JPH06277096A - 安定化されたα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液 - Google Patents
安定化されたα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液Info
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- JPH06277096A JPH06277096A JP8781493A JP8781493A JPH06277096A JP H06277096 A JPH06277096 A JP H06277096A JP 8781493 A JP8781493 A JP 8781493A JP 8781493 A JP8781493 A JP 8781493A JP H06277096 A JPH06277096 A JP H06277096A
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- amylase activity
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 測定対象外の混入α−アミラーゼに対して安
定化された、α−アミラーゼ活性測定用基質として機能
するｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α−マル
トペンタオシドを含有する水溶液を提供する。 【構成】 α−アミラーゼ活性測定用基質として機能す
るｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α−マルト
ペンタオシドを含有し、２〜５．５の範囲内のｐＨ値を
有する水溶液からなる安定化されたα−アミラーゼ活性
測定用基質含有水溶液。
定化された、α−アミラーゼ活性測定用基質として機能
するｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α−マル
トペンタオシドを含有する水溶液を提供する。 【構成】 α−アミラーゼ活性測定用基質として機能す
るｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α−マルト
ペンタオシドを含有し、２〜５．５の範囲内のｐＨ値を
有する水溶液からなる安定化されたα−アミラーゼ活性
測定用基質含有水溶液。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は安定化されたα−アミラ
ーゼ活性測定用基質含有水溶液に関する。
ーゼ活性測定用基質含有水溶液に関する。
【０００２】
【従来の技術】急性膵炎の高アミラーゼ血症、耳下腺
炎、肺ガン等の異所性アミラーゼ産生腫瘍等の診断のた
めに、血清、膵液、尿などのα−アミラーゼ活性を測定
することが重要であり、旧くから行われている。
炎、肺ガン等の異所性アミラーゼ産生腫瘍等の診断のた
めに、血清、膵液、尿などのα−アミラーゼ活性を測定
することが重要であり、旧くから行われている。
【０００３】α−アミラーゼ活性測定法として、旧くは
粘稠なデンプン溶液の粘度の減少を測定する粘度法、混
濁したデンプン溶液の濁度の減少を測定する比濁法等が
あるが、感度及び精度の問題から現在殆ど使用されてい
ない。また、α−アミラーゼの作用により生成した還元
糖による銅の還元を利用したソモジー法や、デンプンに
色素チバクロン（Cibachron ）を結合させた青色デンプ
ン（ブルースターチ）を発色基質とするブルースターチ
法が広く使用されているが、操作が煩雑で、基質の品質
が不安定であると言う問題がある。
粘稠なデンプン溶液の粘度の減少を測定する粘度法、混
濁したデンプン溶液の濁度の減少を測定する比濁法等が
あるが、感度及び精度の問題から現在殆ど使用されてい
ない。また、α−アミラーゼの作用により生成した還元
糖による銅の還元を利用したソモジー法や、デンプンに
色素チバクロン（Cibachron ）を結合させた青色デンプ
ン（ブルースターチ）を発色基質とするブルースターチ
法が広く使用されているが、操作が煩雑で、基質の品質
が不安定であると言う問題がある。
【０００４】最近、糖鎖の短い均一な組成のオリゴ糖が
比較的容易に調製できるようになり、これらの合成基質
にα−アミラーゼを作用させて生じる成分を更に検出酵
素と共役させて酵素的にα−アミラーゼを測定する酵素
的測定法が、測定の自動化に伴って日常使用されてい
る。
比較的容易に調製できるようになり、これらの合成基質
にα−アミラーゼを作用させて生じる成分を更に検出酵
素と共役させて酵素的にα−アミラーゼを測定する酵素
的測定法が、測定の自動化に伴って日常使用されてい
る。
【０００５】酵素的測定法の中に合成発色基質を使用す
る方法がある。その一例は、下記の原理１を測定原理と
する方法である。
る方法がある。その一例は、下記の原理１を測定原理と
する方法である。
【０００６】
【化１】
【０００７】即ち、第一反応に於て、ｐ−ニトロフェニ
ル−β−ガラクトシル−α−マルトペンタオシド（以
下、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａと略記することがある）にα−
アミラーゼが作用し、ｐ−ニトロフェニルマルトトリオ
