JPH05508477A - ＨＩＶ特異的ＩｇＭの検出のための免疫検定 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＨＩＶ特異的１ｇＭの検出のための免疫検定発明の分野 本発明はヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）に対する抗体を検出するための免疫学 的診断法に関する。より詳しくは、本発明はＨＩＶ特異特異的免疫プロ１９２Ｍ ｇＭ）の検出のための固相酵素免疫測定法（エリザ）に関する。本発明の一実施 態様は、ＨＩＶ血清陽性母親に生まれた全ての子供から子宮内でＨＩｖ感染に現 実にかかったこれらの新生児の検出のための特異的試験を提供する。特に、本発 明は、出生前（ｐｒｅｐａｒｔｕｍ）母／胎児環境を経て受身に獲得されたこれ らの母親の抗ＨＩＶ抗体から小児の自原の抗ＨＩＶ抗体応答により生じた抗体を 区別することを可能にする。

発明の背景 １９８１年、その最初の認識から、後天性免疫不全症候群（エイズ）は世界的な 汎発流行病となった。ザ・ワールド・ヘルス・オーガナイゼイションは、世界的 に５００−１０００万の人々がエイズに感染していると見積もっている。ザ・セ ンター・フォア・ディシーズ・コントロール・イン・アトランタの統計は、１９ ９１年が終わる前に、１２５０万のＨＩＶ感染アメリカ人がおり、それらの１０ ゜０００ないし２０．０００は感染小児及び子供であろうと示唆する。（オレス ク、ジェイ、：ナショナル・ヒストリィ・オブＨＩＶインフェクシジン、レポー ト・オフ・サージエン・ゼネラルズ・ワークショップ・オン・チルドレン・ウィ ズ・ＨＩＶインフェクション・アンド・ゼア・ファミリイズ、ＤＨＨＳパブリッ ク・ＮＯ１ＨＲ５−Ｄ−ＭＣ８７−１、ワシントンＤ、　Ｃ，ニスブト・オフ・ ドクス、。

Ｕ、Ｓ、ガバメント・プリント／オフ、、１９８７．２４−２５゜ザ・パブリッ ク・ヘルス・サービスはｇｏｏ、ｏｏｏと１．２００．０００の間の数を置く。

ＣＤＣ，エステイメイト・オフ・ＨＩＶブレバレンス・アンド・プロジェイテッ ド・エイズ・ケイスズ：サマリイ・オフ・ア・ワークショップ、ＩＯ且３１−１ １月１、１９８９、　ＭＭＷＲ３９ニア；　１１０−１１９　。

エイズの病因因子はヒト免疫不全ウィルス、多くのファミリ゛イ・レトロビリダ ニ、であり、モしてＨＩＶ、”ＨＴＬＶ−ｍ又はＡＲＶとして知返れる二最′近 の証拠は、ＨＩＶ病がＨＩＶ感染体液との接触又は暴露により一次的に伝えられ るこた。（Ｕ、　Ｓ、コンブレス：ヒアリング・ビフォア・ザ・セレクト・コミ ッティー・オン・チルドレン、ユース゛・アンド・ファミリーズ、ビョンドパザ ・ステレオタイプズ：ウーマン、アディクション・アンド・ペリナタル・サブス タンス・アブユーズ：４月１９．１９９０．７頁） 子供は報告されたエイズ患者の最も速い成長群の一員である。サイエンティフィ ック・アメリカン、１０月、１９８８゜１９８２年まで小児科主イズが科学文献 で論ぜられることはなかった。既に、工ないし４令の子供会の間で７番目の死の 先頭例がある。１９９１年にはＨＩＶ感染の子供の全数は、１０，０００と２０ ゜０００の間であろうと見積もられている。これは各１０の小児科病院ベッドの 一つが１０億ドル以上の全費用でエイズにかかった子供で占められることを意味 すると解釈できる。セクレタリーズ・ワーク・グループ・オン・ベディアトリッ ク・ＨＩＶインフェクション・アンド・ディジイーズ：ファイナル・レポート、 ＤＨＨ３出版、Ｎｏ５ＮＩＨ８９−３０６３、ワシントン、Ｄ、Ｃ，スプト・オ フ・ドクス、Ｕ、Ｓ、　ガバメント・プリント・オフ、１９８８．１２−１３゜ 現在の報告は、感染した母親に生まれた赤ん坊の２５−３５％は、ＨＩＶ病にか かると示唆する。

