JPH0634754B2 - 細胞培養液のｐＨ測定方法 - Google Patents
細胞培養液のｐＨ測定方法Info
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- JPH0634754B2 JPH0634754B2 JP25615385A JP25615385A JPH0634754B2 JP H0634754 B2 JPH0634754 B2 JP H0634754B2 JP 25615385 A JP25615385 A JP 25615385A JP 25615385 A JP25615385 A JP 25615385A JP H0634754 B2 JPH0634754 B2 JP H0634754B2
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は細胞培養液のpH測定方法に関する。
［従来技術］ 細胞が生育、増殖を行うためには、その細胞培養液のpH
が増殖適合範囲にある必要がある。しかしながら、その
細胞培養液の調製または保存中に細胞培養液中に含まれ
る二酸化炭素が放出され、pHが増大することによって増
殖適合範囲から外れることが多い。
が増殖適合範囲にある必要がある。しかしながら、その
細胞培養液の調製または保存中に細胞培養液中に含まれ
る二酸化炭素が放出され、pHが増大することによって増
殖適合範囲から外れることが多い。
このため、通常細胞培養液に含まれるフェノールレッド
の色変化を目視にて判断したり、或いはpH電極を細胞培
養液中に浸漬して測定するなどの方法により、pHの測定
を行っているが、次のような問題点があった。
の色変化を目視にて判断したり、或いはpH電極を細胞培
養液中に浸漬して測定するなどの方法により、pHの測定
を行っているが、次のような問題点があった。
細胞培養液に含まれたフェノールレッドの色変化を目視
にて判断する場合、誤認が起こる。これは、目視では誤
りが多発しやすく、また細胞培養液中に含まれる牛胎児
などの血清が黄色を呈しているためこの呈色にまどわさ
れることもあるからである。
にて判断する場合、誤認が起こる。これは、目視では誤
りが多発しやすく、また細胞培養液中に含まれる牛胎児
などの血清が黄色を呈しているためこの呈色にまどわさ
れることもあるからである。
一方、pH電極を細胞培養液に浸漬する場合、pH電極が十
分滅菌されていない場合には、雑菌等のコンタミネーシ
ョンが起こる。
分滅菌されていない場合には、雑菌等のコンタミネーシ
ョンが起こる。
［発明の目的］ 本発明の目的は、目視に伴う誤認や、pH電極を使用する
場合のコンタミネーションのような問題の起こらない細
胞培養液のpH測定方法を提供することにある。
場合のコンタミネーションのような問題の起こらない細
胞培養液のpH測定方法を提供することにある。
［発明の構成］ 本発明は、細胞培養培地、血清および可視光の波長領域
で２種以上の吸収ピークを有する指示薬からなる細胞培
養液の可視光の吸収からpHを測定する細胞培養液のpH測
定方法であって、 pHが既知である細胞培養液に可視光を透過して得られた
吸収ピークの２つの波長における吸光度の対数とpHとの
直線関係に基づいて、pHが未知である細胞培養液試料で
測定された各吸収ピークの吸光度の比の対数の値により
pHの値を求めることを特徴とする細胞培養液のpH測定方
法を提供する。さらに本発明は、細胞培養培地、血清お
よび可視光の波長領域で２種以上の吸収ピークを有する
指示薬からなる細胞培養液の可視光の吸収からpHを測定
する細胞培養液のpH測定方法であって、 pHが既知である細胞培養液に可視光を透過して得られた
吸収ピークの２つの波長における吸光度と各吸収ピーク
のない波長における吸光度との差を求めたものの比の対
数とpHとの直線関係に基づいて、pHが未知である細胞培
養液試料で測定された同様の吸光度の差の比の対数の値
によりpHの値を求めることを特徴とする細胞培養液のpH
測定方法を提供する。
で２種以上の吸収ピークを有する指示薬からなる細胞培
養液の可視光の吸収からpHを測定する細胞培養液のpH測
定方法であって、 pHが既知である細胞培養液に可視光を透過して得られた
吸収ピークの２つの波長における吸光度の対数とpHとの
直線関係に基づいて、pHが未知である細胞培養液試料で
測定された各吸収ピークの吸光度の比の対数の値により
pHの値を求めることを特徴とする細胞培養液のpH測定方
法を提供する。さらに本発明は、細胞培養培地、血清お
よび可視光の波長領域で２種以上の吸収ピークを有する
指示薬からなる細胞培養液の可視光の吸収からpHを測定
する細胞培養液のpH測定方法であって、 pHが既知である細胞培養液に可視光を透過して得られた
吸収ピークの２つの波長における吸光度と各吸収ピーク
のない波長における吸光度との差を求めたものの比の対
数とpHとの直線関係に基づいて、pHが未知である細胞培
養液試料で測定された同様の吸光度の差の比の対数の値
によりpHの値を求めることを特徴とする細胞培養液のpH
測定方法を提供する。
本発明の細胞培養液のpH測定方法は、細胞培養培地、牛
胎児などの血清及び指示薬からなる細胞培養液を透明な
容器に入れ、該細胞培養液に可視光を照射し、得られる
透過スペクトルまたは反射スペクトルからpHを算出する
ことを特徴とする。
胎児などの血清及び指示薬からなる細胞培養液を透明な
容器に入れ、該細胞培養液に可視光を照射し、得られる
