；およびマクファジン，”Ｍｅｄｉａ ｆｏｒ Ｉ
ｓｏｌａｔｉｏｎ−Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ Ｉｄｅｎ
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ”，１，Ｗｉｌｌ
ｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，メリーランド州、
バルチモア（１９８５）；また、”Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
ＢＢＬ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ”，第６版，パワーら
（編），Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，メリーランド州、
コッキースビレ（１９８８）を参照されたく、これらの
開示は本明細書中で参考文献として引用されている。本
発明で用いられる、上述した、サポニンでの修飾に適し
た３つの好適な輸送培地には以下のものが含まれる： （１）チャコールの入っていないアミーズ輸送培地 内容物： チオグリコール酸ナトリウム １．００ｇ 塩酸 ３．００ｇ 塩化カリウム ０．２０ｇ 塩化カルシウム ０．１０ｇ 塩化マグネシウム ０．１０ｇ リン酸二水素カリウム ０．２０ｇ リン酸一水素ナトリウム １．１５ｇ 寒天 ４．００ｇ 脱イオン水 １リットル 最終ｐＨ７．４±０．２（２５℃） （２）チャコールの入ったアミーズ輸送物質：上記成分
と１リットルあたり１０ｇのチャコールが含まれる。
は、改良輸送培地には微生物試料の生存を可能にするの
に適した緩衝液および炭素源も含まれるべきである。好
ましくは、サポニンは以下に記載された適当な輸送培地
処方に添加される：アミーズ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉ
ｃ Ｈｅａｌｔｈ，５８，２９６（１９６７）；スチュ
アートら，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，
４５，７３（１９５４）；Ｉｓｅｎｂｅｒｇ Ｍａｎｕ
ａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ，レネッテら（編），第４版，ＡＳＭ，ワシント
ン，Ｄ．Ｃ．（１９８５）；ベイリーら，Ｄｉａｇｎｏ
ｓｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ：”Ｓｐｅｃｉｍ
ｅｎ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｔ
ｒａｎｓｐｏｒｔ”，２６−２７，Ｔｈｅ Ｃ．Ｖ．Ｍ
ｏｓｂｙ Ｃｏ．，ミズーリ州，セントルイス（１９７
４）；およびマクファジン，”Ｍｅｄｉａ ｆｏｒ Ｉ
ｓｏｌａｔｉｏｎ−Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ Ｉｄｅｎ
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ”，１，Ｗｉｌｌ
ｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，メリーランド州、
バルチモア（１９８５）；また、”Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
ＢＢＬ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ”，第６版，パワーら
（編），Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，メリーランド州、
コッキースビレ（１９８８）を参照されたく、これらの
開示は本明細書中で参考文献として引用されている。本
発明で用いられる、上述した、サポニンでの修飾に適し
た３つの好適な輸送培地には以下のものが含まれる： （１）チャコールの入っていないアミーズ輸送培地 内容物： チオグリコール酸ナトリウム １．００ｇ 塩酸 ３．００ｇ 塩化カリウム ０．２０ｇ 塩化カルシウム ０．１０ｇ 塩化マグネシウム ０．１０ｇ リン酸二水素カリウム ０．２０ｇ リン酸一水素ナトリウム １．１５ｇ 寒天 ４．００ｇ 脱イオン水 １リットル 最終ｐＨ７．４±０．２（２５℃） （２）チャコールの入ったアミーズ輸送物質：上記成分
と１リットルあたり１０ｇのチャコールが含まれる。
【００１８】（３）スチュアート輸送培地 内容物： チオグリコール酸ナトリウム １．０ｇ グリセロリン酸ナトリウム １０．０ｇ 塩化カルシウム ０．１ｇ メチレンブルー ０．００２
ｇ 寒天 ３．０ｇ 脱イオン水 １リットル 最終ｐＨ７．３±０．２（２５℃） 本発明の改良処方は、白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ
ｃｅｌｌｓ；ＷＢＣ）の迅速な溶解を提供し、従って
試料中の食作用を受けた微生物を遊離させ、そしてＷＢ
Ｃが遊離の微生物を攻撃するのを防ぐ。食作用を受けた
微生物の解放は、白血球内の環境が微生物にとって敵性
（阻害性または致死性）を示すことから、望ましいこと
である。この環境からの微生物の遊離は、微生物を解放
し、そして該輸送培地により提供される好ましい環境に
微生物を置くことであり、これは微生物の成育能力、あ
るいはその抗原部位の少なくとも１つを保持し、しかし
成長を促進しないことを意図している。
ｇ 寒天 ３．０ｇ 脱イオン水 １リットル 最終ｐＨ７．３±０．２（２５℃） 本発明の改良処方は、白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ
ｃｅｌｌｓ；ＷＢＣ）の迅速な溶解を提供し、従って
試料中の食作用を受けた微生物を遊離させ、そしてＷＢ
Ｃが遊離の微生物を攻撃するのを防ぐ。食作用を受けた
微生物の解放は、白血球内の環境が微生物にとって敵性
（阻害性または致死性）を示すことから、望ましいこと
である。この環境からの微生物の遊離は、微生物を解放
し、そして該輸送培地により提供される好ましい環境に
微生物を置くことであり、これは微生物の成育能力、あ
るいはその抗原部位の少なくとも１つを保持し、しかし
成長を促進しないことを意図している。
【００１９】サポニンに加え、非イオン性の界面活性溶
解剤、他の非イオン性界面活性剤を本発明に利用しても
よい：コール酸ナトリウム、ツイーン２０、いくつかの
トリトンＸシリーズ、ブリジス（Ｂｒｉｊｓ）５６、５
８、７６、７８、９６、９９、リソレシチンおよびポリ
オキシエチレン−１０−トリデシルエーテルなどであ
る。約０．０２％から約２．０％の界面活性剤濃度が適
している。加えて、これらの界面活性溶解剤は、好適に
はほぼ等しい割合で、サポニンを保護する混合ミセルを
形成するリン脂質（Ｌ−ａ レシチン（ホスファチジル
コリン）が適当である；米国特許第４，９９４，３７８
号に記載されており、その開示は本明細書中では参考文
献として引用されている）と共に輸送培地に混合するこ
とが可能である。その特許に記載されている、本発明で
利用できる他のリン脂質にはホスファチジルセリン、ホ
スファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミ
ンおよびスフィンゴミエリンが含まれる。
解剤、他の非イオン性界面活性剤を本発明に利用しても
よい：コール酸ナトリウム、ツイーン２０、いくつかの
トリトンＸシリーズ、ブリジス（Ｂｒｉｊｓ）５６、５
８、７６、７８、９６、９９、リソレシチンおよびポリ
オキシエチレン−１０−トリデシルエーテルなどであ
る。約０．０２％から約２．０％の界面活性剤濃度が適
している。加えて、これらの界面活性溶解剤は、好適に
はほぼ等しい割合で、サポニンを保護する混合ミセルを
形成するリン脂質（Ｌ−ａ レシチン（ホスファチジル
コリン）が適当である；米国特許第４，９９４，３７８
号に記載されており、その開示は本明細書中では参考文
献として引用されている）と共に輸送培地に混合するこ
とが可能である。その特許に記載されている、本発明で
利用できる他のリン脂質にはホスファチジルセリン、ホ
スファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミ
ンおよびスフィンゴミエリンが含まれる。
【００２０】以下の実施例は本発明の様々な特徴をさら
に具体的に説明する。
に具体的に説明する。
【００２１】
【実施例】サポニンは培養培地中の赤血球を溶解させる
ことが知られているが、しかしながら、サポニンの活性
が白血球の溶解に及んでいるかは明らかではなかった。
実際、以前の研究（例えば、米国特許第４，０５３，３
６３号の３段目１６−２３行）は、サポニンが白血球を
溶解する能力を持っていないだろうと示唆している。従
って、以下の実験は、実施例１および２は輸送培地とい
うよりも培養（増殖）培地を用いているが、サポニンが
実施例３において記載されている輸送培地において白血
球を溶解する潜在能力を持つかを決定するために行なわ
れた。
ことが知られているが、しかしながら、サポニンの活性
が白血球の溶解に及んでいるかは明らかではなかった。
実際、以前の研究（例えば、米国特許第４，０５３，３
６３号の３段目１６−２３行）は、サポニンが白血球を
溶解する能力を持っていないだろうと示唆している。従
って、以下の実験は、実施例１および２は輸送培地とい
うよりも培養（増殖）培地を用いているが、サポニンが
実施例３において記載されている輸送培地において白血
球を溶解する潜在能力を持つかを決定するために行なわ
れた。
【００２２】最近の研究ではＢＡＣＴＥＣ ６６０標準
血液培養（増殖）培地をサポニンを含む同じ培地と比較
した。その研究の結果の要旨はジャンキンドらにより、
ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＳＯＣＩＥＴＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯ
ＢＩＯＬＯＧＹ−ＡＢＳＴＲＡＣＴＳ ＯＦ ＴＨＥ
ＡＮＮＵＡＬ ＭＥＥＴＩＮＧ−１９９０，Ｃ−２７
７，３９０（１９９０）において報告されている。その
研究においてはサポニンは培養（増殖）培地において用
いられ血液細胞代謝によるバックグラウンドシグナルを
減らし、微生物検出の改善させた。この研究の結果は実
施例１および２に更に詳細に記載されている。
血液培養（増殖）培地をサポニンを含む同じ培地と比較
した。その研究の結果の要旨はジャンキンドらにより、
ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＳＯＣＩＥＴＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯ
ＢＩＯＬＯＧＹ−ＡＢＳＴＲＡＣＴＳ ＯＦ ＴＨＥ
ＡＮＮＵＡＬ ＭＥＥＴＩＮＧ−１９９０，Ｃ−２７
７，３９０（１９９０）において報告されている。その
研究においてはサポニンは培養（増殖）培地において用
いられ血液細胞代謝によるバックグラウンドシグナルを
減らし、微生物検出の改善させた。この研究の結果は実
施例１および２に更に詳細に記載されている。
【００２３】実施例１ 本実施例は４０ｍｇ／ｍｌのサポニン（ベクトンディッ
キンソン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を含む
嫌気培地における白血球溶解を検定する。
