JPH06220008A - Method for producing alliin - Google Patents

Method for producing alliin

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JPH06220008A
JPH06220008A JP1023993A JP1023993A JPH06220008A JP H06220008 A JPH06220008 A JP H06220008A JP 1023993 A JP1023993 A JP 1023993A JP 1023993 A JP1023993 A JP 1023993A JP H06220008 A JPH06220008 A JP H06220008A
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JP
Japan
Prior art keywords
garlic
alliin
crude
extract
liquid chromatography
Prior art date
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Withdrawn
Application number
JP1023993A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
Shigeru Uchiyama
茂 内山
Kazuhiko Oniyama
和彦 鬼山
Masao Seki
昌夫 関
Masatada Yamashita
正忠 山下
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
IHI Corp
Original Assignee
IHI Corp
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Publication date
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Publication of JPH06220008A publication Critical patent/JPH06220008A/en
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Abstract

PURPOSE:To easily and efficiently purify alliin found in garlic as raw material, without degradation thereof by efficient extraction and using a liquid chromatography with a reversed-phase-based column. CONSTITUTION:The aimed alliin can be obtained from garlic as raw material through the following consecutive processes in this order: (1) heat treatment of raw material garlic is conducted in hot water so as to deactivate the alliinase contained in the garlic, (2) the garlic heat treated is crushed followed by addition of water to make a crude extract solution from the garlic, (3) this solution is put to a liquid chromatography with a reversed-phase-based column to separate, purify and dispense the aimed alliin.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、にんにくに含まれる有
用物質であるアリインの生産方法に関し、にんにく細胞
から効率よく容易にアリインを分離、精製する技術に関
する。
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing alliin, which is a useful substance contained in garlic, and to a technique for efficiently and easily separating and purifying alliin from garlic cells.

【0002】[0002]

【従来の技術】にんにくの細胞中で生産される物質の中
で最も重要な物質の一つにアリチアミンがある。このア
リチアミンはにんにく細胞中に含まれるアリインから合
成される。即ち、この前駆物質のアリインが酵素アリイ
ナーゼの作用によって中間物質のアリシンとなり、さら
にアリシンとチアミン(ビタミンB1チオール型)とか
ら、アリチアミン合成酵素の作用によってアリチアミン
が合成される。
2. Description of the Prior Art One of the most important substances produced in cells of garlic is alliamine. This alliamine is synthesized from alliin contained in garlic cells. That is, the precursor alliin becomes an intermediate allicin by the action of the enzyme alliinase, and further, allicin is synthesized from allicin and thiamine (vitamin B1 thiol type) by the action of alliamine synthase.

【0003】アリチアミンは、 抗菌性作用:急性および慢性の伝染性胃腸炎、赤痢、
チフスなどの殺菌作用、 健胃作用:食欲増進・消化促進など健胃・整腸作用、
駆虫作用、 循環器系作用:動脈硬化症、高血圧症、冷え性に有
効、 発汗作用:発熱時の発汗作用、去炎・利尿硬化と解毒
作用、 強壮・強精作用:肉体疲労回復効果を持つことから強
壮・強精、眼性疲労に効く、などの優れた薬理効果を有
していることが知られ、その利用増大が図られている。
[0003] Alithiamine has an antibacterial action: acute and chronic infectious gastroenteritis, dysentery,
Bactericidal action of typhoid etc., stomachic action: stomachic and intestinal action such as appetite promotion and digestion promotion,
Antiparasitic action, circulatory system action: Effective for arteriosclerosis, hypertension, coldness, sweating action: sweating action at fever, exfoliation / diuretic hardening and detoxification action, tonic / strong action: physical fatigue recovery effect It is known that it has excellent pharmacological effects such as tonicity / severity and eye fatigue, and its use is being increased.

【0004】[0004]

【発明が解決しようとする課題】このアリチアミンを効
率的ににんにくから生産するために、にんにく培養細胞
からアリチアミンを生産する培養法が検討されつつあ
る。この培養技術を確立するためには、アリチアミン生
産性の的確な評価方法が不可決である。ところが現段階
では分析のための標準試料として用いるアリチアミンの
精製標本を入手するのが困難であり、アリチアミン生産
性の的確な評価が難しかった。また、アリチアミンの前
駆物質であるアリインについては、にんにく中に含まれ
るアリイナーゼによって速やかにアリシンなどに変化し
てしまうために、にんにく中から安定してアリインを分
離精製する技術が確立されていない。
In order to efficiently produce this alliamine from garlic, a culture method for producing alliamine from cultured garlic cells is being studied. In order to establish this culture technique, an accurate evaluation method for the productivity of alliamine is inevitable. However, at this stage, it was difficult to obtain a purified sample of alliamine used as a standard sample for analysis, and it was difficult to accurately evaluate the alliamine productivity. In addition, since alliin, which is a precursor of alliamine, is quickly converted to allicin and the like by alliinase contained in garlic, a technique for stably separating and purifying alliin from garlic has not been established.

