JPH06503344A - 可溶性の補体受容体と、補体を抑制しかつ／または免疫活性を抑制する化合物との相乗組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

可溶性の補体受容体と、補体を抑制しかつ／または免疫活性を本発明は、補体を 相乗的または付加的に抑制し、かつ／または免疫抑制活性を有する有機化合物お よび生物化合物の治療組成物、およびその治療上の使用に関する。本発明の有機 化合物は、補体抑制性免疫抑制活性、および／または抗炎症活性を示す化合物で ある。生物化合物は補体受容体および／または５ＣＲ−を含むタンパク質と関連 する機能の少なくとも一つを示す。本発明は免疫疾患および／または炎症疾患の 治療のためのこれらの化合物の混合物の使用に関する。 補体系は、ヒトの正常な血清中のグロブリンの約ｌＯ％を構成するタンパク質の 群である（Ｈｏｏｄ、　Ｌ、　Ｅ、ら１９８４．１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２編 。 Ｔｈｅ　Ｂｅｎｊａｍｉｎ／ＣｕＣｕｍｍ１ｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、 、Ｍｅｎｌｏ　Ｐａｒｋ、Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ。 ｐ、　３３９）。補体（Ｃ）は免疫反応およびアレルギー反応の媒介に重要な役 割を果たす（Ｒａｐｐ、　Ｈ，’　Ｊ、およびＢｏｒｓｏｓ、　Ｔ、　、　１９ ７０．　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂａ５ｉｓｏｆ　Ｃｏｍｐｌｅｏ＋ｅｎｔ　Ａｃ ｔｉｏｎ、Ａｐｐｌｅｔｏｎ−Ｃｅｎｔｕｒｙ−Ｃｒｏｆｔｓ（Ｍｅｒｅｄｉｔ ｈ）、ＮｅｗＹｏｒｋ）。Ｃ成分の活性化は、補体依存性疾患と関連する炎症を 媒介する走化性ペプチドを含む一群の因子の発生をもたらす。補路により、また は成る種の細胞壁多糖の認識を伴う副経路により生じることがある。活性化され た補体タンパク質により媒介される活性は、標的細胞の溶解、走化性、オプソニ ン作用、筋肉およびその他の平滑筋細胞の刺激、マスト細胞の脱顆粒反応、小血 管の増大された透過性、白血球の誘導された移動、並びにＢリンパ球、マクロフ ァージおよび好中球の活性化を含む（Ｅｉｓｅｎ、　Ｈ，Ｎ、　。 １９７４、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｈａｒｐｅｒ＆　Ｒｏｗ、　Ｐｕｂｌ　１ ｓｈｅｒｓ、　Ｉｎｃ、　、　Ｈａｇｅｒｓ　ｔｏｗｎ、　lａ− ｒｙｌａｎｄ、　ｐ、　５１２）。 タンパク質分解カスケード工程中に、生物活性ペプチドフラグメント、アナフィ ラトキシ：ｚＣ３ａ　、　Ｃ４ａ　、およびＣ３ａ（ＷＨＯ５ｃｉｅｎ−ｔ　ｉ 　ｆ　ｉｃ　Ｇｒｏｕｐ、　ＷＨＯＴｅｃｈ、　Ｒｅｐ、　Ｓｅｒ、　１９７７ 、６０６．５およびその中に引用された文献を参考のこと）が第三（Ｃ３）、第 四（Ｃ４）、および第五（Ｃ５）天然補体成分から放出されるＯｌｕｇｌ　ｉ、 　’ｒ、　Ｅ、　ＣＲＣＣｒｉ　ｔ、　Ｒｅｖ、　１ｍｍ−ｕｎｏｌ、　１９８ １．１　、３２１　；Ｂｕｌｔ、　Ｈ，およびＨｅｒｍａｎ、Ａ、Ｇ、Ａｇｅｎ ｔｓ　Ａｃｔｉｏｎｓ１９８３、１３．４０５）。Ｃ５ａフラグメント、即ちＣ ５αサブユニットのアミノ末端の最初の７４のアミノ酸から誘導されたカチオン 性ペプチド（Ｔａｃｋ、　Ｂ、　Ｆ、らＢｊｏｃｈｅｎｉｓｔｒｙ　１９７９． １８．１４９０）は特別な病気に関係する。Ｃ５ａ活性の調節は内因性血漿酵素 カルボキシペプチダーゼＮ（Ｅ、　Ｃ，３，４，１２，７）によるものであり、 これはＣ５ａからカルボキシ末端アルギニンを迅速に除去して、それ程効力がな いが、依然として活性なＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇを生産する。特異的免疫反応に 関するＣ３ａおよびＣ５ａの報告された効果が表Ｉにリストされる。 表１ ヒツジ赤血球に応答する 特異的抗体生産　抑制　増進 ＦＣ抗体フラグメントに 応答するポリクローナル抗体生産　抑制　増進破傷風トキソイドに応答する Ｔ細胞増殖　抑制　増進 混合リンパ球反応中のＴ細胞増殖　効果なし　増進Ｔ細胞媒介細胞毒性　抑制　 増進 Ｃ５ａにより示される多種の生物活性の中に、平滑筋の収縮（Ｗ−ｉｓｓｌｅｒ 、　Ｊ、　Ｈ，Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉ＋＋＋ｍｕｎｏ１．１９７２．２．７３）　 、？スト細胞の脱顆粒（Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ａ、　Ｒ，ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１ ９７５，２８．１０６７）　、多形核好中球（ＰＭＮ）からのアズール顆粒酵素 の分泌（Ｗｅｂｓｔｅｒ、　Ｒ，０，ら、　Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａ−ｃｏｌ 、　１９８０，２，２０１）、およびＰＭＮの走化性（Ｗｉｓｓｌｅｒ、　Ｊ、 　Ｈ，Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍ−ｍｕｎｏｌ、　１９７２．２．７３　；Ｂｅａｋ ｅｒ、　Ｅ、　Ｌ、　Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｓｃｉ、　１９８ ３．４．２Q３） がある（表１１）。 表ｌＩ Ｃ５ａの生物効果 １、炎症に関与する好中球機能の刺激 Ａ、走化性 Ｂ、ケモキネシス Ｃ０凝集 り、リソシーム酵素放出 Ｅ、毒性酸素生産物の発生 ＋＋、平滑筋効果 Ａ、胃平滑筋収縮 Ｂ、血管拡張 １１１、ヒスタミン放出の促進 Ａ、マスト細胞 Ｂ、好塩基細胞 ＩＶ、免疫調節効果 生体内の活性走化性因子はＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇであると考えられる（Ｂｅｃ ｋｅｒ、　Ｅ、　Ｌ、　Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｓｃｉ、　１９ Ｂ３．４．２２３）。 Ｃ５ａまたはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇフラグメントは、慢性関節リウマチ、成る 形態の腎炎、アルサス反応の如き実験上の血管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔ−ｉｄｅｓ ）　、ｏイコトリエンＣ−４およびＤ−４（ＬＴＣ，およびＬＴＤ、）の放出を 伴う実験動物の肺への走化性因子の点滴注入により生じる急性肺炎、等における ＰＭＮの浸潤（走化性効果）に関与していた。加えて、Ｃ５ａと好中球の間の相 互作用が幾つかの臨床状況で組織損傷を引き起こすと考えられていた。例えば、 心筋虚血中、特に、心筋の再酸素化および再潅流（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）の 期間中に心筋組織損傷を媒介することにおける酸素誘導遊離基の役割を明確にす る成長体が存在する。これらの遊離基の幾つかの可能な源の中で、多形核好中球 が主たる注目の焦点であった。これらの研究は、好中球枯渇または好中球機能の 抑制が局所虚血の期間続いて再潅流を受ける心筋組織のかなりの再利用を生じる ことを実証していた（Ｓ＋ｍｐｓｏｎ、　Ｐ、　Ｊ、およびＬｕｃｃｈｅｓｉ、 　Ｂ、　Ｒ，Ｊ、　Ｌａｂ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｅｄ、　１９８７．１１０（１） 、　１３−３０）。イヌ中の好中球枯渇は、２４時間の再潅流を伴う９０分の閉 塞後にかなり小さい心筋梗塞を生じた（Ｊｏｌｌｙ、　Ｓ、　Ｒ，らＡｍ、　Ｈ ｅ−ａｒｔ　Ｊ、１９８６．１１２．６８２−６９０）。 ２．２．補体を抑制し、炎症を回復し、かつ／または免疫抑制活性を有する有機 化合物 多くの薬品が補体媒介活性を減少すると報告されていた。このような化合物は、 アミノ酸（Ｔａｋａｄａ、　ＹらＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１９７８．３４．５０９ ）　；ホスホン酸エステル（Ｂｅｃｋｅｒ、　Ｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏ ｐｈｙ、　Ａｃｔａ１９６７、１４７゜２８９）；ポリアニオン性物質（Ｃｏｎ ｒｏｗ、　Ｒ，Ｂ、らＪ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　１９８０．２３゜２４２） 　；　スルホニルフルオリド（Ｈａｎｓｃｈ、　Ｃ，；Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ、　 Ｍ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ。 １９７４、１７．１１６０、およびその中に引用された文献）；ポリヌクレオチ ド（ＤｅＣＩｅｒｃｑ、　Ｐ、　Ｐ、らＢ　ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、 　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１９７５．６７、２５５）　G ピマール酸（Ｇｌｏｖｓｋｙ、　Ｍ、　Ｍ、らＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９６ ９．１０２．　Ｉ）　：ポルフィン（Ｌａｐｉｄｏｓ、　Ｍ、およびＴｏｍａｓ ｃｏ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ、　１９８１．３．１３７）　 ；幾つかの抗炎症薬（Ｂｕｒｇｅ、　Ｊ、　Ｊ、らＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１ ９７８．１２０．１６２５）　；フェノール（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ 、　Ｈ，Ｊ、　１９７８．　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｂ ｉｏ−ｌｏｇｉｃａｌ　Ｄｅｇｒａｄａｔｉｖｅ　Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ、Ｂｅｒ ｌｉｎ、Ｒ，Ｄ、ら編集、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、 　ｐ、　６５）　；およびベンズアミジン（Ｖｏｇｔ、　Ｗ、らＩｍｍｕｎ−ｏ ｌｏｇｙ　１９７９，３６，１３８）を含む。これらの薬剤の幾つかはプロテア ーゼおよびエステラーゼの一般的な抑制によりそれらの活性を示す。 その他の薬剤は補体経路で特別な中間工程に特異的ではないが、むしろ、補体活 性化の一つより多い工程を抑制する。後述の化合物の例はベンズアミジンを含み 、これらはＣＩ、　Ｃ４およびＣ５利用を阻止する（Ｖｏｇｔ、　Ｗ、らＩｍｍ ｕｎｏｌ、　／　１９７９．３６．１３８）。免疫抑制活性を有し、そして炎症 を回復するように作用する多くの有機化合物がまた当業界で公知である。 はスピロフランにより結合されたベンゼン環と組み合わされたドリマン（ｄｒｉ ｍａｎｅ）骨格を有し、６，７−シホルミルー３°、４°、　４ａ’　、　５’ 　、　６′。 ７゛、８°、８ａ°−オクタヒドロ−４，６’、７’−トリヒドロキシ−２°、 ５°、５°。 ８ａ’−テトラメチルスピロ［ｌ“（２’　Ｈ）−ナフタレン−２（３）１）− ベンゾフラン］として決定されていた（Ｋａｉｓｅ、Ｈ，らＪ、　Ｃｈｅｍ、　 Ｓｏｃ、　Ｃｈｅｗ、　ＣｏＩＩｌ−ｍｕｎ、　１９７９．７２６）　ｏモノカ ルボン酸誘導体であるに一７６ＣＯ０１（は、Ｋ−７６が酸化銀により選択的に 酸化される場合に得られる（Ｃｏｒｅｙ、　Ｅ、　Ｊ。 およびＤａｓ、　Ｊ、　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、　１９８２． １０４．５５５１）。 Ｋ−７６およびに一７６ＣＯＯＩ＋の両方は主としてＣ５工程で補体を抑制する ことが示された（Ｈｏｎｇ、　Ｋ、らＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９７９．１２ ２．２４１８；Ｍｉｙａｚａｋｉ。 Ｗ、らＭｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９Ｂ０，２４．１０９１）。古 典的溶血反応系において、モルモット血清による感作ヒツジ赤血球の溶血が７． ４５ｘ１０−”Ｍのに−７６、または３．４１　ｘ　１０−’Ｍのに一７６ＣＯ ＯＮａにより５０％減少された（Ｈｏｎｇ、　Ｋ、らＪ、　Ｉｉｍｕｎｏｌ、　 １９７９．１２２．２４１８；Ｍｉｙａｚａｋｉ、　Ｗ、らト１ｃｒｏｂｉｏ１ ．Ｉｍｍｕｎｏ１．１９８０，２４．１０９１）　ｏ同様の結果が補体活性化の 副経路により溶血反応系中で観察された。 Ｋ−７６およびに一７６ＣＯＯ）ｌの両方は正常のヒト補体からの走化性因子の 発生を防止した（Ｂｕｍｐｅｒｓ、　Ｈ，およびＢａｕｍ、　Ｊ、　Ｊ、　Ｌａ ｂ、　Ｃ１ｉｎｃ、　Ｍｅｄ。 １９Ｂ３．１０２．４２１）。Ｋ−７６は腎細胞毒性腎炎のラットの尿中に排泄 されるタンパク質の量を減少することが示され（Ｉｉｄａ、Ｈ，らＣ１１ｎ。 Ｅｘｐ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９８７．６７、１３０−１３４）、そして特発 性の全身性エリテマトーデス様疾患のマウスの生存を大幅に増大し、またモルモ ットおよびマウスのフォルスマンショックを抑制すると報告されている（Ｍｉｙ ａｚａｋｉ、　Ｗ、らＭｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９８０，２４． １０９１）。高濃度のに−７６またはに一７６ＣＯＯＨでは、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ６ 、Ｃ７、およびＣ９とそれらのそれぞれの先行する中間体の反応の若干の抑制が 示される。しかしながら、両方の化合物の抑制作用は主としてＣ５およびＥＡＣ Ｉ、４ｂ、２ａ、３ｂからのｌｌ：Ａｃｌ、４ｂ、２ａ、３ｂ、５ｂ（示された 補体成分を有する感作ヒツジ赤血球）の生体外の発生：存在するＥＡＣＩ、４ｂ 、２ａ、３ｂ、５ｂの崩壊の促進；および走化性ペプチドの発生の阻止である（ Ｈｏｎｇ、に、らＪ、　Ｉｉｍｕｎｏｌ、　１９８１．１２７．　１０９；Ｒａ ｍｍ、　Ｌ、　Ｅ、らＭｏ１．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９８３．２０．１５５） 。 また、Ｋ−７６Ｃ００１（は抗肝炎薬であると報告されており（１９８１年、３ 月１２日に公開された西ドイツ特許出願第３．０３１．７８８号（Ｓｈｉｎｏｈ −ａｒａ、　Ｍ、ら））、そして抗体依存性の細胞媒介細胞毒性および自然のキ ラー溶菌活性を抑制する能力を有する（Ｈｕｄｉｇ、　Ｄ、らＪ、　１ｍｍｕ口 ｏｆ。 １９８４、１３３．４０８−４１３）。また、Ｋ−７６またはに一７６ＣＯＯＨ は補体のＣ３ｂイナクチベーター系を抑制すると報告されていた（Ｈｏｎｇ、　 Ｋ、らＪ。 １＋ｎ＋ｎｕｎｏ１．１９８１．１２７．１０４−１０８）。Ｋ−７６の半合成 誘導体が抗アレルギー薬、抗腫瘍薬、および抗腎炎薬として特許されていた（１ ９７８年１１月１６日に公表されたベルギー特許第８６７、０９５号（Ｓｈｉｎ ｏｈａｒａ、　Ｍ。 ら））。Ｋ−７６の単離、自己免疫疾患の治療におけるその使用、およびその誘 導体の調製が幾つかの特許に記載されている（Ｓｈｉｎｏｈａ−ｒａ、　Ｍ、ら の特開間第５４−９２６８０号（１９７９年７月２３日に公開）、同第５４−１ ０６４５８号（１９７９年８月２１日に公開）、同第５７−８３２８１号（１９ ８２年５月２５日に公開）；持分間第６０−３０２８９号（１９７９年３月２０ 日に公開）を参照のこと）。 スピロベンゾフラン−２（３Ｂ）−シクロアルカンの下部構造を含む幾つかの更 に別の化合物が知られている。これらの化合物はグリセオフルビン（Ｗｅｉｎｂ ｅｒｇ、　Ｅ、　Ｄ、　、　１９８１．　ｉｎ　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　 ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２編、　Ｆｏｙｅ、　Ｗ、　Ｏ，編 集、　Ｌｅａ＆　Ｆｅｂｉｇｅｒ、　Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ。 ＰＡ、　、　ｐ、　８１３）、イソパンナリン（Ｄｊｕｒａ、　Ｐ、およびＳａ ｒｇｅｎｔ、　Ｍ、　Ｖ、　Ａｕ５ｔ。 Ｊ、Ｃｈｅ＋ｎ、１９８３．３６．１０５７）、およびシフォノジクチオン・コ ラリーファグム（Ｓｉｐｈｏｎｏｄｉｃｔｙｏｎ　ｃｏｒａｌｌｉ−ｐｈａｇｕ ｍ）の代謝産物（Ｓｕｌｌｉｖａｎ、　Ｂ、らＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　１９８ １．３７．９７９）を含む。 ２．４．補体受容体 Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ補体受容体（ＣＲＩ）。 補体受容体１　（ＣＲＩ、またＣＤ３５）と称されるヒトＣ３ｂ／Ｃ４ｂ受容体 は、赤血球、単核細胞／マクロファージ、顆粒細胞、Ｂ細胞、幾つかのＴ細胞、 膵臓小胞樹状細胞、および糸球体有足細胞に存在する（Ｆｅａｒｏｎ　Ｄ、　Ｔ 、　、　１９８０．　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５２：２０．　Ｗｉ　１ｓ ｏｎ、　Ｊ、　Ｇ、ら１９８R゜ Ｊ、　１ｗ＋ｍｕｎｏ１．１３１　＋６８４；Ｒｅｙｎｅｓ、　Ｍ、ら１９７６ Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、２９５：１０；にａｚ−ａｔＣｈｋｉｎｅ、　Ｍ、 　Ｄ、ら１９８２．　ＣＩ　ｉｎ、　Ｉｉｍｕｎｏｌ、　１ｍｍｕｎｏｐａｔｈ ｏ１．２７：２１０）。 ＣＲＩはＣ３ｂ　、　Ｃ４ｂおよび１Ｃ３ｂを特異的に結合する。 また、ＣＲＩは古典的経路および副経路Ｃ３／Ｃ５コンバーターゼを抑制でき、 そして因子■によるＣ３ｂおよびＣ４ｂの開裂のコファクターとして作用でき、 これはＣＲＩが受容体として利用できることの他にまた補体調節機能を有するこ とを示す（Ｆｅａｒｏｎ　Ｄ、　Ｔ、　、　１９７９゜Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、７６：５８６７；ｌ１ｄａ、に、およびＮｕｓ ｓｅｎｚｗｅｉｇ、Ｖ、、　１９８１．Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１５３：１１３８ ）。 ＣＲＩは補体受容体型２　（ＣＲ２）に対し相同性を有することが示された（Ｗ ｅｉｓ、　Ｊ、　Ｊ、ら１９８６．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓ ｃｉ、υ、　Ｓ、　Ａ、　８３　：５６３９−５６S３）。 ＣＲＩの４種のアロタイプ形態が見出され、これらは４０．０００〜５０、００ ０ダルトンの分子量の増分により異なっている。４種のＣＲＩアロタイプの全て がＣ３ｂ結合活性を有する（Ｄｙｋｍａｎ、　Ｔ、　Ｒ，ら１．９８３゜Ｐｒｏ ｃ、　Ｎａｔ　１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　８０：１６９ ８　；Ｗｏｎｇ、　Ｗ、　Ｗ、ら１９８３、Ｊ、　Ｃh　ｉｎ 、　Ｉ　ｎｖｅ−ｓ　ｔ、　７２　：　６８５　；　Ｄｙｋｍａｎ、　２０Ｔ、 　Ｒ，ら１９８４．　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５９：U９１　；Ｄｙｋ ｍａｎ、　Ｔ、　Ｒ，ら１９８５．　Ｊ、　Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１．１３４：１７８ ７）。 ＣＲ２゜ 補体受容体型２　（ＣＲ２，ＣＤ２１）は、１５または１６のＳＣＲを含む細胞 外領域、２４のアミノ酸膜貫通領域、および３４のアミノ酸細胞質領域からなる 膜貫通リンタンパク質である（Ｍｏｏｒｅら１９８７．　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　８４：９１９４−９１９８；Ｗｅｔ ｓら１９８８．Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１６７：１０４７−１０６６（これらの文 献は参考として本明細書に含まれる））。可溶性組換えＣＲ２の電子顕微鏡によ る研究は、ＣＲＩと同様に、それが３９．６ナノメーターｘ３．２ナノメーター の推定輪郭長さを有する延長された高度に可撓性の分子であり、この場合、それ ぞれのＳＣＲが長さ２．４ナノメーターの小環として現れることを示した（Ｍｏ ｏｒｅら１９８９．　