JPH06258319A - Test paper for detection of oxypurine in urine - Google Patents

Test paper for detection of oxypurine in urine

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JPH06258319A
JPH06258319A JP8236493A JP8236493A JPH06258319A JP H06258319 A JPH06258319 A JP H06258319A JP 8236493 A JP8236493 A JP 8236493A JP 8236493 A JP8236493 A JP 8236493A JP H06258319 A JPH06258319 A JP H06258319A
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JP
Japan
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oxypurine
test paper
impregnated
layer
urine
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JP8236493A
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Japanese (ja)
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Kusuki Nishioka
久寿樹 西岡
Yutaka Mizushima
裕 水島
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L T T KENKYUSHO KK
Original Assignee
L T T KENKYUSHO KK
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Abstract

PURPOSE:To semiquantitatively detect the existence of oxypurine in urine by a method wherein two layers as a development layer an a reaction layer are formed on a base material and the respective layers are impregnated with inspection reagents. CONSTITUTION:In a sheet of test paper 1, at least two regions as a development- layer part 3 and a reaction-layer part 4 are formed on a sheet of paper 2 as a base material. The development-layer part 3 is impregnated with ascorbic acid oxydase, peroxidase and N-ethyl-N-m-toluidine sodium salt, and the reaction-layer part 4 is impregnated with 4-amino-antipurine and xanthineoxydase. When the parts are impregnated with these constituent components, H2O2 which is generated by the combination of oxypurine with the xanthineoxy-dase is guided to a coloring system by using the oxi4izable color reagent of the proxydase, the 4-aminoantipurine and the Methyl-N-m-tolui4 ine sodium salt. Then, when the reaction-layer part 4 is colored, the oxypurine is detected.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、臨床検査方法として簡
易的に使用できる、尿中のオキシプリンを半定量的に検
出できる試験紙に関する。
BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a test strip which can be easily used as a clinical test method and can semi-quantitatively detect oxypurine in urine.

【0002】[0002]

【従来の技術】臨床検査における尿あるいは血液等の体
液成分の化学的検査ならびに定量は、病態の治療および
予防のために重要な検査方法であり、これまで種々のに
臨床的検査に使用されてきている。特に健康診断の普及
により、臨床検査値の把握は早期の病態の確認のために
今日不可欠とされており、その精度の向上と共に検査方
法の迅速化、簡易化が進められてきている。
2. Description of the Related Art Chemical tests and quantification of body fluid components such as urine and blood in clinical tests are important test methods for the treatment and prevention of pathological conditions, and have been used in various clinical tests. ing. In particular, with the spread of medical examinations, grasping clinical test values is now indispensable for early confirmation of pathological conditions, and the accuracy and the speedup and simplification of test methods are being promoted.

【0003】現在、このような迅速化、簡易化の手段と
しては、尿あるいは血液検査等に見られる試験紙が普及
している。これは、被検査液中の対象成分の検出および
定量に必要な検査試薬をシートに含浸させたものであ
り、これを被試験液に浸すか被試験液を滴下するだけの
操作で、対象成分の検出・定量ができるものであり、検
査時の複雑な試薬の調製が省け、熟練者でなくとも正確
な判定ができ、臨床検査の実際において多用されている
ものである。
At present, as a means for such speeding up and simplification, test papers found in urine or blood tests are in widespread use. This is a sheet impregnated with a test reagent required for detection and quantification of the target component in the test liquid, which is simply immersed in the test liquid or dropping the test liquid. It is capable of detecting and quantifying, and can omit complicated preparation of a reagent at the time of inspection, can make accurate judgment even if it is not an expert, and is widely used in clinical examination.