分娩前後の伝達は、（１）出生前に、子宮におけるウィルスの胎盤通過により、 （２）分娩の間、感染した母親の血液及び膣液への暴露により、そして（３）出 生後の間、多分ウィルスを含む母乳の摂取により起きる。エイズ・アンド・マザ ー・マニフェスティションズ・オフ・ザＨＩＶ−インフェクション、ノエス・パ ブリケイションズ、パーク・リッジ、ニュー・ジャーシイ（１９８７）、キャブ ■、ジ・エビデミオロジイ・オフ・ベディアトリックＨＩＶインフェクションズ 、４２−４３頁。　。

Ｈ’ＩＶ感染は患者の免疫系を徐々に損なう。一つの結果は、日和見感染により 感受性の個体である。ＨＩＶに感染した大人は、ヘルパーＴ細胞の劇的不全を伴 うリンパ球減少及び厳しい細胞媒介免疫不全並びに高グロブリン血症及び−次又 はブースター免疫後、抗体を生じるのが減じた能力を有するようである。ジャー ナル・オフ・ベディアトリクス、１１０：５６３−５６６（１９８７）。大人の ＨＩＶ病に特徴的な日和見感染又は悪性はフネウモリスティス・カルミ肺炎、サ イトメガロウィルス網膜炎及びカポジ肉腫を含む。ＨＩＶ感染は小児において同 様の日和見感染及び免疫異常を生ずる一方、先天的に獲得したＨＩＶ感染は、成 長及び発達の変調となる患者の中枢神経系により十分に影響を受ける。

ＨＩＶによる感染後、直ちに知られていない期間、感染個体は抗体陰性状態、即 ち、血清反応陰性を経験しつる。この期間に、ＨＩＶはウィルス培養研究でのみ 検出可能である。後に、感染個体は熱、不安及び皮膚発疹を伴う短期間の単核症 様疾病をしばしば表わす。この徴候（ｓｙｍｐｔｏ＋ｗｏｌｏｇｙ）は、通常、 血清変換（ｓｅｒｏ−ｃｏｎｖｅｒｓｆｏｎ）を表わす。即ち、時間抗ＨＩＶ抗 体がまず検出できる。血清変換は２週間と３ケ月の間、続く初めの感染を起こす と考えられる。ザ・メルク・マニュアル、１５版、メルク・アンド・カンバニイ ・インコーホレイテッド、ラーウェイ、Ｎ、Ｙ、１９８７゜ 新生児におけるエイズの分娩前後の伝達の検出は確かな診断試験の欠如により困 難となる。サイエンティフィック・アメリカン、１０月、１９８８．８０におい て。免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体は胎盤を越えて母親から胎児に定量的に伝 達されるので、ＨＩＶ感染母親に生まれた乳児は、実際にウィルスに感染したか 否かに関係なく、彼等の血液中に循環している母親から誘導された抗ＨＩＶ抗体 を受身に獲得する。従って、抗−ＨＩＶＩｇＧの検出に基づ＜ＨＩＶ免疫学的診 断法は、これらの乳児で偽陽性結果を生ずるであろう。この診断非特異性は、耐 抗ＨＩＶＩｇＧ抗体が子供血中で１４ケ月まで続くので乳児の第一誕生日を越え て続きつる。

対照的にＨＩＶによる子宮内感染に対する応答として、胎児はそれ自身の抗−Ｈ ＩＶ抗体を合成する。全ての級の抗体が明らかに生成される一方、抗−ＨＩｖＩ ｇＧは最初の胎児応答である。ＩｇＭ抗体は胎盤を越えることができないので、 贋帯血清中でのその存在は胎児の子宮内ＨＩＶ感染の特徴である。

