【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
産業上の利用分野
この発明は、有機物含有水性液、例えば水溶性
切削研削油剤、塗料ミスト処理剤および水溶性洗
浄剤等の腐敗防止方法に関する。
発明の概要
この発明は、水性処理剤の腐敗を防止する方法
において、
該処理液の腐敗に関与する細菌に対する溶菌活
性を有するバクテリオフアージを添加することに
よつて、
該処理液の腐敗劣化を効果的に防止できるよう
にしたものである。
従来の技術
従来から、水溶性切削研削油剤、塗料ミスト処
理剤および水溶性洗浄剤等の水性処理剤の細菌に
よる腐敗劣化を防止するために、トリアジン系化
合物やイソチアゾリン系化合物等の防腐殺菌剤を
該処理剤中へその使用前および／または使用後に
随時添加する方法が一般に採用されている。
しかしながら、この種の防腐殺菌剤を多量に添
加すると作業者に皮膚荒れ、目や鼻腔の粘膜の炎
症等をもたらすので、腐敗劣化を効果的に防止す
るのに十分な量を使用することは作業衛生上の観
点から問題がある。このため、腐敗が発生した後
で、防腐殺菌剤を数百ppm程度の濃度で随時補充
添加しているのが実情である。さらに、同種の防
腐殺菌剤を継続的に使用すると、該薬剤に対する
耐性菌が出現するので、腐敗を有効に防止するこ
とができない。
また、水溶性切削研削油剤の場合には、ばつ気
処理を行うこともある。この方法によれば嫌気性
細菌の増殖は抑制できるので硫化水素等の発生は
抑えられるが、好気性細菌が増殖して潤滑剤や界
面活性剤等の油剤成分が生分解を受けやすくなる
という問題がある。
発明が解決しようとする課題
この発明は、この種の水性処理剤の腐敗劣化
を、作業衛生上問題のある防腐殺菌剤等の薬剤を
使用せずに、有効に防止できる方法を提供するた
めになされたものである。
課題を解決するための手段
即ち本発明は、水性処理剤に、該処理剤の腐敗
に関与する細菌に対する溶菌活性を有するバクテ
リオフアージを添加することを特徴とする水性処
理剤の腐敗防止法に関する。
以下、本発明を実施するための基本的な単位操
作を説明する。
(1) 有機物を含有する被処理水性液の腐敗に関与
する細菌の単離と同定
被処理水性液の腐敗液に含まれる腐敗菌を常
法により、適当な培地に塗沫培養し、生じたコ
ロニーから細菌を単離する。
単離した細菌は常法に従つて、形態、グラム
染色、運動性、嫌気条件下での発育、Ｏ−Ｆテ
スト等によつて同定すればよい。
通常の有機物含有水性液の腐敗に関与する細
菌は当該分野においては既に数多く単離され同
定されているので、この単位操作は容易に行う
ことができる。
この種の細菌としては大腸菌（Escherichia
coli）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、
パラ大腸菌属（Paracolobactrum sp.）、尋常
変形菌（Proteus vulgaris）、緑膿菌
（Pseudomonas aeruginosa）、シユードモナ
ス・オレオボランス（Pseudomonas
oleovorans）、シユードモナス属
（Pseudomonas sp.）、腸チフス菌
（Salmonella typhosa）、黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus）、デスルフオビブリ
オ・デスルフリカンス（Desulfovibrio
desulfuricans）、硫酸還元菌種（Desulfovibrio
sp.）、枯草菌（Bacillus subtillis）およびバチ
ルス属（Bacillus sp.）等が例示される。
(2) バクテリオフアージの探索
単離された細菌を溶菌するバクテリオフアー
ジの探索は間接法で行うのが簡便である。
適宜の液体培地（例えば肉エキス、ペプト
ン、塩化ナトリウム等を含有する水性培地等）
に前記の単離した細菌の培養液を加えて振盪培
養し、次いでこの培養液に、バクテリオフアー
ジを含むと考えられる被処理水性液の腐敗液を
添加し振盪培養する。この培養液を遠心分離
し、上澄液をメンブランフイルター等を用いる
濾過処理に付す。
濾液中のバクテリオフアージの探索は、単離
した細菌を接種した寒天平板二重層培地上に該
濾液を滴下し、静置培養後、濾液の滴下部分に
生じる溶菌斑の有無によつておこなう。
(3) バクテリオフアージ単離
バクテリオフアージの存在が確認された試料
を滅菌生理食塩水等を用いて10〜108倍に希釈
し、該希釈液を寒天培地上に一定量とり、単離
した宿主細菌の培養液と軟寒天との混合物を該
寒天培地上に重層させ、静置培養する。寒天培
地上に生じた溶菌斑から白金線を用いてバクテ
リオフアージを採取し、これを単離した細菌の
培養液に添加した後、培養する。この培養液を
遠心分解し、上澄液をメンブランフイルター等
を用いて濾過することによつてバクテリオフア
ージ含有液を得る。該含有液は滅菌生理食塩水
等を用いて適当に希釈して使用に供される。
(4) バクテリオフアージの溶菌作用と腐敗防止効
果
上記のようにして調製されるバクテリオフア
ージ含有液を、有機物を含有する被処理水性液
に添加すると、バクテリオフアージは該水性液
の腐敗に関与する細菌の細胞内に遺伝子を注入
し、その遺伝子の複製および構成タンパク質の
合成を行わせ、バクテリオフアージの複製を行
わせる。複製されたバクテリオフアージは、細
菌を溶菌することによつて細胞外に放出され
る。従つて、バクテリオフアージを被処理水性
