【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
〔産業上の利用分野〕
本発明の化合物は抗腫瘍剤として期待されるも
のである。
〔従来の技術〕
4′−デメチル−エピポドフイロトキシン−β−
Ｄ−４，６−ｏ−エチリデングリコシドは抗腫瘍
作用を有する化合物として特公昭45−38258など
により公知である。
〔発明が解決しようとする問題点〕
従来抗腫瘍剤として使用されている4′−デメチ
ル−エピポドフイロトキシン−β−Ｄ−４，６−
ｏ−エチリデングリコシドは水に対して極めて難
溶性であるために、通常の注射剤として調製する
ことが困難であり、ポリエチレングリコール溶液
などとして用いられてきた。
しかしながら注射時の疼痛を伴うなどの欠点を
有し、水溶液製剤が望まれている。
〔問題点を解決するための手段〕
そこで本発明者らは水溶性を高めた4′−デメチ
ル−エピポドフイロトキシン誘導体につき種々検
討した。
その結果、一般式（）
（式中、R1、R2およびR3はそれぞれ水酸基、硫
酸基あるいはリン酸基を示し、少なくともそれら
の１つは水酸基以外の基を示す。）
で表わされる4′−デメチル−エピポドフイロトキ
シン誘導体の新規エステル又はその薬理学的に許
容される塩が高い水溶性をもつことを見出し、本
発明を完成した。
本発明の一般式（）の化合物としては例え
ば、次の表に示す化合物があげられる。
[Industrial Application Field] The compounds of the present invention are expected to be used as antitumor agents. [Prior art] 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-
D-4,6-o-ethylidene glycoside is known as a compound having antitumor effects, such as in Japanese Patent Publication No. 38258/1983. [Problems to be solved by the invention] 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-4,6-, which has been conventionally used as an antitumor agent.
Since o-ethylidene glycoside is extremely poorly soluble in water, it is difficult to prepare it as an ordinary injection, and it has been used as a polyethylene glycol solution. However, it has drawbacks such as pain during injection, and an aqueous solution formulation is desired. [Means for Solving the Problems] Therefore, the present inventors conducted various studies on 4'-demethyl-epipodophyllotoxin derivatives with increased water solubility. As a result, the general formula () (In the formula, R 1 , R 2 and R 3 each represent a hydroxyl group, a sulfate group or a phosphoric acid group, and at least one of them represents a group other than a hydroxyl group.) The present invention was completed based on the discovery that a novel ester of an irotoxin derivative or a pharmacologically acceptable salt thereof has high water solubility. Examples of the compound of general formula () of the present invention include the compounds shown in the following table.
〔効果〕〔effect〕
本発明によつて得られる一般式（）の代表的
化合物のナトリウム塩の水に対する溶解性を表２
に示す。
なお、対照化合物としてR1＝R2＝R3＝OHで
ある化合物を挙げた。
Table 2 shows the solubility in water of the sodium salt of a representative compound of general formula () obtained by the present invention.
Shown below. In addition, a compound in which R 1 =R 2 =R 3 =OH was listed as a control compound.
〔作用〕[Effect]
次に一般式（）で表わされる本発明の代表的
化合物のナトリウム塩の抗腫瘍活性を実験例によ
り示す。
(1) 実験方法
L1210白血病細胞を１×105／0.2mlとなるよ
うにHank's balancedに懸濁し、CDF1マウス
（６週齢）に腹腔内移植した。薬剤は翌日より
５日間連日腹腔内投与した。薬剤は生理食塩水
で溶解、希釈し、0.1ml／10ｇ体重の割合で投
与した。観察期日は60日とした。
評価判定は各マウスの生存日数より、各群の
平均生存日数を求め、コントロール群の平均生
存日数に対する比率、Ｔ／Ｃ（％）として求め
た。
(2) 本発明化合物代表例の抗腫瘍活性を表３に示
す。なお、対照としてはR1＝R2＝R3＝OHで
ある一般式（）で表わされる化合物をあげ
た。
Next, the antitumor activity of the sodium salt of the representative compound of the present invention represented by the general formula () will be shown by experimental examples. (1) Experimental method L1210 leukemia cells were suspended in Hank's balanced at 1×10 5 /0.2 ml and intraperitoneally transplanted into CDF 1 mice (6 weeks old). The drug was intraperitoneally administered every day for 5 days starting from the next day. The drug was dissolved and diluted with physiological saline and administered at a rate of 0.1 ml/10 g body weight. The observation period was 60 days. For evaluation, the average survival days of each group was determined from the survival days of each mouse, and the ratio to the average survival days of the control group was determined as T/C (%). (2) Table 3 shows the antitumor activity of representative examples of the compounds of the present invention. As a control, a compound represented by the general formula () where R 1 =R 2 =R 3 =OH was used.