シド（ｐＮＰ−Ｇ３）及びｐ−ニトロフェニルマルトジ
オシド（ｐＮＰ−Ｇ２）が生成し、第二反応に於て、こ
れら両者にα−グルコシダーゼが作用して、ｐ−ニトロ
フェノール（ｐＮＰ）を生成するので、遊離するｐ−ニ
トロフェノール（ｐＮＰ）を比色定量することによりα
−アミラーゼ活性を測定する。
ル−β−ガラクトシル−α−マルトペンタオシド（以
下、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａと略記することがある）にα−
アミラーゼが作用し、ｐ−ニトロフェニルマルトトリオ
シド（ｐＮＰ−Ｇ３）及びｐ−ニトロフェニルマルトジ
オシド（ｐＮＰ−Ｇ２）が生成し、第二反応に於て、こ
れら両者にα−グルコシダーゼが作用して、ｐ−ニトロ
フェノール（ｐＮＰ）を生成するので、遊離するｐ−ニ
トロフェノール（ｐＮＰ）を比色定量することによりα
−アミラーゼ活性を測定する。
【０００８】従来、酵素的測定法に使用するα−アミラ
ーゼ活性測定用試薬は、一般にα−グルコシダーゼを含
む第一試薬と基質を含む第二試薬とからなり、それぞれ
凍結乾燥品として市販されており、使用時に適当な緩衝
液（一般にｐＨ＝約７．０）に溶解して試薬溶液を調製
して用いられている。
ーゼ活性測定用試薬は、一般にα−グルコシダーゼを含
む第一試薬と基質を含む第二試薬とからなり、それぞれ
凍結乾燥品として市販されており、使用時に適当な緩衝
液（一般にｐＨ＝約７．０）に溶解して試薬溶液を調製
して用いられている。
【０００９】最近、使用時の試薬溶液の調製の手間を省
き、調製時のミスを無くするために、そのまま測定装置
に使用することができる液状の形態の試薬が求められる
ようになってきた。その結果、凍結乾燥品の場合には特
に問題にならなかった試薬の保存安定性が重要になり、
一般に製造時から使用時まで一年間、液状試薬は安定に
保存できるものであることが必要である。
き、調製時のミスを無くするために、そのまま測定装置
に使用することができる液状の形態の試薬が求められる
ようになってきた。その結果、凍結乾燥品の場合には特
に問題にならなかった試薬の保存安定性が重要になり、
一般に製造時から使用時まで一年間、液状試薬は安定に
保存できるものであることが必要である。
【００１０】α−アミラーゼ活性測定用試薬の液状化に
当り、第一試薬及び第二試薬をそれぞれα−アミラーゼ
の至適ｐＨである６．５〜７．５の範囲内のｐＨを有す
る適当な緩衝液に溶解して液状試薬を製造することが考
えられる。例えば、「臨床検査医学研究会第５回学術講
演会講演要旨集（ＶＯＬ．４ Ｎｏ．１）」第４１頁に
は、α−アミラーゼ測定試薬の液状化処方として、β−
グリセロリン酸塩、グルコアミラーゼ、β−グルコシダ
ーゼ、塩化ナトリウム及び塩化カルシウムからなる第一
試薬及びβ−グリセロリン酸塩、６−Ｎ３Ｇ５ＣＮＰ
（２−クロロ−４−ニトロフェニル ６5 −アジド−６
5 −デオキシ−β−Ｄ−マルトペンタオシド）、塩化ナ
トリウム及び塩化カルシウムからなる第二試薬からなる
組成が記載されている。更に上記文献には、この処方に
用いられている基質６−Ｎ３Ｇ５ＣＮＰがｐＨ５〜６で
最も安定であることが記載されている。
当り、第一試薬及び第二試薬をそれぞれα−アミラーゼ
の至適ｐＨである６．５〜７．５の範囲内のｐＨを有す
る適当な緩衝液に溶解して液状試薬を製造することが考
えられる。例えば、「臨床検査医学研究会第５回学術講
演会講演要旨集（ＶＯＬ．４ Ｎｏ．１）」第４１頁に
は、α−アミラーゼ測定試薬の液状化処方として、β−
グリセロリン酸塩、グルコアミラーゼ、β−グルコシダ
ーゼ、塩化ナトリウム及び塩化カルシウムからなる第一
試薬及びβ−グリセロリン酸塩、６−Ｎ３Ｇ５ＣＮＰ
（２−クロロ−４−ニトロフェニル ６5 −アジド−６
5 −デオキシ−β−Ｄ−マルトペンタオシド）、塩化ナ
トリウム及び塩化カルシウムからなる第二試薬からなる
組成が記載されている。更に上記文献には、この処方に
用いられている基質６−Ｎ３Ｇ５ＣＮＰがｐＨ５〜６で
最も安定であることが記載されている。
【００１１】酵素的測定法で使用するα−アミラーゼ活
性測定用試薬に用いられる基質として知られている前記
のｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａは、ｐＨの変動に対して比較的安
定であり、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａを含む第二試薬を液状化
する場合、試薬液のｐＨをα−アミラーゼの至適ｐＨで
ある７．０付近の値にしても、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ自体
の安定性については特に問題は生じない。
性測定用試薬に用いられる基質として知られている前記
のｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａは、ｐＨの変動に対して比較的安
定であり、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａを含む第二試薬を液状化
する場合、試薬液のｐＨをα−アミラーゼの至適ｐＨで
ある７．０付近の値にしても、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ自体
