JPH06308082A - 蛋白回収器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 コンパクトな容器形状の蛋白回収器を提供
し、かつディスク泳動槽に簡単に取付けられて、多種・
多数のサンプルを一度に回収できるようにする。 【構成】 収容部１１上に泳動槽のゲル管取付部への取
付管部１２を突設した上部材１０と、上部材１０の収容
部に着脱可能で、かつ中空室１１１と連通する中空室２
１２を有するゲル片収容部２１の中空室２１２と連通す
る蛋白回収室２２１を有する回収部２２の先端先細り部
に環状膨出部分を有する係止部２３とにより形成された
下部材２０と、下部材２０のゲル片収容部２１内室に設
置されるゲル片を載せる目皿３０とにより容器形状に形
成する。透析膜は、下部材２０の先端部に張り付けら
れ、その上からＯリング２５によって係止部２３の部分
で係止保持されさる。ゲル片を目皿３０に載せた後、適
量の緩衝液を中空室２１２及び回収室２２１に入れ、上
下の部材１０，２０をネジ嵌合し、取付管部１２を泳動
槽のゲル片取付部に嵌合する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、電気泳動後のポリア
クリルアミドゲル（ＰＡＧ）や寒天、アガロースゲル、
デンプンゲルから目的成分、すなわち、各分画部分の微
量の蛋白質（蛋白、酵素等）を電気泳動によって分離分
取・回収するために用いられる蛋白回収器に関する。

【０００２】

【従来の技術】生化学のみならず、医学、薬学、農業、
水産、化学などの多くの分野において目的成分、すなわ
ち、蛋白質（蛋白、酵素等）の分離・分取・回収は、よ
り効果的な精密測定診断・判定を行う上で極めて重要な
ことになっている。例えば、リポ蛋白電気泳動によって
得られたゲル（支持体）上には、ＨＤＬ（ハイデンシテ
ィリポプロテイン）、ＬＤＬ（ローデンシティリポプロ
テイン）、ＩＤＬ（インターミーディエイトデンシティ
リポプロテイン）、ＶＬＤＬ（ペリーローデンシティリ
ポプロテイン）の４分画が形成されているが、これから
医学上の診断、治療のための精密検査の試料を得るに
は、各分画毎にＨＤＬ、ＬＤＬ、ＩＤＬ、ＶＬＤＬの蛋
白を分離分取して回収する必要がある。このような支持
体・ゲル上の各蛋白を分離分取する方法として超遠心分
離法、電気泳動法が従来より広く利用されている。超遠
心分離法は、電気泳動後のゲル（支持体）を超高速回転
の遠心分離にかけ、各分画部分を分離・分取して回収す
るものである。電気泳動法は、例えばマックスイールド
（商品名）蛋白回収装置を用い、電気泳動によって分離
された各分画部分を支持体（ゲル）から切り出し、この
切り出した目的物質を含む支持体を回収装置の回収カッ
プに収容後、通電し、目的物質を電気泳動によって透析
膜上に分取・回収するものである。

【０００３】第６図は従来のマックスイールド蛋白回収
装置を示すもので、回収器本体１と、３個の回収カップ
２・・・と、回収メンブラン３、すなわち透析膜とから
なっている。回収器本体１は、冷却水の循環管路を有す
る冷却槽１Ａと、この冷却槽１Ａ内に設置されるカップ
ホルダー１Ｂと、その上部の冷却槽１Ａ上に設置される
安全カバー１Ｃを有する。カップホルダー１Ｂは、回収
カップ２を取付ける取付穴を３個所に有する。各回収カ
ップ２にはゲル片を載せたゲルホルダー１Ｄが入れられ
る。また、安全カバー１Ｃの各回収カップ２との対応部
には、白金線を備えた電極線ターミナル１Ｅがそれぞれ
装着されている。安全カバー１Ｃと冷却槽１Ａとには、
リード線１Ｆのプラス側とマイナス側とがそれぞれ接続
されている。各回収カップ２内に回収用緩衝液を入れて
ゲル片を載せたゲルホルダー１Ｄを入れた後、電極線タ
ーミナル１Ｅに所定時間通電すると、それぞれの回収カ
ップ２の回収部にゲル片上の目的成分が分取・回収され
る。その後、カップホルダーを取り出し、各回収カップ
２を取り外してその回収部から目的物質を回収すると、
回収カップ２に収容された３個のサンプル中の目的画分
の回収が終了する。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、超遠心
分離法による分取方法は、リポ蛋白質の場合、ＨＤＬで
４８〜７２時間／１サンプルと分取に極めて長時間がか
かり、また、その分取の技術は高い熟練を必要とし、だ
れでも簡単に行うという訳にはいかない。

