JPH06256279A - 新規含臭素化合物 - Google Patents
新規含臭素化合物Info
- Publication number
- JPH06256279A JPH06256279A JP8663693A JP8663693A JPH06256279A JP H06256279 A JPH06256279 A JP H06256279A JP 8663693 A JP8663693 A JP 8663693A JP 8663693 A JP8663693 A JP 8663693A JP H06256279 A JPH06256279 A JP H06256279A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- logepsilon
- benzene
- cleavage
- spectrum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 新たな抗腫瘍活性を有する化合物を提供す
る。 【構成】 構造式（１） 【化１】 で示される、（４Ｚ，６Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１４Ｅ，１
６Ｚ）−１１−ブロモ−３，１２−ジヒドロキシ−２，
２，４，１０−テトラメチル−４，６，８，１０，１
４，１６−アイコサヘキサエン−１８−インアミドは、
クラスリア属海綿から得られた新規含臭素化合物であ
り、イトマキヒトデ成熟卵の卵割を抑制し、ヒトミエロ
イド細胞に対して抗腫瘍活性を示す。
る。 【構成】 構造式（１） 【化１】 で示される、（４Ｚ，６Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１４Ｅ，１
６Ｚ）−１１−ブロモ−３，１２−ジヒドロキシ−２，
２，４，１０−テトラメチル−４，６，８，１０，１
４，１６−アイコサヘキサエン−１８−インアミドは、
クラスリア属海綿から得られた新規含臭素化合物であ
り、イトマキヒトデ成熟卵の卵割を抑制し、ヒトミエロ
イド細胞に対して抗腫瘍活性を示す。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規な含臭素化合物に
関する。更に詳細には、クラスリア（Ｃｌａｔｈｒｉ
ａ）属海綿由来の、抗腫瘍活性を有する新規な含臭素化
合物に関する。
関する。更に詳細には、クラスリア（Ｃｌａｔｈｒｉ
ａ）属海綿由来の、抗腫瘍活性を有する新規な含臭素化
合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、海産無脊椎動物に含まれる生理活
性物質が注目されており、細胞障害活性を指標に、海洋
無脊椎動物より抗腫瘍活性物質を精製した例が多数報告
されている（例えば、特開昭５８−２９７３７、特開昭
５９−２１９２４６号公報、日本化学会編・化学総説Ｎ
ｏ．２５「海洋天然物化学」１９７９年等を参照）。
性物質が注目されており、細胞障害活性を指標に、海洋
無脊椎動物より抗腫瘍活性物質を精製した例が多数報告
されている（例えば、特開昭５８−２９７３７、特開昭
５９−２１９２４６号公報、日本化学会編・化学総説Ｎ
ｏ．２５「海洋天然物化学」１９７９年等を参照）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの多く
は、腫瘍細胞に対する細胞障害活性を指標に見出された
化合物であり、毒性が強いために制癌剤としての実用化
は困難であった。
は、腫瘍細胞に対する細胞障害活性を指標に見出された
化合物であり、毒性が強いために制癌剤としての実用化
は困難であった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、これらの
点に鑑み、制癌剤の重要な作用機作の一つである有糸体
細胞分裂阻害を評価する新しいアッセイ系を開発した。
この系はイトマキヒトデ（Ａｓｔｅｒｉａ ｐｅｃｔｉ
ｎｉｆｅｒａ）の卵成熟と受精卵の卵割に対する薬剤の
影響を調べるアッセイ系である。即ち、卵成熟を抑えず
に卵割を抑える化合物は、非特異的毒性を伴わない選択
的細胞分裂阻害剤である可能性が高いことになる。