【表】
以下実施例により本発明を具体的に説明する。
なお薄層クロマトグラフイのRf値はメルク社
薄層プレート、ArtNo.5715を用いて測定した。な
お検出は紫外線照射及び希硫酸にて行つた。
実施例 １
4′−ｏ−ホスホノ−4′−デメチル−エピポドフ
イロトキシン−β−Ｄ−４，６−ｏ−エチリデ
ングルコシド（化合物No.１）のナトリウム塩の
製法
(1) 4′−ｏ−ホスホノ−4′−デメチル−エピポド
フイロトキシン−β−Ｄ−２，３−ジ−ｏ−
β，β，β−トリクロロエトキシカルボニル−
４，６−ｏ−エチリデングルコシドのナトリウ
ム塩
4′−デメチル−エピポドフイロトキシン−β
−Ｄ−２，３−ジ−ｏ−β，β，β−トリクロ
ロエトキシカルボニル−４，６−ｏ−エチリデ
ングルコシド4.70ｇ（5.00ｍmol）に１，２−
ジクロロエタン30mlおよび乾燥ピリジン５mlを
加えて溶解後、−60℃に冷却する。ついで、１，
２−ジクロロエタン20mlに溶解したオキシ塩化
リン0.92ml（10ｍmol）を５分間で適下後、内
温約−15℃で１時間、０℃で１時間撹拌し、つ
いで室温で一夜撹拌する。
反応後、反応液を減圧濃縮し、濃縮残渣に酢
酸エチル、氷および食塩水ついでIN塩酸を加
えて抽出後、酢酸エチル層を食塩水で２回洗浄
し、無水硫酸マグネシウムを用いて脱水する。
硫酸マグネシウムを去後、酢酸エチル溶液を
減圧濃縮後、残渣に酢酸エチル50mlを加えて溶
かした溶液中にイソプロパノール50mlに溶かし
た２−エチルヘキサン酸ナトリウム0.9ｇを加
え、再度10〜20mlまで濃縮したところでイソプ
ロパノール100mlを加えて結晶を過し、減圧
乾燥すると粗結晶4.8ｇ（粗収率92％）が得ら
れる。
Rf＝0.5（展開溶媒 ｎ−ブタノール：酢酸：水
＝４：１：１）
(2) 4′−ホスホノ−4′−デメチル−エピポドフイ
ロトキシン−β−Ｄ−４，６−ｏ−エチリデン
グルコシド（化合物No.１）のナトリウム塩
上記(1)で得られた組結晶4.00ｇに酢酸120ml
を加えて溶解後、亜鉛末6.0ｇを加え、室温で
２時間激しく撹拌する。反応終了後、水1000ml
を用いて亜鉛を過し、白濁した液をセルロ
ース過補助剤および水800mlを用いて再度
過する。
ついで、この液（約2000ml）をハイポーラ
スポリマー（三菱化成工業KK、HP−20
）
200mlのカラムに吸着させ、水洗処理後、30％
アセトン水を用いて溶出を行い、目的物を含む
フラクシヨンを分取する。
分取した溶出液を減圧濃縮し、アセトンを留
去させた後、凍結乾燥すると4′−ホスホノ−
4′−デメチル−エピポドフイロトキシン−β−
Ｄ−４，６−ｏ−エチリデングルコシドのナト
リウム塩1.50ｇ（2.17ｍmol）を得る。
Rf＝0.2（展開溶媒 ｎ−ブタノール：酢酸：水
＝４：１：１）
核磁気共鳴スペクトル（ジメチルスルホキシド−
d6溶液、内部標準物質テトラメチルシラン）
δ＝1.24（3H、ｄ）
δ＝2.89（1H、ｍ）
δ＝3.0〜3.4（5H、ｍ）
δ＝3.50（1H、ｔ）
δ＝3.57（6H、ｓ）
δ＝4.08（1H、dd）
δ＝4.28（2H、ｍ）
δ＝4.54（1H、ｄ）
δ＝4.58（1H、ｄ）
δ＝4.73（1H、ｍ）
δ＝4.94（1H、ｄ）
δ＝5.24（2H、broad）
δ＝6.03（2H、ｓ）
δ＝6.20（2H、ｓ）
δ＝6.54（1H、ｓ）
δ＝7.01（1H、ｓ）
実施例 ２
4′−デメチル−エピポドフイロトキシン−β−
Ｄ−２，３−ジ−ｏ−ホスホノ−４，６−ｏ−
エチリデングルコシド（化合物No.２）の２ナト
リウム塩の製法
(1) 4′−ｏ−ベンジルオキシカルボニル−4′−デ
メチル−エピポドフイロトキシン−β−Ｄ−
２，３−ジ−ｏ−ホスホノ−４，６−ｏ−エチ
リデングルコシドの２ナトリウム塩
4′−ｏ−ベンジルオキシカルボニル4′−デメ
チル−エピポドフイロトキシン−β−Ｄ−４，
６−ｏ−エチリデングルコシド1.45ｇ（2.00ｍ
mol）、乾燥ピリジン1.08mlおよびテトラヒド
ロフラン10mlの溶液を、オキシ塩化リン0.4ml
（4.4ｍmol）のエチルエーテル10mlの溶解中
に、−60℃冷却下、適下する。
滴下後、同温度で２時間、氷浴中で１時間撹
拌し、ついで室温で一夜撹拌する。
反応後、反応液に酢酸エチルおよび氷水を加
