JPH04149197A

JPH04149197A - 新規ペプチド

Info

Publication number: JPH04149197A
Application number: JP2274668A
Authority: JP
Inventors: Masatomo Mori; 昌朋森; Masami Murakami; 村上　正己
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1990-10-12
Filing date: 1990-10-12
Publication date: 1992-05-22
Also published as: CA2050046A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔技術分野〕本発明は新規ペプチドに関する。

［従来技術］バセドウ病などの甲状腺機能亢進症は、甲状腺細胞の過
形成により甲状腺がびまん性ないし結節性に腫大し、甲
状腺ヨード摂取率が上昇するなどの現象を示し、甲状腺
ホルモンの合成が高まることによって、血中へのホルモ
ン過剰分泌による基礎代謝の亢進がおこり、発汗、頻脈
、心悸亢進、手指振戦や体重減少など甲状腺中毒症の所
見を呈する疾患である。

この原因として、上記のよ・うな所見がいずれも甲状腺
が刺激された状態にあることを示していることから、甲
状腺刺激作用を有する物質の関与可能性が早くから考え
られ、当初は甲状腺刺激ホルモン（Ｔｈｙｒｏｉｄ　　
Ｓ　ｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　　Ｈｏｒｍｏｎｅ　：　Ｔ
　ＳＨ）分泌過剰が有力視されたものの患者血中のＴＳ
Ｈ濃度がかえって低いことにより否定された。

１９５６年に至って、Ａ　ｄａｍｓらが患者血中にＴＳ
Ｈとは異なる甲状腺刺激物質が存することを明らかにし
たことをきっかけに、研究が進み、現在では甲状腺刺激
物質はＴＳＨ受容体に対する抗体であり、甲状腺機能亢
進症は患者の自己抗体にもとづく受容体異常症と考えら
れている。

また、甲状腺機能異常疾患である新生児甲状腺機能低下
症などにおいても、自己受容体抗体が存在することが証
明されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、かかる甲状腺機能異常疾患の原因とな
る受容体抗体を結合し、これを囚便に検出しうる新規ペ
プチドを提供しようとするものである。

（課題を解決するだめの手段〕本発明は、少なくとも次式（１）または（Ｉｔ）で示さ
れるアミノ酸配列を有するペプチドまたはその塩、及び
それを抗原とする甲状腺機能異常疾患の診断剤である。

Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ　−Ｐｈｅ−
Ａｒｇ　−Ｖａｌ　−Ｔｈｒ　−Ｃｙｓ　−Ｌ　ｙｓ　
−Ａｓｐ　−１１ｅ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａｒｇ　−１１ｅ
　−Ｐｒｏ−３ｅｒ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ　
−３ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ　　　（Ｉ）Ｌｅｕ
−Ａｒｇ　−Ｇ］、ｎ−Ａｒｇ　−Ｌｙｓ　−Ｓｅｒ　
−Ｖａｌ　−Ａｓｎ　−Ａｌａ　−Ｌｅｕ　−Ａｓｎ　
−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　−Ｌｅｕ　−Ｈｌｓ−Ｃｈｉｎ−
Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−ＡｓｎＬｅｕ　−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ　−Ｓｅｒ　−１１ｅ　−Ｖａｌ　−Ｇｌ
ｙ　−Ｔｙｒ　　　　　　　　　　　　　（Ｉｆ）本発
明のペプチドは、遊離であってもよいが、例えば、塩酸
塩、硫酸塩、燐酸塩などの無機酸付加塩、酢酸塩、クエ
ン酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、蓚酸塩、メタンスルホ
ン酸塩などの有機酸付加塩であってもよい。更にはナト
リウム塩、カリウム塩、トリエチルアミン塩などの塩基
性塩であっても好適に用いることができる。また、本発
明のペプチドは、式（１）又は（ＩＩ）で示されるアミ
ノ酸配列を有しておればよく、Ｎ末端に他のアミノ酸、
例えば、Ｌ−チロシンが結合していてもよく、また、ア
ミノ基、カルボキシル基、イミノ基、水酸基等の官能基
が保護されていてもよい。