透過スペクトルまたは反射スペクトルからpHを算出する
ことを特徴とする。
細胞培養液中には通常細胞に害を与えないような希薄な
濃度にてフェノールレッドがpH変化の検出のため含まれ
ているが、このような希薄な濃度においてはフェノール
レッドは可視光の範囲において４３０〜４４０nm付近と
５６０nm付近に吸収ピークをもち、また４８０nmに等吸
収点をもっている。細胞の生育可能なpH領域であるpH
６．８〜７．６の範囲では、pHが下がるにつれて４３０
〜４４４nm付近の吸収ピークは増大し、５６０nm付近の
吸収ピークは減少していく。フェノールレッドのみの吸
収が得られれば、この４３０〜４４０nm付近の吸収と５
６０nm付近の吸収の比をとると、プロットは１本の曲線
上にのり、この２つのピークの比から培養液のpHを算出
することが可能である。しかしながら、通常細胞培養液
に含まれる牛胎児、ウマなどの血清は黄色を呈し４００
nm付近に吸収をもつため、上記のような２つのピークの
比から培養液のpHを算出するのは困難である。
濃度にてフェノールレッドがpH変化の検出のため含まれ
ているが、このような希薄な濃度においてはフェノール
レッドは可視光の範囲において４３０〜４４０nm付近と
５６０nm付近に吸収ピークをもち、また４８０nmに等吸
収点をもっている。細胞の生育可能なpH領域であるpH
６．８〜７．６の範囲では、pHが下がるにつれて４３０
〜４４４nm付近の吸収ピークは増大し、５６０nm付近の
吸収ピークは減少していく。フェノールレッドのみの吸
収が得られれば、この４３０〜４４０nm付近の吸収と５
６０nm付近の吸収の比をとると、プロットは１本の曲線
上にのり、この２つのピークの比から培養液のpHを算出
することが可能である。しかしながら、通常細胞培養液
に含まれる牛胎児、ウマなどの血清は黄色を呈し４００
nm付近に吸収をもつため、上記のような２つのピークの
比から培養液のpHを算出するのは困難である。
本発明は、このような牛胎児などの血清が含まれる細胞
培養液の吸収変化からpHを算出できるものである。４３
０〜４４０nm付近の吸収にはフェノールレッドによる吸
収と血清による吸収が含まれているが、これらの関係は
細胞培養液に含まれる各々の割合によって決定してお
り、４３０〜４４０nm付近のある波長の吸光度と、５６
０nm付近のある波長の吸光度の比の対数は pHに対して直線関係を示しており、その直線の傾きと切
片とは細胞培養液に含まれるフェノールレッドの濃度及
び血清の濃度から算出することが可能である。これ以外
に細胞培養液に含まれるアミノ酸、塩、糖などは可視領
域には殆ど吸収をもたないため無視することができる。
但し、細胞培養液を長期間保存した場合にはタンパクの
分解物などが固体として浮遊している場合があるため、
フェノールレッド及び血清の吸収がない例えば６５０nm
付近の吸光度によってこれらの影響を差し引くため、４
３０〜４４０nm付近のある波長の吸光度から６５０nm付
近のある波長の吸光度を差し引いたものと、５６０nm付
近のある波長の吸光度から６５０nm付近のある波長の吸
光度を差し引いたものの比の対数とpHとの直線関係を用
いることが好ましい。
培養液の吸収変化からpHを算出できるものである。４３
０〜４４０nm付近の吸収にはフェノールレッドによる吸
収と血清による吸収が含まれているが、これらの関係は
細胞培養液に含まれる各々の割合によって決定してお
り、４３０〜４４０nm付近のある波長の吸光度と、５６
０nm付近のある波長の吸光度の比の対数は pHに対して直線関係を示しており、その直線の傾きと切
片とは細胞培養液に含まれるフェノールレッドの濃度及
び血清の濃度から算出することが可能である。これ以外
に細胞培養液に含まれるアミノ酸、塩、糖などは可視領
域には殆ど吸収をもたないため無視することができる。
但し、細胞培養液を長期間保存した場合にはタンパクの
分解物などが固体として浮遊している場合があるため、
フェノールレッド及び血清の吸収がない例えば６５０nm
付近の吸光度によってこれらの影響を差し引くため、４
３０〜４４０nm付近のある波長の吸光度から６５０nm付
近のある波長の吸光度を差し引いたものと、５６０nm付
近のある波長の吸光度から６５０nm付近のある波長の吸
光度を差し引いたものの比の対数とpHとの直線関係を用
いることが好ましい。
また、上記に述べた関係は、各々ある波長のみの値をと
るのではなく半値巾をもつ干渉フィルターによって得ら
れる吸光度を代用してもよい。
るのではなく半値巾をもつ干渉フィルターによって得ら
れる吸光度を代用してもよい。
実施例１ フェノールレッド０．００１％を含むダルベッコＭＥＭ
培地に牛胎児血清（ＭＡＢ社）を加えないもの及び１０
％または２０％を加えた細胞培養液に、０．１規定の塩
酸または０．１規定の水酸化ナトリウムの水溶液を添加
してpH６．５〜７．６の細胞培養液を調整し、各々の４
３０、５５８及び６３０nmの吸光度を測定し、得られた
値から 対pHのプロットを行った。結果を第１図に示す。
培地に牛胎児血清（ＭＡＢ社）を加えないもの及び１０
％または２０％を加えた細胞培養液に、０．１規定の塩
酸または０．１規定の水酸化ナトリウムの水溶液を添加
してpH６．５〜７．６の細胞培養液を調整し、各々の４
３０、５５８及び６３０nmの吸光度を測定し、得られた
値から 対pHのプロットを行った。結果を第１図に示す。
牛胎児血清が含まれない場合には、傾き１．０８、切片