キンソン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を含む
嫌気培地における白血球溶解を検定する。
【００２４】嫌気培養（増殖）培地の２つの試料につい
て検定した。１つはサポニンが入っており、もう１つは
入っていなかった。サポニンのない培地はベクトンディ
ッキンソン（メリーランド州コッキーズビレ）からＢＡ
ＣＴＥＣR嫌気培養培地 ＮＲ−７Ａ，ベクトンディッ
キンソンにより出版されたＭＡ−００３４，ＰＰ−０４
４ＤにおいてカタログＮｏ．０４３９２（１９８９年６
月）として商業的に入手可能であり、以下の成分を含
む：
て検定した。１つはサポニンが入っており、もう１つは
入っていなかった。サポニンのない培地はベクトンディ
ッキンソン（メリーランド州コッキーズビレ）からＢＡ
ＣＴＥＣR嫌気培養培地 ＮＲ−７Ａ，ベクトンディッ
キンソンにより出版されたＭＡ−００３４，ＰＰ−０４
４ＤにおいてカタログＮｏ．０４３９２（１９８９年６
月）として商業的に入手可能であり、以下の成分を含
む：
【表１】 表１ ＢＡＣＴＥＣ（商標名） ＮＲ７Ａ 嫌気培養培地 構成要素 量 加工水 ３０ｍｌ 大豆−カゼイン消化ブロース ２．７５％ ｗ／ｖ ヘミン ０．０００５％ ｗ／ｖ ビタミン Ｋ ０．００００５％ ｗ／ｖ デキストロース ０．２％ ｗ／ｖ ポリアネトールスルフォン酸ナトリウム ０．０３５％ ｗ／ｖ （ＳＰＳ） 酵母エキストラクト ０．２０％ ｗ／ｖ 動物組織消化物 ０．０５％ ｗ／ｖ クエン酸ナトリウム ０．０２％ ｗ／ｖ チオール ０．１０％ ｗ／ｖ ３０ｍｌのＢＡＣＴＥＣ（商標名）嫌気培養培地を含む
二（２）つのボトルを、ボトルあたり４０ｍｇのサポニ
ンも含むＢＡＣＴＥＣR培養培地ＮＲ７Ａの同一の試料
２つと（計４ボトル）比較した。ドナーＩからの血液
（表２を参照）を各ボトルに置いた。記された各データ
点に対して２回の試料計数を行なった。サポニンを含む
ボトルは試料ＡおよびＣとされ、サポニンを含まないコ
ントロール培地を試料ＢおよびＤとした。ドナーＩは健
康な若い成人のカフカス人男性であり、ドナーＩに対す
る血液検定の結果は以下の表２にまとめられている：
二（２）つのボトルを、ボトルあたり４０ｍｇのサポニ
ンも含むＢＡＣＴＥＣR培養培地ＮＲ７Ａの同一の試料
２つと（計４ボトル）比較した。ドナーＩからの血液
（表２を参照）を各ボトルに置いた。記された各データ
点に対して２回の試料計数を行なった。サポニンを含む
ボトルは試料ＡおよびＣとされ、サポニンを含まないコ
ントロール培地を試料ＢおよびＤとした。ドナーＩは健
康な若い成人のカフカス人男性であり、ドナーＩに対す
る血液検定の結果は以下の表２にまとめられている：
【表２】 表２ 血液画分 量 ＷＢＣ分化 （％） 白血球 ６．８×１０3／ｍｍ3 好中球 ５１．０ 赤血球 ４．５１×１０6ｍｍ3 リンパ球 ３６．９ ヘモグロビン １５．３ｇ／ｄｌ 単球 ６．８ ヘマトクリット管 ４４．１％ エオシン好球 １．３ 血小板 ２４７．０×１０3／ｍｍ3 好塩基球 １．１ 血清中の 総コレステロール ２２６ｍｇ／ｄｌ ＊Ｌｕｃ ２．８ ＊未分類の大きな細胞 ドナーＩからの血液（４０ｍｌ）を大きなイエロー−ト
ップのＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ管２本に採取した。各ボト
ルの培地を３５℃に温め、４ｍｌの血液を皮下用針で無
菌法を用いて各ボトルの隔膜を通じて注入した。ドナー
Ｉからの血液３０ｍｌからの白血球を、１×重力で静置
した赤血球（ＲＢＣ）の後の白血球に富んだ画分の採取
により回収した。白血球を分離し、そしてインジウム
111で標識して、次に約４ｍｌの全血（ｗｈｏｌｅ ｂ
ｌｏｏｄ）からのＷＢＣと見なせる等量の細胞をＡ−Ｄ
の各試料ボトルに加えた。これにより各試料におけるＷ
ＢＣ計数が効果的に複製された。
ップのＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ管２本に採取した。各ボト
ルの培地を３５℃に温め、４ｍｌの血液を皮下用針で無
菌法を用いて各ボトルの隔膜を通じて注入した。ドナー
Ｉからの血液３０ｍｌからの白血球を、１×重力で静置
した赤血球（ＲＢＣ）の後の白血球に富んだ画分の採取
により回収した。白血球を分離し、そしてインジウム
111で標識して、次に約４ｍｌの全血（ｗｈｏｌｅ ｂ
ｌｏｏｄ）からのＷＢＣと見なせる等量の細胞をＡ−Ｄ
の各試料ボトルに加えた。これにより各試料におけるＷ
ＢＣ計数が効果的に複製された。
【００２５】培地中に放出されたインジウム111の量を
放射活性計数器を用いて測定することによりこれらの培
地におけるＷＢＣの溶解率を検定した。すべての計数は
二度行なわれ平均化された。これらの計数値から２００
ｃｐｍのバックグラウンド計数値が引かれた。表３には
サポニンを含む嫌気培地ＮＲ７Ａおよびコントロールの
同培地におけるＷＢＣの溶解率を示す。
放射活性計数器を用いて測定することによりこれらの培
地におけるＷＢＣの溶解率を検定した。すべての計数は
二度行なわれ平均化された。これらの計数値から２００
ｃｐｍのバックグラウンド計数値が引かれた。表３には
サポニンを含む嫌気培地ＮＲ７Ａおよびコントロールの
同培地におけるＷＢＣの溶解率を示す。
【００２６】
【表３】 表３ コントロールの嫌気培養培地およびサポニンを含む同培地におけるＷＢＣの溶 解率 試料 時間 サポニンＡ サポニンＣ コントロールＢ コントロールＤ ３０秒 ９５．３％ ８４．５％ ２．３％ ２．２％ １５分 １００．９％ ９２．５％ ２．４％ ２．７％ ３０分 １０２．４％ ９５．３％ ２．９％ ６．６％ ６０分 １０９．７％ ９８．７％ ４．５％ ６．７％ ２時間 １０１．１％ ９６．６％ ４．６％ ５．１％ ４時間 １０２．４％ ９７．３％ ６．６％ ７．２％ ２１時間 １０４．９％ ９６．８％ １８．６％ １９．０％ 表４は、コントロールの嫌気培養培地およびサポニンを
