JPH06506479A

JPH06506479A - Immunoassay using synthetic HTLV-2 peptide

Info

Publication number: JPH06506479A
Application number: JP5510159A
Authority: JP
Inventors: シャー，ディニッシュ　オー; ナス，ヌラペンドラ
Original assignee: デイド、インターナショナル、インコーポレイテッド
Priority date: 1991-11-25
Filing date: 1992-11-20
Publication date: 1994-07-21
Also published as: AU3142593A; AU660752B2; CA2100883A1; EP0573630A1; WO1993011431A1; EP0573630A4

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】合成ＨＴＬＶ−ＩＩペプチドを用いるイムノアッセイ本発明の背景１、本発明の分野本発明は、合成ペプチドおよびこれら合成ペプチドをＨＴ　Ｌ　Ｖ　−■に対する抗体のだめの改良されたイムノアッセイに使用する方法に関する。[Detailed description of the invention] Immunoassays using synthetic HTLV-II peptides Background of the invention 1. Field of the invention The present invention provides synthetic peptides and the use of these synthetic peptides against HTLV-■. The present invention relates to methods for use in improved immunoassays of antibody stocks.

２、先五艮五曵に皿ヒトＴ細胞親すンパ性ウィルス（ＨＴＬＶ）タイプＩおよびタイプ■はヒトレトロウィルスに密接に関係する。ＨＴＬＶ−Ｉは成人Ｔ細胞白血病に関連し、ＨＴ　Ｌ　Ｖ〜■は特定の疾病に関連しないけれども多数の静脈内薬物使用者に発見される。Ｒ，Ｌａｌ　ｅｔ」■互Σ」Ｊ、Ｊ、ｏ　ｆ　Ｉ　ｎｆ−Ｄｉｓ、１６３　：　４１−４６（１９９１年１月）。一般に血清学的アッセイは、ＨＴＬＶ −１およびＨＴ　Ｌ　Ｖ−ＩＩ感染の間を信超して区別できない。これら２種のウィルスの間を血清学的に区別するため、Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌはヒトＴ細胞親すンパ性ウィルスのエンベロープＩ！類タンパク（ｇｐ４６）の独特の領域に相当する合成ペプチドを開示した。Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌの研究において、２種のＨＴＬＶ−Ｉ配列誘導ペプチド、Ｅｎｖ−１（アミノ酸１９１−２１５）およびＥｎｖ−５（アミノ酸２４２−２５７）はＨＴＬＶ−１感染者の血清標本の９２％および１００％と反応したが、ＨＴＬＶ−１１に感染した者からの血清標本の少％（８，６％）はＥｎｖ−１と交差反応し、これら標本のどれもＥｎｖ−５と反応しなかった。ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−Ｉｆのエン・＼ローブ領域によってコードされるペプチドＥｎｖ−２（アミノ酸１８７−２１０）はＨＴＬＶ−１（９４％）およびＨＴＬＶ−ＩＩ　（７４％）感染者からの血清標本と反応したが、他のＨＴＬＶ−ｎペプチドであるＥｎｖ−６（アミノ酸２３８−２５４）は標本の６％以下としか反応しなかった。この研究に基づいて、Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌは、ＥＨｖ− ５がすべてのＨＴＬＶ−Ｉ感染者からの血清抗体によって認識されるＨＴＬＶ− １の免疫優性ドメインを表すものと結論した。2. Plate for the first five people Human T-cell related lymphotropic virus (HTLV) type I and type II are human Closely related to loviruses. HTLV-I is associated with adult T-cell leukemia; LV~■ is not associated with a specific disease, but is found in many intravenous drug users. be done. R, Lal et” ■ Mutual Σ” J, J, o f I nf-Dis, 16 3: 41-46 (January 1991). Generally, serological assays are performed on HTLV -1 and HTL V-II infections cannot be clearly distinguished. These two types To serologically differentiate between viruses, Lal et al. Envelope I of a pathogenic virus! Corresponds to a unique region of the similar protein (gp46) A synthetic peptide has been disclosed. In the study of Lal et al., two types of HT LV-I sequence derived peptides, Env-1 (amino acids 191-215) and En v-5 (amino acids 242-257) is present in 92% of serum specimens from HTLV-1 infected individuals. and 100% of serum specimens from individuals infected with HTLV-11. (8.6%) cross-reacted with Env-1 and none of these specimens reacted with Env-5. I didn't. Coded by the en\lobe region of HT　V　V　-If Peptide Env-2 (amino acids 187-210) is associated with HTLV-1 (94%) and and HTLV-II (74%) reacted with serum specimens from infected individuals, but other HTL The V-n peptide Env-6 (amino acids 238-254) is present in less than 6% of the specimens. I just didn't react. Based on this study, Lal et al. 5 is recognized by serum antibodies from all HTLV-I infected individuals. It was concluded that this represents an immunodominant domain of 1.

このためＬａｌ　ｅｔ　ａｌのＥｎｖ−５ペプチドを使用するアッセイは密接に関係するＨＴＬＶ−Ｉおよび■感染の間のカテゴリー区分を許容することができる。Ｌａｌ　ｅｔ　ａ１報文において、これらペプチドはＨＴＬＶ−１または■ に対する抗体の血清学的評価を実施するためポリビニールプレート上に被覆された。ＨＴＬＶ−ｎペプチド（Ｅｎｖ−２）は本発明者らによって微粒子へ付着された。しかしながらこの固相は低い感度をもってＨＴＬＶ−ｎのための血清学的アッセイをもたらした。そのためＨＴＬＶ−ｎのための高感度血清学的アッセイを得るため微粒子と共に使用することができるペプチドを創出する必要性が存在する。血液銀行事業においてＨＴＬＶ−ｎのための血清学的テストは有用であろう。For this reason, assays using the Env-5 peptide of Lal et al. Categorical division between related HTLV-I and ■ infections can be tolerated. Ru. In the Lal et a1 report, these peptides are HTLV-1 or ■ coated on polyvinyl plates to perform serological evaluation of antibodies against Ta. HTLV-n peptide (Env-2) was attached to microparticles by the present inventors. It was. However, this solid phase has low sensitivity for serologic testing for HTLV-n. brought about the assay. Therefore, a sensitive serological assay for HTLV-n There is a need to create peptides that can be used with microparticles to obtain do. A serological test for HTLV-n would be useful in blood banking operations. cormorant.