現在の診断法はＩｇＧ抗体からＩｇＭ抗体を区別しないので、それらは同様に感 染母から受身に獲得した巣なる一過性漿液陽性（ｓｅｒｏｐｏｓｆｔｉｕｉｔｙ ）から、活性な胎児の疾病を区別することができない。この区別は重要であるこ とができるが、小児ＨＩＶ疾病と関連した高い死亡率を与える。感染した子供は ２才までに恐らく死ぬか重い病気になる。従って、ＨＩＶ感染の早い確認は極め て重要であって、看護のための適当な指示を与えることができ、規則的な医学追 跡治療を実施することができる。加えて、抗ウイルス薬物の発達で、早期の診断 及び認定は早い処置に必須である。

子宮内感染を避けた小児の保護も明白な及び現実の小児血清変換の間の早期の識 別の重要なゴールである。遂に、小児が、ＨＩＶ感染血液の分娩後輸血から疾病 を彼女自身得たその母親から、ＨＩＶ感染を出生後に得た一つの例が報告された 。ザイグラー、ジエイ、ビー、等、：ボストナタル・トランスミッション・オブ ・エイズーアソシエイテッド・レトロウィルス・フロム・マザー・ツー・インフ ァント、ランセット１９８５：　１：８９６−８９７゜小児の明らかな血清変換 が母親の抗体の一過性存在を単に表わすという認識は、実際上既に感染している これらの小児に対して哺乳及び他の母親−子供接触を阻止する必要のないこの小 児を保護するのに取られるべき段階を可能にする。

既に示したように、ＨＩＶ感染診断法は、得られた患者の検体中のＨＩＶまたは 抗ＨＩＶ抗体のどちらかの存在の研究室での確認に頼っている。ウィルス単離技 術は血清中のＨＩＶの存在を検出できるが、方法が扱いにくく高価であるため、 初期のスクリーニングには実際的でない。培養は生存細胞培養にウィルス含有材 料を接種することを必要とし、それは高価な試薬および長い培養期間（一般的に 約４週間）を必要とする。

ＨＩＶ感染の検出に有用かも知れない抗原測定システムが開発されている。これ らの方法は患者の血清中に存在するウィルス抗原を直接測定することを可能にし 、このように細胞培養系中でのウィルスの培養を待つことの遅延を避けることが できる。しかしながら、今日まで、多分抗原がインビボに低濃度存在するかまた は、妨害または非特異的物質のためにこれらの試験は非感受性である。

他のＨＩＶ感染の診断試験は、特異的抗体の産生のような患者の特異的な応答を 探すことである。このような試験の１つはＨＩＶ感染性を遮断しうる患者抗体の 存在を探すことである。上記のように、現在のシステムはＨＩＶを中和する抗体 のクラスの識別能力がない。従って、それらは新生児個体群およびかなり初期の 大人のＨＩＶ疾病に利用できない。

酵素架橋免疫吸着剤測定（エリザ）は現在エイズウィルス抗体の感受性のあるス クリーニングにおいて最も標準的な方法である。しかしながら、この試験は特異 性を欠如しており、陽性の結果は、特にもし適当な臨床像がない場合、ウェスタ ン・プロット法または放射能免疫沈降測定で確認しなければならない。（マニュ アル・オブ・クリニカル・イムノロジー、第３版、ローズ、フリートマンおよび ファヘイ、アメリカン・ソサイニティー・フォー・マイクロバイオロジー（１９ ８６年））標準的なエリザ法の別の不利益は、それらがＩｇＧＭ体に向けられ、 ＩｇＭ抗体を特異的に検出できないことである。