液に一旦添加すれば、その後は添加せずに該水
性液中の腐敗菌の増殖を効果的に抑制し、該水
性液の腐敗を有効に防止することができる。
バクテリオフアージは被処理水性液中の腐敗
菌の種類に応じて複数種類併用するのが有効で
ある。また、バクテリオフアージは従来から常
用されている防腐殺菌剤に対して安定であるの
で、これらと併用してもよい。
バクテリオフアージの添加時期は特に限定的
ではないが、バクテリオフアージは腐敗菌が増
殖期にあるときに一般に最も高い溶菌効果を示
すので、被処理水性液に予め添加しておくか、
使用開始時もしくは使用液の交換時に添加する
のが好ましい。
以下、本発明を実施例によつて説明する。
実施例 １
(1) 細菌の単離と同定
有機物として界面活性剤、防錆剤、可溶化
剤、染料、油、高分子等を含有する水性液の腐
敗液から常法に従つてシユードモナスおよびバ
チルス属の腐敗菌を単離した。
これらの細菌の同定は常法に従つて形態、グ
ラム染色、運動性、嫌気条件下での発育、Ｏ−
Ｆテスト等によつて行つた。
(2) バクテリオフアージの探索
濃縮液体培地（肉エキス10ｇ、ペプトン20
ｇ、塩化ナトリウム10ｇ、精製水１；PH7.0）
100mlおよび腐敗菌の前培養液［該細菌を液体
培地（肉エキス５ｇ、ペプトン10ｇ、塩化ナト
リウム５ｇ、精製水１；PH7.0）中で一夜振
盪培養（120回／分、振幅20mm）後の培養液］
0.67mlを500mlの振盪フラスコ内に入れ、30℃
で４時間振盪培養を行つた（120回／分、振幅
70mm）。
この培養液に、バクテリオフアージを含有す
ると考えられる腐敗液（有機物として界面活性
剤、防錆剤、可溶化剤、染料、油、高分子等を
含有する水性液の腐敗液）を100ml添加し、同
一条件下で一夜振盪培養した。この培養液を５
℃で10分間の遠心分離処理（10000rpm）に付
し、上澄液をメンブランフイルター（0.45μｍ）
を用いる濾過処理に付した後、滅菌試験管に採
取した。
この濾液を寒天平板二重層培地［液体培地に
寒天５ｇを添加して加温溶解した軟寒天培地３
mlと上記の腐敗菌の前培養液0.5mlを混合し、
これを、液体培地に寒天15ｇを添加した普通寒
天培地上に流した後、凝固させた培地］の上に
滴下し、30℃で一夜静置培養後の溶菌斑の有無
によつてバクテリオフアージを探索した。
(3) バクテリオフアージの単離
バクテリオフアージの存在が確認された試料
を滅菌生理食塩水を用いて108倍まで希釈し、
該希釈液１mlを腐敗菌の前培養液0.5mlおよび
軟寒天培地３mlと混合し、これを普通寒天培地
上で凝固させた後、30℃で一夜静地培養を行つ
た。生じた斑点（プラーク）に白金線を穿刺し
て採取した試料を滅菌生理食塩水５mlに懸濁さ
せ、これを再び同様な方法によつて105倍まで
希釈し、バクテリオフアージのプラークを発生
させた。
(4) バクテリオフアージ含有液の調製
液体培地10mlに宿主菌の前培養液１mlを加
え、30℃で４時間振盪培養（120回／分、振幅
20mm）を行つた後、上記のバクテリオフアージ
のプラークを白金線を用いて採取して懸濁させ
た。この懸濁液を同一の振盪条件下で一夜培養
させた後、５℃で10分間の遠心分離処理
（10000rpm）に付し、上澄液をメンブランフイ
ルター（0.45μｍ）を用いる濾過処理に付すこ
とによつてバクテリオフアージ含有液を調製し
た。該含有液は滅菌試験管に採取し、４℃で保
存した。
シユードモナス属の腐敗菌およびバチルス属
の腐敗菌に対応するバクテリオフアージ数はそ
れぞれ8.9×109pfu／mlおよび3.5×109pfu／ml
であつた（バクテリオフアージ数の測定は、バ
クテリオフアージ含有液を上記のようにして滅
菌生理食塩水で希釈し、これを寒天平板二重層
培地上において、30℃で一夜培養することによ
つて形成されるプラークの係数によつて行つ
た。）
(5) バクテリオフアージの溶菌活性試験
500mlの振盪フラスコ内に溶体培地150ml、腐
敗菌の前培養液１mlおよび腐敗菌を溶菌するバ
クテリオフアージ含有液１mlを入れ、30℃で振
盪培養を行い（120回／分、振幅70mm）、経時的
に試料を採取し、650nmにおける吸光度を測定
した。この場合、比較のためにバクテリオフア
ージ含有液を添加しない試料についての吸光度
も経時的に測定した。
なお試験開始時におけるシユードモナス属お
よびバチルス属の腐敗菌の生菌数はそれぞれ
1.4×107cfu／mlおよび1.8×106cfu／mlであつ
た。
測定結果を第１図に示す。図中、ａおよび
a′はそれぞれシユードモナス属の腐敗菌に対応
するバクテリオフアージ含有液を添加した場合
および該含有液を添加しない場合を示し、ｂお
よびb′はそれぞれバチルス属の腐敗菌に対応す
るバクテリオフアージ含有液を添加した場合お
よび該含有液を添加しない場合を示す。
(6) バクテリオフアージの添加による腐敗防止試
験
有機物として、界面活性剤、防錆剤、可溶化
剤、染料、油、高分子等を約２重量％含有する
水性液（１／10濃度液体培地添加）100mlを滅
菌後、前記の二種の腐敗菌の前培養液とそれぞ
れの腐敗菌を溶菌するバクテリオフアージ含有
液を１mlづつ添加した。この水性液を30℃で10
日間保存しても腐敗臭はほとんど検出されなか
つた。
一方これらのバクテリオフアージ含有液を添
加しない場合には、該水性液は30℃で１日間保
存すると腐敗臭が検出されるようになり、３日
間保存すると刺激の強い腐敗臭が検出された。
実施例 ２
生分解性試験
振盪フラスコ（500ml）にマシン油5.0244ｇ、