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　３４：２０５７６−２０ ５８２）。 組換え可溶性ＣＲ２の形態が生産されていた（Ｍｏｏｒｅら１９８９．　Ｊ、　 Ｂｉｏｌ。 Ｃｈｅｍ、２６４：２０５７６−２０５８２）　、可溶性ＣＲＩ系と同様に、可 溶性ＣＲ２は、受容体の完全な細胞外領域を含むが膜貫通領域および細胞質領域 を含まない発現ベクターから組換え系中で生産された。この組換えＣＲ２は、２ ７．５ｍＭに等しいＫｄ（解離定数）でｌ＝１複合体中でＣ３ｄｇに結合し、モ してＫｄ＝３．２ｎＭで１＝１複合体中でエプスタイン−バータンパク質ｇｐ３ ５０／２２０に結合すると報告されている（Ｍｏｏｒｅら１９８９゜Ｊ、　Ｖｉ ｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２６４　：２０５７６−２０５８２）。 ＣＲ３゜ 第三の補体受容体であるＣＲ３はまた１Ｃ３ｂを結合する。ＣＲ３への１Ｃ３ｂ の結合は炎症中に補体活性化内皮細胞への好中球の付着を促進する（Ｍａｒｋｓ ら１９８９．Ｎａｔｕｒｅ３３９：３１４）　、また、ＣＲ３は食作用に関与し 、この場合、１Ｃ３ｂで被覆された粒子が好中球またはマクロファージにより吸 い込まれる（Ｗｒｉｇｈｔ　ら１９８２、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１５６：１１ ４９；Ｗｒ　ｉ　ｇｈ　ｔら１９８３、Ｊ、　Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１５８：１３ ３８）。 ＣＲ４゜ ＣＲ４（ＣＤＩＩ）はまた白血球付着に関与することが明らかである（Ｋｉｓｈ ｔｍ−ｏｔｏら１９８９．　Ａｄｖ、　Ｉｉｍｕｎｏｌ、　４６　：１４９−８ ２）。 短コンセンサス・リピート（ＳＣＲ）モチーフ。 ＣＲＩは徹底的に研究されており、短コンセンサス・リピート（ＳＣＲ）と称さ れる６０〜７０のアミノ酸の構造モチーフが見出された。 ＳＣＲモチーフはＣＲＩのＦ−アロタイプ中で３０回タンデムリピートされ、更 に別のリピートサイクルがその他のアロタイプ中で起こる。 ＳＣＲのコンセンサス配列は４個のシスティン、グリシンおよびトリプトファン を含み、これらは全てのＳＣＲ中で不変である。１６のその他の位置が保存され 、同じアミノ酸または保存型置換がその他の３０のＳＣＨの半分以上で見られる （ＫＩ　１ｃｋｓｔｅｉｎら１９８７．　Ｊ、　Ｅｘｐ。 Ｍｅｄ、　１６５：１０９５−１１１２；Ｋｌ　１ｃｋｓｔｅｉｎら１９８８． 　Ｊ、　ＥＸｐ、　Ｍｅｄ、　１６８：１６９９−１７１７@； Ｈｏｕｒｃａｄｅら１９８８．　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１６８：１２５５ −１２７０）　。それぞれのＳＣＲの寸法はほぼ２．５−３．Ｏｎｍ　ｘ　２ｎ ｍ　ｘ　２ｒ＋＋ｎであると推定される。 ２．５．補体媒介疾患および不適当な補体活性化を示す疾患補体活性化経路は多 くのヒトの疾患および障害に基本的な役割を果たす。Ｃ５ａ放出の臨床上の関係 の幾つかが表ＩＩ＋に列記される。 このような症状は免疫複合体疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、関節炎、 腎炎、およびエイズ）を含むが、これらに限定されない。 表Ｉ１１ 補体を伴う疾患および障害 自己免疫疾患 慢性関節リウマチ 免疫複合体誘導脈管炎 関節炎型■１コラーゲン誘誘導節炎 急性免疫関節炎 重症筋無力症 急性痛風関節炎 全身性エリテマトーデス 溶血性貧血 多発硬化症 腎炎 実験上のアレルギー性神経炎 免疫複合体疾患 肝障害 成人呼吸困難症候群 肺機能不全−血液透析 慢性進行性肺デイスーシスティック（Ｄｉｓ−Ｃｙｓｔｉｃ）線維症綿線維沈着 症 アスベスト誘導炎症 腎炎の炎症 クローン病の炎症 プルチャー網膜症 出血性肝臓炎 表目１　（続き） 腎皮質壊死 原発性胆汁性肝硬変炎症 腎症 脳膜炎における脳神経損傷 腫瘍細胞転移 心筋梗塞における拡大された組織破壊 火傷における拡大された組織破壊 ウィルスにより誘発された感染症 ニブスティン−バーウィルスに関連する疾患ンヨーグレン症候群、慢性関節リウ マチ、ウルキット（ｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫、ホジキン病、ウィルスエイズまた はＥＢＶに関連するＢ細胞リンパ腫、慢性疲労症候群、寄生虫性症状（例えば、 同種移植片移植後のウィルス感染またはエイズ） ＨＴＬＶ−１１１／ＬＡＹ／ＨＩＶ　（エイズ）心筋梗塞。 組換え組織プラスミノーゲンアクチベータ−（ｒ−ＴＰＡ）　（近年、これは急 性心筋梗塞の患者に有効な血栓崩壊薬であることが知られていた）は補体を活性 化することが示された。Ｃ４ａ　、　Ｃ３ａおよびＣ５ａのレベルの顕著な増加 が、薬剤の投与の前にこれらの補体ペプチドのレベルに較べて、ｒ−ＴＰＡを受 ける患者で知られている（Ｂｅｎｎｅｔｔ、Ｗ、Ｒ，らＪ、Ａｍ、Ｃｏ１１．Ｃ ａｒｄｉｏｌ、１９８７．１０（３）、６２７−６３２）。 ５ｃｈａｆｅｒおよび共同研究者らは、ヒト組織中の梗塞の領域内に位置された 心筋細胞中の末端Ｃ３ｂ−９補体複合体の付着を明確に同定できた（Ｊ、　Ｉｍ ｍｕｎｏｌ、　１９８６．１３７（６）、　１９４５−１９４９）　、同様に、 虚血性イヌ心筋中の補体の第一成分および白血球の選択的蓄積が知られていた（ Ｒｏｓｅｎ、　Ｒ，Ｄ、らＣ１ｒｃ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、１９８５．５７．１１ ９−２３０）。成る研究では、補体の枯渇が虚血性イヌ心筋中の血流を増加する ことが知られていた。この増加された血流は、順に、対照動物に対して補体枯渇 動物で酸素の供給および利用を増加することが知られていた（Ｇｒｏｖｅｒ、　 Ｇ、　Ｊ、およびＷｅｉｓｓ、　Ｈ，Ｒ，Ｂａ５ｉｃ　Ｒｅｓ、　Ｃａｒｄｉｏ 、１９８７．８２（１）。 ５７−６５）。ＣＲＩの組換え可溶性形態が生産され、これは生体外の古典的経 路および副経路の両方の活性化を抑制できる。また、それは生体内の補体活性化 を抑制でき、そして心筋梗塞に関連する炎症および再潅流の動物モデルで有効で ある（１９８９年１０月５日にＷＯ３９１０９２２０として公開され、′ヒトＣ ３ｂ／Ｃ４ｂ受容体（ＣＲＩ）”と題する国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８９１０１ ３５８；Ｗｅｉｓｓｍａｎら１９９０．５ｃｉｅｎｃｅ２４９：　１４６−１５ １）。 ＳＬＥ。 全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の患者の赤血球におけるＣＲＩの減少された 発現が、日本（Ｍｉｙａｋａｗａら１９８１．　Ｌａｎｃｅｔ２：４９３−４９ ７；Ｍｉｎｏｔａら１９８４．　Ａｒｔｈｒ、　Ｒｈｅｕｍ、　２７：ｌ３２９ −１３３５）、米国（Ｉｉｄａら１９８２゜Ｊ、　ＥＸＩ）、　Ｍｅｄ、　１５ ５：　１４２７−１４３８；Ｗｉ　１ｓｏｎら１９８２．　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　 Ｊ、　Ｍｅｄ、　３０７@：９８１− ９８６）およびヨーロッパ（Ｗａｌｐｏｒｔら１９８５．　ＣＩ　ｉｎ、　Ｅｘ ｐ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　５９：５４７；Ｊｏｕｖｉｎら１９８６．　Ｃｏｍｐ ｌｅｍｅｎｔ３：８８−９６；Ｈｏｌｍｅら１９８６．　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｘｐ、 　Ｉｎｍｕｎ−ｏｌ、　６３：４ｌ−４８）を含む幾つかの地域から研究者らに より報告されていた。 自己免疫疾患。 補体系の活性化が、免疫複合体誘発脈管炎（Ｃｏｃｈｒａｎｅ、　１９８４．　 Ｓｐ−ｒｉｎｇｅｒ　Ｓｅ＋ｎ１ｎａｒ　Ｉ＋ｎｍｕｎｏｐａｔｈｏ１．７＋２ ６３）、腎炎（Ｃｏｕｓｅｒら１９８５．　Ｋｉ−ｄｎｅｙ　Ｉｎ５ｔ、２９＋ ８７９）　、溶血性貧血（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ＆　Ｆｒａｎｋ、　１９７２．　 Ｊ、　ＣＩ　ｉｎ。 Ｉｎ−ｖｅｓｔ、５１：５７５）　、重症筋無力症（Ｌｅｎｎｏｎら１９７Ｂ、 　Ｊ、　１Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１４７：９７３；　Ｂｉｅｓｅｃｅｒ＆Ｇｏｍ ｅｚ、　１９８９．　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４２＋２６５４）、１１型コ ラ一ゲン誘発関節炎（Ｗａｔｓｏｎ　＆Ｔｏｗｎｅｓ、１９８５．Ｊ、Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、１６２：１８７８）　、および実験上のアレルギー性神経炎（Ｆｅａｓ ｂｙら１９８７．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、４１９：９７）の如き自己免疫疾患の動 物モデルで組織損傷を引き起こすことが示唆されている。 免疫複合体障害５ 免疫複合体は多くの症状に見られ、これらの症状は自己免疫疾患、例えば、慢性 関節リウマチまたはＳＬＥ　、血液悪性、例えば、エイズ（Ｔａｙｌｅｒ　ら１ ９８３．　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、　Ｒｈｅｕｍ、２６＋７３６−４４；Ｉｎａｄ ａら１９８６゜ＡＩＤＳ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ２：２３５−２４７）および自己抗 体および／または補体活性化を伴う障害（Ｒｏｓｓら１９８５．　Ｊ、　Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、　１３５：２００５−１４）を含むが、これらに限定されない。赤血 球は赤血球−ＣＲＩへの付着により循環免疫複合体の除去に関与し、そして生体 組織中の免疫複合体の付着を抑制するように作用し得る。循環免疫複合体の除去 および固定化のための治療法は、高いＣＲＩ活性を有する濃縮赤血球の輸注を伴 う。この方法は補体消費に依存する。 エイズ。 赤血球ＣＲＩは自己免疫患者の循環免疫複合体の除去に機能上の役割を有し、そ してそれにより生体組織成分内の免疫複合体の付着を抑制し得る（Ｉｎａｄａら １９８９．Ａｎｎ、Ｒｈｅｕｍ、Ｄｉｓ、４：２８７）　６　Ｌイズの発生にお いて、ＣＲＩ活性の減少損失は無症候性の血清反応陽性の同性愛ボランティアか らＡＲＣの前駆性スペクトルに進行し、最終的に顕性エイズの完全な消失に進行 する（ｌｎａｄａら１９８６．ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ。 ２：　２３５）。これらの研究は、循環免疫複合体のレベルとではなく、減少さ れたＣＲＩ活性と臨床上の症状の関連を実証した。ヒト免疫不全ウィルス（）Ｉ ｎ感染の患者で観察された赤血球からＣＲＩの相対的損失（Ｔａｕｓｋ、　Ｆ、 　Ａ、ら１９８６．　Ｊ、　ＣＩ　ｉｎ、　１ｎｖｅｓｔ、　７８：９７７−９ ８２）がまた、らい１らいで観察された（Ｔａｕｓｋ、　Ｆ、　Ａ、ら１９８５ ．　Ｊ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｄｅｒｍａｔ、８５：　５８ｓ−６１ｓ）。 炎症性障害。 補体活性化はまた炎症を伴う症状に関連していた。クローン病の腸炎症は単核お よび多形核の白血球のリンパ浸潤を特徴とする。 クローン病患者の空腸液中の補体Ｃ４濃度が正常な対照に較べて増加することが 最近知られていた（Ａｈｒｅｎｓｔｅｄｔら１９９０．　Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、　Ｊ 。 Ｍｅｄ、　３２２：１３４５−９）。炎症中に補体系にかかわっているその他の 症状は熱損傷（火傷、凍傷）　（Ｇｅｌｆａｎｄら１９８２．　Ｊ、　Ｃ１１ｎ 、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７０：１１７０；Ｄｅｍｌ　ｉｎｇら１９Ｂ９．ｓｕｒｇ ｅｒｙ１０６：５２−９）　、血液透析（Ｄｅｐｐｉｓｃｈら１９９０、Ｋｉｄ ｎｅｙ　Ｉｎ５ｔ、３７：６９−７０６；Ｋｏｊｊｍａら１９８９　Ｎ１ｐｐｏ ｎ　Ｊｅｎｚｏ　Ｇａｋ−ｋａｉ　Ｓｈｉ　３１：９ｌ−７）、および心肺バイ パスのポンプ後の症候群（Ｃｈ−ｅｎｏｗｅｔｈら１９８１．Ｃｏｍｐｌｅｍｅ ｎｔ　Ｉｎｆｌａｍｍ、３：１５２−１６５；Ｃｈｅｎｏｗｅｔｈら１９８６、 Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　３：１５２−１６５；Ｓａｌａｍａら１９８８．Ｎ、Ｅ ｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、３１８＋４０８−１４）。 血液透析。 血液透析装置の使用は副経路を活性化する。Ｂｂ、　１Ｃ３ｂ、　Ｃ３ａおよび Ｃ５ａのレベルは増加するが、Ｃ４ｄレベルは変化しない（Ｏｐｐｅ−ｒ＋ｎａ ｎｎ　ら１９８８．　Ｋ１１ｎ、　Ｗｏｃｈｅｎ、　６６：８５７−８６４；Ｋ ｏｊｉｍａら１９８９．Ｎ１ｐｐｏｎ　Ｊ−ｅｎｚｏ　Ｇａｋｋａｉ　Ｓｈｉ　 ３１：９１−９７；Ｕｅｄａら１９９０．Ｎ１ｐｐｏｎ　Ｊｅｎｚｏ　Ｇａｋｋ ａｉＳｈｉ　３２：１９−２４）　。末端補体複合体が血漿中で実証され（Ｋｏ ｊｉｍａら１９８９、上記の文献）、そして透析中に顆粒細胞の膜で実証された （Ｄｅｐｐｉｓｃｈ　ら１９９０．　Ｋｉｄｎｅｙ、　Ｉｎｔ、　３７：６９６ −７０６）。 心肺バイパス。 心肺バイパスおよび血液透析中の人工心肺系の使用は全身性炎症反応（これは深 部器官機能不全で起こることがある）と関連していた。これらの効果はポンプ後 の症候群または潅流後の症候群と総称されていた。この症候群の臨床上の知見は Ｃ３ａおよびＣ５ａの生物活性と同様である。実際に、増大されたＣ３ａが延長 された体外循環を受ける患者で実証された（Ｃｈｅｎｏｗｅ　ｔ　ｈら１９８１ ．　ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＩｎｆｌａｍｍ、　３：１５２−１６５）。５Ｃ５ｂ −９の増加された血漿レベル（Ｄａｌｍａｓｓ。 ら１９８１．ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ　ｌｎｆｌａｍｍ、６：３６−４８）、並び に赤血球および多形咳細胞における末端Ｃ３ｂ−９複合体付着（Ｓａｌａｍａら １９８８．　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ。 Ｍｅｄ、　３１８　：４０８−４１４）がこれらの患者で観察された。成る研究 は、心肺バイパス中の補体の活性化および酸素誘導遊離基の発生を報告していた 。心肺バイパス中のプロタミンの投与は補体を更に活性化した（Ｃａｖａｒｏｃ ｃｈｉ、　Ｎ、　Ｃ，ら１９８６．Ｃ１ｒｃｕｌａｔｔｏｎ、　７４．　１３０ −１３３；Ｋｉｒｋｌｅｎ。 Ｊ、　Ｋ、ら１９８３．Ｊ、Ｔｈｏｒａｃ、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ、Ｓｕｒｇ、 ８６．８４５−８５７）。 心肺バイパスのための三つの実験モデルが、ラット（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ＆ＡＩ ａｎｉ、　１９８３．　Ｊ、　Ｓｕｒｇ、　Ｒｅｓ、　３５：２８−３４）　、 ブタ（Ｎｉ　ｌ５ｓｏｎら１９９０．　Ａｒ−ｔｉｆ、　Ｏｒｇａｎｓ１４：４ ６−４８）およびジノモルゲス・サル（Ｍａｅｏ、　１９８９．　Ｎ１−ｐｐｏ ｎ　Ｋｙｏｂｕ　Ｇｅｋａ　Ｇａｋｋａｉ　Ｚａｓｓｈｉ３７：２１６６−２１ ７４）で同定された。 熱外傷（火傷）。 火傷により開始される病因プロセスの殆どは炎症性である。主な併発症はショッ ク、肺水腫、および感染である。古典的経路ではなく補体活性化側経路の大きな 活性化がマウスの火傷外傷のモデルで観察された（Ｇｅｌｆａｎｄら１９８２． Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、７０：１１７０−１１７６）。 また、血漿Ｃ３ａ　ｄｅｓ　ＡｒｇおよびＣ４ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇの増加が火傷 の患者で検出された（Ｄａｖｉｓら１９８７．　Ｓｕｒｇｅｒｙ１０２：４７７ −４８４）。 成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）。 補体および白血球の両方が成人呼吸困難症候群の病因にかかわッテイることが報 告されている（Ｚｉｌｏｗら１９９０．　ＣＩ　ｉｎ、　Ｅｘｐ、　Ｉｍｍｕｎ ｏｌ。 ７９：１５１−５７；Ｌａｎｇｌｏｉｓら１９８９．Ｈｅａｒｔ　Ｌｕｎｇ１８ ニア１−８４）。また、成人呼吸不全、ショック肺、び慢性肺胞損傷、または外 傷性水腫肺として知られているこの症候群は、酸素治療が難しい重度の寿命を短 くする呼吸不全の迅速な開始を臨床上特徴としている（Ｍｉｅｓｃｈｅｒ。 Ｐ、　Ａ、およびＭｕｌ　１ｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ、　Ｈ，Ｊ、編集、１９７ ６、Ｔｅｘｔ　Ｂｏｏｋ　ｏｆ　ｌｎ＋ｎｕ−１ｏｐａｔｈｏ＋ｏｇｙ、第２編 、■巻および１１巻、　Ｇｒｕｎ６および５ｔｒａｔｔｏｎ、　ＮｅｗＹｏｒｋ ；Ｓａｎｄｂｅｒｇ、Ａ、Ｌ、、１９８１．　ｉｎ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｆｕｎ ｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄ　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、Ｏ ｐｐｅｎｈｅｉｍ、Ｊ、Ｊ、ら編集、ＥＩｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ　Ｈｏ１− Ｉａｎｄ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐ、　３７３；Ｃｏｎｒｏｗ、　Ｒ，Ｂ、ら １９８０．Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ２３：２４２；Ｒｅｇａｌ、　Ｊ、　Ｆ、　； およびＰｉｃｋｅｒｉｎｇ、　Ｒ，Ｈ，、１９８３，Ｉｎｔ、　Ｊ、　１ｍｍｕ ｎｏｐｈａｒｍａｃ−ｏｌ、　１０４＋６１７）　。 セブシス。 セプシスの死亡率は、主としてショックおよびＡＲＤＳの如き併発症のために高 い。古典的経路による補体系の活性化は、セブシスの致命的な併発症の発生に関 与していると示唆されている（Ｈａｃｋら１９８９．　Ａ＋ｎ、　Ｊ、　Ｍｅｄ 、　８６：２Ｏ−２６）。 圧力障害。 潜函病（ＤＣ５）の現象は補体により媒介されることが仮定されていた。補体系 はＣＤＳのウサギで活性化された。これらのウサギが生体内で薬理学的に補体除 去された場合、それらはＣＤＳを発生しなかった（Ｗａｒｄら１９９０．　Ｕｎ ｄｅｒｓｅａ　Ｂｉｏｍｅｄ、　Ｒｅｓ、　１７：５ｌ−６６）。 同種移植片拒絶。 補体系はまた超急性の同種移植および超急性の異種移植の拒絶に関与している（ Ｋｎｅｃｈｔｌｅら１９８５．Ｊ、Ｈｅａｒｔ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ４（５） ：５４１；Ｇｕｔｔｍａｎ、　１９７４．　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ１ ７：３８３；Ａｄａｃｈｉ　ら１９８７．　Ｔｒａｎｓ、　Ｐｒ−ｏｃ、　１９ （１）：１１４５；ＰｒｕｉｔｔおよびＢｏｌｌｉｎｇｅｒ、　１９９１．　Ｊ 、　Ｓｕｒｇ、　Ｒｅｓ、　５０：３５０−３５５　；Ｐｒｕ　ｉ　ｔ　ｔ　ら １９９１．　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ５２：８６８−８７３；Ｍｉｇａ ｇｏｗａら１９８８、　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ　１ｏｎ４６　：８２５）。 インターロイキン−２療法。 組換えＩＬ−２による免疫療法中の補体活性化は、■シー２治療から観察された ひどい毒性および副作用を生じることが明らかである（ＴｈｉｊＳら１９９０． 　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４４　：２４１９）。 ＣＲ２が関与する疾患。 このような症状は、免疫複合体疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、関節炎 、腎炎、多発硬化症およびエイズ）、エプスタイン−バーウィルスに関連する疾 患（例えば、ショーグレン症候群、慢性関節リウマチ、バーキットリンパ腫、ホ ジキン病、ウィルス（エイズまたはＥＢＶ）に関連するＢ細胞リンパ腫、慢性疲 労症候群、および寄生虫性症状（例えば、同種移植片移植後のウィルス感染また はエイズ）を含むが、これらに限定されない。 