含む嫌気培養培地の試料における、各々０．５ｍｌの試
料に関してｃｐｍで測定した白血球からのインジウム
111の放出を示す。各試料液０．５ｍｌに関しての分あ
たりの計数値（”ｃｐｍ”）での総放射活性は試料Ａに
ついては１４３３７９ｃｐｍ、試料Ｃについては１４２
１３７ｃｐｍ、試料Ｂについては１４４８２０ｃｐｍ、
および試料Ｄについては１３７９３２ｃｐｍ（表４では
ＳＴＤとしてある）。
含む嫌気培養培地の試料における、各々０．５ｍｌの試
料に関してｃｐｍで測定した白血球からのインジウム
111の放出を示す。各試料液０．５ｍｌに関しての分あ
たりの計数値（”ｃｐｍ”）での総放射活性は試料Ａに
ついては１４３３７９ｃｐｍ、試料Ｃについては１４２
１３７ｃｐｍ、試料Ｂについては１４４８２０ｃｐｍ、
および試料Ｄについては１３７９３２ｃｐｍ（表４では
ＳＴＤとしてある）。
【００２７】
【表４】 表４ 嫌気コントロール培地とサポニンを含む試料におけるＷＢＣからのインジウム111 の放出 試料各０．５ｍｌあたりのｃｐｍ 時間 サポニンＡ サポニンＣ コントロールＢ コントロールＤ ３０秒 １２７２８４ １２１４４７ ３５２１ ３１６６ １４６４２９ １１９２８６ ３６１４ ３３１２ １５分 １３５６１７ １２９２０６ ３６５２ ３８６５ １５４１８９ １３４２８１ ３８１２ ４０３６ ３０分 １３６１３９ １３１２４７ ４３３５ ８９９１ １５７８８６ １４００６５ ４５４８ ９４８７ ６０分 １４０４０９ １３０６９１ ５４１２ ９３１９ １７４６３２ １５０２１３ ７９０６ ９５１５ ２時間 １３８７２５ １３２２７６ ６８０１ ７２１０ １５１６４１ １４２５９４ ７０２７ ７３８１ ４時間 １５０５２７ １３６６４５ ９６３２ ９９７９ １４３６２８ １４０３４５ ９９１７ １０３０４ ２１時間 １４９８８５ １４１２３３ ２６３３７ ２５９７７ １５１２９１ １３４２２９ ２７８９７ ２６８５３ ＳＴＤ １４６９４９ １４２０３６ １４８８１８ １３９６２３ １４０２０９ １４２６３７ １４１２２１ １３６６４１ 表４に示された数値は２００ｃｐｍのバックグラウンド
読み値についての補正はなされていなかった。
読み値についての補正はなされていなかった。
【００２８】本実施例は、嫌気培地１ｍｌあたり少なく
とも１ｍｇのサポニンを含む嫌気培地が白血球の溶解に
非常に効果的であることを明らかに示している。さら
に、細胞の８４％から９５％が最初の３０秒間で溶解
し、細胞の９０％から１００％が最初の１５分間で溶解
した。
とも１ｍｇのサポニンを含む嫌気培地が白血球の溶解に
非常に効果的であることを明らかに示している。さら
に、細胞の８４％から９５％が最初の３０秒間で溶解
し、細胞の９０％から１００％が最初の１５分間で溶解
した。
【００２９】実施例２ 本実施例は、実施例１で検定したのと同じ濃度（即ち１
ｍｇサポニン／ｍｌ培養（増殖）培地）のサポニンがよ
り低い濃度も含めて、実施例１に記載した嫌気培養（増
殖）培地における場合と同等の効果を好気培養（増殖）
培地中の白血球溶解に発揮するかを決定するために行な
われた。
ｍｇサポニン／ｍｌ培養（増殖）培地）のサポニンがよ
り低い濃度も含めて、実施例１に記載した嫌気培養（増
殖）培地における場合と同等の効果を好気培養（増殖）
培地中の白血球溶解に発揮するかを決定するために行な
われた。
【００３０】表５に挙げた構成成分を含むＢＡＣＴＥＣ
（商標名）好気培養培地ＮＲ−６Ａ（ベクトンディッキ
ンソン、メリーランド州、コックスビレ、カタログＮ
ｏ．０４３９１、ＭＡ−００３４，ＰＰ ０４４Ｄ（１
９８９年６月）より商業的に入手可能）を含む５つのボ
トルを検定した。
（商標名）好気培養培地ＮＲ−６Ａ（ベクトンディッキ
ンソン、メリーランド州、コックスビレ、カタログＮ
ｏ．０４３９１、ＭＡ−００３４，ＰＰ ０４４Ｄ（１
９８９年６月）より商業的に入手可能）を含む５つのボ
トルを検定した。
【００３１】
【表５】 表５ ＢＡＣＴＥＣR ＮＲ６Ａ 嫌気培養培地 構成要素 量 加工水 ３０ｍｌ 大豆−カゼイン消化ブロース ２．７５％ ｗ／ｖ ヘミン ０．０００５％ ｗ／ｖ ビタミン Ｋ ０．００００５％ ｗ／ｖ デキストロース ０．６％ ｗ／ｖ ショ糖 ０．０８３５％ ｗ／ｖ ポリアネトールスルフォン酸ナトリウム ０．０３５％ ｗ／ｖ （ＳＰＳ） 防泡剤 ０．０１％ ｗ／ｖ ピリドキサル塩酸（ビタミン Ｂ6） ０．００１％ ｗ／ｖ 表５に記載された好気培養培地を、一本あたり３０ｍｌ
の培地を含む５本のＢＡＣＴＥＣ（商標名）培養ボトル
（Ａ−Ｅとする）に分けた。最初のボトルをサポニンを
含まないコントロール試料（Ａ）とした；２番目のボト
ルには２０ｍｇのサポニンを０．５ｍｇサポニン／ｍｌ
好気培養培地の濃度になるように無菌的に添加し、試料
（Ｂ）とした；３番目のボトルには３０ｍｇのサポニン
を０．７５ｍｇサポニン／ｍｌ好気培地の濃度になるよ
うに無菌的に添加し試料（Ｃ）とした；そして残りの２
本のボトルには４０ｍｇのサポニンを１．０ｍｇサポニ
ン／ｍｌ好気培養培地の濃度になるように添加し、それ
ぞれ試料（Ｄ）および（Ｅ）とした。この実施例に関し
ては、各データ点の試料について２回の計数を行なっ
た。ドナーＩＩ（健康な中年のカフカス人の成年男性）
からの血液を検定した。血液検定の結果は以下の表６に
挙げられている：
の培地を含む５本のＢＡＣＴＥＣ（商標名）培養ボトル
（Ａ−Ｅとする）に分けた。最初のボトルをサポニンを
含まないコントロール試料（Ａ）とした；２番目のボト
ルには２０ｍｇのサポニンを０．５ｍｇサポニン／ｍｌ
好気培養培地の濃度になるように無菌的に添加し、試料