【０００５】また、第６図に示す従来のマックスイール
ド蛋白回収装置を用いた電気泳動法は、回収カップのみ
では分離分取を行えず、回収器本体を含む専用の装置が
必要であり、装置構成が極めて大がかりで複雑である。
さらに、それぞれの回収カップに１つずつ白金線を有す
る電極線ターミナルを取付けなければならず、装置構成
が繁雑である。また、回収カップの先端部はストレート
であり、そのため、折角取付けた透析膜が回収中にずり
落ち、回収サンプルを使用不能にしたり、透析膜の保持
固定が難しいという難点がある。さらに、従来の回収装
置は、一度に回収カップを３個のみしか取付けられず、
一度に多くの種類のサンプルから成分を回収するといっ
たことは行えなかった。

【０００６】また、上記超遠心分離法による分取は、回
収したサンプル成分を取り出すとき、コンタミネーショ
ン（相互汚染）を引き起すという問題がある。

【０００７】本発明は、従来のマックスイールド回収装
置とは異なったユニークな単体の容器形状・構造であっ
て、構造が極めて小型・コンパクトであり、ディスク電
気泳動槽のゲル管に替えてその取付部に簡単に組込むこ
とができ、その組込数の範囲で一度に多種・多数のサン
プルを同時に分取・回収することができると共にその種
類・数を選択することができ、かつ、サンプル回収中に
透析膜をしっかりと保持固定することのできる蛋白回収
器を提供することを目的とするものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するために、中空の室を有する収容部上にディスク電
気泳動槽のゲル管取付部への取付管部が突設された上部
材と、該上部材の上記収容部に着脱可能であってその中
空室と連通する中空室を有するゲル片収容部と該ゲル片
収容部の中空室と連通する蛋白回収室を有する回収部と
該回収部の先端先細り部に環状膨出部分を有する透析膜
係止部とから成る下部材と、この下部材のゲル片収容部
内室に設置されるサンプル・ゲル片を載せる目盛とによ
り上記泳動槽の各ゲル管取付部に取付可能な容器形状に
形成し、下部材の先端先細り部に透析膜を張り付け、該
透析膜を先端の係止部にて係止部材により係止保持する
ようにした。

【０００９】

【実施例】図１、図２は本発明に係る蛋白回収器を示す
もので、後述する図３のディスク電気泳動槽の各ゲル管
取付部に取付可能な容器形状・構造に形成されている。
本蛋白回収器は、透明樹脂材によって形成され、上部材
１０と下部材２０とにより容易に分割可能かつ組合せ・
一体化可能に構成されている。

【００１０】上部材１０は、下方に開口する中空室１１
１を有する筒状の収容部１１と、収容部１１の上面中央
から上向きに突出するゲル管取付部への取付管部１２と
から成っている。収容部１１の中空室１１１の内側壁に
メネジ１１２が形成されており、このメネジ１１２に下
部材２０のゲル管収容部２１の外周壁に形成したオネジ
２１２がネジ込まれるようになっている。このオネジ２
１２とメネジ１１２のネジ嵌合及び嵌合の取外しによ
り、本蛋白回収器は、上部材１０と下部材２０とを容易
に一体的に組合せて容器形状の使用状態とし、かつ、上
部材１０と下部材２０とを容易に分割して取外すことが
できる。上部材１０の取付管部の径は、ディスク電気泳
動槽のゲル管取付部の取付孔の径と略同径、かつ、該取
付部に取付けられるゲル管の径と同径に設定されてい
る。