【0005】本発明は上記事情に鑑みてなされたもの
で、にんにく細胞を用いたアリチアミン生産技術の確立
のための基礎として、アリチアミンの前駆物質であるア
リインをにんにく細胞中から効率よく容易に分離、精製
する方法の提供を目的としている。
The present invention has been made in view of the above circumstances, and as a basis for establishing an alliamine production technique using garlic cells, alliamine which is a precursor of alliamine is efficiently and easily separated from garlic cells. The purpose is to provide a method for purification.

【0006】[0006]

【課題を解決するための手段】本発明は、原料にんにく
を熱水中に入れて含有されるアリイナーゼを失活させる
ように熱処理する工程と、熱処理したにんにくを破砕し
て水を加えてにんにく粗抽出液を作製する工程と、逆相
系カラムを用いた液体クロマトグラフィーによって上記
にんにく粗抽出液中からアリインを分離精製して分取す
る工程とを備えたアリインの生産方法である。
Means for Solving the Problems The present invention comprises a step of heat-treating raw garlic in hot water to inactivate the contained alliinase, and a step of crushing the heat-treated garlic and adding water to the crude garlic. A method for producing alliin, comprising a step of producing an extract and a step of separating and purifying alliin from the above-mentioned crude garlic extract by liquid chromatography using a reversed-phase column and fractionating.

【0007】また、上記アリインの生産方法において
は、上記にんにく粗抽出液を不活性ガス雰囲気下で保持
しつつ、上記分取工程を行なうことが望ましい。
In the method for producing alliin, it is desirable to carry out the fractionation step while holding the crude garlic extract in an inert gas atmosphere.

【0008】[0008]

【作用】原料にんにくを熱水中に入れて含有されるアリ
イナーゼを失活させるように熱処理し、これを破砕して
水を加えてにんにく粗抽出液を作製することにより、原
料にんにく中のアリインが分解することなく、効率よく
抽出することができる。また、逆相系カラムを用いた液
体クロマトグラフィーを用いてにんにく粗抽出液からア
リインを分取することによって、この液体クロマトグラ
フィーのみでアリインを容易に効率よく精製することが
できる。
[Action] Put the raw garlic in hot water and heat it to inactivate the contained alliinase, crush it and add water to make a crude garlic extract. It can be efficiently extracted without decomposition. Also, by collecting alliin from the crude garlic extract using liquid chromatography using a reversed phase column, alliin can be easily and efficiently purified only by this liquid chromatography.

【0009】[0009]

【実施例】以下、本発明を詳細に説明する。本発明によ
るアリインの生産方法は、原料にんにくを熱水中に入れ
て含有されるアリイナーゼを失活させるように熱処理す
る工程と、熱処理したにんにくを破砕して水を加えてに
んにく粗抽出液を作製する工程と、逆相系カラムを用い
た液体クロマトグラフィーによって上記にんにく粗抽出
液中からアリインを分離精製して分取する工程とを備え
ている。ここで用いる原料にんにくは、市販のにんにく
(球根部)や茎などの栽培品、或いは組織培養法によっ
て生産されるにんにく細胞などが用いられる。
The present invention will be described in detail below. The method for producing alliin according to the present invention comprises a step of heat-treating raw garlic in hot water to inactivate the contained ariinase, and crushing the heat-treated garlic to add water to prepare a crude garlic extract. And a step of separating and purifying alliin from the crude garlic extract by liquid chromatography using a reversed-phase column. As the raw material garlic used here, commercially available garlic (bulb part), cultivated products such as stems, or garlic cells produced by the tissue culture method are used.

【0010】そして、原料にんにくは、熱水中に入れて
含有されるアリイナーゼを失活させるように熱処理す
る。この熱処理条件は、望ましくは80〜100℃の熱
水中に10〜30分程度とする。この熱処理によって原
料にんにく中のアリイナーゼが失活し、アリインの分解
を阻止し得るので、以後の工程でのアリインの経時的な
分解を抑制することが可能である。
The raw garlic is heat-treated so as to inactivate the alliinase contained in hot water. This heat treatment condition is preferably about 10 to 30 minutes in hot water at 80 to 100 ° C. This heat treatment deactivates the alliinase in the raw garlic and can prevent the decomposition of alliin, so that it is possible to suppress the decomposition of alliin over time in the subsequent steps.