補体系に依存しない種々の免疫反応が特異的反応性リンパ球により媒介されるこ とが知られている。これらの反応は自己免疫疾患、過敏症、または単にアレルギ ー性の反応を生じることがある。 これらの反応の幾つかの例は、遅延型過敏症、同種移植拒絶、対宿主性移植片病 、薬アレルギー、または感染抵抗性を含む。自己゛免疫障害は、萎縮性胃炎、甲 状腺炎、アレルギー性脳を髄炎、胃粘膜、甲状腺中毒、自己免疫溶血性貧血、お よび交感性眼炎を含み得る（Ｅｉｓｅｎ、　Ｈ，Ｎ、　、　１９７９．１ｍｍｕ ｎｏｌｏｇｙ、　ＨａｒｐｅｒおよびＲｏｗ、　Ｈａｇｅｒｓｔ−ｏｗｎ、　Ｍ ａｒｙｌａｎｄ、　ｐｐ、　５５７−５９５）。 発明の背景の以上の説明は、以上のいずれかが本発明に対する従来技術として利 用できるという許可と見なされるべきではない。 （本頁以下余白） ３、　発明の要約 本発明は、免疫反応を抑制し、抗炎症作用を示し、かつ／また補体を選択的に阻 害する有機化合物と生物学的化合物の組合せを含有してなる組成物に関する。本 発明組成物は相乗的にまたは相加的に補体関連機能の発現を阻害し、あるいは免 疫活性を抑制し、かつ／また抗炎症作用を示す。本発明組成物は補体および／ま たは免疫活性により仲介される病気や疾患を軽快させるという治療上の用途を有 する。 本発明は、補体活性を阻害し、抗炎症作用を示し、かつ／また免疫反応を抑制す る有機化合物と、１以上の同し性質を有する生物学的化合物が相乗的にまたは相 加的に作用し合えるという驚くべき発見に基づいている。 本発明組成物中の有機化合物は免疫抑制作用を示し、かつ／また抗炎症作用を示 し、かつ／また補体活性を阻害する化合物である。このような有機化合物には、 Ｋ−７６、Ｋ−７６Ｃ０ＯＨおよびそれらの誘導体並びに合成類縁体、代謝拮抗 物質、抗有糸分裂性薬物、シクロスポリン、ステロイド、および非ステロイド系 抗炎症剤が含まれるが、これらに限定されない。この種の多くの化合物は当分野 で知られており、本発明により提供される相乗的組成物中で使用することができ る。特定の態様において、有機化合物としては、免疫抑制作用、補体阻害作用ま たは抗炎症作用を示す置換ジヒドロベンゾフラン、置換および非置換スピロベン ゾフラン−２（３Ｈ）−シクロアルカン、およびそれらの開鎖中間体が挙げられ るが、これらに限定されない。特定の態様において、このような有機化合物はＣ ５からの生物活性成分へのタンパク質分解プロセシングを妨げて、Ｃ５ａの放出 を阻止するものである。 本発明の生物学的化合物は保存されたＳＣＲモチーフを含み、補体活性を阻害す ることができる。特に、本発明の生物学的化合物としては、Ｃ１ｒ、Ｃｌｓ、Ｂ 因子、Ｃ２、Ｈ因子、Ｃ４−ＢＰ、ＤＡＦＳＭＣＰ、ＣＲＩ、ＣＲ２、Ｃ６、Ｃ ７、インターロイキン−２レセプターａ鎖、ｂ２−糖タンパク質ｌ、およびＸ１ １１因子が挙げられるが、これらに限定されない。この種の生物学的化合物は補 体レセプターおよび／またはＳＣＲ含有含有タンパ色質連した機能を少なくとも １つもっている。特定の態様において、生物学的化合物は可溶性補体レセプター ＣＲＩまたはＣＲ２のフラグメント、融合タンパク質、キメラ、類縁体もしくは 誘導体である。 特定の態様において、本発明組成物は自己免疫疾患または補体系の“不適当な” 活性化に関連した多くの疾患あるいは炎症の治療に使用されよう。本発明の更な る態様において、有機化合物と生物学的化合物の混合物はＣＲＩおよびＣＲ２と 関連した病気または疾患の治療に特に効果がある。 本発明の更なる態様は、組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ またはウロキナーゼのような血栓溶解剤により慣例的に治療される疾患を有する 患者（例えば心筋梗塞患者）を、本発明の相乗的組成物と血栓溶解化合物との組 合せを用いて治療することにより得られる、併用療法を含むものである。 さらに、本発明は、このような有機化合物と生物学的化合物またはそれらの塩の 組合せを含有してなる医薬組成物に関する。 ３．１　定義 本明細書中で用いる場合、以下の略号および用語は次の意味を有する： ｎ−ＢｕＬｉ＝ｎ〜ブチルリチウム ｔ−ＢｕＬｉ　＝ｔｅｒｔ−ブチルリチウムｔ、　−Ｂ　ｕ　Ｓ　Ｌ　ｉ　＝リ チウムｔｅｒｔ−ブチルチオレートＣ＝補体；炭素 ＣＨＯ＝チャイニーズハムスター卵巣 ＣＲＩ　−補体レセプターｌ型 （Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂレセプター） ＣＲ２−補体レセプタ−２型 ＣＰＭ　＝１分あたりのカウント数 ＥＢＶ　＝エプスタインーバーウィルスＥｔ２０　＝ジエチルエーテル ＨＭＰＡ　−ヘキサメチルリン酸トリアミドＩｇＧ　−免疫グロブリンＧ ’ＰｒＯＨ−インプロパツール ＩＲ−赤外 に−７６Ｃ０ＯＨ＝に−７６のモノカルボン酸誘導体に−７６ＣＯＯＮａ　＝に −７６のモノカルボン酸誘導体のナトリウム塩ＬＡＨ−水素化アルミニウムリチ ウム Ｌ　ＨＲ＝長鎖相同反復配列 （ｌｏｎｇ　ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｒｅｐｅａｔ）ＭＯＭ　＝メトキシメチル 基 ＮＫ　＝ナチュラルキラー ＮＭＲ−核磁気共鳴 ＰＢＬ　＝末梢血リンパ球 ｐｃｃ　＝ピリジニウムクロロクロメートＰＨＡ　＝フィトヘマグルチニン （植物性血球凝集素） ＰＭＮ　−多形核細胞 ＲＬｉ　＝アルキルリチウム ＳＣＲ＝短鎖共通反復配列 （ｓｈｏｒｔ　ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｒｅｐｅａｔ）ＴＨＦ　−テトラヒドロフ ラン ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー ＴＭＥＤＡ　＝Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ−テトラメチルエチレンジアミンＴＭＳ　−テ トラメチルシラン Ｔｒ　ｉＭＥＤＡ＝Ｎ、Ｎ、Ｎ’−ｈジメチルエチレンジアミン５ｃＲ１＝可溶 性補体レセプター１型 本発明において用いる“バイオアイソステリック（ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｉｃ） 　”基なる用語は、電子配置が置換すべき基と実質的に類似し、結果的に分子全 体の極性と電荷が変わらない代用の化学基を意味する。しかし、バイオアイソス テリック基（または“バイオアイソステア（ｂｊｏｉｓｏｓｔｅｒｅ）”　）の 大きさ、原子数または電子構造の変動は許容され、それらの変動はその機能に影 響を及ぼしうる。バイオアイソステアは酸性（例えば、プロトンを放出すること ができ、その後負電荷をもつ）、塩基性（例えば、プロトン化され、その後陽電 荷をもつ）、あるいは中性（例えば、通常は酸性基または塩基性基として機能し 得ない）でありうる。 他に記述または指定しない限り、ここで用いる“アルキル”なる用語はメチル、 エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、５ｅｃ−ブチ ル、またはｔｅｒｔ−ブチル基を意味する。“アルカノーノシなる用語はアルキ ル基とヒドロキシル基のカップリングにより誘導される化合物を表す。同様に、 “アルコキシ”なる用語はメトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソプロ ピルオキシ、ｎ−１ｉｓｏ−１ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−ブトキシ基を意味する 。“低級”なる用語は炭素原子ｌ−４個の数値範囲を意味し直鎖または分枝鎖骨 格を含む。 他に記述または指定しない限り、ここで用いる“ハロゲン”なる用語はフッ素、 塩素、臭素およびヨウ素を含む。 他に記述または指定しない限り、本発明の置換ジヒドロベンゾフラン類縁体の所 定の構造、式、あるいは命名はそのあらゆる立体異性体を含めるものとする。 他に記述または指定しない限り、本発明の最終化合物カルボン酸への言及は、カ ルボン酸から得られるアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩のようなその塩形を も含むものとする。 ４、

【図面の簡単な説明】

図１は、二置換スピロベンゾフラン化合物６２．６６および６８による補体仲介 溶血の阻止を示す。阻止は化合物の濃度の関数として示しである。 図２は、６８の濃度を添加５ＣＲ１の非存在下で変化させた５ＲＢＣ溶血アツセ イの結果を示す（白の四角）。また、溶血の阻止は一定濃度（２２０ｎｇ／ｍｌ ）の５ＣＲ１の存在下での化合物濃度の関数としても示しである（黒の四角）。 図３は、添加化合物６８の存在下または非存在下での５ｃＲ１濃度の関数として の溶血の阻止を示す。溶血の５０％阻止に必要な５ｃＲ１の濃度は、６８（４３ μＭ）の存在下および非存在下で、それぞれｌｏｏｎｇ／ｍｌおよび２３０ｎｇ ／ｍｌである。 従って、補体溶血を阻止する５ｃＲ１の見かけの効力は４３μＭの６８の存在下 においてほぼ２倍になる。 （来貢以下余白） ５、発明の詳細な説明 本発明は免疫応答を抑制し、抗炎症活性を示し、かつ／または選択的に補体を阻 害する有機化合物と生物学的化合物との組み合わせからなる組成物に関する。本 発明の組成物は相乗的または相加的に、補体関連機能の発現を阻害し、免疫活性 を抑制し、かつ／または抗炎症活性を示す。 本明細書で用いる”相乗的”の語は、各成分の個々の効果または活性の和よりも 大きい活性効果をいう。すなわち、本発明の組成物は、組成物中に存在するのと 同じ濃度で生物学的化合物または有機化合物を単独で用いるときよりも大きい阻 害活性、および両方の成分の活性の相加よりも大きい阻害活性をもつ。好ましく は、本発明の組成物の活性は両成分活性の相加よりも約ｌＯ％大きい。より好ま しくは、組成物の活性は各成分の活性の相加よりも約２５％、さらに好ましくは 約５０％大きい。特定の態様では、生物学的化合物のｉｎ　ｖｉｔｒｏの阻害活 性が約３０％で有機化合物の阻害活性が約３％であり、したがって３３％の相加 活性であるのに、両成分からなる組成物の阻害活性は約５０％である。したがっ て、この組成物は以下に示すように成分の相加効果よりも約５０％大きい活性を 有する。 １００ｘ　［（５０−３３）／３３］　＝５０％ｉｎ　ｖｉｔｒｏの別の特定の 態様では、有機化合物の存在しない場合よりも存在する場合の方が生物学的化合 物が約２倍の活性になる。さらにｉｎ　ｖｉｖｏの別の特定の態様では、本組成 物は各成分の相加活性よりも少なくとも４５％大きい活性をもつ。 ここで用いる”相加的”の語は、各成分のお互いの活性を補って、各成分が単独 で達成できるｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｉｎ　ｖｉｖｏの活性よりも大きい予期で きない活性をいう。例えば、本発明の組成物中の生物学的化合物が有害な補体活 性（例えば心筋梗塞）を最大４０％阻害し、有機化合物が最大３０％阻害するな 　゛らば、両成分は一緒になって４０％以上の阻害を達成する。４０％以上の阻 害は、そうでない場合に予期されるよりも有効な治療効果を提供する。 有機化合物と生物学的化合物との組み合わせからなる本発明の組成物は以下の実 施例で記載するように、有効濃度でその阻害活性を示すことができる。しかしな がら、この組成物ははるかに高濃度で調製して、後にｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｉ ｎ　ｖｉｖｏで希釈して有効濃度を得ることができる。 本発明による組成物中の有機化合物は免疫抑制、補体阻害、および／または抗炎 症活性を示す化合物である。このような有機化合物はに−７６、Ｋ−７６Ｃ０Ｏ Ｈおよびその誘導体並びに合成類似体、抗代謝剤、抗分裂剤、シクロスポリン、 ステロイド、および非ステロイド抗炎症剤を含むが、これに限定されない。特定 の態様では、有機化合物はシクロスポリンである。かかる化合物は当業界で多数 知られており、本発明によって提供される相乗的組成物に用いることができる。 特定の態様では、有機化合物はこのような免疫抑制、補体阻害または抗炎症活性 を示す置換ジヒドロベンゾフラン、置換および非置換のスピロベンゾフラン−２ （３Ｈ）−シクロアルカンおよびその開鎖中間体であるが、これに限定されない 。特に、これらの化合物は真菌代謝物に−７６の部分類似体である。 特定の態様においては、本発明の有機化合物補体阻害剤はＣ５活性化、すなわち 、Ｃ５からタンパク質分解によって生物活性補体断片であるＣ５ａおよびＣ５ｂ が生成されるのを阻害する。このような化合物からなる組成物は補体系の好まし くない不適切な活性化に伴う疾患や障害の治療または予防に有効である。特定の 態様において、かかる化合物を含む本発明の組成物は炎症性障害の治療に使用で きる。また、循環系疾患の治療にも使用できる。 本発明はまたその有機化合物が免疫抑制活性を有する組成物に関する。特に、こ れらの化合物は免疫応答を阻害する。特定の態様において、本発明の組成物は単 核細胞の殺傷活性、リンノ々球増殖および／または活性化を阻害することができ る。免疫抑制化合物からなる本発明の組成物は各種免疫障害の治療に有効である 。 さらに、本発明の組成物中の有機化合物は上記セクション２゜４並びにそこに引 用した文献に記載した一つ以上のに一７６様の活性を有する。 特定の面においては、有機化合物は非タンノ（り性化合物である。 本発明の組成物の生物学的化合物は保存ＳＣＲモチーフを含むもの、すなわち補 体活性を阻害し、補体リセブターおよび／またはＳＣＲ含有タンパク質に関連す る少なくとも１つの機能を持つものを含む。 特定の態様では、これらの生物学的化合物は補体リセプターおよび／またはＳＣ Ｒ含有タンパク質に関連する少なくとも１つの機能を持ち、可溶性補体リセプタ ーＣＲＩまたはＣＲ２の断片、融合タンパク質、キメラ、類似体または誘導体で ある。 本発明はまた、このような有機化合物と生物学的化合物またその塩の混合物から なる医薬組成物に関する。 本発明の化合物、および中間体並びにその製造方法、並びにその医薬組成物を以 下に詳述する。 本発明は相乗的にまたは相加的に補体を阻害し、および／または免疫活性を抑制 する有機化合物からなる組成物に関する。このような有機化合物はに−７６、Ｋ −７６Ｃ０ＯＨ，その誘導体および合成類似体、抗代謝剤（例えば、アザチオプ リン、メトトレキセート）、抗分裂剤（例えば、シクロホスファミド）、シクロ スポリン（シクロスポリンＡ）、ＦＫ５０６などのマクロライド（Ｎａｔｕｒｅ 、　３４１ニア５８（１９８９））、およびステロイド（例えば、プレドニゾン 、グルココルチコイドやコイルチコステロイドのような副腎ステロイド）、およ び非ステロイド（例えば、インドメタシン、アスピリンなどのサリチル酸エステ ル、イブプロフェンおよびナブロシン（アリール酢酸基））を含むが、これに限 定されない。このような化合物の多くが当業界で公知であり、本発明に用いうる 。このような化合物の例を以下に記載する。 本発明の組成物の化合物として適した有機化合物は免疫抑制活性、特に補体阻害 または抗炎症活性、そしてこれに限定されるものではないが、インターロイキン 生合成の阻害または自己免疫疾患の軽減を示すことのできる化合物である。例え ば、インターロイキン−１の生合成の阻害剤であると言われている３−置換−２ −オキシンドール−１−力ルポキサミド（米国特許第４，８６１、７９４号）の ような化合物を本発明では有利に使用することができる。その他の化合物では補 体活性化の阻害剤として低分子量のヘパリン断片（米国特許第４．８３７，３３ ８号）、２−フェニルイミダゾール（２，１−Ｂ）ベンゾチアゾールまたはその 塩（米国特許第４，４６４，３８４号）、ベンズアニリド（米国特許第４，０７ ２，７５３号）、脂環式アミノ酸のヒドロキシ保護基（米国特許第３．９９７， ５９４号および３，７０３，５４３号）、ヨーロッパ特許出願第３７５．９７６ 号に記載されているようなヘバリンリセプターに結合する化合物、均一なコンカ ナバリン−Ａ二量体（米国特許第４，８８９，８４２号）、またはヨーロッパ特 許出願第３４２，４３３号に記載されているようなジベンゾチオフェンおよびチ オキサンチン化合物を含む。 さらに、本発明に使用できる化合物は、例えばオーストラリア特許出願第８，８ １７，３８６号に記載されているようなシクロスポリンおよびシクロデキストリ ンを含む。非常に特定な場合では、移植拒絶の治療、および火傷、ガンまたは外 傷による免疫抑制に用いられる免疫抑制タンパク質およびそのモノクローナル抗 体（例えば、米国特許第４．９２５，９２０号）を本組成物中に使用できる。そ の他の場合では、この成分は米国特許第４，７５２．６０１号に記載のような免 疫グロブリンＦｃに結合する免疫複合体をブロックすることのできる特定のオリ ゴペプチドである。同様に、シクロスポリンを含むある種の低分子量のキノリン 誘導体も使用できる（ヨーロッパ特許第２３１，１５１号；下記セクションＩＯ 参照）。その他の代表的な化合物はアザナフタレン（米国特許第４，９４５，０ ９５号）、８−置換−９−ベンジルグアニン誘導体（米国特許第４．８７４，８ ６２号）、２，８゜９−三置換プリン誘導体（米国特許第４，９１８．２１９号 および４，９２１，８５９号）、米国特許第４，４６４，３８４号に記載の２− ヒドロキシフェニルイミダゾール−（２，１−ｂ）−ベンゾチアゾール化合物お よびそのエステル、トリメチルヒドロキシピリミジン（例えば南アフリカ（Ｓ　 Ｕ）特許第９３３，０９６号参照）、プロテアーゼ阻害剤として有用なアミジノ ビニルフェニルエステル（米国特許第４，４９０，３８８号）、およびｌ−アミ ジノ−４−ピペリジンカルボシキレートおよびプロピオネート（米国特許第４， ４３３，１５２号）を含むが、これに限定されない。 本発明の成分の１つとして適当な有機化合物のさらなる例は、日本特許出願筒５ ７，１１２，４００号に記載のようなステロールグリコシド化合物、Ｎ−アシル ペプチド（米国特許第４，４３６．７２６号）、６−置換−６Ｈ−ジベンゾピラ ン誘導体（米国特許第４，４６３，００１号）、日本特許出願筒５６．１５０゜ ０３８号に記載のセコプロスタグランジン化合物、日本特許出願筒５６，０５９ ，７６２号に記載の５−アリール−２−チオウラシル誘導体、日本特許出願筒８ ８，０２７，３３７号に記載のアントラニン酸誘導体、および３−デアザアデノ シンおよびその誘導体（米国特許第４，３０９，４１９号）を含む。 さらに、その他の化合物も使用できる。例えば、１．　８−ジアミノナフタレン からの２−アリール−ＩＨ−ペリミジンおよびハロゲン化アリールまたはアリー ルアルデヒド（米国特許第４，２２４．３２６号および４，２９４，９６４号） ；デカヒドロナフタレンスピロベンゾフラン誘導体（米国特許第４，２２９．４ ６６号）、Ｎ−ヒドロキシフェニル−し−グルタミンまたはその塩（米国特許第 ４，１８０，５８８号および４，２６５，７６６号）、紅斑性狼癒、溶血性貧血 、ネフロシス、潰瘍性大腸炎およびその他の同様な疾患の治療に有用なアミノプ リンヌクレオシド化合物（米国特許第４，０８１，５３４号）、ある種のイソチ オウレア（例えば、米国特許第４，２０５，０７１号、４，２９４゜８５４号、 ４，３７８，３６５号、４，４９０，３８７号および４．６４９，１３８号を参 照）、西ドイツ特許公開節２，６１７．２０２に記載のフェニルアラニルチロシ ルオリゴペプチドを使用できる。 特定の態様では、本発明の組成物に使用する有機化合物は、一般式３の置換ジヒ ドロベンゾフランおよび一般式４のスピロベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロア ルカンからなる。 ＲおよびＲ，−Ｒ，で示される基は、水素および上記セクション３．１．で既に 定義したｌから４個の炭素原子をもつ線状または分枝状低級アルキル基を含む。 さらに、Ｒ，−Ｒ，は各々、独立にハロゲン、アミノ、アミド、ヒドロキシル、 ヒドロキシアルキル、アルキルオキシ、ニトロ、ホルミル、アセタール、カルボ キシル、トリフルオロアセチル、Ｎ−置換低級アルキルカルバミド、２−１０個 の炭素原子をもつ置換ビニル、または２−２０個の炭素原子をもつアルキリデン 基である。 Ｒ３およびＲ４が独立に表されてもよいその他の基は、４から２４個の炭素原子 の炭化水素を含み、これらは中程度の長さ、長鎖、線状、分枝状、環状、飽和、 不飽和、非置換またはへテロ原子置換でありうる。さらにＲ３、Ｒ４およびこれ らが結合する炭素原子は５から２４個の炭素原子の環状炭化水素基を形成しても よく、これらは炭素および水素からのみなるか、あるいはへテロ原子と組合わさ った５−１６−または７員環の飽和または不飽和環を含んでもよい。環は非置換 でもよく、また余分の環へテロ原子または炭化水素置換基を含んでいてもよい。 本発明はまた、一般式５（式中、Ｒ，Ｒ，およびＲ２は式３および４て定義した 通り）の合成開鎖中間体化合物に関する。さらにＲ５は、水素、低級アルキル基 、あるいはメトキシメチル、テトラヒドロピラニル、２−メトキシプロピル、２ −メトキシエトキシメチル、トリアリールメチル、ベンジル、メチルチオメチル またはｔ−ブチルジメチルシリル基のような適当なヒドロキシ保護基を表す。