JPH05130815A - Method for multiplying young seedling of wasabi and medium used therefor - Google Patents
Method for multiplying young seedling of wasabi and medium used thereforInfo
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- JPH05130815A JPH05130815A JP3045622A JP4562291A JPH05130815A JP H05130815 A JPH05130815 A JP H05130815A JP 3045622 A JP3045622 A JP 3045622A JP 4562291 A JP4562291 A JP 4562291A JP H05130815 A JPH05130815 A JP H05130815A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、ワサビの幼苗の増殖法
に関し、更に詳細には、組織培養法により、ワサビ生長
点から不定芽誘導と発根促進を行なうワサビ幼苗の大量
育成に適した増殖法およびこれに用いる培地に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for multiplying wasabi seedlings, and more specifically, suitable for mass-cultivating wasabi seedlings that induce adventitious buds and promote rooting from a wasabi growth point by a tissue culture method. The present invention relates to a growth method and a medium used for the method.
【０００２】[0002]
【従来の技術】ワサビ（Wasabia japonica Matsum）は
アブラナ科に属する常緑・多年性の植物で全国殆どの都
道府県で栽培されている。ワサビの品種は栽培産地ごと
に地名で呼ばれることが多く、品種と言っても栽培変異
を指しているため雑種性が強く、実生苗を育成しても形
質の異なる固体が出現する。 また、真妻系を中心に交
配しても種子が出来にくい品種もあり、一般にワサビの
繁殖は栄養繁殖を主体として行なわれている。しかし、
従来の分けつ苗による栄養繁殖では、スミイリ病、ナン
プ病及び各種ウイルス病などが問題となっているため
に、種苗の確保が困難であり、組織培養による優良種苗
の大量増殖法の開発が強く望まれている。2. Description of the Related Art Wasabi (Wasabia japonica Matsum) is an evergreen and perennial plant belonging to the Brassicaceae family and is cultivated in most prefectures nationwide. The varieties of wasabi are often called by place name for each cultivated area, and even if they are called varieties, they indicate cultivation variation and thus have strong hybridity, and even when seedlings are grown, solids with different traits appear. In addition, there are some varieties that do not produce seeds even if they are mated around the Mazuma system, and in general, wasabi is mainly vegetatively propagated. But,
In the conventional vegetative propagation using split seedlings, it is difficult to secure seedlings due to problems such as squirrel's disease, Nanp's disease and various viral diseases.Therefore, it is strongly desired to develop a method for mass-growing good seedlings by tissue culture. It is rare.
【０００３】このため、ワサビの組織培養による増殖に
関しては、種々の検討がなされており、例えば、以下の
ような方法が報告されている。 （１）メリクローン法（不定芽誘導法） 「農業および園芸」・第６３巻 第１号 第１８５〜１８
９頁（１９８８）、同第６３巻 第５号 第６５３〜６５
４頁（１９８８）等。 （２）不定胚誘導法 特開昭 ６３−３０４９２２号、特開平 １−９８４１６
号等。 （３）苗条原基誘導法 特開昭 ６１−１１５４１７号等。 （４）カルス経由再分化法 特開昭 ５９−５０２８５号等。Therefore, various studies have been made on the growth of horseradish by tissue culture, and the following methods have been reported, for example. (1) Mericlon method (adventitious bud induction method) "Agriculture and gardening", Volume 63, No. 1, 185-18
Page 9 (1988), Vol. 63, No. 5, No. 653-65.
4 pages (1988) etc. (2) Somatic embryo induction method JP-A-63-304922, JP-A-1-98416
No. (3) Shoot primordium induction method JP-A-61-115417. (4) Regeneration method via callus JP-A-59-50285 and the like.
【０００４】これらの方法を比較すると、カルス経由の
再分化法は他の方法に比べ遺伝的に変異を起こしやすい
という問題があり、不定胚誘導法、苗条原基誘導法が有
効な手段とされているが、これらの方法は再現性に問題
があり、実験室レベルの手法ではあっても実用的な方法
とはいえない。[0006] Comparing these methods, the redifferentiation method via callus has a problem that genetic mutation is more likely to occur than other methods, and the somatic embryo induction method and shoot primordium induction method are considered to be effective means. However, these methods have problems in reproducibility, and are not practical methods even if they are laboratory-level methods.
【０００５】一方、メリクローン法は最も実用的である
が、この方法では、基本培地としてＭＳ（ムラシゲ・ス
クーグ）培地もしくはその改変組成を用いていたため、
培養中に根茎部が褐変し、成育が衰え枯死するものが多
かった。 また、不定芽誘導法に使用するベンジルアデ
ニンの蓄積により発根誘導が難しく、増殖、培地更新作
業労力、発根誘導等に問題があり、この方法も未だ十分
に満足の行くものとはいえない。On the other hand, although the Merriclon method is the most practical, in this method, since MS (Murashige-Skoog) medium or its modified composition was used as the basic medium,
In many cases, the rhizomes turned brown during the culture, and the growth was diminished and the plants died. In addition, rooting induction is difficult due to the accumulation of benzyladenine used in the adventitious bud induction method, and there are problems in proliferation, medium renewal labor, rooting induction, etc., and this method is not yet sufficiently satisfactory. ..