（Ｂ）とした；３番目のボトルには３０ｍｇのサポニン
を０．７５ｍｇサポニン／ｍｌ好気培地の濃度になるよ
うに無菌的に添加し試料（Ｃ）とした；そして残りの２
本のボトルには４０ｍｇのサポニンを１．０ｍｇサポニ
ン／ｍｌ好気培養培地の濃度になるように添加し、それ
ぞれ試料（Ｄ）および（Ｅ）とした。この実施例に関し
ては、各データ点の試料について２回の計数を行なっ
た。ドナーＩＩ（健康な中年のカフカス人の成年男性）
からの血液を検定した。血液検定の結果は以下の表６に
挙げられている：
【表６】 表６ 血液画分 量 ＷＢＣ分化 （％） 白血球 ５．０１×１０3／ｍｍ3 好中球 ４６．４ 赤血球 ４．３４×１０6ｍｍ3 リンパ球 ４１．８ ヘモグロビン １４．３ｇ／ｄｌ 単球 ６．５ ヘマトクリット管 ３９．５％ エオシン好球 ２．４ 血小板 ２２０×１０3／ｍｍ3 好塩基球 ０．６ 血清中の 総コレステロール ２９０ｍｇ／ｄｌ ＊Ｌｕｃ ２．３ ＊未分類の大きな細胞 ドナーＩＩからの血液（４０ｍｌ）を大きなイエロー−
トップのＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ管２本に採取した。各ボ
トルの培地を３５℃に温め、４ｍｌの血液を皮下用針で
無菌法を用いて各ボトルの隔膜を通じて注入した。ドナ
ーＩＩからの血液３０ｍｌからの白血球を、１×重力で
静置した赤血球（ＲＢＣ）の後の白血球に富んだ画分の
採取により回収した。白血球を分離しインジウム111で
標識して、約４ｍｌの全血からのＷＢＣと見なせる等量
の細胞をＡ−Ｄの各試料ボトルに加えた。これにより実
施例１に記載されたものと同じ様式で各試料におけるＷ
ＢＣ計数が効果的に複製された。
トップのＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ管２本に採取した。各ボ
トルの培地を３５℃に温め、４ｍｌの血液を皮下用針で
無菌法を用いて各ボトルの隔膜を通じて注入した。ドナ
ーＩＩからの血液３０ｍｌからの白血球を、１×重力で
静置した赤血球（ＲＢＣ）の後の白血球に富んだ画分の
採取により回収した。白血球を分離しインジウム111で
標識して、約４ｍｌの全血からのＷＢＣと見なせる等量
の細胞をＡ−Ｄの各試料ボトルに加えた。これにより実
施例１に記載されたものと同じ様式で各試料におけるＷ
ＢＣ計数が効果的に複製された。
【００３２】これらの培地におけるＷＢＣの溶解率を培
地中に放出されたインジウム111の量を実施例１で記載
されたのと同じ放射活性計数器を用いて決定することに
より検定した。すべての計数は二度行なわれ平均化され
た。表７にはサポニンを含む好気培養培地ＢからＥ、お
よびサポニンを含まないコントロールの好気培養培地Ａ
におけるＷＢＣの溶解率を示す。
地中に放出されたインジウム111の量を実施例１で記載
されたのと同じ放射活性計数器を用いて決定することに
より検定した。すべての計数は二度行なわれ平均化され
た。表７にはサポニンを含む好気培養培地ＢからＥ、お
よびサポニンを含まないコントロールの好気培養培地Ａ
におけるＷＢＣの溶解率を示す。
【００３３】
【表７】 表７ コントロールおよびサポニンを含む好気培地におけるＷＢＣ溶解率 試料 時間 コントロールＡ サポニンＢ サポニンＣ サポニンＤ サポニンＥ ３０秒 ２．８％ ３６．８％ ７２．８％ ８４．６％ ８８．５％ １５分 ３．７ ５５．１ ８４．６ ９２．６ ９２．５ ３０分 ４．２ ５８．７ ８７．３ ９２．３ ９２．１ ６０分 ５．０ ６６．９ ８６．３ ９１．５ ９３．７ ２時間 ６．５ ７１．３ ９２．０ ９１．４ ９４．４ ４時間 ７．７ ７６．１ ９０．８ ９１．０ ９５．２ ２１時間 １４．６ ８７．３ ９３．８ ９５．４ ９８．５ これらの作表に関しては２００ｃｐｍのバックグラウン
ド計数値が引かれていない。
ド計数値が引かれていない。
【００３４】表８には、コントロールの好気培地（Ａ）
およびサポニンを含む好気培養培地試料Ｂ−Ｅにおける
白血球からのインジウム111の放出を各々０．５ｍｌの
試料に対して測定して示してある。検定した各０．５ｍ
ｌの試料についての分あたりの計数値（”ｃｐｍ”）に
よる総放射活性は、試料Ａについては３６４１５ｃｐ
ｍ、試料Ｂについては３４９４５ｃｐｍ、試料Ｃについ
ては３６７００ｃｐｍ、試料Ｄについては３６３８８ｃ
ｐｍで試料Ｅについては３３５３３ｃｐｍであった（表
８においてＳＴＤで表されている）。
およびサポニンを含む好気培養培地試料Ｂ−Ｅにおける
白血球からのインジウム111の放出を各々０．５ｍｌの
試料に対して測定して示してある。検定した各０．５ｍ
ｌの試料についての分あたりの計数値（”ｃｐｍ”）に
よる総放射活性は、試料Ａについては３６４１５ｃｐ
ｍ、試料Ｂについては３４９４５ｃｐｍ、試料Ｃについ
ては３６７００ｃｐｍ、試料Ｄについては３６３８８ｃ
ｐｍで試料Ｅについては３３５３３ｃｐｍであった（表
８においてＳＴＤで表されている）。
【００３５】
【表８】 表８ 好気コントロール培地とサポニンを含む試料におけるＷＢＣからのインジウム11 1 の放出 試料各０．５ｍｌあたりのｃｐｍ 時間 コントロールＡ サポニンＢ サポニンＣ サポニンＤ サポニンＥ ３０秒 １０９３ １２９３８ ２９４５３ ２９２７６ ２９３９４ ９５２ １３３３９ ２６９４６ ３２０９３ ２９９８０ １５分 １２９４ １９１７８ ３０５２１ ３３２６５ ３０９８９ １３８２ １９３０１ ３１５８５ ３３９９４ ３１０８３ ３０分 １５２０ ２０５９２ ３１６３５ ３３２５０ ３０３３４ １５２５ ２０４５４ ３２４０４ ３３９０９ ３１４６８ ６０分 １７７１ ２３３７４ ３１７３１ ３３４０５ ３０６５９ １８９３ ２３３６３ ３１５９６ ３３１６５ ３２２２５ ２時間 ２２１４ ２４６６４ ３３８３５ ３４０８０ ３１０８１ ２５５４ ２５１３８ ３３６８２ ３２８７９ ３２２６５ ４時間 ２７１９ ２６６２５ ３２７７０ ３２４５３ ３１４０５ ２８７６ ２６５８８ ３３８７７ ３３７３８ ３２５０２ ２１時間 ５２６５ ３００９７ ３４１６４ ３４４３９ ３２４７５ ５３４７ ３０９３９ ３４７１１ ３５０２１ ３３６２８ ＳＴＤ ３６００６ ３４４６７ ３６５１９ ３５５７７ ３２８５３ ３０８２３ ３５４３２ ３６８７９ ３７１９８ ３４２５３ 表８に示された数値は２００ｃｐｍのバックグラウンド