Ｒ ６基は式３および４で定義したＲ、−Ｒ，で表される化学基を含み、また置換基 シクロへキセニルメチル（５ａ）、リモネニル（５ｂ）およびカルボン（ｃａｒ ｖｏｎｅ）由来のジオールアセトニド（５ｃ）基を表す。その他の化合物も中間 体５および５ａ−ｃから誘導しうる。これらの中間体は続いて以下のセクション で記載する一般式３および４の生成物に転化される。 表■は本発明の一般式４からなる代表的化合物を列挙したものであるが、この表 を限定的に解してはならない。 表■ 本発明の補体阻害剤 °スピロフクロヘキサン上に置換基が存在してもよい。 例えば１０−イソプロペニル 一般式３および４の本発明の置換ジヒドロベンゾフランおよびスピロベンゾプラ ン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン化合物、一般式５の合成中間体、およびその塩 は、補体介在性Ｃ５ａ生産の阻害および／または補体介在性溶血の阻害によって 示されるような補体阻害を示す。本発明の化合物の補体阻害性は、例えば下記セ クションＧ、６．１で記載するアンセイのような既知の手法を修飾して評価する ことができる。 本発明の化合物を適当な塩基性試薬で処理するとその薬学的に受容しうる塩が得 られる。 ５．２０合成法 本発明の多くの有機化合物を合成する化学的工程を以下に記載する。 本発明によるこのような合成法を図式１に示す。図式ｌに示す合成法はに−７６ の合成法（Ｃｏｒｅｙ　ａｎｄ　Ｄａｓ、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ 。 １９８２、１０４．５５５１；　ＭｃＭｕｒｒａｙ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ａ ｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、　１９８２゜１０７、２７１２）に基づくものより も短く、かつ融通がきく合成経路を提供する。図式ｌによって合成されたすべて の最終化合物を適合成評価すると、最終的に２つの部分、すなわち脂肪族部分と 芳香族部分とが得られる。これら２つの部分は領域選択的オルトリチウム化とそ れに続くアルキル化によって結合することができる。本発明の最終化合物を製造 するには２つの異なる方法、すなわちまず環化を行い、次いで芳香族の官能基化 を行うか、あるいはその逆を用いることができる。 （来貢以下余白） 図式１ ％式％ ｌ”１６°＜Ｈ，Ｈ，４″４□吟ハアンバーリスト樹脂さ＋’％＜ム４ｐム 図式ｌ　（続き） （ａｌ　’ＥＬＬ、　ｒｓＦｒＮＥＤＡ、　Ｎ：　ＱＪ’、　’ｅｌ　Ｒ，Ｘ、 　ｉｄｌ　’らｖｌｗ　ヘキサン〒しＥＤ＆１＠ＩＥ−ｆ引のイ′ＰＯ４０１ア ンバーリスト樹脂ら）゛翫６ヒ１枦入Ｏ関ぺ１１；ト ５．２．１．一般式６−カルボキシル−４＝置換スピロ［ベンゾ一連のエーテル 置換誘導体を生成するために４位においても置換されている６−カルボキシルス ピロ［ベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン１分子は以下の図式２および ３に示し、かつ後記セクション６の特定の実施例で詳述する方法で調製すること ができる。 （来貢以下余白） 図式２ 図式３ これらの化合物およびその塩は補体介在性溶血の阻害で示される補体の阻害を示 す。これらの化合物のその他の補体阻害性は当業界で公知の多くの補体アッセイ 法によって評価することができる。一般式４の化合物の４位にあるＲの置換基は 、水素原子、低級アルキル基（例えばＣＨ３−１ＣＨａ　ＣＨ２−１ｎ−Ｂｕ− ）、官能化低級アルキル基（例えばＨＯＣＨ２ＣＨ２−）　、ベンジルまたは置 換ベンジル基、フェニルまたは置換フェニル基（例えばＣ６Ｈ、ＣＨ２−１Ｃ， Ｈ５−１ｐ−ＮＯｔＣｓＨ＋　−１ｐ−ＣＨＯＣａＨ＋−１ｐ　Ｎ　０２　Ｃ６ Ｈ＊−１およびＩ）　ＮＨ２Ｃ６Ｈ１）を含む。さらに一般式４の化合物の４位 のＯＲはＨ−と置き換わってもよい。４位の好ましい置換を化合物４４ｂ、５５ ｃおよび５５ｅで例示するが、これらの化合物はに７６ＣＯＯＨよりも有効に補 体介在性の溶血を阻害する。 ６．７−二置換スピロ［ベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン１分子は以 下の図式４および５に示し、かつ後記セクション７て詳述する方法で調製するこ とができる。 （本頁以下余白） 図式４ 図式５ ＋１＝、＋ｌ！Ｆ＋ｔ＠ｒｔ曝Ｆ＊ＳＳ４＋ｌキ”、ｔＩ！Ｆ＋ｅａｒｌさらに 本セクションの化合物はベンゼン環の４位においても置換されて三置換類似体と なることもできる。これら二、および三置換化合物とその塩は補体介在性溶血の 阻害で示される補体の阻害を示す。これらの化合物のその他の補体阻害性は当業 界で公知の多くの補体アッセイ法によって評価することができる。 Ｒ１およびＲ２基は以下の基のいかなる組み合わせであってもよい：水素原子、 カルボキシル基、ホルミル基、ヒドロキシメチル基、Ｎ−（低級アルキル）カル ボキサミド基、トリフルオロアセチル基、カルブアルコキシ基、ハライド基、２ −１０個の炭素原子をもつ置換ビニル基、２−２０個の炭素原子をもつアルキリ デン基、メチルケトン基、他の低級アルキルケトン基、アリールケトン基、トリ フルオロアセチル基、スルフォンアミド基、イミド基、テトラゾール基、脂肪族 三級アミン基、オキサゾリン基、アミジン基、またはヒドラゾン基。 Ｒ１およびＲ２基の特定の置換基バー　ＣＨＯ５−ＣＨ２０Ｈ１−ＣＯＯＨ，Ｃ ０ＣＦ１、ＳＯ，ＮＨ２およびテトラゾール、オキサゾリン、イミドまたはＣＨ ２Ｎ　Ｍ　ｅ　２誘導体を含む。６位および７位における置換は化合物６２およ び６８で例示する環状化合物てあってもよい。６および７位に極性基が存在する と、多分このような極性基が補体リセブターの領域と相互作用するので、補体阻 害活性に影響するように思われる。 特定の化合物は一般式４の化合物を含み、式中、Ｒは一般的に上記した各種のも のであり：Ｒ１はカルボキシ基またはバイオアイソステリック酸性基（例えば、 スルホンアミド、イミドまたはテトラゾール）、バイオアイソステリック塩基性 基（脂肪族三級アミン、オキサゾリン、アミジンまたはヒドラゾン）またはバイ オアイソステリック中性基（トリフルオロアセチルなど）、Ｒ２はホルミル基ま たはメチルケトン（アセチル）、その他のアルキルケトン、アリールケトンまた はその他の類似の基などのバイオアイソステリック基である。 本発明の組成物の好ましい有機化合物は溶血アッセイで比較的大きな補体阻害を 示す４．　６．　７−三置換スピロ［ベンゾフラン−２（３Ｈ）シクロヘキサン ］の化合物６８である。６８に存在する６、７−二置換と最適な４位置換とを組 み合わせることによってさらに強い阻害性化合物を製造することができる。さら に好ましい態様においては、本発明の組成物の有機化合物は６−カルポキシルー ７−ホルミルー４−フェノキシスピロベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサ ンである。 ５．３補体を抑制する生物学的化合物 本発明の範囲に含まれる生物学的化合物は補体受容体または補体の活性を抑制で きる保存されたＳＣＲモチーフを含む補体受容体群のうち可溶性のものを包含す る。ＳＣＲは補体系で最も特徴的な構造を有するものの１つである。ＳＣＲを含 有する生物学的化合物の例は、Ｃ１ｒ、　Ｃ１ｓ、Ｂ因子、Ｃ２，Ｈ因子、Ｃ４ −ＢＰ、ＤＡＦ、　ＭＣＰ、　ＣＲＩ。 ＣＲ２，Ｃ６，Ｃ７，インターロイキン−２受容体α鎖、β２糖蛋白ｌ、および Ｘ１１１因子である。ＣＲＩおよびＣＲ２に関する誘導体、類縁体およびペプチ ドの製造および使用も本発明の範囲に包含される。 このような機能の例は、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂの遊離形態または複合体形 態での結合、責食作用補体調節の促進、刺激促進、■因子コファクターとしての 能力、補体成分Ｃ３ｂまたはＣ４ｂの不可逆的不活性化の促進（Ｆｅａｒｏｎ、 　Ｄ、Ｔ、、　１９７９．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、 　ＵＳＡ、　７６：５８６７；　ｌ１ｄａ、　ＫおよびＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ 、　Ｖ、、　１９８１．　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５３：１１３８）およ び／または代わりのまたは古典的なＣ３またはＣ５転換酵素を阻害する能力であ る。好ましくはＣＲＩまたはＣＲ２の少なくとも１つの機能的活性を有するよう な生物学的化合物を用いる。 補体結合部位を有する可溶性構築物は相乗的組成物として、補体依存性細胞活性 化に関わる多くの疾患の治療のために使用してよく、この構築物を投与すること により補体の活性化および細胞の補体依存性活性化を抑制できる。例えば、特定 の実施態様において、古典的な補体仲介溶血、古典的Ｃ５ａ生産、古典的Ｃ３ａ 生産またはｉｎ　ｖｉｔｒｏでの好中球酸化的バーストを抑制する能力によって 実証される所望の機能的活性を保持している可溶性ＣＲＩ分子を用いることがで きる。この目的のために、トランスメンプラン領域を持たないＣＲ１分子をコー ドするように発現ベクターを構築でき（例えば殆どのＣ末端ＳＣＲによりコード されているアルギニンまでのカルボキシ末端を欠損させて）、これにより可溶性 ＣＲＩフラグメントを作成できる。１つの実施態様においては、このようなフラ グメントは遊離形態または複合体形態においてＣ３ｂおよび／またはＣ４ｂに結 合する能力を保持することができる。可溶性ＣＲＩのための好ましい発現ベクタ ーは国際特許公報ＷＯ８９１０９２２０号およびＷｏ　９１１０５０４７号に記 載されている。 ＣＲ２を含む構築物は細胞結合ＣＲ２とＥＢＶについて競合して、ＥＢＶの細胞 への結合を低下させ、ＥＢｖ感染を抑制する。このような構築物はＣ３ｄｇに対 しても競合的に作用し、Ｂ細胞活性化を抑制する。この作用は関節リューマチや 全身性エリテマトーデスのような自己免疫疾患において特に重要である。１Ｃ３ ｂに結合することにより、構造物は好中球およびマクロファージによる責食作用 を抑制できる。構造物はまた炎症を軽減する作用も有する。 本発明のＣＲＩまたはＣＲ２の分子または関連の誘導体、類縁体およびペプチド は当該分野で知られている種々の方法で調製できる。 調製のための操作は当該分野で知られている多くの方法の何れかを用いて遺伝子 レベルまたは蛋白レベルで行なう（Ｍａｎｉａｔｉｓ、　Ｔ、。 １９８２、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ、　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ ｙ　Ｍａｎｕａｌ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔ ｏｒｙ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）。類 縁体またはペプチドをコードする遺伝子の調製においては、所望の補体特異的活 性がコードされている遺伝子領域中、翻訳停止シグナルにより中断されることな く、同じ翻訳読み枠内に修飾遺伝子が残存するように留意する。特定の実施態様 においては、ＣＲＩまたはＣＲ２配列の一部と非ＣＲＩ配列からなる分子よりな る融合蛋白が調製できる。 更にＣＲＩまたはＣＲ２の遺伝子をｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｉｎ　ｖｉｖｏで突 然変異させて、翻訳開始および／または終止配列を作成および／または破壊した り、１個または数個のアミノ酸置換を有するムティンを作成したり、グリコジル 化部位を変えることにより別の部位がグリコジル化されたフラグメントを作成し たり、または、コード領域に変化を生じさせたり、新しい制限酵素部位を作った り既存の部位を破壊したり、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ修飾を更に容易にすることができ る。当該分野で知られているいずれかの突然変異誘発法を用いてよく、例えばｉ ｎ　ｖｉｔｒｏ部位特異的突然変異誘発（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ、　Ｃ。 、　ｅｔ　ａｌ、、　１９７８．　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５３：６５１ １）およびＴＡＢリンカ−（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の使用などを行なってよい。 ＣＲＩまたはＣＲ２配列の操作を蛋白レベルで行なってＣＲＩまたはＣＲ２の誘 導体を調製してもよい。既知の化学修飾法を用いてよく、例えば臭化シアン、ト リプシン、キモトリプシン、パパイン、ｖ８プロテアーゼＮａＢＨ４を用いた特 異的化学的切断ニアセチル化、ホルミル化、酸化、還元；ツニカマイシン存在下 の代謝合成等を行なってよい。 更にＣＲＩまたはＣＲ２に関わる類縁体およびペプチドを化学合成することもで きる。例えば、所望の活性（例えばＣ３ｂおよび／またはＣ４ｂ結合、免疫刺激 、補体調節等）を媒介するＣＲＩの一部に相当するペプチドをペプチド合成機を 用いて合成できる。 ＣＲＩまたはＣＲ２のヌクレオチド配列の特定の修飾は、組み換えＤＮＡ法を用 いて行なうことができ、複数のＬＨＲまたはＳＣＲの配列またはＬＨＲの一部を 有する蛋白をコードする生物学的化合物を得ることができる。このような原子価 修飾により特定の補体関連活性の程度を変えることができる。 その他の修飾としては、他の分子に結合したＣＲＩまたはＣＲ２のＬＨＲまたは ＳＣＲの配列の一部を有するキメラ分子を形成させることであり、その目的は得 られるキメラの溶解性、薬理作用またはクリアランスを変えるためである。この ようなキメラは融合蛋白として遺伝子レベルで、または、化学的に調製した誘導 体として蛋白レベルで作成できる。免疫グロブリン鎖の一部を有するキメラ分子 は、蛋白分解によるか、または、重鎮内のヒンジ領域のあとに終止コドンを導入 してＦｅ領域を欠失させることにより調製されるＦａｂまたは（Ｆａｂ’　）　 ２分子、あるいは異なる免疫グロブリンのアイソタイプを含むことができる。融 合蛋白の最終的な臨床用途に応じて、補体活性化複合体のＦｃ受容体媒介クリア ランスを与えるために、キメラ蛋白の免疫グロブリン部分の非補体活性化アイソ タイプのＦｃ領域を保持することが望ましい場合がある。キメラを作成するため に用いてよいその他の分子の例は、血清アルブミン、ヘパリン、または免疫グロ ブリンのような蛋白、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチル化ポリオ ールのような重合体、または、例えばポリエチレングリコールで誘導体化するな どして抗原性を低下させた蛋白である。適当な分子は当該分野で知られており、 例えば、米国特許４．７４５．１８０号、４．７６６、１０６号および４．８４ ７．３２５号およびこれらの参考文献中に記載されている。 生物学的化合物またはそのフラグメントの誘導体を調製するために使用してよい その他の分子は、プロティンＡおよびプロティンＧである（国際特許公開ＷＯ３ ７１０５６３１，１９８７年９月２４日公開、「プロティンＧと同様のＩｇＧ特 異性を有する蛋白の調製方法と手段」；　Ｂｊｏｒｃｋ　ｅｔ　ａｌ、、　１９ ８７．　２４：１１１３−１１２２；Ｇｕｓｓ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８６．　 ＥＭ口ＯＪ、５：１５６７−１５７５．　Ｎｙｇｒｅｎ　ｅｔ　ａｌ、、　１９ ８８．　Ｊ、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｒｅｃｏｇｎｉｔ本発明の組成物中の生物学 的化合物は有機化合物がもっていない多くの活性を有する。有機化合物の利点は 、低分子量であるために生物学的化合物には容易に適用できない系、例えば経口 的に投与できる点である。即ち、有機化合物の患者への投与は生物学的化合物の 患者への投与とは異る経路で行なってよい。 有機化合物と生物学的化合物の両方を組合せることにより相乗作用が認められた ため、同じ活性を得るためには、各化合物を単独で投与する場合よりも低用量で 両化合物を投与することが可能である。このような低用量は、毒性の問題がある 場合に重要である。あるいは、組成物の化合物の作用は相加的であり、何れの薬 剤も単独では最も効果的な用量でも達成できないような治療結果を達成すること ができる。 有機化合物と生物学的化合物の混合物 有機化合物と生物学的化合物の適切な混合物はｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｉｎ　ｖ ｉｖｏで得られ、これにより、補体活性を抑制できる。化合物は同時または順次 投与できる。抑制作用を有する有機化合物および生物学的化合物またはその塩の 相乗作用または相加作用を有する組合せを含有する医薬組成物が本発明により提 供される。このような組成物は、治療上有効な量の生物学的化合物（またはその 類縁体、誘導体またはフラグメント）および有機化合物の組成物、および薬学的 に許容される担体を含有する。このような担体の例は食塩水、緩衝食塩水、デキ ストロースおよび水である。典型的には、静脈投与用の組成物は滅菌等張性水性 緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物は可溶化剤および局所麻酔剤、例 えばリグノカインなどを含有することにより注射部位の痛みを緩和することがで きる。一般的には諸成分は別個に、または単位投与形態として一緒に混合して、 または活性単位として有効成分の量を示すアンプルや小袋などの気密容器に濃縮 して、供給される。 注入により組成物を投与する場合は、滅菌された薬品等級の「注射用水」または 食塩水の入った注入ぴんと共に分配する。組成物を注射により投与する場合は、 有効成分を投与前に混合できるように滅菌された注射用水または食塩水のアンプ ルが準備される。 医薬組成物の成分１つ以上の入った１つ以上の容器よりなる薬品バックも本発明 の範囲に含まれる。 生物学的化合物の直接化学修飾 補体媒介疾患を有する患者を治療するための組成物を得るために有機化合物と生 物学的化合物を混合する以外に、生物学的化合物に低分子量有機化合物を直接結 合させることにより化学的に修飾することも可能である。このようなポリペプチ ドへの低分子量有機化合物の化学結合は、当該分野で知られた方法により行なう ことができ、例えば、有機化合物および／またはポリペプチド上の反応性の基を 介して（例えば蛋白質のリジン、チロシンまたはシスティン基を介して）ポリペ プチドに直接連結するか、または有機化合物とポリペプチドの間に短くフレキシ ブルなアームを形成するようなリンカ−化合物を用いるなどしてよい。リンカ− は有機化合物の結合および作用に柔軟性を与えるために用いることができ、可逆 的および不可逆的なリンカ−の両方を含む。可逆的リンカ−は化学修飾された生 物学的化合物がプロドラッグとして作用することが望ましい場合に使用でき、こ の場合は、プロドラッグの活性は可逆的リンカ−が逆転し、これにより連結され た有機化合物を放出する際に調節される。プロドラッグの活性または有機化合物 と生物学的化合物との相乗作用から得られる活性の量を最適化するためには有機 化合物の連結の程度を測定することが必要である。 生物学的化合物に連結するために用いることのできる反応性の基を得るために置 換スピロ［ベンゾフラン］−シクロアルカン化合物に対して行なうことのできる 修飾の例をＢＣＤ環スピロ［ベンゾフラン］−２（３Ｈ）−シクロヘキサンのペ リリルアルコール誘導体について以下の図式６に示す。 （来貢以下余白） 」＆殴ｌ− スピロベンゾフランのＤ環の４．６および７位は補体活性において重要であるた め、ペリリルアルコール基はＢシクロヘキサン環に導入される。一連のペリリル アルコール誘導体を調製した後、アルコール基を更に修飾して生物学的化合物の 特定のアミノ酸に共有結合することの可能な反応性の基を得ることができる。ア ルコール基の厳密な修飾は、生物学的蛋白のどのアミノ酸またはアミノ酸誘導体 を結合部位として選択するかによる。このようなアルコールおよびアミノ酸の修 飾は当該分野で知られている。補体受容体蛋白のＳＣＲ単位の構造はシスティン を含んでいるため、結合部位としては、リジンまたはチロシン基がシスティンよ り好ましい。ペリリルアルコール誘導体の特定の例が検討されており、補体抑制 活性を有することが示された。 ５．５補体抑制能力 本発明の相乗作用混合物は当該分野で知られた何れかの方法を用いて検定するこ とによりその補体抑制活性を示すことができる。このような検定の例は、補体系 の活性を抑制する能力または補体誘導ペプチドの形成を選択的に抑制する能力を 調べる下記に示すｉｎ　ｖＨｒｏ試験である。 （ｉ）補体媒介赤血球溶解（溶血）の測定（ｉｉ）Ｃ５ａおよびＣ５ａ　ｄｅｓ 　Ａｒｇの生成を抑制する能力の測定、および／または、Ｃ３ａおよびＣ３ａ　 ｄｅｓ　Ａｒｇの生成を抑制する能力の測定。 顕著な補体抑制活性を有することが示されたこれらの有機化合物および生物学的 化合物は後記のセクション５．７に示す病気や疾患の治療または予防において治 療上の価値を有する。組合せた場合、各々単独の作用と比較して、相乗ないしは 相加的に作用するような、補体に関わる活性を抑制する能力を有するセクション ５゜１に記載した有機化合物および補体受容体に関わる活性を有するセクション ５．３に記載した生物学的化合物は、本出願の範囲に含まれる。ＣＲＩおよびＣ Ｒ２に通常備わっている活性は当該分野でよく知られており、その活性やアッセ イを記載した例としては、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８９１０１３５８　（１９ ８９年１０月５日ＷＯ３９１０９２２０として公開、発明の名称は「ヒトＣ３ｂ ／Ｃ４ｂ受容体（ＣＲＩ）　Ｊ　）　；　Ｗｅｉｓｓｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、、　 １９９０．５ｃｉｅｎｃｅ　２４９：１４６−１５１；Ｆｅａｒｏｎ、　Ｄ、Ｔ 、およびＷｏｎｇ。 Ｗ、Ｗ、、　１９８３．　Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｉｍｍｕｏｌ、、　ｌ：２４３；Ｆ ｅａｒｏｎ、　Ｄ、Ｔ、、　１９７９．　Ｐｒ。 ｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、ｓｃｉ、ＵｓＡ、　７６：５８６７；１ｉｄａ、　Ｋ 、およびＮｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ、　Ｖ、、　１９８Ｌ　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、 　１５３：１１３８；Ｋ１１ｃｋｓｔｅｉｎ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８７．　Ｊ 、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、　１６５：１０９５；　Ｗｅｉｓｓ　ｅｔ　ａｌ、、　１ ９８８．　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、　１６７：１０４７−１０６６；　Ｍｏｏｒ ｅ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８７．　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、８ ４：９１９４；Ｍｏｏｒｅ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８９．Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ ｍ、２６４：２０５７６がある。例えば、ＣＲＩについては、このような活性は 好中球酸化的バーストを抑制し、補体媒介溶血を抑制し、Ｃ３ａおよび／または Ｃ５ａ生産を抑制し、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂに結合し、■因子コファクタ ー活性を示し、Ｃ３および／またはＣ５転換酵素活性を抑制するｉｎ　ｖｉｔｒ ｏの能力を含む。特に、以下に示すアッセイを用いて補体抑制を明らかにした。 ５、５．１．　Ｃ３ａおよびＣ５ａ生産の阻害補体阻害能力は、Ｃ３ａおよびＣ ５ａの生産の特異的阻害をアッセイすることにより試験した。全ての実験におい て、補体の原料として使用した単一のヒト血清プールは等分し、−７０℃で凍結 保存した。ヒトＩｇＧは熱凝集させ、分割し、−７０℃で凍結保存した。 各実験において、血清試料は種々の濃度の被験化合物存在下で３７℃で平衡化し た。古典的補体経路は、凝集ヒトＩｇＧを添加することにより開始した。ＩｇＧ を含有しない試料を対照として含めた。 １０分の固定反応時間（Ｃ５ａまたはＣ３ａの生産がほぼ終了する、即ち９０％ より多くなるような好都合な時間をめるために、あらかじめ経時変化試験におい て測定）後、放出された補体ペプチド（Ｃ５ａまたはＣ３ａ）の量を、変更した 手順で、例えば、市販のラジオイムノアッセイキット（Ｃ５ａ　ＲＩＡ、　Ｕｐ Ｊｏｈｎ　Ｃａｔ、Ｎｏ、３２５０−０２；Ｃ３ａＲＩＡ、　ＵｐＪｏｈｎ　Ｃ ａｔ、　Ｎｏ、３２４５−０１；　Ｃ５ａ　ＲＩＡ、　Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｃａ ｔ、Ｎｏ、　ＲＰＡ、５２０；Ｃ３ａ　ＲＩＡ、　Ａｍｅｒｓｈａｍ　ＲＰＡ、 ５１８）を用いたラジオイムノアッセイにより測定した。 競合的免疫アッセイを用いたため、補体ペプチド（Ｃ５ａおよびＣ３ａ）の濃度 はカウント数と逆に変化する。試料の結合カウント数（ＣＢ）は、ペレットで測 定した総カウント数（分当りのカウント数。 ｃｐｍ）マイナス非特異的結合（ＮＳＢ）対照で測定したカウント数としてめた 。ＮＳＢ対照はトレーサーペプチド（ｌｔｉ＋標識）および第２の沈殿抗血清の みを含有する試料であり、Ｃ３ａ−またはＣ３ａ−特異的抗血清は含有しない。 阻害分率は、「試料」の結合カウント数（ＣＢ）マイナス［化合物未添加試料」 のＣＢを、ｒ１ｇＧ非含有対照」のＣＢマイナス「化合物未添加試料」のＣＢで 割った値に等しい。 阻害＝［（試料ＣＢＩ（化合物未添加ＣＢ）　］［（ＩｇＧ非含有ＣＤ）−（化 合物未添加ＣＢ）］５．５．２．補体媒介溶血の阻害の実証補体を阻害する能力 は補体媒介赤血球溶解（溶血）の阻害をアッセイすることにより更に試験した。 溶血の阻害は、組成物の濃度の関数として、あるいは、１つの化合物の濃度を変 化させ、もう１つの化合物の濃度は一定とすることにより、測定した。被験組成 物はＯ，ＩＭ　Ｈｅｐｅｓ緩衝液（０，１５Ｎ　ＮａＣ１，ｐＨ７，４）中に調 製し、５０μｍをＶ底マイクロプレートの各ウェルに添加した。補体源として使 用するヒト血清はＨｅｐｅｓ緩衝液てｌ：５００に希釈し、５０μｍを各ウェル に添加した。次に、抗ヒツジ抗体の添加された市販のヒツジ赤血球（例えばＤｉ ａｍｅｄｉｘ　Ｃａｔ、Ｎｏ、　７８９−００１）を入手した状態で用いて、１ ００μｌ／ウエルで添加し、溶血をもたらす補体経路を開始した。プレートは３ ７８Ｃで６０分間インキュベートした後、１０分間５００Ｘｇで遠心分離した。 上清を除去し、平底マイクロプレートに入れた。溶血の程度は４１０ｎｍにおけ る試料の吸光度の関数として測定した。最大吸光度（最大溶血に相当）　Ａ、、 、は、ヒト血清のみを含有する赤血球試料の吸光度Ａ、マイナス赤血球のみを含 有する試料の吸光度Ａ。からめた。即ち、Ａ１□、＝Ａ、−Ａ。 とした。ヒト血清および抑制組成物の両方を含有する赤血球試料の吸光度と、抑 制組成物のみを含有する試料の吸光度の間の差をＡｓｒａｐｌｅとして定義した 。阻害ＩＨは（Ａｍａｘ　Ａ　ｉｎｍｏｌａ）　／　Ａｍａｘの分数として表さ れ、ＩＨ，ｏは１Ｈ＝１／２の値を得るために必要とされる抑制組成物または変 化させた個々の化合物の濃度として定義した。 ５．６．免疫抑制活性 本発明の組成物の有機化合物は、免疫活性を抑制することができる。特に、本発 明の化合物は、細胞性免疫機能を抑制する。例えば、これら化合物は、ナチュラ ルキラー活性を抑制し、末梢血液リンパ球の増殖を抑制し、および／またはＰＢ Ｌ培地中のＴリンパ球の活性化を抑制する。 公知のいかなる方法も免疫抑制活性を立証するために用いることができる。その ような方法として、標的細胞のナチュラルキラー溶解の抑制、末梢血液リンパ球 の増殖抑制または細胞表面インターロイキン２レセプター発現抑制のインビトロ アッセイがあるが、これらに限定されるものではない。特に、以下のアッセイが 免疫抑制活性を立証するために用いることができる。 ５、　６．　１．ナチュラルキラー活性抑制の実証末梢血液単核細胞の、ＮＫ感 受性標的細胞のに５６２を溶解する能力に対する本組成物の効果を調べることが できる。Ｃ「でラベルしたに５６２エリスロミエロイド白血病細胞を標的として 用い、正常な末梢血液単核細胞をエフェクター細胞として用いて、４時間の細胞 毒性アッセイにより、ＮＫ活性を決定する。フィコルーヒバーク（Ｆｉｃｏｌｌ −Ｈｙｐａｑｕｅ）勾配遠心により、エフェクター細胞を新鮮な血液から単離し 、１００μｍの５Ｘ１０’細胞／ウエルの懸濁液をＶ底のマイクロタイタープレ ートのそれぞれのウェルに加える。 １０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ　１６４０培地に組成物を希釈し、ｌウェル あたり１００μｌで分与する。標的細胞（Ｋ５６２）を１００μＣｉの５１Ｃｒ で３０分間ラベルし、完全に洗浄し、２０μＩの容積で１０４細胞／ウエルで分 与する。これらの細胞濃度は、エフェクタ一対標的細胞の比率が最終的に５０： Ｉとなる。マイクロタイタープレートを、例えば、５０×ｇで５分間遠心し、５ ％ＣＯ２加湿チヤンバ一中３７℃でインキュベートする。４時間後、１００μｍ をそれぞれのウェルから取り、放射活性をＬＫ８１２７５ガンマカウンターを用 いて測定する。特異的溶解のパーセンテージは以下のように計算した： 特異的溶解％＝［（ＥＸＰ−３Ｒ／　（）−タル−Ｂ）］ｘ　１　ｏ　。 ここで、ＥＸＰ　（実験値）は、エフェクターおよび標的細胞用いて得られる； ＳＲ（自発的放出）は、培地のみでインキュベートした標的細胞から得られる； トータルの放出は、水中での低浸透圧溶解により得られる；Ｂは機器のバックグ ラウンドを表す。 その平均は４つ作成したウェルから計算できる。試験化合物とともにインキュベ ートしたエフェクター細胞の生存能力は、トリパンブルー排除により決定できる 。 ５、　６．　２．末梢血液リンパ球の増殖抑制の実証フィトヘマグルチニン（Ｐ Ｉ（Ａ　、ウェルカム）または抗ＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ−３、オル ト）に応答するヒト末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）の増殖は３Ｈチミジンの取込み により評定できる。この組成物を培養培地中で所望の濃度まで希釈し、ヒトＰＢ Ｌを１０’細胞／ｍｌの最終濃度まで添加し、次に、ＰＨＡ（ウェルカム）また は抗ＣＤ３（ＯＫＴ−３、オルト）抗体（ｌ　ｍｇ／ｍｌの最終濃度）を加えて 増殖を開始させた。ｌ試料あたりの最終容積は、１００μｍとすることができる 。細胞を刺激後の７２時間インキュベートし、ｌ試料あたりＩｕｃｉの３Ｈチミ ジンで４時間標識し、回収し、ＤＮＡ中への３Ｈチミジンの取込みをシンチレー ションカウンターでカウントした。別個の実験は、促進物質なしに組成物の量の みを変へて曝された試料に関して行い、これにより、用いられた組成物濃度範囲 では、ＰＢＬは生存可能である（トリバンブルー排除により視覚的に決定）こと を示すことができる。 リンパ球からの細胞表面インターロイキン２リセブタ−（１１，−２Ｒ）または ＣＤ８抗原の放出は、Ｔ細胞活性化と相関する現象である（Ｒｕｂｉｎ　ｅｔ　 ａｌ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９８５．１３５．３１７２−７７；　Ｒａ ｂｉｎ　ｅｔ　ａｌ。 Ｆｅｄ、　ｐｒｏｃ、　１９Ｂ５４４．９４６；　Ｆｕｊｉｍｏｔｏ、　Ｊ、　 ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ。 １９８３、１５９．７５２−６６；　Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎ、　Ｂ、　ｅｔ　ａｌ 、　２ｄ　Ａｎｎｕａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｉ ｍｍｕｎｏｌ、　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　Ｄ、Ｃ，、０ｃｔｏｂｅｒ　３０． 　１９８７）。ＰＢＬ培養物の上清中に放出されたｆＬ−２ＲまたはＣＯＢタン パクの量は、　３Ｈチミジンで標識する直前にそこからアリコートを除去するこ とにより評定することができる。市販されているエンザイム・イムノアッセイ・ キット（セルフリーＩＬ−２Ｒ（登録商標）カタログＮｏ、　ＣＫ１０２０、マ サチューセッツ州ケンブリッジのＴセルサイエンシズ社、またはセルフリーＴ８ ／ＣＤ８　（登録商標）カタログＮｏ、ＣＫ１０４０、Ｔセルサイエンシズ社） を用いて、この２つの分析物の量が決定できる。 インターロイキン２リセプタ−（ＩＬ−２Ｒ）は、休止Ｔ細胞の表面上には検出 できない。特異的な抗原または分裂促進因子により活性化される際に、Ｔ細胞増 殖は自己分泌機構により仲介されて、活性化細胞がインターロイキン２を分泌し 、細胞表面ＩＬ−２Ｒを発現する（Ｍｅｕｅｒ、　Ｓ、Ｃ，ｅｔ　ａｌ、　Ｐｒ ｏｃ、　Ｎａ口、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、１９８４、　８＋、１ ５０９；　Ｔｓｕｄｏ、Ｍ、、ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１９８４．　 ＋６０゜６１２−６１７；　Ｗａｌｄｍａｎｎ、Ｔ、Ａ、、ｅｔ　ａｌ、Ｊ、Ｅ ｘｐ、Ｍｅｄ、１９８４．　１６０．　１４５０−１４６６）　。 組成物についてＴ細胞活性化抑制能を試験することができるが、これは細胞表面 ＩＬ−２Ｒ発現の阻止により示される。組成物の非存在下もしくは可変量の存在 下で、ＰＢＬ培養物（１，５ｍｌ　；２４ウエルプレート）を７２時間ＰＨＡ（ １ａｇ／ｍｌ）で刺激する。次に、この細胞をフルオレセインイソチオシアネー ト（ＦＩＴＣ）で標識した抗ＩＬ−２８抗体（ＡＣｔ−Ｔ−３ｅｔ　ＩＬ−２Ｒ 、カタログＮｏ、　ＡＡ２００９、マサチューセッツ州ケンブリッジのＴセルサ イエンシズ社）を用いて染色し、流動細胞計測法（オルトシステム３０）により 分析することができる。 ５、　６．　４．　ＣＨＯ細胞増殖の抑制の欠如免疫細胞に対する組成物の抑制 活性の特異性は、チャイニーズハムスター卵巣（Ｃ）１０）細胞の増殖抑制能の 評価により示すことができる。非集密的ＣＨＯ細胞を、ｌウェルあたり５０μｍ の容積で、組成物の存在もしくは非存在下で９６ウエルプレートで４時間増殖さ せた。細胞を１サンプルあたり０．５μＣｉの３Ｈチミジンで標識し、回収し、 取り込まれた３Ｈチミジンの量をシンチレーションカウンティングにより決定し た。組成物の存在下に増殖させたＣＨＯ細胞は、組成物の非存在下でインキュベ ートされた細胞とだいたい同じ鳳の３Ｈ−チミジンを取り込むことができ、ＰＢ Ｌ培養物の活性化および／または増殖を抑制する本発明の組成物が、哺乳細胞の 増殖を抑制しないことがこうして示された。 ５．７３本発明化合物の臨床的利用 相乗的または付加的補体の免疫および／または炎症活性の抑制を示す本発明の組 成物は、多様な免疫もしくは炎症の疾病または不全の予防や処置において治療上 の価値を有する。望まれないか、適当でない補体活性を伴う免疫不全の治療のた めに、本発明の組み合わされた化合物を患者に投与することができる。特に、効 果的用量の本発明化合物の抑制性混合物は、補体系（例えば、Ｃ３ａ）または不 適当な反応免疫系の成分の活性により起こる有害な作用の改善または予防に治療 的に適用してもよい。効果的用量の化合物は当業者により決定することができ、 この投与量は、生物学的化合物および有機化合物の選択ならびに通常の安全性研 究、毒性研究、投与量範囲および投与方法、例えば、ポーラス投与、連続投与ま たは反復投与を考慮に入れたそれぞれの相対的な量に依存する。特別な実施態様 において、有機化合物の投与量は、約０．Ｏｌから約５００　ｍｇ／ｋｇ／日の 範囲にあることができ、生物学的化合物の投与量は、約０．０１から約５００　 ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあることができる。 一つの化合物またはその他の化合物は、ポーラス投与することができる。具体的 な実施態様において、有機化合物は、約ｔｏ　ｍｇ／ｋｇ／日て筋肉内に投与す るシクロスポリンＡであり、生物学的化合物は、１５　ｍｇ／ｋｇでその全量を 一回で静脈内に投与される可溶性ＣＲ１である。 本発明の化合物により治療できる疾病や不全として、表ＩＩＩに挙げたものや上 記セクション２．６に記載のものがあるが、これらに限定されない。特に、火傷 または心筋梗塞により誘発される負傷による組織破壊の広範囲な領域に関連する 疾患、およびショック肺（ｓｈｏｃｋ　ｌｕｎｇ）としても知られている成人呼 吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）が、効果的量の本発明の組成物の投与により治療する ことができる。 補体系の有害な非特異的な活性化、または代わりの経路による好ましくない活性 化も、本発明の組成物の投与により予防または治療ができる。特別な実施態様に おいて、そのような化合物の混合物は、特異的または非特異的なＣ５のタンパク 質分解プロセシングにより誘導される急性の病理学的変化を改善することができ る。そのような化合物の混合物とは、有機化合物と生物学的化合物の組合せによ る投与、または有機化合物も含むように化学的に修飾された生物学的化合物の投 与のどちらかを指している。 本発明の化合物の混合物を使って、補体系により直接的または間接的に仲介され る生物的または免疫的機能の調製も可能であり、これら機能としては、上記の表 Ｉと■に挙げたものと、そのインビトロ機能に関連するインビボ機能があるが、 これらに限定されない。 特別な実施態様において、抑制性化合物の混合物を例えば腎臓結石、全身性エリ テマトーデス（ＳＬＥ）　、腎毒性の糸状体腎炎または多発性硬化症に関連した 炎症の治療に用いることができる（例えば、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ａｌｌ ｅｒｇｉｃ　Ｂｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ、　Ａ　ＵｓｅｆｕＩ　Ｍｏ ｄｅｌ　ｆｏｒ　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　５ｃｌｅｒｏｓｉｓ、　Ａ　５ａｔｅｌｌ ｉｔｅ　Ｃｏｎ４ｅｒｅｎｃｅ　ｏｆｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　５ ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｓ、　Ｊｕｌｙ　１６−１９． １９８３、　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　５ｅａＬ ｔｌｅ、　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ；　Ｍｉｙａｚａｋｉ、　Ｗ、　ｅｔ　ａｌ、 　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９８０．２４．　＋０９１；　 Ｋｏｎｎｏ。 Ｓ、　ａｎｄ　Ｔｓｕｒｕｔｕｊｉ、　Ｓ、　Ｓｒ、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏ ｌ、　１９８３．８０．２６９を参照）。 さらにもう一つの実施態様において、本発明の化合物の混合物は、補体系により 誘引され、活性化される好中球から生じる、心筋虚血および再潅流による組織損 傷の治療に投与することができる。 本発明の化合物の混合物は、増加したリンパ球により起こるか達成される疾病ま たは不全、または増加したリンパ球またはナチュラルキラー活性により起こるか 達成される不全の予防または治療のために投与することもでき、それらの疾病、 不全としては、萎縮性胃炎、甲状腺炎、アレルギー性脳を髄炎、胃粘膜、甲状腺 中毒症、自己免疫性溶血性貧血、尋常性天庖瘉、交換性眼炎、遅延型過敏症、同 種移植片の拒絶、移植庁−宿主反応、器官移植拒絶、他の自己免疫疾患、および 薬物アレルギーがある。これら混合物は、治療的介在、例えば組織プラスミノー ゲンアクチベーター治療または心肺バイパスにより起こる補体活性化の悪影響を 軽減するために用いることもできる。 多様なデリバリ−システム（例えば、リポソーム、マイクロ粒子またはマイクロ カプセル中へのカプセル化、または特異的分子への結合）が公知であり、これら 化合物の治療的投与のために用いることができる。投与方法としては、経口、皮 肉、経皮、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内の経路があるが、これらに限 定されない。そのような投与は、ポーラス投与または反復投与または連続投与、 例えば点滴により実施できる。有機化合物および生物学的化合物は、同時または 引き続いて、同じまたは異なる経路により投与できる。例えば、一つの実施態様 において、有機化合物は経口で投与することができ、一方、生物学的化合物は静 脈内に投与する。 本発明のさらに別の実施態様としては、本発明の組成物とルーチンに投与される 血栓溶解化合物またはその繊維素溶解活性フラグメント、誘導体または修飾物と の組み合わせを用いて、血栓溶解剤、例えば、組織プラスミノーゲンアクチベー ター、ストレプトキナーゼまたはウロキナーゼによりルーチンに治療を受けてい る病気の患者（例えば、心筋梗塞患者）の治療により得られる併用療法がある。 そのような併用療法の有用性は、補体系が、心筋梗塞などの不全またはバイパス 手術で活性化されるという観察から導きだされている。併用療法の効能は、不適 当で、損傷を与える補体活性化を調整するという補体抑制性組成物の能力のみに よる血栓溶解処置よりも実質的に良好となりうる。血栓溶解剤と本組成物の投与 は、同時または引き続くものであってよく、また、異なる投与形態、ごくわずか な例を挙げれば、経口投与形態と注射可能形態との組み合わせがある。 本発明は、以下の実施例によりさらに良く理解することができるが、これらの例 は説明の目的だけのために示すのであって、本発明の範囲の限定を意図するもの ではない。 Ｈ）−シクロヘキサン］ナトリウム塩（４４ａ）、および、６−カルボキシレー トー４−エトキン−スピロ［ベンゾフラン−２（３）−シクロヘキサン］ナトリ ウム塩（４４ｂ）３３ａ−ｂの調製。無水アセトン（２００ｍｌ）中のメチル３ ．５−ジヒドロキシベンゾエート（１０ｇ、　５９．５　ｍｍｏｌ）を乾燥に２ ＣＯ３（８，２ｇ、　５９゜４　ｍｍｏｌ）に加えた。硫酸ジメチル（３３ａに ついて、７．５　ｇ、　５９．５ｍｍｏｌ）を混合液に加え、これを２４時間還 流した。混合液を濾過した。エーテル（２００ｍｌ）を溶液に加え、Ｎ２０によ り抽出した（１００　ｍｌ　Ｘ　２）。この有機溶液をＭｇ５Ｏ＋上で乾燥した 。溶媒の除去後に、粗生成物（９，０ｇ）をクロマトグラフィー　（１：１９　 ＝　ＥｔＯＡｃ／ＣＩ（ｇＣ１２）により精製し、白色固体の３３ａを収量３． ９　ｇ（３６％）を得た。 融点９５−９７°Ｃ；　ＴＬＣＲ，０，５８（１：９　＝　ＥｔＯＡｃ／Ｃ）１ ２ｃ１２）、　ＮＭＲ（ＣＤＣｌｉ）δ７．２６−７．１３　（ｍ、２Ｈ）、　 ６．６３　（ｍ、ＩＨ）、　５．９０　（ｓ、ＩＨ，ＯＨ）、　３．９０　（ｓ 。 ３Ｈ）、　３．８０　（ｓ、３Ｈ）。３３ｂについては、３３ａの方法をアルキ ル化剤として硫酸ジエチルを用いることにより修正した。３３ｂ＝融点９８−１ ００°Ｃ；収率３３％、ＴＬＣＲ，０，５１（１：９　＝　ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２ Ｃｈ）　。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）６７．１６−７．１４　（ｍ、２Ｈ）、　６． ６２　（ｍ、ｌＨ）、　５．７０（ｓ、ＩＨ，ＯＨ）、　４．０７−４．００（ ｑ、２Ｂ）、　３．９０　（ｓ、ＩＨ）、　１．４１−１．３８　（ｔ、３Ｈ） 。 ３４ａ−ｂの調製。ＮａＨ（５０％鉱油；　２．２ｇ、　９１．７　ｍｍｏｌ） をＮ２下においてへキサンで洗浄した（４０　ｍｌ　Ｎ２）。無水ＤＭＦ（５０ ｍｌ）を添加し、混合液を０℃まで冷却した。無水ＤＭＦ（４０ｍｌ）中の３３ ａ（７，６ｇ。 ４１．７　ｍｍｏｌ）の溶液を混合液にゆっくりと加え、次に、１時間２５０Ｃ で撹拌した。混合液を０℃に再度冷却し、ＭＯＭＣＩ（３，７ｇ、　４５．８ｍ ｍｏ　Ｉ　）の無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）の溶液を滴下した。混合液を２５℃で３ 時間撹拌した。エーテル（２００ｍｌ）を混合物に加え、Ｎ２０で洗浄した（　 １００　ｍｌ　ｘ　４）。エーテル部を乾燥しくＭｇ５Ｏ＋）濃縮して、淡黄色 の液体３４ａを得た。収量８．２　ｇ（８７％＞　、ＴＬＣＲ，ａ、４４（ｃＨ ，ｃＩ２）、ＩＲ（無溶媒）、、２９５０．１７４０．１６００．１４６０．１ ４３０．１３２０．１２４０．１１５０゜１０６０、１０２０．７７０　Ｃｍ　 −’　、ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　Δ７．３２−７．３１　（ｍ、ＩＨ）、　７゜ ２４−７．２３　（ｍ、ｌＨ）、　６．７９　（ｍ、ｌＨ）、　５．１９　（ｓ 、２Ｈ）、　３．９０　（ｓ、２Ｈ）、　３．８３　（ｓ、３Ｈ）、　３．４８ 　（ｓ、３Ｈ）　、　３４ｂについては、３４ａの方法を一部変更した。収率９ ５％、ＴＬＣＲ，０，４２（Ｃ８，Ｃｌ２）　、　ＩＲ（無溶媒’）　２９８０ ゜１７２５、１６００．１４５５０．１３００．１２４０．１１５０．１０６０ ．１０３０．７７０　ｃｍ　−’。 ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）　６７．３０−７．２９　（＋ｎ、１８）、　７．２３− ７．２２　（ｍ、ＩＨ）、　６．７９−６゜７８　（＋ｎ、ｌＨ）、　５．１９ 　（ｓ、２Ｈ）、　４．０９−４．０２　（Ｑ、２Ｈ）、　３．９０　（ｓ、３ Ｈ）、　３．４８　（ｓ、３Ｈ）、１．４４−１．３９　（ｔ、３Ｈ）。 ３５ａ−ｂの調製。ＬｉＡＩＨ＋　（１，７ｇ、　４４．２　ｍｍｏｌ）を無水 Ｔ）ＩＦ（１５０ｍｌ）に窒素下で懸濁し、０℃に冷却した。ＴＨＦ（２０ｍｌ ）中の３４ａ（１０ｇ、　４４．２　ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。混合物を３ 時間２５℃で撹拌した。 過剰のＬｉＡＩＨ，を、さらに氷を入れて注意深く分解した。混合物をシリカゲ ルを通して濾過し、エーテルで洗浄した（１５０　ｍｌ）。その溶液をＩ２０て 洗浄しく５０　ｍｌ　Ｎ２）　、乾燥し、濃縮して、３５ａの無色液体が収量６ ．７　ｇ（７６％）で与えられた。ＴＬＣＲ，０，３８（１：４ＥｔＯＡｃ／Ｃ Ｈ２Ｃｌ２）、ＩＲ（無溶媒）　３４００．２９２０．１６００．１４６０．１ ２９０．１１５０、１０５０．９２５．８４０　ｃｍ−ＩＳＮＭＲ（ＣＤＣＩａ ）Δ６．６７−６、５０（ｍ、　３８）、　５．１６　（ｓ、２Ｈ）、　４．６ ５　（ｓ、２Ｈ）、　ｓ、３Ｈ）、　３．５０　（ｓ、３Ｈ）、　２．６５（ｓ 、１１．ＯＨ）。３５ｂは３５ａに用いられた同じ方法で調製した。収率　９０ −９２％、ＴＬＣＲ，０，５２（１：４　＝　Ｅｔ２０／ＣＨ２Ｃｌ２）。ＩＲ （無溶媒＞　３４００．２９４０．１６００、１４６０．１３９０．１２８０． １２１０．１１５５．１１４０．１０３０．９２５．８５０ｃｎ＋−’ｏＮＭＲ （ＣＤＣＩａ）６６、８０−６゜５７　（ｍ、３Ｈ）、　５．２７　（ｓ、２Ｈ ）、　４．７０　（ｓ、２Ｈ）。 ４．２０−３．９７　（ｑ、２Ｈ）、　３．５０　（ｓ、３Ｈ）、　２．００　 （ｓ、Ｉ（、ＯＲ）、　１．５０−１．３３　（ｔ、　３Ｈ）。 ３６ａ−ｂの調製。３５ａ（２，２ｇ、　１１．１　ｍｍｏｌ）とイミダゾール （１，５１ｇ。 ２２、２　ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）中の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（ ｔｏ　ｍｌ）に溶解したＴＢＤＭＳＣＩ（２，０ｇ、　１３．３　ｍｍｏｌ）を ゆっくりと加えた。混合液を２５℃で３時間撹拌した。混合液をＨ，０で洗浄し く１００　ｍＪｘ２）、乾燥しくＭｇ５０４）、濃縮して、無色の液体３６ａ　 、３．３　ｇ（９４％）を得た。ＴＬＣＲ，０，８（４：６　＝　ヘキサ：／／ ＣＨ２Ｃ１ｚ）、ＩＲ（無溶媒）　２９４０゜１６００、１４６０．１３６５． １３００．１２５０．１２１０．１１９０．１１５０．１１００．１０５５゜１ ０２５、９２５．８３５．７６５　ｃｍ　’、ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）δ６．６２ −６．６１　（ｍ、Ｉｔ（）。 ６．５８−６．５６　（ｍ、１８）、　６．４９−６．４７　（ｔ、ＩＨ）　、 ５．１５　（ｓ、２８）、　４．６９　（ｓ、２Ｈ）、　３．７８　（ｓ、３Ｈ ）、　３．４７　（ｓ、３Ｈ）、　０．９５　（ｓ、９Ｈ）、　０．１０　（ｓ 、６８）。３６ｂに関しては３６ａに用いられた手順により調製した。収率９０ −９５％、ＩＲ（無溶媒）　２９４０．１６００．１４６０．１３９０．１３７ ０．１２９０．１２５０゜１１５０、１１００．１０３０．９４０．８４０．７ ７５　ａｍ−’、ＮＭＲ（ＣＤＣ１，）δ６．６１−６．５９　（ｍ、ＩＨ）、 　６．５６−６．５４　（ｍ、ＩＨ）、　６．４８−６．４７　（ｔ、ＩＨ）、 　５．１５　（ｓ、２８１４．６７　（ｓ、２Ｈ）、　４．０４−３．９７　（ ｑ、２１（）、　３．４７　（ｓ、３）１）、　１．４３−１．３７（ｔ、３Ｈ ）、　０．９４　（ｓ、９Ｈ）、　０．１０　（ｓ、６Ｈ）。 ３８ａ−ｂの調製。３６ａ　（８，２ｇ、　２６．２　ｍｍｏｌ）およびＴＭＢ ＤＡ（４，６ｇ、３９．４　ｍｌｎｏｌ）の窒素下Ｏ℃の無水ＴＨＦ（２００ｍ ｌ）中の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１２ｍｌ、　２８．８　ｍｍｏｌ）をゆっくり と加えた。この溶液を０℃で３０分間撹拌し、続いて２５℃で１．５時間で撹拌 した。溶液を一７８℃に再冷却し、積極的なＮ２の流れの下に、Ｃｕｌ　（７， ５ｇ、　３９．４　ｍｍｏｌ）を−回で加えた。混合液を１．５時間−７８℃か ら−４０”Ｃで撹拌した。混合液を一７８℃に再冷却し、ＴＨＦ（２０ｍｌ）中 の臭化物３７（５，５ｇ、　３１．５　ｎｏｎｏｌ）を滴下し、混合液を一７８ ℃から２５℃で撹拌した。エーテル（２００ｍｌ）を溶液に加え、水相が青色で なくなるまで２０％のＮＨ、Ｏｆ（溶液で洗浄し、乾燥、濃縮して褐色の液体（ １０，４ｇ）を与えた。り０７トグラフイー　（ｉ：１９　＝　ＥｔＯＡｅ／ヘ キサン〕による精製により、無色液体の生成物３８ａ（８，７ｇ、　８２％）が 得られた。ＴＬＣＲ，０，７０（１：９　＝　ＥｔＯＡ／ヘキサン）。ＩＲ（無 溶媒’）　２９３０．　１６１０．　１５９０．　１４６０．　１４３０．　１ ２６０．　１２００．　１１００．　１０８０．　１０３０、　８４０．　７８ ０　ｃｍ−’。ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　６６．６８　（ｓ、ｌＨ）、６．６１　 （ｓ、ＩＨ）、５．２２−５．１８　（ｍ、ｌＨ）、５．１３　（ｓ、２Ｈ）、 ４．７１　（ｓ、２Ｈ）、３．７９　（ｓ、３Ｈ）。 ３．４４　（ｓ、３Ｈ）、３．２６　（ｓ、２）１）、１．９７−１．８８　（ ｍ、４Ｈ）、］、、］６２−１．４６（ｍ。 ４Ｈ）、　０．９４　（ｓ、９Ｈ）、　０．１０　（ｓ、６Ｈ）　、　３８ｂ； 調製は３８ａに用いられたものと基本的には同じものを用いた。収率６０−６２ ％、ＴＬＣＲ，０，６６（１：９　＝　ＥｔＯＡＣ／ヘキサン）、ＩＲ（無溶媒 ）　２９４０．１６１０．１５９０．１４４０、１３９０．１３７０．１２６０ ．１２００．　［５０，１１００，８４０，７７０ｃｍ−’、ＮＭＲ（ＣＤＣ１ ，）δ６．６７　（ｓ、ＩＨ）、　６．５８　（ｓ、０１）、　５．２５−５． ２２　（ｍ、ＩＨ）、　５．１３　（ｓ、２Ｈ）、　４．６９　（ｓ、２ｔ（） 、　４．０３−３．９６　（ｑ、２Ｈ）、　３．４４　（ｓ、３Ｈ）、　３゜２ ８　（ｓ、２Ｈ）、　２．００−１．８９　（ｍ、４Ｈ）、　１．７６−１．４ ７　（ｎ＋、４Ｈ）、　１．３９−１．３５　（ｔ、３）１）、　０．９４　（ ｓ、９Ｈ）、　０．１０　（ｓ、６Ｈ）。 ３９ａ−ｂの調製。ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の３８ａ（７，２ｇ、　１４．７　 ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｂｕ）、ＮＦ　（ＴＩ（Ｆ中１．０Ｍ、　２１　ｍｌ、 　２１　ｍｍｏｌ）を２５℃にてゆっくりと加えた。２５℃で２時間溶液を撹拌 した。エーテル（１００ｍｌ）を溶液に加え、次に５％　ＨＣＩ　（２０ｍｌ） 、さらにＩ２０（１００ｍｌ　Ｎ２）で洗浄した。有機層を乾燥し、濃縮して無 色液体の３９ａを得た。収量６．０　ｇ（９０％）　、ＴＬＣＲ，０，５３（２ ：３　ＥｔＯＡ／ヘキサン）。ＩＲ（無溶媒）　３３８０．３９２０．１６１０ ．１５９０．１４５０．１４３０．１４００．１２００．１１６０、　＋１１０ ．１０８０．１０３０．９６０．９２５．８３０　ｃｍ　−’　。ＮＭＲ（ＣＤ ＣＩａ）δ６．７０　（ｓ、ＩＨ）、　６．６１　（ｓ、ＩＨ）、　５．２１− ５．１８　（ｍ、ｌＨ）、　５．１４　（ｓ、２Ｈ）。 ４．６２　（ｓ、２Ｈ）、　７．３９　（ｓ、３Ｈ）、　３．４４　（ｓ、３） １）、　３．２６　（ｓ、２Ｈ）、　２．００−１．８７　（ｍ、４Ｈ）、　１ ．６２−１．４８　（ｗ＋、４Ｈ）。３９ｂについて、調製は３９ａに用いたも のと基本的には同じものを用いた。収率９５％、ＴＬＣＲ，０゜５８（２：３　 ＝　ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）　、ＩＲ（無溶媒）　３４００．２９４０．１６１ ０゜１５９０、　１４４０．　１３９０．　１２００．　１！５０．　１１２０ ．　１０７０．　１０３０．　９２５．　８２０　ｃｍ−１゜ＮＭＲ（ＣＤＣＩ ａ）　６６．６９　（ｓ、ＩＨ）、６．５８　（ｓ、ｌＨ）、５．３０−５．２ ５　（ｍ、ＩＨ）、５．１４　（ｓ、２Ｈ）、４．５９　（ｓ、２８）、　４． ０３−３．９６　（ｑ、２Ｈ）、　３．４４　（ｓ、３）１）、３．２８　（ｓ 、２Ｈ）、２．００−１．８８　（ｍ、４Ｈ）、１．６０−１．４６　（ｍ、４ Ｈ）、１．３９−１．３５　（ｔ、３Ｈ）。 ４０ａ−ｂの調製。２５℃のＣＨ２Ｃｌ２　（１００ｍｌ）中のＦＣＣ（５，５ ｇ、　２５゜６　＋ｎ＋ｎｏｌ）混合液に、ＣＨ，ＣＩ２　（５０ｍｌ）中の３ ９ａ（４，６ｇ、　１５．７　ｍｍｏｌ）　′をゆっくりと加えた。その混合液 を２５℃で４時間以上撹拌した。 混合液をシリカゲルを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（４０ｍｌ）で洗浄した。 溶液をＩ２０（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥しくＭｇ５Ｏ，）　、濃縮して黄色液 体を得、これをクロマトグラフィー（３ニア　＝　ＥｔＯＡＣ／ヘキサン）で精 製し、淡黄色液体ノ４０ａを収量４．２　ｇ（９２％）で得た。ＴＬＣＲ，０゜ ６６　（３ニア　＝　ＥｔＯＡ／ヘキサン）　、ＩＲ（無溶媒）２９２０．　＋ ６９０．１５８０゜１４５０、１４３０．１３８０．１３００．１２００．１１ ５０．１１１０．１０７０．１０２０．９２０゜８４０、７４０．７２０　ｃｍ −’、　ＮＭＲ（ＣＤＣ１１）６９．８９　（ｓ、ｌＨ）、　７．２３　（ｓ、 ＩＨ）。 ７．１０　（ｓ、ＩＨ）、　５．２２　（ｓ、２Ｂ）、　５．２０−５．１８　 （！ＩＩ、ＩＨ）、　３．８６　（Ｓ、３Ｈ）、　３．４６　（ｓ、３Ｈ）、　 ３．３３　（ｓ、２Ｈ）、　１．９８−１．８８　（ｍ、４Ｈ）、　１．６１− １．４８　（ｍ、４Ｈ）。４０ｂについて；調製方法は４０ａに用いたものと基 本的には同じてあった。収率７５−８１％、ＴＬＣＲ，０，５６（１：４　＝　 ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、ＩＲ（無溶媒）　２９２０．１７００．１５８５．１ ４４０．１３８０．１３１０．１２００゜１１６０、１１１０．１０７０．１０ ３０．９６０．９２０．８４５．７４０．７２０　ｃ＋ｎ−’。ＮＭＲ（ＣＤＣ Ｉａ）６９．８８　（ｓ、ｌＨ）、　７．２２　（ｓ、ｌＨ）、　７．０８　（ ｓ、ＩＨ）、　５．２５−５．２２　（ｍ、ＩＨ）、　５．２１　（ｓ、２Ｈ） 、　４．１２−４．０５　（ｑ、２Ｈ）、　３．４７　（ｓ、３Ｈ）、　３．３ ６（ｓ、２Ｈ）、　２．００−１．８９　（ｍ、４Ｈ）、　１．６０−１．３８ 　（ｍ、４Ｈ）、　１．４３−１．３９　（ｔ、３４１ａ−ｂの調製。２−プロ パツール（３０ｍｌ）とＴＨＦ（１５ｍｌ）中の０℃の４０ａ（４，２ｇ、　１ ４．５　ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと２−プロパツール（１０ｍ）中の４ＮＨ Ｃ１水溶液（４０ｍｌ、　１６０　ｍｍｏｌ）を加えた。 次に、この溶液を１６時間即ち４０ａが（ＴＬＣにより）消失するまで２５℃で 撹拌した。溶液をエーテルで抽出した（５０ｍｌ　Ｘ　３）。このエーテル溶液 をＩ２０（３０ｍｌ）で洗浄し、次に乾燥し濃縮した。粗生成物をクロマトグラ フィー（３ニア　＝　ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、白色固体ノ４１ａを得 た。収量３ｇ　（８４％）　、融点１５３−１５５℃、ＴＬＣＲ，０，６０（３ ニア　＝　ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）　、ＮＭＲ（ＣＤＣＩｇ）６９．９０　（ｓ 、１８）、　７．０４　（ｍ、２Ｈ）、　５．７８　（ｓ、ＩＨ，ＯＨ）、　５ ．６８−５．６５　（ｍ、２Ｈ）、　３．９０　（ｓ、３Ｈ）、　３．４８　（ ｓ、２Ｈ）、　２．０９−２．０１　（ｍ、４Ｈ）、　１．９６−１．９０　（ ｍ、４Ｈ）。４１ｂについて；調整法は４１ａに用いたものと基本的には同じで あった。収率７６％、ＴＬＣＲ，０，３４（１：４　＝　ＥｔＯＡｃ／　ヘキサ ン）、ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）δ９．８６　（ｓ、ＩＨ）、　７．００　（ｍ、２ Ｈ）、　５．８０　（ｓ、ｌＨ，ＯＨ）、　５．７０−５．６６（＋ｎ、２Ｈ） 、　４．１８−４．０６　（ｑ、２８）、　３．４７　（ｓ、２Ｈ）、　２．０ ５−２．０２　（ｍ、２Ｈ）、　１゜９２−１．８８　（ｎ＋、２Ｈ）、　１． ６３−１．５４　（ｍ、４Ｈ）、　１．４６−１．４１　（ｔ、３）１）。 ４２ａ−ｂの調製。アンバーリスト１５　（１０ｇ）を−回でＣＨ，ＣＩ２　（ １００ｍｌ）中の４１ａ（３，３ｇ、　１３．４　ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。 混合物を２５℃で６時間撹拌した。混合物を濾過し、溶液を）１２０（１００ｍ ｌ）で洗浄し、乾燥し濃縮して、粗生成物（３ｇ）を得、次にこれをクロマトグ ラフィー（１：４　＝　ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、白色固体４２ａ　 （２，５ｇ、　７６％）を得た。ＴＬＣＲ，０，５７（１：４　＝　ｉｌ！ｔＯ Ａｃ／ヘキサン）、ＩＲ（ＫＢｒ）　２９３０．　１６９０．　１６００．　１ ４３０．　１３９０．　１３５０．　１３２５．　１２２０、１１２０．１０３ ０．９２０．８３０．８０５．７４５　ｃｍ−’。Ｎ１１ｌＲ（ＣＤＣＩ３）δ ９゜８５　（ｓ、ＩＨ）、６．９３　（ｓ、ＩＨ）、　６．８９　（ｓ、ＩＨ） 、　３．８８　（ｓ、３Ｈ）、　２．９４　（ｓ。 ２）１）、１．８６−１．６４　（ｍ、６）１）、１．５５−１．４５　（＋ｎ 、４Ｈ）　、′３ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）δ　１９１．７７、　１６０．５３． 　１５６．９０．　１３８．１９．　１２１．２５．　１．０５．６５．　１０ ２．８１゜９０．３６．５５．５８．３８．４８．３７．２３．２５．０５．２ ２．９５゜４２ｂについて；調製方法は４２ａに用いたものと基本的には同じで あった。融点１０５−１０６℃、収率８２％、ＴＩ、ＣＲ，０，５５（１：４　 ＝　ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、ＮＭＲ（ＣＤＣＩ３）６９．８４　（ｓ、ＩＨ） 、　６．９１　（ｓ、ＩＨ）、　６．８７　（ｓ、ＩＨ）、　４．１５−４．０ ８　（ｑ、２Ｎ）、　２．９５　（ｓ、２Ｈ）、　１．８６−１．６８　（ｍ、 ６Ｈ）、　１．５３−１．４５　（＋ｎ、４Ｈ）。 １．４５−１．４０　（ｔ、３Ｈ）。 ４３ａ−ｂの調製。ＡｇｚＯ（２，４ｇ、　１０．２　ｍｍｏｌ）を含む５０℃ の２ＮＮａＯＨ水溶液（３０ｍｌ）の混合液に、ＥｔＯｔ（（１ｍｌ）とＴＨＦ （５ｍｌ）中の４２ａ（ｌ　ｇ、　４．１　ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。こ の混合液を６時間、５０℃で撹拌した。混合液を濾過し、その水溶液をエーテル （５０ｍｌ）で洗浄した。次に、水溶液を０℃まで冷却して、濃塩酸溶液で酸性 にした。得られた白色析出物をエーテルで抽出し、乾燥し濃縮して４３ａの白色 固体を０．７５　ｇ（７１％）の収態を得た。ＴＬＣＲ。 ０．６２　（１：９：１０　＝ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃ１ｇ／ＥｔＯ＾ｃ）　。ＮＭ Ｒ（ＣＤＣＩｓ）δ７．１６（Ｓ、２Ｈ）、　３．８８　（ｓ、３Ｈ）、　２． ９４　（ｓ、２１（）、　１．８７−１．６５　（ｍ、６Ｈ）、　１．５５−１ ．４７　（ｍ、４Ｈ）。４３ｂについて；調製方法は４３ａに用いたものと基本 的には同じであった。融点１９０−１９２℃、ＴＬＣＲ，０，６２（１：９：１ ０　ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２／ｌ’ｔＯＡｃ）。収率６９％、ＩＲ（ＫＢｒ）３ ３００−２４００．１６７５．１５９５．１４３０、１３５０．１３２５．１２ ６５．１２１０．１１２０．１１００．１０３０．９５５．８６０．７７０、７ ４０　ｃｍ　−＋、　ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）δ７．