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】したがって、現在、組
織培養により簡単に優良なワサビ幼苗を大量に増殖する
方法の開発が強く望まれている。Therefore, at present, there is a strong demand for development of a method for easily growing a large amount of excellent wasabi seedlings by tissue culture.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、メリクロ
ーン法によりワサビ幼苗の実用的な増殖方法を開発すべ
く鋭意研究を重ねた結果、不定芽誘導と発根誘導に用い
る培地を変えることによりその目的が達成されることを
見出し、本発明を完成した。すなわち本発明は、ワサビ
の生長点部位を不定芽誘導培地で培養して不定芽を得、
ついで、この不定芽を発根誘導培地で培養して発根せし
めることを特徴とするワサビ幼苗の増殖法およびこれに
利用する培地を提供するものである。[Means for Solving the Problems] As a result of intensive studies to develop a practical method for multiplying wasabi seedlings by the meliclon method, the present inventors changed the medium used for adventitious bud induction and root induction. As a result, they found that the object was achieved, and completed the present invention. That is, the present invention, to obtain adventitious buds by culturing wasabi growth point site in adventitious bud induction medium,
Then, the present invention provides a method for growing wasabi seedlings, which comprises culturing the adventitious buds in a rooting induction medium to allow rooting, and a medium used therefor.
【０００８】本発明方法を実施するには、まず、ワサビ
から生長点部位を取り出し、これを必要に応じて静置し
た外植片の成長と細菌による汚染を防止するための初期
培養、継代培養を行なった後、不定芽誘導培地で培養し
て不定芽を得る。In order to carry out the method of the present invention, first, a growth point site is taken out from horseradish, and if necessary, the growth of an explant that has been left still and initial culture and passage for preventing bacterial contamination are subcultured. After culturing, it is cultured in an adventitious bud induction medium to obtain adventitious buds.
【０００９】ワサビの生長点部位は、例えばワサビ茎頂
部から常法にしたがって取り出すことができる。 ワサ
ビの茎頂部としては、根茎の頂の中心部に存在する頂芽
及び葉柄の根元に存在する側芽の茎頂部を用いることが
でき、特に側芽を用いれば１本のワサビから１０数個の
茎頂部を得ることもでき好ましい。 また、既に花芽分
化の認められる茎頂部を用いてもよい。 これら頂芽及
び側芽から生長点部位を取り出すには、エタノール、塩
化ベンザルコニウム、次亜塩素酸ナトリウムなどの滅菌
液や抗生物質（セフォタキシムナトリウム）で滅菌した
後、実体顕微鏡下で生長点を摘出すれば良い。The growth point part of the horseradish can be taken out from the apex of the wasabi, for example, according to a conventional method. As the shoot apices of wasabi, the shoot apices existing in the central part of the apices of rhizomes and the shoot apices of the lateral buds existing at the base of the petiole can be used. Particularly, if the lateral buds are used, 10 or more stems from one wasabi can be used. The top can be obtained, which is preferable. Alternatively, a shoot apex in which flower bud differentiation is already recognized may be used. To remove the growth point from these apical and lateral buds, sterilize with a sterilizing solution such as ethanol, benzalkonium chloride, sodium hypochlorite or an antibiotic (cefotaxime sodium), and then remove the growth point under a stereomicroscope. Just do it.
【００１０】また、不定芽誘導培地としては、サイトカ
イニン様植物成長調節物質およびジベレリン様植物生長
調節物質を含有する培地が使用される。 不定芽誘導培
地に配合されるサイトカイニン様植物生長調節物質は、
サイトカイニンとして知られる天然の植物生長ホルモン
およびこれと同様の作用を有する合成物を意味し、具体
的な例としては、ベンジルアデニン（ＢＡ）、カイネチ
ン、ゼアチン等が挙げられる。 一方、ジベレリン様植
物生長調節物質は、ジベレリン（以下、「ＧＡ」と略称
する）として知られる天然の植物生長ホルモンおよびこ
れと同様の作用を有する合成物を意味し、具体的な例と
しては、ＧＡ3〜ＧＡ0等が挙げられる。不定芽誘導培地
中のサイトカイニン様植物生長調節物質の配合量は、例
えばＢＡを用いた場合０.０１〜２ｍｇ／ｌ、好ましく
は０.１〜０.２ｍｇ／ｌ程度であり、また、ジベレリン
様植物生長調節物質の配合量は、ＧＡ3を用いた場合０.
０１〜２ｍｇ／ｌ、好ましくは０.１〜０.５ｍｇ／ｌ程
度である。Further, as the adventitious bud induction medium, a medium containing a cytokinin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator is used. The cytokinin-like plant growth regulator contained in the adventitious shoot induction medium is
It means a natural plant growth hormone known as cytokinin and a synthetic compound having an action similar to this, and specific examples thereof include benzyladenine (BA), kinetin, zeatin and the like. On the other hand, the gibberellin-like plant growth regulator means a natural plant growth hormone known as gibberellin (hereinafter, abbreviated as "GA") and a compound having an action similar to this, and specific examples include: GA 3 to GA 0 and the like can be mentioned. The amount of the cytokinin-like plant growth regulator contained in the adventitious bud induction medium is, for example, 0.01 to 2 mg / l, preferably 0.1 to 0.2 mg / l when BA is used, and gibberellin-like. The blending amount of the plant growth regulator is 0 when GA 3 is used.
It is about 01 to 2 mg / l, preferably about 0.1 to 0.5 mg / l.