７．３１の直線が、また１０％牛胎児血清含有の場合に
は傾き１．１５、切片７．３８の直線が、２０％牛胎児
血清含有の場合には傾き１．２７、切片７．４７の直線
が各々得られた。各々の場合に良い直線性が得られ、こ
れらの直線から、各波長の吸光度を用いてpHを算出する
ことが可能である。
７．３１の直線が、また１０％牛胎児血清含有の場合に
は傾き１．１５、切片７．３８の直線が、２０％牛胎児
血清含有の場合には傾き１．２７、切片７．４７の直線
が各々得られた。各々の場合に良い直線性が得られ、こ
れらの直線から、各波長の吸光度を用いてpHを算出する
ことが可能である。
実施例２ 実施例１で調製した細胞培養液と同様にして、フェノー
ルレッド０．００１％、牛胎児血清１０％の細胞培養液
をpH６．３〜７．８まで各々調整し、その４４１nm、５
７８nm、６３４nmの吸光度を測定し、 対pHのプロットを行ったところ、傾き１．１９、切片
７．８６の直線が得られた。
ルレッド０．００１％、牛胎児血清１０％の細胞培養液
をpH６．３〜７．８まで各々調整し、その４４１nm、５
７８nm、６３４nmの吸光度を測定し、 対pHのプロットを行ったところ、傾き１．１９、切片
７．８６の直線が得られた。
同じ細胞培養液を３つの干渉フィルター（主波長４４１
nm、半値巾１２nm；主波長５７８nm、半値巾２．５nm；
主波長６３４nm，半値巾３nm）ｙ用いて、その吸光度を
測定し、 対pHのプロットを行っったところ、傾き１，２１、切片
７，８６の直線が得られ、単一波長の吸光度を用いても
半値巾をもつ干渉フィルターを用いても良い直線性を示
し、pHを算出できた。
nm、半値巾１２nm；主波長５７８nm、半値巾２．５nm；
主波長６３４nm，半値巾３nm）ｙ用いて、その吸光度を
測定し、 対pHのプロットを行っったところ、傾き１，２１、切片
７，８６の直線が得られ、単一波長の吸光度を用いても
半値巾をもつ干渉フィルターを用いても良い直線性を示
し、pHを算出できた。
第１図は、実施例１で得られた結果を示すグラフであ
る。
る。
Claims (6)
- 【請求項１】細胞培養培地、血清および可視光の波長領
域で２種以上の吸収ピークを有する指示薬からなる細胞
培養液の可視光の吸収からpHを測定する細胞培養液のpH
測定方法であって、 pHが既知である細胞培養液に可視光を透過して得られた
吸収ピークの２つの波長における吸光度の対数とpHとの
直線関係に基づいて、pHが未知である細胞培養液試料で
測定された各吸収ピークの吸光度の比の対数の値により
pHの値を求めることを特徴とする細胞培養液のpH測定方
法。 - 【請求項２】細胞培養液に含まれる指示薬がフェノール
レッドである特許請求の範囲第１項記載の細胞培養液の
pH測定方法。 - 【請求項３】可視光の吸収が干渉フィルターを通じて得
られる吸収である特許請求の範囲第１項または第２項記
載の細胞培養液のpH測定方法。 - 【請求項４】細胞培養培地、血清および可視光の波長領
域で２種以上の吸収ピークを有する指示薬からなる細胞
培養液の可視光の吸収からpHを測定する細胞培養液のpH
測定方法であって、 pHが既知である細胞培養液に可視光を透過して得られた
吸収ピークの２つの波長における吸光度と各吸収ピーク
のない波長における吸光度との差を求めたものの比の対
数とpHとの直線関係に基づいて、pHが未知である細胞培
養液試料で測定された同様の吸光度の差の比の対数の値
によりpHの値を求めることを特徴とする細胞培養液のpH
測定方法。 - 【請求項５】細胞培養液に含まれる指示薬がフェノール
レッドである特許請求の範囲第４項記載の細胞培養液の
pH測定方法。 - 【請求項６】可視光の吸収が干渉フィルターを通じて得
られる吸収である特許請求の範囲第４項または第５項記
載の細胞培養液のpH測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25615385A JPH0634754B2 (ja) | 1985-11-14 | 1985-11-14 | 細胞培養液のｐＨ測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25615385A JPH0634754B2 (ja) | 1985-11-14 | 1985-11-14 | 細胞培養液のｐＨ測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62115297A JPS62115297A (ja) | 1987-05-26 |
| JPH0634754B2 true JPH0634754B2 (ja) | 1994-05-11 |
Family
ID=17288641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25615385A Expired - Lifetime JPH0634754B2 (ja) | 1985-11-14 | 1985-11-14 | 細胞培養液のｐＨ測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0634754B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2490008A2 (en) | 2011-02-18 | 2012-08-22 | Nihon Kohden Corporation | Method and apparatus for measuring pH of solution |