１／10の濃度の液体培地100ml、実施例１の(6)と
同様、二種の腐敗菌の前培養液とそれぞれの菌を
溶菌するバクテリオフアージ含有液（実施例１で
調製したもの）を１mlずつ添加し、30℃、120
回／分で10日間振盪培養することによりマシン油
の腐敗試験を行つた。対照試験として、バクテリ
オフアージ含有液を添加していないものについて
も同様に行つた。
マシン油の抽出には、ｎ−ヘキサン200mlを使
用し、抽出液に活性化した無水硫酸ナトリウム50
ｇを脱水剤として加えた。この抽出液を室温で減
圧蒸留し、溶媒を除去後精秤することにより腐敗
試験後のマシン油の重量を測定した。
酸価の測定は、溶媒を除去した試料の一定量を
エタノールベンゼン（１：１）に溶かし、フエノ
ールフタレインを指示薬として１／10N水酸化カ
リウム溶液で滴定した。
ガスクロマトグラフ（Shimadzu model GC−
4CM）の操作条件は次の通りである。
検出器および注入口温度：320℃、カラム温
度：300℃、カラムの長さ：１ｍ、カラムの内
径：３mm、窒素流量：40ml／分、充填剤：
Silicone GE SE−30 60〜80mesh 10％、検出
器：FID。
結果を第１表、第２表および第２図に示す。第
１表からも明らかなように、バクテリオフアージ
含有液を添加することにより、マシン油の減量の
度合には10倍以上の効果が認められた。これは、
バクテリオフアージ含有液の添加により細菌が溶
菌され、そのため生分解がほとんど起こらなかつ
たためだと判断される。
また、第２表の酸価をみても、バクテリオフア
ージ含有液を添加したものは、酸価にはまつたく
変化が認められなかつた。しかし、バクテリオフ
アージ含有液を添加していないものは、酸価が
0.05から0.11に増大した。これは、マシン油中の
アルカン等が腐敗によりβ酸化等を受けカルボン
酸等になつたためだと考えられる。
第２図に、マシン油にバクテリオフアージ含有
液を添加しないで10日間腐敗試験した前後に抽出
したマシン油のガスクロマトグラフによる分析結
果を示す。マシン油にバクテリオフアージ含有液
を添加して10日間振盪培養した後のものは、元の
マシン油とまつたく同じクロマトグラムを示し
た。
INDUSTRIAL APPLICATION FIELD This invention relates to a method for preventing spoilage of organic substance-containing aqueous liquids, such as water-soluble cutting and grinding fluids, paint mist treatment agents, and water-soluble cleaning agents. Summary of the Invention The present invention provides a method for preventing spoilage of an aqueous treatment solution by adding a bacteriophage having lytic activity against bacteria involved in the spoilage of the treatment solution. This can be effectively prevented. Conventional Technology Conventionally, antiseptic disinfectants such as triazine-based compounds and isothiazoline-based compounds have been used to prevent bacterial deterioration of aqueous processing agents such as water-soluble cutting and grinding fluids, paint mist processing agents, and water-soluble cleaning agents. Generally, a method is adopted in which the additive is added to the processing agent at any time before and/or after its use. However, adding large amounts of this type of preservative and disinfectant can cause skin roughness and inflammation of the mucous membranes of the eyes and nasal passages for workers, so it is important to use a sufficient amount to effectively prevent decomposition and deterioration. There is a problem from a hygiene perspective. For this reason, the reality is that after spoilage has occurred, a preservative and fungicide is added as needed at a concentration