【0004】[0004]

【発明が解決しようとする課題】ところで高尿酸血症
は、細胞内高エネルギーの担体のひとつであるプリンヌ
クレオチドの代謝障害によって生じる高尿酸血症を基礎
疾患とする先天性または後天性の代謝疾患であるといわ
れている。痛風は高尿酸血症に基づいて生じる急性単関
節炎であり、片側の母趾基関節に最も多く発症し、放置
しても軽快するものの関節痛は激しく、歩行不能になる
こともまれではない。またやっかいなことに、発作が起
こるまではまったく無症状であるため、高尿酸血症を早
期に把握するには、尿中の尿酸排泄量の確認による臨床
検査によらざるを得ない。
By the way, hyperuricemia is a congenital or acquired metabolic disease which is based on hyperuricemia which is caused by metabolic disorder of purine nucleotide which is one of intracellular high energy carriers. It is said that Gout is an acute monoarthritis caused by hyperuricemia. It most often develops in the phalangeal joint of one side and is relieved even if left untreated, but joint pain is severe and it is not uncommon to be unable to walk. Moreover, since there are no symptoms until an attack occurs, it is inevitable that a clinical examination by confirming the amount of uric acid excreted in urine is necessary to grasp hyperuricemia at an early stage.

【0005】この高尿酸血症(痛風)を誘発する最大の
因子としては、過剰のアルコール摂取や骨格筋運動、精
神的ストレスおよびこれらの相乗効果といった点が大き
くクローズアップされてきている。これらの解明の糸口
になったのは、運動性高尿酸血症であり、またエタノー
ル負荷運動などの成績である。これらの成績は、その後
の高尿酸血症の成因概念を大きく変えると共に、予防お
よび治療方法の改善にまで大きなインパクトを与えてき
ている。今日まで、大部分の高尿酸血症の成因は、こう
いったエネルギー代謝調節障害として考えられており、
血液中の尿酸値のみならず、特に尿酸の前駆物質である
ヒポキサンチンとキサンチンの細胞外液への露出を測定
することが最も重要な課題となってきている。しかしな
がら、これまでの測定方法については高速液体クロマト
グラフィーや酵素比色方法などの方法が開発されている
が、この方法は実際にはかなり煩雑で臨床応用を手軽に
できる方法についてはいまだ成功していない。
As the largest factors inducing this hyperuricemia (gout), excessive alcohol intake, skeletal muscle exercise, mental stress and their synergistic effects have been widely highlighted. The clues to these clarifications were motor hyperuricemia and the results of ethanol exercise. These results have greatly changed the etiology of hyperuricemia, and have also made great impacts on the improvement of prevention and treatment methods. To date, the cause of most hyperuricemia is thought to be these disorders of energy metabolism regulation,
It has become the most important issue to measure not only the uric acid level in blood but also the exposure of hypoxanthine and xanthine, which are precursors of uric acid, to extracellular fluid. However, although methods such as high-performance liquid chromatography and enzyme colorimetric method have been developed as the measurement methods up to now, this method is actually quite complicated and a method that can be easily applied clinically is still successful. Absent.

【0006】したがって、より簡易でかつ精度の良い軽
易な測定方法による、尿酸の前駆物質であるヒポキサン
チンとキサンチンの細胞外液への露出を測定する方法の
開発が所望されていた。本発明者らは、かかる簡易でか
つ精度の良い測定方法を開発すべく鋭意検討した結果、
尿酸の前駆物質であるキサンチン等のオキシプリンが、
一定のエネルギー負荷により尿中に排泄されることに着
目し、このオキシプリンの存在を半定量的に検出するこ
とは、必然的に尿中の尿酸値の定量に結びつき、したが
って、高尿酸血症の検査試験紙ができ得ることを見いだ
した。
Therefore, it has been desired to develop a method for measuring the exposure of hypoxanthine and xanthine, which are the precursors of uric acid, to the extracellular fluid by a simpler and more accurate measurement method. The present inventors have conducted extensive studies to develop such a simple and accurate measurement method,
Oxypurines such as xanthine, which is a precursor of uric acid,
Focusing on excretion in the urine with a constant energy load, semi-quantitative detection of the presence of this oxypurine inevitably leads to the quantification of uric acid levels in the urine, and therefore hyperuricemia I found that the inspection test paper of can be made.