の安定性については特に問題は生じない。
【００１２】しかしながら、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａを含む
液状第二試薬に外部から測定検体以外のものに由来する
α−アミラーゼが混入すると、そのｐＨがα−アミラー
ゼの至適ｐＨに調整されているために、混入したα−ア
ミラーゼにより基質が分解され、このような基質の一部
が分解された試薬を使用して検体のα−アミラーゼ活性
を測定すると、ブランク値が上昇するという問題点が生
じる。α−アミラーゼは、特にヒトの唾液に由来するも
のが通常の雰囲気中に多数存在しており、液状試薬の製
造時、保存時及び使用時に液状試薬中に混入し易い。特
に、製造時に基質を含む液状試薬中にα−アミラーゼが
混入した場合、液状試薬の保存の間にα−アミラーゼに
よる試薬中に含有されている基質ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの
分解が進行し、上記のような問題を生じる傾向が強い。
上記文献には、α−アミラーゼ活性測定用の基質を含む
液状試薬のこのような問題点について全く考慮されてい
ない。
液状第二試薬に外部から測定検体以外のものに由来する
α−アミラーゼが混入すると、そのｐＨがα−アミラー
ゼの至適ｐＨに調整されているために、混入したα−ア
ミラーゼにより基質が分解され、このような基質の一部
が分解された試薬を使用して検体のα−アミラーゼ活性
を測定すると、ブランク値が上昇するという問題点が生
じる。α−アミラーゼは、特にヒトの唾液に由来するも
のが通常の雰囲気中に多数存在しており、液状試薬の製
造時、保存時及び使用時に液状試薬中に混入し易い。特
に、製造時に基質を含む液状試薬中にα−アミラーゼが
混入した場合、液状試薬の保存の間にα−アミラーゼに
よる試薬中に含有されている基質ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの
分解が進行し、上記のような問題を生じる傾向が強い。
上記文献には、α−アミラーゼ活性測定用の基質を含む
液状試薬のこのような問題点について全く考慮されてい
ない。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、測定
対象外の混入α−アミラーゼに対して安定化された、α
−アミラーゼ活性測定用基質として機能するｐ−ニトロ
フェニル−β−ガラクトシル−α−マルトペンタオシド
を含有する水溶液を提供することにある。
対象外の混入α−アミラーゼに対して安定化された、α
−アミラーゼ活性測定用基質として機能するｐ−ニトロ
フェニル−β−ガラクトシル−α−マルトペンタオシド
を含有する水溶液を提供することにある。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明は、α−アミラー
ゼ活性測定用基質として機能するｐ−ニトロフェニル−
β−ガラクトシル−α−マルトペンタオシドを含有し、
２〜５．５の範囲内のｐＨ値を有する水溶液からなるこ
とを特徴とする安定化されたα−アミラーゼ活性測定用
基質含有水溶液である。
ゼ活性測定用基質として機能するｐ−ニトロフェニル−
β−ガラクトシル−α−マルトペンタオシドを含有し、
２〜５．５の範囲内のｐＨ値を有する水溶液からなるこ
とを特徴とする安定化されたα−アミラーゼ活性測定用
基質含有水溶液である。
【００１５】本発明の好適な態様は下記の通りである。
【００１６】（１）上記ｐＨ値が３〜４．５の範囲内で
ある上記のα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液。
ある上記のα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液。
【００１７】本発明に於けるｐ−ニトロフェニル−β−
ガラクトシル−α−マルトペンタオシドは、前記の原理
を測定原理とするα−アミラーゼ活性測定方法に於いて
α−アミラーゼ活性測定用基質として機能する化合物で
ある。即ち、前記原理に於ては、検体中のα−アミラー
ゼ活性を測定するために、α−グルコシダーゼとｐ−ニ
トロフェニル−β−ガラクトシル−α−マルトペンタオ
シド（基質）とが使用されるが、これらはα−グルコシ
ダーゼを含む試薬（以下、第一試薬と言うことがある）
と基質としてのｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａを含む試薬（以下、
第二試薬と言うことがある）とに分けて製造し、第一試
薬と第二試薬とのセットの形でα−アミラーゼ活性測定
用試薬としてユーザーに供給されている。α−アミラー
ゼ活性の測定に際しては、これらの第一試薬と第二試薬
とを混合して一液系にして用いられる。
ガラクトシル−α−マルトペンタオシドは、前記の原理
を測定原理とするα−アミラーゼ活性測定方法に於いて
α−アミラーゼ活性測定用基質として機能する化合物で
ある。即ち、前記原理に於ては、検体中のα−アミラー
ゼ活性を測定するために、α−グルコシダーゼとｐ−ニ
トロフェニル−β−ガラクトシル−α−マルトペンタオ
シド（基質）とが使用されるが、これらはα−グルコシ
ダーゼを含む試薬（以下、第一試薬と言うことがある）