本発明の概要本発明は、Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌにより開示された基本配列を有し、ＨＴＬＶ−Ｉｆエンベロープ遺伝子によってコードされる糖タンパクｇｐ−４６の一部分に相当するある種のペプチドに関する。本発明者らによって発見された改良は、Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌ、ＨＴＬＶ−ｎペプチドのアミノ酸１８７の前へ、ＨＴＬＶ−１に相同して３個のアミノ酸を付加することを含む。ＨＴＬＶ−ｎのアミノ酸１８３ヘセリンも付加される。これらアミノ酸残基番号は各タンパクのアミノ末端からのものである。加えて、固相へのカップリングを容易化するため、修飾したペプチドへいくつかのアミノ酸を加えることができる。驚くべきことに、ＨＴＬＶ −Ｉへの感度を増すように修飾したこのペプチドは、ＨＴＬＶ−ＩＩのための高感度固相アッセイをもたらした。Summary of the invention The present invention has the basic sequence disclosed by Lal et al. Compatible with a portion of the glycoprotein gp-46 encoded by the f envelope gene. related to certain peptides. The improvement discovered by the inventors is that La l et al, before amino acid 187 of HTLV-n peptide, HTLV-1 It involves the addition of three amino acids homologous to . Amino acid 18 of HTLV-n 3 Heserin is also added. These amino acid residue numbers are at the amino terminal of each protein. It belongs to them. In addition, modified polymers are available to facilitate coupling to the solid phase. Some amino acids can be added to putide. Surprisingly, HTLV This peptide, modified to increase sensitivity to -I, is highly sensitive for HTLV-II. yielded a sensitive solid-phase assay.

詳しくは、本発明は式（配列同定Ｎ１１ｌ）の抗原ペプチドに関する、加えて、チロシン、システィンまたはリジンをペプチドのＮまたはＣ末端のどちらへも付加することができる。これら修飾ペプチドは配列同定Ｎ１１２−７に示したアミノ酸配列を有する。これらペプチド（配列同定Ｎ１１ｌ−７）は、ＨＴＬＶ−ＩＩ特異性抗体の検出のためのアッセイに使用するため、固相へ吸着または付着させることができる。方法は、サンプルとペプチドとを、ペプチドと、もしサンプル中に存在すればＨＴＬＶ−ＩＩに対する抗体との間に免疫複合体が形成されるような条件のもとで接触させ、サンプル中のＨＴＬＶ−■に対する抗体の存在を決定するため、免疫複合体の形成を測定することを含む、この方法は実施例３に記載されている。In particular, the invention relates to an antigenic peptide of the formula (sequence identification N11l), in addition: Attaching tyrosine, cysteine or lysine to either the N- or C-terminus of the peptide can be added. These modified peptides have the amino acid shown in sequence identification N112-7. It has a noic acid sequence. These peptides (sequence identification N11l-7) adsorbed or attached to a solid phase for use in assays for the detection of I-specific antibodies. can be set. The method is to combine the sample with the peptide and the peptide with the sample. If present in the cell, an immune complex will be formed between the antibody and the antibody against HTLV-II. The presence of antibodies against HTLV-■ in the sample was detected by contacting the sample under such conditions. This method is described in Example 3, including measuring the formation of immune complexes to determine Are listed.

本発明の詳細な説明Ｒｅｎｕ　Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌは、ＨＴＬＶ−ＩおよびＨＴＬＶ−■に対するエンベロープ遺伝子部分に対してそれぞれ以下のアミノ酸配列を発表した。配列同定Ｎ［Ｌ８　（天然ペプチドのアミノ酸１９１から２１４に相当）および配列同定Ｎｏ、９　（天然ペプチドのアミノ酸１８７から２１０に相当）。アミノ酸残基番号は各ペプチドのアミノ末端からのものである。Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌは、これら配列はＨＴＬＶ−１およびＨＴＬＶ−ＩＩに対する感染の区別および免疫応答に重要であると主張した。Detailed description of the invention Renu Lal et al. The following amino acid sequences were announced for each of the envelope gene parts. Same sequence Constant N [L8 (corresponds to amino acids 191 to 214 of the natural peptide) and sequence identity Constant No. 9 (corresponds to amino acids 187 to 210 of the natural peptide). amino acid residue Group numbers are from the amino terminus of each peptide. Lal et al. These sequences are used to differentiate infections and immune responses to HTLV-1 and HTLV-II. He argued that it was important for the answer.