of several hundred ppm. Furthermore, if the same type of preservative and fungicide is used continuously, bacteria resistant to the agent will appear, making it impossible to effectively prevent spoilage. Furthermore, in the case of water-soluble cutting and grinding fluids, aeration treatment may be performed. This method suppresses the growth of anaerobic bacteria, thereby suppressing the generation of hydrogen sulfide, etc., but the problem is that aerobic bacteria grow, making oil components such as lubricants and surfactants more susceptible to biodegradation. There is. Problems to be Solved by the Invention The present invention aims to provide a method that can effectively prevent this type of aqueous treatment agent from rotting and deteriorating without using chemicals such as preservatives and disinfectants that pose problems in terms of work hygiene. It has been done. Means for Solving the Problems That is, the present invention relates to a method for preventing spoilage of an aqueous treatment agent, which is characterized by adding to an aqueous treatment agent a bacteriophage having bacteriolytic activity against bacteria involved in the spoilage of the treatment agent. . Hereinafter, basic unit operations for carrying out the present invention will be explained. (1) Isolation and identification of bacteria involved in the putrefaction of aqueous liquids to be treated containing organic matter. Isolate bacteria from colonies. Isolated bacteria may be identified by conventional methods such as morphology, Gram staining, motility, growth under anaerobic conditions, and O-F test. Since many bacteria involved in the spoilage of common organic matter-containing aqueous liquids have already been isolated and identified in the art, this unit operation can be easily carried out. This type of bacteria is Escherichia coli (Escherichia
coli), Klebsiella pneumoniae,
Paracolobactrum sp., Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas oleovorans
oleovorans), Pseudomonas sp., Salmonella typhosa, Staphylococcus aureus, Desulfovibrio
desulfuricans), sulfate-reducing bacteria species (Desulfovibrio
sp.), Bacillus subtillis, and Bacillus sp.. (2) Search for bacteriophages It is convenient to search for bacteriophages that lyse isolated bacteria using an indirect method. Appropriate liquid medium (e.g., aqueous medium containing meat extract, peptone, sodium chloride, etc.)
A culture solution of the isolated bacteria is added to the culture solution with shaking, and then a putrefactive solution of the aqueous liquid to be treated, which is thought to contain bacteriophage, is added to the culture solution and cultured with shaking. This culture solution is centrifuged, and the supernatant is subjected to filtration using a membrane filter or the like. The search for bacteriophage in the filtrate is carried out by dropping the filtrate onto an agar plate double-layer medium inoculated with isolated bacteria, and after standing culture, checking for the presence or absence of lytic spots that appear in the area where the filtrate has been dropped. (3) Isolation of bacteriophage A sample in which the presence of bacteriophage has been confirmed is diluted 10 to 108 times using sterile physiological saline, etc., and a certain amount of the diluted solution is placed on an agar medium for isolation. A mixture of the culture solution of the host bacteria and soft agar is layered on the agar medium and cultured stationary. Bacteriophages are collected using a platinum wire from the lytic spots formed on the agar medium, added to the culture solution of the isolated bacteria, and then cultured. This culture solution is centrifuged and the supernatant solution is filtered using a membrane filter or the like to obtain a bacteriophage-containing solution. The containing liquid is appropriately diluted with sterile physiological saline and the like before use. (4) Bacteriophage lytic action and spoilage prevention effect When the bacteriophage-containing liquid prepared as described above is added to an aqueous liquid to be treated containing organic matter, bacteriophage will inhibit the putrefaction of the aqueous liquid. A gene is injected into the cells of the bacteria involved, causing replication of the gene and synthesis of constituent proteins, and replication of the bacteriophage. The replicated bacteriophages are released outside the cell by lysing the bacteria. Therefore, once bacteriophage is added to the aqueous liquid to be treated, the growth of spoilage bacteria in the aqueous liquid can be effectively inhibited without adding it thereafter, and the spoilage of the aqueous liquid can be effectively prevented. I can do it. It is effective to use multiple types of bacteriophage in combination depending on the type of putrefactive bacteria in the aqueous liquid to be treated. Furthermore, since bacteriophages are stable against commonly used preservatives and disinfectants, they may be used in combination with these. The timing of adding bacteriophage is not particularly limited, but since bacteriophage generally exhibits the highest lytic effect when spoilage bacteria are in the growth phase, it may be added to the aqueous liquid to be treated in advance, or
It is preferable to add it at the beginning of use or when replacing the working liquid. Hereinafter, the present invention will be explained with reference to Examples. Example 1 (1) Isolation and identification of bacteria Pseudomonas and Bacillus were isolated from a putrid aqueous liquid containing organic substances such as surfactants, rust preventives, solubilizers, dyes, oils, and polymers according to a conventional method. We isolated rotten fungi of the genus. These bacteria were identified using conventional methods based on morphology, Gram staining, motility, growth under anaerobic conditions, O-
This was done by F test etc. (2) Search for bacteriophage Concentrated liquid medium (meat extract 10g, peptone 20g
g, sodium chloride 10g, purified water 1; PH7.0)
100 ml and a preculture of spoilage bacteria [after culturing the bacteria overnight with shaking (120 times/min, amplitude 20 mm) in a liquid medium (5 g of meat extract, 10 g of peptone, 5 g of sodium chloride, 1 part of purified water; PH7.0) Culture solution]
Pour 0.67ml into a 500ml shake flask and heat at 30°C.
Shaking culture was performed for 4 hours at (120 times/min, amplitude
70mm). To this culture solution, add 100 ml of a putrid liquid that is thought to contain bacteriophages (an aqueous putrid liquid containing organic substances such as surfactants, rust preventives, solubilizers, dyes, oils, and polymers). , and incubated with shaking overnight under the same conditions. Add this culture solution to 5
Centrifuge for 10 minutes at ℃ (10,000 rpm) and filter the supernatant through a membrane filter (0.45 μm).
After being subjected to filtration treatment using This filtrate was transferred to an agar plate double layer medium [soft agar medium 3 in which 5 g of agar was added to a liquid medium and dissolved by heating.
ml and 0.5ml of the above spoilage bacteria preculture solution,
This was poured onto an ordinary agar medium prepared by adding 15 g of agar to a liquid medium, and then dripped onto the solidified medium. After standing overnight at 30°C, bacteriophage was determined by the presence or absence of lytic plaques. explored. (3) Isolation of bacteriophage A sample in which the presence of bacteriophage was confirmed was diluted up to 10 times with sterile physiological saline.
1 ml of the diluted solution was mixed with 0.5 ml of the preculture of the putrefaction bacteria and 3 ml of soft agar medium, solidified on the normal agar medium, and then statically cultured overnight at 30°C. A sample collected by puncturing the resulting plaque with a platinum wire was suspended in 5 ml of sterile physiological saline, and diluted to 105 times using the same method again to generate bacteriophage plaques. I let it happen. (4) Preparation of bacteriophage-containing solution Add 1 ml of host bacteria preculture solution to 10 ml of liquid medium, and culture with shaking at 30°C for 4 hours (120 times/min, amplitude
20 mm), the bacteriophage plaques described above were collected using a platinum wire and suspended. After culturing this suspension overnight under the same shaking conditions, it was centrifuged at 5°C for 10 minutes (10,000 rpm), and the supernatant was filtered using a membrane filter (0.45 μm). A bacteriophage-containing solution was prepared by. The containing liquid was collected into a sterile test tube and stored at 4°C. The bacteriophage numbers corresponding to Pseudomonas and Bacillus spoilage bacteria are 8.9×10 9 pfu/ml and 3.5×10 9 pfu/ml, respectively.
(The number of bacteriophage was measured by diluting the bacteriophage-containing solution with sterile physiological saline as described above, and culturing it overnight at 30°C on a double layer agar medium. (5) Lytic activity test of bacteriophage In a 500 ml shaking flask, add 150 ml of solution medium, 1 ml of preculture of spoilage bacteria, and bacteriophage to lyse spoilage bacteria. 1 ml of the containing solution was added, cultured with shaking at 30°C (120 times/min, amplitude 70 mm), samples were collected over time, and the absorbance at 650 nm was measured. In this case, for comparison, the absorbance of a sample to which no bacteriophage-containing solution was added was also measured over time. The viable counts of Pseudomonas and Bacillus spoilage bacteria at the start of the test were
They were 1.4×10 7 cfu/ml and 1.8×10 6 cfu/ml. The measurement results are shown in Figure 1. In the figure, a and
a′ indicates the case where a solution containing a bacteriophage corresponding to a spoilage bacterium of the genus Pseudomonas is added and the case where the solution containing the bacteriophage is not added, respectively; b and b′ each indicate a case containing a bacteriophage corresponding to a spoilage bacterium of the genus Bacillus. The case where the liquid is added and the case where the containing liquid is not added are shown. (6) Putrefaction prevention test by addition of bacteriophage Aqueous liquid (1/10 concentration liquid medium Addition) After sterilizing 100 ml, 1 ml each of the above-mentioned preculture solution of the two types of spoilage bacteria and a solution containing bacteriophage for lysing each spoilage bacteria were added. This aqueous solution was heated at 30℃ for 10
Almost no putrid odor was detected even after storage for several days. On the other hand, when these bacteriophage-containing solutions were not added, a putrid odor was detected when the aqueous solution was stored at 30°C for 1 day, and a strong putrid odor was detected when stored for 3 days. Example 2 Biodegradability test 5.0244 g of machine oil in a shake flask (500 ml),
100 ml of a liquid medium with a concentration of 1/10, as in (6) of Example 1, a preculture solution of two types of putrefaction bacteria and a bacteriophage-containing solution for lysing each bacteria (prepared in Example 1) Add 1 ml of
A machine oil spoilage test was performed by incubating with shaking at 10 times/min for 10 days. As a control test, a sample to which no bacteriophage-containing solution was added was also conducted in the same manner. To extract machine oil, use 200 ml of n-hexane and add 50 ml of activated anhydrous sodium sulfate to the extract.
g was added as a dehydrating agent. This extract was distilled under reduced pressure at room temperature, and after removing the solvent, it was accurately weighed to measure the weight of the machine oil after the putrefaction test. To measure the acid value, a certain amount of the sample from which the solvent had been removed was dissolved in ethanol benzene (1:1) and titrated with a 1/10N potassium hydroxide solution using phenolphthalein as an indicator. Gas chromatograph (Shimadzu model GC−
4CM) operating conditions are as follows. Detector and inlet temperature: 320℃, Column temperature: 300℃, Column length: 1m, Column inner diameter: 3mm, Nitrogen flow rate: 40ml/min, Packing material:
Silicone GE SE−30 60~80mesh 10%, Detector: FID. The results are shown in Table 1, Table 2, and Figure 2. As is clear from Table 1, the addition of the bacteriophage-containing liquid was more than 10 times more effective in reducing the amount of machine oil. this is,
It is considered that this is because the bacteria were lysed by the addition of the bacteriophage-containing solution, and therefore almost no biodegradation occurred. Also, looking at the acid values in Table 2, no significant change was observed in the acid values of the samples to which the bacteriophage-containing solution was added. However, those without added bacteriophage-containing liquid have a low acid value.
Increased from 0.05 to 0.11. This is thought to be because alkanes and the like in the machine oil undergo β-oxidation and other processes due to decay and become carboxylic acids and the like. Figure 2 shows the results of gas chromatography analysis of machine oil extracted before and after a 10-day spoilage test without adding a bacteriophage-containing liquid to the machine oil. After adding the bacteriophage-containing solution to machine oil and culturing it with shaking for 10 days, it showed exactly the same chromatogram as the original machine oil.
【表】【table】
【表】
発明の効果
本発明によれば、水性処理剤の腐敗劣化を、作
業衛生上問題のある防腐殺菌剤等の薬剤の代り
に、自然界に既存のバクテリオフアージを使用す
ることによつて有効に防止することができる。
本発明に使用するバクテリオフアージは特定の
細菌のみを選択的特異的に攻撃して死滅させるだ
けで人畜無害であり、二次的公害をもたらすこと
もない。
従つて、本発明は、水性処理剤（例えば、水溶
性切削研削油剤、塗料ミスト処理剤、水溶性洗浄
剤等）以外にも種々の分野で使用される有機物含
有水性液、例えば界面活性剤、塗料、防錆液、冷
却水、接着剤、糊料、ラテツクス、分散剤、イン
ク、消火剤、高分子等の腐敗防止に適用できる。[Table] Effects of the Invention According to the present invention, the decomposition and deterioration of aqueous treatment agents can be prevented by using bacteriophage existing in the natural world instead of agents such as preservatives and disinfectants that pose problems in terms of work hygiene. It can be effectively prevented. The bacteriophages used in the present invention selectively and specifically attack and kill only specific bacteria, and are harmless to humans and animals, and do not cause secondary pollution. Therefore, in addition to aqueous treatment agents (e.g., water-soluble cutting and grinding fluids, paint mist treatment agents, water-soluble cleaning agents, etc.), the present invention also applies to organic substance-containing aqueous liquids used in various fields, such as surfactants, It can be applied to prevent corrosion of paints, anti-rust liquids, cooling water, adhesives, pastes, latex, dispersants, inks, fire extinguishers, polymers, etc.
【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]
第１図はバクテリオフアージの溶菌活性試験の
結果を示すグラフである。ａおよびa′はそれぞれ
シユードモナス属の腐敗菌に対応するバクテリオ
フアージ含有液を添加した場合および該含有液を
添加しない場合を示し、ｂおよびb′はそれぞれバ
チルス属の腐敗菌に対応するバクテリオフアージ
含有液を添加した場合および該含有液を添加しな
い場合を示す。第２図は腐敗試験前後の水溶性切
削研削油剤中のマシン油成分（ｎ−ヘキサン抽出
分）のガスクロマトグラムである。ｃはバクテリ
オフアージ含有液を添加した水溶性切削研削油剤
からｎ−ヘキサン抽出して得たマシン油成分のク
ロマトグラム、ｄはバクテリオフアージ含有液を
添加しない水溶性切削研削油剤からｎ−ヘキサン
抽出して得たマシン油成分のクロマトグラムおよ
びｅはマシン油自体のクロマトグラムを示す。
FIG. 1 is a graph showing the results of a bacteriophage lytic activity test. a and a' indicate the case where a solution containing bacteriophage corresponding to the spoilage bacteria of the genus Pseudomonas is added and the case where the solution is not added, respectively, and b and b' respectively indicate the case where the solution containing bacteriophage corresponding to the spoilage bacteria of the genus Bacillus is added. A case where an arge-containing liquid is added and a case where the liquid containing an arge is not added are shown. FIG. 2 is a gas chromatogram of the machine oil component (n-hexane extract) in the water-soluble cutting and grinding fluid before and after the rot test. c is a chromatogram of machine oil components obtained by n-hexane extraction from a water-soluble cutting and grinding fluid containing a bacteriophage-containing solution, and d is n-hexane extracted from a water-soluble cutting and grinding fluid without a bacteriophage-containing solution. The chromatogram of the machine oil component obtained by extraction and e shows the chromatogram of the machine oil itself.