と基質としてのｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａを含む試薬（以下、
第二試薬と言うことがある）とに分けて製造し、第一試
薬と第二試薬とのセットの形でα−アミラーゼ活性測定
用試薬としてユーザーに供給されている。α−アミラー
ゼ活性の測定に際しては、これらの第一試薬と第二試薬
とを混合して一液系にして用いられる。
【００１８】第一試薬は、７．０±０．５のｐＨの緩衝
液（例えば、グッドの緩衝液ＰＩＰＥＳ）中にα−グル
コシダーゼが溶解されており、更に塩化ナトリウム、塩
化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、有機
酸カルシウム塩（例えば、酢酸カルシウム、クエン酸カ
ルシウム、安息香酸カルシウム）等の塩が溶解されて構
成されている。α−グルコシダーゼの含有量は一般的に
３〜１００Ｕ／ｍＬである。
液（例えば、グッドの緩衝液ＰＩＰＥＳ）中にα−グル
コシダーゼが溶解されており、更に塩化ナトリウム、塩
化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、有機
酸カルシウム塩（例えば、酢酸カルシウム、クエン酸カ
ルシウム、安息香酸カルシウム）等の塩が溶解されて構
成されている。α−グルコシダーゼの含有量は一般的に
３〜１００Ｕ／ｍＬである。
【００１９】第二試薬は、水（一般に緩衝液）中にｐＮ
Ｐ−Ｇ５−Ｇａが溶解されており、更に、好ましくは測
定系にカルシウムイオンを共存させるために、無機カル
シウム塩（例えば、塩化カルシウム、水酸化カルシウム
等）及び／又は有機酸カルシウム塩（例えば、酢酸カル
シウム、クエン酸カルシウム、安息香酸カルシウム等）
のカルシウム含有水溶性化合物が溶解されている。
Ｐ−Ｇ５−Ｇａが溶解されており、更に、好ましくは測
定系にカルシウムイオンを共存させるために、無機カル
シウム塩（例えば、塩化カルシウム、水酸化カルシウム
等）及び／又は有機酸カルシウム塩（例えば、酢酸カル
シウム、クエン酸カルシウム、安息香酸カルシウム等）
のカルシウム含有水溶性化合物が溶解されている。
【００２０】本発明は、この第二試薬として使用でき
る、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが溶解され、ｐＨが２〜５．
５、好ましくは３〜４．５の範囲内に調整保持された水
溶液であり、基質であるｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａを外部から
混入する検体以外のものに由来するα−アミラーゼによ
り分解させることなく安定に保存できる水溶液である。
る、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが溶解され、ｐＨが２〜５．
５、好ましくは３〜４．５の範囲内に調整保持された水
溶液であり、基質であるｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａを外部から
混入する検体以外のものに由来するα−アミラーゼによ
り分解させることなく安定に保存できる水溶液である。
【００２１】第二試薬のｐＨを、従来のようにα−アミ
ラーゼの至適ｐＨである７．０付近に調整した場合に
は、第二試薬を製造するとき、貯蔵するとき、検体中の
α−アミラーゼ活性測定をするための試薬を調製すると
きに、検体以外のものからのα−アミラーゼが第二試薬
に混入すると、第二試薬中の基質であるｐＮＰ−Ｇ５−
Ｇａの少なくとも一部が混入α−アミラーゼにより分解
される。混入α−アミラーゼを含む第二試薬をその製造
から使用するまでの期間貯蔵する間に、第二試薬中のｐ
ＮＰ−Ｇ５−Ｇａは混入α−アミラーゼにより継続的に
分解され、検体のα−アミラーゼ活性を測定するために
第二試薬を使用する際には、第二試薬中のｐＮＰ−Ｇ５
−Ｇａの含有量は、その製造時の含有量よりも減少して
おり、その減少量も混入α−アミラーゼの量、第二試薬
の貯蔵条件及び貯蔵期間等により変化する。
ラーゼの至適ｐＨである７．０付近に調整した場合に
は、第二試薬を製造するとき、貯蔵するとき、検体中の
α−アミラーゼ活性測定をするための試薬を調製すると
きに、検体以外のものからのα−アミラーゼが第二試薬
に混入すると、第二試薬中の基質であるｐＮＰ−Ｇ５−
Ｇａの少なくとも一部が混入α−アミラーゼにより分解
される。混入α−アミラーゼを含む第二試薬をその製造
から使用するまでの期間貯蔵する間に、第二試薬中のｐ
ＮＰ−Ｇ５−Ｇａは混入α−アミラーゼにより継続的に
分解され、検体のα−アミラーゼ活性を測定するために
第二試薬を使用する際には、第二試薬中のｐＮＰ−Ｇ５
−Ｇａの含有量は、その製造時の含有量よりも減少して
おり、その減少量も混入α−アミラーゼの量、第二試薬
の貯蔵条件及び貯蔵期間等により変化する。
【００２２】しかしながら、第二試薬のｐＨを２〜５．
５、好ましくは３〜４．５の範囲内に調整保持すると、
仮に第二試薬中に外来のα−アミラーゼが混入したとし
ても、α−アミラーゼの至適ｐＨから外れているため
に、混入α−アミラーゼによりｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが分
解されることが極めて少なくなる。更に、α−アミラー
ゼは６以下のｐＨの環境下では失活するので、２〜５．