本発明の合成ペプチド（配列同定Ｎａ１−７）の合成において、本発明者らは、ＨＴＬＶ−ｎについてＬａｌ　ｅｔ　ａｌが発表した配列（配列同定阻８）へ、５ｅｉｋｉ　ｅｔ　ａｌが発表したＨＴＬＶ−１のための配列、Ｈｕｍａｎ　Ａｄｕｌｔ　Ｔ−ＣｅｌｌＬｅｕｋｅユ上ｌ−茎土工且１！旦ｌユＩ上ｌ上ｅＮ工旦土１！ｔｉｄｅ　Ｓｅ　ｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＰｒｏｖｉｒｕｓＧｅｎｏｍｅ　Ｉｎｔｅ　ｒａｔｅｄ　ｉｎ　ＬｅｎｋｅｍｉａＣｅｌｌ　ＤＮＡ、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ’　Ｉ　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）８０：３６１Ｂ−３６２２（Ｊｕｎｅ　１９８３）の配列同定隘１０（アミノ酸１８７から２１４まで）の一部分と組合せた。配列同定Ｎ１１１０は配列同定Ｎｔｌｌに示した配列を構成するために使用された。特に、配列同定Ｎ［１１０のアミノ酸２−４と、配列同定寛１のアミノ酸２−４の間に相同性を見出すことができる。抗ＨＴＬＶ−ＩのためのアッセイにＨＴＬＶ−Ｉ　（ｅｎｖ）に相当するペプチドを組込むことは、ＨＴＬＶ−Ｉおよび■の両方を検出するように抗原スペクトルを広くすることが期待された。Ｌａｌ　ｅｔ　ａＩのＨＴＬＶ−ｎペプチドのＮ末端のアミノ酸はＨＴＬＶ−１ペプチドのアミノ酸配列と共通の短いアミノ酸配列を含むように延長された。加えて、Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌのペプチドへアミノ酸セゾンが付加された。これはＨＴＬＶ−ＩをＨＴＬＶ−ｎサンプルから区別するのを助けると考えた。最後に微粒子のような固相へのカップリングまたは吸着を容易化するため、該ペプチドの末端ヘリジンが付加された。チロシン（Ｙ）またはシスティン（Ｃ）は該ペプチドのＮまたはＣ末端にリジン（Ｋ）の代わりに付加することができる。In the synthesis of the synthetic peptide of the present invention (sequence identification Na1-7), the present inventors To the sequence published by Lal et al for HTLV-n (sequence identification 8), Sequence for HTLV-1, Human A, published by 5eiki et al. dult　T-CellLeuke Yu upper l-stem earthwork and 1! dan l yu I upper l upper eN engineering Dan Sat 1! tide Se uence of the Provirus Gen ome Inte rated in LenkemiaCell DNA, P roc, Nat' I Acad, Sci, (USA) 80:361B-362 2 (June 1983) sequence identification number 10 (amino acids 187 to 214) combined with a part of. Sequence identification N1110 constructs the sequence shown in sequence identification Ntll. was used to create In particular, amino acids 2-4 of the sequence identification N[110 and the sequence Homology can be found between amino acids 2-4 of identicon1. anti-HTLV-I Incorporating a peptide corresponding to HTLV-I (env) into the assay for Broadens the antigen spectrum to detect both HTLV-I and was expected. The N-terminal amino acid of the HTLV-n peptide of Lal et aI The acid contains a short amino acid sequence common to that of the HTLV-1 peptide. It was extended to In addition, the amino acid saison was added to the peptide of Lal et al. It was done. This will help distinguish HTLV-I from HTLV-n samples. Thought. Finally, to facilitate coupling or adsorption onto solid phases such as microparticles, Therefore, the terminal helidine of the peptide was added. Tyrosine (Y) or cysteine (C) can be added to the N- or C-terminus of the peptide instead of lysine (K). can.

しかしながら、驚くべきことにＨＴＬＶ−■に対する感度を高めるため修飾したこのペプチドはＨＴＬＶ−ＩＩのための高度に感受性の面相アッセイを招来した。However, surprisingly, it was modified to increase sensitivity to HTLV-■. This peptide led to a highly sensitive facial assay for HTLV-II. .

配列同定Ｎ１１ｌ−７によって示した新しいペプチドは微粒子のような固相へ連結または吸着することができる。この免疫反応剤は血液サンプル中のＨＴＬＶ− ＩＩに対する抗体と反応することができる。The new peptide shown by the sequence identification N11l-7 can be linked to a solid phase such as a microparticle. Can be bound or adsorbed. This immunoreactive agent is used to detect HTLV- can react with antibodies against II.

この合成抗原と溶液中の抗体との間の反応の程度は、ヒ）ＨＴＬＶ−ｎと免疫学的に反応する標識した抗体で検出することができる。The extent of the reaction between this synthetic antigen and the antibody in solution is can be detected using a labeled antibody that reacts with

本発明の環境において標識したとは直接または間接に標識したことを意味する。Labeled in the context of the present invention means directly or indirectly labeled.

。間接に標識するため結合酵素に対する基質が添加される。. A substrate for the bound enzyme is added for indirect labeling.

ペプチドはＭｉｌｌｉｇｅｎ−Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ　９６００モデルペプチドシンセサイザー上で、フルオレニルメトキシキ力ルボニル（ＦＭＯＣ）アミノ保護法および１．３−ジイソプロピルカルボジイミドカップリング化学を使用してアミド形に合成された。配列のアミド形は遊！酸形よりも一層密接に生理学的に活性な類縁体を真似することが期待されるので採用された。活性化したアミノ酸は２．４−ジメトキシベンズヒドリルアミン樹脂へ連結された。ペプチド合成は、イサチンテストが実施されたプロリンを除いてすべてのアミノ酸についてニンヒドリン分析によってモニターされた。Peptides were obtained from Milligen-Biosearch 9600 model peptide series. On the synthesizer, fluorenylmethoxycarbonyl (FMOC) amino protection method and 1,3-diisopropylcarbodiimide coupling chemistry. Synthesized in mid form. The amide form of the sequence is play! more closely physiologically active than the acid form. It was chosen because it is expected to imitate its sexual analogs. The activated amino acid is 2. Coupled to 4-dimethoxybenzhydrylamine resin. Peptide synthesis is The isatin test was performed on all amino acids except proline. monitored by dorine analysis.