間接的エリザシステムの方法は、本質的に下記の通りである：１、固相は適当な 抗原で受動吸収により感作する。

２、試験血清を加える；血清中のいかなる抗原特異的抗体も固定化抗原と反応す る。

３、酵素標識抗ヒト免疫グロブリンを加える；この結合体は、固相固定化抗原と 結合したいかなる抗体とも反応する。

４、酵素基質を加える；溶液の色素の強度は視覚的にまたは光度測定的に評価す る。

標準エリザ法は一般的に総抗体またはＩｇＧ抗体の検出に有用である。この方法 は抗原が直接固相に付着するためＩｇＭ抗体検出には有効でなく、試験血清中の ＩｇＧ抗体は２つの問題を作る抗原に結合することが可能である。第１に、もし ＩｇＧ４７を体がＩｇＭに対して大過剰であれば、すべての抗原の結合部位がＩ ｇＧと結合することが可能で、ＩｇＭが検出されないため、疑似陰性の結果が得 られる可能性がある。

第２に、リウマチ因子（ＲＦ）は疑似陽性の結果になる原因となり得る。ＲＦは 全てのＩｇＧ抗体種に非特異的に向けられたＩｇｌ抗体である。従って、エリザ の間、存在するいかなるＲＦもＨＩＶ特異特異的１巳Ｇ合する。残りの試薬を加 えたとき、抗ＨＩＶ　ＩｇＭが存在しなくても、陽性試験結果が得られる。

発明の要約 以下の記載で、現在血清中のＨＩＶ抗体の検出に使用できる技術を述べる。これ らの技術で、抗ＨＩＶ抗体のＩｇＧおよびＩｇＭクラス間の識別に十分な感受性 および特異性があるものはない。私はＩｇｌｌ抗ＨＩＶ抗体を検出する特殊抗体 捕獲エリザ法を開発−た。本発明の１つの態様は、実際にヒト免疫不全ウィルス に子宮内感染した小児の同定、および、これらの小児と、母親／胎児循環を受身 に通って母親の抗体を単に一時的に獲得しただけの小児との識別を可能にする測 定である。

ＩｇＭ抗体は胎盤を通って輸送されないため、素状組織血清中のその存在は母親 の抗体を受動的に取り込んだ可能性は無視され、それゆえ疾病に特徴的な本当の 胎児感染である。

このＩｇＭ検定の感染小児の同定のための有用性は、ＨＩＶの疾病開始直後に抗 ウィルス剤での処置を可能にすることであろう。これはまた、まだ感染しておら ず、予防効果の恩惠、例えばＢ型肝炎ウィルスでは成功した受動免疫の利益を受 けるかも知れない暴露された小児を同定する。さらに、どの小児がウィルスの広 がりを予防するために特別な警戒が必要かを決定する。

私の発明中に記載の方法は子宮内感染の疑いのある小児の抗ＨＩ　ＶＩｇｉ［抗 体を測定するのに使用しつるが、この使用を限定するものではない。本方法は、 例えば、ＩｇＧ応答を増すことができない、またはごく最近感染したためまだそ うなっていないいずれの大人においても抗ＨＩ　ＶＩｇＭ抗体を検出するのに使 用しつる。

発明の詳細な説明 本発明の方法はＨＩＶに向けられたＩｇＭ抗体（抗Ｈｒ　ＶｒｇＭ）を検出する ことができる。特に、感染の徴候が現れる前に感染した小児患者を検出すること ができる抗ＨＩ　ＶＩｇＭエリザ法が述べられている。同様に、感染した大人の 患者および血液提供者をこのような抗ＨＩ　ＶＩｇＧエリザにより血清が陽性に なる時に先駆けて検出することができる。

ＨＩＶ感染した母親から生まれた子供は、抗ＨＩＶＩｇＧを経胎盤で獲得し、か れらの立場が確実に決定されるまで、中間の範喘であるＰｏとして分類される。

ＩｇＭは胎盤を通って輸送はされない。したがって、素状組織血清中の抗ＨＩＶ ＩｇＭの存在は母親による製造というよりむしろ胎児由来のものであるはずであ るということを示唆する。新生児の抗ＨＩ　ＶＩｇｌｌのスクリーニング試験は 、それゆえ感染小児の初期の同定に非常に貴重である。

ＨＩＶの感染に続く抗ＨＩ　ＶＩｇＭは初期の抗体応答である：それは抗ＨＩＶ ＩｇＧの産生に先行する。抗ＨＩ　ＶＩｇＭの測定方法は、慣用の抗ＨＩ　ＶＩ ｇＧエリザで可能であるよりも、初期の疾病進行において、感染患者および提供 者の検出にも用いることができることになる。