５のｐＨに保持された第二試薬中のｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ
は分解を受けることなく安定であり、第二試薬製造時の
含有量がその使用時まで実質的に変化することなく維持
される。一方、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａは、２〜５．５のｐ
Ｈの環境下でも安定であり、第二試薬の貯蔵期間中変質
することは無い。
５、好ましくは３〜４．５の範囲内に調整保持すると、
仮に第二試薬中に外来のα−アミラーゼが混入したとし
ても、α−アミラーゼの至適ｐＨから外れているため
に、混入α−アミラーゼによりｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが分
解されることが極めて少なくなる。更に、α−アミラー
ゼは６以下のｐＨの環境下では失活するので、２〜５．
５のｐＨに保持された第二試薬中のｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ
は分解を受けることなく安定であり、第二試薬製造時の
含有量がその使用時まで実質的に変化することなく維持
される。一方、ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａは、２〜５．５のｐ
Ｈの環境下でも安定であり、第二試薬の貯蔵期間中変質
することは無い。
【００２３】前記のように、検体のα−アミラーゼ活性
を測定するに際しては、第二試薬を第一試薬と混合して
α−アミラーゼ活性測定用試薬として使用する。第一試
薬は７．０付近のｐＨを有する緩衝液系であり、第二試
薬は第一試薬に比して少量使用されるので、２〜５．５
のｐＨに保持された第二試薬をそのまま第一試薬と混合
しても、混合液のｐＨが低下することは殆どない。勿
論、第一試薬と第二試薬との混合液のｐＨがα−アミラ
ーゼの至適ｐＨ範囲よりも外れた場合には、常法により
α−アミラーゼの至適ｐＨ範囲に調整することが可能で
ある。従って、本発明の安定化されたα−アミラーゼ活
性測定用基質含有水溶液、即ち、安定化されたｐＮＰ−
Ｇ５−Ｇａを含有する第二試薬は、何らの障害も無しに
検体のα−アミラーゼ活性を測定するために使用するこ
とができる。
を測定するに際しては、第二試薬を第一試薬と混合して
α−アミラーゼ活性測定用試薬として使用する。第一試
薬は７．０付近のｐＨを有する緩衝液系であり、第二試
薬は第一試薬に比して少量使用されるので、２〜５．５
のｐＨに保持された第二試薬をそのまま第一試薬と混合
しても、混合液のｐＨが低下することは殆どない。勿
論、第一試薬と第二試薬との混合液のｐＨがα−アミラ
ーゼの至適ｐＨ範囲よりも外れた場合には、常法により
α−アミラーゼの至適ｐＨ範囲に調整することが可能で
ある。従って、本発明の安定化されたα−アミラーゼ活
性測定用基質含有水溶液、即ち、安定化されたｐＮＰ−
Ｇ５−Ｇａを含有する第二試薬は、何らの障害も無しに
検体のα−アミラーゼ活性を測定するために使用するこ
とができる。
【００２４】第二試薬のｐＨの調整は、それ自体公知の
方法、例えば、燐酸塩水溶液に塩酸のような無機酸又は
水酸化ナトリウムのような無機塩基を添加することによ
り容易に行うことができる。
方法、例えば、燐酸塩水溶液に塩酸のような無機酸又は
水酸化ナトリウムのような無機塩基を添加することによ
り容易に行うことができる。
【００２５】
【実施例】次に、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【００２６】［実施例１］ （試薬の調製）α−アミラーゼ活性測定用の試薬として
使用する、第一試薬及び本発明の安定化されたα−アミ
ラーゼ活性測定用基質含有水溶液である安定化第二試薬
を下記のようにして調製した。
使用する、第一試薬及び本発明の安定化されたα−アミ
ラーゼ活性測定用基質含有水溶液である安定化第二試薬
を下記のようにして調製した。
【００２７】（第一試薬） ７５ｍＭ ＰＩＰＥＳ ５０ｍＭ 塩化ナトリウム １ｍＭ 酢酸カルシウム ７．５Ｕ／ｍＬ α−グルコシダーゼ 上記組成の水溶液をｐＨ７．０に調整して第一試薬を調
製した。得られた第一試薬は、使用時まで密栓して保存
した。
製した。得られた第一試薬は、使用時まで密栓して保存
した。
【００２８】（安定化第二試薬） １０ｍＭ リン酸一カリウム ５ｍＭ ｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α
−マルトペンタオシド（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ） ０．５ｍＭ 酢酸カルシウム 上記組成の水溶液に塩酸又は水酸化ナトリウムを添加し
て、それぞれｐＨを２．０、３．０、４．０又は５．０
に調整した四種類の安定化第二試薬を調製した。
−マルトペンタオシド（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ） ０．５ｍＭ 酢酸カルシウム 上記組成の水溶液に塩酸又は水酸化ナトリウムを添加し
て、それぞれｐＨを２．０、３．０、４．０又は５．０
に調整した四種類の安定化第二試薬を調製した。
【００２９】［安定化第二試薬の唾液α−アミラーゼに
対する安定性］上記四種類の安定化第二試薬を使用し、