合成したペプチドは樹脂からトリフルオロ酢酸、チオアニソール、エタンジチオールおよびアニソールを９０：５：３：２の容積比で含む試薬Ｒによって開裂された。The synthesized peptide is extracted from the resin with trifluoroacetic acid, thioanisole, and ethanedithio. cleaved by reagent R containing olefin and anisole in a volume ratio of 90:5:3:2. It was.

樹脂から開裂したペプチドは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって精製され、そして正確な配列を確認するためＦｏｒｔｏｎ　ＰＩ　２０９０　Ｅ　インテグレーテッドマイクロシーケンシングシステムによって特徴化された。The peptide cleaved from the resin is purified by high performance liquid chromatography (HPLC). Forton PI 2090E to confirm purified and accurate sequence. Characterized by an integrated microsequencing system.

純度は（Ａ）水中０．１％トリフルオロ酢酸、（Ｂ）ＣＨ３ＣＮＮＯ３１％トリフルオロ酢酸の４５分中（Ｂ）５％ないし６０％の直線勾配を用いて逆相カラム上のＨＰＬＣによって確かめられた。＠光度を２３０　ｎｍにおいて追跡した。The purity is (A) 0.1% trifluoroacetic acid in water, (B) CH3CNNO31% trifluoroacetic acid. (B) Reversed phase column using a linear gradient of 5% to 60% in 45 min of fluoroacetic acid. Confirmed by HPLC above. The luminous intensity was tracked at 230 nm.

実施例１ペプチド（配列同定Ｎ１１２）が以下の操作に従って常磁性微粒子上に受動的に被覆された。ポリスチレン表面よりなる約５μｍ常磁性粒子２．５ｗ／ｖ％のｌａｄが５ｄサイズ使い捨て無菌冷凍バイアル（コーニング、カタログ番号２５７０８）内にマグネチックセパレーター上で分離された。上清を除去し、粒子を７０％エタノールで１０分間再懸濁した０粒子を前と同様に分離し、上清を除去した。Example 1 Peptide (sequence identification N112) was passively deposited onto paramagnetic microparticles according to the following procedure. coated. 2.5% w/v l of approximately 5 μm paramagnetic particles with a polystyrene surface ad 5d size disposable sterile frozen vials (Corning, catalog number 257 08) was separated on a magnetic separator. Remove the supernatant and collect the particles at 7 The 0 particles were resuspended in 0% ethanol for 10 min and separated as before, and the supernatant was removed. Ta.

粒子を５０ｍＭ炭酸塩緩衝液ｐＨ８，３の１Ｍｌ中に再懸濁した。粒子を前と同様に分離し、上清を除去した。さらに炭酸塩緩衝液による洗浄を前と同様に２回繰り返し、上清を除去した。The particles were resuspended in 1Ml of 50mM carbonate buffer pH 8.3. Particles as before The supernatant was removed. Two more washes with carbonate buffer as before. The supernatant was removed repeatedly.

粒子スラリーヘペプチド溶液（５０ｍＭ炭酸塩緩衝液ｐＨ８，３中１！Ｉｇ／Ｉｄ）１００．ｃｌと、５０ｍＭ炭酸塩緩衝液９００．ｃｌを加えた０粒子を再懸濁し、室温で約５時間振とうした。Peptide solution (1!Ig/I in 50mM carbonate buffer pH 8.3) to particle slurry d) 100. cl and 50mM carbonate buffer 900. Resuspend the 0 particles with cl. The mixture became cloudy and was shaken at room temperature for about 5 hours.

次に受動的に吸着したペプチド粒子をマグネチックセパレーター上で分離し、上清を除去し、粒子を０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０洗浄荊を加えた等張緩衝食塩水中に再懸濁した６粒子をさらに分離し、等張緩面食塩水に３回再懸濁した０次に被覆した粒子を等張緩衝食塩水中最終濃度０．２５ｗ／ｖ％に再懸濁した。The passively adsorbed peptide particles are then separated on a magnetic separator and The supernatant was removed and the particles were washed in isotonic buffered saline with 0.05% Tween 20. The 6 particles resuspended in The overturned particles were resuspended in isotonic buffered saline to a final concentration of 0.25% w/v.

実施例２ペプチド（配列同定随２）を以下の操作に従ってカルボキシ官能化常磁性微粒子へ共有結合により連結した。約５μｍ常磁性粒子２．５ｗ／ｖ％のｌｄが５ｄサイズ使い捨て冷凍バイアル（コーニング、カタログ番号２５７０８）内にマグネチックセパ−レータ−上で分離された。上清を除去し、粒子を７０％エタノールで１０分間再懸濁した。粒子を前と同様に分離し、上清を除去した。粒子を５０ｍＭ炭酸塩緩衝液ｐｉ（Ｅｌ、３のｌＨ１中に再懸濁した。粒子を前と同様に分離し、上滑を除去した。さらに炭酸塩緩衝液による洗浄を前と同様に２回繰り返し、上清を除去した。Example 2 The peptide (sequence identification part 2) was transformed into carboxy-functionalized paramagnetic microparticles according to the following procedure. was covalently linked to. Approximately 5 μm paramagnetic particles 2.5 w/v % ld is 5 d sa A magnet in a disposable frozen vial (Corning, catalog number 25708) Separated on a tick separator. Remove the supernatant and soak the particles in 70% ethanol. and resuspended for 10 minutes. The particles were separated as before and the supernatant was removed. 50 particles Resuspended in 1H1 of mM carbonate buffer pi (El, 3). Particles were separated as before. Released and removed the upper slip. Repeat two more washes with carbonate buffer as before. and the supernatant was removed.