【００１１】一方、下部材２０は、全体が上部材１０の
収容部１１よりも小径のほぼ筒状に形成され、収容部１
１よりも小径のゲル片収容部２１と、ゲル片収容部２１
の下方に形成されたサンプル回収部２２と、その先端先
細り部に形成された透析膜係止部２３とにより概略構成
されている。ゲル片収容部２１は、上方に開口する中空
室２１１を有し、下部材２０を上部材１０に組合せ一体
化したとき、上部材１０の中空室１１１と連通するよう
になっている。さらに、ゲル片収容部２１の上部外周壁
に上部材１０の中空室壁部に形成したメネジ１１２とネ
ジ嵌合されるオネジ２１２が形成されている。

【００１２】ゲル片収容部２１の中空室２１２の下端に
サンプル・ゲル片を載せた目盛３０が設置される。目盛
３０は複数の孔３０１を形成されている。

【００１３】さらに、下部材２０の中空室２１２の下方
は略漏斗状に傾斜縮小すると共に、その下部に中空室２
１２よりも小径の回収液を溜る室２２１が形成されてい
る。室２２１は、サンプル回収部２２のサンプル回収室
であり、下部材２０の下方先端部に開口している。サン
プル回収部２２は、上下の中間部から下方に径が縮小す
る先細り状に形成されている。その先端先細り部に透析
膜の係止部２３が形成されている。係止部２３は、外方
に環状に膨出し、本実施例の場合、逆オーム状に膨出形
成されている。下部材２０は、ゲル片収容部２１と、サ
ンプル回収部２２と、先端の透析膜係止部２３とにより
略筒状に一体的に形成されている。

【００１４】透析膜１００は本回収器使用時に下部材２
０の下方先端部、すなわち、サンプル回収部２２の先端
部に張り付けられ、その先端の係止部２３にて係止部
材、例えばＯリング２５によって係止保持される。その
際、Ｏリング２５は、透析膜１００の上から係止部２３
のくぼみの部分に外嵌合される。これによって透析膜１
００は、下部材２０の先端部にしっかりと固定保持さ
れ、サンプル回収中の不用意な抜け落ち、ズレが防止さ
れる。そして、下部材２０の先端部に張り付けてその上
からＯリング２５を係止部２３に嵌め付けるだけで良い
ので、透析膜１００の回収器への取付けは極めて容易簡
単である。また、透析膜１００の取外しもＯリング２５
を係止部２３から取外すだけで行えるので極めて簡単容
易である。

【００１５】上記のように構成された本蛋白回収器は、
図３に示すディスク電気泳動槽の上槽に形成した各ゲル
管取付部に着脱可能に装着される。このディスク電気泳
動槽は、図３に示すように、上槽４０と下槽５０とによ
り構成され、下槽５０の上に上槽４０を載せて一体化
し、使用に供される。

【００１６】上槽４０の内底部中央に白金線４１１を巻
回した（−）電極部４１が配置されている。白金線４１
１は、内底部を通して外側に引き出され、リード線２０
０の（−）側接続端子４２に接続されている。上槽４０
の内底部には、円周方向に一定ピッチ間隔で複数のゲル
管取付部、例えば１２個のゲル管取付部４３…が等配間
隔で配設されている。各ゲル管取付部４３にはゴムリン
グ４４が組付けられている。サンプルの電気泳動の際、
サンプルを入れたゲル管（不図示）がゴムリング４４を
介して各ゲル管取付部４３に装着される。また、サンプ
ルのゲル片からの分取・回収の際、本蛋白回収器の上部
材１０の取付管部１２がゴムリング４４の取付孔に挿着
され、本蛋白回収器が各ゲル管取付部４３に装着され
る。

【００１７】一方、下槽５０は、上槽４０と同様に、内
底部中央に白金線５１１を巻回した（＋）電極部５１を
配設している。白金線５１１は内底部を通して外側に引
き出され、リード線２００の（＋）側接続端子５２に接
続されている。

【００１８】本発明の蛋白回収器が適用されるディスク
電気泳動槽は上記のように構成されている。

【００１９】次に本発明に係る蛋白回収器を用いた電気
泳動によるサンプル回収手順の一例を説明する。 血清２５μｌを支持体のゲル上に重層し、初期設定
５ｍＡ／本の定電圧で泳動を行い、ゲル上に複数画分の
分画を得る。その際、リポ蛋白の易動した位置のマーカ
ーとして、例えばNarayan 染色法でリポ蛋白を染色した
ものを並べて同時に泳動させておく。

【００２０】 マーカーのリポ蛋白の易動した位置を
目安に支持体上の各画分を切り出し、各画分のサンプル
を含むゲル片３００を得る。

【００２１】 で切り出した各画分のサンプルを含
むゲル片３００…を本蛋白回収器の下部材２０に設けた
ゲル片収容部２１の中空室２１１内の目皿３０上にそれ
ぞれ載せ、中空室２１１とサンプル回収部２２のサンプ
ル回収室２２１内に緩衝液を所定量入れる。緩衝液は、
例えばあらかじめ１０倍に希釈されて使用に供される。
このとき、蛋白回収器の下部材２０の先端部には、上記
のような取付手順で透析膜１００が張り付け・固定され
ている。したがって、緩衝液が漏れ出すことはない。

【００２２】 次に、ゲル片３００を収容した回収器
を所定本数ディスク電気泳動槽のゲル管取付部４３…に
取付ける。その後、泳動槽の上槽４０と下槽５０に白金
線の電極部４１，５１が完全に浸るまで注入する。その
際、下槽５０は、各回収器の下端が十分に浸るまで緩衝
液を入れる。これによってディスク電気泳動槽の上槽４
０と下槽５０の間に各蛋白回収器を含む蛋白回収回路が
形成される。図４はこの状態を示している。次いで、白
金線の（＋），（−）電極部４１，５１間に定電圧、例
えば２００Ｖの定電圧で所定時間、例えば１２０分間通
電すると、図５に示すようにゲル片３００から抽出され
たサンプル、すなわちリポ蛋白が下部材２０のサンプル
回収室２２１に分離・分取される。その後、各蛋白回収
器を泳動槽から取り外し、その回収室２２１から抽出・
分取されているサンプル・リポ蛋白をピペット等を用い
て回収すると、回収工程が終了する。回収されたリポ蛋
白は各種診断、治療の精密検査の試料として用いられ
る。

【００２３】なお、蛋白回収器の取付本数は、ディスク
電気泳動槽のゲル管の取付数の範囲であれば、任意に変
えることができる。これによって、一度に多くのサンプ
ルを同時に回収することができる。さらに、本蛋白回収
器は、リポ蛋白の回収ばかりでなく、アルカリフォスフ
ァターゼ、ヘモグロビン、ＬＤＨの酵素や蛋白の回収に
も適用可能である。また、アガロースゲルや等電点電気
泳動によって得られたゲル片からもそれぞれの蛋白を分
取・回収することができる。

【００２４】

【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
下記の効果が得られる。 従来のマックスイールド蛋白回収装置とは構成が全
く異なる単体の容器形状・構造であり、極めて小型・コ
ンパクトな構造の新規な蛋白回収器を提供することがで
きる。