点に鑑み、制癌剤の重要な作用機作の一つである有糸体
細胞分裂阻害を評価する新しいアッセイ系を開発した。
この系はイトマキヒトデ（Ａｓｔｅｒｉａ ｐｅｃｔｉ
ｎｉｆｅｒａ）の卵成熟と受精卵の卵割に対する薬剤の
影響を調べるアッセイ系である。即ち、卵成熟を抑えず
に卵割を抑える化合物は、非特異的毒性を伴わない選択
的細胞分裂阻害剤である可能性が高いことになる。
【０００５】本発明者等は、先にこの系を用い、一糸状
菌の培養濾液から卵成熟を抑えずに卵割を抑える化合物
を見出しアフィディコリンと同定した（Ｓ．Ｉｋｅｇａ
ｍｉｅｔ．ａｌ．，Ａｇｒｉ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，
４３巻 １６１頁 １９７９年）。この化合物は、予想
通り特定の細胞反応を抑制する有糸体細胞分裂阻害剤で
あり（Ｓ．Ｉｋｅｇａｍｉ ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒ
ｅ ２７５巻 ４５８頁 １９７８年）、マウスの白血
病細胞の増殖を抑える活性を有していた。
菌の培養濾液から卵成熟を抑えずに卵割を抑える化合物
を見出しアフィディコリンと同定した（Ｓ．Ｉｋｅｇａ
ｍｉｅｔ．ａｌ．，Ａｇｒｉ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，
４３巻 １６１頁 １９７９年）。この化合物は、予想
通り特定の細胞反応を抑制する有糸体細胞分裂阻害剤で
あり（Ｓ．Ｉｋｅｇａｍｉ ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒ
ｅ ２７５巻 ４５８頁 １９７８年）、マウスの白血
病細胞の増殖を抑える活性を有していた。
【０００６】本発明者等は、このアッセイ系を海産無脊
椎動物からの生理活性物質の探索研究に応用し、鋭意研
究を行った結果、クラスリア属海綿から、構造式（１）
椎動物からの生理活性物質の探索研究に応用し、鋭意研
究を行った結果、クラスリア属海綿から、構造式（１）
【０００７】
【化２】
【０００８】で示されるクラスリンアミドと命名した新
規含臭素化合物を単離し、この化合物がヒトミエロイド
細胞に対して抗腫瘍活性を有することを見出し、本発明
を完成した。
規含臭素化合物を単離し、この化合物がヒトミエロイド
細胞に対して抗腫瘍活性を有することを見出し、本発明
を完成した。
【０００９】即ち、本発明によれば、構造式（１）で示
される抗腫瘍活性を有する新規含臭素化合物が提供でき
る。
される抗腫瘍活性を有する新規含臭素化合物が提供でき
る。
【００１０】本発明の化合物は、クラスリア属海綿を原
料に、これを細切の後、メタノール等の水と混和する溶
媒で抽出し、この抽出物をベンゼン等の水と混和しない
溶媒に転溶した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーおよび高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等に
より単離精製することによって得ることができる。
料に、これを細切の後、メタノール等の水と混和する溶
媒で抽出し、この抽出物をベンゼン等の水と混和しない
溶媒に転溶した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーおよび高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等に
より単離精製することによって得ることができる。
【００１１】
【作用】本発明の化合物は、後述の評価例１に示すよう
に、イトマキヒトデ受精卵の卵割を、５０％阻害濃度
（以下、ＩＣ５０と略記する）が６ｎｇ／ｍｌという極
めて低い濃度で阻害したが、この濃度では卵成熟の抑制
は観察されなかった。このことは、本発明の化合物が選
択的に有糸体細胞分裂だけを阻害することを強く示唆す
るものである。また、本発明の化合物は、ヒトミエロイ
ド細胞（Ｋ−５６２株）に対してもＩＣ５０＝０．２μ
ｇ／ｍｌという低濃度で抗腫瘍活性を示した。即ち、本
発明の化合物は、生化学試薬や制癌剤として有用である
ばかりか、水産業にとって有害なイトマキヒトデの駆除
等に応用され得る有用な化合物である。