感受性のある測定法のための抗原の大きさは限界がある。界面活性剤に溶解した 抗原を用いるＩｇｌｌＨＩ　Ｖエリザは非感受性であることが既に確認されてい る。

抗体捕獲技術は、それゆえリウマチ因子または過剰なＩｇＧの存在により発生す るような慣用のエリザに関連する問題の回避を導く。結果として、抗ＨＩ　ＶＩ ｇｉｌエリザは感染の兆候が現れる前に感染した大人の患者および小児の、およ び現在利用可能な方法により血清が陽性となる前に大人の患者および提供者の検 出を可能とする。

本発明の利点は、好ましい態様を述べた以下の記載により容易に見ることができ る。もちろん、これらの実施例は単に説明であり、本発明の範囲を限定するもの ではない。

Ｈ−９細胞中の種々の株のＨＩＶ−１の通過は文献でかなり述べられている。

培養物は広範囲の融合細胞形成が観察されたとき回収する。感染したＨ−９細胞 の細胞ベレットはリン酸緩衝液食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７，４で２回洗浄し、一 部はＨ−９感染細胞調製物を一７０℃で凍結し、ゆっくり４℃で３時間解凍して 抗原を調製するために使用する。このサンプルはそれから最終濃度０．５％のト リトンＸ−１００で５分間、室温で感染性を破壊するために処理する。

平底Ｕ−型基塩化ポリビニルミクロタイタープレートヌンク・イミュン・プレー トーマキジソープ・インターメディエート、デンマーク）を炭酸緩衝液、ｐｆ！ ９゜６中のＱ、１ｍｌの１　：　２００ヤギ抗ヒトμ抗体（ＩｇＭ）（タボ・イ ンコーポイレイテイッド、ブーリンガム、ＣＡ）でコートする。プレートは使用 する前４℃で、最低７２時間は保存する。コート溶液は０．５％ツイン２０を含 むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ−Ｔ）でそれぞれ１．５分の続けて３回の浸透を含 み５回洗浄することにより除く；全ての以下の洗浄はこの方法で行う。

全ての試薬の連続の希釈は、抗ＨＩ　ＶＩｇＭ血清陽性および血清陰性分離を確 実に成し遂げるために種々の組み合わせで試験される。全ての試薬はＱ、ｌｏ＋ ｌ量加える。それぞれの試験血清サンプルの１：１００希釈はＰＢＳ−Ｔ中に１ ０％グロブリンネ足正常ヤギ血清を含む１％加熱非活性牛脂児血清中で調製する 。血清のインキュベーションは３７℃で３時間加湿チャンバー中で行う。ＰＢＳ −Ｔ中の１５％グロブリンネ足正常ヤギ血清中の抗原の１＝１０希釈または適当 な対照を、次いで各々２個の“ウィルス′または“対照”ウェルにそれぞれ添加 する。次に、インキュベーションを１８℃で加湿チャンバーで一晩行う。抗原の インキュベーションは３７℃で、短い時間で低い値を産生ずる。抗血清は４時間 ３７℃でインキュベーションする。西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したヤギ 抗ウサギ血清（タボ、ブーリンガム、ＣＡ）の１＋１０００希釈を次いで２時間 ３７℃でインキュベーションする。最後に、０．０２％過酸化水素を含むクエン 酸リン酸緩衝液で希釈した基賀（０−フェニレンジアミン２ＨＣＩ）を加える。

３０分、室温でインキュベーションした後、酵素反応をＩＮ　Ｈ２ＳＯ４を加え ることにより停止し、色素反応を酵素免疫検定デュポンリーダー（モデル９０１ 、デニポン・インコーホレイティラド、エヌ・ビレリカ、ＭＡ）で４９０ｎｍで 分光光度測定学的に読む。