えて、撹拌下、炭酸水素ナトリウムを加え、室
温で３時間撹拌後、一夜静置して水層を分取す
る。
水層の溶存酢酸エチルを減圧濃縮により留去
し、残液に水を加えて150mlとする。次に、ハ
イポーラスポリマー（三菱化工業KK、HP−
20
）50mlのカラムに吸着させ、水洗処理後、
50％アセトン水を用いて溶出し、目的物を含む
フラクシヨンを分取する。
分取した溶出液を減圧濃縮後、イソプロパノ
ールを加えて結晶化させる。析出した結晶を
過し、減圧乾燥すると4′−ｏ−ベンジルオキシ
カルボニル4′−デメチル−エピポドフイロトキ
シン−β−Ｄ−２，３−ジ−ｏ−ホスホノ−
４，６−ｏ−エチリデングルコシドの２ナトリ
ウム塩0.44ｇ（0.45ｍmol）を得る。
Rf＝0.5（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：
酢酸＝75：25：３）
核磁気共鳴スペクトル（ジメチルスルホキシド−
d6、内部標準物質、テトラメチルシラン）
δ＝1.23（3H、ｄ）
δ＝2.95（1H、ｍ）
δ＝3.20（1H、ｍ）
δ＝3.3〜3.7（5H、ｍ）
δ＝3.62（6H、ｓ）
δ＝3.94（1H、ｔ）
δ＝4.03（1H、dd）
δ＝4.26（2H、ｄ）
δ＝4.63（1H、ｄ）
δ＝4.79（1H、ｍ）
δ＝4.97（1H、ｄ）
δ＝5.23（2H、ｓ）
δ＝6.03、6.05（2H、ｓ、ｓ）
δ＝6.31（2H、ｓ）
δ＝6.55（1H、ｓ）
δ＝7.10（1H、ｓ）
δ＝7.40（5H、ｍ）
(2) 4′−デメチル−エピポドフイロトキシン−β
−Ｄ−２，３−ジ−ｏ−ホスホノ−４，６−ｏ
−エチリデングルコシド（化合物No.２）の２ナ
トリウム塩
上記(1)で得られた4′−ｏ−ベンジルオキシカ
ルボニル−4′−デメチル−エピポドフイロトキ
シン−β−Ｄ−２，３−ジ−ｏ−ホスホノ−
４，６−ｏ−エチリデングルコシドの２ナトリ
ウム塩300mg（0.309ｍmol）に水10ml、アセト
ン10mlおよび５％パラジウム炭素0.1ｇを加え、
常圧、室温で接触還元を２時間行う。
還元後、パラジウム炭素を過し、液を減
圧濃縮して得られた残渣に水20〜30mlを加え、
水不溶物をミリポアフイルター（Millex
−
GS、0.22μｍ）を用いて過する。
ついで液を凍結乾燥すると4′−デメチル−
エピポドフイロトキシン−β−Ｄ−２，３−ジ
−ｏ−ホスホノ−４，６−ｏ−エチリデングル
コシドの２ナトリウム塩250mg（0.315ｍmol）
が得られる。
Rf＝0.4（展開溶媒 クロロホルム：メタノー
ル：酢酸＝75：25：３）
核磁気共鳴スペクトル（重水、外部標準、水
（4.80ppm））
δ＝1.36（3H、ｄ）
δ＝3.07（1H、ｍ）
δ＝3.73（6H、ｓ）
δ＝3.96（1H、ｍ）
δ＝5.97、5.99（2H、ｓ、ｓ）
δ＝6.37（2H、ｓ）
δ＝6.58（1H、ｓ）
δ＝7.02（1H、ｓ）
実施例 ３
4′−ヒドキシスルホニル−4′−デメチルエピポ
ドフイロトキシン−β−Ｄ−４，６−ｏ−エチ
リデングルコシド（化合物No.３）の２ナトリウ
ム塩の製法
(1) 4′−ヒドキシスルホニル−4′−デメチルエピ
ポドフイロトキシン−β−Ｄ−２，３−ジ−ｏ
−β，β，β−トリクロロエトキシカルボニル
−４，６−ｏ−エチリデングルコシドのナトリ
ウム塩
4′−デメチルエピポドフイロトキシン−β−
Ｄ−２，３−ジ−ｏ−β，β，β−トリクロロ
エトキシカルボニル−４，６−ｏ−エチリデン
グルコシド（0.47ｇ）にＮ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（10ml）およびピリジン（10ml）を加
えて溶解後、無水硫酸・ピリジン複合塩（2.5
ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（10ml）
溶液を加え、室温で７日間撹拌を行い、反応液
を減圧濃縮する。濃縮残渣にメタノールおよび
２−エチルヘキサン酸ナトリウムを加えて減圧
濃縮後、残渣に酢酸エチルおよび水を加え抽出
する。酢酸エチル層を分取し、減圧濃縮して得
られた残渣にエーテルを加えて、結晶を過、
減圧乾燥すると目的物（0.21ｇ）が得られる。
Rf＝0.46（展開溶媒 ｎ−ブタノール：酢酸：
水＝４：１：１）
(2) 4′−ヒドロキシスルホニル−4′−デメチルエ
ピポドフイロトキシン−β−Ｄ−４，６−ｏ−
エチリデングルコシドのナトリウム塩
上記(1)で得られた化合物（0.20ｇ）に酢酸
（４ml）を加えて溶解後、亜鉛末（0.5ｇ）およ
び水（0.4ml）を加え、室温で１時間撹拌を行
う。
反応液に水（100ml）を加えて亜鉛を過し
液を実施例１−(2)と同様に処理することによ
り目的物（66mg）が得られる。
Rf＝0.24（展開溶媒、ｎ−ブタノール：酢
酸：水＝４：１：１）
参考例
(1) 4′−ベンジルオキシカルボニル−4′−デメチ
ルエピポドフイロトキシン−β−Ｄ−２，３−
ジ−ｏ−β，β，β−トリクロロエトキシカル
ボニル−４，６−ｏ−エチリデングルコシドの
製法
4′−ベンジルオキシカルボニル−4′−デメチ
ルエピポドフイロトキシン（72.5ｇ）および
４，６−ｏ−エチリデン−２，３−ジ−ｏ−
β，β，β−トリクロロエトキシカルボニル−
β−Ｄ−グルコピラノース（83ｇ、1.1当量）
を１，２−ジクロロエタン（800ml）に溶解後、
１，２−ジクロロエタン（300ml）に溶解した
三弗化ホウ素エーテレート（29ｇ）を内温−10
〜−15℃に保ち３時間で滴下する。滴下後−10
〜15℃で２時間撹拌する。
ついで反応液にピリジン（21ml）の１，２−
ジクロロエタン（80ml）の溶液を内温−10℃で
ゆつくり滴下後、水（500ml）を加え、有機層
を分液する。この有機層を希塩酸ついで食塩水
で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、
減圧濃縮を行い、得られた濃縮残渣をシリカゲ
ルクロマトグラフイーにより精製すると目的物
（121ｇ）が得られる。
Rf＝0.8（展開溶媒 クロロホルム：メタノール
＝10：１）
(2) 4′−デメチルエピポドフイロトキシン−β−
Ｄ−２，３−ジ−ｏ−β，β，β−トリクロロ
エトキシカルボニル−４，６−ｏ−エチリデン
グルコシドの製法
参考例(1)で得られた4′−ベンジルロキシカル
ボニル−4′−デメチルエピポドフイロトキシン
−β−Ｄ−２，３−ジ−ｏ−β，β，β−トリ
クロロエトキシカルボニル−４，６−ｏ−エチ
リデングルコシド（20.0ｇ）のアセトン（300
ml）溶液を５％パラジウム炭素（１ｇ）の存在
下、オートクレーブ中、水素圧30Kg／cm2にて室
温で２時間接触還元を行う。
ついで、触媒を除去後、溶液を減圧濃縮して
得られた残渣に酢酸エチルを加え溶解させる。
酢酸エチル溶液を水洗し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣にイソ
プロパノールを加え結晶化を行う。
析出した結晶を過、洗浄後減圧乾燥をする
と目的物（16.2ｇ）が得られる。
Rf＝0.5（展開溶媒 ベンゼン：酢酸エチル＝
２：１）[Table] The present invention will be specifically explained below with reference to Examples. Note that the Rf value of thin layer chromatography was measured using a Merck thin layer plate, Art No. 5715. Note that detection was performed using ultraviolet irradiation and dilute sulfuric acid. Example 1 Method for producing sodium salt of 4'-o-phosphono-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-4,6-o-ethylidene glucoside (compound No. 1) (1) 4'- o-phosphono-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-2,3-di-o-
β, β, β-trichloroethoxycarbonyl-
Sodium salt of 4,6-o-ethylidene glucoside 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β