【0007】[0007]

【課題を解決するための手段】しかして、本発明は、上
記目的を達成するために、基材上に、展開層およびを反
応層の2層を形成し、展開層部分にアスコルビン酸オキ
シダーゼ、ペルオキシダーゼ、N−エチル−N−(2−
ヒドロキシ−3スルホプロピル)−m−トルイジン ナ
トリウム塩を含浸させ、反応層部分に4−アミノアンチ
ピリン、キサンチンオキシダーゼを含浸させた尿中オキ
シプリン検出用試験紙を提供する。更に本発明は、上記
構成において、展開層および反応層の間に未含浸の層を
設けることにより、妨害物質除去層を形成した尿中オキ
シプリン検出用試験紙を提供する。
SUMMARY OF THE INVENTION In order to achieve the above object, the present invention has two layers of a developing layer and a reaction layer formed on a substrate, and ascorbic acid oxidase is provided in the developing layer portion. Peroxidase, N-ethyl-N- (2-
A test strip for detecting oxypurine in urine, which is obtained by impregnating hydroxy-3sulfopropyl) -m-toluidine sodium salt and impregnating a reaction layer portion with 4-aminoantipyrine and xanthine oxidase. Furthermore, the present invention provides a test paper for detecting oxypurine in urine, which has an interfering substance removal layer formed by providing an unimpregnated layer between the spreading layer and the reaction layer in the above-mentioned constitution.

【0008】以下に、本発明を図面に基づいて詳細に説
明する。第1図は、本発明の一具体的実施例にかかる試
験紙であり、本試験紙1は基材であるろ紙2上に、展開
層部分3および反応層部分4の少なくとも二つの領域を
形成し、展開層部分3には、アスコルビン酸オキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ、N−エチル−N−(2−ヒドロ
キシ−3−スルホプロピル)−m−トルイジンナトリウ
ム塩を含浸されており、反応層部分4には、4−アミノ
アンチピリン、キサンチンオキシダーゼを含浸されてい
る。
The present invention will be described in detail below with reference to the drawings. FIG. 1 shows a test paper according to a specific embodiment of the present invention, in which at least two regions of a spreading layer portion 3 and a reaction layer portion 4 are formed on a filter paper 2 which is a base material. Then, the developing layer portion 3 is impregnated with ascorbic acid oxidase, peroxidase, and N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m-toluidine sodium salt, and the reaction layer portion 4 is It is impregnated with 4-aminoantipyrine and xanthine oxidase.

【0009】本実施例においては、展開層部分3と反応
層部分4の間の未含浸の層部分5を設けると共に、展開
層部分3の下部にも未含浸層部分6が設けられている
が、これら各層5および6は必ずしも設ける必要はな
く、ろ紙上に展開層部分と反応層部分の2層が区分され
ているものであれば良い。上記構成において、ろ紙上の
展開層部分3に含浸されるアスコルビン酸オキシダーゼ
は、尿中アスコルビン酸を分解させ、アスコルビン酸の
影響をなくすることを目的とする。すなわち、アスコル
ビン酸は還元物質であり、次の反応層部分での発色阻害
の干渉があることより、この影響を除くために含浸され
るものである。
In this embodiment, the unimpregnated layer portion 5 is provided between the spreading layer portion 3 and the reaction layer portion 4, and the unimpregnated layer portion 6 is provided below the spreading layer portion 3. However, these layers 5 and 6 do not necessarily have to be provided, and it is sufficient that the two layers of the developing layer portion and the reaction layer portion are divided on the filter paper. In the above configuration, the ascorbic acid oxidase impregnated in the spreading layer portion 3 on the filter paper is intended to decompose urinary ascorbic acid and eliminate the influence of ascorbic acid. That is, ascorbic acid is a reducing substance, and since it interferes with the inhibition of color development in the next reaction layer portion, it is impregnated to remove this influence.