粒子スラリーへ、ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド５Ｉ１ｇと炭酸塩緩衝液１１ｄを加えた。粒子を良く混合し、次に４０分分間上うした。次に活性化した粒子をマグネチックセパレーター上で分離し、上清を除去し、そして粒子をペプチド溶液（炭酸塩緩衝液ＰＨ８，３中０．１■／ｌ１１）ｌＩＩｉ中に再懸濁した０粒子をよく混合し、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド４■を加えた。再び粒子を良く混合し、約５時間振とうした。To the particle slurry, l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiyl Added 1 g of Mido5I and 11 d of carbonate buffer. Mix the particles well and then for 40 minutes I went up. Next, the activated particles are separated on a magnetic separator, and the supernatant is was removed and the particles were dissolved in a peptide solution (0.1 μ/l in carbonate buffer pH 8.3). 11) Mix well the 0 particles resuspended in lIIi and add the sulfo-N-hydroxys 4■ of succinimide was added. The particles were mixed well again and shaken for about 5 hours.

共有結合により結合したペプチド粒子をマグネチックセパレーター上で分離した。上滑を除去し、粒子を０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０洗浄剤を加えた等張緩衝食塩水中に再懸濁した。粒子をさらに分離し、等張緩面食塩水に３回再懸濁した。次に被覆した粒子を等張緩衝液（０，１ＭＩリスＨＣＩ　ｐＨ７，５，０，５Ｍ塩化ナトトリ衝食塩水中最終濃度０．２５ｗ／ｖ％に再懸濁した。Covalently bound peptide particles were separated on a magnetic separator. . The supernatant was removed and the particles were placed in isotonic buffered saline with 0.05% Tween 20 detergent. Resuspend in water. The particles were further separated and resuspended three times in isotonic mild saline. Next The particles coated with The cells were resuspended in concentrated saline to a final concentration of 0.25% w/v.

実施例３実施例１および２に示したペプチドで被覆した粒子を用いる常磁性粒子アッセイを以下のように実施した。ヒト血清または血漿をウェル緩衝液（２０％ウシ新生児血清、１．０６Ｍ塩化ナトリウム〇、０１５Ｍ　トＵス−ＨＣｌ、ｐＨ７，４，０，０１８Ｍ　！Ｊ７酸緩衝液ｐＨ７，４＋０．１，０．０９％アジ化ナトリウム、および０．４５％　ＮＰ−４０）中に１：１００希釈した。Example 3 Paramagnetic particle assay using peptide-coated particles shown in Examples 1 and 2 was carried out as follows. Human serum or plasma was added to well buffer (20% newborn bovine Child serum, 1.06M sodium chloride, 015M sodium chloride-HCl, pH 7.4 ,0,018M! J7 acid buffer pH 7.4 + 0.1, 0.09% sodium azide and 0.45% NP-40).

希釈したサンプル５０ｕｆをＰａｎｄｅｘ黒色マイクロタイタープレートの各ウェルへ加えた。サンプルは少なくとも２の複数でテストした。実施例１または２に記載したようにペプチドで被覆した常磁性粒子を各ウェルへ加えた（２０ｕｆ）。プレートを次に４２℃で３０分間放置した。Add 50uf of the diluted sample to each volume of a Pandex black microtiter plate. Added to well. Samples were tested in multiples of at least two. Example 1 or 2 Peptide-coated paramagnetic particles were added to each well as described in (20uf ). The plate was then left at 42°C for 30 minutes.

このインキュベーション終了時、ウェル中の粒子を緩衝食塩水およびＴｗｅｅｎ２０　（１１中二塩基性リン酸ナトリウム２．０６ｇ、−塩基性リン酸ナトリウム０．３１８ｇ、Ｔｗｅｅｎ２０　０゜５ｄ、塩化＋）’Ｊウム８．７６ｇ、７ ’；化ナトリウムｔ、Ｏｇ、ｐＨ７，４）で洗った。洗浄ステップ間常磁性粒子はプレートの底へ印加された磁場によりマイクロタイタープレートウェル中に保持された。粒子をこの態様で５回洗った。At the end of this incubation, the particles in the wells are washed with buffered saline and Tween. 20 (2.06 g of dibasic sodium phosphate in 11, -basic sodium phosphate Mu 0.318g, Tween20 0゜5d, chloride+)'Jum 8.76g, 7 '; Sodium t, Og, pH 7.4). Paramagnetic particles between washing steps is held in the microtiter plate well by a magnetic field applied to the bottom of the plate. It was held. The particles were washed in this manner five times.

各ウェル中の粒子を粒子再懸濁緩衝液（ｌｆｆｉ中二塩中性塩基性リン酸ナトリウム４６ｇ、−塩基性リン酸ナトリウム０．５２４ｇ。Particles in each well were dissolved in particle resuspension buffer (lffi di-salt neutral basic sodium phosphate). - 0.524 g of basic sodium phosphate.