それぞれ唾液α−アミラーゼを添加するか又は添加しな
いで、下記の表１に示す安定化第二試薬試料（１）〜
（８）を作成した。
対する安定性］上記四種類の安定化第二試薬を使用し、
それぞれ唾液α−アミラーゼを添加するか又は添加しな
いで、下記の表１に示す安定化第二試薬試料（１）〜
（８）を作成した。
【００３０】
【表１】
【００３１】また、対照のために、下記組成の水溶液に
水酸化ナトリウムを添加してｐＨを７．０に調整して対
照第二試薬を調製した。 １０ｍＭ リン酸一カリウム ５ｍＭ ｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α
−マルトペンタオシド（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ） ０．５ｍＭ 酢酸カルシウム
水酸化ナトリウムを添加してｐＨを７．０に調整して対
照第二試薬を調製した。 １０ｍＭ リン酸一カリウム ５ｍＭ ｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α
−マルトペンタオシド（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ） ０．５ｍＭ 酢酸カルシウム
【００３２】この対照第二試薬を使用し、それぞれ唾液
α−アミラーゼを添加するか又は添加しないで、上記の
表１に示す対照第二試薬試料（対照１）及び（対照２）
を作成した。
α−アミラーゼを添加するか又は添加しないで、上記の
表１に示す対照第二試薬試料（対照１）及び（対照２）
を作成した。
【００３３】対照第二試薬試料（対照１）及び（対照
２）並びに安定化第二試薬試料（１）〜（８）をガラス
瓶に入れ、密栓して室温にて保存した。
２）並びに安定化第二試薬試料（１）〜（８）をガラス
瓶に入れ、密栓して室温にて保存した。
【００３４】前記の第一試薬０．８ｍＬを試験管に入
れ、３７℃で５分間加温し、この第一試薬に、下記の表
２に示す所定の保存期間が経過した、上記のそれぞれの
対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料０．２ｍＬを
添加した。対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料を
添加して１分後、４分後及び５分後に、混合液の４１５
ｎｍに於ける吸光度（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの分解により
生成するｐ−ニトロフェノールに基づく吸収）を、日立
７０５０型自動分析機（株式会社日立製作所製）を使用
して測定した。
れ、３７℃で５分間加温し、この第一試薬に、下記の表
２に示す所定の保存期間が経過した、上記のそれぞれの
対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料０．２ｍＬを
添加した。対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料を
添加して１分後、４分後及び５分後に、混合液の４１５
ｎｍに於ける吸光度（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの分解により
生成するｐ−ニトロフェノールに基づく吸収）を、日立
７０５０型自動分析機（株式会社日立製作所製）を使用
して測定した。
【００３５】上記の１分後の吸光度は、対照第二試薬試
料又は安定化第二試薬試料の保存中に分解されたｐＮＰ
−Ｇ５−Ｇａの量にほぼ比例するものであり、上記の５
分後の吸光度から４分後の吸光度を差し引いた値の吸光
度変化（ΔＥ／分）は、保存後の対照第二試薬試料又は
安定化第二試薬試料中に残存する唾液α−アミラーゼ活
性を示すものである。各吸光度の測定結果を下記の表２
に示す。
料又は安定化第二試薬試料の保存中に分解されたｐＮＰ
−Ｇ５−Ｇａの量にほぼ比例するものであり、上記の５
分後の吸光度から４分後の吸光度を差し引いた値の吸光
度変化（ΔＥ／分）は、保存後の対照第二試薬試料又は
安定化第二試薬試料中に残存する唾液α−アミラーゼ活
性を示すものである。各吸光度の測定結果を下記の表２
に示す。
【００３６】
【表２】
【００３７】また、表２に示すデータを吸光度（Ａｂ
ｓ）対保存期間でプロットして得られたグラフを図１に
示す。
ｓ）対保存期間でプロットして得られたグラフを図１に
示す。
【００３８】表２のデータから、本発明の安定化第二試
薬が顕著な効果を奏することが明らかである。即ち、対
照１の試料は保存１２か月後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが殆
ど分解されておらず、α−アミラーゼ活性を示さない
が、対照２の試料は、添加した唾液α−アミラーゼによ
り、唾液添加後２時間で既にｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが分解
されており、保存１日以降はｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの分解
量が多く、１分後の吸光度はスケールアウトし、ΔＥ／
分を測定することができなかった。
薬が顕著な効果を奏することが明らかである。即ち、対