【0010】また、ペルオキシダーゼは、Hに作
用し、酸化指示薬を対応する色素に酸化するものであ
る。更に、N−エチル−N−(2−ヒドロキシ−3−ス
ルホプロピル)−m−トルイジン ナトリウム塩は、酸
化指示薬としてペルオキシダーゼ存在下、反応層部分4
に含浸される4−アミノアンチピリンとで、H
よって酸化縮合物を生成するアニリン誘導体として同様
含浸されるものであり、これらを展開層部分3に含浸さ
せることにより被検液が反応層部分4に展開される間に
還元性の強いアスコルビン酸が除去・分解されることに
なる。また、キサンチンオキシダーゼは、被検液中のオ
キシプリンに特異的に作用する酵素であり、目的成分で
あるオキシプリンに相当するHを生成させるもの
であり、入手可能な微生物起源、動物のミルク起源のも
のが使用できる。
Further, peroxidase acts on H 2 O 2 to oxidize an oxidation indicator into a corresponding dye. Furthermore, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m-toluidine sodium salt was added to the reaction layer portion 4 in the presence of peroxidase as an oxidation indicator.
Is similarly impregnated with 4-aminoantipyrine as an aniline derivative that forms an oxidative condensate with H 2 O 2. By impregnating these into the development layer portion 3, the test liquid is reacted with the reaction layer. Ascorbic acid, which has a strong reducing property, is removed and decomposed while being developed in the portion 4. In addition, xanthine oxidase is an enzyme that specifically acts on oxypurine in a test solution and produces H 2 O 2 corresponding to oxypurine which is a target component. You can use those of milk origin.

【0011】これらの構成成分を含浸させることによ
り、オキシプリン−キサンチンオキシダーゼの組み合わ
せで発生するHを、ペルオキシダーゼと4−アミ
ノアンチプリン、N−エチル−N−(2−ヒドロキシ−
3−スルホプロピル)−m−トルイジン ナトリウム塩
の被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き、反応層部分
の呈色により検出されることになる。本発明の尿中オキ
シプリン検出用試験紙は、ろ紙上に区分された展開層部
分ならびに反応層部分に少なくとも上記した各成分が含
浸されているものであれば良く、尿中オキシプリンの検
出・定量を目的とするかぎり、その目的を阻害しない他
の成分を更に含浸させてることもできる。そのような他
の成分としては、粘稠剤、緩衝剤、D−マンニトール、
牛血清アルブミン等が挙げられる。
By impregnating these constituents, H 2 O 2 generated by the combination of oxypurine-xanthine oxidase is converted into peroxidase and 4-aminoantipurine, N-ethyl-N- (2-hydroxy-).
3-Sulfopropyl) -m-toluidine sodium salt is introduced into a coloring system using an oxidizable coloring reagent, and it is detected by the coloring of the reaction layer portion. The test paper for detecting oxypurine in urine of the present invention may be any one in which at least the above-mentioned respective components are impregnated in the development layer part and the reaction layer part which are sectioned on the filter paper. As long as the purpose is quantitative, it may be further impregnated with other components that do not interfere with the purpose. Such other ingredients include thickeners, buffers, D-mannitol,
Examples include bovine serum albumin and the like.

【0012】粘稠剤は、本発明の試験紙に含浸させた構
成成分である薬剤の流出を防止するために使用されるも
のであり、そのような粘稠剤として代表的なものは、ポ
リビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ゼラチン、
カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、
アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。さらに緩衝剤は
展開層部分および反応層部分に含浸させるのが良く、こ
の緩衝剤は、試験紙を被検液に浸清した際のpH値を5
〜8に保つための目的として含浸されるものであり、こ
のような緩衝剤としては、クエン酸ナトリウム−水酸化
ナトリウム、ベロナールナトリウム−塩酸、第一リン酸
カリウム−第二リン酸ナトリウム、第一リン酸カリウム
−水酸化ナトリウム等が挙げられる。また、D−マンニ
トールおよび牛血清アルブミンは反応層部分および展開
層部分の両者に含浸させるのが良く、試験紙の乾燥時に
酵素の失活を防止するための安定剤として含浸されるも
のである。
The thickener is used to prevent the outflow of the drug as a constituent component impregnated in the test paper of the present invention, and a typical example of such a thickener is polyvinyl. Alcohol, polyacrylamide, gelatin,
Carboxymethyl cellulose, polyvinylpyrrolidone,
Examples include sodium alginate and the like. Further, it is preferable to impregnate the developing layer portion and the reaction layer portion with a buffering agent.
It is impregnated for the purpose of keeping to ~ 8, and as such a buffering agent, sodium citrate-sodium hydroxide, veronal sodium-hydrochloric acid, potassium monophosphate-dibasic sodium phosphate, Examples include potassium monophosphate-sodium hydroxide. Further, D-mannitol and bovine serum albumin are preferably impregnated in both the reaction layer portion and the development layer portion, and are impregnated as a stabilizer for preventing the inactivation of the enzyme when the test paper is dried.

