JPH0627093B2 - Separation method - Google Patents
Separation methodInfo
- Publication number
- JPH0627093B2 JPH0627093B2 JP59209296A JP20929684A JPH0627093B2 JP H0627093 B2 JPH0627093 B2 JP H0627093B2 JP 59209296 A JP59209296 A JP 59209296A JP 20929684 A JP20929684 A JP 20929684A JP H0627093 B2 JPH0627093 B2 JP H0627093B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- salt
- silica gel
- acid
- enantiomers
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はα−ヒドロキシカルボン酸又はその塩のエナン
チオマーを液体クロマトグラフィーによって光学分割す
る分離方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a separation method for optically resolving the enantiomer of α-hydroxycarboxylic acid or a salt thereof by liquid chromatography.
これまで液体クロマトグラフイーを用いたα−ヒドロキ
シカルボン酸の光学分割には、谷村らによる分析化学
会、第30回講演要旨集、P15(1981)、あるい
はBeneckeによるJ.Chromatogr.,291(1984)、
155、に記載のものがある。これらは、逆相分配充填
剤を用い、移動相に2価銅と光学活性なアミノ酸又は光
学活性なN,N−ジアルキルアミノ酸とを用いる方法で
あり、検出には3価鉄塩溶液を発色試薬とするポストラ
ベル検出法を採用している。Up to now, the optical resolution of α-hydroxycarboxylic acid using liquid chromatography has been described by Tanimura et al., JS Chromatogr., 291 (1984) by The Analytical Society of Japan, 30th Lecture Summary, P15 (1981). ),
155. These are methods in which a reversed-phase partitioning packing is used and divalent copper and an optically active amino acid or an optically active N, N-dialkylamino acid are used as a mobile phase, and a trivalent iron salt solution is used as a coloring reagent for detection. The post label detection method is adopted.
併しながら上記文献に記載されている方法は、微量の光
学活性体である試料の光学分割のために、圧倒的に多量
の光学活性体を移動相として消費するという問題点を有
している。At the same time, however, the method described in the above-mentioned document has a problem that an overwhelmingly large amount of the optically active substance is consumed as a mobile phase due to the optical resolution of a sample which is a very small amount of the optically active substance. .
又、文献記載の移動相は紫外線及び可視光線に対し強い
吸光度を示すため、液体クロマトグラフイー用の検出器
として最も一般的に普及している紫外・可視吸光光度計
(UV-V1S検出器)を使用することができず、装置として
は複雑なポストラベル検出法を用いなければならないと
いう欠点がある。In addition, the mobile phase described in the literature exhibits a strong absorbance with respect to ultraviolet rays and visible rays, so the ultraviolet / visible absorptiometer (UV-V1S detector) which is most commonly used as a detector for liquid chromatography. However, there is a drawback in that the device must use a complicated post label detection method.
本発明者らは、移動相に光学活性な物質を使用すること
なく、α−ヒドロキシカルボン酸又はその塩のエナンチ
オマーを分離する方法として、分離基材(液体クロマト
グラフイー用充填剤)を鋭意検討した結果、シリカゲル
にL−プロリンの金属塩を結合した充填剤を用いること
により上記の問題点を解決しうることを見い出し、本発
明を完成した。The present inventors have diligently studied a separation base material (a packing material for liquid chromatography) as a method for separating an enantiomer of α-hydroxycarboxylic acid or a salt thereof without using an optically active substance as a mobile phase. As a result, they have found that the above problems can be solved by using a filler in which a metal salt of L-proline is bound to silica gel, and completed the present invention.
即ち本発明はシリカゲルにL−プロリンの金属塩を結合
してなる充填剤を用いる液体クロマトグラフイーによる
α−ヒドロキシカルボン酸又は/及びその塩のエナンチ
オマーの分離法である。That is, the present invention is a method for separating an enantiomer of an α-hydroxycarboxylic acid or / and a salt thereof by liquid chromatography using a filler obtained by binding a metal salt of L-proline to silica gel.