照１の試料は保存１２か月後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが殆
ど分解されておらず、α−アミラーゼ活性を示さない
が、対照２の試料は、添加した唾液α−アミラーゼによ
り、唾液添加後２時間で既にｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが分解
されており、保存１日以降はｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの分解
量が多く、１分後の吸光度はスケールアウトし、ΔＥ／
分を測定することができなかった。
【００３９】これに対して、本発明の安定化されたｐＮ
Ｐ−Ｇ５−Ｇａ含有水溶液を第二試薬試料として使用す
ると、唾液α−アミラーゼを添加したものも唾液α−ア
ミラーゼを添加しなかったものと同様に、保存１２か月
後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが殆ど分解されておらず、α−
アミラーゼ活性を示さないことが明らかである。
Ｐ−Ｇ５−Ｇａ含有水溶液を第二試薬試料として使用す
ると、唾液α−アミラーゼを添加したものも唾液α−ア
ミラーゼを添加しなかったものと同様に、保存１２か月
後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが殆ど分解されておらず、α−
アミラーゼ活性を示さないことが明らかである。
【００４０】（第二試薬の環境からの混入α−アミラー
ゼに対する安定性）前記四種類の安定化第二試薬をガラ
ス瓶に入れ、それぞれ瓶の口を開口したままか又は密栓
して室温で保存して、下記の表３に示す保存状態の異な
る安定化第二試薬試料（１１）〜（１８）を作成した。
ゼに対する安定性）前記四種類の安定化第二試薬をガラ
ス瓶に入れ、それぞれ瓶の口を開口したままか又は密栓
して室温で保存して、下記の表３に示す保存状態の異な
る安定化第二試薬試料（１１）〜（１８）を作成した。
【００４１】
【表３】
【００４２】また、対照のために、前記の対照第二試薬
をガラス瓶に入れ、それぞれ瓶の口を開口したままか又
は密栓して室温で保存して、上記の表３に示す保存状態
の異なる対照第二試薬試料（対照１１）及び（対照１
２）を作成した。
をガラス瓶に入れ、それぞれ瓶の口を開口したままか又
は密栓して室温で保存して、上記の表３に示す保存状態
の異なる対照第二試薬試料（対照１１）及び（対照１
２）を作成した。
【００４３】前記の第一試薬０．８ｍＬを試験管に入
れ、３７℃で５分間加温し、この第一試薬に、下記の表
４に示す所定の保存期間が経過した、上記のそれぞれの
対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料０．２ｍＬを
添加した。対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料を
添加して１分後、４分後及び５分後に、混合液の４１５
ｎｍに於ける吸光度（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの分解により
生成するｐ−ニトロフェノールに基づく吸収）を、日立
７０５０型自動分析機（株式会社日立製作所製）を使用
して測定した。
れ、３７℃で５分間加温し、この第一試薬に、下記の表
４に示す所定の保存期間が経過した、上記のそれぞれの
対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料０．２ｍＬを
添加した。対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料を
添加して１分後、４分後及び５分後に、混合液の４１５
ｎｍに於ける吸光度（ｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの分解により
生成するｐ−ニトロフェノールに基づく吸収）を、日立
７０５０型自動分析機（株式会社日立製作所製）を使用
して測定した。
【００４４】上記の１分後の吸光度は、対照第二試薬試
料又は安定化第二試薬試料の保存中に混入α−アミラー
ゼにより分解されたｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの量にほぼ比例
するものであり、上記の５分後の吸光度から４分後の吸
光度を差し引いた値の吸光度変化（ΔＥ／分）は、保存
後の対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料中に存在
する混入α−アミラーゼ活性を示すものである。各吸光
度の測定結果を下記の表４に示す。
料又は安定化第二試薬試料の保存中に混入α−アミラー
ゼにより分解されたｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａの量にほぼ比例
するものであり、上記の５分後の吸光度から４分後の吸
光度を差し引いた値の吸光度変化（ΔＥ／分）は、保存
後の対照第二試薬試料又は安定化第二試薬試料中に存在
する混入α−アミラーゼ活性を示すものである。各吸光
度の測定結果を下記の表４に示す。
【００４５】
【表４】
【００４６】また、表４に示すデータを吸光度（Ａｂ
ｓ）対保存期間でプロットして得られたグラフを図２に