読み値についての補正はなされなかった。
読み値についての補正はなされなかった。
【００３６】本実施例は、好気培養培地１ｍｌあたり
０．５ｍｇのサポニンを含む好気培養培地が最初の１５
分間でＷＢＣの５５％以上を溶解することを示してい
る。さらに好気培養培地１ｍｌあたり０．７５ｍｇのサ
ポニンを含む好気培養培地においては、７０％以上の白
血球が最初の３０秒間で溶解され、８４％以上の白血球
が最初の１５分間で溶解された。好気培養培地１ｍｌあ
たり１ｍｇのサポニンを含む好気培養培地においては、
８４％以上の白血球が最初の３０秒間で溶解され、９２
％以上の白血球が最初の１５分間で溶解された。以上の
結果は、好ましいことに、実施例１で検定された嫌気培
養培地１ｍｌあたり１ｍｇのサポニンの場合に匹敵す
る。
０．５ｍｇのサポニンを含む好気培養培地が最初の１５
分間でＷＢＣの５５％以上を溶解することを示してい
る。さらに好気培養培地１ｍｌあたり０．７５ｍｇのサ
ポニンを含む好気培養培地においては、７０％以上の白
血球が最初の３０秒間で溶解され、８４％以上の白血球
が最初の１５分間で溶解された。好気培養培地１ｍｌあ
たり１ｍｇのサポニンを含む好気培養培地においては、
８４％以上の白血球が最初の３０秒間で溶解され、９２
％以上の白血球が最初の１５分間で溶解された。以上の
結果は、好ましいことに、実施例１で検定された嫌気培
養培地１ｍｌあたり１ｍｇのサポニンの場合に匹敵す
る。
【００３７】実施例３ 輸送培地を調製しＡ，Ｂ２つのアリコットに分ける。輸
送培地の適切な処方はスチュアートら，Ｃａｎ．Ｊ．ｏ
ｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，４５，７３（１９５
４）；およびアミーズ，Ｃａｎ．Ｊ．ｏｆ Ｐｕｂｌｉ
ｃ Ｈｅａｌｔｈ，５８，２９６（１９６７）に記載さ
れている。アリコットＡにおいては、サポニン（固体）
を輸送培地中の最終濃度が１ｍｇ／ｍｌ輸送培地となる
ように十分量加える。アリコットＢはサポニンのないコ
ントロールとしてそのままにしておく。各アリコットに
対して１００本のチューブを準備する。本培地を次に、
各チューブに分注し（２ｍｌ／チューブ）、滅菌のため
にオートクレーブした。
送培地の適切な処方はスチュアートら，Ｃａｎ．Ｊ．ｏ
ｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，４５，７３（１９５
４）；およびアミーズ，Ｃａｎ．Ｊ．ｏｆ Ｐｕｂｌｉ
ｃ Ｈｅａｌｔｈ，５８，２９６（１９６７）に記載さ
れている。アリコットＡにおいては、サポニン（固体）
を輸送培地中の最終濃度が１ｍｇ／ｍｌ輸送培地となる
ように十分量加える。アリコットＢはサポニンのないコ
ントロールとしてそのままにしておく。各アリコットに
対して１００本のチューブを準備する。本培地を次に、
各チューブに分注し（２ｍｌ／チューブ）、滅菌のため
にオートクレーブした。
【００３８】臨床設定において１００の滲出性傷の培養
液（ｅｘｕｄａｔｉｖｅ ｗｏｕｎｄ ｃｕｌｔｕｒ
ｅ）を各々２本の綿棒を用いて採取する。各綿棒を次に
ＡまたはＢ培地のいづれかに無作為に入れる。次にチュ
ーブを培養および検定のために臨床微生物学研究所に輸
送する。
液（ｅｘｕｄａｔｉｖｅ ｗｏｕｎｄ ｃｕｌｔｕｒ
ｅ）を各々２本の綿棒を用いて採取する。各綿棒を次に
ＡまたはＢ培地のいづれかに無作為に入れる。次にチュ
ーブを培養および検定のために臨床微生物学研究所に輸
送する。
【００３９】微生物学研究所において各綿棒を生理食塩
水１．０ｍｌで完全にリンスする。１／１０ｍｌのアリ
コットを、４つの寒天培地：（１）５％ヒツジ血液を含
むトリプティックソイ寒天、（２）マッコンキー寒天、
（３）ＣＮＡ寒天、および（４）チョコレート寒天培
地：の各々の表面上にまき、均一に広げる。次にこのプ
レートを適切なインキュベーター中に３７℃で４８時間
置く。培養時間が終わるとプレートを回収し各プレート
のコロニー数を数える。コロニーの計数は、サポニンの
入っている輸送培地Ａにおいて検定した試料の各々につ
いて、そしてサポニンの入っていないコントロールの輸
送培地Ｂについて平行して行なわれた。
水１．０ｍｌで完全にリンスする。１／１０ｍｌのアリ
コットを、４つの寒天培地：（１）５％ヒツジ血液を含
むトリプティックソイ寒天、（２）マッコンキー寒天、
（３）ＣＮＡ寒天、および（４）チョコレート寒天培
地：の各々の表面上にまき、均一に広げる。次にこのプ
レートを適切なインキュベーター中に３７℃で４８時間
置く。培養時間が終わるとプレートを回収し各プレート
のコロニー数を数える。コロニーの計数は、サポニンの
入っている輸送培地Ａにおいて検定した試料の各々につ
いて、そしてサポニンの入っていないコントロールの輸
送培地Ｂについて平行して行なわれた。
【００４０】輸送培地ＡおよびＢからの各培地の組につ
いてのコロニー計数の結果を、カイ二乗検定などの適当
な統計学的比較により比較する。輸送培地Ａから取って
きた培養プレートは、白血球の溶解によるより大きな細
菌回収を提供し、食細胞内部の過酷な殺菌条件から細菌
を解放することが期待される。
いてのコロニー計数の結果を、カイ二乗検定などの適当