本発明において使用する担体には、シリカゲル、多孔性
合成高分子、多糖類が例示され、さらに具体的には多孔
性合成高分子としてはスチレン−ジビニルベンゼン共重
合体、多価アルコールのアクリル酸エステルの重合物、
そして多糖類としてはデキストラン、セルロースが例示
されるが、シリカゲルが最も好ましい。Examples of the carrier used in the present invention include silica gel, a porous synthetic polymer, and a polysaccharide. More specifically, examples of the porous synthetic polymer include styrene-divinylbenzene copolymer and acrylic acid ester of polyhydric alcohol. Polymer of
Dextran and cellulose are exemplified as the polysaccharide, and silica gel is most preferable.
シリカゲルを担体として使用した本発明において使用す
る充填剤は下記の一般式(I)で示される。The filler used in the present invention using silica gel as a carrier is represented by the following general formula (I).
〔但し、式中Y1,Y2,Y3のうち、少なくとも1つ
はシリカゲル及びシリカゲルとのシロキサン結合部分を
表わし、残りはそれぞれ水素、炭素数1〜6のアルキル
基、炭素数6〜14のアリール基、炭素数7〜20のア
リールアルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、または炭
素数1〜6のアルコキシ基もしくはこれら任意の組合せ
を表わす。Xは炭素数1〜20のスペーサーを表わす。
RはL−プロリンの金属塩を表わす〕 上記一般式(I)で示される充填剤のスペーサー部分を形
成させるシラン処理剤としては公知のいかなるものでも
用いられるが、具体的には3−クロロプロピルトリメト
キシシラン、3−クロロプロピルジメトキシメチルシラ
ン、3−クロロプロピルメチルジクロロシラン、3−ク
ロロプロピルトリクロロシラン、3−ブロモプロピルジ
メチルクロロシラン、3−プロモプロピルトリクロロシ
ラン、3−ブロモプロピルトリメトキシシラン、2−
(3,4−エポキシシクロヘキシルエチル)トリメトキ
シシラン、3−グリシドキシプロピルトリメトキシシラ
ン、ジエトキシ−3−グリシドキシプロピルメチルシラ
ン、3−グリシドキシプロピルジメチルエトキシシラ
ン、8−ブロモオクチルトリクロロシランなどが例示さ
れる。L−プロリンの金属塩としては、2価の銅、ニッ
ケル及び3価のコバルトの塩が例示される。 [However, in the formula, at least one of Y 1 , Y 2 , and Y 3 represents silica gel and a siloxane bond portion with silica gel, and the rest are hydrogen, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and a carbon atom having 6 to 14 carbon atoms, respectively. Represents an aryl group, an arylalkyl group having 7 to 20 carbon atoms, a halogen, a hydroxy group, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or any combination thereof. X represents a spacer having 1 to 20 carbon atoms.
R represents a metal salt of L-proline] Any known silane-treating agent for forming the spacer portion of the filler represented by the general formula (I) can be used, and specifically, 3-chloropropyl is used. Trimethoxysilane, 3-chloropropyldimethoxymethylsilane, 3-chloropropylmethyldichlorosilane, 3-chloropropyltrichlorosilane, 3-bromopropyldimethylchlorosilane, 3-promopropyltrichlorosilane, 3-bromopropyltrimethoxysilane, 2 −
(3,4-epoxycyclohexylethyl) trimethoxysilane, 3-glycidoxypropyltrimethoxysilane, diethoxy-3-glycidoxypropylmethylsilane, 3-glycidoxypropyldimethylethoxysilane, 8-bromooctyltrichlorosilane Are exemplified. Examples of the metal salt of L-proline include salts of divalent copper, nickel and trivalent cobalt.
本発明の分離方法としては一般式(I)で示す物質を液体
クロマトグラフイーの充填剤として用い、移動相に2価
の銅の強酸塩の水溶液又はそれにアセトニトリル、アル
コールを混合した液を用いるのが好ましい。2価の銅の
強酸塩としては例えば塩化第二銅、硝酸第二銅、硫酸
銅、過塩素酸銅及びこれらの水和物であり、これらの水
溶液として使用する。In the separation method of the present invention, the substance represented by the general formula (I) is used as a packing material for liquid chromatography, and an aqueous solution of a divalent copper strong acid salt or a mixture thereof with acetonitrile and alcohol is used as a mobile phase. Is preferred. Examples of the strong acid salt of divalent copper include cupric chloride, cupric nitrate, copper sulfate, copper perchlorate and hydrates thereof, which are used as an aqueous solution thereof.