結果は、デルタ至的濃度（ＤＯＤ）、即ち２つの抗原のウェルの平均から２つの 対照のウェルの平均を引いたものとして表す。既知陰性血清サンプル並びに低お よび高陽性血清サンプルの一定量はそれぞれの作業の中に含まれる。それぞれの 血清のこれまでの検定に見られた平均値より有意な変化がある検定は除外した。

実施例２ 上記実施例１で述べた方法を利用して、ＨＩＶに感染した母親から生まれた１９ 名の新生児を試験した。２名を除く全員が盲検定を行った。１２名が非感染で、 ７名が感染していた。後者の５名の血液サンプルを感染の臨床的兆候が現れる前 の最初の６週間の間入手した（Ｐの。全ての感染者の年令の範囲は１日から６力 月であった。感染の測定はＨＩＶに対する陽性血液培養および／または感染の臨 床的兆候の発現によって行った。（５名の感染者は陽性血液培養をもち２名は感 染の臨床的兆候をもっていた。それらのうち１名は両方をもっていた。）正常な 新生児から得た２２個の素状組織血清群は、抗ＨＩ　ＮＩｇＭを血清陰性範囲を 決定するために試験した。２２名の素状組織血清の平均および標準誤差はそれぞ れ０．０４０および０．０３６であった。全ての２２名の素状組織血清を含むＤ ＯＤ値０．０６８、即ち３つの標準誤差に平均を加えたものを血清陰性値の上限 として決めた。

全ての７名の感染小児はＩｇＭ−ＨＩ　Ｖに対しては陽性であった（範囲０．１ ０７−４５４）。最初の６週間に試験を受け陽性であった６名のうち１名のみが 感染の臨床的兆候を示した。試験した全ての３名の素状組織血清はＨＩＶ−Ｉｇ 肋（陽性であった（表１参照）。１２名の非感染症のうち１名のみが我々の抗Ｈ ＩＶ−Ｉｇ蓋検定では陽性であった（０．１６１）。

７名の感染小児の年令および臨床的状態に関するＨＩＶＩｇｌｌ値患ｔ　被験者 ノ年令ＣＤＣＨＩ　ＶＩｇｌ１分類（１） ２　６週間　Ｐ−０（＋）０．４２２ ３　４週間　Ｆ−０（＋）０．２３３ ４　素状組織血清　Ｐ−０（＋）０．１２５３週間　Ｐ−２Ｂ　（＋）０．２１ ５ ５　素状組織血清　Ｐ−０（＋）０．１１３４週間　Ｐ−１（＋）０．１９１ ６　索状組織血清　Ｐ−０（＋）０．１５８５週間　Ｆ−１（＋）０．１２０ ７　６力月　Ｐ−２Ａ　（＋）０．４５４血清陰性範囲の上限は０．０６８であ った。

実施例３ ２から７日間の間隔で採血した期間の間抗ＨＩ　ＶＩｇＧが高い７名の血漿提供 者は盲検定を行った。少な（ともいくつかは血清転化した蓄積した血漿サンプル を抗ＨＩ　ＶＩｇＭ試験に使用した。それぞれの提供者の２から６サンプルを試 験に用いた。

７名全ての提供者が抗ＨＩ　ＶＩｇＭｌ二対して陽性であつた。試験した２９名 の大人のうち２７名が明白に抗ＨＩ　ＶＩｇｌｌをもっていた。血清陰性であっ た血清標本は最初の２名の提供者からの試料のみであった。２９サンプルのうち ９個が抗ＨＩＶＩｇＧに対して陰性で、１３個が陽性で、残りが中間的な値を示 した。

要約書 ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）に対する抗体を検出するための免疫検定方法。

検定はＨＩＶ特異特異的１抗 抗体を受身に獲得したものからＨＩＶで感染した小児を区別する。加えて、検定 は、ＩｇＧ免疫応答をまだ増やさないＨＩＶに感染した個体を検出するのに用い ることができる。

