JPH0591891A - Production of saccharide compound - Google Patents

Production of saccharide compound

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JPH0591891A
JPH0591891A JP27625791A JP27625791A JPH0591891A JP H0591891 A JPH0591891 A JP H0591891A JP 27625791 A JP27625791 A JP 27625791A JP 27625791 A JP27625791 A JP 27625791A JP H0591891 A JPH0591891 A JP H0591891A
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JP
Japan
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glucose
xylitol
sucrose
sugar alcohol
sugar
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Application number
JP27625791A
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Japanese (ja)
Inventor
Satoru Kitao
悟 北尾
Yoko Shimaoka
洋子 嶋岡
Hiroshi Sekine
廣 関根
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Kikkoman Corp
Original Assignee
Kikkoman Corp
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Publication date
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

PURPOSE:To obtain a saccharified compound having a dental carries preventing effect and a sweetness in high purity from glucose-1-phosphoric acid and sugar alcohol by using sucrose phosphorylase without requiring any complicated isolation and purification treatment. CONSTITUTION:Glucose-1-phosphoric acid or sucrose is made to react with a sugar alcohol (e.g. xylitol or arabitol) using sucrose phosphorylase to provide the objective saccharide compound in which glucose and sugar alcohol are bound. The reaction is preferably carried out at 35-45 deg.C and pH6-7 for 8-15hr. Furthermore, as the sucrose phosphorylase, e.g. enzyme derived from Leuconostoc mesenteroides is used.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、虫歯予防効果を有し甘
味料としても非常に有用な糖化合物の製造法、特に詳し
くはシュークロースホスホリラーゼを利用してグルコー
ス−1−リン酸又はシュークロースと、糖アルコールと
から、グルコースと糖アルコールが結合した、上記特徴
を有する糖化合物を複雑な単離精製操作をすることなく
高純度に得る方法に関する。
FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a method for producing a sugar compound having a caries-preventing effect and which is very useful as a sweetener, and more specifically, glucose-1-phosphate or sucrose using sucrose phosphorylase. And a sugar alcohol, the method of obtaining a sugar compound having glucose and a sugar alcohol bound to each other and having a high purity in a high purity without performing a complicated isolation and purification operation.

【0002】[0002]

【従来の技術】従来、糖加リン酸分解酵素シュークロー
スホスホリラーゼを利用してグルコース−1−リン酸又
はシュークロースと、糖アルコールとから、効率良くグ
ルコースと糖アルコールが結合した糖化合物を製造する
方法は未だ知られていない。一方、糖分解酵素α−グル
コシダーゼを利用して、グルコースと糖アルコールとか
ら、グルコースと糖アルコールが結合した糖化合物を製
造する方法が知られている(特開平2−163092参
照)。一般にグルコシダーゼ、ガラクトシダーゼ、アミ
ラーゼ、サイクロデキストリン合成酵素またはフラクト
シルトランスフェラーゼなどを用いて糖類化合物を製造
する場合、その反応産物は重合度の異なるオリゴ糖の混
合物として得られ、純度の高いオリゴ糖が得にくいとい
う問題点を有する。
2. Description of the Related Art Conventionally, a sugar compound in which glucose and a sugar alcohol are bound is efficiently produced from glucose-1-phosphate or sucrose and a sugar alcohol using a sugar-phosphorylating enzyme sucrose phosphorylase. The method is not yet known. On the other hand, there is known a method for producing a sugar compound in which glucose and sugar alcohol are bound from glucose and sugar alcohol using a sugar-degrading enzyme α-glucosidase (see Japanese Patent Laid-Open No. Hei 2-163092). Generally, when a saccharide compound is produced using glucosidase, galactosidase, amylase, cyclodextrin synthase or fructosyl transferase, the reaction product is obtained as a mixture of oligosaccharides having different degrees of polymerization, and it is difficult to obtain a highly pure oligosaccharide. There is a problem.

【0003】[0003]

【発明が解決しようとする課題】本発明者等はグルコー
ス−1−リン酸又はシュークロースと、糖アルコールと
から、グルコースと糖アルコールとが結合した糖化合物
を複雑な単離精製操作をすることなく得るために種々検
討を重ねた結果、グルコース−1−リン酸又はシューク
ロースと、糖アルコールとを含有する溶液に糖加リン酸
分解酵素シュークロースホスホリラーゼを添加作用させ
ることによって、高純度の目的とする糖化合物が収率良
く得られることを知り、この知見に基づいて本発明を完
成した。
DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have to perform a complicated isolation and purification operation of glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol from a sugar compound in which glucose and sugar alcohol are bound. As a result of various studies in order to obtain it, glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol are added to the solution containing the glycosyl phosphate-degrading enzyme, sucrose phosphorylase, to obtain a high-purity object. The present invention has been completed based on this finding, knowing that the sugar compound can be obtained in good yield.