本発明に於てα−ヒドロキシカルボン酸及びその塩のエ
ナンチオマーを分離する液体クロマトグラフイーに使用
する円筒カラムはガラス製もしくはステンレススチール
製のいずれでもよいが、通常は使用圧力と耐圧能力から
選択される。またカラムの大きさはいかなるものでも原
理的には可能であるが、試料の注入量、分析時間、溶媒
流量などから適当なものが撰択される。The cylindrical column used in the liquid chromatography for separating the enantiomers of the α-hydroxycarboxylic acid and its salt in the present invention may be either glass or stainless steel, but it is usually selected from the working pressure and pressure resistance. It Although any column size is possible in principle, an appropriate column size is selected depending on the injection amount of sample, analysis time, solvent flow rate and the like.
上記一般式(I)で示される充填剤は、上記カラムに充填
されるが、充填方法としては乾式あるいは湿式のいずれ
の方法も可能であるが、小さいカラムでは通常は高い理
論段数が得られる湿式法即ちスラリー法で充填するのが
良い。充填されたカラムはポンプと接続され溶媒が流さ
れるがポンプとカラムの間に注入器をもうけておき、そ
こから溶媒中に分離すべきエナンチオマーを注入し、カ
ラム中で分割が行なわれる。分割されたエナンチオマー
はカラム出口に設けられた検出器で検出されるが検出の
方法は可能ないかなる方法ででもよく、一般によく用い
られているUV検出器で多くの場合十分目的に適合しう
る。The packing represented by the general formula (I) is packed in the column, and either a dry method or a wet method can be used as a packing method, but in a small column, a wet method which usually provides a high theoretical plate number. It is better to fill by the method, that is, the slurry method. The packed column is connected to a pump to allow the solvent to flow, but an injector is provided between the pump and the column, from which the enantiomers to be separated are injected, and the column is divided. The separated enantiomers are detected by a detector provided at the column outlet, but the method of detection may be any possible method, and a commonly used UV detector is often adequate for the purpose.
本発明によつて光学分割できる対象化合物はα−ヒドロ
キシカルボン酸及びその塩のマセミ混合物である。具体
例を上げると、乳酸、マンデル酸、リンゴ酸、グリセリ
ン酸及びそれらのナトリウム塩、カリウム塩、カルシウ
ム塩等がある。The target compounds that can be optically resolved according to the present invention are racemic mixtures of α-hydroxycarboxylic acids and their salts. Specific examples include lactic acid, mandelic acid, malic acid, glyceric acid and their sodium salts, potassium salts, calcium salts and the like.
α−ヒドロキシカルボン酸は光学活性な物質、特に生理
活性物質などを合成する上での中間体としても重要な物
質であり、多くの場合、対掌体の一方のみを必要とする
ので、その異性体の分析及その単離は重要である。本発
明によつて提供される分離方法は、α−ヒドロキシカル
ボン酸及びその塩のエナンチオマーに対して極めて良好
な光学分割能を示し、エナンチオマーであるD体とL体
は溶出時間に十分な差を持つて溶出し、かつ各々の成分
のピークはシヤープに分離されるので、エナンチオマー
の定性・定量分析及びその分取に有利に使用され得る。α-Hydroxycarboxylic acid is an important substance as an intermediate in synthesizing an optically active substance, especially a physiologically active substance, and in many cases, only one of the antipodes is required. The analysis of the body and its isolation is important. The separation method provided by the present invention shows extremely good optical resolution with respect to the enantiomers of α-hydroxycarboxylic acid and its salt, and the D-form and the L-form which are enantiomers show a sufficient difference in the elution time. Since it elutes and the peaks of the respective components are separated into sharps, it can be advantageously used for qualitative / quantitative analysis of enantiomers and fractionation thereof.
以下に本発明を実施例をもつて述するが、本発明はこれ
らに限定されるものではない。The present invention will be described below with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.