示す。
ｓ）対保存期間でプロットして得られたグラフを図２に
示す。
【００４７】表４のデータから、本発明が顕著な効果を
奏することが明らかである。即ち、対照１１の試料は保
存１２か月後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが殆ど分解されてお
らず、α−アミラーゼ活性を示さないが、対照２の試料
は、開口したままで保存したために保存中に空気中のα
−アミラーゼが混入し、保存期間の増加と共にｐＮＰ−
Ｇ５−Ｇａの分解量が増加し、試料中に残存する唾液α
−アミラーゼ活性を示すΔＥ／分も増加している。
奏することが明らかである。即ち、対照１１の試料は保
存１２か月後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが殆ど分解されてお
らず、α−アミラーゼ活性を示さないが、対照２の試料
は、開口したままで保存したために保存中に空気中のα
−アミラーゼが混入し、保存期間の増加と共にｐＮＰ−
Ｇ５−Ｇａの分解量が増加し、試料中に残存する唾液α
−アミラーゼ活性を示すΔＥ／分も増加している。
【００４８】これに対して、本発明の安定化されたｐＮ
Ｐ−Ｇ５−Ｇａ含有水溶液を第二試薬試料として使用す
ると、開口したままで保存したものも密栓して保存した
ものと同様に、保存１２か月後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが
殆ど分解されておらず、α−アミラーゼ活性を示さない
ことが明らかである。
Ｐ−Ｇ５−Ｇａ含有水溶液を第二試薬試料として使用す
ると、開口したままで保存したものも密栓して保存した
ものと同様に、保存１２か月後もｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａが
殆ど分解されておらず、α−アミラーゼ活性を示さない
ことが明らかである。
【００４９】
【発明の効果】本発明の安定化されたα−アミラーゼ活
性測定用基質含有水溶液は、α−アミラーゼ活性測定用
基質としてのｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−
α−マルトペンタオシドが、検体中のα−アミラーゼ活
性の測定に有害な影響を与えることなく、測定対象外の
混入α−アミラーゼに対して安定化されているという顕
著な効果を奏する。
性測定用基質含有水溶液は、α−アミラーゼ活性測定用
基質としてのｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−
α−マルトペンタオシドが、検体中のα−アミラーゼ活
性の測定に有害な影響を与えることなく、測定対象外の
混入α−アミラーゼに対して安定化されているという顕
著な効果を奏する。
【図１】実施例１に於けるｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ含有試薬
の添加唾液α−アミラーゼに対する安定性を示す、吸光
度（Ａｂｓ）対保存期間でプロットして得られたグラフ
である。
の添加唾液α−アミラーゼに対する安定性を示す、吸光
度（Ａｂｓ）対保存期間でプロットして得られたグラフ
である。
【図２】実施例１に於けるｐＮＰ−Ｇ５−Ｇａ含有試薬
の環境からの混入α−アミラーゼに対する安定性を示
す、吸光度（Ａｂｓ）対保存期間でプロットして得られ
たグラフである。
の環境からの混入α−アミラーゼに対する安定性を示
す、吸光度（Ａｂｓ）対保存期間でプロットして得られ
たグラフである。
Claims (1)
- 【請求項１】 α−アミラーゼ活性測定用基質として機
能するｐ−ニトロフェニル−β−ガラクトシル−α−マ
ルトペンタオシドを含有し、２〜５．５の範囲内のｐＨ
値を有する水溶液からなることを特徴とする安定化され
たα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8781493A JPH06277096A (ja) | 1993-03-24 | 1993-03-24 | 安定化されたα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8781493A JPH06277096A (ja) | 1993-03-24 | 1993-03-24 | 安定化されたα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06277096A true JPH06277096A (ja) | 1994-10-04 |
Family
ID=13925447
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8781493A Withdrawn JPH06277096A (ja) | 1993-03-24 | 1993-03-24 | 安定化されたα−アミラーゼ活性測定用基質含有水溶液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06277096A (ja) |
-
1993
- 1993-03-24 JP JP8781493A patent/JPH06277096A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20000530 |