【0004】[0004]

【課題を解決するための手段】即ち、本発明はグルコー
ス−1−リン酸またはシュークロースと、糖アルコール
とから、グルコースと糖アルコールが結合した糖化合物
を生成せしめるために、シュークロースホスホリラーゼ
を用いる酵素反応を利用することを特徴とする糖化合物
の製造法である。
That is, the present invention uses sucrose phosphorylase in order to produce a sugar compound in which glucose and sugar alcohol are bound from glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol. It is a method for producing a sugar compound, which is characterized by utilizing an enzymatic reaction.

【0005】[0005]

【作用】以下、本発明を詳細に説明する。The present invention will be described in detail below.

【0006】先ず、本発明を実施するためにはグルコー
ス−1−リン酸又はシュークロースと、糖アルコールと
を反応液中に所定量混和し、これにシュークロースホス
ホリラーゼを添加して反応を行う。
First, in order to carry out the present invention, a predetermined amount of glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol are mixed in a reaction solution, and sucrose phosphorylase is added to the mixture to carry out the reaction.

【0007】ここに用いられる糖アルコールとしては、
キシリトール、アラビトール、アドニトール、グリセロ
ール、及びソルビトール等が挙げられる。
As the sugar alcohol used here,
Examples include xylitol, arabitol, adonitol, glycerol, sorbitol and the like.

【0008】またシュクロースホスホリラーゼは、無機
リン酸の存在下でシュークロースに作用してグルコース
−1−リン酸とフラクトースを生成する、またはこの逆
反応を触媒する酵素である。
Sucrose phosphorylase is an enzyme that acts on sucrose in the presence of inorganic phosphate to produce glucose-1-phosphate and fructose, or catalyzes its reverse reaction.

【0009】そして、その起源としては例えばロイコノ
ストック・メセンテロイデス(Leuconostoc
mesenteroides)、シュードモナス・サ
ッカロフィラ(Pseudomonas saccha
rophila)、シュードモナス・パトリファシエン
ス(Pseudomonas putrefacien
s)、クロストリジウム・パステイリアナム(Clos
tridium pasteurianum)、アセト
バクター・キシリナム(Acetobacter xy
linum)、プルラリア・プルランス(Pullul
aria pullulans)等のものが知られてい
る〔バイオテクノロジー・アンド・バイオエンジニアリ
ング(Biotechnol.Bioeng.,)Vo
l.29,Pp8−15,1987参照〕が、これらに
限定されるものではない。
[0009] And, as its origin, for example, Leuconostoc (Leuconostoc)
mesenteroides), Pseudomonas saccha
rophila), Pseudomonas putrefacien (Pseudomonas putrefacien)
s), Clostridium pasteurianum (Clos
tridium pasteurianum, Acetobacter xy
linum), Pullularia pullulans (Pullul)
aria pullulans) etc. are known [Biotechnology and Bioengineering (Biotechnol. Bioeng.,) Vo.
l. 29, Pp8-15, 1987], but is not limited thereto.

【0010】本発明を実施するにあたり先ず、グルコー
ス−1−リン酸又はシュークロースと、糖アルコールと
を含有する比較的高濃度の反応溶液を調製する。この調
製液の濃度範囲としては重量%濃度で5〜100%、さ
らに望ましくは20〜100%である。また、その混合
物の配合比率は、重量比でグルコース−1−リン酸又は
シュークロースに対する糖アルコールが100:1〜
1:100の範囲、さらに望ましくは1:10〜10:
1の範囲である。
In carrying out the present invention, first, a relatively high concentration reaction solution containing glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol is prepared. The concentration range of this preparation liquid is 5 to 100% by weight, more preferably 20 to 100%. Further, the blending ratio of the mixture is such that the sugar alcohol to glucose-1-phosphate or sucrose is 100: 1 by weight.
The range is 1: 100, more preferably 1:10 to 10 :.
The range is 1.

【0011】また、反応液中のシュークロースホスホリ
ラーゼの添加量は、グルコース−1−リン酸又はシュー
クロースと、糖アルコールの混合物(基質)1グラム当
たり1単位以上、望ましくは50〜100単位である。
The amount of sucrose phosphorylase added to the reaction solution is 1 unit or more, preferably 50 to 100 units, per 1 gram of the mixture (substrate) of glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol. ..

【0012】なお、1単位とは特開平3−4785「シ
ュークロースホスホリラーゼの製造法」に記載の方法に
従って求めたものである。
One unit is determined according to the method described in JP-A-3-4785 "Method for producing sucrose phosphorylase".

【0013】また、酵素反応のpHは5〜8、望ましく
は6〜7.5であり、また温度は20〜50℃、望まし
くは35〜45℃であり、また時間は1〜24時間、望
ましくは8〜15時間である。
The pH of the enzyme reaction is 5 to 8, preferably 6 to 7.5, the temperature is 20 to 50 ° C., preferably 35 to 45 ° C., and the time is 1 to 24 hours, preferably Is 8 to 15 hours.

【0014】このようにして得られた反応液は、活性炭
を充填したカラムに通液吸着させた後、エタノール溶液
で溶出することにより目的とする糖化合物が単一化合物
として簡単に分離することが出来る。
The reaction solution thus obtained is adsorbed on a column packed with activated carbon and adsorbed on the column, and then eluted with an ethanol solution to easily separate the target sugar compound as a single compound. I can.

【0015】[0015]

【本発明の効果】本発明は、グルコース−1−リン酸又
はシュークロースと、糖アルコールとを含有する溶液に
糖加リン酸分解酵素シュークロースホスホリラーゼを添
加作用させるものであるから、単一な、目的とするα−
D−グルコピラノシル−キシリトール、α−D−グルコ
ピラノシル−アラビトール、α−D−グルコピラノシル
−アドニトール等の糖化合物が収率良く得られる。
INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention is to add a sugar-phosphorylating enzyme, sucrose phosphorylase, to a solution containing glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol. , The desired α-
Sugar compounds such as D-glucopyranosyl-xylitol, α-D-glucopyranosyl-arabitol and α-D-glucopyranosyl-adnitol can be obtained in good yield.

【0016】したがって、反応液から目的とするこれら
の糖化合物を単離精製する操作が非常に簡単であり、ま
た本発明で得られる糖化合物は虫歯予防効果(低う蝕
性)を有する上に、難消化性(低カロリー)である点で
特徴があり、甘味料としても非常に有用である。
Therefore, the operation of isolating and purifying the desired sugar compound from the reaction solution is very simple, and the sugar compound obtained in the present invention has a caries preventive effect (low caries property). It is characterized by being indigestible (low calorie) and is very useful as a sweetener.

【0017】従って、チョコレート、クッキー、ビスケ
ットへの利用にも適している。
Therefore, it is also suitable for use in chocolate, cookies and biscuits.

【0018】また、熱に強く、水飴や麦芽糖等の還元性
物質と異なり、加える時間や加熱温度について厳しく規
制されることがないので作業性が改善できると言った利
点を有している。
Further, it is resistant to heat, and unlike reducing substances such as starch syrup and maltose, there is no strict restriction on the addition time and heating temperature, so that there is an advantage that workability can be improved.

【0019】さらにまた、これらの化合物はカビ(青カ
ビ、麹カビ、黒カビ、毛カビ)や、酵母等に利用され難
く、乳酸飲料や発酵食品をはじめ、漬け物、佃煮、和菓
子等の水分の多い食品に使用することによって、発酵を
抑え、食品の日持ちを改善し、製品の保存性の向上を期
待できる。
Furthermore, these compounds are difficult to be used for molds (blue mold, koji mold, black mold, hair mold), yeasts, etc., and lactic acid drinks, fermented foods, pickled vegetables, boiled foods, and other high-moisture foods. It is expected that the use of this product for fermentation suppresses fermentation, improves the shelf life of foods, and improves the shelf life of products.

【0020】以下、実施例を示して本発明をより具体的
に説明する。
Hereinafter, the present invention will be described more specifically by showing examples.

【0021】[0021]

【実施例1】グルコース−1−リン酸40グラムとキシ
リトール(糖アルコール)40グラムとを容量300ミ
リリットルのビーカーに採り、これに0.1モルのME
S緩衝液(pH6.8)で希釈し100ミリリットル反
応液を調製し、これにシュークロースホスホリラーゼ
(盛進製薬社製)を6000単位添加して42℃で15
時間、糖化合物生成反応を行い、次いで、100℃、5
分間加熱処理して酵素反応を停止し酵素反応処理液を得
た。次に、得られた反応液を活性炭カラム(内径6セン
チ、長さ50センチ)に通液し、水を通液して未反応の
キシリトールを洗い流したあとエタノール5%溶液を通
流させて、目的とするα−D−グルコピラノシル−キシ
リトールを含有する溶液を得た。なお、上記反応液に
は、未反応のグルコース−1−リン酸も含まれているが
これは活性炭と接触するとこの中に強く吸着され、エタ
ノール溶液によっても溶出することはない。
Example 1 40 g of glucose-1-phosphate and 40 g of xylitol (sugar alcohol) were placed in a beaker having a capacity of 300 ml, and 0.1 mol of ME was added thereto.
Dilute with S buffer (pH 6.8) to prepare a 100 ml reaction solution, and add 6000 units of sucrose phosphorylase (manufactured by Seishin Pharmaceutical Co., Ltd.) to the mixture at 42 ° C. for 15 minutes.
The sugar compound formation reaction is carried out for a time, then at 100 ° C. for 5
The enzyme reaction was stopped by heat treatment for a minute to obtain an enzyme reaction treatment liquid. Next, the obtained reaction solution was passed through an activated carbon column (inner diameter: 6 cm, length: 50 cm), water was passed therethrough to wash off unreacted xylitol, and then an ethanol 5% solution was passed through, A solution containing the target α-D-glucopyranosyl-xylitol was obtained. The reaction solution also contains unreacted glucose-1-phosphate, but when it comes into contact with activated carbon, it is strongly adsorbed in this and does not elute even with an ethanol solution.

【0022】このようにして、得られたα−D−グルコ
ピラノシル−キシリトールを含有する溶液は次いで、ロ
ータリーエバポレーターにより減圧濃縮を行い、34.
8ミリリットルのシロップ状のα−D−グルコピラノシ
ル−キシリトールを含有する濃縮物を得た。
The thus-obtained solution containing α-D-glucopyranosyl-xylitol was then concentrated under reduced pressure by a rotary evaporator.
A concentrate containing 8 ml of syrupy α-D-glucopyranosyl-xylitol was obtained.

【0023】上記濃縮物を高速液体クロマトグラフィー
(TSK−gel Amide−80)による分析を行
いα−D−グルコピラノシル−キシリトールの純度を測
定したところ98%であり、また生成量は12.7グラ
ムであった。
The above concentrate was analyzed by high performance liquid chromatography (TSK-gel Amide-80) to measure the purity of α-D-glucopyranosyl-xylitol, which was 98%, and the yield was 12.7 g. there were.

【0024】また、その構造を以下の分析方法によって
測定したところ、得られた化合物はα−D−グルコピラ
ノシル−キシリトールであることが確認された。即ち、
上記シロップ状の濃縮物に塩酸を加えて終濃度2規定溶
液とし、この溶液2ミリリットルを90℃、4時間反応
し、反応溶液を高速液体クロマトグラフィー(TSK−
gel Amide−80)による分析を行ったとこ
ろ、グルコースとキシリトールのピークを得た。
The structure was determined by the following analytical method, and it was confirmed that the obtained compound was α-D-glucopyranosyl-xylitol. That is,
Hydrochloric acid was added to the syrupy concentrate to give a final concentration of 2 N solution, and 2 ml of this solution was reacted at 90 ° C. for 4 hours, and the reaction solution was subjected to high performance liquid chromatography (TSK-
As a result of analysis by gel Amide-80), peaks of glucose and xylitol were obtained.

【0025】また、上記シロップ状の濃縮液を核磁気共
鳴分析により構造の解析をしたところ構成糖がグルコー
スとキシリトールであることを確認した。
When the structure of the above syrup-like concentrated liquid was analyzed by nuclear magnetic resonance analysis, it was confirmed that the constituent sugars were glucose and xylitol.

【0026】さらにまた、マススペクトルにより分子量
が304であることを確認した。
Furthermore, it was confirmed by a mass spectrum that the molecular weight was 304.

【0027】以上の結果から、得られた糖化合物はα−
D−グルコピラノシル−キシリトールであることが確認
された。
From the above results, the obtained sugar compound was α-
It was confirmed to be D-glucopyranosyl-xylitol.

【0028】[0028]

【実施例2】シュークロース40グラムとキシリトール
(糖アルコール)40グラムとを容量300ミリリット
ルのビーカーに採り、これに0.1モルのMES緩衝液
(pH6.8)で希釈し100ミリリットル反応液を調
製し、これにシュークロースホスホリラーゼ(盛進製薬
社製)を6000単位添加して42℃で15時間、糖化
合物生成反応を行い、次いで、100℃、5分間加熱処
理して酵素反応を停止した。
Example 2 40 g of sucrose and 40 g of xylitol (sugar alcohol) were placed in a beaker having a volume of 300 ml and diluted with 0.1 mol of MES buffer (pH 6.8) to give 100 ml of reaction solution. 6000 units of sucrose phosphorylase (manufactured by Morishin Pharmaceutical Co., Ltd.) was prepared, and a sugar compound-forming reaction was carried out at 42 ° C. for 15 hours, followed by heat treatment at 100 ° C. for 5 minutes to stop the enzymatic reaction. ..