【００１１】この不定芽誘導培地中には、更にハイポネ
ックス等の植物栄養素およびサッカロース等の糖類等を
加えることができる。 植物栄養素としては、例えば、
そのＮ−Ｐ−Ｋ比が６−６−６、６.５−６−１９、１
０−３０−２０等であるものを好ましく使用することが
でき、その好ましい配合量は、３.０〜４.０ｇ／ｌであ
る。 また、サッカロース等の糖類は、３.５〜５.０ｇ
／ｌ程度配合される。本発明で用いる不定芽誘導培地
は、固体であっても液状であっても良いが、固体のもの
の方が取り扱いの面から有利である。Into the adventitious bud induction medium, phytonutrients such as Hyponex and sugars such as saccharose can be added. Examples of phytonutrients include:
The N-P-K ratio is 6-6-6, 6.5-6-19, 1
It is possible to preferably use those of 0-30-20 and the like, and the preferable blending amount thereof is 3.0 to 4.0 g / l. In addition, saccharides such as sucrose are 3.5-5.0 g.
/ L is mixed. The adventitious bud induction medium used in the present invention may be solid or liquid, but a solid one is more advantageous in terms of handling.
【００１２】不定芽誘導のための培養は、１０００〜１
５００ルクス（１６ｈｒ明、８ｈｒ暗）の光条件下、１
３〜１６℃に保たれた温度条件下で行なうことが望まし
い。温度が２５℃またはそれ以上になるとワサビの成長
が停止しするので好ましくない。The culture for adventitious bud induction is 1000-1
500 lux (16hr light, 8hr dark) light condition, 1
It is desirable to carry out under the temperature condition kept at 3 to 16 ° C. When the temperature is 25 ° C. or higher, wasabi growth stops, which is not preferable.
【００１３】不定芽誘導のための培養において、ワサビ
幼苗が増殖したときは１５〜２０日毎にメスでこれを大
きめに（不定芽を５〜６個含む固まりに）分割し、必要
な苗数が出来るまでこの作業を繰返す。 この時５ｃｍ
以上伸長した幼苗は葉柄部を切り落としてから培養に供
すことが不定芽の増殖に好ましい。 尚、培地の更新は
３０〜４０日程度でおこなうことが適当である。In the culture for inducing adventitious buds, when the young wasabi seedlings were proliferated, they were divided into large pieces (in a mass containing 5 to 6 adventitious buds) every 15 to 20 days, and the required number of seedlings was increased. Repeat this work until you can. 5 cm at this time
It is preferable for cutting off the petiole part of the thus-grown seedling and then subjecting it to culture for the growth of adventitious buds. In addition, it is appropriate to update the medium within about 30 to 40 days.
【００１４】このようにして不定芽を誘導した後、これ
を発根誘導培地に移し、得られた幼苗から発根を誘導す
る。発根誘導培地は、オーキシン様植物成長調節物質お
よびジベレリン様植物成長調節物質を含有する培地であ
り、このうち、ジベレリン様植物成長調節物質は前記の
不定芽誘導培地に用いたものと同様のものを用いること
ができる。After inducing adventitious buds in this manner, this is transferred to a rooting induction medium, and rooting is induced from the obtained seedlings. The rooting induction medium is a medium containing an auxin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator, of which the gibberellin-like plant growth regulator is the same as that used for the adventitious shoot induction medium. Can be used.
【００１５】また、オーキシン様植物生長調節剤として
は、オーキシンとして知られる天然の植物生長ホルモン
およびこれと同様の作用を有する合成物を意味し、具体
的な例としては、インドール−３−酢酸（ＩＡＡ）、イ
ンドール−３−酪酸（ＩＢＡ）、１−ナフタレン酢酸
（ＮＡＡ）および２,４−ジクロロフェノキシ酢酸（２,
４−Ｄ）等が挙げられる。 このうち、実用的には、発
根率の面からＩＡＡ、ＩＢＡがより好ましい。The auxin-like plant growth regulator means a natural plant growth hormone known as auxin and a compound having the same action as this, and specific examples include indole-3-acetic acid ( IAA), indole-3-butyric acid (IBA), 1-naphthalene acetic acid (NAA) and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,
4-D) and the like. Of these, IAA and IBA are more preferable in terms of rooting rate in practical use.
【００１６】発根誘導培地中のオーキシン様植物生長調
節物質の配合量は、０.０１〜５ｍｇ／ｌ、好ましくは
０.５〜２.０ｍｇ／ｌ程度であり、また、ジベレリン様
植物生長調節物質の配合量は、ＧＡ3を用いた場合０.０
１〜２ｍｇ／ｌ、好ましくは０.２５〜０.５ｍｇ／ｌ程
度である。The amount of the auxin-like plant growth regulator contained in the root induction medium is about 0.01-5 mg / l, preferably about 0.5-2.0 mg / l, and the gibberellin-like plant growth regulator is used. The compounding amount is 0.0 when GA 3 is used.
It is 1 to 2 mg / l, preferably about 0.25 to 0.5 mg / l.
【００１７】この発根誘導培地中には、ハイポネックス
等の植物栄養素等を加えることができ、その好ましい配
合量は、０.５〜２.０ｇ／ｌ程度である。 植物栄養素
としては、例えば、前記のＮ−Ｐ−Ｋ比のものを用いて
も良いが、より実用的には、苗が徒長しにくく、馴化時
に葉枯れが起きにくい６.５−６−１９のものを使用す
ることが好ましい。To this rooting induction medium, phytonutrients such as Hyponex can be added, and the preferable blending amount is about 0.5 to 2.0 g / l. As the phytonutrients, for example, those having the above-mentioned N-P-K ratio may be used, but more practically, the seedlings are less likely to grow, and leaf wilting is less likely to occur during acclimation 6.5-6-19. It is preferable to use those of
【００１８】発根誘導のための培養は、３０〜６０日程
度行なえば良く、光及び温度等の培養条件は、前記不定
芽誘導のための培養とほぼ同様で良い。ワサビ幼苗の発
根は培養３０日目頃から始まり５０〜６０日で、馴化可
能な程度に根が伸長する。The culture for inducing rooting may be carried out for about 30 to 60 days, and the culture conditions such as light and temperature may be substantially the same as the culture for inducing adventitious buds. The rooting of the wasabi seedlings starts around the 30th day of culture, and the roots grow to the extent that they can be acclimatized in 50 to 60 days.