-D-2,3-di-o-β,β,β-trichloroethoxycarbonyl-4,6-o-ethylidene glucoside (4.70 g (5.00 mmol))
Add 30 ml of dichloroethane and 5 ml of dry pyridine to dissolve and cool to -60°C. Next, 1,
After dropping 0.92 ml (10 mmol) of phosphorus oxychloride dissolved in 20 ml of 2-dichloroethane over 5 minutes, the mixture was stirred at an internal temperature of about -15°C for 1 hour, at 0°C for 1 hour, and then at room temperature overnight. After the reaction, the reaction solution is concentrated under reduced pressure, and the concentrated residue is extracted with ethyl acetate, ice, and brine, followed by IN hydrochloric acid. The ethyl acetate layer is washed twice with brine and dried over anhydrous magnesium sulfate.
After removing the magnesium sulfate, the ethyl acetate solution was concentrated under reduced pressure, and 50 ml of ethyl acetate was added to the residue. 0.9 g of sodium 2-ethylhexanoate dissolved in 50 ml of isopropanol was added to the solution, and the mixture was concentrated again to 10 to 20 ml. By the way, by adding 100 ml of isopropanol to filter the crystals and drying under reduced pressure, 4.8 g of crude crystals (crude yield 92%) are obtained. Rf=0.5 (Developing solvent n-butanol:acetic acid:water=4:1:1) (2) 4'-phosphono-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-4,6-o-ethylidene Sodium salt of glucoside (compound No. 1) 4.00 g of the combined crystals obtained in (1) above and 120 ml of acetic acid
After dissolving, add 6.0 g of zinc powder and stir vigorously at room temperature for 2 hours. After the reaction is complete, add 1000ml of water.
Filter the zinc using a filter, and filter the cloudy liquid again using a cellulose filtering agent and 800 ml of water. Next, add this liquid (approximately 2000 ml) to High Porous Polymer (Mitsubishi Chemical Industries KK, HP-20).
After adsorbing on a 200ml column and washing with water, 30%
Elute with acetone water and collect a fraction containing the target product. The fractionated eluate was concentrated under reduced pressure, the acetone was distilled off, and the 4'-phosphono-
4′-demethyl-epipodophyllotoxin-β-
1.50 g (2.17 mmol) of the sodium salt of D-4,6-o-ethylidene glucoside is obtained. Rf=0.2 (Developing solvent n-butanol:acetic acid:water=4:1:1) Nuclear magnetic resonance spectrum (dimethyl sulfoxide-
d 6 solution, internal standard tetramethylsilane) δ = 1.24 (3H, d) δ = 2.89 (1H, m) δ = 3.0 to 3.4 (5H, m) δ = 3.50 (1H, t) δ = 3.57 (6H , s) δ = 4.08 (1H, dd) δ = 4.28 (2H, m) δ = 4.54 (1H, d) δ = 4.58 (1H, d) δ = 4.73 (1H, m) δ = 4.94 (1H, d ) δ=5.24 (2H, broad) δ=6.03 (2H, s) δ=6.20 (2H, s) δ=6.54 (1H, s) δ=7.01 (1H, s) Example 2 4′-demethyl-epi Podophyllotoxin-β-
D-2,3-di-o-phosphono-4,6-o-
Process for producing disodium salt of ethylidene glucoside (compound No. 2) (1) 4'-o-benzyloxycarbonyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-
Disodium salt of 2,3-di-o-phosphono-4,6-o-ethylidene glucoside 4'-o-benzyloxycarbonyl 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-4,
6-o-ethylidene glucoside 1.45g (2.00m
mol), 1.08 ml of dry pyridine and 10 ml of tetrahydrofuran, and 0.4 ml of phosphorus oxychloride.
(4.4 mmol) was dissolved in 10 ml of ethyl ether while cooling at -60°C. After the dropwise addition, the mixture was stirred at the same temperature for 2 hours, in an ice bath for 1 hour, and then at room temperature overnight. After the reaction, ethyl acetate and ice water are added to the reaction solution, and sodium hydrogen carbonate is added while stirring. After stirring at room temperature for 3 hours, the mixture is left to stand overnight and the aqueous layer is separated. Dissolved ethyl acetate in the aqueous layer was distilled off by concentration under reduced pressure, and water was added to the remaining liquid to make 150 ml. Next, high porous polymer (Mitsubishi Chemical Industries KK, HP-
20) After adsorption on a 50ml column and washing with water,
Elute with 50% acetone water and collect the fraction containing the target product. After concentrating the fractionated eluate under reduced pressure, isopropanol is added to crystallize it. The precipitated crystals were filtered and dried under reduced pressure to give 4'-o-benzyloxycarbonyl 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-2,3-di-o-phosphono-
0.44 g (0.45 mmol) of the disodium salt of 4,6-o-ethylidene glucoside is obtained. Rf=0.5 (Developing solvent chloroform: methanol:
Acetic acid = 75:25:3) Nuclear magnetic resonance spectrum (dimethyl sulfoxide)
d 6 , internal standard substance, tetramethylsilane) δ = 1.23 (3H, d) δ = 2.95 (1H, m) δ = 3.20 (1H, m) δ = 3.3 to 3.7 (5H, m) δ = 3.62 (6H , s) δ = 3.94 (1H, t) δ = 4.03 (1H, dd) δ = 4.26 (2H, d) δ = 4.63 (1H, d) δ = 4.79 (1H, m) δ = 4.97 (1H, d ) δ=5.23 (2H, s) δ=6.03, 6.05 (2H, s, s) δ=6.31 (2H, s) δ=6.55 (1H, s) δ=7.10 (1H, s) δ=7.40 (5H , m) (2) 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β
-D-2,3-di-o-phosphono-4,6-o
- Disodium salt of ethylidene glucoside (compound No. 2) 4'-o-benzyloxycarbonyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-2,3-di -o-phosphono-
10 ml of water, 10 ml of acetone and 0.1 g of 5% palladium on carbon were added to 300 mg (0.309 mmol) of the disodium salt of 4,6-o-ethylidene glucoside.
Catalytic reduction is carried out at normal pressure and room temperature for 2 hours. After reduction, filter the palladium on carbon, concentrate the liquid under reduced pressure, add 20 to 30 ml of water to the resulting residue,
Filter water-insoluble matter through a Millipore filter (Millex −
GS, 0.22 μm). The liquid is then freeze-dried to form 4'-demethyl-
Epipodophyllotoxin-β-D-2,3-di-o-phosphono-4,6-o-ethylidene glucoside disodium salt 250 mg (0.315 mmol)
is obtained. Rf=0.4 (Developing solvent chloroform:methanol:acetic acid=75:25:3) Nuclear magnetic resonance spectrum (heavy water, external standard, water (4.80ppm)) δ=1.36 (3H, d) δ=3.07 (1H, m) δ=3.73 (6H, s) δ=3.96 (1H, m) δ=5.97, 5.99 (2H, s, s) δ=6.37 (2H, s) δ=6.58 (1H, s) δ=7.02 (1H, s) Example 3 Process for producing disodium salt of 4'-hydroxysulfonyl-4'-demethylepipodophyllotoxin-β-D-4,6-o-ethylidene glucoside (Compound No. 3) (1) 4'-Hydoxysulfonyl-4'-demethylepipodophyllotoxin-β-D-2,3-di-o
- Sodium salt of β, β, β-trichloroethoxycarbonyl-4,6-o-ethylidene glucoside 4'-demethylepipodophyllotoxin-β-
Add N,N-dimethylformamide (10 ml) and pyridine (10 ml) to D-2,3-di-o-β,β,β-trichloroethoxycarbonyl-4,6-o-ethylidene glucoside (0.47 g). After dissolving, add sulfuric anhydride/pyridine complex salt (2.5
g) N,N-dimethylformamide (10ml)
The solution was added, stirred at room temperature for 7 days, and the reaction solution was concentrated under reduced pressure. Methanol and sodium 2-ethylhexanoate are added to the concentrated residue, and the mixture is concentrated under reduced pressure, and then ethyl acetate and water are added to the residue for extraction. The ethyl acetate layer was separated and concentrated under reduced pressure. Ether was added to the resulting residue to filter the crystals.
Drying under reduced pressure yields the desired product (0.21 g). Rf=0.46 (developing solvent n-butanol: acetic acid:
Water = 4:1:1) (2) 4'-hydroxysulfonyl-4'-demethylepipodophyllotoxin-β-D-4,6-o-
Sodium salt of ethylidene glucoside The compound obtained in (1) above (0.20 g) was dissolved in acetic acid (4 ml), then zinc dust (0.5 g) and water (0.4 ml) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. conduct. Water (100 ml) was added to the reaction solution, the zinc was filtered, and the solution was treated in the same manner as in Example 1-(2) to obtain the desired product (66 mg). Rf=0.24 (developing solvent, n-butanol:acetic acid:water=4:1:1) Reference example (1) 4'-benzyloxycarbonyl-4'-demethylepipodophyllotoxin-β-D-2, 3-
Method for producing di-o-β,β,β-trichloroethoxycarbonyl-4,6-o-ethylidene glucoside 4'-benzyloxycarbonyl-4'-demethylepipodophyllotoxin (72.5g) and 4,6- o-ethylidene-2,3-di-o-
β, β, β-trichloroethoxycarbonyl-
β-D-glucopyranose (83 g, 1.1 equivalents)
After dissolving in 1,2-dichloroethane (800ml),
Boron trifluoride etherate (29 g) dissolved in 1,2-dichloroethane (300 ml) was heated to an internal temperature of -10
Keep at ~-15°C and add dropwise over 3 hours. After dropping -10
Stir at ~15°C for 2 hours. Then, pyridine (21 ml) of 1,2-
Slowly add a solution of dichloroethane (80 ml) dropwise at an internal temperature of -10°C, then add water (500 ml) and separate the organic layer. This organic layer was washed with dilute hydrochloric acid and then with brine, dried over anhydrous sodium sulfate,
Concentration is performed under reduced pressure, and the resulting concentrated residue is purified by silica gel chromatography to obtain the desired product (121 g). Rf=0.8 (developing solvent chloroform:methanol=10:1) (2) 4′-demethylepipodophyllotoxin-β-
D-2,3-di-o-β,β,β-trichloroethoxycarbonyl-4,6-o-ethylidene glucoside 4'-benzyloxycarbonyl-4'-dehyde obtained in Reference Example (1) Methylepidophyllotoxin-β-D-2,3-di-o-β,β,β-trichloroethoxycarbonyl-4,6-o-ethylidene glucoside (20.0 g) in acetone (300 g)
ml) The solution is subjected to catalytic reduction in the presence of 5% palladium on carbon (1 g) in an autoclave at a hydrogen pressure of 30 Kg/cm 2 at room temperature for 2 hours. Then, after removing the catalyst, the solution was concentrated under reduced pressure, and ethyl acetate was added to the resulting residue to dissolve it.
The ethyl acetate solution is washed with water, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. Isopropanol is added to the resulting residue to perform crystallization. The precipitated crystals are filtered, washed, and dried under reduced pressure to obtain the desired product (16.2 g). Rf=0.5 (developing solvent benzene: ethyl acetate=
2:1)