【0013】本発明に使用する基材としては、ろ紙、ガ
ラス繊維、プラスチック素材からなる不織布等があり、
含浸液と反応したり、あるいは含浸液に溶解したりせ
ず、かつ吸収性を有しているものであれば良い。なかで
も、一般的に臨床試験紙として使用されているろ紙が好
ましく使用される。なお本発明は、上記具体的構成にお
いて、展開層3および反応層4の間に未含浸の層5を設
けているが、この未含浸層を設けることにより、妨害物
質除去層を形成した尿中オキシプリン検出用試験紙が提
供される。この妨害物質除去層を設ける意図は、被検査
の尿中に有色成分が含まれる場合には判定が困難になっ
たり、判定が不可能となる場合があるので、これら妨害
成分の除去を目的とした層を形成するためである。
The substrate used in the present invention includes filter paper, glass fiber, non-woven fabric made of plastic material, and the like.
Any substance that does not react with the impregnating liquid or dissolves in the impregnating liquid and has absorbency may be used. Among them, filter paper generally used as clinical test paper is preferably used. In the present invention, the unimpregnated layer 5 is provided between the spreading layer 3 and the reaction layer 4 in the above-described specific structure. However, by providing the unimpregnated layer 5, the interfering substance removal layer is formed in urine. An oxypurine detection test strip is provided. The purpose of providing this interfering substance removal layer is to remove these interfering components because it may be difficult or impossible to make determination if the urine of the subject contains colored components. This is for forming a layer.

【0014】次に本発明の試験紙の製造法を記す。第2
図に示した如く、長方形のろ紙(例えば、ADVANT
EC TOYOFILTER PAPER CHROM
ATOGRAPHY 514A 20×400mm)を
4区分に均等に分け、その上層部分を反応層部分4、次
層を未含浸層部分5、その次を展開層部分3とし、これ
ら反応層部分4と展開層部分3にそれぞれ含浸させるべ
き成分を塗布する。次いで、かくして含浸を終了したろ
紙2を凍結乾燥後、所望の試験紙に裁断し、目的とする
本発明の試験紙が製造される。
Next, a method for producing the test paper of the present invention will be described. Second
As shown in the figure, a rectangular filter paper (for example, ADVANT
EC TOYFILTER PAPER CHROM
(ATOGRAPHY 514A 20 × 400 mm) is evenly divided into 4 sections, the upper layer portion is the reaction layer portion 4, the next layer is the unimpregnated layer portion 5, and the next is the development layer portion 3, and these reaction layer portion 4 and the development layer portion. 3 is coated with the components to be impregnated respectively. Then, the filter paper 2 thus impregnated is freeze-dried, and then cut into a desired test paper to manufacture the desired test paper of the present invention.

【0015】[0015]

【発明の作用・効果】本発明の上記構成によれば、手軽
に測定できることより、高尿酸血症の予備群ともいうべ
きオキシプリン尿症がマススクリーニングできる。この
ことは、痛風・高尿酸血症の発症予防にまったく新しい
見地からの展開を切り開くものであると同時に、これら
の成績を手がかりに高尿酸血症の発症のより詳細なメカ
ニズム解明に役立つものといえる。特に本発明の試験紙
は、被試験液である尿に単に浸し展開させることによる
迅速かつ簡易な方法により、被検査液中の対象成分の検
出および定量を反応層部分の色調の濃淡により判定でき
るものであり、検査時の複雑な試薬の調製が省け、熟練
者でなくとも正確な判定ができ、臨床検査の実際に多大
の改善を与えるものである。
According to the above-mentioned constitution of the present invention, since it can be easily measured, it is possible to perform mass screening for oxypurineuria which should be called a preparative group of hyperuricemia. This will open up a completely new perspective for the prevention of the development of gout and hyperuricemia, and at the same time, it will be useful for elucidating the detailed mechanism of the onset of hyperuricemia based on these results. I can say. In particular, the test paper of the present invention can detect and quantify the target component in the test liquid by the shade of the color tone of the reaction layer portion by a quick and simple method by simply immersing it in urine as the test liquid and developing it. In addition, the preparation of complicated reagents at the time of examination can be omitted, and even an unskilled person can make accurate determination, which greatly improves the actual clinical examination.