本発明のペプチドは、液相法及び固相法など、ペプチド
化学において通常用いられる方法、例えば、５ｃｈｒｏ
ｄｅｒ　ａｎｄ　Ｌｕｂｋｅ著「ザ　ペプチド（Ｔｈｅ
Ｐｅｐｉｄｅｓ）　」第−巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒ
ｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、Ｕ。

Ｓ、Ａ、　（１９６５年）、泉屋信夫ら著「ペプチド合
成の基礎と実験」丸善＠　（１９８５年）などに記載さ
れている方法によって製造することができる。

ペプチド結合を形成するための縮合方法は特に限定され
ず、活性エステル法、カルボニルジイミダゾール法、ア
ジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法
、Ｎ、Ｎ’　−ジシクロへキシルカルボジイミド法、Ｎ
、Ｎ’　−ジシクロヘキシルカルボジイミド−アディテ
ィブ法などのほか、酸化還元法、ウッドワード試薬を用
いる方法など、種々の方法を採用することができる。

カルボキシル基の保護基としては、例えば、メチル、エ
チル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｔ−ブチル、シ
クロヘキシル等のエステルを挙げることができ、アミノ
基の保護基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニ
ル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、イソボルニルオキシ
カルボニル基９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
基等を挙げることができる。

保護基の離脱方法としては、例えば、塩化水素、臭化水
素、無水フッ化水素、メタンスルホン酸トリフルオロメ
タンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、又は、これらの混
合物等による酸処理、水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム、ヒドラジン、ジエチルアミン、ピペリジン等による
塩基処理、及び、液体アンモニア中ナトリウム、パラジ
ウム炭素による還元等が挙げられる。上記酸処理による
脱保護基反応においては、アニソール、フェノール、チ
オアニソールの如きカチオン捕捉剤の添加が有効である
。

また、固相法で合成したペプチドの樹脂からの切断方法
としては、無水フッ化水素、臭化水素、トリフルオロ酢
酸等による酸処理が挙げられる。

かくして得られた本発明のペプチドは、反応終了後、そ
れ自体公知のペプチドの分離手段、例えば、抽出、分配
、再沈澱、再結晶、カラムクロマトグラフィー等によっ
て取得することができる。

また、本発明のペプチドは、それ自体公知の方法により
、前記の如き塩とすることができる。

本発明のペプチドは、甲状腺機能異常疾患を有する患者
、例えば、異常腺機能光進症患者の血清中に存在する抗
体と特異的に反応するので、公知の各種イムノアッセイ
法に適用して、甲状腺機能異常疾患の診断に使用するこ
とができる。

かかるイムノアッセイ法としては、例えば−元免疫拡散
法、定量免疫電気泳動法、交差免疫電気泳動法、ラテッ
クス凝集法、レーザーネフェロメトリー法、ラジオイム
ノアッセイ法、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、ウェ
スタンブロッティング法、サンドインチ法、ゲル拡散免
疫測定法、ゲル拡散沈降法、蛍光イムノアッセイ法など
があげられる。

これらのイムノアッセイ法においては、抗原として、本
発明のペプチドを使用すればよく、例えば、−元免疫拡
散法においては、甲状腺機能亢進症が疑われる被検者の
血清をアガロースゲル平板内に適当な濃度となるよう含
有させ、ついで本発明のペプチドを適当量加えることに
より形成される沈降輪の面積を測定することにより、定
量を行うことができる。

また、定量免疫電気泳動法によるときは、上記−元免疫
拡散法において本発明のペプチドを加えたのち両端に電
位差を与え、ペプチドを移動させて抗体との沈降線を形
成させることにより、実施することができる。

更にラテックス凝集法によるときは、微細なラテックス
粒子に本発明のペプチドを結合させて甲状腺機能亢進症
の抗体に感作させることにより、ラテックス粒子の凝集
が起こるので、これを例えば光学的に測定することによ
り、抗体の測定が可能となる。

レーザーネフェロメトリー法によるときは、液相中で被
検血漿に本発明のペプチドを作用させて、不溶性の抗原
抗体複合体粒子を形成させ、この反応系に光を照射して
、散乱光を検知することによって測定することができる
。

ラジオイムノア・ンセイ法によるときは、放射性同位元
素により本発明のペプチドを標識し、抗体と反応させ、
反応生成物の放射活性を測定することにより、抗体を測
定することができる。なお、標識を容易にするためには
、Ｎ末端にＬ−チロシンが結合しているペプチドを用い
るのが好ましい。

酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）によれば、アルカリフ
ォスファターゼ、ペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダ
ーゼなどの酵素を本発明のペプチドに結合させて標識し
て使用することにより、抗体の測定を行うことができる
。

更にまた、本発明のペプチドは、免疫反応を生起させう
るに適した媒体を構成するための試薬、免疫反応によっ
て生しる抗原抗体複合体を検出するだめの試薬などと組
み合わせて、所謂、インビトロ診断に使用するためのキ
・、トにも好適に使用しうるものである。

以下、本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれら
に限定されるものではない。

なお、本明細書において、アミノ酸、保護基を略号で表
す場合には、当該技術分野で慣用されている略号、或い
は、Ｉ　ＵＰＡＣ−Ｉ　ＬＩＢの命名委員会で採用され
た下記の略号を使用している。また、光学活性を示さな
い場合アミノ酸はＬ型を意味するものとする。

Ａｓｐ　　　　：アスパラギン酸Ａｓｎ　　　　：アスパラギンＡｒｇ　　　　：アルギニンＣｙｓ　　　　ニジスティンＧｕ　　　：グルタミン酸Ｏｎ　　　＝グルタミンｃｒｙ　　　　ニゲリシンＨｉｓ　　　　：ヒスチジンｌｉｅ　　　　：イソロイシン１、ｅｕ　　　　：ロイシンＬ、３　　　、リジンＰｈｅ　　　　：フェニルアラニンＰｒｏ　　　　ニブロリンＳｅｒＴｈｒｙｒＶａｌＢｏａ実施例１アミノ酸配列（１）の合成。

（１）ペプチド合成装置（アプライトノ何オシステムズ
社製、モデル４３１Ａ）を使用し、ＨＯＢ　ｔ／ＤＣＣ
活性化法を用いたＢｏｃ固相合成法によって合成した。

アブライドハイオシステムズ社から市販されている０、
５ｍｍｏｌｅのＮ−Ｂｏｃ−０−ベンジル−しスレオニ
ンを導入した４−（オキシメチル）−フェニルアセトア
ミドメチル（スチレン共重合１％ジビニルベンゼン）樹
脂に、以下の保護アミノ酸：スレオニン：チロシン：バリン：ｔ−ブトキシカルボニルオキシ：セリン（アブライドハイオシステムズ社又はペプチド研究所か
ら市販）　２．０　ｍｍｏｌｅ　　を順に縮合反応させ
て、保護基を有するペプチド（１）を得る。

Ｎ−ｒｘ−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン、Ｎ−Ｂｏｃ−０ベ
ンジル−し−スレオニン、Ｎ−Ｂｏｃ−０−ベンジル−
し−ヘンシル−Ｌ−セリン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリン
、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシ
ン、Ｎ−Ｂｏｃ−０−ベンジル−Ｌセリン、Ｎ−Ｂｏｃ
−Ｌ−プロリン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−イソロイシン、Ｎ−
α−Ｂｏｃ−Ｎ’　　　）シル−し一アルギニン、Ｎ−
α−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−イソロ
イシン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌアスパラギン酸−β−ベンジル
・エステル、Ｎα−Ｂｏａ−Ｎ−ε−（２−クロロベン
ジルオキシカルボニル）−Ｌ−リジン、Ｎ−Ｂｏｃ−３
−４−メチルベンジル−し−システィン、Ｎ−Ｂｏｃ−
Ｏ−ベンジル−し−スレオニン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−バリ
ン、Ｎ−α−Ｂｏｃ−Ｎ’−トシルーＬ−アルギニン、
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−
アスパラギン酸−β−ベンジル・エステル、Ｎ−Ｂｏａ
−Ｌ−グルタミン酸−γ−ベンジル・エステル、Ｎ−Ｂ
ｏａ−Ｌ−グルタミン酸−γ−ヘンシル・エステル、Ｎ
−α−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン、Ｎ−ａ−Ｂｏｃ−Ｌ−
Ｎ−ｙｔ　−ヘアジルオキシメチル−Ｌ−ヒスチジン。