に、イトマキヒトデ受精卵の卵割を、５０％阻害濃度
（以下、ＩＣ５０と略記する）が６ｎｇ／ｍｌという極
めて低い濃度で阻害したが、この濃度では卵成熟の抑制
は観察されなかった。このことは、本発明の化合物が選
択的に有糸体細胞分裂だけを阻害することを強く示唆す
るものである。また、本発明の化合物は、ヒトミエロイ
ド細胞（Ｋ−５６２株）に対してもＩＣ５０＝０．２μ
ｇ／ｍｌという低濃度で抗腫瘍活性を示した。即ち、本
発明の化合物は、生化学試薬や制癌剤として有用である
ばかりか、水産業にとって有害なイトマキヒトデの駆除
等に応用され得る有用な化合物である。
【００１２】
【実施例】次いで、実施例に基づいて本発明を更に詳細
に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。
に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるも
のではない。
【００１３】実施例１．クラスリンアミドの製造 クラスリンアミドの精製工程においては、後述の評価例
１で述べるイトマキヒトデ受精卵の卵割阻害活性を指標
に用いた。
１で述べるイトマキヒトデ受精卵の卵割阻害活性を指標
に用いた。
【００１４】愛媛県佐田岬で採集したクラスリア属海綿
１０ｇを細切して、５０ｍｌのメタノールで、４℃で４
回抽出した。抽出液を減圧下に濃縮乾固して５４０ｍｇ
のメタノール抽出物を得た。
１０ｇを細切して、５０ｍｌのメタノールで、４℃で４
回抽出した。抽出液を減圧下に濃縮乾固して５４０ｍｇ
のメタノール抽出物を得た。
【００１５】これに５０ｍｌのベンゼンを加え、５０ｍ
ｌの精製水で３回分液分配すると、活性はベンゼン層に
のみ認められた。このベンゼン層を減圧下に濃縮乾固さ
せて、１６０ｍｇのベンゼン可溶画分を得た。
ｌの精製水で３回分液分配すると、活性はベンゼン層に
のみ認められた。このベンゼン層を減圧下に濃縮乾固さ
せて、１６０ｍｇのベンゼン可溶画分を得た。
【００１６】このベンゼン可溶画分を１ｍｌのベンゼン
に溶解し、Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００（和光純薬製）
のカラム（φ１．２ｃｍ×１８ｃｍ Ｖｔ＝２０ｍｌ）
に付し、（１）ベンゼン８０ｍｌ、（２）２０％酢酸エ
チル／ベンゼン８０ｍｌ、（３）４０％酢酸エチル／ベ
ンゼン８０ｍｌ、（４）６０％酢酸エチル／ベンゼン８
０ｍｌ、（５）８０％酢酸エチル／ベンゼン８０ｍｌ、
（６）酢酸エチル８０ｍｌの順に展開した。４ｍｌずつ
分画して活性を測定すると、活性は４０％酢酸エチル／
ベンゼン溶出区分（フラクション１）と６０％酢酸エチ
ル／ベンゼン溶出区分（フラクション２）とに分かれて
溶出された。クラスリンアミドはこのフラクション２よ
り得られた。
に溶解し、Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００（和光純薬製）
のカラム（φ１．２ｃｍ×１８ｃｍ Ｖｔ＝２０ｍｌ）
に付し、（１）ベンゼン８０ｍｌ、（２）２０％酢酸エ
チル／ベンゼン８０ｍｌ、（３）４０％酢酸エチル／ベ
ンゼン８０ｍｌ、（４）６０％酢酸エチル／ベンゼン８
０ｍｌ、（５）８０％酢酸エチル／ベンゼン８０ｍｌ、
（６）酢酸エチル８０ｍｌの順に展開した。４ｍｌずつ
分画して活性を測定すると、活性は４０％酢酸エチル／
ベンゼン溶出区分（フラクション１）と６０％酢酸エチ
ル／ベンゼン溶出区分（フラクション２）とに分かれて
溶出された。クラスリンアミドはこのフラクション２よ
り得られた。
【００１７】フラクション２を減圧下に濃縮乾固させ
て、２．１４ｍｇの固形物を得た。これを約１００μｌ
のエタノールに溶解し、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＳＩＬ１５
０−５（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）のカラム（φ４．
６ｍｍ×１５０ｍｍ）を用いる高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）に付し、５％エタノール／ヘキサン
１．０ｍｌ／ｍｉｎで展開した。３２０ｎｍの吸収でモ