【0016】[0016]

【実施例】以下に本発明を実施例によりより具体的に説
明する。なお、以下の実施例は本発明を限定するもので
はないことはもちろんである。下記の成分からなる展開
層試薬ならびに反応層試薬を調整する。
EXAMPLES The present invention will be described more specifically below with reference to examples. Needless to say, the following examples do not limit the present invention. A development layer reagent and a reaction layer reagent composed of the following components are prepared.

【0017】反応層試薬 : 2倍濃度McIlvaine緩衝液(pH 7.4) 0.2 ml 0.4Mリン酸ナトリウム18.17ml 0.2Mクエン酸1.83mlより調製 50mM4−アミノアンチピリン 0.1 ml 20%(w/v)D−マンニトール 0.125 ml 20%(w/v)牛血清アルブミン 0.125 ml 250U/mlキサンチンオキシダーゼ 0.05 ml 2.5%(w/v)ポリビニルアルコール 0.3 ml (重合度:2000) 脱イオン蒸留水 0.1 ml 全量 1.0 ml Reaction layer reagent : 2-fold concentration McIlvaine buffer solution (pH 7.4) 0.2 ml 0.4M sodium phosphate 18.17 ml 0.2M citric acid prepared from 1.83 ml 50 mM 4-aminoantipyrine 0.1 ml 20% (w / v) D-mannitol 0.125 ml 20% (w / v) bovine serum albumin 0.125 ml 250 U / ml xanthine oxidase 0.05 ml 2.5% (w / v) polyvinyl alcohol 0. 3 ml (degree of polymerization: 2000) Deionized distilled water 0.1 ml Total 1.0 ml

【0018】展開層試薬 : 2倍濃度McIlvaine緩衝液(pH7.4) 0.2 ml 0.4Mリン酸ナトリウム18.17ml 0.2Mクエン酸1.83mlより調製 100mMN−エチル−N−(2−ヒドロキシ 3−スルホプロピル)−m−トルイジ ン ナトリウム塩 2水化物 0.1 ml 10%(w/v)D−マンニトール 0.05 ml 10(w/v)牛血清アルブミン 0.05 ml 4000U/mlアスコルビン酸オキシダーゼ 0.05 ml 1000U/mlペルオキシダーゼ 0.05 ml 2.5%(w/v)ポリビニルアルコール 0.4 ml (重合度:2000) 脱イオン蒸留水 0.14 ml 全量 1.0 ml Developing layer reagent : 2-fold concentration McIlvaine buffer (pH 7.4) 0.2 ml 0.4M sodium phosphate 18.17 ml 0.2M citric acid prepared from 1.83 ml 100 mM N-ethyl-N- (2- Hydroxy 3-sulfopropyl) -m-toluidine sodium salt dihydrate 0.1 ml 10% (w / v) D-mannitol 0.05 ml 10 (w / v) bovine serum albumin 0.05 ml 4000 U / ml Ascorbate oxidase 0.05 ml 1000 U / ml Peroxidase 0.05 ml 2.5% (w / v) polyvinyl alcohol 0.4 ml (Polymerization degree: 2000) Deionized distilled water 0.14 ml Total 1.0 ml