【００２５】また、従来のマックスイールド蛋白回収装
置のように、冷却槽やカップホルダー，ゲルホルダー，
安全カバーなどのような大型の部品は全く不要であり、
個々の回収カップ毎に白金線ターミナルを付けていたも
のを省くことができ、従来の回収カップに略相当する大
きさのコンパクトな回収器を提供することができる。

【００２６】 ディスク電気泳動槽のゲル管の取付部
に簡単に取付けてサンプル回収を簡単に行うことができ
る。また、１つの泳動槽に複数の回収器を取付けられる
ので、その数の範囲であれば、一度に多種かつ多くのサ
ンプルを同時に回収できる。

【００２７】 回収器先端の係止部の抜け止め作用に
より、サンプルの回収中に透析膜がズレ落ちたり、抜け
落ちたりする不具合な現象がなくなる。また、透析膜の
たるみもなくなる。さらに、係止部の部分に透析膜の上
から係止部材、例えばＯリングを嵌め付け、または取外
すだけで良いので、取付け、取外しが簡単であり、膜に
キズをつけるようなこともない。

【００２８】 従来の超遠心分離器を用いる回収のよ
うに、回収後のサンプルを取り出す際のコンタミネーシ
ョンは生じない。

【００２９】 ゲル片中の微量のサンプルの回収に適
用できる。

【００３０】 サンプルの回収時間は３０分〜２時間
であり、超遠心分離法に比べて格段に時間を短縮でき
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明に係る蛋白回収器の分解斜視図である。

【図２】本発明に係る蛋白回収器の組立状態を示す断面
図である。

【図３】本発明の回収器が適用されるディスク電気泳動
槽の断面図である。

【図４】本蛋白回収器を泳動槽に組込んだ使用前（回収
前）の状態を示す断面図である。

【図５】本蛋白回収器によってサンプルを回収した状態
を示す断面図である。

【図６】従来のマックスイールド蛋白回収装置を示す分
解斜視図である。

【符号の説明】

１０ 上部材 １１ 収容部 １１１ 中空室 １２ 取付管部 １１２ メネジ ２０ 下部材 ２１ ゲル片収容部 ２１２ 中空室 ２２ サンプル回収部 ２２１ サンプル回収室 ２３ 係止部 ３０ 目皿 １００ 透析膜 ２５ Ｏリング

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【手続補正書】

【提出日】平成２年１２月２０日

【手続補正１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 中空の室を有する収容部上にディスク電
   気泳動槽のゲル管取付部への取付管部が突設された上部
   材と、該上部材の前記収容部に着脱可能であって前記中
   空室と連通する中空の室を有するゲル片収容部と該ゲル
   片収容部の中空室と連通する蛋白回収室を有する回収部
   と該回収部の先端先細り部に環状膨出部分を有する透析
   膜係止部とにより一体的に形成された下部材と、この下
   部材の前記ゲル片収容器部内室に設置されるサンプル・
   ゲル片を載せる目皿とにより容器形状に形成し、前記下
   部材の先端先細り部に透析膜を張り付け、該透析膜を前
   記係止部にて係止部材により係止保持するようにして成
   ることを特徴とする蛋白回収器。
2. 【請求項２】 上部材の収容部と下部材のゲル片収容部
   とをネジ嵌合し、互いの中空室を連通させるようにした
   ことを特徴とする請求項１に記載の蛋白回収器。
3. 【請求項３】 下部材の先端先細り部に逆オーム状に膨
   出された係止部を形成し、該係止部のくぼみの部分にＯ
   リング等の係止部材により張り付けられた透析膜を係止
   保持するようにしたことを特徴とする請求項１に記載の
   蛋白回収器。
4. 【請求項４】 上部材の取付管部がディスク電気泳動槽
   に形成された複数のゲル管取付部と略同径であって、該
   ゲル管取付部に前記上部材の取付管部を嵌合装着した
   際、前記ディスク電気泳動槽内に上下の部材を含む蛋白
   回収回路が形成されるようにしたことを特徴とする請求
   項１に記載の蛋白回収器。