| EP2505992A2 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-03 | Nihon Kohden Corporation | Method and apparatus for measuring pH of medium solution |
| JP2013202031A (ja) * | 2012-03-29 | 2013-10-07 | Nippon Koden Corp | 細胞培養液の液面高さの測定方法および測定装置 |
| KR101501199B1 (ko) * | 2013-12-24 | 2015-03-13 | 조정윤 | pH 센서 패키지 및 상기 pH 센서 패키지를 이용한 pH 센싱 방법 |
| CN110376190A (zh) * | 2019-08-19 | 2019-10-25 | 世翱（上海）生物医药科技有限公司 | 一种基于光谱的细胞培养悬液pH值检测方法 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6435347A (en) * | 1987-07-31 | 1989-02-06 | Sumitomo Electric Industries | Detection of intrusion of various bacteria |
| JPWO2019058512A1 (ja) * | 2017-09-22 | 2020-10-15 | オリンパス株式会社 | 観察システム |
| JP6995606B2 (ja) * | 2017-12-19 | 2022-01-14 | オリンパス株式会社 | 計測装置および培養システム |
| US11299701B2 (en) | 2019-03-19 | 2022-04-12 | Olympus Corporation | Culture-medium-monitoring apparatus |
| US20220404286A1 (en) * | 2019-10-04 | 2022-12-22 | Kyocera Corporation | Ph measurement method and ph measurement device |
-
1985
- 1985-11-14 JP JP25615385A patent/JPH0634754B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2490008A2 (en) | 2011-02-18 | 2012-08-22 | Nihon Kohden Corporation | Method and apparatus for measuring pH of solution |
| EP2505992A2 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-03 | Nihon Kohden Corporation | Method and apparatus for measuring pH of medium solution |
| CN102735626A (zh) * | 2011-03-31 | 2012-10-17 | 日本光电工业株式会社 | 用于测量介质溶液的ph值的方法和装置 |
| JP2012215428A (ja) * | 2011-03-31 | 2012-11-08 | Nippon Koden Corp | 培地溶液のｐＨ計測方法及びｐＨ計測装置 |
| US9291572B2 (en) | 2011-03-31 | 2016-03-22 | Nihon Kohden Corporation | Method and apparatus for measuring pH of medium solution |
| CN102735626B (zh) * | 2011-03-31 | 2017-06-09 | 日本光电工业株式会社 | 用于测量介质溶液的ph值的方法和装置 |
| JP2013202031A (ja) * | 2012-03-29 | 2013-10-07 | Nippon Koden Corp | 細胞培養液の液面高さの測定方法および測定装置 |
| US9470572B2 (en) | 2012-03-29 | 2016-10-18 | Nihon Kohden Corporation | Method and apparatus for measuring liquid level of cell culture solution |
| KR101501199B1 (ko) * | 2013-12-24 | 2015-03-13 | 조정윤 | pH 센서 패키지 및 상기 pH 센서 패키지를 이용한 pH 센싱 방법 |
| CN110376190A (zh) * | 2019-08-19 | 2019-10-25 | 世翱（上海）生物医药科技有限公司 | 一种基于光谱的细胞培养悬液pH值检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62115297A (ja) | 1987-05-26 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |