JPH0584098A - Negative control for drug sensibility test - Google Patents
Negative control for drug sensibility testInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、薬剤感受性試験用の陰
性コントロール、該陰性コントロールを備えた薬剤感受
性試験具およびそれらを使用して薬剤感受性試験を行う
方法である。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a negative control for a drug sensitivity test, a drug sensitivity test device equipped with the negative control, and a method for carrying out a drug sensitivity test using them.
【０００２】[0002]
【従来の技術】細菌やその他の微生物の薬剤に対する感
受性を試験するに当たっては、通常、試験のたびごとに
検査される微生物（「被検微生物」ということがある）
を接種した培地と共に、被検微生物を接種しないコント
ロール用の培地を作成し、各々の培地に薬剤を施した時
の状態を互いに比較することによって、被検微生物の薬
剤に対する感受性の有無や強弱等の試験を行っている。
そのため、微生物の薬剤感受性試験に際しては、被検微
生物を接種した培地とは別に、被検微生物を接種した培
地と同様の組成を有するが被検微生物を接種しない培地
をも被検微生物接種培地と同様の方法で別途作成する必
要があり、微生物の薬剤感受性試験を手間および時間の
かかるものにしていた。2. Description of the Related Art In testing the susceptibility of bacteria and other microorganisms to drugs, microorganisms usually tested at each test (sometimes referred to as "test microorganisms").
By making a control medium that is not inoculated with the test microorganisms together with the medium inoculated with, and comparing the states when the drugs were applied to each medium, the presence or absence of the sensitivity of the test microorganisms to the drug, the strength, etc. Is conducting a test.
Therefore, in the drug sensitivity test of microorganisms, in addition to the medium inoculated with the test microorganism, a medium having the same composition as the medium inoculated with the test microorganism but not inoculated with the test microorganism is also used as the test microorganism inoculation medium. It has to be prepared separately by the same method, which makes the drug susceptibility test of microorganisms troublesome and time-consuming.
【０００３】また、例えば連鎖球菌の薬剤感受性試験に
おけるように培地に血液を添加する必要がある場合は、
陰性コントロール用培地の組成によっては褐変や沈殿等
が生ずることがあり、それによって薬剤接種培地と薬剤
非接種培地との対比が困難になり、微生物の薬剤感受性
試験が正確に行えないという問題が生じていた。When it is necessary to add blood to the medium, as in the case of Streptococcus drug susceptibility test,
Depending on the composition of the negative control medium, browning, precipitation, etc. may occur, which makes it difficult to compare the drug inoculated medium and the drug non-inoculated medium, resulting in the problem that the drug susceptibility test of microorganisms cannot be performed accurately. Was there.
【０００４】[0004]
【発明の内容】上記の点から、本発明者らは、微生物の
薬剤感受性試験を手間をかけずに簡単に且つ正確に行え
る方法、およびそのための器具等を開発することを目的
として研究を行ってきた。その結果、静菌作用または殺
菌作用を有する陰性コントロールを予め多数作成してお
き、薬剤感受性試験時にこの陰性コントロールの必要数
だけを使用して試験を行うと、試験のたびごとに陰性コ
ントロール用の培地を別に作成する手間がなくなり、か
つ微生物の薬剤感受性試験が正確にできることを見出し
て本発明を完成した。From the above point of view, the present inventors have conducted research for the purpose of developing a method for easily and accurately carrying out a drug sensitivity test of microorganisms without any trouble, and a device therefor. Came. As a result, if a large number of negative controls with bacteriostatic or bactericidal activity were created in advance and the test was performed using only the required number of these negative controls during the drug susceptibility test, the negative control The present invention has been completed by finding that the labor of separately preparing a medium can be eliminated and that a drug sensitivity test of microorganisms can be accurately performed.
【０００５】したがって、本発明は、静菌作用または殺
菌作用を有する物質を保持していることを特徴とする薬
剤感受性試験用の陰性コントロールである。本発明は、
更に、該陰性コントロールを備えた微生物の薬剤感受性
試験具およびそれらを使用して微生物の薬剤に対する感
受性を試験する方法である。Therefore, the present invention is a negative control for a drug susceptibility test, which is characterized by retaining a substance having a bacteriostatic or bactericidal action. The present invention is
Further, there are provided a microbial drug susceptibility test device provided with the negative control and a method for testing microbial susceptibility to a drug by using them.
【０００６】本発明の陰性コントロールは、静菌作用ま
たは殺菌作用を有する物質（以後「静菌／殺菌物質」と
いう）を、微生物の薬剤感受性試験において通常使用さ
れているマイクロプレートまたはそれに類する容器中に
保持した状態にして置くのが便利である。そこで、マイ
クロプレートを使用した陰性コントロールを例に挙げ
て、従来の微生物の薬剤感受性試験と本発明の薬剤感受
性試験の違いについて、図１および図２を参照して以下
に簡単に説明する。The negative control of the present invention uses a substance having a bacteriostatic or bactericidal action (hereinafter referred to as "bacteriostatic / bactericidal substance") in a microplate or a container similar to that usually used in the drug sensitivity test of microorganisms. It is convenient to put it in the state of holding it. Therefore, the difference between the conventional drug susceptibility test of microorganisms and the drug susceptibility test of the present invention will be briefly described below with reference to FIGS. 1 and 2, taking a negative control using a microplate as an example.
【０００７】図１は、従来の薬剤感受性試験に関するも
のであり、そこでは被検微生物を接種した培地１と被検
微生物を接種してない培地２の両方が作成される。マイ
クロプレート３には複数の凹部（ウエル）４〜９が設け
てあり、例えばウエル４〜６を微生物の薬剤感受性試験
用に、またウエル７〜９を陰性コントロール用に使用す
る。FIG. 1 relates to a conventional drug susceptibility test, in which both a medium 1 inoculated with a test microorganism and a medium 2 not inoculated with a test microorganism are prepared. The microplate 3 is provided with a plurality of recesses (wells) 4-9. For example, the wells 4-6 are used for microbial drug sensitivity test, and the wells 7-9 are used for negative control.
【０００８】微生物の薬剤感受性試験用ウエル４〜６に
は、スポイト１０等の適当な手段によって、被検微生物
接種培地１が加えられる。ウエル４〜６には、必要に応
じて、希釈用液体やこの種の試験において通常使用され
ているウマ溶血液等の成分を添加することもできる。The test microorganism inoculation medium 1 is added to the wells 4 to 6 for microbial drug susceptibility test by an appropriate means such as a dropper 10. If necessary, the wells 4 to 6 may be added with a component such as a diluting liquid or horse hemolyzed blood which is usually used in this type of test.
【０００９】一方、陰性コントロール用のウエル７〜９
には、スポイト１１等の適当な手段によって、被検菌未
接種培地２が加えられ、必要に応じて希釈用液体やこの
種の試験において通常使用されているウマ溶血液等の成
分が添加される。On the other hand, wells 7 to 9 for negative control
To the medium is added an inoculated medium 2 to be inspected bacteria by an appropriate means such as a dropper 11 and, if necessary, a liquid for dilution or components such as horse hemolyzed blood which are usually used in tests of this kind. It
【００１０】そして、場合によって上記で準備したマイ
クロプレートを、所定時間培養した後、薬剤感受性試験
用ウエル４〜６内の状態と、陰性コントロール用ウエル
７〜９内の状態とを、目視、顕微鏡、吸光度測定装置等
の適当な手段により対比することによって、薬剤感受性
試験用ウエル４〜６内の薬剤に対する被検微生物の感受
性の有無および強弱等が判定される。After optionally culturing the microplate prepared above for a predetermined time, the state in the drug sensitivity test wells 4 to 6 and the state in the negative control wells 7 to 9 are visually and microscopically examined. The presence or absence of the sensitivity of the test microorganism to the drug in the drug sensitivity test wells 4 to 6 and the strength thereof are determined by comparing with an appropriate means such as an absorbance measuring device.
【００１１】上記の試験において、薬剤感受性試験用ウ
エル４〜６には、試験しようとする薬剤を、薬剤感受性
試験用ウエルへの培地１の添加前または添加後、或いは
培養前または培養後に加える。その場合に、薬剤感受性
試験用ウエル４〜６の各々に加えられる薬剤は、各々の
試験内容に応じて、同種のものであってもまたは異種の
ものであってもよく、また薬剤の濃度はウエル４〜６で
同じであっても、異なっていてもよい。そして、薬剤感
受性試験用ウエル４〜６に加えられた被検微生物は、ウ
エル４〜６内の薬剤に対する感受性の有無や強弱に応じ
て、死滅、生存、増殖等の状態を示す。In the above test, the drug to be tested is added to the drug sensitivity test wells 4 to 6 before or after addition of the medium 1 to the drug sensitivity test well, or before or after the culture. In that case, the drug added to each of the drug susceptibility test wells 4 to 6 may be the same or different, depending on the content of each test, and the concentration of the drug may be different. The wells 4 to 6 may be the same or different. Then, the test microorganisms added to the drug susceptibility test wells 4 to 6 show states such as death, survival, and growth depending on the presence or absence of sensitivity to the drug in the wells 4 to 6 and their strength.
【００１２】そして、上記の説明から明らかなように、
従来の微生物の薬剤感受性試験では、被検微生物接種培
地１の他に被検微生物未接種培地２を別途作成すること
が必要であり、しかもそのようにして作成した２つの培
地を薬剤感受性試験用ウエルと陰性コントロール用ウエ
ルの各々に区別して注入する必要があり、手間および時
間を要する。And, as is clear from the above description,
In the conventional drug susceptibility test of microorganisms, it is necessary to separately prepare a test microorganism non-inoculated medium 2 in addition to the test microorganism inoculated medium 1, and the two media thus prepared are used for the drug susceptibility test. It is necessary to inject separately into each well and well for negative control, which requires labor and time.
【００１３】次に、図２を参照して本発明について説明
する。図２の方法では、被検微生物接種培地１のみが作
成される。そして、マイクロプレート３には、静菌／殺
菌物質１２を入れた陰性コントロール用ウエル７〜９
が、該静菌／殺菌物質を入れない薬剤感受性試験用ウエ
ル４〜６と共に設けられている。Next, the present invention will be described with reference to FIG. In the method of FIG. 2, only the test microorganism inoculation medium 1 is prepared. Then, in the microplate 3, negative control wells 7 to 9 containing bacteriostatic / bactericidal substance 12 were placed.
Are provided together with the drug susceptibility test wells 4 to 6 containing no bacteriostatic / bactericidal substance.
【００１４】そして、微生物の薬剤感受性試験に当たっ
ては、ウエル４〜９の全てに、スポイト１０等の適当な
手段によって被検微生物接種培地１が加えられ、ウエル
４〜６には、試験しようとする薬剤を、ウエルへの培地
１の添加前または添加後、或いは培養前または培養後に
加える。ウエル４〜９には、従来技術の場合と同様に、
必要に応じて希釈用液体やこの種の試験において通常使
用されているウマ溶血液等の成分を添加することもでき
る。In the microbial drug susceptibility test, the test microorganism inoculation medium 1 is added to all of the wells 4 to 9 by an appropriate means such as a dropper 10, and the wells 4 to 6 are to be tested. The drug is added before or after the addition of the medium 1 to the well, or before or after the culture. In wells 4-9, as in the case of the prior art,
If necessary, a diluting liquid and components such as equine hemolyzed blood usually used in this type of test can be added.
【００１５】その結果、薬剤感受性試験用ウエル４〜６
に加えられた被検微生物（被検菌接種培地１）は、ウエ
ル４〜６内の薬剤に対する感受性の有無や強弱に応じ
て、死滅、生存、増殖等の状態を示す。一方、陰性コン
トロール用ウエル７〜９に加えられた被検微生物（被検
菌接種培地１）は、ウエル７〜９内に入れた静菌／殺菌
物質によって、その活性を抑制または阻害され、或いは
殺菌されて、死滅したりその増殖が抑制される結果、被
検微生物がウエル７〜９に加えられないブランク（陰
性）の場合と同様の状態を呈し、陰性コントロールとし
て機能する。As a result, wells 4 to 6 for drug sensitivity test
The test microorganism (test bacterial inoculation medium 1) added to the cells shows a state of death, survival, growth, etc. depending on the presence or absence of sensitivity to the drug in the wells 4 to 6 and the strength. On the other hand, the test microorganism (test bacterial inoculation medium 1) added to the negative control wells 7 to 9 has its activity suppressed or inhibited by the bacteriostatic / bactericidal substance contained in the wells 7 to 9, or As a result of being sterilized and killed or the growth thereof being suppressed, a state similar to the case of blank (negative) in which the test microorganism is not added to wells 7 to 9 is exhibited, and it functions as a negative control.
【００１６】上記図２による説明から明らかなように、
静菌／殺菌物質からなる陰性コントロールを使用する本
発明の場合は、被検微生物未接種培地を試験のたびごと
に別途作成する必要がなく、しかもマイクロプレートの
ウエル４〜９の全てに被検菌接種培地１を同様に加える
だけで試験を行うことができるので、微生物の薬剤感受
性試験を極めて簡単に行うことができる。As is clear from the description with reference to FIG.
In the case of the present invention in which a negative control consisting of bacteriostatic / bactericidal substances is used, it is not necessary to separately prepare a test microorganism non-inoculated medium for each test, and moreover, all the wells 4 to 9 of the microplate are tested. Since the test can be carried out only by adding the bacterial inoculation medium 1 in the same manner, the drug sensitivity test of microorganisms can be carried out very easily.
【００１７】本発明の陰性コントロールおよびそれを備
えた微生物の薬剤感受性試験具は、図２に示したマイク
ロプレートに限定されず、種々の形状および構造を有す
る陰性コントロールを包含する。例えば陰性コントロー
ルを備えた薬剤感受性試験具を、図２におけるような一
つのプレートに複数のウエルを設けたマイクロプレート
とし、そのうちの幾つかを薬剤感受性試験用ウエルと
し、また残りの幾つかを陰性コントロール用ウエルとし
てもよい。The negative control of the present invention and the microbial drug susceptibility testing device provided with the negative control are not limited to the microplate shown in FIG. 2 and include negative controls having various shapes and structures. For example, the drug susceptibility test device provided with a negative control is a microplate in which a plurality of wells are provided in one plate as shown in FIG. 2, some of them are used as drug susceptibility test wells, and some of them are negative. It may be used as a control well.
【００１８】または、図３に示すように、静菌／殺菌物
質１２を入れた陰性コントロール用のウエルまたは容器
（小容器）１３を一つずつ個別に設けて、それを個別に
保存、流通、販売してもよく、或いは図４に示すよう
に、該陰性コントロール用ウエルまたは容器１３を薬剤
感受性試験用ウエルまたは容器（小容器）１４と組み合
わせて、一つの薬剤感受性試験具としてもよい。Alternatively, as shown in FIG. 3, negative control wells or containers (small containers) 13 containing the bacteriostatic / bactericidal substance 12 are individually provided and stored and distributed individually. Alternatively, as shown in FIG. 4, the negative control well or container 13 may be combined with a drug sensitivity test well or container (small container) 14 to form one drug sensitivity test device.
【００１９】本発明の陰性コントロールで使用する静菌
／殺菌物質は、液体状、半固形状、固体状のいずれであ
ってもよい。そのうちでも、保存性および安定性の点か
ら、静菌／殺菌物質を乾燥固体状にウエルや容器中に保
持して、保存、流通、販売等を行うのが望ましい。The bacteriostatic / bactericidal substance used in the negative control of the present invention may be liquid, semi-solid or solid. Among them, from the viewpoint of storability and stability, it is desirable to hold the bacteriostatic / bactericidal substance in a dry solid state in wells and containers for storage, distribution and sale.
【００２０】陰性コントロールで使用する静菌／殺菌物
質は、非揮発性であって、被検微生物接種培地（通常液
状を呈する）または希釈液を加えたときに、該培地また
は希釈液に溶解し得るものを使用すると、陰性コントロ
ールと薬剤感受性試験用部分（ウエル等）との対比を確
実に行うことができ望ましい。また、静菌／殺菌物質と
して、その静菌作用または殺菌作用が特定の微生物に特
異的でなく、種々の微生物に対して共通に作用する汎用
の静菌／殺菌物質を使用すると、静菌／殺菌物質を保持
する陰性コントロールを種々の微生物に対する薬剤感受
性試験に共通して使用することができ望ましい。The bacteriostatic / bactericidal substance used in the negative control is non-volatile and dissolves in the test microorganism inoculation medium (usually in liquid form) or diluent when added. It is preferable to use the obtained one because it is possible to reliably compare the negative control with the drug susceptibility test portion (well, etc.). In addition, as a bacteriostatic / bactericidal substance, when a general-purpose bacteriostatic / bactericidal substance whose bacteriostatic or bactericidal action is not specific to a specific microorganism but commonly acts on various microorganisms is used, A negative control containing a bactericidal substance is desirable because it can be commonly used in drug susceptibility tests against various microorganisms.
【００２１】静菌／殺菌物質の代表例としては、種々の
防腐剤、消毒薬、殺菌剤が知られており、本発明ではそ
れのうちから適当なものを選んで使用することができ
る。本発明で使用し得る静菌／殺菌物質の具体例として
は、主に防腐剤として使用されているデヒドロ酢酸およ
びそのナトリウム塩、安息香酸およびその塩、サリチル
酸、ソルビイン酸およびその塩、ｐ−オキシ安息香酸の
エチル、ブチルまたはプロピルエステル、メチルナフト
キノン、主に防腐・殺菌剤として使用されている次亜塩
素酸、次亜塩素酸ナトリウム、サラシ粉、ニトロフラゾ
ーン、塩化水銀(II)、陰イオン性界面活性剤、フェノー
ル類、エチレンジアミン四酢酸などのキレート化合物等
を挙げることができる。静菌／殺菌物質は、１種類のみ
を使用しても、または互いに悪影響を及ぼさない限りは
２種以上を組み合わせて使用してもよい。As typical examples of bacteriostatic / bactericidal substances, various preservatives, disinfectants and bactericides are known, and in the present invention, an appropriate one can be selected and used. Specific examples of the bacteriostatic / bactericidal substance that can be used in the present invention include dehydroacetic acid and its sodium salt, benzoic acid and its salt, salicylic acid, sorbic acid and its salt, p-oxy, which are mainly used as preservatives. Ethyl, butyl or propyl ester of benzoic acid, methylnaphthoquinone, hypochlorous acid, sodium hypochlorite, which is mainly used as an antiseptic / bactericidal agent, porridge powder, nitrofurazone, mercury (II) chloride, anion Examples thereof include a surface active agent, phenols, and chelate compounds such as ethylenediaminetetraacetic acid. The bacteriostatic / bactericidal substances may be used alone or in combination of two or more as long as they do not adversely affect each other.
【００２２】上記した静菌／殺菌物質のうちでも、防腐
剤、陰イオン界面活性剤およびキレート化合物の混合物
が、非揮発性、被検微生物接種液体培地および希釈液へ
の良好な溶解性、多種の微生物に対する優れた静菌作用
または殺菌作用（微生物への非特異性）の点から好まし
い。そして、防腐剤、陰イオン界面活性剤およびキレー
ト化合物の混合物において、特に防腐剤としてデヒドロ
酢酸またはその塩を使用し、キレート化合物としてエチ
レンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を使用したものが特に
好ましい。また、陰イオン界面活性剤としてはラウリル
硫酸ナトリウムを使用するのが好ましい。Among the above-mentioned bacteriostatic / bactericidal substances, the mixture of the preservative, the anionic surfactant and the chelating compound is non-volatile, has good solubility in the liquid medium for inoculating the microorganism to be tested and the diluent, and has a wide variety. Is preferable from the viewpoint of excellent bacteriostatic action or bactericidal action against microorganisms (non-specificity to microorganisms). In the mixture of the preservative, the anionic surfactant and the chelate compound, it is particularly preferable to use dehydroacetic acid or its salt as the preservative and ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) as the chelate compound. Further, it is preferable to use sodium lauryl sulfate as the anionic surfactant.
【００２３】デヒドロ酢酸、ラウリル硫酸ナトリウムお
よびＥＤＴＡの混合物を静菌／殺菌物質として使用する
陰性コントロールでは、それらの割合を重量で、デヒド
ロ酢酸ナトリウム：ラウリル硫酸ナトリウム：ＥＤＴＡ
＝２〜３：１〜２：２〜４となるようにするのがよい。
また、陰性コントロールにおける該３者の混合物の保持
量は、被検微生物接種液体培地またはその希釈液を各ウ
エル（容器）中に分注したときに、液中におけるデヒド
ロ酢酸の濃度が約１〜２％、ラルリル硫酸ナトリウムの
濃度が約０．５〜１％、そしてＥＤＴＡの濃度が約４０
〜１００ｍＭとなるようにするのがよい。In a negative control using a mixture of dehydroacetic acid, sodium lauryl sulphate and EDTA as a bacteriostatic / bactericidal substance, their proportions are by weight, sodium dehydroacetate: sodium lauryl sulphate: EDTA.
= 2 to 3: 1 to 2: 2 to 4 is preferable.
In addition, the retention amount of the mixture of the three in the negative control is such that the concentration of dehydroacetic acid in the liquid is about 1 to 1 when the test microorganism inoculated liquid medium or its diluted solution is dispensed into each well (container). 2%, sodium lauryl sulfate concentration about 0.5-1%, and EDTA concentration about 40%.
It is recommended that the concentration be ˜100 mM.
【００２４】[0024]
《実施例 １》図５に示すような、直径約６．５ｍｍ、
深さ約１１．０ｍｍの円形ウエル１５を縦に６個並べた
ものを更に横に１０列並列させたマイクロプレート１６
を準備した。このマイクロプレート１６において、右か
ら縦第１列目の上から１個目のウエル１５ａと２個目の
ウエル１５ｂは陰性コントロール用ウエルであり、右か
ら縦第１列目の下２つのウエル１５ｃおよびウエル１５
ｄは陽性コントロール用ウエルであり、そして右から縦
第２列目以降の残りのウエルは薬剤感受性試験用ウエル
である。マイクロプレートの上記陰性コントロール用ウ
エル１５ａと１５ｂの各々に、デヒドロ酢酸ナトリウム
４％、ラウリル硫酸ナトリウム２％およびＥＤＴＡ１６
０ｍＭを含む水溶液（ｐＨ７．２）を２５μｌずつ分注
した後、２５℃で１６時間乾燥して、陰性コントロール
用ウエルおよび薬剤感受性試験用ウエルの両方を備えた
本発明の薬剤感受性試験具を作成した。<< Example 1 >> As shown in FIG. 5, a diameter of about 6.5 mm,
A microplate 16 in which 6 circular wells 15 each having a depth of about 11.0 mm are arranged vertically and further 10 rows are arranged in parallel.
Prepared. In this microplate 16, the first well 15a and the second well 15b from the top in the first column from the right are negative control wells, and the bottom two wells 15c and the wells in the first column from the right are well. 15
d is a positive control well, and the remaining wells from the second column onward from the right are drug sensitivity test wells. In each of the negative control wells 15a and 15b of the microplate, sodium dehydroacetate 4%, sodium lauryl sulfate 2% and EDTA16 were added.
An aqueous solution (pH 7.2) containing 0 mM was dispensed in 25 μl aliquots and then dried at 25 ° C. for 16 hours to prepare a drug susceptibility test device of the present invention having both a negative control well and a drug susceptibility test well. did.
【００２５】上記で作成した薬剤感受性試験具の陰性コ
ントロールウエルおよび薬剤感受性試験用ウエルの全て
に大腸菌を７５０個／μｌの割合で含有する液体培地
（ｐＨ７．３）を１００μｌずつ分注し、次いで湿潤箱
中で３７℃において１８時間培養した。培養後に薬剤感
受性試験具を湿潤箱から取り出して、各ウエルの状態を
目視で観察するとともに、その吸光度を測定した。100 μl of a liquid medium (pH 7.3) containing E. coli at a ratio of 750 cells / μl was dispensed into each of the negative control wells and the drug sensitivity test wells of the drug susceptibility test device prepared above, then, Incubated at 37 ° C. for 18 hours in a humid box. After culturing, the drug sensitivity test device was taken out of the wet box, and the state of each well was visually observed, and the absorbance was measured.
【００２６】２個の陰性コントロール用ウエルでは大腸
菌の発育は全く認められず、ウエル中の液体培地は透明
であり、褐変や沈殿がなく、６６０ｎｍでの吸光度の値
は０.０１０±０.００５であった。一方、薬剤感受性試
験用ウエルでは、大腸菌が増殖して培地が混濁してお
り、６６０ｎｍでの吸光度の値は０.５００±０.０５で
あった。No growth of E. coli was observed in the two negative control wells, the liquid medium in the wells was transparent, there was no browning or precipitation, and the absorbance value at 660 nm was 0.010 ± 0.005. Met. On the other hand, in the drug sensitivity test well, Escherichia coli grew and the medium was turbid, and the value of absorbance at 660 nm was 0.500 ± 0.05.
【００２７】マイクロプレートの薬剤感受性試験用ウエ
ルに予め段階希釈した薬剤を乾燥固定した後、該薬剤感
受性試験用ウエルに上記の液体培地を分注し、次いで３
７℃で１８時間培養したところ、ある薬剤濃度以上のウ
エルでは増殖は抑制されており、その結果を上記の陰性
コントロール用ウエルにおける状態と比較することによ
って、この薬剤の大腸菌に対する最小発育阻止濃度を求
めることができた。After the serially diluted drug was dried and fixed in the drug sensitivity test well of the microplate, the above liquid medium was dispensed into the drug sensitivity test well, and then 3
After culturing at 7 ° C for 18 hours, the growth was suppressed in wells with a certain drug concentration or higher. By comparing the results with the conditions in the negative control wells described above, the minimum inhibitory concentration of this drug against E. coli was determined. I was able to ask.
【００２８】《実施例 ２》実施例１で作成したのと同
じ、陰性コントロール用ウエル（２個）と薬剤感受性試
験用ウエルを備えた薬剤感受性試験具を使用した。該薬
剤感受性試験具の陰性コントロールウエルおよび薬剤感
受性試験用ウエルの全てに肺炎桿菌（クレブシラ・ニュ
モニア菌；Klebsiella pneumoniae）を７５０個／μｌ
の割合で含有する液体培地を１００μｌずつ分注し、次
いで湿潤箱中で３７℃において１８時間培養した。培養
後に薬剤感受性試験具を湿潤箱から取り出して、各ウエ
ルの状態を目視で観察した。Example 2 The same drug susceptibility test device as that prepared in Example 1 provided with negative control wells (2) and drug susceptibility test wells was used. 750 pieces / μl of Klebsiella pneumoniae (Klebsiella pneumoniae) in all of the negative control well and the well for drug sensitivity test of the drug susceptibility test device
The liquid culture medium containing 100 μl was dispensed by 100 μl each, and then cultured in a humid box at 37 ° C. for 18 hours. After culturing, the drug susceptibility test device was taken out of the wet box, and the condition of each well was visually observed.
【００２９】２個の陰性コントロール用ウエルでは肺炎
桿菌の発育は全く認められず、ウエル中の液体培地は透
明であり、褐変や沈殿がなかった。一方、薬剤感受性試
験用ウエルでは、肺炎桿菌が増殖して、培地は混濁して
いた。No growth of Klebsiella pneumoniae was observed in the two negative control wells, the liquid medium in the wells was transparent, and neither browning nor precipitation occurred. On the other hand, in the drug sensitivity test well, Klebsiella pneumoniae grew and the medium was cloudy.
【００３０】《実施例 ３》エンテロバクター・クロア
カエ菌（Enterobacter cloacae）、セラチティア・マル
セセンス菌（Serratia marcescens）、プロテウス・ミ
ラビリス菌（Proteusmirabilis）、緑膿菌（シュードモ
ナス・アエルギノサ菌；Pseudomonas aeruginosa）、キ
サントモナス・マルトフィリア菌（Xanthomonas maltop
hilia）、アシネトバクター・カルコアセティクス菌（A
cinetobacter calcoaceticus）、黄色ブドウ球菌(スタ
フィロコッカス・アウレウス菌;Staphylococcus aureu
s）、化膿連鎖球菌(ストレプトコッカス・ピゲネス菌;S
treptococcus pyogenes）、腸球菌(エンテロコッカス・
ファエカリス菌;Enterococcus faecalis）の各々につい
ても、上記実施例２と同様にして、各菌を接種した培地
を薬剤感受性試験具の陰性コントロール用ウエルと薬剤
感受性試験用ウエルの両方に分注して培養を行ったとこ
ろ、陰性コントロール用ウエル中の液体培地は透明で、
褐変や沈殿が生じていなかった。一方、薬剤感受性試験
用ウエルでは、各菌の増殖が行われていた。<Example 3> Enterobacter cloacae, Serratia marcescens, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Xanthomonas Xanthomonas maltop
hilia), Acinetobacter calcoaceticus (A
cinetobacter calcoaceticus), Staphylococcus aureu
s), Streptococcus pyogenes (Streptococcus pigenes; S
treptococcus pyogenes), enterococci (enterococcus
For each of the Enterococcus faecalis), the culture medium inoculated with each bacterium was dispensed into both the negative control well and the drug susceptibility test well of the drug susceptibility test device and cultured in the same manner as in Example 2 above. The liquid medium in the negative control wells was transparent,
No browning or precipitation occurred. On the other hand, in the drug sensitivity test well, the growth of each bacterium was carried out.
【００３１】[0031]
【発明の効果】本発明の陰性コントロールまたは該陰性
コントロールを備えた薬剤感受性試験具を使用すること
によって、微生物の薬剤に対する感受性試験のたびごと
に陰性コントロール用の培地を別途作成する手間がなく
なり、微生物の薬剤感受性試験を極めて簡単に行うこと
ができる。また、陰性コントロールに保持させる静菌／
殺菌物質の種類を選ぶことにより、被検微生物接種培地
を注入した際に、褐変や沈殿のない良好なコントロール
を得ることができる。EFFECTS OF THE INVENTION By using the negative control of the present invention or the drug susceptibility test device equipped with the negative control, it is possible to eliminate the trouble of separately preparing a negative control medium for each microbial susceptibility test to a drug. Microbial drug susceptibility testing can be performed very easily. In addition, bacteriostatic /
By selecting the type of bactericidal substance, good control without browning or precipitation can be obtained when the test microorganism inoculation medium is injected.
【図１】従来の微生物の薬剤感受性試験法を示した図で
ある。FIG. 1 is a diagram showing a conventional method for testing drug sensitivity of microorganisms.
【図２】本発明による微生物の薬剤感受性試験法を示し
た図である。FIG. 2 is a diagram showing a drug sensitivity test method for microorganisms according to the present invention.
【図３】静菌作用または殺菌作用を有する物質を入れた
本発明の陰性コントロール用ウエル（容器）の一例を示
す図である。FIG. 3 is a view showing an example of a negative control well (container) of the present invention containing a substance having a bacteriostatic action or a bactericidal action.
【図４】陰性コントロール用ウエル（容器）と、薬剤感
受性試験用ウエル（容器）とを組み合わせた本発明の薬
剤感受性試験具の一例を示す図である。FIG. 4 is a diagram showing an example of a drug susceptibility test device of the present invention in which a negative control well (container) and a drug susceptibility test well (container) are combined.
【図５】本発明の実施例で使用したマイクロプレートを
示す図である。FIG. 5 is a view showing a microplate used in an example of the present invention.
１ 被検微生物接種培地 ２ 被検微生物未接種培地 ３ マイクロプレート ４ ウエル ５ ウエル ６ ウエル ７ ウエル ８ ウエル ９ ウエル １０ スポイト １１ スポイト １２ 静菌作用または殺菌作用を有する物質 １３ 陰性コントロール用ウエル（容器） １４ 薬剤感受性試験用ウエル（容器） １５ ウエル １６ マイクロプレート 1 test microorganism inoculated medium 2 test microorganism non-inoculated medium 3 microplate 4 well 5 well 6 well 7 well 8 well 9 well 10 dropper 11 dropper 12 substance having bacteriostatic or bactericidal action 13 negative control well (container) 14 Wells (Containers) for Drug Susceptibility Testing 15 Wells 16 Micro Plates
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山口 衛 神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地 テルモ株式会社内 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Mamoru Yamaguchi 1500 Inoguchi, Nakai-cho, Ashigarakami-gun, Kanagawa Terumo Corporation
Claims (9)
保持していることを特徴とする薬剤感受性試験用の陰性
コントロール。1. A negative control for a drug susceptibility test, which holds a substance having a bacteriostatic or bactericidal action.
マイクロプレートの凹部またはそれに類する容器中に保
持している請求項１の陰性コントロール。2. The negative control according to claim 1, wherein the substance having a bacteriostatic action or a bactericidal action is held in the concave portion of the microplate or a similar container.
乾燥状態で保持している請求項１または２の陰性コント
ロール。3. The negative control according to claim 1 or 2, wherein a substance having a bacteriostatic action or a bactericidal action is kept in a dry state.
が、防腐剤、界面活性剤およびキレート化合物の混合物
からなる請求項１〜３のいずれか１項の陰性コントロー
ル。4. The negative control according to claim 1, wherein the substance having a bacteriostatic action or bactericidal action comprises a mixture of a preservative, a surfactant and a chelate compound.
陰性コントロール。5. The negative control according to claim 4, wherein the preservative is dehydroacetic acid.
る請求項４または５の陰性コントロール。6. The negative control according to claim 4, wherein the surfactant is an anionic surfactant.
酸である請求項４〜６のいずれか１項の陰性コントロー
ル。7. The negative control according to claim 4, wherein the chelate compound is ethylenediaminetetraacetic acid.
トロールを備えた微生物の薬剤感受性試験具。8. A drug susceptibility test tool for microorganisms, comprising the negative control according to any one of claims 1 to 8.
トロールまたは請求項８の薬剤感受性試験具を使用して
微生物の薬剤に対する感受性の試験を行う方法。9. A method for testing the susceptibility of a microorganism to a drug, using the negative control according to any one of claims 1 to 7 or the drug susceptibility testing device according to claim 8.
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| JP03274948A JP3094562B2 (en) | 1991-09-27 | 1991-09-27 | Negative controls for drug susceptibility testing |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106133129A (en) * | 2014-03-19 | 2016-11-16 | 株式会社日立高新技术 | Check device |
| CN115341013A (en) * | 2022-07-06 | 2022-11-15 | 清华珠三角研究院 | Microbial drug sensitivity detection method, device, equipment and storage medium |
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1991
- 1991-09-27 JP JP03274948A patent/JP3094562B2/en not_active Expired - Fee Related
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| CN106133129A (en) * | 2014-03-19 | 2016-11-16 | 株式会社日立高新技术 | Check device |
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| CN115341013A (en) * | 2022-07-06 | 2022-11-15 | 清华珠三角研究院 | Microbial drug sensitivity detection method, device, equipment and storage medium |
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