【0011】ついで、熱処理した原料にんにくを破砕
し、水を加えてアリインを抽出してにんにく粗抽出液と
する。このにんにくの破砕には、高性能ミキサーやホモ
ジナイザー等が好適に用いられる。また、粗抽出液中の
原料にんにくの割合は、原料にんにくの濃度が1〜20
重量%の範囲とするのが好ましく、特に5重量%程度と
するのが好ましい。破砕されたにんにくには不溶性繊維
分などが含まれており、熱処理にんにくの破砕物に水を
加え、攪拌した液は、ろ過或いは遠心分離によって不溶
成分を取り除く。にんにく粗抽出液は瓶に入れ、窒素ガ
ス、炭酸ガス、ヘリウムガス、アルゴンガスなどの不活
性ガスを満たし、25℃以下、望ましくは4℃以下の冷
暗所で保存するのが望ましい。
Then, the heat-treated raw garlic is crushed and water is added to extract alliin to obtain a crude garlic extract. A high performance mixer, a homogenizer, or the like is preferably used for crushing the garlic. The ratio of raw garlic in the crude extract is such that the concentration of raw garlic is 1 to 20.
It is preferably in the range of wt%, particularly preferably about 5 wt%. The crushed garlic contains insoluble fiber components and the like, and water is added to the crushed material of heat-treated garlic and the stirred liquid removes insoluble components by filtration or centrifugation. It is desirable that the crude garlic extract is put in a bottle, filled with an inert gas such as nitrogen gas, carbon dioxide gas, helium gas, or argon gas, and stored in a cool dark place at 25 ° C. or lower, preferably 4 ° C. or lower.

【0012】ついで、不溶成分を取り除いたにんにく粗
抽出液を、逆相系カラムを用いた液体クロマトグラフィ
ーによって分離し、アリインを分離精製する。ここで用
いるカラムとしては、例えば、デュポン社製逆相カラム
ZORBAX TMS等が好適に用いられる。この種
の逆相系カラムを用いてにんにく粗抽出液のクロマトグ
ラフィーを行う場合には、カラムににんにく粗抽出液を
供給してアリインを吸着させた後、純水を溶離液として
分離し、UV検出器を用い、アリインの特異吸収波長で
ある210nm程度を測定波長として溶離液のUV吸収
率をモニタしておくことにより、アリイン含有フラクシ
ョンを容易に得ることが可能である。
Then, the crude garlic extract from which insoluble components have been removed is separated by liquid chromatography using a reverse phase column to separate and purify alliin. As the column used here, for example, reverse phase column ZORBAX TMS manufactured by DuPont or the like is preferably used. When the crude garlic extract is chromatographed using this type of reversed-phase column, the crude garlic extract is supplied to the column to adsorb alliin, and then purified water is separated as an eluent to remove UV. The ariin-containing fraction can be easily obtained by using a detector and monitoring the UV absorption rate of the eluent with a measurement wavelength of about 210 nm, which is the specific absorption wavelength of ariin.

【0013】にんにく粗抽出液を、逆相系カラムを用い
た液体クロマトグラフィーによって分離する場合には、
後述する実験例に詳細を記すが、アリインの流出画分に
は、アリイン以外の他の成分が殆ど存在せず、逆相系カ
ラムを用いた液体クロマトグラフィーのみで精製アリイ
ンを分取することが可能である。
When the crude garlic extract is separated by liquid chromatography using a reverse phase column,
As will be described in detail in Experimental Examples described later, the efflux fraction of alliin contains almost no components other than alliin, and the purified alliin can be collected only by liquid chromatography using a reversed phase column. It is possible.

【0014】また、この液体クロマトグラフィーを実施
する場合において、連続大量分取を行う場合には、にん
にく粗抽出液は不安定であり、空気中にされされること
により不溶成分が析出して白濁しやすく、カラムの分離
効率の低下を招くおそれがあるので、にんにく粗抽出液
は瓶に入れ、窒素ガス、炭酸ガス、ヘリウムガス、アル
ゴンガスなどの不活性ガスを満たしておく。これによっ
てにんにく粗抽出液の白濁を防止でき、連続分取が可能
となる。
Further, in the case of carrying out this liquid chromatography, in the case of carrying out continuous large-scale fractionation, the crude garlic extract is unstable, and when it is exposed to the air, insoluble components are precipitated and become cloudy. The garlic crude extract is put in a bottle and filled with an inert gas such as nitrogen gas, carbon dioxide gas, helium gas, or argon gas, because it is easy to do so and the separation efficiency of the column may be lowered. As a result, cloudiness of the crude garlic extract can be prevented and continuous fractionation becomes possible.