な統計学的比較により比較する。輸送培地Ａから取って
きた培養プレートは、白血球の溶解によるより大きな細
菌回収を提供し、食細胞内部の過酷な殺菌条件から細菌
を解放することが期待される。
【００４１】実施例４ 輸送培地を調製し、実施例５に記載したようにＡとＢの
２つのアリコットに分けた。アリコットＡには、サポニ
ン（固体）を、輸送培地中の最終濃度が輸送培地１ｍｌ
あたり１ｍｇのサポニンとなるように十分量加える。ア
リコットＢはサポニンのないコントロールとしてそのま
まにする。各アリコットにつき１００本のチューブを準
備する。それから培地を滅菌のためにオートクレーブす
る。
２つのアリコットに分けた。アリコットＡには、サポニ
ン（固体）を、輸送培地中の最終濃度が輸送培地１ｍｌ
あたり１ｍｇのサポニンとなるように十分量加える。ア
リコットＢはサポニンのないコントロールとしてそのま
まにする。各アリコットにつき１００本のチューブを準
備する。それから培地を滅菌のためにオートクレーブす
る。
【００４２】臨床設定において１００の喉培養液（ｔｈ
ｒｏａｔ ｃｕｌｔｕｒｅ）を各々２本の綿棒を用いて
採取する。各綿棒を次にＡまたはＢ培地のいづれかに無
作為に入れる。次にチューブを抗原検定のために臨床微
生物学研究所に輸送する。
ｒｏａｔ ｃｕｌｔｕｒｅ）を各々２本の綿棒を用いて
採取する。各綿棒を次にＡまたはＢ培地のいづれかに無
作為に入れる。次にチューブを抗原検定のために臨床微
生物学研究所に輸送する。
【００４３】微生物学研究所において各綿棒に、グルー
プＡストレプトコッキ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）
（Ｓ．ピオジェネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ））につい
てのスクリーニング検定を行なうための適当な調製操作
を施す。そのような検定の例は、ＢＢＬ Ｄｉｒｅｃｔ
ｉｇｅｎ（商標名）グループＡストレップ検定（Ｇｒｏ
ｕｐ Ａ Ｓｔｒｅｐ ｔｅｓｔ）（ベクトンディッキ
ンソン マイクロバイオロジーシステム、メリーランド
州、コッキーズビレ、２１０３０）である。
プＡストレプトコッキ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）
（Ｓ．ピオジェネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ））につい
てのスクリーニング検定を行なうための適当な調製操作
を施す。そのような検定の例は、ＢＢＬ Ｄｉｒｅｃｔ
ｉｇｅｎ（商標名）グループＡストレップ検定（Ｇｒｏ
ｕｐ Ａ Ｓｔｒｅｐ ｔｅｓｔ）（ベクトンディッキ
ンソン マイクロバイオロジーシステム、メリーランド
州、コッキーズビレ、２１０３０）である。
【００４４】輸送培地ＡおよびＢからの検定の各組の結
果を、スチューデントのＴ検定などの適当な統計学的比
較により比較する。輸送培地Ａ（サポニン入り）からの
綿棒を用いた血清学的検定は、白血球の溶解によるより
優れた抗原回収、および食細胞内部の有害な殺菌条件か
らの細菌の解放を提供するものと期待される。
果を、スチューデントのＴ検定などの適当な統計学的比
較により比較する。輸送培地Ａ（サポニン入り）からの
綿棒を用いた血清学的検定は、白血球の溶解によるより
優れた抗原回収、および食細胞内部の有害な殺菌条件か
らの細菌の解放を提供するものと期待される。
【００４５】以上、本発明の現在考えられる好適な実施
態様を記載してきたが、本発明の精神および範囲を逸脱
することなくさらなる変更および改変が当業者によりな
されうるものであり、そしてそのような変更および改変
はすべて本発明に包含されると考えられる。
態様を記載してきたが、本発明の精神および範囲を逸脱
することなくさらなる変更および改変が当業者によりな
されうるものであり、そしてそのような変更および改変
はすべて本発明に包含されると考えられる。
フロントページの続き (72)発明者 セオドアー・アール・カースキー アメリカ合衆国メリーランド州21013，ボ ールドウィン，ボールドウィン・ミル・ロ ード 14258
Claims (9)
- 【請求項１】微生物の生育能力を保持するために炭素源
に適当な緩衝剤を含む、微生物学的標品の生育能力を保
持するための改良輸送培地であって、食細胞からの微生
物の解放を行いうるのに有効な量の白血球溶解剤が含ま
れることを特徴とする輸送培地。 - 【請求項２】上記溶解剤が非イオン性の界面活性剤また
はサポニンである、請求項１に記載の改良輸送培地。 - 【請求項３】上記溶解剤がサポニンであり、さらにＬ−
ａレシチン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイ
ノシトール、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセ
ロール、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ
ミエリン、およびそれらの混合物からなるグループから
選択されるリン脂質が含まれることを特徴とする、請求
項１に記載の改良輸送培地。 - 【請求項４】食細胞からの微生物の抗原部位をそのまま
の形で解放させることができるのに有効な量の白血球溶
解剤が含まれることを特徴とする、微生物学的標品の抗
原部位の完全性を保持するための改良輸送培地。 - 【請求項５】上記溶解剤が非イオン性の界面活性剤また
はサポニンである、請求項４に記載の改良輸送培地。 - 【請求項６】微生物学的標品を、微生物の生育能力を保
持するための適当な緩衝剤と炭素源および食細胞から微
生物を解放しうるのに有効な量の白血球溶解剤を含む輸
送培地と接触させ；そして上記微生物学的標品が使用ま