（２）上記で得られた保護基を有するペプチド樹脂０．
５ｇ　ヲアニソール０．７５−およびエチルメチルスル
フィド０．１３　ｍのと共に液状ＨＦ６ｒｄ中、２０°
Ｃで３０分間処理し、ついでＯ″Ｃで３０分間処理する
。

ＨＦを減圧下に蒸発させたのち、樹脂を冷無水エーテル
で洗浄する。次いでトリフルオロ酢酸１０ｉを使用して
ペプチドを溶解し樹脂から回収する。トリフルオロ酢酸
を蒸発させた後、装置を２Ｎ酢酸水溶液にン容解し、凍
結真空乾燥して粗ペプチドを得、この内の一部を０．１
χ　トリフルオロ酢酸水溶液に溶解して、マイクロボン
ダスフェア−（日本ウォーターズ社製、１５μ　Ｃｌ８
）１．９Ｘ　３０　ａｍＯカラムに吸着させ、アセトニ
トリル濃度をＯから６０χまで直線的に変化させつつ毎
分８−の速度で送液を行う。２２Ｏｒ＋ｍの紫外吸収に
より検出される主ペプチドビークを含む流出液（１０〜
１５ｄ）を集め、凍結真空乾燥することにより、ペプチ
ド２０ｍｇを得る。

得られたペプチドの配列が、Ｈ１ｓ−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　ｌｕ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａｓｐ
　−Ｐｈｅ　−Ａｒｇ　−Ｖａｌ−Ｔｈｒ　−Ｃｙｓ　
−Ｌｙｓ−Ａｓｐ　−１１ｅ　−Ｇｌｎ　−Ａｒｇ　−
１１ｅ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｒ　−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−
Ｐｒｏ　−３ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｇｉｎ−Ｔｈｒであることは、自動エドマン分解法により確認した。

また、このペプチドのアミノ酸組成分析を行ったところ
、下記の通り、理論値によく一致する結果が得られた。

アミノ酸分析（加水分解条件：６ＮＨＣ１，１１０”Ｃ
，２２ｈｒ）Ａｓｐ（２）　２．０２．　Ｔｈｒ（３）２．４８　５
ｅｒ（２）　１．８５Ｇｌｕ（５）　４．９８．　　Ｐ
ｒｏ（３）　３．０４．　　Ｃｙｓ（１）　　ＣＣｙｓ
Ｏ，３５，１／２　Ｃｙｓｔｉｎｅ　Ｏ，５３）　、　
Ｖａｌ（１）　０．７０゜１１ｅ（２）　１．９８．　
　Ｌｅｕ（１）　１．０２．　　Ｐｈｅ（１）　１．０
１゜Ｌ　ｙｓ　（１ン　０．９７．　　　Ｈ１ｓ（１）
　　０．９６．　　　Ａｒｇ（２）　　２．０２゜ＮＨ
３（３）　　３．７５（カッコ内の数値は理論値）実施例２アミノ酸配列（ＩＩ）の合成。

（１）実施例１と同様に、アブライドバイオシステムズ
社製ペプチド合成装置モデル４３１Ａを使用し、ＨＯＢ
ｔ／ＤＣＣ活性化法を用いたＢ。０固相合成法によって
合成した。

アブライドハイオシステムズ社から市販されている０、
５ｍｍｏｌｅのＮ−Ｂｏｃ−０−（２−ブロモベンジル
オキシカルボニル）−Ｌ−チロシンを導入した４−（オ
キシメチル）−フェニルアセトアミドメチル（スチレン
共重合１％ジビニルヘンゼン）樹脂に、以下の保護アミ
ノ酸（アブライドバイオシステムズ社又はペプチド研究
所から市販）２．０＋ｎｍｏｌｅを順に縮合反応させて
、保護基を有するペプチド（ＩＩ）を得る。

Ｎ−Ｂｏｃ−グリシン、Ｎ　　Ｂｏｃ−Ｌ−バリン、Ｎ
−Ｂｏｃ−Ｌ−イソロイシン、Ｎ−Ｂｏｃ−０−ベンジ
ル−Ｌ−セリン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β
−シクロヘキシル・エステル、Ｎ−Ｂｏｃ−グリシン、
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−０イシン、Ｎ−ｃｘ−Ｂｏｃ−Ｌ−ア
スパラギン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミンＭ−ｒ−ベン
ジル・エステル、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌグルタミン酸−γ−ベ
ンジル・エステル、Ｎ−Ｂｏｃ−０−（２’７”ロモヘ
ンジルオキシ力ルボニル）−Ｌ−チロシン、Ｎ−Ｂｏｃ
−Ｌ−グルタミン酸−γ−ヘンシル・エステル、Ｎ−α
−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン、Ｎ−α−Ｂｏｃ−Ｎ−π−
ベンジルオキシメチル−Ｌ−ヒスチジン、Ｎ−Ｂｏｃ−
Ｌ−ロイシン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリン、Ｎ−Ｂｏｃ
−０−ベンジル−Ｌ−セリン、Ｎ−α−Ｂｏｃ−Ｌアス
パラギン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−ロイシン、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ
−アラニン、Ｎ−α−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン、ＮＢ
ｏｃ−Ｌ−バリン、Ｎ−Ｂｏｃ−０−ヘンシル−Ｌ−セ
リン、Ｎ−ｏニーＢｏｃ−Ｎ　−ε−（２−クロロベン
ジルオキシカルボニル）−Ｌ−リジン、Ｎ−ａ−Ｂｏｃ
−Ｎ’　−トシル−Ｌ−アルギニン、Ｎ−ｒｒ−Ｂｏｃ
−Ｌ−グルタミン、Ｎ−α−Ｂｏｃ−Ｎ’　−トシル−
し−アルギニン、Ｎ−Ｂｏｃ−り一ロイシン。

（２）上記で得られた保護基を有するペプチド樹脂０．
５ｇを実施例１と同様に、アニソール０．７５　ｍおよ
びエチルメチルスルフィド０．１３　ｄのと共に液状Ｈ
Ｆ６ｄ中、−２０°Ｃで３０分間処理し、ついで０°Ｃ
で３０分間処理する。

ＨＦを減圧下に蒸発させたのち、樹脂を冷無水エーテル
で洗浄する。次いでトリフルオロ酢酸１０Ｉｄを使用し
てペプチドを溶解し樹脂から回収する。トリフルオロ酢
酸を蒸発させた後、残金を２Ｎ酢酸水溶液に溶解し、凍
結真空乾燥して粗ペプチドを得、この内の一部を０．１
χ　トリフルオロ酢酸水溶液に溶解して、マイクロボン
ダスフェア−（日本ウォーターズ社製、１５μ　Ｃ１Ｂ
）１．９×３０ｃＩｌｌＯカラムに吸着させ、アセトニ
トリル濃度をＯから６０χまで直線的に変化させつつ毎
分８ｉの速度で送液を行う。２２Ｏｎ＋＋＋の紫外吸収
により検出される主ペプチドビークを含む流出液（１０
〜１５ｄ）を集め、凍結真空乾燥することにより、ベブ
チＦ　１５ｍｇを得た。

得られたペプチドの配列が、Ｌｅｕ−Ａｒｇ　−Ｇｉｎ−Ａｒｇ　−Ｌｙｓ　−Ｓｅ
ｒ　−Ｖａｌ　−Ａｓｎ−Ａｌａ　−Ｌｅｕ−Ａｓｎ　
−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　−Ｌｅｕ　−Ｈｌｓ　−Ｇｌｎ　
−Ｃ１ｕ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ−Ａｓｎ　−
Ｌｅｕ　−Ｇａｙ−Ａｓｐ　−Ｓｅｒ　−１１ｅ　−Ｖ
ａｌ　−Ｇｉｙ　−Ｔｙｒであることは、自動エドマン分解法により確認した。

アミノ酸分析（加水分解条件：６ＮＨＣＩ、１１０°Ｃ
，２２ｈｒ）Ａｓｐ（４）　３．９９．　５ｅｔ（３）　２．８０．
　Ｃ１ｕ（５）　４．９．６゜Ｐｒｏ（１）　１．０１
．　　Ｇｌｙ（２）　２．０５．　Ａｌａ（１）　１．
０２Ｖａｌ（２）　１．７２．　７１ｅ（１）　０．９
０．　　Ｌｅｕ（４）　４．０３゜Ｔｙｒ（２）　１．
８８．　Ｈｉｓ（１）　０．９７．　Ｌｙｓ（１）　０
．９６゜Ａｒｇ（２）　　　１．９５．　　　ＮＨ：１
（５）　　　４．９７（カッコ内の数値は理論値）実施例３Ｎ末端アミノ酸原料に、更にＮ−Ｂｏｃ−０−（２−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−チロシンを追加
する以外は、実施例１と同様にして、次のアミノ酸配列
を有するペプチドを得た。

Ｔｒｙ　−Ｈｉｓ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇｌｕ　−Ｇ　ｌｕ
　−Ａｓｐ　−Ｐ　ｈｅ　−Ａｒｇ　−Ｖａｌ　−Ｔｈ
ｒ　−Ｃｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ａｓｐ　−１１ｅ　−Ｇｌ
ｎ−Ａｒｇ−１１ｅ　−Ｐｒｏ　−Ｓｅｔ　−Ｌｅｕ　
−Ｐｒｏ　−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ
無色無定形粉末アミノ酸分析（加水分解条件：６ＮＨＣ１，１１ｅ°Ｃ
，２２ｈｒ）Ａｓｐ（２）　２．０１．　Ｔｈｒ（３）　２．４７．
　５ｅｒ（２）　１．８８゜Ｇｌｕ（５）　４．９４．
　　Ｐｒｏ（３）　３．０９．　　Ｃｙｓ（１）　　（
ＣｙｓＯ，３３，１／２　Ｃｙｓｔｉｎｅ　Ｏ，５５〕
、　　Ｖａｌ（１）　０．９９゜１１ｅ（２）　１．９
５．　　Ｌｅｕ（１）　１．０３．　Ｔｙｒ（１）　０
．９３゜Ｐｈｅ（１）　１．００．　　Ｌｙｓ（１）　
０．９８．　　Ｈｉｓ（１）　０．９８゜Ａｒｇ（２）
　１．９Ｂ、　ＮＨ：１（３）　３．６５（カッコ内の
数値は理論値）実施例４Ｎ末端アミノ酸原料に、更にＮ−Ｂｏｃ−０−（２−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−千０シンを追加
する以外は、実施例キと同様にして、次のアミノ酸配列
を有するペプチドを得た。

Ｔｒｙ　−Ｌｅｕ　−Ａｒｇ　−Ｇｉｎ　−Ａｒｇ　−
Ｌｙｓ　−Ｓｅｒ　−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ａ、１ａ　−Ｌ
ｅｕ−Ａｓｎ　−Ｓｅｒ　−Ｐｒｏ　−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
−Ｃ；Ｉｎ−Ｇｌｕ　　Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｃ；ｌｕ　−
Ａ、ｓｎ　−Ｌｅｕ　−Ｇｌｙ　−Ａｓｐ　−５ｅｒ−
１１ｅ　−Ｖａｌ　−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ無色無定形粉末アミノ酸分析（加水分解条件：６ＮＨＣ１，１１０°Ｃ
１２２ｈｒ）Ａｓｐ（４）　３．９７．　５ｅｒ（３）　２．８２．
　Ｇｌｕ（５）　４．９７゜Ｐｒｏ（１）　０．９９．
　　Ｃ１ｙ（２）　２．００．　Ａｌａ（１）　１．０
１゜Ｖａｌ（２）　１．７０．　　Ｉ　１ｅ（１）　０
．６９．　　Ｌｅｕ（４）　４．０５Ｔｙｒ（３）　２
．８４．　Ｈｉｓ（１）　０．９８．　Ｌｙｓ（１）　
０．９８゜Ａｒｇ（２）　１．９７．　ＮＨ３（５）　
４．９８（カッコ内の数値は理論値）実験例１（１）実験方法 ■標識化ペプチドの調製実施例で得たＮ末端にＬ−チロシンを有するペプチド（
１）および（ＩＩ）１０ｔＩｇを用い、クロラミンＴ法
により、０．５ｍＣ１のＮａ１２５１テ放射ヨートラベ
ル化を行った。

次いで、セファデックスＧ−２５カラムで処理し、更に
５ｅｐ−ｐａｋｃ、ｓカラム（ウォーターアソシエイト
、ＭＡ）で、０．１χ　トリフルオロ酢酸存在下でアセ
トニトリルＯ→６０χのグラジェント（流速０．３７　
ｄａｄ、分取１ｍｌ／１ｕｂｅ）で精製することにより
、＋５１で標識されたペプチドを得た。

■並メｌ」−と１盃未治療のハモドウ病患者８人（男４人、女４人）および
健常人８人（男４人、女４人）から採血し、常法ムこよ
り血清を得た。

＋２５Ｉ標識ヘプチド（１）または（Ｉｆ）を、０゜２
５　Ｘの生血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む生理的リン
酸緩衝液（０，０１Ｍ　　ＰＯ，、０１０１Ｍ塩化ナト
リウム、ｐＨ７，５）に熔解した溶液１００ｕｆ、血清
５０μ！および０．０５　ＭのＥＤＴＡを含む生理的リ
ン酸緩衝液１５０μ℃を４８時間インキュベートする。

ついで、その混合物に牛Ｔ−グロブリン溶液（８ｍｇ／
ｍｌ）　５ｏｏμ！２と３０　Ｘノポリエチレングリコ
ール（分子量６０００）溶液５００μ！を加えて、２０
００’＝、３０分間遠心分離した後、沈澱物の放射活性
を測定し、特異的結合率を求めた。

（２）結果結果は下記第１表および第１図に示す通りである。

（注）：特異的結合率の値は、を表す。（以下、同）平均値±標準誤差実験例２（１）実験方法上記実験例１と同様にして得た未治療のハモドウ病患者
８人および健常人８人の血清を０，０２Ｍ　ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ８，０）中で一夜透析したのち、ＤＥＡＥカ
ラム（バイオ−ランドラボラトリ−、リッチモンド、カ
ナダ）で処理し、溶出液をアミコンズ・マクロソルート
コンセントレーター（デイビジョン　オブ　−、Ｒ１ブ
レースエンドカンパニー製、米国）を用いて濃縮し、リ
ン酸緩衝液を加えて、Ｂｒａｄｆｏｒｄの方法により、
免疫グロブリン（ＬｇＧ）濃度が下記第２表記載の濃度
となるよう調製した。

以下、血清５０　ｕβにかえて上記免疫グロブリン溶液
５０　ａβを用いる他は、実験例１と同様にしてイムノ
アツセイを行い、特異的結合率を求めた。

（２）結果結果は下記第２表および第２図に示す通りである。

第２表〔発明の効果］本発明のペプチドは、甲状腺機能異常疾患を有する患者
、例えば、異常腺機能光道症患者の血清中に存在する抗
体と特異的に反応するので、甲状腺機能異常疾患の診断
に使用することができる９

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のペプチドとハモドウ病患者または健常
人の血清における特異的結合率を示す線図であり、同図
において（ａ）はペプチド（１）（ｂ）はペプチド（Ｉ
ｔ）の結合率をそれぞれ表し、第２図は免疫グロブリン
濃度を変えた場合の本発明のペプチドとハモドウ病患者
または健常人の血清中の免疫グロブリンとの特異的結合
率を示す線図であり、同図において（ａ）はペプチド（
Ｉ）、（ｂ）はペプチド（ＩＩ）の結合率をそれぞれ表
す。特異的結合率（％）第（ａ）ペプチド（Ｉ）図（ｂ）ペプチド（ｎ）ＩｇＧ濃度ｍｇ／ｒｎ１２

Claims

【特許請求の範囲】

（１）少なくとも次式（ I ）又は（II）で示されるア
ミノ酸配列を有するペプチドまたはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼
（２）式（ I ）又は（II）で示されるアミノ酸配列を
有する請求項（１）記載のペプチド又はその塩。
（３）式（ I ）又は（II）で示されるアミノ酸配列を
有し、Ｎ末端に更にＬ−チロシンが結合した請求項（１
）記載のペプチド又はその塩。
（４）請求項（１）記載のペプチドまたはその塩を抗原
とする甲状腺機能異常疾患の診断剤。
（５）甲状腺機能異常疾患が甲状腺機能亢進症又は甲状
腺機能低下症である請求項（４）記載の診断剤。