合成例1 シリカゲルLichrosorb SI 100、粒径10μm(E.Me
rck社製)に真空中で5時間、120〜150℃に加熱
し、乾燥する。乾燥したシリカゲル20gを無水ベンゼ
ン120mlに懸濁し、そこにグリシドキシプロピルトリ
メトキシシラン8mlを加え、乾燥窒素気流下、加熱還流
する。このとき生成するメタノールは系外に除くように
して3時間反応させる。反応終了後室温に冷却し、グラ
スフイルターで過する。得られた修飾シリカゲルは無
水ベンゼンで洗つた後、真空中40℃で乾燥する。L−
プロリンのナトリウム塩1.24gを無水メタノール30
mlに溶解し、これに上記修飾シリカゲル3.5gを加え懸
濁させ室温で4日間振盪する。修飾したシリカゲルは
過し、メタノールで洗つた後、硫酸銅2gを純水50ml
に溶解した水溶液中に移して銅塩とした。これを再び
過し、純水で洗うことにより、L−プロリンの銅塩が化
学的に結合したシリカゲルを得た。Synthesis Example 1 Silica gel Lichrosorb SI 100, particle size 10 μm (E.Me
(manufactured by rck) in vacuum for 5 hours at 120 to 150 ° C. and dried. 20 g of dried silica gel is suspended in 120 ml of anhydrous benzene, 8 ml of glycidoxypropyltrimethoxysilane is added thereto, and the mixture is heated to reflux under a stream of dry nitrogen. The methanol produced at this time is allowed to react for 3 hours so as to be removed from the system. After completion of the reaction, the mixture is cooled to room temperature and passed through a glass filter. The obtained modified silica gel is washed with anhydrous benzene and then dried in vacuum at 40 ° C. L-
1.24 g of sodium salt of proline in anhydrous methanol 30
It is dissolved in ml, 3.5 g of the above-mentioned modified silica gel is added and suspended, and the mixture is shaken at room temperature for 4 days. After passing through the modified silica gel and washing with methanol, 2 g of copper sulfate was added to 50 ml of pure water.
To obtain a copper salt. This was filtered again and washed with pure water to obtain silica gel in which the copper salt of L-proline was chemically bound.
実施例1 合成例1で得られた充填剤を用いて種々のα−ヒドロキ
シカルボン酸及びその塩のラセミ体の光学分割を行なつ
た。即ち、平均粒径が10μmで、平均細孔径が100
Åの全多孔性シリカゲルに結合したL−プロリンの銅塩
よりなる充填剤を高速液体クロマトグラフ用ステンレス
カラム(25cm×0.46cm)に充填し、2.5×10−4
M硫酸銅水溶液を溶媒に用いて流速1ml/分、室温で下
記に示すα−ヒドロキシカルボン酸又はその塩のラセミ
体の光学分割を行なうと、次の表−1の如き結果が得ら
れた。Example 1 The filler obtained in Synthesis Example 1 was used to perform optical resolution of racemates of various α-hydroxycarboxylic acids and salts thereof. That is, the average particle size is 10 μm and the average pore size is 100 μm.
2.5 × 10 -4 A high-performance liquid chromatographic stainless steel column (25 cm × 0.46 cm) was filled with a packing material consisting of a copper salt of L-proline bound to the all-porous silica gel of Å.
Optical resolution of the racemic α-hydroxycarboxylic acid or its salt shown below was carried out at room temperature at a flow rate of 1 ml / min using M copper sulfate aqueous solution as the solvent, and the results shown in Table 1 below were obtained.
表−1中、k′,α,RSは夫々次の如く定義される。 In Table-1, k ', α, and R S are defined as follows.