【0019】次いで、20×400mmの長方形のろ紙
(ADVANTEC TOYO FILTER PAP
ER CHROMATOGRAPHY 514A)を横
長方向に4区分に均等に分け、上から順次その第一区分
を反応層部分、第2区分を未含浸層部分、第3区分を展
開層部分、第4区分を未含浸層部分とし、その反応層部
分と展開層部分にそれぞれ上記のごとく調整した反応層
試薬成分ならびに展開層試薬成分を塗布し、含浸を完了
させる。次いで、かくして含浸を終了したろ紙を凍結乾
燥後、ろ紙を縦方向に20×5ml幅に裁断し、目的と
する尿中オキシプリン検出用試験紙を得た。
Then, a rectangular filter paper of 20 × 400 mm (ADVANTEC TOYO FILTER PAP
ER CHROMATO GRAPHY 514A) is evenly divided into four sections in the lateral direction, and from the top, the first section is the reaction layer section, the second section is the unimpregnated layer section, the third section is the developed layer section, and the fourth section is unimpregnated. A layer portion is formed, and the reaction layer reagent component and the development layer reagent component adjusted as described above are applied to the reaction layer portion and the development layer portion, respectively, to complete the impregnation. Then, the filter paper thus impregnated was freeze-dried, and then the filter paper was cut in the longitudinal direction into a width of 20 × 5 ml to obtain a desired test paper for detecting oxypurine in urine.

【0020】モデル試験:上記のごとく製造した尿中オ
キシプリン検出用試験紙を用い、モデル試験液による検
出試験を実施した。モデル試験液としては、以下のもの
を用意した。 (1)キサンチン200μM含有生理食塩水 (2)キサンチン500μM含有生理食塩水 (3)ヒポキサンチン200μM含有生理食塩水 (4)ヒポキサンチン500μM含有生理食塩水 (5)イノシン200μM含有生理食塩水 (6)イノシン500μM含有生理食塩水 (7)生理食塩水(対照液) 各試験液100μlをサンプルカップにそれぞれ分注す
る。その液に、上記で得た尿中オキシプリン検出用試験
紙を、展開層部分を下にして、各サンプルカップに入
れ、該試験紙の下部2mm程を浸す。そのままの状態
で、展開層部分より上部の反応層部分へ試験液の展開を
開始する。展開後30分後に反応層部分の赤紫色の色調
の濃淡を判定する。
Model test : Using the test paper for detecting oxypurine in urine produced as described above, a detection test using a model test solution was carried out. The following model test solutions were prepared. (1) 200 μM xanthine-containing physiological saline (2) Xanthine 500 μM-containing physiological saline (3) Hypoxanthine 200 μM-containing physiological saline (4) Hypoxanthine 500 μM-containing physiological saline (5) Inosine 200 μM-containing physiological saline (6) Saline containing 500 μM inosine (7) Saline (control solution) 100 μl of each test solution is dispensed into each sample cup. The test paper for detecting urinary oxypurine obtained above is placed in the liquid in each sample cup with the development layer portion facing downward, and the bottom 2 mm of the test paper is immersed. In this state, the test liquid is started to spread to the reaction layer portion above the development layer portion. 30 minutes after the development, the shade of the reddish purple color tone of the reaction layer portion is judged.

【0021】 判 定: 試 験 液 色調の濃淡 (1)キサンチン200μM含有生理食塩水 ++ (2)キサンチン500μM含有生理食塩水 +++ (3)ヒポキサンチン200μM含有生理食塩水 ++ (4)ヒポキサンチン500μM含有生理食塩水 +++ (5)イノシン200μM含有生理食塩水 ± (6)イノシン500μM含有生理食塩水 ± (7)生理食塩水(対照液) −Judgment: Test liquid color tone (1) Saline containing 200 μM xanthine ++ (2) Saline containing 500 μM xanthine ++ (3) Saline containing 200 μM hypoxanthine ++ (4) Containing 500 μM hypoxanthine Saline +++ (5) Saline containing 200 μM inosine ± (6) Saline containing 500 μM inosine ± (7) Saline (control solution) −