塩化ナトリウム８．７６ｇ、　アジ化ナトリウムＩｇ、ＰＨ７，４）３０μｌに再懸濁した。ウェルへ、β−ガラクトシダーゼでコンジュゲートしたヤギ抗ヒ）　ＩｇＧ　（Ｈ＋Ｌ）をコンジュゲート希釈緩車　１ム、５％グリセリン、５．２５Ｍ塩化マグネシウム、０．１％アジ化ナトリウム、および２０％ウシ新生児血清、ｐＨ７，５）で１：２０００希釈した液２０μ ｆを加えた。コンジュゲートを４２°Ｃにおいて１５分間インキュベートした後、ウェル中の粒子を上記リン酸緩衝食塩水およびＴｗｅｅｎ２０で５回洗浄し、未結合コンジュゲートの実質上すべてを除去した。洗浄液中のＴｗｅｅｎ２０は洗浄プロセスを増強し、非特異的に結合したコンジュゲ−１・を除去した。最後に、基質溶液での６回目の洗浄の後、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド（ＭＵＧ）の基質溶液（１１，中ＭＵＧ０．１７８ｇ、トリシン３．５８ｇ、　ジメチルスルホキシド５．１１ｄ、メチルアルコール０．５ｄ、アジ化ナトリウム０．２０ｇ、Ｔｗｅｅｎ２０　０．５ｄ、ｐＨ８，５）５０ｔｔｌ！を各ウェルへ加えた。ウェル中のβ−ガラクトシダーゼ（すなわちコンジュゲートンの存在は螢光性クマリン産物を発注するＭＬＩＧの開裂を引金した。この試薬およびコンジュゲートは感受性検出システムとして使用された。螢光（励起波長４００　ｎｍ／放出波長４５０　ｎｍ）がＭＵＧ添加後二つの時間間隔（すなわち２分および１４分）において測定された。二つの値の間の差は螢光生成物発生の動力学的測定であり、そして粒子へ結合し７たコンジュゲートおよびヒトＩｇＧ／ＩｇＭの直接測定である。螢光値は、標準曲線を作成するためクマリン自体の各種濃度およびその結果得られる螢光を使用してｎＭクマリン値へ換算された。8.76g of sodium chloride, sodium azide Ig, PH7.4) to 30μl Resuspend. goat anti-human conjugated with β-galactosidase) IgG (H+L) conjugate dilution slow wheel 1 5% glycerin, 5.25M magnesium chloride, 0.1% sodium azide , and 20μ of a 1:2000 dilution with 20% neonatal bovine serum, pH 7.5). Added f. After incubating the conjugate for 15 minutes at 42°C , wash the particles in the wells 5 times with the above phosphate buffered saline and Tween 20, Substantially all of the unbound conjugate was removed. Tween20 in the cleaning solution The washing process was intensified to remove non-specifically bound conjugate-1. last After the sixth wash with substrate solution, 4-methylumbelliferyl-β-D-ga Lactoside (MUG) substrate solution (11, in which MUG 0.178g, tricine 3. 58g, dimethyl sulfoxide 5.11d, methyl alcohol 0.5d, azide Sodium chloride 0.20g, Tween20 0.5d, pH8.5) 50ttl ! was added to each well. β-galactosidase (i.e. conjugate) in the wells The presence of the autoton triggered the cleavage of MLIG to produce a fluorescent coumarin product. this The reagents and conjugates were used as sensitive detection systems. Fluorescence (excitation) wavelength 400 nm/emission wavelength 450 nm) at two time intervals (all 450 nm) after MUG addition. 2 minutes and 14 minutes). The difference between the two values is the fluorescent product A kinetic measurement of the development and binding of conjugates to particles and humans. It is a direct measurement of IgG/IgM. Fluorescence values were measured using coumarin to create a standard curve. The various concentrations of coumarin itself and the resulting fluorescence are used to convert to nM coumarin values. It was.

（以下余白）粒子へ受動的に９看されたベブチド表　２粒子へ共有結合により結合したペプチドサンプル同定　アッセイ値ＨＴＬＶ−ｎ＃１　２７　１３８＃３　２６　２７７＃８　３１　１０８＃１１　１５０　１５８＃１２　３０６　８３６＃Ｌ３　３８８　７７１＃１６　１６４　１２０３＃１７　１２４　５０００＃１８　７０　７６９ＨＴＬＶ−１陽性　２１　１１陰性対照　１８　１１サンプル希釈液　３２粒子：懸濁緩衝液中０．０２％；ヤギ抗ヒトＩ　ｇＧ　（Ｈ＋Ｌ）β−ガラクトシダーゼ標識コンジュゲート：　１　：　２０００希釈。１００のアッセイ値をアッセイカットオフとして設定し、そして１００より小さい値はこのためこの評価において陰性と考えた。(Margin below) Bebutide passively attached to particles Table 2 Identification of peptide samples covalently bound to particles Assay value HTLV-n#1 27 138 #3 26 277 #8 31 108 #11 150 158 #12 306 836 #L3 388 771 #16 164 1203 #17 124 5000 #18 70 769 HTLV-1 positive 21 11 Negative control 18 11 Sample diluent 32 Particles: 0.02% in suspension buffer; goat anti-human IgG (H+L) β-galacto Sidase labeled conjugate: 1:2000 dilution. 100 assay values set as the assay cutoff, and values less than 100 are therefore The test results were considered negative.

これらの実施例は、微粒子のような固相へ付着または会合した配列同定阻２の合成ペプチドは、Ｌａｌ　ｅｔ　ａｌによって報告されたＨ　Ｔ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩｎペプチドりもＨＴＬＶ−Ｕに対して一層感受性のアッセイをもたらしたことを示す。These examples describe the combination of sequence identification inhibitors 2 attached to or associated with a solid phase such as a microparticle. The synthetic peptide is HTLV-II reported by Lal et al. The n-peptide also yielded a more sensitive assay for HTLV-U. show.

本発明は主として特定のそして好ましい具体例に関して記載されたが、本発明の範囲から逸脱することな（修飾することが可能であることが理解されるであろう。以下の請求の範囲は、本発明の原理に一般的に従い、そして本開示から離脱を含む、本発明のすべての変更、使用または適応化を、本発明が関係する分野における既知のまたは慣用の実際の入るものとして、またはこの分野の当業者に自明なものとして、カバーすることを意図する。Although the invention has been described primarily in terms of specific and preferred embodiments, the invention without departing from the scope (it will be understood that it is possible to modify . The following claims generally follow the principles of the invention and do not depart from this disclosure. All modifications, uses or adaptations of the invention, including as known or commonly used in practice or obvious to a person skilled in the art. As such, it is intended to cover.