ニターしながら分取し、活性を測定すると、活性は保持
時間約１５分（ピーク１）、保持時間約２７分（ピーク
２）および保持時間約３２分（ピーク３）の３つの吸収
ピークに合致して認められた。クラスリンアミドはこの
ピーク２より得られた。
て、２．１４ｍｇの固形物を得た。これを約１００μｌ
のエタノールに溶解し、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＳＩＬ１５
０−５（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）のカラム（φ４．
６ｍｍ×１５０ｍｍ）を用いる高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）に付し、５％エタノール／ヘキサン
１．０ｍｌ／ｍｉｎで展開した。３２０ｎｍの吸収でモ
ニターしながら分取し、活性を測定すると、活性は保持
時間約１５分（ピーク１）、保持時間約２７分（ピーク
２）および保持時間約３２分（ピーク３）の３つの吸収
ピークに合致して認められた。クラスリンアミドはこの
ピーク２より得られた。
【００１８】分取を繰り返してピーク２を集め、減圧濃
縮の後凍結乾燥して白色粉末０．８４ｍｇを得た。この
ものは、上述のＨＰＬＣの系で分析したところ、保持時
間約２７分の箇所にシングルピークを与えた。
縮の後凍結乾燥して白色粉末０．８４ｍｇを得た。この
ものは、上述のＨＰＬＣの系で分析したところ、保持時
間約２７分の箇所にシングルピークを与えた。
【００１９】実施例２．クラスリンアミドの構造決定 クラスリンアミドの構造決定は分光学的方法により行っ
た。即ち、日立製作所製Ｍ−８０Ｂ型質量分析器でＳＩ
ＭＳを測定したところ、ｍ／ｚ４８６および４８４に
〔Ｍ＋Ｎａ〕＋のイオンピークが、ｍ／ｚ４６４および
４６２に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のイオンピークが観察され、その
同位体存在比から、分子内に臭素の存在が示唆された。
た。即ち、日立製作所製Ｍ−８０Ｂ型質量分析器でＳＩ
ＭＳを測定したところ、ｍ／ｚ４８６および４８４に
〔Ｍ＋Ｎａ〕＋のイオンピークが、ｍ／ｚ４６４および
４６２に〔Ｍ＋Ｈ〕＋のイオンピークが観察され、その
同位体存在比から、分子内に臭素の存在が示唆された。
【００２０】また、日本分光製ＦＴ／ＩＲ−５３００型
赤外線分光器でＩＲスペクトルを測定したところ、３３
５０ｃｍ−１に水酸基の吸収、２２００ｃｍ−１にＣ−
Ｃ三重結合の吸収、１６６０ｃｍ−１にアミド基の吸収
が観察され、分子内に水酸基、Ｃ−Ｃ三重結合およびア
ミド基の存在が示唆された。
赤外線分光器でＩＲスペクトルを測定したところ、３３
５０ｃｍ−１に水酸基の吸収、２２００ｃｍ−１にＣ−
Ｃ三重結合の吸収、１６６０ｃｍ−１にアミド基の吸収
が観察され、分子内に水酸基、Ｃ−Ｃ三重結合およびア
ミド基の存在が示唆された。
【００２１】島津製作所製ＵＶ−１６０Ａ型紫外線分光
器でＵＶスペクトルを測定したところ、３３６ｎｍ（ｌ
ｏｇε＝４．４６）、３２１ｎｍ（ｌｏｇε＝４．５
８）、３０８ｎｍ（ｌｏｇε＝４．４７）および２６７
ｎｍ（ｌｏｇε＝４．２９）に極大吸収が観察された。
器でＵＶスペクトルを測定したところ、３３６ｎｍ（ｌ
ｏｇε＝４．４６）、３２１ｎｍ（ｌｏｇε＝４．５
８）、３０８ｎｍ（ｌｏｇε＝４．４７）および２６７
ｎｍ（ｌｏｇε＝４．２９）に極大吸収が観察された。
【００２２】さらに、日本分光製ＤＩＰ−３６０型旋光
計で測定した比旋光度は、〔α〕Ｄ＝＋１４６°（ｃ＝
０．０１６４，ＭｅＯＨ，２５℃）と測定された。
計で測定した比旋光度は、〔α〕Ｄ＝＋１４６°（ｃ＝
０．０１６４，ＭｅＯＨ，２５℃）と測定された。
【００２３】日本電子製ＧＳＸ−５００型核磁気共鳴測
定器（５００ＭＨｚ）で１Ｈ−ＮＭＲを測定したとこ
ろ、次のようなデータが得られた（溶媒ＣＤ３ＯＤ，Ｔ
ＭＳ基準のδｐｐｍ）。
定器（５００ＭＨｚ）で１Ｈ−ＮＭＲを測定したとこ
ろ、次のようなデータが得られた（溶媒ＣＤ３ＯＤ，Ｔ
ＭＳ基準のδｐｐｍ）。
【００２４】１．０５（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，３
Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．９８（ｄ，３Ｈ，Ｊ
＝２Ｈｚ），２．０１（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｔ，２
Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），４．７０（ｓ，１Ｈ），４．８０
（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），５．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ
＝１１，２Ｈｚ），５．７２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１５，
８Ｈｚ），６．１０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１Ｈｚ），６．
２３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１Ｈｚ），６．４４（ｔ，１
Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３Ｈ
ｚ），６．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５，１１Ｈｚ），
６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５Ｈｚ）および６．９８
（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５，１１Ｈｚ）
Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．９８（ｄ，３Ｈ，Ｊ
＝２Ｈｚ），２．０１（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｔ，２
Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），４．７０（ｓ，１Ｈ），４．８０
（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），５．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ
＝１１，２Ｈｚ），５．７２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１５，
８Ｈｚ），６．１０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１Ｈｚ），６．
２３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１Ｈｚ），６．４４（ｔ，１
Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３Ｈ
ｚ），６．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５，１１Ｈｚ），
６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５Ｈｚ）および６．９８
（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５，１１Ｈｚ）
【００２５】また、ＧＳＸ−５００型核磁気共鳴測定器
（１２５ＭＨｚ）で１３Ｃ−ＮＭＲを測定したとこ
ろ、、次のようなデータが得られた（溶媒ＣＤ３ＯＤ，
ＴＭＳ基準のδｐｐｍ）。
（１２５ＭＨｚ）で１３Ｃ−ＮＭＲを測定したとこ
ろ、、次のようなデータが得られた（溶媒ＣＤ３ＯＤ，
ＴＭＳ基準のδｐｐｍ）。
【００２６】１８３．３（Ｃ，Ｃ−１），１４１．１
（Ｃ，Ｃ−４），１３９．５（ＣＨ，Ｃ−１６），１３
６．０（ＣＨ，Ｃ−９），１３３．７（Ｃ，Ｃ−１
０），１３２．７（Ｃ，Ｃ−１１），１３２．５（Ｃ
Ｈ，Ｃ−１４），１３１．６（ＣＨ，Ｃ−１５），１２
９．９（ＣＨ，Ｃ−７），１２８．８（ＣＨ，Ｃ−