１４　（ｓ、２Ｈ）、　４． １５−４．０８　（ｑ、２Ｈ）、　２．９５　（ｓ、２Ｈ）、　１．８６−１． ６５　（ｍ、６Ｈ）、　１．６０−１．４５　（ｍ、４Ｈ）、　１．４５−１． ４０　（ｔ、３８）。１′ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩｚ）δ１７２゜１７．１６０．０ ８．１５５．６１．１３０．１９、　１２０．５４．　１０５．３９，１０４． ７７．９０．０４，６３．８０，３８．４９，３７．２４，２５゜０９、２２． ９９．１４．８４゜Ｃ，６Ｈ２，０，の分析計算値：　Ｃ，６９，５４，Ｈ，７ ，３０、実測値：　Ｃ，６９，４０；　Ｈ，７，３５゜４４ａ−ｂの調製。水素 化ナトリウム（鉱油中５０　％、　０．５８　ｇ、　２４．２ｍｍｏ　Ｉ　）を ヘキサン（３０ｍｌ）で窒素下にて洗浄し、次に水を含まないエーテル（５０ｍ ｌ）を添加した。エーテル中（１５０ｍｌ）の４３ａ（３゜２ｇ、　１２．２　 ｍｍｏｌ）の溶液を上記混合液に２５℃でゆっくりと加えた。 混合液を２５℃、６時間撹拌し、白色析出物が得られた。混合液を８２０（５０ ｍｌ）で抽出した。水溶液を集めて凍結乾燥し、白色固体を得た（３．２　ｇ、 　９２％）。ＮＭＲ（０２０）δ７．１０　（ｓ、ＩＨ）、　６．９２　（ｓ、 ＩＨ）、　３．８５　（ｓ、３Ｈ）、　２．８２　（ｓ、２Ｈ）、　１．７０− １．５４　（ｍ、６Ｈ）、　１．４４−１．３３（ｍ、４）１）。 ４４ｂについて；調整方法は、４４ａに用いたものと基本的には同じであった。 収率７５　Ｌ　ＮＭＲ（ＤｔＯ）δ７．０９　（ｓ、ＬＨ）、　６．９０　（Ｓ 、ｌＢ）。 ４．１９−４．１２　（Ｑ、２８）、　２．８９　（ｓ、２Ｈ）、　１．７７− １．６０　（ｍ、６８）、　１．５０−１．４０（ｎ＋、４Ｈ）、　１．４０− １．３６　（ｔ、３Ｈ）。 ６−カルポキシルー４−Ｐ−ニトロフェノキシスピロ［ベンゾ５５ａ−ｅ、　ｇ 、　ｉの調製。これらの化合物の調製方法は、４４に用いられたものと基本的に は同じであった。５５ａ−ｇのＮＭＲスペクトルを以下に挙げる。５５ａ：　Ｎ ＭＲ（ＤｇＯ）δ７，２１−６．８８　（ｓ、７Ｈ）、　４．８５　（ｓ、２８ ）、　２．５６　（ｓ、２Ｈ）、　１．４３−１．０６　（ｍ、１ＯＨ）。５５ ｂ：　ＮＭＲ（０２０）δ７．１０　（ｓ、ＩＨ）、　６．９０　（ｓ、ｌＨ） 、　４゜１３　（ｔ、２Ｈ）、　２．９３　（ｓ、２Ｈ）、　１．７９−１．６ ３（ｍ、８Ｈ）、　１．５０−１．４１　（ｍ、６８）、　０．９３　（ｔ、３ Ｈ）　、　５５ｃ：　ＮＭＲ（ＤｔＯ）δ７．２０−６．８０　（ｎ＋、７Ｂ） 、　２．６１　（ｓ、２Ｈ）、　１．６０−１．１２　（ｍ、ｌ０Ｈ）。　５５ ｄ二　ＮＭＲ（ＤｔＯ）δ７，０７　（ｓ、ＩＨ）、　６．９２　（ｓ、ＩＨ） 、　４．１８　（ｔ、２Ｈ）、　３．９３　（ｔ、２）１）、　２．９６　（ｓ 、２Ｈ）、　１．６８　（ｓ、ｂ、６Ｈ）、　１．４４　（ｓ、ｂ、４Ｈ）。５ ５ｅ：　ＮＭＲ（ｏ２゜）δ８．１０−８．０７　（ｄ、２Ｂ）、　７．１３　 （ｓ、ＩＨ）、　７．１１　（Ｓ、ＩＦ＋）、　６．９８−６．９５（ｄ、２Ｈ ）、　２．６８　（ｓ、２Ｈ）、　１．７０−１．２３　（ｍ、　ｌ０Ｈ）。５ ５ｉ：　ＮＭＲ（ＤｔＯ）、　７．９０−７．８７　（ｄ、２Ｈ）、　７．１４ 　（ｓ、ＩＨ）、　７．１２　（ｓ、ＩＨ）、　７．００−６．９７　（ｄ、２ Ｈ）。 ２．７６　（ｓ、２Ｂ）、　１．７０−１．２７　（ｍ、ｌ０Ｈ）。５５　ｇ： 　ＮＭＲ（０２０）δ７．４５−７．４２　（ｄ、１）１）、　７．２３−７． ２０　（ｍ、２Ｈ）、　２．９３　（ｓ、２Ｈ）、　１．６５　（ｓ、ｂ、６Ｈ ）、１．４１　（ｓ、ｂ、４Ｈ）　、　１３ｃ　ＮＭＲ（０２０）δ１７７．６ ３．１６０．０５．１３９．２５．１３３．６８．１２７．８３．１２４．６０ ．１１２．０９．９３．６４．４２．４５．３８．９６．２７．１５゜２５、３ ７゜ ７、実施例 シアニソール（９ａ） 化合物７の３−メトキシメトキシアニソールは、以下の方法により９６％の収率 で得られた。無水アセトニトリル中の無水炭酸カリ（Ｋ２ＣＯ３；　２．０当量 ）の微細粉末と３−メトキシフェノール（１，０当量）の混合液を窒素下Ｏ℃で １５分間撹拌した。反応ｐＨが約６以上にあることを確かめるために、フェノー ル基質１グラムにつき、１００　ｍｌのアセトニトリルを用いた。触媒量の１８ −クラウン−６（０゜１２当量）を添加し、混合液をさらに１５分間θ℃で撹拌 した。次に、純粋なりロロメチルメチルエーテル（１，５当量）をゆっくりと入 れた。懸濁液を気温まで高めて、６時間撹拌した。この後に混合液を０℃まで再 冷却し、Ｋ２ＣＯ１，１８−クラウン−６、およびＣＨ，ＯＣＨ、ＣＩのそれぞ れの半分の量を加えた。さらに４時間室温で撹拌の後に、懸濁液を濾過して、濾 液を減圧下で濃縮した。残留物をエチルエーテル（Ｅｂｏ）に溶解し、５％水酸 化ナトリウム（３Ｘ５０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で濃縮し、減圧下に蒸留した。 化合物７は透明な無色の液体として得られた。沸点４５８Ｃ（０，１５ｍｍ　Ｈ ｇ）　、’ＨＮＭＲ（９０ＭＨｚ、　ジュテリオクロロホルム）　：　ＴＭＳか らダウンフィールドｐｐｍで、δ７，１６　（ＩＨ，ｍ）、　６．６１　（３Ｈ ，ｍ）、　５．１６　（２Ｈ，ｓ）、　３゜７９　（３Ｈ，ｓ）および３．４９ 　（３Ｈ，ｓ）。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）：　ＴＭＳからダウンフィールドｐ ｐｍて、δ　１６０．５．　ｍ　１５８．２．１２９．７．１０８．２．１０７ ．３、１０２．５．９４．３．５５．９および５５．　ｌ。 ｎ−ＢｕＬｉ　（１，１当量）をゆっくり化合物？　（１，０当量）とＴＭＥＤ Ａ（１，１当量）のＴＩ（Ｆ溶液に０°Ｃで窒素雰囲気下に加えた。溶液を室温 で２〜５時間撹拌し、次に一７８℃に冷却した。ヨウ化第−銅（１，２当量）を −回ですべて加えた。明るい灰色懸濁液を一４０℃まで温め、１．５時間撹拌し た後に緑−灰色になった。その銅試薬を一７８℃に冷却し、新しく調製した臭化 アリル６ａ（１，３当量）のＴＨＦ溶液と反応させた。この反応混合液を徐々に 気温まで温め、７２時間まで撹拌した。混合物を冷却し、水層が無色になるまで 炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液で洗浄した。充填された炭酸カリウムに有機層 を通して乾燥して、減圧下に濃縮し、暗い橙色の油状物を得た。この粗生成物を 減圧下で蒸留し、化合物９ａを収率６９％を得た。沸点１０５℃（０，１５ｍｌ 　Ｈｇ）　、Ｃ＋ａＬ□Ｏｓの分析計算値：Ｃ，７３，２５，Ｈ，８，４５、実 測値：　Ｃ，７３，１３，Ｈ，８，５０゜’ＨＮＭＲ（９０ＭＨｚ、　ＣＤＣＬ ｓ）：　ＴＭＳからダウンフィールドｐｐｍで、δ７．０３　（ＩＨ，ｔ、　！ −＝　８　Ｈｚ）、　６．７１　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ　＝　８　Ｈｚ）、　６．５ ４　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ　＝　８　Ｈｚ）、５．２３　（ＩＩＬブロードｓ）、　 ５．１３　（２Ｈ，ｓ）、　３．７７　（３）１．ｓ）、　３．４３　（３Ｈ， ｓ）、　３．３２　（３８，ブロードｓ）、　１．９５　（４Ｈ，ｍ）および１ ．５７　（４Ｈ，ｍ）。 ＣＮＭＲ（７５ＭＨ２，ＣＤＣｌ５）：　ＴＭＳからダウンフィールドｐｐｍで 、δ１５８．５．１５５．８．１３６．３．１２６．７．１２０．０．１１８． １．１０７．０．１０４．６．９４．３、５５．８　（２Ｃ’ｓ）、　３０．９ ．２８．８．２５．３．２３．１および２２．６゜ＩＲ（無溶媒）　２９４０． ２８４０．　１５９５．　１４７０．　１４４０．　１２６０．　１１６０．　 １１０５．　１０７０および１０２５　ｃｍ　□１０ 化合物９ａを以下の方法により４位でメタレート化した。９ａ（１゜０当量）と ＴＭ［！ＤＡ（１，１当量）のヘキサン溶液をｎ−ＢｕＬｉ（１，１当量）を窒 素雰囲気下０℃で徐々に加えたヘキサン溶液で処理した。溶液を室温で３時間撹 拌して、次に一７８℃に冷却した。 次に、上記の経路により調製したアリールリチウム試薬Ｌｉ−９ａの一７８℃溶 液に乾燥二酸化炭素気体を０．５時間ノくブリングした。 ０℃でのこの反応を実施は、得られる収量を半分にした。気体の安定な流れを保 ちながら、この混合液を室温まで温めた。混合液を水中に注き、５％水酸化ナト リウム水溶液で数回抽出し濃塩酸で酸性化してｐＨ１とし、次にエーテル中に抽 出した。粗精製物をＥ【２０中にバック抽出し、−緒にした有機層を硫酸マグネ シウム上で乾燥した。溶媒を蒸発させ、残留物を最小量の沸騰エーテル中に再溶 解した。温かい溶液をわずかに冷却し、次にヘキサンを曇り点まで加えた。次に 、混合物をフリーザーに放置した。１６１−１６３℃の融点を持つ黄色がかった 白色の固体を回収したく６６％収率）　、　Ｃ，、）ｌ、、０．の分析計算値： 　Ｃ，６８，６９：　Ｈ，６，９２、実測値：Ｃ９６Ｂ、７５；　Ｈ，６，９５ 、’ＨＮＭＲ（９０Ｍｌ（ｚ、アセトン−ｄｓ）：　ＴＭＳからダウンフィール ドｐｐｍで、δ７．８１　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ　＝　９Ｈｚ）、　６．６２　（Ｉ Ｈ，ｄ、　Ｊ＝　９Ｈｚ）、５．２６　（ＩＨ，ブロードｓ）、　４．２６　（ ２８，ブロードｓ）、　３．９０（３Ｈ，Ｓ）、　３．２９　（２）１．　ブロ ードｓ）、　２．０１　（４）１．　ｍ）、および１．５７　（４Ｈ。 ｍ）。”ＣＮＭＲ（アセトン−ｄ、）δ　１７３．０．　１６４．３．　１６２ ．１　（２Ｃ’ｓ）、１３６．５．１３０．６．１２１．０．１１５．９．１０ ６．５　（２Ｃ’ｓ）、　１０３．３．５６．３．３０．０゜２９．４．２５． ８．２３．８．２３．２　（２Ｃ’ｓ）　、　ＩＲ（ＫＢｒ）　１６５０．１６ １０．１５００゜１４５５、１２６５．１１８５および１０９０　ｃｍ　−’。 上記セクション７．２に記載の方法により、その場（ｉｎ　５ｉｔｕ）で調製し たアリールリチウム試薬Ｌｉ−９ａの溶液を＝１２℃まで冷却して、一度ですべ て加えられた純粋なＮ、Ｎ“−ジメチルホルムアミド（１，５当量）でこの溶液 を処理した。混合液を室温で３時間撹拌した。次に、その混合液を水の中に注ぎ 、塩化ナトリウムで飽和し、Ｅｔ２０で抽出した。有機層を一緒にし、乾燥しく Ｍｇ５Ｏｔ）、減圧で濃縮し、その残留物をエーテル−ヘキサンから再結晶した （セクション７．２を参照）。生成物は、カラムクロマトグラフィー（シリカ、 エーテル／ヘキサン溶出液）により精製した。融点４８−４９℃、Ｃ，、）Ｉ、 　、０３の分析計算値：　Ｃ，？３．１５．　ｌ（，７，３７、実測値：Ｃ，７ ３，２２；　Ｈ，７，４０、’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：　ＴＭＳからダウンフ ィールドｐｐｍで、δ　１１．４２　（ＩＨ，ブロードｓ）、　９．６４　（Ｉ Ｈ，ｓ）、　７．３３　（ＩＩ（、ｄ）、　６゜５１　（ＩＨ，ｄ）、　５．２ ３　（ＩＨ，ブロードｓ）、　３．８３　（３Ｈ，ｓ）、　３．２６　（２Ｈ， ブロードｓ）、　１．９６　（４Ｈ，ｍ）および１．５６　（４Ｈ，ｍ）　、　 １３ＣＮＭＲ（ＣＤＣＩａ）：　ＴＭＳからダウンフィールドｐｐｍで、δ　１ ９４．７．　１６４．６．　１６１．３．　１３５゜５、１３３．８．１２０． ６．１１５．９．１１５．６．１０３．１．５５．９．２９．９．２８．８．２ ５．２．２３．０および２２．４゜ＩＲ（ＫＢｒ）　２９３０．２８４０．１６ ２５．　１４９５．１２５５゜１１００、８００および６４０　ｃｍ−’。 化合物１２ａ（セクション７．２）のベンゼン溶液を、乾燥アンノ（−リストイ オン交換樹脂（基質１ｇあたり、１１０℃高減圧下で乾燥のおよそ３〜４ｇ）を 一度に加えて処理した。その混合物を室温で２４時間まで撹拌し、次に濾過した 。樹脂ビーズを新しいベンゼンと塩化メチレンで完全に洗浄した。濾液を一緒に して、水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧にして濃縮した。生成物 １１ａをカラムクロマトグラフィーにより８５％の収率て精製した。融点１９２ ４９４℃、Ｃｌ５ＨＩ８０４＋７）分析計算値：　Ｃ，６８，６９；　ｌ（，６ ，９２、実測（ｉｉ　：　Ｃ，６８，５２，Ｈ，６，９９、’ＨＮＭＲ（ＣＤＣ ｌ２）：　ＴＭＳ　カラダウンフィールドｐｐｍで、δ　約１２．０に中心のあ るブロードロール（ＩＨ）。 ７．８５　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ　＝　９　Ｈｚ）、　６．５０　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ 　＝　９Ｈｚ）、　３．８９　（３Ｈ，ｓ）、　２．９４　（２Ｈ，ｓ）および １．６９　（１０８，ブＯ−Ｆｍ）。”ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）：ＴＭＳからダ ウンフィールドｐｐｍで、１６４．５．１６０．６．１５８．７．１３２．７゜ １１３．６．　１０６．２．　１０４．５．９４．２．５５．７．３８．０．３ ７、ｌ　（２Ｃ’ｓ）、　２４．９および２３．２　（２Ｃ’ｓ）。図１は赤外 （ＫＢｒ）スペクトルを示す。ＩＲ（ＫＢｒ）　１６６０．１６１５．１４４５ ．１４３５．１３８５および１１００　ｃｍ　−’ｏ　４　Ｎ塩酸／イソプロパ ツール溶媒混合物（５０１５０）中またはＴＨＦ中の三フッ化ホウ素エテレート 溶液中で、フェノール前駆体を加熱することにより環状化を達成することもでき る。しがし、後者溶液中での環状化方法は、１２ａ以外のフェノール前駆体には 推奨されない。 フェノール前駆体１２ｂを、前セクションに記載したように、アンバーリスト樹 脂で処理した。生成物１１ｂを単離してカラムクロマトグラフィーにより精製し た（８３％収率）。融点６２−６３℃、Ｃ，５Ｈ，，０，分析計算値：　Ｃ，７ ３，１５，Ｈ，７，３７、実測値：　Ｃ，７３，２２゜９　Ｈｚ）、　６．４６ 　（ＩＨ，ｄ、Ｊ　＝　９　Ｈｚ）、　３．８８　（３Ｈ，ｓ）、　２．８８　 （２Ｈ，ｓ）。 １．４−２．０　（ＩＯＨ，ブロードｍ）。 当業者によく知られている金属水素化還元または他の手段により、化合物１１ｂ を容易にｌｉｅに変換することができる。 ジカルボキシル−４−メトキシスピロ［ベンゾフラン−２（３）−シクロヘキサ ンコ　（６６） ６５の調製：　ヘキサン（２，２０ｍｌ、　４．９５＋ｎｍｏｌ）中のｎ−ブチ ルリチウム溶液を、−２０℃のＴＨＦ（６１１１１）中のＮ、Ｎ、Ｎ’トリメチ レンジアミン（０，６５ｍｌ、　５．０９　ｍｍｏｌ）の溶液（ＣＣＩＩ／Ｃ０ ２）に加えた。３０分後、ＴＨＦ（４ｍｌ）中の１ｌｂ（１１７０ｍｇ、　４． ７６　ｍｍｏＬ上記セクション６゜８に記載のように調製されたもの）を滴下し 、３０分後にｎ−ＢｕＬｉ（６，３５ｍｌ、　１４．２８　ｍｍｏｌ）を滴下し た。得られたシステムを一２０℃で２４時間保ち、ＤＭＦを加えた（０２．２０ 　ｍｌ、　２８．５６　ｍｍｏｌ）。 ２４時間の反応時間の後に、反応生成物をエーテル（４Ｘ５０　ｍｌ）と塩溶液 （５０ｍｌ）に分配して、その抽出物のクロマトグラフィーにより、６５　（１ １３５ｍｇ、　４．１４　ｎ＋＋ｎｏｌ、　８７　Ｄの固体を得た。融点１２９ −１３１　℃（ヘキサン−エーテルから再結晶化）　；　ＩＲ（ＫＢｒ）　：　 ３０００−２８４０．１６７０．１６００．１４７０．１４２５．１３９０．１ ３２０．１２８０．１２６０．１２１０、　１１３０．１０３０．８９０．８５ ０．７７０．７００および６２０　ｃｔｎ　’　；　’ＨＮＭＲ：１．４０−１ ．９３　（ｓ、ｌ０Ｈ）、　２．９３　（ｓ、２Ｈ）、　３．９４　（ｓ、３Ｈ ）、　７．０４　（ｓ、ｌＨ）。 １０．３５　（ｓ、ＩＨ）および１０．７０　（ｓ、ＩＨ）；　１３ＣＮＭＲ： 　２２．９．２４．９．３７．２゜３７．７．５６．０．９３．０．１０３．６ ．１１３．７．１２０．２．１３８．７．１６０．３．１６４．７゜１８８．６ および１９２．６　、元素分析：計算値Ｃ＝　７０．０６．　Ｈ＝　６．６１　 。 実測値Ｃ＝　６９．８４．　Ｈ＝　６．６５゜６８の調製：　ＴＨＦ（１０ｍｌ ）および溶解硝酸銀（３７７７ｍｇ、　２２．２２　ｍｍａｔ、　１．０５　ｅ ｑ、）を含む水（７ｍｌ）中の化合物６５（２９００ｍｇ、　１０５８ｍｍｏ　 ｌ　）の撹拌溶液に、水酸化カリウムの４Ｎ溶液（５２，９２ｍｍｏｌ）を室温 で滴下した。その反応系を直接光から保護した。２時間室温で撹拌した後に、固 体を濾過して蒸留水で十分に洗浄した。２ＮのＨ２ＳＯ，をｐＨ３まで加え、そ の反応生成物をエーテル（３ＸＩ５０ｍｌ）で抽出し、塩溶液（２Ｘ２５　ｍｌ ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ，）した。 反応生成物のクロマトグラフィーにより、出発物質（１８２３ｍｇ、　６３％） 、化合物６８（３２６ｍｇ、　１．１２　ｍｍｏｌ、　１１％、２９％補正収率 ）および化合物６６　（６１４ｍｇ、　２．０１　ｍｍｏｌ、　１９％、　５１ １１ｉ）を回収することができた。化合物６８：融点・１４８−＋５０°Ｃ（ヘ キサン−エーテルより回収）　；　ＩＲ（ＫＢｒ）：　３４４０．３０００−２ ８４０．１７４０．１６３０．１４５０，１３４５、１２９０．１２７０．１１ ５０．１１０５．１０１０．９１０．８６０．７７０．６９０ｃｍ−’；’ＨＮ ＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：　１．３０１．５２　（ｍ、４Ｈ）、１．６２−１．８ １　軸、６８）、　２．９１（ｓ、２Ｈ）、　３．８７　（ｓ、３Ｈ）、　６． ５５　（ｂｓ、ＩＨ）、　６．８５　（ｓ、ｌＨ）および７．９５（ｂｓ、］Ｈ ）：　”ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ）＋　２２．５２．２４．４７．３６．５７． ３７．５６．５５゜８６、９１．９０．９６．３３．９８．３４．１２０．６０ ．１２１．４８．１２８．９９．１５４．０３．１５８．２８．　１６８．４２ ；　ＭＳ　（ｅ／ｍ、　％）：　２９０　（Ｍ＋、　８９）、　２８９　（７２ ）、　２７２　（１００）、　２７１　（８８）、　２４４　（６５）、　２１ ５　（７８）、　１９２　（９８）、　＋９１　（９５）、　１９０（６５）、 　１６５　（９３）、　１６４　（８２）、　７９　（８９）。元素分析：計算 値Ｃ＝６６．２０．　Ｈ＝　６．２５；実測値Ｃ＝　６６．１９．　Ｈ＝　６． ２６゜６６の直接の調製Ｈｚタノール（５ｍｌ）中の化合物６５　（１５３ｍｇ 。 ０．５６　ｍｍｏｌ）の溶液に、蒸留水（Ｉ　ｍｌ）中の硝酸銀（２２２ｍｇ、 　１．３０ｍｍｏ　Ｉ　）の溶液を加え、続いてＫＯＨ（３ｍｌ、　２．９９　 ｍｍｏｌ）を加えた。この系を遮光し室温で一晩撹拌して、次にこれを濾過し、 残留物を水で注意深く洗浄した。水相を一緒にし、これをエーテルで抽出し、次 にその水相を酸性にしてがらエーテル（３Ｘ２５　ｍｌ）で抽出した；−緒にし た有機相を乾燥し、クロマトグラフィーにかけて、６６　（１５６ｍｇ、　０． ５１　ｍｍｏｌ、　９１　Ｘ）を白色固体として得た。融点１８８−１９０℃（ アセトンから再結晶）　；　ＩＲ（ＫＢｒ）：　３５００−２４００．３０００ −２８５０、１７００．１６１０．１４１０．１３３０．１２９０．１１３０． １０４０．１０００．９３０．８５５、７５０および６６０　ｃｍ　’：　’Ｈ ＮＭＲ：アセトンｄ６）：　１．４０−１．９０　（ｍ、ｌ０Ｈ）、　２．９３ 　（ｓ、２ｆ（）、　３．９１　（ｓ、３Ｈ）および６．９５　（ｓ、２Ｎ）； 　”ＣＮＭＲ：（アセトンｄｓ）：　２３．５．２５．６．３７．６．３８．７ ．５６．１．９１．７．　１０５．１゜１１１．６．１１８．８．１３３．０． １５７．８．１５８．８．１６７．２および１８６．１　、元素分析二計算値Ｃ ＝　６２．７４．　Ｈ＝　５．９２．実測値Ｃ＝　６２．６６、　Ｈ＝　６゜（ 来貢以下余白） ７．７．一般的方法 融点はトーマスフ−バー装置を用いて測定し、補正は行なってイナい；赤外スペ クトルは、パーキンエルマー２８１Ｂスペクトロフオトメーターを用いて得られ 、’ＨＮＭＲスペクトルは、パリアンＥＭ３９０装置により９０　ＭＨｚか、パ リアンＶＸＲ３００スペクトロメーターにより３００　ＭＨｚで、特に他の溶媒 を明記しないかぎりジュテリオクロロホルム中で記録した。”ＣＮＭＲは、パリ アンＶＸＲ３００スペクトロメーターを用いて、７５．４　ＭＨｚで記録した。 内部基準として用いた、テトラメチルシランからダウンフィールドのｐｐｍです べてのシグナルを記録している。シグナルの多重度は、以下のように略す・Ｓ＝ ニシンブレットｄ＝ダブレット、ｔ＝ニトリブレットｑ＝カルチット、ｍ＝マル チプレット、ｂ＝ニブロードシグナル低分解能マススペクトルは、７０　ｅＶで 、フィニガン３２２１−Ｆ２００スペクトログラフから得られた。元素分析は、 アトランティックミロラボ社（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ、　ＧＡ）が行なった。　ＨＲ ＭＳは、マサチューセッツ・インスティチュート・オブ・テクノロジーにて得ら れた。 用いられたすべての溶媒と薬品は良品質であった。ある場合において、それらの いくつかは、それ以前に確立した方法に従って精製および／または乾燥した。す べての反応は、乾燥窒素雰囲気下で実施した。カラムクロマトグラフィーは、Ｍ Ｎシリカゲル６０を用いて、大気圧下で、異なる溶媒系（ヘキサン−エーテル、 ヘキサン−酢酸エチル）を用いて、この溶媒系においては、第二の溶媒の量を増 加させながら、これを一定時間毎に第一の溶媒に加えた、またはクロマトトロン で行った。１％酢酸をカルボン酸のクロマトグラフィーの間に添加した。 ８、ジおよびトリ置換されたスピロ［ベンゾフラン−２（３８）−シフ実施例７ の４つの置換スピロベンゾフラン化合物および実施例８のジ置換スピロベンゾフ ラン化合物を試験して、補体仲介のヒツジ赤血球（５ＲＢＣ）溶解に対するそれ ら化合物の抑制能力を調べた。試験する化合物は、０．１ＭのＨｅｐｅｓ緩衝液 （０，１５Ｎ　ＮａＣ１，ｐＨ７，４）中に希釈し、■底のマイクロタイタープ レートのそれぞれのウェルに５０μｌを加えた。補体の　源として用いるヒト血 清をＨｅｐｅｓ緩衝液でｌ：　１００に希釈し、その５０μｌをそれぞれのウェ ルに加えた。次に、抗ヒツジ抗体を有する市販のヒツジ赤血球（Ｄｉａｍｅｄｉ ｘカタログＮｏ、　７８９−００１）を受け取った通りに用い、ｉｏ。 μｍ／ウェルで加えて、溶血に導く補体経路を開始させる。プレートを６０分間 ３７℃でインキュベートし、次に５００Ｘｇで１０分間遠心した。上清を除去し 、平底のマイクロタイタープレート中に入れた。溶血の程度は、４１０　ｒｖ＋ の試料吸光度の関数として測定した。赤血球のみを含有する試料の吸光度Ａ０を 引いたヒト血清のみを含有する赤血球試料の吸光度Ａ、から、最大吸光度（最大 溶血に対応する）のＡ、、１を得た。従って、Ａ、、、、＝Ａ、−Ａ。。ヒト血 清と抑制化合物の両者を含む赤血球試料の吸光度と抑制化合物のみを含む細胞試 料の吸光度との差を、Ａ、８３．１．とじて定義した。抑制（ＩＨ）は、分数（ Ａｍａｗ　Ａ　５ｔａｐｌｅ）　／　Ａｍａｗとして示し、ＩＨ，。をＩＨ＝　 １／２の値をもたらすのに必要な抑制化合物の濃度として定義した。溶血アッセ イの結果を図１と表Ｖおよび表Ｖｌに示す。 表■ ６．７−ジ置換−４−メトキシスピロ［ベンゾフラン−２（３１（）−シクロヘ キサン］による溶血の抑制 化合物　平均　ＩＨ６ｏ（±ＳＤ）”　ｎ＝Ｍ １１ａ　１．３３０　（±０．４９０）　１０４４ａ　０．５３２　（±０．１ ９３）　２９６２　１．６７０　（±０．１５３）　３６６　０．８００　（± ０．３５６）　３６８　０．１６４　（±０．０７６）　？に７６ＣＯＯＨ０１ ５７０（±０．１７０）　９°０．５の溶血抑制値を得るのに必要な化合物の濃 度（士標準偏差）（来貢以下余白） 表Ｖｌ 化合物　平均　ＩＨｓ。（±ＳＤ）”　ｎ＝Ｍ ３１ａ　１．４５　（±０．２１）　２４４ａ　０．５３２　（±０．１９３） 　２９４４ｂ　Ｏ，５８０（±０．２１６）　３５５ａ　２．５３　（±１．０ ０　２ ５５ｂ　Ｏ，４３０１ ５５ｃ　Ｏ，２８０（±０．０１４）　２５５ｄ　＞２．８　１ ５５ｅ　Ｏ，３０５（±０．０４９）　２５５ｇ　２．３２０　（±０．０９９ ）　２５５　ｈ”　０．３２０　（±０．０５６）　９５５３　１．４５　（± ０．４４）　２に７６ＣＯＤＨ０，５７０（±０．１７０）　２°０．５の溶血 抑制の値を得るのに必要な化合物の濃度（士標準偏差）。 ”　４−ｐ−アミノフェノキシカルボキシスピロ［ベンゾフラン−２（３Ｈ）− シクロヘキサン］。 図１および表Ｖに示した化合物６２．６６および６８にょる溶血の抑制を比較す ることにより、ベンゾフラン環の６位および７位の置換基の特別な配置が、抗溶 血活性に重要であることが理解できる。 表ｖ１に示した４位の置換系列のＩＨ，、値（例えば、５５ｃ　、５５ｅおよび ５５ｈの値）を比較することにより、抗溶血活性の向上が、４位のＲ置換基の最 善の選択を通して得ることもできる。さらに、いくつかの化合物（例えば、特に 、化合物５５ｃ　、５５ｅ　、５５ｈおよび６８を参照）は、Ｋ７６ＣＯＯＨよ りも補体仲介溶血の抑制により有効である。４位の最適な置換基は、６位と７位 の最適なペアーの置換基と組み合わされて、さらに効力のある補体抑制剤になる と予想可溶性組換えヒト補体リセブタータイプｌ　（ｓｃＲｌ）は、古典補体活 性化と代わりの補体活性化の両方を抑制することがインビトロアッセイで示され ている（国際特許公報ＷＯ３９１０９２２０およびＷＯ９１１０５０４７（とも にＴｈｅ　Ｈｕｍａｎ　Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”と題されている） およびＷｅｉｓｍａｎ　ｅｔ　ａｔ、、　１９９０．５ｃｉｅｎｃｅ、　２４９ ．１４６−１５１）。特に、５ｃＲ１は、補体仲介ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）溶 解を抑制し、特定のアッセイ条件に依存して０．１から１．ＯｎＭまでの範囲の 濃度で５０％の抑制が観察されている（Ｗｅｉｓｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、、　１ｂ ｉｄ、）。 スピロベンゾフラン−２（３Ｈ）シクロヘキサンのあるものは、インビトロアッ セイで補体を抑制することが示されている（上記のセクション６．７および８を 参照）。具体的には、６−カルポキシルー７−ホルミルー４−メトキシスピロ［ ベンゾフラン−２（３１（）シクロヘキサン］の化合物（ここでは化合物６８と する）は、補体仲介のヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）溶血を抑制することが示され、 １６４±７６μＭの化合物濃度で５０％抑制が観察された（上記のセクション８ の表Ｖを参照）。 ５ｃＲ１と化合物６８の両者の組み合わせの補体抑制能の影響を評定するために 、これらの抑制剤の組合せを５ＲＢＣ溶血アツセイで評価した。加えた５ｃＲ１ の非存在下で、６８の濃度を変化させた５ＲＢＣ溶血アツセイの結果を図２に示 す（白の四角）。さらに、化合物濃度の関数として、５ｃＲ１の２２０　ｎｇ／ ｍｌの一定濃度での溶血の抑制も示している（黒の四角）。６８が存在しない場 合、５ｃＲ１はこの濃度で溶血を３０％だけ抑制する（ｙ切片値、黒の四角）。 図から分かるように、６８の低い濃度において（＜　２５０μＭ）、抑制効果は 相乗効果を示して、個々の活性の単純な相加よりも高いように思わる。 例えば、１１μＭの化合物６８のみは３％の抑制をもたらし、２２０　ｎｇ／ｍ ｇの５ｃＲ１のみは３０％の抑制をもたらすが、これらの２つを同じ濃度で組み 合わせてみると、５４％の抑制がもたらされる。グラフからも分かるように、よ り高い６８の濃度（＞　７００μＭ）において５ｃＲ１と組み合わせると、加わ った効果よりも小さくなる。６８の低い濃度における明白な相乗効果とより高い 濃度における競合的効果の説明は、現在さらに研究されている。 図３は、加えた化合物６８の欠如下および存在下で、溶血の抑制を５ｃＲ１濃度 の関数として示している。化合物６８の欠如下および存在下（４３μＭ）では、 溶血の５０％抑制に必要とされる５ｃＲ１の濃度は、それぞれ２３０　ｎｇ／ｍ ｌおよび１００　ｎｇ／ｍｌである。従って、ＣＲＩの補体溶血の抑制の明らか な効能は、４３μＭの化合物６８の存在下でおよそ２倍となる。 本実施例は、インビボでの超急性の拒絶に対するシクロスポリンＡと５ｃＲ１の 組合せ投与の効果を評価するために、ルイスラット受容動物を公知のＡｃｔ皮膚 移植により感作するＡＣＩ−ルイスラット心臓移植である感作同種移植の確立し たモデルを使用するも感作された受容動物に対する心臓の同種移植片の移植は、 すでに記載の方法（Ｐｒｕｉｔｓｓ　＆　Ｂｏｌｌｉｎｇｅｒ、　１９９１．　 Ｊ、　Ｓｕｒｇ、　Ｒｅｓ、　５０：３５０−３５５）により行なった。簡単に 述べると、ルイスラットに３回連続してＡｃｔラット皮膚の移植を行い、Ａｃｔ に特異的な高い血清力価の抗体を生じさせる。次に、これらの過剰感作したルイ スラットに、異所性Ａｃｔ心臓同種移植を行なった。ｉｏ　ｍｇ／ｋｇ／日のシ クロスポリンＡの筋肉内への投与は、移植の２日前に始めて、移植拒絶時まで続 けた。移植の再潅流の直前に、５ｃＲ１を１５　ｍｇ／ｋｇで静脈内ポーラスと して投与した。コントロールの動物は、５ｃＲ１で処置したグループの動物と同 じ容積のリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）を投与した。再潅流後の最初の３０分間、心 臓の同種移植片を視覚的に評価し、続いて拒絶まで１時間毎に腹腔触診により評 価した。 拒絶は心臓の移植片の収縮の完全停止として定義され、直接的な目視と組織学的 検査により確認された。 表Ｖ１１に、個々の動物に対する同種移植片の生存期間（時間）と多様なグルー プの平均と平均の標準誤差（ＳＥＭ）を示す。５ｃＲ１のグループは、コントロ ールグループよりも約１０倍長い移植生存時間を示した。これは３　ｍｇ／ｋｇ というより低い５ｃＲ１投与量の同じモデルで以前に観察された著しい延長と一 致する（Ｐｒｕｉｔｔ　＆　Ｂｏｌｌｉｎｇｅｒ、　１９９１、上記）。シクロ スポリンＡグループは、移植片生存の可能な延長を示唆する変動する結果を示し た。同じモデルにおける初期の研究は、シクロスポリンＡ　（１０ｍｇ／ｋｇ／ 日；移植の日から始めて拒絶まで連続して筋肉内投与）が、コントロールよりも 著しく長い移植片生存を示したが、他方、低い投与量（５ｍｇ／ｋｇ／日）を除 いて同一のものは、そうした生存が示されなかった（Ｋｎｅｃｈｔｌｅ　ｅｔ　 ａｌ、、　１９８５　Ｊ、　Ｈｅａｒｔ、　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、　４：５４ １−５４５）。 シクロスポリンを含む単一の治療グループ内の予期されない結果の変動が、この モデルで、例えば全リンパ系への照射と組み合わせたときに既に報告されている （Ｈａｒｌａｎｄ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８９　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、　Ｐｒ ｏｃ、　２１：１１１８−１１１９）。表Ｖ１１に示されているように、シクロ スポリンと５ｃＲ１とを組み合わせた投与は、５ｃＲ１処置のみよりも明らかに 長い移植片生存時間をもたらした。シクロスポリンと５ＣＲ１の組み合わせによ る移植片生存時間は、「シクロスポリンのみ」を越える向上を示唆しているが、 後者グループでの変動は大きい。 従って、５ｃＲ１とシクロスポリンとの組み合わせは、どちらか一つの化合物の 投与に比べて向上をもたらすものである。 （来貢以下余白） 表Ｖ１１ 全長のＣＲＩタンパクをコードするプラスミドｐｉＡＢＣＤ　（ｐｃＲｌ−ｐｉ ＡＢＣＤと命名）を有する大腸菌株ＤＫＩ／Ｐ３は、１９８８年３月３１日にイ リノイ州のベオリアの農業研究培養物収集所［ｔｈｅ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ ｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ（ＮＲＲＬ）］ に寄託番号Ｂ−１８３５５で寄託された。 可溶性ＣＲ１分子をコードするプラスミドｐＢｓｃＲ１ｃ／ｐＴｃｓｇｐｔクロ ーン３５．６を有するチャイニーズハムスター卵巣細胞系ＤＵＸ　ｅｌｌは、１ ９８９年３月２３日のメリーランド州ロクビルのアメリカン・タイプ・カルチャ ー・コレクション（ＡＴＣＣ）に寄託番号ＣＲＬ　１００５２で寄託された。 本実施例および寄託された微生物は、本発明のいくつかの側面の一つの記載を意 図するものであり、機能的に同等などんな実施態様も本発明の範囲に入るために 、本実施例および寄託された実施態様により、その範囲が限定されるものではな い。実際、ここに示し記載したものに加えて、本発明の多様な修飾が、前記記載 および添付の図面から当業者には明らかとなるであろう。そのような修飾は、添 付の特許請求の範囲内に入ることが意図されるものである。 多様な文献をここに挙げたが、それらの開示はすべて参照により本明細書中に編 入されるものである。 囚 嗣 梠 燵 国際調査報告 Ｄ＃ｔｌＬｌ＃ｅｌ　Ｒ１１１＋１０ｒＪｌ　ｆｏｒ　Ｌａｃ〆　：１　ｕｎｉ ｔｙ　ｕミ９１／ｉ＋９３Ｇ＠フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　４５１０６　 ８４１５−４ＣＩ

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）補体の少なくとも１つの作用を阻害し得る生物学的化合物；および （Ｂ）免疫抑制作用、補体阻害作用または抗炎症作用を示し得る非タンパク質有 機化合物； を含む組成物。
2. ２．生物学的化合物がＳＣＲまたはその誘導体を有する、請求項１記載の組成物 。
3. ３．前記組成物が補体阻害作用を示し、当該作用が（１）赤血球の補体仲介溶解 の阻止； （ｉｉ）Ｃ５ａまたはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇの形成の阻止；あるいは （ｉｉｉ）Ｃ３ａまたはＣ３ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇの形成の阻止；により証明され る、請求項１記載の組成物。
4. ４．生物学的化合物がＣＲ１、ＣＲ２、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｉ因子、Ｈ因子および ＤＡＦより成る群から選ばれる、請求項１記載の組成物。
5. ５．生物学的化合物がＣＲ１またはそのフラグメントもしくは誘導体である、請 求項１記載の組成物。
6. ６．生物学的化合物がＣＲ２またはそのフラグメントもしくは誘導体である、請 求項１記載の組成物。
7. ７．生物学的化合物がトランスメンブラン領域を実質的に欠いている可溶性レセ プタ−である、請求項５または６記載の組成物。
8. ８．血栓溶解剤またはその繊維素溶解活性フラグメントもしくは誘導体をさらに 含む、請求項１記載の組成物。
9. ９．血栓溶解剤が組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナ−ゼ、およ びウロキナ−ゼより成る群から選ばれる、請求項８記載の組成物。
10. １０．非タンパク質化合物が抗炎症化合物、代謝拮抗物質、抗有糸分裂剤、シク ロスポリン様化合物およびマクロライド系物質より成る群から選ばれる、請求項 １−８のいずれか１つに記載の組成物。
11. １１．非タンパク質化合物がスピロベンゾフランである、請求項１記載の組成物 。
12. １２．スピロベンゾフランが６−カルボキシ−４−フェノキシスピロ〔ベンゾフ ラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン〕、６−カルボキシ−４−ｐ−ニトロフェノ キシスピロ〔ベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン〕、４−ｐ−アミノフ ェノキシ−６−カルボキシスピロ〔ベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン 〕、６−カルボキシ−７−ホルミル−４−メトキシスピロ〔ベンゾフラン−２（ ３Ｈ）−シクロヘキサン〕、６−カルボキシ−７−ホルミル−４−フェノキシス ピロ〔ベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン〕、Ｋ７６、およびＫ７６　 ＣＯＯＨより成る群から選ばれる、請求項１１記載の組成物。
13. １３．非タンパク質化合物に共有結合で結合された生物学的化合物から成る分子 であって、生物学的化合物が補体の少なくとも１つの機能的作用を阻害すること ができ、そして非タンパク質化合物が免疫抑制作用または抗炎症作用を示すこと ができるか、あるいは補体の少なくとも１つの機能的作用を阻害することができ る、上記分子。
14. １４．生物学的化合物がＳＣＲまたはその誘導体を有する、請求項１３記載の分 子。
15. １５．共有結合が被験者ヘのｉｎ　ｖｉｖｏ投与後に切断される、請求項１３記 載の分子。
16. １６．補体阻害作用を生じ、当該作用が（ｉ）赤血球の補体仲介溶解の阻止； （ｉｉ）Ｃ５ａまたはＣ５ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇの形成の阻止；あるいは （ｉｉｉ）Ｃ３ａまたはＣ３ａ　ｄｅｓ　Ａｒｇの形成の阻止；により証明され る、請求項１３記載の分子。
17. １７．タンパク質がＣＲ１、ＣＲ２、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｉ因子、Ｈ因子およびＤ ＡＦより成る群から選ばれる、請求項１３記載の分子。
18. １８．タンパク質がトランスメンブラン領域を実質的に欠いている可溶性レセプ ターである、請求項１３記載の分子。
19. １９．タンパク質がＣＲ１またはそのフラグメントもしくは誘導体である、請求 項１３記載の分子。
20. ２０．タンパク質がＣＲ２またはそのフラグメントもしくは誘導体である、請求 項１３記載の分子。
21. ２１．タンパク質がトランスメンブラン領域を実質的に欠いている可溶性ＣＲ１ フラグメントである、請求項１９記載の分子。
22. ２２．請求項１３記載の分子および血栓溶解剤またはその繊維素溶解活性フラグ メントもしくは誘導体を含む組成物。
23. ２３．血栓溶解剤が組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、お よびウロキナーゼより成る群から選ばれる、請求項２２記載の組成物。
24. ２４．非タンパク質化合物が抗炎症性化合物、代謝拮抗物質、抗有糸分裂剤、シ クロスポリン様化合物およびマクロライド系物質より成る群から選ばれる、請求 項１３記載の組成物。
25. ２５．非タンパク質化合物がスピロベンゾフランまたはその誘導体もしくは類縁 体である、請求項１３記載の組成物。
26. ２６．スピロベンゾフランが６−カルボキシ−４−フェノキシスピロ〔ベンゾフ ラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン〕、６−カルボキシ−４−ｐ−ニトロフェノ キシスピロ〔ベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン〕、４−ｐ−アミノフ ェノキシ−６−カルボキシスピロ〔ベンゾフラン−２（３Ｈ）−シクロヘキサン 〕、６−カルボキシ−７−ホルミル−４−メトキシスピロ〔ベンゾフラン−２（ ３Ｈ）−シクロヘキサン〕、Ｋ７６、およびＫ７６ＣＯＯＨより成る群から選ば れる、請求項２５記載の組成物。
27. ２７．（ａ）ＣＲ１の少なくとも１つの機能的作用を示す、トランスメンブラン 領域を実質的に欠いている可溶性ＣＲ１フラグメント（ここで当該機能的作用は ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける補体仲介溶血を阻止する能力、Ｃ３ａおよび／または Ｃ５ａ生産を阻止する能力、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂと結合する能力、Ｉ因 子の補助因子活性を阻止する能力、およびＣ３および／またはＣ５転換酵素活性 を阻止する能力より成る群から選ばれる）；および （ｂ）６−カルボキシ−７−ホルミル−４−メトキシスピロ〔ベンゾフラン−２ （３Ｈ）−シクロヘキサン〕；を含む組成物。
28. ２８．免疫疾患または望ましくないあるいは不適当な補体活性を伴う疾患を治療 するための、効果的な量の請求項１または２６記載の組成物および製剤上許容さ れる担体を含有してなる医薬組成物。
29. ２９．免疫疾患または望ましくないあるいは不適当な補体活性を伴う疾患を治療 するための、効果的な量の請求項１４記載の分子および製剤上許容される担体を 含有してなる医薬組成物。
30. ３０．非タンパク質化合物が一般式４：▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、置換低級アルキル基、ベンジル基、置 換ベンジル基、フェニル基または置換フェニル基を表し；Ｒ１およびＲ２は、独 立して、水素原子、カルボン酸基、ホルミル基、ヒドロキシメチル基、Ｎ−（低 級アルキル）カルバモイル基、トリフルオロアセチル基、ハライド基、ビニル基 、１０個までの炭素原子を有する置換ビニル基、２０個までの炭素原子を有する アルキリデン基、脂肪族アシル基、置換脂肪族アシル基、芳香族アシル基、置換 芳香族アシル基、スルファモイル基、アミノメチル基、Ｎ−（低級アルキル）ア ミノメチル基、Ｎ，Ｎ−ジ（低級アルキル）アミノメチル基、複素環、Ｎ−（ア シル）カルバモイル基、アミジノ基またはヒドラジド基を表し；Ｒ１とＲ２は、 それらが結合している炭素原子と一緒になって、環状酸無水物またはうクトンを 表すこともできる；ただしＲ１とＲ２が両方とも水素原子であることはない〕 の化合物、またはその薬学的に許容される酸または塩基付加塩もしくはエステル である、請求項１記載の組成物。