【0022】尿試験液による試験:ヒトの尿サンプル1
00μlをサンプルカップにそれぞれ分注し、上記と同
様の操作にて試験をした。各試験紙の展開後30分後に
おける反応層部分の赤紫色の色調の濃淡を、上記のモデ
ル試験における反応層部分の赤紫色の色調との比較を行
い、尿中オキシプリンの濃度を判定した。その結果、生
理的オキシプリン濃度では陰性を示したものの、オキシ
プリン濃度が高い尿サンプルほど陽性を示し、反応層部
分は強い赤紫色を呈した。
Test with urine test solution: Human urine sample 1
00 μl was dispensed into each sample cup and tested in the same manner as above. The shade of the reddish purple color of the reaction layer portion 30 minutes after the development of each test paper was compared with the reddish purple color tone of the reaction layer portion in the above model test to determine the concentration of oxypurine in urine. . As a result, although the oxypurine concentration was negative, the higher the oxypurine concentration was, the more positive the urine sample was, and the reaction layer portion was strongly reddish purple.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図1】本発明の一具体的実施例にかかる試験紙であ
る。
FIG. 1 is a test paper according to a specific example of the present invention.

【図2】本発明の試験紙の製造法を記す図である。FIG. 2 is a diagram showing a method for producing the test paper of the present invention.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

1 試験紙 2 ろ紙 3 展開層部分 4 反応層部分 5,6 未含浸層部分 1 Test paper 2 Filter paper 3 Development layer part 4 Reaction layer part 5,6 Unimpregnated layer part

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 基材上に、展開層およびを反応層の2層
を形成し、展開層部分にアスコルビン酸オキシダーゼ、
ペルオキシダーゼ、N−エチル−N−(2−ヒドロキシ
−3−スルホプロピル)−m−トルイジン ナトリウム
塩を含浸させ、反応層部分に4−アミノアンチピリン、
キサンチンオキシダーゼを含浸させたことを特徴とする
尿中オキシプリン検出用試験紙。
1. A development layer and two reaction layers are formed on a substrate, and ascorbic acid oxidase is provided in the development layer portion.
Peroxidase, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m-toluidine sodium salt was impregnated, and 4-aminoantipyrine was added to the reaction layer portion.
A test paper for detecting oxypurine in urine, which is impregnated with xanthine oxidase.
【請求項2】 基材が、ろ紙、ガラス繊維またはプラス
チック素材からなる不織布である請求項1に記載の尿中
オキシプリン検出用試験紙。
2. The test paper for detecting oxypurine in urine according to claim 1, wherein the base material is a filter paper, a non-woven fabric made of a glass fiber or a plastic material.
【請求項3】 基剤がろ紙である請求項1に記載の尿中
オキシプリン検出用試験紙。
3. The test paper for detecting oxypurine in urine according to claim 1, wherein the base is a filter paper.
【請求頂4】 粘稠剤、緩衝剤、D−マンニトール、牛
血清アルブミンを更に含浸させた請求項1に記載の尿中
オキシプリン検出用試験紙。
4. The test paper for detecting oxypurine in urine according to claim 1, which is further impregnated with a thickener, a buffer, D-mannitol, and bovine serum albumin.
【請求項5】 粘稠剤がポリビニルアルコール、ポリア
クリルアミド、ゼラチン、カルボキシメチルセルロー
ス、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウムから
選択され、緩衝剤がクエン酸ナトリウム−水酸化ナトリ
ウム、ベロナールナトリウム−塩酸、第一リン酸カリウ
ム−第二リン酸ナトリウム、第一リン酸カリウム−水酸
化ナトリウムから選択される請求項1に記載の尿中オキ
シプリン検出用試験紙。
5. The thickener is selected from polyvinyl alcohol, polyacrylamide, gelatin, carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone and sodium alginate, and the buffer is sodium citrate-sodium hydroxide, veronal sodium-hydrochloric acid, monophosphoric acid. The test paper for detecting oxypurine in urine according to claim 1, which is selected from potassium-dibasic sodium phosphate and monobasic potassium phosphate-sodium hydroxide.
【請求項6】 展開層および反応層の間に未含浸の層を
設けることにより、妨害物質除去層を形成した請求項1
に記載の尿中オキシプリン検出用試験紙。
6. The interfering substance removing layer is formed by providing an unimpregnated layer between the spreading layer and the reaction layer.
The test paper for detecting oxypurine in urine according to [4].
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013187302A1 (en) * 2012-06-14 2013-12-19 テルモ株式会社 Test paper
CN111896671A (en) * 2020-07-28 2020-11-06 上海中医药大学 Screening method of xanthine oxidase inhibitor

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