８），１２７．０（ＣＨ，Ｃ−６），１２５．８（Ｃ
Ｈ，Ｃ−５），１０９．７（ＣＨ，Ｃ−１７），９２．
５（Ｃ，Ｃ＝１９），７７．６（Ｃ，Ｃ−１８），７
５．５（ＣＨ，Ｃ−３），７１．４（ＣＨ，Ｃ−１
２），４６．７（Ｃ，Ｃ−２），４０．４（ＣＨ２，Ｃ
−１３），２６．３（ＣＨ３，Ｃ−２１），２２．０
（ＣＨ３，Ｃ−２２），２０．０（ＣＨ３，Ｃ−２
３），１６．１（ＣＨ３，Ｃ−２４）および４．０（Ｃ
Ｈ３，Ｃ−２０）
（Ｃ，Ｃ−４），１３９．５（ＣＨ，Ｃ−１６），１３
６．０（ＣＨ，Ｃ−９），１３３．７（Ｃ，Ｃ−１
０），１３２．７（Ｃ，Ｃ−１１），１３２．５（Ｃ
Ｈ，Ｃ−１４），１３１．６（ＣＨ，Ｃ−１５），１２
９．９（ＣＨ，Ｃ−７），１２８．８（ＣＨ，Ｃ−
８），１２７．０（ＣＨ，Ｃ−６），１２５．８（Ｃ
Ｈ，Ｃ−５），１０９．７（ＣＨ，Ｃ−１７），９２．
５（Ｃ，Ｃ＝１９），７７．６（Ｃ，Ｃ−１８），７
５．５（ＣＨ，Ｃ−３），７１．４（ＣＨ，Ｃ−１
２），４６．７（Ｃ，Ｃ−２），４０．４（ＣＨ２，Ｃ
−１３），２６．３（ＣＨ３，Ｃ−２１），２２．０
（ＣＨ３，Ｃ−２２），２０．０（ＣＨ３，Ｃ−２
３），１６．１（ＣＨ３，Ｃ−２４）および４．０（Ｃ
Ｈ３，Ｃ−２０）
【００２７】以上のデータから、クラスリンアミドの構
造を〔図１〕に示すように、（４Ｚ，６Ｚ，８Ｅ，１０
Ｚ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−ブロモ−３，１２−ジヒ
ドロキシ−２，２，４，１０−テトラメチル−４，６，
８，１０，１４，１６−アイコサヘキサエン−１８−イ
ンアミドと決定した。
造を〔図１〕に示すように、（４Ｚ，６Ｚ，８Ｅ，１０
Ｚ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−ブロモ−３，１２−ジヒ
ドロキシ−２，２，４，１０−テトラメチル−４，６，
８，１０，１４，１６−アイコサヘキサエン−１８−イ
ンアミドと決定した。
【００２８】
【図１】
【００２９】評価例１．イトマキヒトデ受精卵の卵割阻
害活性の測定 イトマキヒトデ卵母細胞を１０−６Ｍの１−メチルアデ
ニンを含む海水に１０分間浸漬して卵成熟を誘起させた
後、海水に測定すべき試料を加えると、卵成熟の阻害を
観察することができる。
害活性の測定 イトマキヒトデ卵母細胞を１０−６Ｍの１−メチルアデ
ニンを含む海水に１０分間浸漬して卵成熟を誘起させた
後、海水に測定すべき試料を加えると、卵成熟の阻害を
観察することができる。
【００３０】充分に成熟した成熟卵に精子を加えて受精
させ、受精膜が完全に形成されるのを確認した後、軽く
遠心分離して受精卵を得る。
させ、受精膜が完全に形成されるのを確認した後、軽く
遠心分離して受精卵を得る。
【００３１】得られた受精卵を種々の濃度の試料を含む
海水中で、２０℃で１時間培養した後、卵割の状態を観
察して、試料濃度と卵割している受精卵の割合を確率対
数用紙にプロットして、５０％卵割を阻害するサンプル
濃度（ＩＣ５０）を算出する。
海水中で、２０℃で１時間培養した後、卵割の状態を観
察して、試料濃度と卵割している受精卵の割合を確率対
数用紙にプロットして、５０％卵割を阻害するサンプル
濃度（ＩＣ５０）を算出する。
【００３２】こうして得られた、クラスリンアミドの製
造工程に於ける各フラクションの収量と比活性（ＩＣ
５０値）を〔表１〕に示す。
造工程に於ける各フラクションの収量と比活性（ＩＣ
５０値）を〔表１〕に示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】評価例２．ヒトミエロイド細胞に対する細
胞障害活性の測定 ヒトミエロイド細胞に対する細胞障害活性の測定は、Ｃ
ａｒｍｉｃｈａｅｌらの、３−〔４，５−ジメチルチア
ゾール−２−イル〕−２，５−ジフェニルテトラゾリウ
ム ブロマイド（略称ＭＴＴ）を用いるＭＴＴ法（Ｊ．
Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４７巻 ９３６頁１９８７年）に準
拠して行った。
胞障害活性の測定 ヒトミエロイド細胞に対する細胞障害活性の測定は、Ｃ
ａｒｍｉｃｈａｅｌらの、３−〔４，５−ジメチルチア