【0015】このように、本発明によるアリインの生産
方法は、原料にんにくを熱水中に入れて含有されるアリ
イナーゼを失活させるように熱処理する工程、熱処理し
たにんにくを破砕して水を加えてにんにく粗抽出液を作
製する工程、及び逆相系カラムを用いた液体クロマトグ
ラフィーによって粗抽出液中からアリインを分離精製し
て分取する工程とを順次行うことにより、原料にんにく
中からアリインを生産する。そして原料にんにくを熱水
中に入れて含有されるアリイナーゼを失活させるように
熱処理し、これを破砕して水を加えてにんにく粗抽出液
を作製することにより、原料にんにく中のアリインを分
解させることなく、効率よく抽出することができる。ま
た、逆相系カラムを用いた液体クロマトグラフィーを用
いてにんにく粗抽出液からアリインを分取することによ
って、この液体クロマトグラフィーのみで精製アリイン
を分取することができる。従って、本発明によれば、原
料にんにく中から容易に効率良く、しかも安定的にアリ
インの分離精製することができる。
As described above, the method for producing alliin according to the present invention comprises the steps of heat-treating the raw garlic in hot water to inactivate the contained ariinase, crushing the heat-treated garlic and adding water. Ariin is produced from raw garlic by sequentially performing the step of preparing a crude garlic extract and the step of separating and purifying and purifying alliin from the crude extract by liquid chromatography using a reverse phase column. To do. Then, the raw garlic is placed in hot water and heat-treated to inactivate the contained alliinase, and this is crushed and water is added to make a crude garlic extract, thereby decomposing alliin in the raw garlic. It can be efficiently extracted. Further, by collecting the alliin from the crude garlic extract using liquid chromatography using a reversed phase column, the purified alliin can be collected only by this liquid chromatography. Therefore, according to the present invention, it is possible to easily and efficiently isolate and purify alliin from the raw garlic.

【0016】(実験例)まず、原料にんにく中から効率
よくアリインを抽出するためのプロセスについて検討し
た。図1に本実験例におけるにんにく粗抽出液の作製プ
ロセスの概要を示した。この図に示す通り、原料のにん
にく球根は外皮を剥して秤量した後、15分間沸騰水中
で煮沸して熱処理し、これを10000r.p.m.で1分間
ホモジナイズし、濾紙を用いて濾過し、この濾液を純水
を用いて100mlに定容し、にんにく粗抽出液(熱処
理)とした。一方、これと比較するために、外皮を剥し
たにんにくを秤量し、そのまま10000r.p.m.で1分
間ホモジナイズし、濾紙を用いて濾過し、この濾液を純
水を用いて100mlに定容し、にんにく粗抽出液(無
処理)とした。これらのにんにく粗抽出液は5重量%濃
度とした。また各粗抽出液は4℃以下の冷暗所に保存し
た。
Experimental Example First, a process for efficiently extracting alliin from raw garlic was examined. FIG. 1 shows an outline of the production process of the crude garlic extract in this experimental example. As shown in this figure, the raw material garlic bulbs were peeled and weighed, then boiled in boiling water for 15 minutes for heat treatment, homogenized at 10000 rpm for 1 minute, and filtered with a filter paper. Was made up to a constant volume of 100 ml with pure water to obtain a crude garlic extract (heat treatment). On the other hand, in order to compare with this, the garlic peeled off is weighed, homogenized for 1 minute at 10000 rpm, filtered through a filter paper, and the filtrate is made up to 100 ml with pure water. The crude extract (untreated) was used. These crude garlic extract solutions had a concentration of 5% by weight. Each crude extract was stored in a cool dark place at 4 ° C or lower.

【0017】ついで、これらの粗抽出液中のアリインを
HPLCシステムBIP−1(日本分光株式会社製)を
用いて分析した。カラムはデュポン社製逆相カラムZO
RBAX TMS(4.6mm×25cm)を用いた。
この分析条件は、 ・温度:25℃ ・流量:0.5ml/min. ・溶離液:純水 ・検出器:UV検出器(測定波長;210nm) とした。これら粗抽出液のアリイン分析結果を図2及び
図3に示した。
Then, the alliin in these crude extracts was analyzed using HPLC system BIP-1 (manufactured by JASCO Corporation). The column is reverse phase column ZO manufactured by DuPont.
RBAX TMS (4.6 mm × 25 cm) was used.
The analysis conditions were: temperature: 25 ° C., flow rate: 0.5 ml / min, eluent: pure water, detector: UV detector (measurement wavelength; 210 nm). The results of alliin analysis of these crude extracts are shown in FIGS. 2 and 3.