【００１９】発根したワサビ幼苗は、滅菌したバーミキ
ューライトを入れたビニールポットに植え、これにビニ
ールを被せながら徐々に馴化を行なう。馴化における
光、温度等の条件は各培養工程と同じである。 灌水
は、２０００倍のハイポネックス（６.５−６−１９）
を随時与えることにより行なえば良い。The rooted wasabi seedlings are planted in a vinyl pot containing sterilized vermiculite and gradually acclimatized while covering the vinyl pot with vinyl. The conditions such as light and temperature in acclimation are the same as those in each culture step. Watering is 2000 times Hyponex (6.5-6-19)
May be given at any time.
【００２０】[0020]
【作用】本発明は、メリクローン法の、培養中に根茎部
が褐変し、成育が衰え枯死するという欠点をＭＳ培地お
よびその改変組成を用いないことにより回避し、更に不
定芽誘導に使用するＢＡの蓄積による発根誘導の困難
を、組成の異なる培地、すなわち不定芽誘導培地と発根
誘導培地を順次用いることにより解消したものである。INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention avoids the disadvantages of the mericlon method, in which the rhizome is browned during culturing, causing growth to die and dying, by not using MS medium and its modified composition, and further used for inducing adventitious buds. The difficulty of rooting induction due to the accumulation of BA is solved by sequentially using media having different compositions, that is, adventitious bud induction medium and rooting induction medium.
【００２１】[0021]
【発明の効果】本発明で用いる培地は、培地の組成が単
純で、従来の培地（ＭＳ又はその改変培地）に比べ、培
養中に組織の黒変が無く、生育の衰えや枯死が無いた
め、５０日以上の連続培養も可能である。EFFECTS OF THE INVENTION The medium used in the present invention has a simple medium composition and does not cause tissue blackening during culture, and does not cause growth deterioration or death as compared with conventional medium (MS or its modified medium). Continuous culture for 50 days or more is also possible.
【００２２】従来、ワサビ培養培地では１４日に１回程
度培地更新を行なう必要があったので、本発明の培地を
用いることにより、培地の更新期間を長くすることがで
き、経済的である。また、従来の培地では、発根誘導率
が０〜３５％程度であるのに対し、本発明の発根誘導率
が７５〜８５％と高い。更に、本発明の培地は、品種に
対する汎用性が非常に広く、アブラナ科ワサビ属に属す
るいわゆるワサビに広く適用され、しかも再現性が非常
に高い。Conventionally, the wasabi culture medium had to be renewed about once every 14 days. Therefore, by using the medium of the present invention, the renewal period of the medium can be extended, which is economical. Further, in the conventional medium, the rooting induction rate is about 0 to 35%, whereas the rooting induction rate of the present invention is as high as 75 to 85%. Furthermore, the medium of the present invention has a very wide versatility with respect to varieties, is widely applied to so-called wasabi belonging to the genus Wasabi of the family Brassicaceae, and has very high reproducibility.
【００２３】このようなワサビ培養培地を用いる本発明
方法は、分割増殖法の省力及び効率化を高め、実用的に
大量のワサビの優良幼苗生産が可能となる経済的に優れ
たものである。The method of the present invention using such a horseradish culture medium is economically excellent in that the labor saving and efficiency of the split breeding method can be improved and a large amount of excellent wasabi seedlings can be produced practically.
【００２４】[0024]
【実施例】次に実施例を挙げ本発明を更に詳しく説明す
る。 実 施 例 １ ワサビの腋芽をメスで切りだし、ガーゼに包み、以下の
手順で殺菌を行なう。殺菌後、実体顕微鏡下で葉原基を
２〜３枚残し、成長点をメスで摘出し、下に示す初期培
地Ａに置床する。初期培地Ａで１ケ月培養後、これを分
割せずに、継代培地Ｂに植え継ぐ。EXAMPLES Next, the present invention will be described in more detail by way of examples. Example 1 Axillary buds of horseradish are cut out with a scalpel, wrapped in gauze, and sterilized by the following procedure. After sterilization, 2-3 leaf primordia are left under a stereoscopic microscope, growth points are excised with a scalpel, and placed on the initial medium A shown below. After culturing in the initial medium A for 1 month, the cells are subcultured in the subculture medium B without dividing.
【００２５】更に継代培地Ｂで１ケ月培養後、分割可能
なものは２分割し、サイトカイニン様植物生長調節物質
としてベンジルアデニン（ＢＡ）を、ジベレリン様植物
生長調節物質としてＧＡ3を用い、第１表に示す組成の
不定芽誘導培地に植え継ぐ。不定芽培養培地で１ケ月培
養後のワサビ幼苗の生育状態を第２表に示す。After further culturing for 1 month in the subculture medium B, the dividable one was divided into two, and benzyladenine (BA) was used as a cytokinin-like plant growth regulator and GA 3 was used as a gibberellin-like plant growth regulator. 1 Subculture in an adventitious bud induction medium having the composition shown in Table 1. Table 2 shows the growth state of the wasabi seedlings after 1 month of culture in the adventitious bud culture medium.
【００２６】（殺菌手順） （１）７０％ エタノールに２〜３秒浸漬する。 （２）０.２５％ 塩化ベンザルコニウムに１０分間浸漬
する。 （３）界面活性剤を添加した０.２５％次亜塩素酸ナト
リウムに１０分間浸漬する。 （４）滅菌水で３回洗う。 （５）抗生物質 セフォタキシウムナトリウムの０.５ｇ
／ｌ溶液に３０分間浸漬する。(Sterilization procedure) (1) Immerse in 70% ethanol for 2 to 3 seconds. (2) Immerse in 0.25% benzalkonium chloride for 10 minutes. (3) Immerse in 0.25% sodium hypochlorite containing a surfactant for 10 minutes. (4) Wash with sterile water three times. (5) 0.5 g of antibiotic cefotaxium sodium
Soak for 30 minutes in a 1 / l solution.
【００２７】 （初期培地 Ａ） ハイポネックス（１０−３０−２０） ３.５０ｇ／ｌ ＢＡ（ベンジルアデニン） ０.１５ｍｇ／ｌ ＧＡ3（ジベレリン） ０.２５ｍｇ／ｌ サッカロース ３５.０ｇ／ｌ セフォタキシムナトリウム（抗生物質） ０.５０ｇ／ｌ 寒天 ０.８０ｇ／ｌ ｐＨ ５.６(Initial medium A) Hyponex (10-30-20) 3.50 g / l BA (benzyladenine) 0.15 mg / l GA 3 (Gibberellin) 0.25 mg / l saccharose 35.0 g / l Cefotaxime sodium ( Antibiotics) 0.50 g / l agar 0.80 g / l pH 5.6
【００２８】 （継代培地 Ｂ） ハイポネックス（１０−３０−２０） ３.５０ｇ／ｌ ＢＡ（ベンジルアデニン） ０.１５ｍｇ／ｌ ＧＡ3（ジベレリン） ０.２５ｍｇ／ｌ サッカロース ３５.０ｇ／ｌ セフォタキシムナトリウム（抗生物質） ０.２５ｇ／ｌ 寒天 ０.８０ｇ／ｌ ｐＨ ５.６(Subculture medium B) Hyponex (10-30-20) 3.50 g / l BA (benzyladenine) 0.15 mg / l GA 3 (gibberellin) 0.25 mg / l saccharose 35.0 g / l cefotaxime sodium (Antibiotic) 0.25g / l agar 0.80g / l pH 5.6
【００２９】 （不定芽誘導培地） 第 １ 表 ──────────────────────────────────── 培 地 ＢＡ ＧＡ3 植物栄養素* サッカロース 寒 天 番 号 （mg/l） （mg/l） （g/l） （g/l）
──────────────────────────────────── １ ０.１５ ０.２５ ＨＹ ３５ ０.８ ２ ０.１５ − ＨＹ ３５ ０.８ ３ ０.１５ ０.２５ ＭＳ ３５ ０.８ ４ ０.１５ − ＭＳ ３５ ０.８ ５ ０.１５ ０.２５ Ｍ１／２ＭＳ ３５ ０.８ ──────────────────────────────────── ＊ ： ＨＹはハイポネックス（６.５−６−１９）を、
ＭＳはＭＳ培地を、Ｍ１／２ＭＳはＭＳ培地からミオイ
ノシトールを除き、窒素源のみを１／２にした改変培地
を示す。(Adventitious bud induction medium) Table 1 ──────────────────────────────────── BA GA 3 Phytonutrients * Sucrose Agar No. (mg / l) (mg / l) (g / l) (g / l)
──────────────────────────────────── 1 0.15 0.25 HY 35 0.8 20 .15-HY 35 0.8 3 0.15 0.25 MS 35 0.8 0.8 0.15 -MS 35 0.8 5 0.15 0.25 M1 / 2 MS 35 0.8 ─────── ────────────────────────────── *: HY is Hyponex (6.5-6-19),
MS represents MS medium, and M1 / 2 MS represents modified medium in which myo-inositol was removed from the MS medium and only the nitrogen source was halved.
【００３０】 （ワサビ幼苗の生育状態） 第 ２ 表 ──────────────────────────────────── 培 地 生存率 継代率 不定芽 苗伸長 総 合 評 価 番 号 （％） （％） ──────────────────────────────────── １ １００ １００ ＋＋＋ ＋＋＋ 苗の生育が極めて良好 ２ １００ １００ ＋＋ ＋＋ 苗の生育が良好 ３ ８０ ７０ ＋＋ ＋ やや褐変が認められる ４ ６０ ５５ ＋ − 褐変による枯死が多い ５ ４０ ３０ ＋ ＋ 苗がやや軟らかい ────────────────────────────────────(Growth state of wasabi seedlings) Table 2 ───────────────────────────────────── Land survival rate Passage rate Adventitious shoots Seedling growth Total evaluation number (%) (%) ───────────────────────────── ──────── 1 100 100 ++++ ++++ Very good growth of seedlings 2 100 100 ++++ Good growth of seedlings 3 80 70 ++ ++ Slight browning observed 4 60 55 ++ Many deaths due to browning 5 40 30 + + The seedlings are a little soft ─────────────────────────────────────
【００３１】実 施 例 ２ 実施例１と同様にしてワサビの生長点部位を取り出し、
初期培地Ａ、ついで継代培地Ｂで培養した後、それぞれ
所定の不定芽誘導培地で３ケ月培養し、さらに第３表に
示す発根誘導培地に移して培養を行なった。 なお、不
定芽培養培地においては、２〜３週間程度毎に分割作業
を行ない、目的の苗数が得られた時点で、発根誘導培地
に移し、発根を誘導した。 また、培地の更新は１ケ月
毎に行なった。 更に、細菌による汚染発生時にはセフ
ォタキシムナトリウムを０.５ｇ／ｌを培地に添加し、
除菌した。発根誘導培地において２ケ月培養後のワサビ
幼苗の状況を第４表に示す。Practical example 2 In the same manner as in Example 1, the growing point of wasabi was taken out,
After culturing in the initial medium A and then in the subculture medium B, each was cultured in a predetermined adventitious bud induction medium for 3 months, and further transferred to the rooting induction medium shown in Table 3 for culturing. The adventitious bud culture medium was divided every 2-3 weeks, and when the desired number of seedlings was obtained, it was transferred to a rooting induction medium to induce rooting. The medium was renewed every month. Furthermore, when bacterial contamination occurs, cefotaxime sodium is added to the medium at 0.5 g / l,
Sterilized. Table 4 shows the situation of the wasabi seedlings after two months of cultivation in the rooting induction medium.
【００３２】 （発根誘導培地組成） 第 ３ 表 ──────────────────────────────────── 培 地 オーキシン* ＧＡ3 植 物 サッカロース 寒 天 番 号 ［種類;濃度(mg/l)］ （mg/l） 栄養素** （g/l） （g/l） ──────────────────────────────────── １ ＮＡＡ; １.０ ０.２５ ＨＹ ３.５ ０.８ ２ ＮＡＡ; １.０ − ＨＹ ３.５ ０.８ ３ ＩＡＡ; １.０ ０.２５ ＨＹ ３.５ ０.８ ４ ＩＡＡ; １.０ − ＨＹ ３.５ ０.８ ５ ＩＢＡ; ０.５ ０.２５ ＨＹ ３.５ ０.８ ６ ＩＢＡ; ０.５ − ＨＹ ３.５ ０.８ ７ ＮＡＡ; １.０ ０.２５ ＭＳ ３.５ ０.８ ８ ＮＡＡ; １.０ − ＭＳ ３.５ ０.８ ９ ＩＡＡ; １.０ ０.２５ ＭＳ ３.５ ０.８ １０ ＩＡＡ; １.０ − ＭＳ ３.５ ０.８ １１ ＩＢＡ; ０.５ ０.２５ ＭＳ ３.５ ０.８ １２ ＩＢＡ; ０.５ − ＭＳ ３.５ ０.８ ──────────────────────────────────── ＊ ： ＮＡＡは１−ナフタレン酢酸を、ＩＡＡはインド
ール−３−酢酸を、ＩＢＡはインドール−３−酪酸をそ
れぞれ示す。 ** ： ＨＹはハイポネックス（６.５−６−１９）を、
ＭＳはＭＳ培地を示す。(Rooting induction medium composition) Table 3 ──────────────────────────────────── Local auxin * GA 3 plant Sucrose Agar No. [type; concentration (mg / l)] (mg / l) Nutrients ** (g / l) (g / l) ─────────── ────────────────────────── 1 NAA; 1.0 0.25 HY 3.5 0.8 0.8 NAA; 1.0-HY 3.5 0.8 3 IAA; 1.0 0.25 HY 3.5 0.8 4 IAA; 1.0-HY 3.5 0.8 0.5 IBA; 0.5 0.25 HY 3.5 50 0.86 IBA; 0.5-HY 3.5 0.87 NAA; 1.0 0.25 MS 3.5 0.8 0.8 NAA; 1.0-MS 3.5 0.89 IAA; 1 0.0 0.25 MS 3.5 0.8 10 IAA; 1.0-MS 3.5 0.8 11 IBA; 0.5 0.25 MS 3.5 0.8 12 IBA; 0.5-MS 3.5 0.8 ────────────────────────────── ──────── *: NAA represents 1-naphthalene acetic acid, IAA represents indole-3-acetic acid, and IBA represents indole-3-butyric acid. **: HY is Hyponex (6.5-6-19),
MS indicates MS medium.
【００３３】 （ワサビ幼苗の発根状態） 第 ４ 表 ─────────────────────────────── 培 地 供 試 数 生 存 数 発根個体数 番 号 （個） （個） （個） ─────────────────────────────── １ ２０ ２０ ４ ２ ２０ １９ ２ ３ ２０ ２０ １７ ４ ２０ ２０ ７ ５ ２０ ２０ １５ ６ ２０ ２０ ６ ７ ２０ １２ ３ ８ ２０ ７ ０ ９ ２０ １７ １１ １０ ２０ １４ ６ １１ ２０ １５ ９ １２ ２０ １３ ４ ─────────────────────────────── (Rooting state of wasabi seedlings) Table 4 ──────────────────────────────── Number of living organisms Number of rooted individuals Number (unit) (unit) (unit) ──────────────────────────────── 1 20 20 4 2 20 20 19 2 3 20 20 20 17 4 20 20 7 5 5 20 20 15 6 6 20 20 6 6 7 20 12 3 8 20 7 0 9 9 20 17 11 11 10 20 14 6 11 20 20 15 9 12 12 20 13 4 ── ────────────────────────────
【００３４】１〜６の培地で発根を誘導したワサビ個体
においては、根茎部及び培地のかっぺんはきわめて少な
かった。 また、葉枯れも無く、長期連続培養でも枯れ
死する個体が殆どなかった。 発根は30日ごろから始ま
り、根の伸長も良かった。 ＩＡＡおよびＩＢＡ添加区
において、ＧＡ3の添加は発根に特に効果があった。一
方、７〜１２の培地において、ＧＡ3無添加区は特にか
っぺんが多く、培養１０日目頃から、葉枯れと根茎部の
かっぺんが観察された。In the horseradish individuals whose roots were induced in the mediums 1 to 6, the rhizomes and the caps of the medium were extremely small. Moreover, there was no leaf death, and almost no individual died even after long-term continuous culture. Rooting started around 30 days, and the roots grew well. In the IAA and IBA addition groups, addition of GA 3 was particularly effective for rooting. On the other hand, in the culture mediums 7 to 12, the GA 3 non-added group had a lot of caps, and leaf wilting and root caps were observed from about the 10th day of culture.
【００３５】実 施 例 ３ 下に示す不定芽誘導培地と発根促進培地を調製し、ＧＡ
3の存在がワサビ幼苗の生育に与える影響を調べた。 こ
の結果を第５表に示す。Example 3 An adventitious bud induction medium and a rooting promotion medium shown below were prepared and GA
The effects of the presence of 3 on the growth of wasabi seedlings were investigated. The results are shown in Table 5.
【００３６】（不定芽誘導培地） Ｃ+培地 ： ハイポネックス（10-30-20）に、ベンジル
アデニンを０.１５ｐｐｍ、ＧＡ3を０.２５ｐｐｍとな
る様に加えた培地 Ｃ-培地 ： ハイポネックス（10-30-20）に、ベンジル
アデニンを０.１５ｐｐｍとなる様に加え、ＧＡ3は添加
しない培地(Adventitious bud inducing medium) C + medium: medium in which benzyladenine was added to 0.15 ppm and GA 3 to 0.25 ppm to Hyponex (10-30-20) C - medium: Hyponex (10 -30-20) to which benzyladenine was added to 0.15 ppm and GA 3 was not added.
【００３７】（発根誘導培地） Ｄ1+培地： ハイポネックス（10-30-20）に、インドー
ル−３−酢酸を１ｐｐｍ、ＧＡ3を０.２５ｐｐｍとなる
様に加えた培地 Ｄ1-培地： ハイポネックス（10-30-20）に、インドー
ル−３−酢酸を１ｐｐｍとなる様に加え、ＧＡ3は添加
しない培地 Ｄ2+培地： ハイポネックス（10-30-20）に、インドー
ル−３−酪酸を０.５ｐｐｍ、ＧＡ3を０.２５ｐｐｍと
なる様に加えた培地 Ｄ2-培地： ハイポネックス（10-30-20）に、インドー
ル−３−酪酸を０.５ｐｐｍとなる様に加え、ＧＡ3は添
加しない培地(Rooting induction medium) D 1+ medium: medium in which indole-3-acetic acid was added to Hyponex (10-30-20) so that the concentration was 1 ppm and GA 3 was 0.25 ppm. D 1- medium: Medium in which indole-3-acetic acid is added to Hyponex (10-30-20) to a concentration of 1 ppm and GA 3 is not added D 2+ medium: Indole-3-butyric acid is added to Hyponex (10-30-20) Medium with 0.5 ppm and GA 3 added to 0.25 ppm D 2- medium: Hydonex (10-30-20) was added with indole-3-butyric acid to 0.5 ppm, GA 3 Medium without addition
【００３８】 第 ５ 表 ──────────────────────────────── 使 用 培 地 結 果 ─────────────── ───────────── 不定芽誘導培地 発根促進培地 発 根 数 発 根 率 ──────────────────────────────── Ｃ+培地 Ｄ1+培地 17／20 ８５％ Ｃ-培地 Ｄ1-培地 7／20 ３５％ Ｃ+培地 Ｄ2+培地 15／20 ７５％ Ｃ-培地 Ｄ2-培地 6／20 ３０％ ──────────────────────────────── この結果より、ＧＡ3を利用することによって発根が促
進されることが明かとなった。Table 5 ──────────────────────────────── USE LAND LAND RESULTS ────── ───────── ───────────── Adventitious shoot induction medium Rooting promotion medium Rooting rate Rooting rate ────────────── ────────────────── C + medium D 1+ medium 17/20 85% C - medium D 1- medium 7/20 35% C + medium D 2+ medium 15 / 20 75% C - medium D2 - medium 6/20 30% ──────────────────────────────── It was revealed that the use of GA 3 promotes rooting.
Claims (9)
で培養して不定芽を得、ついで、この不定芽を発根誘導
培地で培養して発根せしめることを特徴とするワサビ幼
苗の増殖法。1. Propagation of wasabi seedlings, characterized in that adventitious buds are obtained by culturing wasabi growth point sites in adventitious shoot induction medium, and then adventitious shoots are rooted by culturing in adventitious shoot induction medium. Law.
物成長調節物質およびジベレリン様植物成長調節物質を
含有する培地である請求項第１項記載のワサビ幼苗の増
殖法。2. The method for growing wasabi seedlings according to claim 1, wherein the adventitious bud induction medium is a medium containing a cytokinin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator.
ベンジルアデニンまたはカイネチンである請求項第２項
記載のワサビ幼苗の増殖法。3. The method for growing wasabi seedlings according to claim 2, wherein the cytokinin-like plant growth regulator is benzyladenine or kinetin.
調節物質およびジベレリン様植物成長調節物質を含有す
る培地である請求項第１項記載のワサビ幼苗の増殖法。4. The method for growing wasabi seedlings according to claim 1, wherein the root induction medium is a medium containing an auxin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator.
ドール−３−酢酸、インドール−３−酪酸、１−ナフタ
レン酢酸および２,４−ジクロロフェノキシ酢酸から選
ばれたものである請求項第４項記載のワサビ幼苗の増殖
法5. The auxin-like plant growth regulator is selected from indole-3-acetic acid, indole-3-butyric acid, 1-naphthalene acetic acid and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. Method for breeding wasabi seedlings
1〜ＧＡ0の何れかである請求項第２項または第４項記載
のワサビ幼苗の増殖法。6. The gibberellin-like plant growth regulator is GA
The method for growing a wasabi seedling according to claim 2 or 4, wherein the method is any one of 1 to GA 0 .
よびジベレリン様植物成長調節物質を含有するワサビ用
不定芽誘導培地。7. An adventitious shoot induction medium for wasabi containing a cytokinin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator.
ジベレリン様植物成長調節物質を含有するワサビ用発根
誘導培地。8. A rooting induction medium for wasabi containing a auxin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator.
よびジベレリン様植物成長調節物質を含有する不定芽誘
導培地と、オーキシン様植物成長調節物質およびジベレ
リン様植物成長調節物質を含有する発根誘導培地を組み
合わせてなるワサビ用組織培養培地キット。9. An adventitious bud-inducing medium containing a cytokinin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator and a rooting induction medium containing an auxin-like plant growth regulator and a gibberellin-like plant growth regulator. A tissue culture medium kit for wasabi.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3045622A JPH05130815A (en) | 1991-02-20 | 1991-02-20 | Method for multiplying young seedling of wasabi and medium used therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3045622A JPH05130815A (en) | 1991-02-20 | 1991-02-20 | Method for multiplying young seedling of wasabi and medium used therefor |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05130815A true JPH05130815A (en) | 1993-05-28 |
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ID=12724476
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3045622A Pending JPH05130815A (en) | 1991-02-20 | 1991-02-20 | Method for multiplying young seedling of wasabi and medium used therefor |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05130815A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1084141C (en) * | 1998-08-05 | 2002-05-08 | 南京农业大学 | Method for quick reproducing 'Shankui' sprout |
| CN115088602A (en) * | 2022-06-29 | 2022-09-23 | 新疆兵团勘测设计院(集团)有限责任公司 | Cultivation method for improving saline-alkali resistance of plants and ecological system construction method thereof |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5731836A (en) * | 1980-08-05 | 1982-02-20 | Olympus Optical Co | Electric connector of endoscope |
| JPS57164031A (en) * | 1981-04-01 | 1982-10-08 | Olympus Optical Co | Light source apparatus for endoscope |
| JPS59181119A (en) * | 1983-03-31 | 1984-10-15 | オリンパス光学工業株式会社 | Liquid sending apparatus of endoscope |
| JPS60158802U (en) * | 1984-03-31 | 1985-10-22 | オリンパス光学工業株式会社 | Light source device for endoscope |
| JPS6257532A (en) * | 1985-09-04 | 1987-03-13 | 富士写真光機株式会社 | Connector apparatus for endoscope |
| JPS63105735A (en) * | 1986-10-23 | 1988-05-11 | オリンパス光学工業株式会社 | Electronic endoscope apparatus |
| JPS63276885A (en) * | 1987-05-06 | 1988-11-15 | Olympus Optical Co Ltd | Connector device |
| JPS63292938A (en) * | 1987-05-27 | 1988-11-30 | Toshiba Corp | Endoscope |
-
1991
- 1991-02-20 JP JP3045622A patent/JPH05130815A/en active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5731836A (en) * | 1980-08-05 | 1982-02-20 | Olympus Optical Co | Electric connector of endoscope |
| JPS57164031A (en) * | 1981-04-01 | 1982-10-08 | Olympus Optical Co | Light source apparatus for endoscope |
| JPS59181119A (en) * | 1983-03-31 | 1984-10-15 | オリンパス光学工業株式会社 | Liquid sending apparatus of endoscope |
| JPS60158802U (en) * | 1984-03-31 | 1985-10-22 | オリンパス光学工業株式会社 | Light source device for endoscope |
| JPS6257532A (en) * | 1985-09-04 | 1987-03-13 | 富士写真光機株式会社 | Connector apparatus for endoscope |
| JPS63105735A (en) * | 1986-10-23 | 1988-05-11 | オリンパス光学工業株式会社 | Electronic endoscope apparatus |
| JPS63276885A (en) * | 1987-05-06 | 1988-11-15 | Olympus Optical Co Ltd | Connector device |
| JPS63292938A (en) * | 1987-05-27 | 1988-11-30 | Toshiba Corp | Endoscope |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1084141C (en) * | 1998-08-05 | 2002-05-08 | 南京农业大学 | Method for quick reproducing 'Shankui' sprout |
| CN115088602A (en) * | 2022-06-29 | 2022-09-23 | 新疆兵团勘测设计院(集团)有限责任公司 | Cultivation method for improving saline-alkali resistance of plants and ecological system construction method thereof |
| CN115088602B (en) * | 2022-06-29 | 2023-08-18 | 新疆兵团勘测设计院集团股份有限公司 | Cultivation method for improving salt and alkali resistance of plants and ecological system construction method thereof |
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