【0029】次に、得られた反応液にシュークロース分
解酵素(インベルターゼ)(和光純薬社製)40単位を
添加し、シュークロースを完全にグルコースとフラクト
ースとに分解し、次いでこれを活性炭カラム(内径6セ
ンチ、長さ50センチ)に通液し、水を通液して分解し
て生じたグルコースとフラクトース並びに未反応のキシ
リトールを洗い流したあとエタノール5%溶液を通流さ
せて、目的とするα−D−グルコピラノシル−キシリト
ールを含有する溶液を得た。
Next, 40 units of sucrose-degrading enzyme (invertase) (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to the obtained reaction solution to completely decompose sucrose into glucose and fructose, which was then activated carbon column. (Inside diameter 6 cm, length 50 cm), water was passed through to decompose glucose and fructose, and unreacted xylitol was washed off, and then 5% ethanol solution was passed through it. A solution containing α-D-glucopyranosyl-xylitol was obtained.

【0030】このようにして、得られたα−D−グルコ
ピラノシル−キシリトールを含有する溶液は次いで、ロ
ータリーエバポレーターにより減圧濃縮を行い、34.
3ミリリットルのシロップ状のα−D−グルコピラノシ
ル−キシリトールを含有する濃縮物を得た。
The thus-obtained solution containing α-D-glucopyranosyl-xylitol was then concentrated under reduced pressure using a rotary evaporator.
A concentrate containing 3 ml of syrupy α-D-glucopyranosyl-xylitol was obtained.

【0031】上記濃縮物を高速液体クロマトグラフィー
(TSK−gel Amide−80)による分析を行
いα−D−グルコピラノシル−キシリトールの純度を測
定したところ95%であり、また生成量は20.8グラ
ムであった。った。
The above concentrate was analyzed by high performance liquid chromatography (TSK-gel Amide-80) to measure the purity of α-D-glucopyranosyl-xylitol, which was 95%, and the yield was 20.8 g. there were. It was.

【0032】また、その構造を以下の分析方法によって
測定したところ、得られた化合物はα−D−グルコピラ
ノシル−キシリトールであることが確認された。即ち、
上記シロップ状の濃縮物に塩酸を加えて終濃度2規定溶
液とし、この溶液2ミリリットルを90℃、4時間反応
し、反応溶液を高速液体クロマトグラフィー(TSK−
gel Amide−80)による分析を行ったとこ
ろ、グルコースとキシリトールのピークを得た。
The structure was determined by the following analytical method, and it was confirmed that the obtained compound was α-D-glucopyranosyl-xylitol. That is,
Hydrochloric acid was added to the syrupy concentrate to give a final concentration of 2 N solution, and 2 ml of this solution was reacted at 90 ° C. for 4 hours, and the reaction solution was subjected to high performance liquid chromatography (TSK-
As a result of analysis by gel Amide-80), peaks of glucose and xylitol were obtained.

【0033】また、上記シロップ状の濃縮液を核磁気共
鳴分析により構造の解析をしたところ構成糖がグルコー
スとキシリトールであることを確認した。
The structure of the syrup-like concentrated liquid was analyzed by nuclear magnetic resonance analysis, and it was confirmed that the constituent sugars were glucose and xylitol.

【0034】さらにまた、マススペクトルにより分子量
が304であることを確認した。
Furthermore, it was confirmed by a mass spectrum that the molecular weight was 304.

【0035】以上の結果から、得られた糖化合物はα−
D−グルコピラノシル−キシリトールであることが確認
された。
From the above results, the obtained sugar compound was α-
It was confirmed to be D-glucopyranosyl-xylitol.

【0036】[0036]

【応用例1】虫歯は、口くう内でシュークロースが虫歯
菌によりデキストラン等の水不溶性グルカンに変換さ
れ、このグルカンが歯の表面を薄膜状に覆い、そしてこ
の薄膜を通過して歯の表面に達した糖が嫌気発酵を受け
て有機酸を生成し、歯のエナメル質を侵すことによって
起ることが明らかにされている。したがって、口くう内
で水不溶性グルカンと、有機酸の生成をできるだけ抑制
することが虫歯予防の見地から望まれている。
[Application Example 1] In dental caries, sucrose is converted into water-insoluble glucan such as dextran by dental caries in the oral cavity, and this glucan covers the surface of the tooth in a thin film, and passes through this thin film to allow the tooth surface to pass through. It has been clarified that the sugars that reach the temperature of 1 are subjected to anaerobic fermentation to produce organic acids, and attack the tooth enamel. Therefore, it is desired from the viewpoint of preventing dental caries to suppress the formation of water-insoluble glucan and organic acid in the oral cavity as much as possible.

【0037】「抗う蝕性試験(水不溶性グルカン生成試
験)」虫歯菌、ストレプトコッカス・ミュータンス(S
treptococcusmutans)IFO139
55株の種菌をブレイン・ハート・インフュージョン・
ブロス(Brain Heart Infusion
Broth)(日水製薬社製)3.5%の水溶液からな
る培地に植菌し、37℃で18時間静置培養し、前培養
液を得た。
"Anti-cariogenicity test (water-insoluble glucan production test)" Caries bacteria, Streptococcus mutans (S
treptococcus mutans) IFO139
Brain Heart Infusion
Broth (Brain Heart Infusion)
Broth) (manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) was inoculated into a medium composed of a 3.5% aqueous solution, and statically cultured at 37 ° C. for 18 hours to obtain a preculture liquid.

【0038】また、次に上記の3.5%の水溶液からな
る培地を3区分用意し、その第1区分には5%シューク
ロースを加え、第2区分には本実施例1で得られた5%
α−D−グルコピラノシル−キシリトールを加え、そし
て第3区分には5%シュークロースと本実施例1で得ら
れた5%α−D−グルコピラノシル−キシリトールとを
加え、それぞれ10ミリリットルに前記前培養液を0.
2%植菌し、37℃で18時間静置培養を行ない、得ら
れた培養液中の不溶性グルカン生成量を以下の方法によ
り測定した。その結果をまとめて表1に示す。
Next, 3 sections of the above-mentioned medium consisting of 3.5% aqueous solution were prepared, 5% sucrose was added to the first section, and the second section was obtained in this Example 1. 5%
α-D-glucopyranosyl-xylitol was added, and 5% sucrose and 5% α-D-glucopyranosyl-xylitol obtained in this Example 1 were added to the third section, and 10 ml of each of the preculture solution was added. 0.
The cells were inoculated with 2% and statically cultured at 37 ° C. for 18 hours, and the amount of insoluble glucan produced in the obtained culture solution was measured by the following method. The results are summarized in Table 1.

【0039】 [0039]

【0040】「不溶性グルカンの測定方法」培養終了
後、該培養液を静かに取り除き、水洗いをした後ガラス
製試験管の周壁に付着している固形物に対して、0.5
規定NaOH1ミリリットルを加え、37℃で1時間保
持し溶解した。
[Measurement method of insoluble glucan] After culturing, the culture solution was gently removed and washed with water, and then 0.5% of solid matter adhering to the peripheral wall of the glass test tube.
1 ml of normal NaOH was added, and the mixture was kept at 37 ° C. for 1 hour to dissolve.

【0041】この溶解液のグルカン量をフェノール硫酸
法により測定した。
The amount of glucan in this solution was measured by the phenol-sulfuric acid method.

【0042】表1の結果から、区分1は試験管内でシュ
ークロースが虫歯菌によりデキストラン等の水不溶性グ
ルカンに変換され、虫歯の原因物質が生成されることが
判る。これに対して区分2は、虫歯菌によって全く変換
されず、試験管内に水不溶性グルカンが全く生じない。
即ち、本発明よって得られるα−D−グルコピラノシル
−キシリトールは、虫歯の原因物質であるグルカンを生
成しないことが判る。また、区分3は、本発明よって得
られるα−D−グルコピラノシル−キシリトールはシュ
ークロースからのグルカン生成を抑制する作用を有する
ことが判る。
From the results shown in Table 1, it can be seen that, in Category 1, sucrose is converted into water-insoluble glucan such as dextran by a dental caries in a test tube to produce a causative agent of dental caries. On the other hand, Category 2 is not converted by the dental caries at all and no water-insoluble glucan is generated in the test tube.
That is, it is understood that the α-D-glucopyranosyl-xylitol obtained by the present invention does not produce glucan, which is a causative substance of caries. Further, it is understood that in Category 3, α-D-glucopyranosyl-xylitol obtained according to the present invention has an action of suppressing glucan production from sucrose.

【0043】「抗う蝕性試験(有機酸生成試験)」虫歯
菌、ストレプトコッカス・ミュータンス(Strept
ococcusmutans)IFO 13955株の
種菌をブレイン・ハート・インフュージョン・ブロス
(Brain Heart Infusion Bro
th)(日水製薬社製)3.5%の水溶液からなる培地
に植菌し、37℃で18時間静置培養し、培養液700
ミリリットルを得た。
"Anti-cariogenicity test (organic acid production test)" Caries bacteria, Streptococcus mutans (Strept
ococcus mutans) IFO 13955 strain inoculated with Brain Heart Infusion Bro
(th) (manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) was inoculated into a medium consisting of a 3.5% aqueous solution, and statically cultured at 37 ° C. for 18 hours to prepare a culture solution 700.
I got milliliters.

【0044】次いでこの培養液を遠心分離し、得られた
菌体を0.9(W/V)%NaCl水溶液で洗浄して生
菌体を得、これを蒸留水1.5ミリリットルに懸濁して
生菌体調製液を得た。
Then, this culture solution was centrifuged, and the obtained bacterial cells were washed with a 0.9 (W / V)% NaCl aqueous solution to obtain viable bacterial cells, which were suspended in 1.5 ml of distilled water. As a result, a viable cell preparation liquid was obtained.

【0045】次いで、この0.2ミリリットルの生菌体
調製液に、Stephan′s緩衝液(pH7.0)
(Stephan,R.M. et al.,Jour
nalof Dental Research,Vol
26,pp15−41 1947 参照)1.5ミリ
リットル及び30ミリグラムの糖を含む水溶液0.3ミ
リリットルを混合し、この混合液を37℃に30分間保
持した後pHを測定し有機酸生成の指標とした。その結
果を表2に示す。
Next, 0.2 ml of this viable cell preparation liquid was added to Stephan's buffer (pH 7.0).
(Stephan, RM et al., Jour.
nalf Dental Research, Vol
26, pp. 15-41 1947) 1.5 ml and 0.3 ml of an aqueous solution containing 30 mg of sugar are mixed, the mixture is kept at 37 ° C. for 30 minutes, and then pH is measured to give an index of organic acid production. did. The results are shown in Table 2.

【0046】 [0046]

【0047】表2の結果から区分1は、pHが短時間に
著しく低下することから、虫歯菌によってシュークロー
スは速やか代謝されて有機酸が生成しているものと思わ
れる。これに対して本発明の区分2は、pHの低下が殆
ど無く、従って有機酸の生成も殆どないことから、虫歯
菌によってα−D−グルコピラノシル−キシリトールが
殆ど代謝されないことが判る。
From the results in Table 2, it is considered that Category 1 has a sharp decrease in pH in a short time, and thus sucrose is rapidly metabolized by dental caries to produce organic acid. On the other hand, in the category 2 of the present invention, the pH is hardly lowered, and therefore the organic acid is hardly generated, so it is understood that α-D-glucopyranosyl-xylitol is hardly metabolized by the dental caries.

【0048】[0048]

【実験例1】グルコース−1−リン酸10グラムとキシ
リトール(糖アルコール)10グラムとを容量100ミ
リリットルのビーカーに採り、これに0.1モルのME
S緩衝液(pH6.8)で希釈し40ミリリットル反応
液を調製し、これにシュークロースホスホリラーゼ(盛
進製薬社製)を1500単位添加して42℃で15時
間、糖化合物生成反応を行い、次いで、100℃、5分
間加熱処理して酵素反応を停止し酵素反応処理液を得
た。次に上記で得られた酵素反応処理液を高速液体クロ
マトグラフィー(TSK−gel Amide−80)
により分析を行い、α−D−グルコピラノシル−キシリ
トールとそれより分子量の大きいオリゴ糖の生成量の比
率を、ピーク面積より算出した。また、比較のためグル
コース10グラムとキシリトール(糖アルコール)10
グラムとを容量100ミリリットルのビーカーに採り、
これに0.05モルのリン酸緩衝液(pH6.8)で希
釈し40ミリリットル反応液を調製し、これにサッカロ
マイセス属由来のα−グルコシダーゼ(東洋紡社製)を
1500単位添加して42℃で15時間、糖化合物生成
反応を行い、次いで、100℃、5分間加熱処理して酵
素反応を停止し酵素反応処理液を得た。次に上記で得ら
れた酵素反応処理液を高速液体クロマトグラフィー(T
SK−gel Amide−80)により分析を行い、
α−D−グルコピラノシル−キシリトール(2糖)とそ
れより分子量の大きいオリゴ糖(3糖以上)の生成量の
比率を、ピーク面積より算出した。上記2つの結果につ
いて表3に示す。 注1)A:α−D−グルコピラノシル−キシリトール 注2)B:3糖以上の分子量の大きいオリゴ糖 注3)B欄における値は、それぞれの区分においてAを
100とした場合の数値を示した。 表3の結果から、糖分解酵素α−グルコシダーゼを利用
して、グルコースと糖アルコールとからグルコースと糖
アルコールの結合した糖化合物を製造する方法において
は、その反応産物は目的とする糖類化合物の他に、重合
度の異なるオリゴ糖画分も不純物として得られ、純度の
高い目的とするオリゴ糖を得にくいという問題点を有す
る。これに対し、本発明によればシュークロースホスホ
リラーゼを用いるものであるから、純度の高い目的とす
るオリゴ糖を効率良く得られることが判る。
Experimental Example 1 Glucose-1-phosphate (10 g) and xylitol (sugar alcohol) (10 g) were placed in a beaker having a capacity of 100 ml, and 0.1 mol of ME was added thereto.
Dilute with S buffer (pH 6.8) to prepare 40 ml reaction solution, add 1500 units of sucrose phosphorylase (manufactured by Seishin Pharmaceutical Co., Ltd.), and perform sugar compound formation reaction at 42 ° C. for 15 hours, Then, the enzyme reaction was stopped by heating at 100 ° C. for 5 minutes to obtain an enzyme reaction-treated solution. Next, the enzyme reaction-treated solution obtained above was subjected to high performance liquid chromatography (TSK-gel Amide-80).
The ratio of the amount of α-D-glucopyranosyl-xylitol to the amount of oligosaccharides having a higher molecular weight than that produced was calculated from the peak area. For comparison, 10 grams of glucose and 10 grams of xylitol (sugar alcohol)
Gram and 100ml beaker,
This was diluted with 0.05 mol phosphate buffer (pH 6.8) to prepare a 40 ml reaction solution, and 1500 units of α-glucosidase (manufactured by Toyobo Co., Ltd.) derived from Saccharomyces was added to this at 42 ° C. The sugar compound-forming reaction was performed for 15 hours, and then heat treatment was performed at 100 ° C. for 5 minutes to stop the enzyme reaction and obtain an enzyme reaction treatment liquid. Next, the enzyme reaction-treated solution obtained above was subjected to high performance liquid chromatography (T
SK-gel Amide-80),
The ratio of the production amount of α-D-glucopyranosyl-xylitol (disaccharide) to the oligosaccharide having a larger molecular weight than that (3 or more sugars) was calculated from the peak area. Table 3 shows the above two results. Note 1) A: α-D-glucopyranosyl-xylitol Note 2) B: Oligosaccharide with a large molecular weight of 3 sugars or more Note 3) The values in column B are the values when A is 100 in each category. .. From the results of Table 3, in the method of producing a sugar compound in which glucose and a sugar alcohol are bound from glucose and a sugar alcohol using the glycolytic enzyme α-glucosidase, the reaction product is other than the target sugar compound. In addition, there is a problem that oligosaccharide fractions having different degrees of polymerization are also obtained as impurities and it is difficult to obtain a desired oligosaccharide with high purity. On the other hand, according to the present invention, since sucrose phosphorylase is used, it can be seen that the desired oligosaccharide having high purity can be efficiently obtained.

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 グルコース−1−リン酸またはシューク
ロースと、糖アルコールとから、グルコースと糖アルコ
ールが結合した糖化合物を生成せしめるために、シュー
クロースホスホリラーゼを用いる酵素反応を利用するこ
とを特徴とする糖化合物の製造法。
1. An enzyme reaction using sucrose phosphorylase is used for producing a sugar compound in which glucose and sugar alcohol are bound from glucose-1-phosphate or sucrose and sugar alcohol. A method for producing a sugar compound.
【請求項2】 糖アルコールとしてキシリトール、アラ
ビトール、アドニトール、グリセロールを用いる請求項
1に記載の製造法。
2. The production method according to claim 1, wherein xylitol, arabitol, adonitol, or glycerol is used as the sugar alcohol.
【請求項3】 糖化合物がα−D−グルコピラノシル−
キシリトール、α−D−グルコピラノシル−アラビトー
ル、α−D−グルコピラノシル−アドニトールである請
求項1に記載の製造法。
3. The sugar compound is α-D-glucopyranosyl-
The production method according to claim 1, which is xylitol, α-D-glucopyranosyl-arabitol, or α-D-glucopyranosyl-adnitol.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002065293A (en) * 2000-08-30 2002-03-05 Hayashibara Biochem Lab Inc Method for transferring glucosyl group to polyalcohol
WO2008034158A2 (en) 2006-09-21 2008-03-27 Technische Universität Graz Method for producing 2-o-glyceryl-alpha-d-glucopyranoside
CN109576239A (en) * 2018-12-17 2019-04-05 清华大学 Heat-resisting phosphorylase and its application

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002065293A (en) * 2000-08-30 2002-03-05 Hayashibara Biochem Lab Inc Method for transferring glucosyl group to polyalcohol
WO2008034158A2 (en) 2006-09-21 2008-03-27 Technische Universität Graz Method for producing 2-o-glyceryl-alpha-d-glucopyranoside
WO2008034158A3 (en) * 2006-09-21 2008-07-17 Univ Graz Tech Method for producing 2-o-glyceryl-alpha-d-glucopyranoside
JP2010504082A (en) * 2006-09-21 2010-02-12 テッヒニシェ・ウニフェルジテート・グラーツ Method for producing 2-O-glyceryl-α-D-glucopyranoside
US10683525B2 (en) 2006-09-21 2020-06-16 Technische Universität Graz Method for producing 2-O-glyceryl-alpha-D-glucopyranoside
CN109576239A (en) * 2018-12-17 2019-04-05 清华大学 Heat-resisting phosphorylase and its application
CN109576239B (en) * 2018-12-17 2022-06-28 清华大学 Heat-resistant phosphorylase and application thereof

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