国際調査報告

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. １．体液中のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫グロブリンＭ（Ｉｇ Ｍ）を検出する方法であって以下に含む。 ａ）抗ヒトＩｇＭ抗体を固体支持体に付着させること、ｂ）固相−抗体複合体に 体液を加えインキュベートし、そして洗浄すること、ｃ）ＨＩＶ抗原を加え、イ ンキュベートし、そして洗浄すること、ｄ）抗ＨＩＶ抗体を加え、インキュベー トし、そして洗浄すること、ｅ）指標系に接合した抗（抗ＨＩＶ抗体）抗体を加 え、そしてインキュベートすること、及び ｆ）指標の存在を検出すること。
2. ２．体液が血清、唾液、喀痰、精液又は組織抽出物である請求項１の方法。
3. ３．体液が臍帯血液又は血清、或いは小児からの血液又は血清である請求項１の 方法。
4. ４．抗体がポリクローナルである請求項１の方法。
5. ５．抗体がモノクローナルである請求項１の請求項。
6. ６．指標系が酵素又は放射標識を用いる請求項１の請求項。
7. ７．指標の存在を検出することが可視の呈色反応を生ずる酵素基質の添加を含む 、請求項１の請求項。
8. ８．指標の存在を検出することが放射標識抗体のシンチレーション走査を含む請 求項１の方法。
9. ９．ヒト体液におけるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫グロブリン Ｍ（ＩｇＭ）抗体を検出する方法であって以下を含む。 ａ）抗ヒトＩｇＭ抗体を固体支持体に付着させること、ｂ）固相−抗体複合体を ウシ血清アルブミンで「後被覆すること」、ｃ）血清を加え、インキュベートし 、そして洗浄すること、ｄ）ＨＩＶ抗原を加え、インキュベートし、そして洗浄 すること、ｅ）抗ＨＩＶ抗体を加え、インキュベートし、そして洗浄すること、 ｆ）続いて、指標系に接合した抗（抗ＨＩＶ抗体）抗体を加え、そしてインキュ ベートすること、及び ｇ）指標の存在を検出すること。
10. １０．体液が血清、唾液、喀痰、精液又は組織抽出物である請求項９の方法。
11. １１．体液が臍帯血液から又は小児から得たヒト血清である請求項９の方法。
12. １２．抗体がポリクローナルである請求項９の方法。
13. １３．抗体がモノクローナルである請求項９の請求項。
14. １４．指標系が酵素又は放射標識を用いる請求項９の請求項。
15. １５．指標の存在を検出することが可視の呈色反応を生ずる酵素基質の添加を含 む、請求項９の請求項。
16. １６．指標の存在を検出することが放射標識抗体のシンチレーション走査を含む 請求項１２の方法。
17. １７．ヒト血清中のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫グロブリンＭ （ＩｇＭ）抗体を検出する方法であって以下を含む。 ａ）Ｕ型ポリビニルクロリドミクロリットルプレートを炭酸塩緩衝液ｐＨ９．６ 中、抗ヒトＩｇＭ抗体の希釈液で被覆すること、ｂ）プレートを４℃で少なくと も一夜インキュベートすること、ｃ）デカンテーションし、固相を洗浄すること 、ｄ）プレートを１時間３７℃で適用し、次いで、洗浄した１％ウシ血清アルブ ミンで「後被覆すること」、 ｅ）希釈血清を加え、そして１時間３７℃でインキュベートすること、ｆ）ＨＩ Ｖ抗原を加え、インキュベートし、次いで洗浄すること、ｇ）ＨＩＶに対する抗 体を加え、インキュベートし、そして洗浄すること、ｈ）アルカリホスファター ゼ及びインキュベートと接合した段階ｇにおいて、抗体種に対して抗体を加える こと、 ｉ）基質を加え、そして、水酸化ナトリウムを加えることにより４５分後反応を 停止すること、及び ｊ）生じた色又はエリザ読み取り装置を４０５ｎｍで読み取ること。
18. １８．ヒト血清が臍帯血液から又は小児から得られる請求項１７の方法。
19. １９．抗体がポリクローナルである請求項１７の方法。
20. ２０．抗体がモノクローナルである請求項１７の請求項。
21. ２１．指標系が酵素又は放射標識を用いる請求項１７の請求項。