−【坦１− （１）一般情報（１）出願人：５ｈａｈ、Ｄｉｎｅｓｈ　０Ｎａｔｈ、Ｎｒａｐｅｎｄｒａ（ｉｉ　）発明の名称：　ＨＴＬＶ−ｎペプチドを用いるイムノアッセイ（ｉｊ）配列の数：１０（ｉｖ）連絡住所：（Ａ）名宛人：Ｂａｘｔｅｒ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　Ｉｎｃ。- [Dan 1- (1) General information (1) Applicants: 5hah, Dinesh 0Nath, Nrapendra (ii) Title of the invention: Immunoassay using HTLV-n peptide (ij) Number of arrays: 10 (iv) Contact address: (A) Addressee: Baxter Diagnostics Inc.

（Ｂ）ストリート：Ｏｎｅ　Ｂａｘｔｅｒ　Ｐａｒｋｗａｙ。(B) Street: One Baxter Parkway.

Ｆ２−２Ｅ（Ｃ）市：Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ（Ｄ）州：１１１ｉｎｏｉｓ（Ｅ）国：　ＬＪＳＡ（Ｆ）ＺＩＰコード：６００１５（ｖ）コンピュータ読取り形式：（Ａ）媒体タイプ：フロッピーディスク（Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭ　ＰＣコンパチブル（Ｃ）　ｔへＬ／−テ４７グシステＬ　：　ＰＣ−ＤＯ３／ＭＳ−ＤＯ３（Ｄ）ソフトウェア：Ｐａｔｅｎｔｌｎ　Ｒｅ１ｅａｓｅ＃１．　２５（ｖｉ）現行出願データ：（Ａ）出願番号：ＵＳ（Ｂ）出願臼：（Ｃ）分類：（ｖｉ）代理人情報：（Ａ）氏名：　Ｂａ　ｒ　ｔ、ａ、ＫｅｎＬ（Ｂ）登録番号二２９，０４２（Ｃ）参照／ドケソト番号８９１１８３Ａ（ｖｉ）テレコミユニケージジン情報（Ａ）ｉｉｔ話ニア０８／９４８−３３０８（Ｂ）テレファックス：　７０Ｂ／９４８−２６４２（以下余白）（２）配列同定Ｎα１についての情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ二アミノ酸２８個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー：未知（ｉｉ）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定Ｎａｌ：（２）配列同定Ｎα２についての情報：（ｉ）配列の特＠：（Ａ）長さ二アミノ酸２９個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（ｘｉ）配列の記述：配列同定Ｎα２：Ｌｙｓ　Ｓａｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓｌ　５　１０Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ工１ａ　ＬａｕＬｙｓ　Ｐｈｅｌｌｅ（２）配列同定漱３についての情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ二アミノ酸２９個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー：未知（ｉｉ）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定随３：Ｓａｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　入ｓｐ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｖａ１Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ工１ａ　Ｌａｕ　ＬｙｓＰｈａ工１ｅ　Ｌｙｓ（２）配列同定毘４についての情報：（１）配列の特＠：（Ａ）長さ二アミノ酸２９個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー：未知（ｉｉ　）分子タイプ：ペプチド（Ｘｌ）配列の記述：配列同定Ｎα４二Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｐニーｏ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　）（ｉｓ　Ａｓｐ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓｌ　５　１゜Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅ′：Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ工ｍｅ　ＬａｕＬ５　２０　２５Ｌｙｓ　Ｐｈａｌｌｅ（２）配列同定患５についての情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ二アミノ酸２９個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー二未知（ｉｉ　）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定Ｎα５：Ｓａｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　ＶａｌＰｈａ工１ａ　１ｊｌｙｒ（２）配列同定Ｎα６についての情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ二アミノ酸２９個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー二未知（１１）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定ト１α６：Ｃｙｓ　Ｓａｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　入ｓｐ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓｌ　５　１０Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ工１ａ　ＬｅｕＬＹＳ　Ｐｈａｌｌｅ（２）配列同定Ｎα７についての情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ二アミノ酸２９個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー二未知（ｉｉ）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定Ｎα７：Ｓａｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｖａｎ　Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｖａｌｌ　５　１０Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ｓｉｒ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　工ｌａ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ２゜Ｐｈａ工１ａ　Ｃｙｓ（２）配列同定胤８についての情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ二アミノ酸２４個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー：未知（１１）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定Ｎα８：Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ｓａｒ　Ａｓｎ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　Ｈｉｓ　工ｍｅ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　５ａｒ工ｍｅ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　Ｓａｒ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ｖａｌ２゜（２）配列同定Ｎα９についての情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）長さ二アミノ酸２４個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー二未知（１１）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定Ｎα９：（２）配列同定Ｎα１０についての情報：（ｉ）配列の特＠：（Ａ）長さ二アミノ酸２８個（Ｂ）タイプ：アミノ酸（Ｃ）トポロジー二未知（１１）分子タイプ：ペプチド（ｘｉ）配列の記述：配列同定Ｎα１０：Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ｓｉｒ　Ａｓｎ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　Ｈｉｓ　工１ｅＬａｕ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｓａｒ工１ａ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　Ｓａｒ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　ＴｈｒＬａｕ　ＶａｌF2-2E (C) City: Deerfield (D) State: 111inois (E) Country: LJSA (F) ZIP code: 60015 (v) Computer readable format: (A) Media type: Floppy disk (B) Computer: IBM PC computer Patible (C) t to L/-te 47g system L: PC-DO3/MS-DO 3(D) Software: Patentln Release #1. 25 (vi) Current application data: (A) Application number: US (B) Application mill: (C) Classification: (vi) Agent information: (A) Name: Ba r t, a, KenL (B) Registration number 229,042 (C) Reference/Dokesoto number 891183A (vi) Telecommunications information (A) IIT talk near 08/948-3308 (B) Telefax: 70B/ 948-2642 (margin below) (2) Information about sequence identification Nα1: (i) Sequence characteristics: (A) Length: 28 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology: unknown (ii) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: Sequence identification Nal: (2) Information about sequence identification Nα2: (i) Array special @: (A) Length: 29 diamino acids (B) Type: Amino acid (xi) Sequence description: Sequence identification Nα2: Lys Sar Pro Pro La u Val His Asp Sar Asp Lau Glu Hisl 5 10 Val Lau Thr Pro Ser Thr Sar Trp Thr Thr Lys Engineering 1a LauLys Phelle (2) Information about the sequence identified Sou 3: (i) Characteristics of array: (A) Length: 29 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology: unknown (ii) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: sequence identification part 3: Sar　Pro　Pro　Lau　Val　His　sp　Sar　Asp Lau Glu His Va1Lau Thr Pro Sar Thr S er Trp Thr Thr Lys Engineering 1a Lau LysPha Engineering 1e Lys (2) Information about sequence identification Bi4: (1) Array special @: (A) Length: 29 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology: unknown (ii) Molecule type: Peptide (Xl) Sequence description: Sequence identification Nα42 Tyr Ser Pro P knee o L au Val) (is Asp Sar Asp Lau Glu Hisl 5 1゜ Val Lau Thr Pro Sar Thr Se': Trp Thr Thr Lys engineer LauL5 20 25 Lys Phalle (2) Information about sequence identified patient 5: (i) Characteristics of array: (A) Length: 29 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology two unknowns (ii) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: Sequence identification Nα5: Sar　Pro　Pro　Lau　Va l His Asp Ser Asp Lau Glu His ValPha Engineering 1a 1jlyr (2) Information about sequence identification Nα6: (i) Sequence characteristics: (A) Length: 29 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology two unknowns (11) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: Sequence identification 1α6: Cys Sar Pro Pro L au Val His enter sp Sar Asp Lau Glu Hisl 5 10 Val Lau Thr Pro Sar Thr Sar Trp Thr Thr Lys Engineering 1a LeuLYS Phalle (2) Information about sequence identification Nα7: (i) Sequence characteristics: (A) Length: 29 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology two unknowns (ii) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: Sequence identification Nα7: Sar　Pro　Pro　Lau　Va n His Asp Sar Asp Lau Glu His Vall 5 10 Lau Thr Pro Sar Thr Sir Trp Thr Thr Lys Engineering la Lau Lys2゜ Pha engineering 1a Cys (2) Information about sequenced seed 8: (i) Characteristics of array: (A) Length: 24 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology: unknown (11) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: Sequence identification Nα8: Leu Pro His Sar As n Lau Asp His Engineering Me Lau Glu Pro 5ar Engineering Me Pro Trp Lys Sar Lys Lau Leu Thr Lau Val2゜ (2) Information about sequence identification Nα9: (i) Sequence characteristics: (A) Length: 24 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology two unknowns (11) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: Sequence identification Nα9: (2) Information about sequence identification Nα10 :(i) Array special @: (A) Length: 28 diamino acids (B) Type: Amino acid (C) Topology two unknowns (11) Molecule type: Peptide (xi) Sequence description: Sequence identification Nα10: Ala Pro Pro Lau L au Pro His Sir Asn Lau Asp His Engineering 1eLa u Glu Pro Sar engineering 1a Pro Trp Lys Sar Lys Lau Lau Thrau Val