【0018】図2及び図3に示した通り、熱処理したに
んにく粗抽出液(図2)では、アリインを示すピークが
他のピークと明瞭に分離されていたのに対し、にんにく
粗抽出液無処理(図3)では、アリインらしき低く幅広
のピークが観察されたが、熱処理したものと比べアリイ
ンの分離状態が不良であった。さらに、無処理のものは
時間の経過とともにアリインのピークが著しく減少し
た。これは、無処理のものでは液中にアリイナーゼが残
存しているため、アリインが経時的に分解されるためと
考えられる。一方、熱処理したものではアリインの減少
が殆ど見られず、分析結果は安定していた。この分析結
果から、にんにくを沸騰水中で15分程度煮沸する熱処
理を行うことによって、逆相系カラムを用いた液体クロ
マトグラフィーにおけるアリインの分離に悪影響を及ぼ
すような物質が大幅に減少し、熱処理した粗抽出液は逆
相系カラムを用いた液体クロマトグラフィーによる分離
精製操作のみで精製アリインを分取することが可能であ
ることが判明した。
As shown in FIGS. 2 and 3, in the heat-treated garlic crude extract (FIG. 2), the peak indicating alliin was clearly separated from the other peaks, whereas the garlic crude extract was not treated. In (FIG. 3), a wide peak which is low and seems to be alliin was observed, but the separated state of alliin was poor as compared with the one subjected to the heat treatment. Furthermore, the untreated one showed a marked decrease in the peak of alliin over time. It is considered that this is because alliin is decomposed with time because untreated ones have allyinase remaining in the liquid. On the other hand, the heat-treated product showed almost no decrease in alliin, and the analysis results were stable. From the results of this analysis, by performing a heat treatment of boiling garlic in boiling water for about 15 minutes, the substances that adversely affect the separation of alliin in liquid chromatography using a reversed phase column were significantly reduced, and the heat treatment was performed. It was found that the crude extract can collect purified aliin only by a separation and purification operation by liquid chromatography using a reverse phase column.

【0019】ついで、上記にんにく粗抽出液(熱処理)
を限外濾過し、その濾液中のアリインについて、先の逆
相系カラムを用いた液体クロマトグラフィーと同様の分
離操作を行ってアリインの分離状態を調べた。その結果
を図4(a)〜(d)に示した。なお、限外濾過の条件
は透過分子量範囲が10万分子量まで(図4(a))、5
万分子量まで(図4(b))、3万分子量まで(図4(c))
及び1万分子量まで(図4(d))の4種とした。
Then, the above garlic crude extract (heat treatment)
Was ultrafiltered, and the alliin in the filtrate was subjected to the same separation operation as in the liquid chromatography using the reverse phase column described above to examine the separated state of alliin. The results are shown in FIGS. 4 (a) to 4 (d). The ultrafiltration conditions are such that the permeation molecular weight range is up to 100,000 molecular weight (Fig. 4 (a)).
Up to 10,000 molecular weight (Fig. 4 (b)) Up to 30,000 molecular weight (Fig. 4 (c))
And up to 10,000 molecular weight (Fig. 4 (d)).

【0020】これら図4(a)〜(d)に示す通り、限
外濾過した濾液を分析した結果、10万〜5万分子量ま
での限外濾過を行ったものでは、先のにんにく粗抽出液
(熱処理)の場合と同じくアリインが明瞭に分離され、
また、3万〜1万分子量までの限外濾過を行ったもので
は、先のにんにく粗抽出液(熱処理)の場合と同じくア
リインが明瞭に分離されたものの、アリインのピークが
小さくなり、透過分子量が小さい限外濾過を行うとアリ
インの損失が大きくなった。これらの結果から、限外濾
過法により粗抽出液の処理を行わなくとも、熱処理した
にんにくからの粗抽出液を用いて逆相系カラムを用いた
液体クロマトグラフィーによって効率良く精製アリイン
を得ることが可能であることが確認された。
As shown in FIGS. 4 (a) to 4 (d), as a result of analysis of the ultrafiltrated filtrate, in the case where ultrafiltration up to 100,000 to 50,000 molecular weight was carried out, the crude garlic extract was used. As in the case of (heat treatment), alliin is clearly separated,
Also, in the case of performing ultrafiltration up to a molecular weight of 30,000 to 10,000, although the alliin was clearly separated as in the case of the crude garlic extract (heat treatment), the peak of the alliin was reduced and the permeation molecular weight was decreased. The smaller the ultrafiltration, the greater the loss of alliin. From these results, it is possible to efficiently obtain purified alliin by liquid chromatography using a reversed-phase column using the crude extract from heat-treated garlic, even if the crude extract is not treated by the ultrafiltration method. It was confirmed that it was possible.

【0021】ついで、にんにく粗抽出液からアリインを
分取した。アリイン画分の分取には、HPLCシステム
PX−8010(東ソー株式会社製)を用い、分取用逆
相カラムZORBAX TMS(9.4mm×25c
m)を使ってアリインを分離した。図5に、にんにく粗
抽出液(熱処理)の分取クロマトグラムを示し、図6
に、にんにく粗抽出液(無処理)の分取クロマトグラム
を示した。図5に示したように、にんにく粗抽出液(熱
処理)を用いた場合にはアリインのピークが明瞭に分離
されるが、図6のにんにく粗抽出液(無処理)では、ア
リインのピークが確認されなかった。ついで図5に示し
たにんにく粗抽出液(熱処理)で検出された各ピーク画
分I,II,IIIについて、上述したHPLCシステムB
IP−1を用いて分析した。これらの分析結果を図7
(a)〜(c)に示した。図7(a)〜(c)に示した
ように、分取クロマトグラフィーによって確認された3
つの分取画分のうち、保持時間からIII画分のものがア
リインであることが判明した。さらに、このIII画分の
試料について、GC−MS(ガスクロマトグラフィー−
質量分析)を実施した結果、この分取画分IIIの分子量
は177でありアリインに間違い無いことを確認した
(図8)。
Then, alliin was collected from the crude garlic extract. An HPLC system PX-8010 (manufactured by Tosoh Corporation) was used to collect the alliin fraction, and a reverse phase column ZORBAX TMS (9.4 mm × 25 c) for separation was used.
m) was used to separate alliin. FIG. 5 shows a preparative chromatogram of the crude garlic extract (heat treatment).
The preparative chromatogram of the crude garlic extract (untreated) is shown in FIG. As shown in FIG. 5, when the crude garlic extract (heat treatment) was used, the peak of ariin was clearly separated, but in the crude garlic extract (untreated) of FIG. 6, the peak of ariin was confirmed. Was not done. Then, for each of the peak fractions I, II and III detected in the crude garlic extract (heat treatment) shown in FIG.
It was analyzed using IP-1. Figure 7 shows the results of these analyses.
It shows in (a)-(c). As shown in Figures 7 (a)-(c), 3 confirmed by preparative chromatography
Of the three fractions, the retention time revealed that the fraction III was alliin. Furthermore, GC-MS (Gas Chromatography-
As a result of mass spectrometry, it was confirmed that the molecular weight of this fractionated fraction III was 177, which was definitely ariin (FIG. 8).

【0022】また、にんにく粗抽出液(熱処理)を用
い、HPLCシステムPX−8010(カラムには分取
用逆相カラムZORBAX TMS 9.4mm×25
cm)を用いてアリインを分取する際の溶離液の流量を
変え、アリインの分取に最適な流量を求めた。図9
(a)〜(c)にその結果を示した。図9(a)〜
(c)の結果より、アリインを分取する際の溶離液の流
量は0.5〜1.5ml/min.でよいが、特に流量を0.
5〜1.0ml/min.程度にするとアリインの分離状態
が良好となった。
Further, using a crude garlic extract (heat treatment), an HPLC system PX-8010 (a preparative reverse-phase column ZORBAX TMS 9.4 mm × 25) was used.
cm) was used to change the flow rate of the eluent during the fractionation of alliin, and the optimal flow rate for the fractionation of alliin was determined. Figure 9
The results are shown in (a) to (c). 9 (a)-
From the result of (c), the flow rate of the eluent at the time of fractionating alliin may be 0.5 to 1.5 ml / min.
When the amount was about 5 to 1.0 ml / min., The separated state of alliin was good.

【0023】以上の実験結果から、原料にんにく中から
アリインを効率よく安定して分離精製するためには、熱
処理してアリイナーゼを失活したにんにくを破砕し、含
有されるアリインを抽出したにんにく粗抽出液を用い、
これを直接逆相系カラムを用いた液体クロマトグラフィ
ーによってアリインを分離精製する方法が望ましいこと
が判明した。また、本実験例におけるHPLCを用いた
逆相法による最適分取条件は次の通りであった。 ・温度:25℃ ・流量:0.5ml/min. ・溶離液:純水 ・カラム:ZORBAX TMS(9.4mm×25c
m) ・検出器:UV検出器(測定波長;210nm) また、にんにく粗抽出液(熱処理)からアリインを分取
する際、連続大量分取を行う場合、にんにく粗抽出液を
空気中にさらしていると、不溶成分が析出して白濁を生
じ易い。白濁した試料はアリインの回収率が悪化すると
ともに不溶成分がカラムに蓄積するなどの悪影響を招く
おそれがある。この粗抽出液の白濁を防止する方法につ
いて検討した結果、粗抽出液を空気に触れさせなければ
長時間保存しても白濁を生じないことが分かった。具体
的には、粗抽出液をガラス瓶に入れ、窒素ガス、ヘリウ
ムガス、アルゴンガスなどの不活性ガスを満たすことに
より、白濁を防止し得る。これによって粗抽出液を安定
して保存し、連続分取することが可能となった。
From the above experimental results, in order to efficiently and stably separate and purify alliin from the raw garlic, the garlic containing the ariinase-inactivated garlic was crushed, and the contained alliin was extracted by the crude garlic extraction. Using liquid,
It was found that a method for directly separating and purifying alliin by liquid chromatography using a reverse phase column is desirable. The optimum preparative conditions by the reverse phase method using HPLC in this experimental example were as follows. -Temperature: 25 ° C-Flow rate: 0.5 ml / min.-Eluent: pure water-Column: ZORBAX TMS (9.4 mm x 25 c
m) ・ Detector: UV detector (measurement wavelength; 210 nm) Also, when aliquots are to be collected from the garlic crude extract (heat treatment), when the continuous large-volume fractionation is performed, the garlic crude extract is exposed to air. If it is present, insoluble components are likely to be precipitated to cause white turbidity. A cloudy sample may have a bad effect such as a poor recovery rate of alliin and accumulation of insoluble components in the column. As a result of investigating a method for preventing cloudiness of the crude extract, it was found that cloudiness does not occur even if the crude extract is stored for a long time unless the crude extract is exposed to air. Specifically, cloudiness can be prevented by placing the crude extract in a glass bottle and filling it with an inert gas such as nitrogen gas, helium gas, or argon gas. As a result, the crude extract can be stably stored and continuously collected.

【0024】[0024]

【発明の効果】以上説明したように、本発明によるアリ
インの生産方法は、原料にんにくを熱水中に入れて含有
されるアリイナーゼを失活させるように熱処理する工程
と、熱処理したにんにくを破砕して水を加えてにんにく
粗抽出液を作製する工程と、逆相系カラムを用いた液体
クロマトグラフィーによって上記にんにく粗抽出液中か
らアリインを分離精製して分取する工程とを順次行うこ
とにより原料にんにく中からアリインを生産する。そし
て原料にんにくを熱水中に入れて含有されるアリイナー
ゼを失活させるように熱処理し、これを破砕して水を加
えてにんにく粗抽出液を作製することにより、原料にん
にく中のアリインを分解させることなく、効率よく抽出
することができる。また、逆相系カラムを用いた液体ク
ロマトグラフィーを用いてにんにく粗抽出液からアリイ
ンを分取することによって、この液体クロマトグラフィ
ーのみでアリインを容易に効率よく精製することができ
る。従って、本発明によれば、原料にんにく中から容易
に効率良く、しかも安定的にアリインを分離精製するこ
とができる。
INDUSTRIAL APPLICABILITY As described above, the method for producing alliin according to the present invention comprises the steps of heat-treating raw garlic in hot water to inactivate the contained ariinase, and crushing the heat-treated garlic. By adding water to produce a crude garlic extract, and a step of separating and purifying and collecting alliin from the above garlic crude extract by liquid chromatography using a reversed-phase column. Alliin is produced from garlic. Then, the raw garlic is placed in hot water and heat-treated to inactivate the contained alliinase, and this is crushed and water is added to make a crude garlic extract, thereby decomposing alliin in the raw garlic. It can be efficiently extracted. Also, by collecting alliin from the crude garlic extract using liquid chromatography using a reversed phase column, alliin can be easily and efficiently purified only by this liquid chromatography. Therefore, according to the present invention, alliin can be easily and efficiently separated and purified from raw garlic easily and efficiently.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図1】本発明に係る実験例におけるにんにく粗抽出液
の生産プロセスを説明するためのフロー図である。
FIG. 1 is a flow chart for explaining a production process of crude garlic extract in an experimental example according to the present invention.

【図2】粗抽出液(熱処理)のアリイン分析クロマトグ
ラムを示す図である。
FIG. 2 is a diagram showing an alliin analysis chromatogram of a crude extract (heat treatment).

【図3】粗抽出液(無処理)のアリイン分析クロマトグ
ラムを示す図である。
FIG. 3 is a diagram showing an alliin analysis chromatogram of a crude extract (untreated).

【図4】粗抽出液を限外濾過した後の液のアリイン分析
結果を示し、(a)は10万分子量用の限外濾過の透過
液、(b)は5万分子量用の限外濾過の透過液、(c)
は3万分子量用の限外濾過の透過液、(d)は3万分子
量用の限外濾過の透過液のクロマトグラムを示す図であ
る。
FIG. 4 shows the results of alliin analysis of the liquid after ultrafiltration of the crude extract, (a) is a permeate of ultrafiltration for 100,000 molecular weight, (b) is ultrafiltration for 50,000 molecular weight. Permeate, (c)
[Fig. 3] is a diagram showing a chromatogram of an ultrafiltration permeate for 30,000 molecular weight, and (d) is a chromatogram of the ultrafiltration permeate for 30,000 molecular weight.

【図5】粗抽出液(熱処理)のアリイン分取クロマトグ
ラムを示す図である。
FIG. 5 is a view showing an aliin preparative chromatogram of a crude extract (heat treatment).

【図6】粗抽出液(無処理)のアリイン分取クロマトグ
ラムを示す図である。
FIG. 6 is a diagram showing an aliin preparative chromatogram of a crude extract (untreated).

【図7】図5に示す画分I〜IIIのアリイン分析結果を
示し、(a)は分取画分I、(b)は分取画分(II)、
(c)は分取画分IIIの分析クロマトグラムを示す図で
ある。
FIG. 7 shows the results of alliin analysis of fractions I to III shown in FIG. 5, (a) being a fraction fraction I, (b) being a fraction fraction (II),
(C) is a figure which shows the analytical chromatogram of the fractionated fraction III.

【図8】分取画分IIIのGC−MS分析結果を示す図で
ある。
FIG. 8 is a diagram showing a GC-MS analysis result of a fractionated fraction III.

【図9】粗抽出液(熱処理)のアリイン分取クロマトグ
ラフィーにおける流量の変化とアリインの分離状態の関
係を調べた結果を示し、(a)は流量0.5ml/min.、
(b)は流量1.0ml/min.、(c)は流量1.5ml/min.
とした時の分取クロマトグラムを示す図である。
FIG. 9 shows the results of examining the relationship between the change in the flow rate of the crude extract (heat treatment) in preparative chromatography of allyin and the separation state of allyin, (a) showing the flow rate of 0.5 ml / min.
(B) is a flow rate of 1.0 ml / min., (C) is a flow rate of 1.5 ml / min.
It is a figure which shows the preparative chromatogram at the time of.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山下 正忠 神奈川県横浜市磯子区新中原町1番地 石 川島播磨重工業株式会社技術研究所内 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued Front Page (72) Inventor Masatada Yamashita Shin-Nakahara-cho, Isogo-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Ishi Kawashima Harima Heavy Industries Co., Ltd. Technical Research Institute

Claims (2)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 原料にんにくを熱水中に入れて含有され
るアリイナーゼを失活させるように熱処理する工程と、
熱処理したにんにくを破砕して水を加えてにんにく粗抽
出液を作製する工程と、逆相系カラムを用いた液体クロ
マトグラフィーによって上記にんにく粗抽出液中からア
リインを分離精製して分取する工程とを備えたことを特
徴とするアリインの生産方法。
1. A step of heat-treating a raw garlic in hot water so as to inactivate the contained alliinase,
A step of crushing the heat-treated garlic and adding water to prepare a crude garlic extract, and a step of separating and purifying alliin from the above garlic crude extract by liquid chromatography using a reversed-phase column, and A method for producing alliin, comprising:
【請求項2】 上記にんにく粗抽出液を不活性ガス雰囲
気下で保持しつつ、上記分取工程を行なうことを特徴と
する請求項1記載のアリインの生産方法。
2. The method for producing alliin according to claim 1, wherein the fractionation step is performed while holding the crude garlic extract under an inert gas atmosphere.
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