すなわち、表−1のα,RSの値が示すように、各々の
化合物において、エナンチオマーであるD体、L体の溶
出時間には十分な差が認められ、かつピークとして両者
は完全に分離しているので、本発明の方法がエナンチオ
マーの定性・定量分析、並びにその分取に使用しうる優
れた分離方法であることがわかる。 That is, as shown by the values of α and R S in Table-1, in each compound, a sufficient difference was observed in the elution time of the enantiomers D-form and L-form, and the two were completely separated as peaks. Therefore, it is understood that the method of the present invention is an excellent separation method that can be used for qualitative / quantitative analysis of enantiomers and preparative separation thereof.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 C07C 59/50 8930−4H G01N 30/48 W 8310−2J // C07B 57/00 346 7419−4H ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 5 Identification code Internal reference number FI Technical display location C07C 59/50 8930-4H G01N 30/48 W 8310-2J // C07B 57/00 346 7419-4H
Claims (1)
塩のエナンチオマーを、シリカゲルにL−プロリンの金
属塩を結合してなる充填剤を用いる液体クロマトグラフ
ィーによって分離することを特徴とする分離法。1. A separation method, characterized in that the enantiomers of α-hydroxycarboxylic acid or / and a salt thereof are separated by liquid chromatography using a packing obtained by binding a metal salt of L-proline to silica gel.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP59209296A JPH0627093B2 (en) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | Separation method |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP59209296A JPH0627093B2 (en) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | Separation method |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6187640A JPS6187640A (en) | 1986-05-06 |
JPH0627093B2 true JPH0627093B2 (en) | 1994-04-13 |
Family
ID=16570595
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP59209296A Expired - Lifetime JPH0627093B2 (en) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | Separation method |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0627093B2 (en) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5429935A (en) * | 1988-07-12 | 1995-07-04 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Process for the production of optically active 2-hydroxy-4-phenyl-3-butenoic acid |
WO1990000613A1 (en) * | 1988-07-12 | 1990-01-25 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Process for preparing optically active 2-hydroxy-4-phenyl-3-butenoic acid |
GB2350802A (en) * | 1999-06-08 | 2000-12-13 | Anglia Polytechnic University | Sample pre-treatment |
JP5019496B2 (en) * | 2001-03-19 | 2012-09-05 | 本田技研工業株式会社 | Coating material coating method and apparatus |
CN112452311A (en) * | 2020-10-12 | 2021-03-09 | 南京江北新区生物医药公共服务平台有限公司 | Proline bonded silica gel mass spectrum capillary chromatographic column |
CN115569643B (en) * | 2022-10-20 | 2023-10-03 | 宁波大学 | Method for preparing chiral separation material by vacuum-assisted solid phase reaction bonding |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS59173756A (en) * | 1983-03-24 | 1984-10-01 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Packing material for separating optical isomer |
-
1984
- 1984-10-05 JP JP59209296A patent/JPH0627093B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS6187640A (en) | 1986-05-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lämmerhofer et al. | Quinine and quinidine derivatives as chiral selectors I. Brush type chiral stationary phases for high-performance liquid chromatography based on cinchonan carbamates and their application as chiral anion exchangers | |
JP2584498B2 (en) | New crown ether compounds and separating agents | |
EP0300448B1 (en) | Separation medium | |
KR101060896B1 (en) | Methods of Forming Metal Chelate Affinity Ligands | |
Gübitz et al. | Resolution of the optical isomers of underivatisized amino acids on chemically bonded chiral phases by ligand exchange chromatography | |
JPH0833380B2 (en) | Filler for liquid chromatography | |
CN112898585A (en) | Chiral metal-organic framework material and application thereof in chiral chromatographic column | |
JPH0627093B2 (en) | Separation method | |
WO2007139470A1 (en) | A method of preparing an immobilised metal ion chromatography adsorbent and methods of purifying proteins, peptides or polynucleotides. | |
US4627919A (en) | Resolving agent | |
JP3377516B2 (en) | Carrier with protein and carbon chain attached | |
CA1318308C (en) | Packing material for chromatographic use and method for analysis of enantiomer mixture using the same | |
US5051176A (en) | Packing material for liquid chromatography | |
US7018537B2 (en) | Chiral stationary phases based on derivatives of 4-amino-3,5-dinitrobenzoic acid | |
Hyun et al. | Liquid chromatographic separation of the enantiomers of β‐amino acids on a ligand exchange chiral stationary phase | |
EP0318469B1 (en) | Packing for use in resolution | |
JPH0819010B2 (en) | Separation agent for optical isomers | |
JPS6120862A (en) | Separating method | |
JP3179512B2 (en) | Penicillamine derivatives, chirality discriminating agents and separating agents | |
JP2848903B2 (en) | Separating agent for optical isomers | |
Cheong et al. | Allyltrimethoxysilane as the reagent of double bond introduction to porous silica for preparation of a chiral stationary phase in comparison with allyltriethoxysilane | |
JP3121072B2 (en) | Optical isomer separating agent bound to conalbumin | |
US20060199950A1 (en) | Preparation of a metal chelating separation medium | |
JPS61204138A (en) | Method of resolving optical isomer | |
JPH0572373B2 (en) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
EXPY | Cancellation because of completion of term |