たは検定用に開封されるまでの間、上記標品を上記輸送
培地中に維持する工程からなるが、その際、上記輸送培
地は、微生物を破壊し得る白血球細胞から微生物を解放
し上記微生物標品の生育能力を保持する、微生物標品を
輸送するための方法。 - 【請求項７】上記溶解剤が非イオン性の界面活性剤また
はサポニンである請求項６に記載の方法。 - 【請求項８】微生物学的標品を、食細胞から微生物の抗
原部位をそのままの形で解放させることができるのに有
効な量の白血球溶解剤を含む輸送培地と接触させ；そし
て上記微生物学的標品が使用または検定用に開封される
までの間、上記標品を上記輸送培地中に保持する工程か
らなる微生物標品を輸送するための方法。 - 【請求項９】上記溶解剤が非イオン性の界面活性剤また
はサポニンである請求項８に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US88763392A | 1992-05-22 | 1992-05-22 | |
| US887633 | 2001-06-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0662834A true JPH0662834A (ja) | 1994-03-08 |
Family
ID=25391554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12163293A Pending JPH0662834A (ja) | 1992-05-22 | 1993-05-24 | 白血球細胞溶解剤を含む微生物標品に関する輸送培地 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0571203A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0662834A (ja) |
| CA (1) | CA2096194A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002051766A (ja) * | 2000-08-08 | 2002-02-19 | Eiken Chem Co Ltd | 微生物検出用培地 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8481265B2 (en) | 2007-08-02 | 2013-07-09 | Universite Laval | Concentration and enrichment of microbial cells and microbial nucleic acids from bodily fluids |
| CN112345319B (zh) * | 2020-09-29 | 2024-05-17 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种痰液样本的消化方法 |
| CN112345318B (zh) * | 2020-09-29 | 2024-05-17 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种复合痰消化液 |
| WO2022245272A1 (en) * | 2021-05-19 | 2022-11-24 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas (Csic) | Selective lysis of mammalian eukaryotic cells and visualization of viable bacterial cells |
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| US4994378A (en) * | 1989-09-08 | 1991-02-19 | Becton, Dickinson And Company | Method for reducing blood carbon dioxide background in bacterial media by the addition of micelles of saponin and a phospholipid |
| US5043267A (en) * | 1984-05-18 | 1991-08-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for rapid detection of bacterial and fungal infection |
-
1993
- 1993-05-13 CA CA 2096194 patent/CA2096194A1/en not_active Abandoned
- 1993-05-19 EP EP93303896A patent/EP0571203A1/en not_active Withdrawn
- 1993-05-24 JP JP12163293A patent/JPH0662834A/ja active Pending
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| JP4544714B2 (ja) * | 2000-08-08 | 2010-09-15 | 栄研化学株式会社 | 微生物検出用培地 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0571203A1 (en) | 1993-11-24 |
| CA2096194A1 (en) | 1993-11-23 |
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