ゾール−２−イル〕−２，５−ジフェニルテトラゾリウ
ム ブロマイド（略称ＭＴＴ）を用いるＭＴＴ法（Ｊ．
Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４７巻 ９３６頁１９８７年）に準
拠して行った。
【００３５】クラスリンアミドを１００μｇ／ｍｌの濃
度になるようにジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）に
溶解し、遮光下に４℃に保存した。活性測定時にこの保
存溶液を、無血清ＲＰＭ１６４０培地を用いて初濃度１
μｇ／ｍｌに希釈し、次いで同じ培地で２倍づつ段階希
釈を行った。これにヒトミエロイド細胞（Ｋ−５６２細
胞）を３×１０４ｃｅｌｌ／ｍｌになるように播種し、
３７℃でＣＯ２インキュベータで４８時間培養した。培
養終了後、ＭＴＴ法により生細胞数を測定し、生細胞数
と試料濃度とを片対数紙にプロットして、細胞を５０％
死滅させるサンプル濃度（ＩＣ５０）を求めた。同時に
ポジティブコントロールとしてアドリアマイシンのＩＣ
５０を求めた。また、細胞に対するＤＭＳＯの影響を調
べるために、クラスリンアミドの初濃度に対応するＤＭ
ＳＯを培地に添加して、生細胞数を調べた。
度になるようにジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）に
溶解し、遮光下に４℃に保存した。活性測定時にこの保
存溶液を、無血清ＲＰＭ１６４０培地を用いて初濃度１
μｇ／ｍｌに希釈し、次いで同じ培地で２倍づつ段階希
釈を行った。これにヒトミエロイド細胞（Ｋ−５６２細
胞）を３×１０４ｃｅｌｌ／ｍｌになるように播種し、
３７℃でＣＯ２インキュベータで４８時間培養した。培
養終了後、ＭＴＴ法により生細胞数を測定し、生細胞数
と試料濃度とを片対数紙にプロットして、細胞を５０％
死滅させるサンプル濃度（ＩＣ５０）を求めた。同時に
ポジティブコントロールとしてアドリアマイシンのＩＣ
５０を求めた。また、細胞に対するＤＭＳＯの影響を調
べるために、クラスリンアミドの初濃度に対応するＤＭ
ＳＯを培地に添加して、生細胞数を調べた。
【００３６】その結果、クラスリンアミドのＩＣ５０は
０．２μｇ／ｍｌと測定され、ポジティブコントロール
のアドリアマイシン（ＩＣ５０＝０．０５μｇ／ｍｌ）
の１／４程度の細胞障害活性を有することが明らかとな
った。また、ＤＭＳＯの影響は認められなかった。
０．２μｇ／ｍｌと測定され、ポジティブコントロール
のアドリアマイシン（ＩＣ５０＝０．０５μｇ／ｍｌ）
の１／４程度の細胞障害活性を有することが明らかとな
った。また、ＤＭＳＯの影響は認められなかった。
【００３７】
【発明の効果】本発明の化合物であるクラスリンアミド
は、海綿動物より得られた新規な含臭素化合物であり、
ＩＣ５０＝６ｎｇ／ｍｌという低濃度でイトマキヒトデ
受精卵の卵割を阻害するが、この濃度ではイトマキヒト
デの未成熟卵の成熟を抑える作用を示さない。また、受
精そのものには何ら影響を及ぼさない。さらに、バフン
ウニ受精卵に対しても、イトマキヒトデと同様に卵割を
阻害する作用を示す。これらのことから、クラスリンア
ミドは生化学試薬として有用であるばかりか、水産業に
とって有害なイトマキヒトデの駆除等に応用され得る有
用な化合物である。
は、海綿動物より得られた新規な含臭素化合物であり、
ＩＣ５０＝６ｎｇ／ｍｌという低濃度でイトマキヒトデ
受精卵の卵割を阻害するが、この濃度ではイトマキヒト
デの未成熟卵の成熟を抑える作用を示さない。また、受
精そのものには何ら影響を及ぼさない。さらに、バフン
ウニ受精卵に対しても、イトマキヒトデと同様に卵割を
阻害する作用を示す。これらのことから、クラスリンア
ミドは生化学試薬として有用であるばかりか、水産業に
とって有害なイトマキヒトデの駆除等に応用され得る有
用な化合物である。
【００３８】さらに、本発明の化合物であるクラスリン
アミドは、ヒトミエロイド（Ｋ−５６２）細胞に対して
ＩＣ５０＝０．２μｇ／ｍｌという低濃度で細胞障害活
性を示し、制癌剤としての有用性も示唆される。
アミドは、ヒトミエロイド（Ｋ−５６２）細胞に対して
ＩＣ５０＝０．２μｇ／ｍｌという低濃度で細胞障害活
性を示し、制癌剤としての有用性も示唆される。
【図１】〔図１〕はクラスリンアミドの構造式と、ＥＩ
−ＭＳでのマス開裂パターンおよびＮＭＲのシグナルの
同定を示した図面である。図中、波線と矢印で示した数
字は、クラスリンアミドのＥＩ−ＭＳでのマス開裂パタ
ーンを示し、水素原子の側に記載された数字は１Ｈ−Ｎ
ＭＲのシグナルとその同定を示し、炭素原子の側に記載
された斜体数字は、１３Ｃ−ＮＭＲのシグナルとその同
定を示す。
−ＭＳでのマス開裂パターンおよびＮＭＲのシグナルの
同定を示した図面である。図中、波線と矢印で示した数
字は、クラスリンアミドのＥＩ−ＭＳでのマス開裂パタ
ーンを示し、水素原子の側に記載された数字は１Ｈ−Ｎ
ＭＲのシグナルとその同定を示し、炭素原子の側に記載
された斜体数字は、１３Ｃ−ＮＭＲのシグナルとその同
定を示す。
Claims (1)
- 【請求項１】下記の構造式（１） 【化１】 で示される新規含臭素化合物、（４Ｚ，６Ｚ，８Ｅ，１
０Ｚ，１４Ｅ，１６Ｚ）−１１−ブロモ−３，１２−ジ
ヒドロキシ−２，２，４，１０−テトラメチル−４，
６，８，１０，１４，１６−アイコサヘキサエン−１８
−インアミド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8663693A JPH06256279A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | 新規含臭素化合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8663693A JPH06256279A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | 新規含臭素化合物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06256279A true JPH06256279A (ja) | 1994-09-13 |
Family
ID=13892514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8663693A Pending JPH06256279A (ja) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | 新規含臭素化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06256279A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0985623A2 (en) * | 1998-09-07 | 2000-03-15 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Emergency stop device for elevator |
-
1993
- 1993-03-09 JP JP8663693A patent/JPH06256279A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0985623A2 (en) * | 1998-09-07 | 2000-03-15 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Emergency stop device for elevator |
| EP0985623A3 (en) * | 1998-09-07 | 2002-03-06 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Emergency stop device for elevator |
| US6564907B1 (en) | 1998-09-07 | 2003-05-20 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Elevator having emergency stop device |
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