Claims

[Claims]

1. a) Sequence identification No. Amino acid sequences shown in 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7 covalently bonding a synthetic peptide selected from the group consisting of b) combining said solid phase with a blood sample; c) HTLV-II bound to said solid phase; detecting antibodies against Serological detection method for antibodies against HTLV-II in blood samples containing .

2. 2. The method of claim 1, wherein the solid phase is a particulate.

3. a) Sequence identification No. Amino acid sequences shown in 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7 A synthetic peptide selected from the following group is adsorbed onto a solid phase, b) combining said solid phase with a blood sample; c) HTLV-II bound to said solid phase; detecting antibodies against Serological detection method for antibodies against HTLV-II in blood samples containing .

4. 4. The method of claim 3, wherein the solid phase is a particulate.

5. Sequence identification no. A synthetic peptide consisting of the amino acid sequence shown in 1.

6. Binding to an antibody against HTLV-II linked or adsorbed to a solid phase The peptide is transferred to a solid phase in an immunological reagent containing a synthetic peptide compound capable of Represented by the following N-terminal or C-terminal amino acid sequence linked or absorbed Immunological reagent selected from the group of peptides: a. Sequence identification no. 2 b. Sequence identification no. 3 c. Sequence identification no. 4 d. Sequence identification no. 5 e. Sequence identification no. 6 f. Sequence identification no. 7

7. 7. The immunological reagent of claim 6, wherein said solid phase is a microparticle.

8. a) Sequence identification No. Amino acid sequences shown in 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7 Microparticles coated with synthetic peptides selected from the group consisting of b) a labeled antibody that immunologically reacts with human HTLV-II antibodies; c) a negative control; d) negative control, and e) Microtiter plate A diagnostic test kit for the detection of HTLV-II specific antibodies comprising: