JPH06118059A - キャピラリー電気泳動による結合定数の測定方法 - Google Patents
キャピラリー電気泳動による結合定数の測定方法Info
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- JPH06118059A JPH06118059A JP4265198A JP26519892A JPH06118059A JP H06118059 A JPH06118059 A JP H06118059A JP 4265198 A JP4265198 A JP 4265198A JP 26519892 A JP26519892 A JP 26519892A JP H06118059 A JPH06118059 A JP H06118059A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】サンプルの検出時間及びミセルの検出時間に基
づいて、ミセル内のサンプルと泳動溶媒中のサンプルと
の容量比ｋ′を求め、この容量比ｋ′及びミセルを形成
するイオン性物質の濃度〔Ｍ〕0 、サンプル濃度〔Ｓ〕
0 の関係を、式 １／ｋa ＝〔Ｍ〕0 ／ｋ′−〔Ｓ〕0 ／（１＋ｋ′） に当てはめることによって、サンプルがミセルへ取り込
まれる場合の平衡定数である結合係数ｋa を求める。 【効果】キャピラリー電気泳動法において、実測データ
に十分フィットする理論式を採用して、結合係数ｋa を
正確に予測することができるので、各種の結合反応を定
量的かつ十分正確に解析することができるようになる。
づいて、ミセル内のサンプルと泳動溶媒中のサンプルと
の容量比ｋ′を求め、この容量比ｋ′及びミセルを形成
するイオン性物質の濃度〔Ｍ〕0 、サンプル濃度〔Ｓ〕
0 の関係を、式 １／ｋa ＝〔Ｍ〕0 ／ｋ′−〔Ｓ〕0 ／（１＋ｋ′） に当てはめることによって、サンプルがミセルへ取り込
まれる場合の平衡定数である結合係数ｋa を求める。 【効果】キャピラリー電気泳動法において、実測データ
に十分フィットする理論式を採用して、結合係数ｋa を
正確に予測することができるので、各種の結合反応を定
量的かつ十分正確に解析することができるようになる。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、キャピラリー内にイオ
ン性物質を溶解させた泳動溶媒を満たし、キャピラリー
に沿って電位勾配をかけながら、キャピラリー内の一部
にサンプル溶液を注入して、サンプルをイオン性物質の
分子又はミセル（ミセルとは、分子が何個か集まってで
きた分子集合体をいう。以下、イオン性物質の単分子及
びミセルを総称して単に「ミセル」という）に結合させ
又は取り込ませた状態（以下、結合される場合及び取り
込まれる場合を総称して単に「結合」という）で電気泳
動させるキャピラリー電気泳動において、サンプル分子
が前記ミセルに結合される場合の平衡定数（結合定数と
いう）を精度よく求めることのできる結合定数の測定方
法に関するものである。
ン性物質を溶解させた泳動溶媒を満たし、キャピラリー
に沿って電位勾配をかけながら、キャピラリー内の一部
にサンプル溶液を注入して、サンプルをイオン性物質の
分子又はミセル（ミセルとは、分子が何個か集まってで
きた分子集合体をいう。以下、イオン性物質の単分子及
びミセルを総称して単に「ミセル」という）に結合させ
又は取り込ませた状態（以下、結合される場合及び取り
込まれる場合を総称して単に「結合」という）で電気泳
動させるキャピラリー電気泳動において、サンプル分子
が前記ミセルに結合される場合の平衡定数（結合定数と
いう）を精度よく求めることのできる結合定数の測定方
法に関するものである。
【０００２】キャピラリー電気泳動法とは、一般には、
サンプル分子が水相中に存在するときは移動しないがイ
オン性ミセルに結合されているときはミセルとともに移
動するので、ミセルに可溶化される割合の大きいほど移
動速度が大きくなるのを利用して、サンプルの分離を行
う方法である。また、結合係数とは、サンプルＳとミセ
ルＭとが同じ溶液の中に存在する場合に、サンプルＳが
ミセルＭと結合する割合をいい、サンプルＳとミセルＭ
との複合体をＭＳと書くと、結合係数ｋa は、 ｋa ＝〔ＭＳ〕／〔Ｍ〕〔Ｓ〕 (1) と定義される。〔ＭＳ〕はミセルに結合されたサンプル
濃度、〔Ｍ〕はサンプルと結合していないミセルの濃
度、〔Ｓ〕とミセルと結合していないサンプル濃度であ
る。容量比ｋ′はミセル内のサンプルのモル数と、水相
中のサンプルのモル数との比であるから、「モル数」を
「濃度」に置き換えれば、 ｋ′＝〔ＭＳ〕／〔Ｓ〕 (2) と書けるものである。
サンプル分子が水相中に存在するときは移動しないがイ
オン性ミセルに結合されているときはミセルとともに移
動するので、ミセルに可溶化される割合の大きいほど移
動速度が大きくなるのを利用して、サンプルの分離を行
う方法である。また、結合係数とは、サンプルＳとミセ
ルＭとが同じ溶液の中に存在する場合に、サンプルＳが
ミセルＭと結合する割合をいい、サンプルＳとミセルＭ
との複合体をＭＳと書くと、結合係数ｋa は、 ｋa ＝〔ＭＳ〕／〔Ｍ〕〔Ｓ〕 (1) と定義される。〔ＭＳ〕はミセルに結合されたサンプル
濃度、〔Ｍ〕はサンプルと結合していないミセルの濃
度、〔Ｓ〕とミセルと結合していないサンプル濃度であ
る。容量比ｋ′はミセル内のサンプルのモル数と、水相
中のサンプルのモル数との比であるから、「モル数」を
「濃度」に置き換えれば、 ｋ′＝〔ＭＳ〕／〔Ｓ〕 (2) と書けるものである。
【０００３】
【従来の技術】例えば医薬品は、脂質膜の透過性によっ
て経口吸収性、組織への移行性が異なるので、薬効評価
には脂質との結合係数ないし容量比の測定が有効であ
る。この結合係数ないし容量比の測定を行う方法の一つ
として、キャピラリー電気泳動法が注目されている。
て経口吸収性、組織への移行性が異なるので、薬効評価
には脂質との結合係数ないし容量比の測定が有効であ
る。この結合係数ないし容量比の測定を行う方法の一つ
として、キャピラリー電気泳動法が注目されている。
【０００４】この方法によれば、界面活性剤溶液を細管
（キャピラリー）の中に満たし、キャピラリーの一端に
サンプルを注入して、キャピラリーに沿って電界をか
け、電気泳動によるサンプルの移動速度を測定して、一
定の関係式に当てはめることによって容量比ｋ′を測定
することができる。容量比ｋ′を求めるには、従来より
次の式が知られていた（寺部 茂「界面導電クロマトグ
ラフィー」島津科学器械ニュースpp.24-31,Vol.28,No.4
(1987,12)）。すなわち、容量比ｋ′は、電気泳動させ
た時の検出時間（保持時間）を用いて、 ｋ′＝（ｔR −ｔR,0 ）／ｔR,0 （１−ｔR ／ｔmc） (3) と表わされる。ここで、ｔR はサンプルの検出時間、ｔ
mcはミセル検出時間、ｔ R,0 はミセル濃度が０のときの
サンプルの検出時間である。
（キャピラリー）の中に満たし、キャピラリーの一端に
サンプルを注入して、キャピラリーに沿って電界をか
け、電気泳動によるサンプルの移動速度を測定して、一
定の関係式に当てはめることによって容量比ｋ′を測定
することができる。容量比ｋ′を求めるには、従来より
次の式が知られていた（寺部 茂「界面導電クロマトグ
ラフィー」島津科学器械ニュースpp.24-31,Vol.28,No.4
(1987,12)）。すなわち、容量比ｋ′は、電気泳動させ
た時の検出時間（保持時間）を用いて、 ｋ′＝（ｔR −ｔR,0 ）／ｔR,0 （１−ｔR ／ｔmc） (3) と表わされる。ここで、ｔR はサンプルの検出時間、ｔ
mcはミセル検出時間、ｔ R,0 はミセル濃度が０のときの
サンプルの検出時間である。
【０００５】一方、容量比ｋ′と分配係数Ｋとは、前記
文献によれば、 ｋ′＝ＫＶmc／Ｖaq＝ＫＶmc／（Ｖt −Ｖmc） (4) の関係がある。Ｖt は容器の体積、Ｖmcはミセルの体
積、Ｖaqは水相の体積である。ミセルの体積Ｖmcは、ミ
セルの濃度（界面活性剤濃度Ｃstから臨界ミセル濃度Ｃ
ＭＣを引いたもの）に部分比容ｖをかけて求めることが
できるので、 Ｖmc＝ｖ（Ｃst−ＣＭＣ）Ｖt と表される。したがって、(4) 式は、 ｋ′＝Ｋｖ（Ｃst−ＣＭＣ）／｛１−ｖ（Ｃst−ＣＭＣ）｝ (5) となる。サンプル濃度が低く、かつ、ＶmcがＶt より小
さい時には、(5) 式の分母を１とおけるので、 ｋ′＝Ｋｖ（Ｃst−ＣＭＣ） (6) となる。この式により分配係数Ｋを求めることができ
る。
文献によれば、 ｋ′＝ＫＶmc／Ｖaq＝ＫＶmc／（Ｖt −Ｖmc） (4) の関係がある。Ｖt は容器の体積、Ｖmcはミセルの体
積、Ｖaqは水相の体積である。ミセルの体積Ｖmcは、ミ
セルの濃度（界面活性剤濃度Ｃstから臨界ミセル濃度Ｃ
ＭＣを引いたもの）に部分比容ｖをかけて求めることが
できるので、 Ｖmc＝ｖ（Ｃst−ＣＭＣ）Ｖt と表される。したがって、(4) 式は、 ｋ′＝Ｋｖ（Ｃst−ＣＭＣ）／｛１−ｖ（Ｃst−ＣＭＣ）｝ (5) となる。サンプル濃度が低く、かつ、ＶmcがＶt より小
さい時には、(5) 式の分母を１とおけるので、 ｋ′＝Ｋｖ（Ｃst−ＣＭＣ） (6) となる。この式により分配係数Ｋを求めることができ
る。
【０００６】上の(6) 式から明らかなように、容量比
ｋ′と界面活性剤濃度Ｃstとは直線的な関係があること
が分かる。
ｋ′と界面活性剤濃度Ｃstとは直線的な関係があること
が分かる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】ところで、本願発明者
は、いろいろなサンプルについて、キャピラリー電気泳
動法を用いて容量比ｋ′を測定し、界面活性剤濃度Ｃst
との関係をプロットしていくと、必ずしも直線には載ら
ないことに気付いた。図４は、実測データの一例を示し
ている。縦軸は容量比ｋ′、横軸は界面活性剤濃度Ｃst
〔ｍＭ〕であり、測定値は三角点で示されている。測定
値を直線で近似するよりも、曲線で近似するほうがより
フィットすることが分かる。
は、いろいろなサンプルについて、キャピラリー電気泳
動法を用いて容量比ｋ′を測定し、界面活性剤濃度Ｃst
との関係をプロットしていくと、必ずしも直線には載ら
ないことに気付いた。図４は、実測データの一例を示し
ている。縦軸は容量比ｋ′、横軸は界面活性剤濃度Ｃst
〔ｍＭ〕であり、測定値は三角点で示されている。測定
値を直線で近似するよりも、曲線で近似するほうがより
フィットすることが分かる。
【０００８】このことは、容量比ｋ′と界面活性剤濃度
Ｃstとの関係は、必ずしも(6) 式で近似できないことを
示している。この理由は、従来の方法では、ミセルの体
積Ｖmcが全体の体積より小さいという条件は満たされて
いるが、「サンプル濃度が低い」という条件が満たされ
ていないからであると考えられる。
Ｃstとの関係は、必ずしも(6) 式で近似できないことを
示している。この理由は、従来の方法では、ミセルの体
積Ｖmcが全体の体積より小さいという条件は満たされて
いるが、「サンプル濃度が低い」という条件が満たされ
ていないからであると考えられる。
【０００９】そこで、前記(6) 式を導くときに行ったよ
うな一次近似を採用するのは正確性の点で十分でないと
推測される。そこで、本発明の目的は、キャピラリー電
気泳動法において上述の技術的課題を解決し、結合係数
を正確に測定することができる結合定数の測定方法を提
供することである。
うな一次近似を採用するのは正確性の点で十分でないと
推測される。そこで、本発明の目的は、キャピラリー電
気泳動法において上述の技術的課題を解決し、結合係数
を正確に測定することができる結合定数の測定方法を提
供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】前記の目的を達成するた
めの請求項１記載の結合定数の測定方法は、サンプルの
検出時間及びミセルの検出時間に基づいて、ミセル内の
サンプルと、泳動溶媒中のサンプルとの容量比ｋ′を求
め、この容量比ｋ′及びミセルを形成するイオン性物質
の濃度〔Ｍ〕0 、サンプル濃度〔Ｓ〕0 の関係を、式 １／ｋa ＝〔Ｍ〕0 ／ｋ′−〔Ｓ〕0 ／（１＋ｋ′） (7) に当てはめることによって、サンプルがミセルへ取り込
まれる場合の平衡定数である結合係数ｋa を求めるもの
である。
めの請求項１記載の結合定数の測定方法は、サンプルの
検出時間及びミセルの検出時間に基づいて、ミセル内の
サンプルと、泳動溶媒中のサンプルとの容量比ｋ′を求
め、この容量比ｋ′及びミセルを形成するイオン性物質
の濃度〔Ｍ〕0 、サンプル濃度〔Ｓ〕0 の関係を、式 １／ｋa ＝〔Ｍ〕0 ／ｋ′−〔Ｓ〕0 ／（１＋ｋ′） (7) に当てはめることによって、サンプルがミセルへ取り込
まれる場合の平衡定数である結合係数ｋa を求めるもの
である。
【００１１】
【作用】結合係数ｋa はすでに述べたように、 ｋa ＝〔ＭＳ〕／〔Ｍ〕〔Ｓ〕 (8) と定義され、容量比ｋ′はミセル内のサンプルのモル数
ｎmcと、水相中のサンプルのモル数ｎaqとの比ｎmc／ｎ
aqであるから、「モル数」を「モル濃度」に置き換えれ
ば、 ｋ′＝〔ＭＳ〕／〔Ｓ〕 (9) と書けるものである。
ｎmcと、水相中のサンプルのモル数ｎaqとの比ｎmc／ｎ
aqであるから、「モル数」を「モル濃度」に置き換えれ
ば、 ｋ′＝〔ＭＳ〕／〔Ｓ〕 (9) と書けるものである。
【００１２】電気泳動するキャピラリー中のサンプルの
濃度は、図５(c) に示すように、サンプルが一定以上の
濃度で存在する範囲（検出バンドという）にわたって一
定であるとし、サンプルと結合していないミセルの濃度
〔Ｍ〕とサンプルと結合したミセル濃度〔ＭＳ〕との
和、すなわち総ミセルの濃度を〔Ｍ〕0 と表し、ミセル
と結合していないサンプル濃度〔Ｓ〕とミセルに結合さ
れたサンプル濃度〔ＭＳ〕との和、すなわち総サンプル
濃度を〔Ｓ〕0 と表わす。
濃度は、図５(c) に示すように、サンプルが一定以上の
濃度で存在する範囲（検出バンドという）にわたって一
定であるとし、サンプルと結合していないミセルの濃度
〔Ｍ〕とサンプルと結合したミセル濃度〔ＭＳ〕との
和、すなわち総ミセルの濃度を〔Ｍ〕0 と表し、ミセル
と結合していないサンプル濃度〔Ｓ〕とミセルに結合さ
れたサンプル濃度〔ＭＳ〕との和、すなわち総サンプル
濃度を〔Ｓ〕0 と表わす。
【００１３】上の(8) 式は、 ｋa ＝〔ＭＳ〕／（〔Ｍ〕0 −〔ＭＳ〕）（〔Ｓ〕0 −〔ＭＳ〕） (10) と書け、(9) 式は、 ｋ′＝〔ＭＳ〕／（〔Ｓ〕0 −〔ＭＳ〕） (11) と書ける。
【００１４】(10)式と(11)式から、〔ＭＳ〕を消去する
と、 １／ｋa ＝〔Ｍ〕0 ／ｋ′−〔Ｓ〕0 ／（１＋ｋ′） (12) という式が得られる。(12)式は、総ミセル濃度〔Ｍ〕0
と総サンプル濃度〔Ｓ〕0 と容量比ｋ′とから、結合係
数ｋa を求める方法を示している。
と、 １／ｋa ＝〔Ｍ〕0 ／ｋ′−〔Ｓ〕0 ／（１＋ｋ′） (12) という式が得られる。(12)式は、総ミセル濃度〔Ｍ〕0
と総サンプル濃度〔Ｓ〕0 と容量比ｋ′とから、結合係
数ｋa を求める方法を示している。
【００１５】ここで、従来の技術の説明との関係を明ら
かにしておく。(12)式の〔Ｍ〕0 は、(6) 式に現れる
（Ｃst−ＣＭＣ）を使うと、 （Ｃst−ＣＭＣ）／ｎ に相当する（ｎはミセル会合数）。また、(12)式の
〔Ｓ〕0 は、サンプルを注入した時の初濃度ではなく、
検出バンドの総サンプル濃度となる。
かにしておく。(12)式の〔Ｍ〕0 は、(6) 式に現れる
（Ｃst−ＣＭＣ）を使うと、 （Ｃst−ＣＭＣ）／ｎ に相当する（ｎはミセル会合数）。また、(12)式の
〔Ｓ〕0 は、サンプルを注入した時の初濃度ではなく、
検出バンドの総サンプル濃度となる。
【００１６】(12)式をｋ′について解くと、
【００１７】
【数１】
【００１８】となり、〔Ｓ〕0 が〔Ｍ〕0 より十分小さ
いという仮定では、
いという仮定では、
【００１９】
【数２】
【００２０】となって、これに 〔Ｍ〕0 ＝（Ｃst−ＣＭＣ）／ｎ を代入すると、 ｋ′＝ｋa （Ｃst−ＣＭＣ）／ｎ (15) となり前の(6) 式と同様の関係が得られる。(15)式と
(6) 式とから、 ｋa （Ｃst−ＣＭＣ）／ｎ＝Ｋｖ（Ｃst−ＣＭＣ） となり、 ｋa ＝ｎＫｖ が導かれる。これが結合係数ｋa と前出の分配係数Ｋと
の関係となる。
(6) 式とから、 ｋa （Ｃst−ＣＭＣ）／ｎ＝Ｋｖ（Ｃst−ＣＭＣ） となり、 ｋa ＝ｎＫｖ が導かれる。これが結合係数ｋa と前出の分配係数Ｋと
の関係となる。
【００２１】本発明では、「〔Ｓ〕0 が〔Ｍ〕0 より十
分小さいという」近似を採用することなく、(12)式をそ
のままの形で利用できるところに特徴がある。
分小さいという」近似を採用することなく、(12)式をそ
のままの形で利用できるところに特徴がある。
【００２２】
【実施例】以下実施例を示す添付図面によって詳細に説
明する。図１は、キャピラリー電気泳動法による実験シ
ステム図であり、内径７５μｍ，有効長Ｌ＝３７５ｍｍ
の溶融石英製キャピラリー１中にサンプル溶液を注入し
て、全長５００ｍｍのキャピラリー１の両端に高電圧Ｖ
＝５ｋＶを印加する。検出器３には、紫外可視スペクト
ル測定装置を用いた。電流計４は、キャピラリー１内に
気泡が発生して電流が中断するのをモニタするために設
けているものである。また、周囲温度は２５°Ｃを保つ
ようにしている。
明する。図１は、キャピラリー電気泳動法による実験シ
ステム図であり、内径７５μｍ，有効長Ｌ＝３７５ｍｍ
の溶融石英製キャピラリー１中にサンプル溶液を注入し
て、全長５００ｍｍのキャピラリー１の両端に高電圧Ｖ
＝５ｋＶを印加する。検出器３には、紫外可視スペクト
ル測定装置を用いた。電流計４は、キャピラリー１内に
気泡が発生して電流が中断するのをモニタするために設
けているものである。また、周囲温度は２５°Ｃを保つ
ようにしている。
【００２３】泳動溶媒として、２０ｍＭリン酸緩衝液ｐ
Ｈ６．９にＳＤＳ（硫酸ドデシルナトリウム）を添加し
たもの及び無添加のものを採用した。添加濃度は、１ｍ
Ｍから３０ｍＭまでの間の１２とおりの濃度を選んだ。
サンプルとして、ドーパミンを選び、０．１ｍｇ／ｍｌ
の割合で前記泳動溶媒に溶解させた。しかし、ドーパミ
ンに限らず、カテコール、ノルエピネフリン、ドーパ等
を用いることもできる。
Ｈ６．９にＳＤＳ（硫酸ドデシルナトリウム）を添加し
たもの及び無添加のものを採用した。添加濃度は、１ｍ
Ｍから３０ｍＭまでの間の１２とおりの濃度を選んだ。
サンプルとして、ドーパミンを選び、０．１ｍｇ／ｍｌ
の割合で前記泳動溶媒に溶解させた。しかし、ドーパミ
ンに限らず、カテコール、ノルエピネフリン、ドーパ等
を用いることもできる。
【００２４】実験を始める際には、まず吸引によるキャ
ピラリー１の洗浄を行う。具体的には、図２に示すよう
に、一方の容器５に洗浄液（０．１Ｎ ＮａＯＨ）を満
たして他方の容器を密閉してポンプで２分間吸引し、次
に泳動溶媒を同様にして満たし１０分間吸引する。次に
いわゆる落差法によりサンプルを注入する。すなわち図
３に示すように、正極側の容器５にサンプル溶液を満た
し、負極側の容器６の水面よりも高く持ち上げてサンプ
ルを少量注入する。具体的には、落差Ｈ＝１５ｍｍで１
０秒間注入を行った。
ピラリー１の洗浄を行う。具体的には、図２に示すよう
に、一方の容器５に洗浄液（０．１Ｎ ＮａＯＨ）を満
たして他方の容器を密閉してポンプで２分間吸引し、次
に泳動溶媒を同様にして満たし１０分間吸引する。次に
いわゆる落差法によりサンプルを注入する。すなわち図
３に示すように、正極側の容器５にサンプル溶液を満た
し、負極側の容器６の水面よりも高く持ち上げてサンプ
ルを少量注入する。具体的には、落差Ｈ＝１５ｍｍで１
０秒間注入を行った。
【００２５】このように、内径の細いキャピラリーを使
用し、高電圧をかけるので、一般的に、サンプル量が微
量でも測定でき、測定時間も短いという利点がある。次
に実際の実験手順について説明する。まず、電荷を持た
ないメタノール又は水を注入し、電気浸透流を起こさ
せ、電気浸透流速度を次の式により求めた。 （電気浸透流速度）＝（キャピラリー有効長Ｌ）／（検
出時間） 次に、前記ＳＤＳ無添加のサンプルを注入し、サンプル
移動速度ＶR,0 を次の式により求めた。
用し、高電圧をかけるので、一般的に、サンプル量が微
量でも測定でき、測定時間も短いという利点がある。次
に実際の実験手順について説明する。まず、電荷を持た
ないメタノール又は水を注入し、電気浸透流を起こさ
せ、電気浸透流速度を次の式により求めた。 （電気浸透流速度）＝（キャピラリー有効長Ｌ）／（検
出時間） 次に、前記ＳＤＳ無添加のサンプルを注入し、サンプル
移動速度ＶR,0 を次の式により求めた。
【００２６】（サンプル移動速度）＝（キャピラリー有
効長Ｌ）／（サンプル検出時間） さらに、ＳＤＳを１２とおりの濃度で添加した溶液につ
いてサンプルをそれぞれ注入し、サンプル移動速度ＶR
と、ミセルの移動速度Ｖmcを求めた。そして、次の式に
より、容量比ｋ′を求めた。 ｋ′＝（ＶR,0 −ＶR ）／（ＶR,0 −Ｖmc） 図４は、ＳＤＳ濃度を横軸とし、容量比ｋ′を縦軸にし
て測定された１２個のデータをプロットしたグラフであ
る。
効長Ｌ）／（サンプル検出時間） さらに、ＳＤＳを１２とおりの濃度で添加した溶液につ
いてサンプルをそれぞれ注入し、サンプル移動速度ＶR
と、ミセルの移動速度Ｖmcを求めた。そして、次の式に
より、容量比ｋ′を求めた。 ｋ′＝（ＶR,0 −ＶR ）／（ＶR,0 −Ｖmc） 図４は、ＳＤＳ濃度を横軸とし、容量比ｋ′を縦軸にし
て測定された１２個のデータをプロットしたグラフであ
る。
【００２７】図４のグラフで、実線は１２個のデータの
間を通るようにフィッティングさせた直線であり、破線
は１２個のデータを間を通るようにフィッティングさせ
た ａ／ｋ′−ｂ／（１＋ｋ′）＝一定 の形の曲線である。両方の場合について標準偏差を求め
ると、直線の場合は０．６０４，曲線の場合は０．４４
６となったので、曲線でフィットさせるほうが、実測値
をより正確に現しているということがいえる。この曲線
の形を決めることによって、前記(7) 式により、サンプ
ルがミセルへ取り込まれる場合の平衡定数である結合係
数ｋa を求めることができる。
間を通るようにフィッティングさせた直線であり、破線
は１２個のデータを間を通るようにフィッティングさせ
た ａ／ｋ′−ｂ／（１＋ｋ′）＝一定 の形の曲線である。両方の場合について標準偏差を求め
ると、直線の場合は０．６０４，曲線の場合は０．４４
６となったので、曲線でフィットさせるほうが、実測値
をより正確に現しているということがいえる。この曲線
の形を決めることによって、前記(7) 式により、サンプ
ルがミセルへ取り込まれる場合の平衡定数である結合係
数ｋa を求めることができる。
【００２８】なお、本発明は前記実施例に限定されるも
のではない。実施例では、泳動溶媒に解かすイオン性物
質として、界面活性剤溶液を採用したが、これ以外に細
胞、リポソーム等の膜構造の物質、シクロデキストリン
等を採用してもよい。またラテックスや菌等の微小球体
を採用してもよい。また、本発明のキャピラリー電気泳
動による結合定数の測定法の応用例として、タンパク質
−タンパク質相互作用、タンパク質−リガンド相互作用
（タンパク質と医薬品との結合、抗原−抗体反応、神経
伝達系での刺激伝達物質と受容体との結合等）、ＤＮ
Ａ，ＲＮＡ等の核酸におけるプライマーとポリメラーゼ
との結合、核酸と色素、核酸と医薬品との結合を調べる
こともできる。
のではない。実施例では、泳動溶媒に解かすイオン性物
質として、界面活性剤溶液を採用したが、これ以外に細
胞、リポソーム等の膜構造の物質、シクロデキストリン
等を採用してもよい。またラテックスや菌等の微小球体
を採用してもよい。また、本発明のキャピラリー電気泳
動による結合定数の測定法の応用例として、タンパク質
−タンパク質相互作用、タンパク質−リガンド相互作用
（タンパク質と医薬品との結合、抗原−抗体反応、神経
伝達系での刺激伝達物質と受容体との結合等）、ＤＮ
Ａ，ＲＮＡ等の核酸におけるプライマーとポリメラーゼ
との結合、核酸と色素、核酸と医薬品との結合を調べる
こともできる。
【００２９】
【発明の効果】以上のように本発明の結合定数の測定方
法によれば、キャピラリー電気泳動法において、実測デ
ータに十分フィットする理論式を採用して、結合係数ｋ
a を正確に予測することができるので、各種の結合反応
を定量的かつ十分正確に解析することができるようにな
る。
法によれば、キャピラリー電気泳動法において、実測デ
ータに十分フィットする理論式を採用して、結合係数ｋ
a を正確に予測することができるので、各種の結合反応
を定量的かつ十分正確に解析することができるようにな
る。
【図１】キャピラリー電気泳動法による実験システム図
である。
である。
【図２】吸引によるキャピラリー洗浄方法を説明する図
である。
である。
【図３】落差法によりサンプルを注入する方法を説明す
る図である。
る図である。
【図４】容量比ｋ′を縦軸、界面活性剤濃度を横軸にと
った、実測データの一例を示すグラフである。
った、実測データの一例を示すグラフである。
【図５】(a) はキャピラリー中を電気泳動するサンプル
の様子を示す図、(b) は濃度分布図、(c) は濃度分布を
一様と近似した図である。
の様子を示す図、(b) は濃度分布図、(c) は濃度分布を
一様と近似した図である。
１ キャピラリー ２ 電源 ３ 検出器 ４ 電流計 ５，６ 容器
Claims (1)
- 【請求項１】キャピラリー内にイオン性物質を所定濃度
で溶解させた泳動溶媒を満たし、キャピラリーに沿って
電位勾配をかけながら、キャピラリー内の一部にサンプ
ルとなる物質を所定濃度で溶解させた溶液を注入して、
サンプルとなる物質の分子が前記イオン性物質の分子又
はその分子集合体に結合され又は取込まれた状態で前記
イオン性物質の分子又はその分子集合体を電気泳動させ
るキャピラリー電気泳動法において、 サンプルの検出時間及び前記イオン性物質の分子又はそ
の分子集合体の検出時間に基づいて、前記イオン性物質
の分子又はその分子集合体に結合され又は取り込まれた
サンプルと、泳動溶媒中のサンプルとの容量比ｋ′を求
め、 この容量比ｋ′、前記イオン性物質の濃度〔Ｍ〕0 、及
びサンプルの濃度〔Ｓ〕0 との関係を、式 １／ｋa ＝〔Ｍ〕0 ／ｋ′−〔Ｓ〕0 ／（１＋ｋ′） に当てはめることによって、サンプル分子が前記イオン
性物質の分子又はその分子集合体に結合され又は取り込
まれる場合の平衡定数である結合係数ｋa を算出するこ
とを特徴とする、キャピラリー電気泳動による結合定数
の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4265198A JPH06118059A (ja) | 1992-10-02 | 1992-10-02 | キャピラリー電気泳動による結合定数の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4265198A JPH06118059A (ja) | 1992-10-02 | 1992-10-02 | キャピラリー電気泳動による結合定数の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06118059A true JPH06118059A (ja) | 1994-04-28 |
Family
ID=17413905
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4265198A Pending JPH06118059A (ja) | 1992-10-02 | 1992-10-02 | キャピラリー電気泳動による結合定数の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06118059A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100399017C (zh) * | 2003-03-14 | 2008-07-02 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种毛细管区带电泳对药物进行筛选的方法 |
| CN114705744A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-05 | 中国林业科学研究院高原林业研究所 | 一种测定没食子酸与金属离子结合常数方法 |
-
1992
- 1992-10-02 JP JP4265198A patent/JPH06118059A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100399017C (zh) * | 2003-03-14 | 2008-07-02 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种毛细管区带电泳对药物进行筛选的方法 |
| CN114705744A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-05 | 中国林业科学研究院高原林业研究所 | 一种测定没食子酸与金属离子结合常数方法 |
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