JPH03505869A - サクシニルアセトンを使用する自己免疫疾患の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 サクシニルアセトンを使用する自己免疫疾患の治療方法本発明は、一般的に自己 免疫疾患の治療方法に関する。

さらに詳しくは、本発明はサクシニルアセトンを使用する自己免疫疾患の治療方 法に関する。

２、関連技術の説明 自己免疫疾患は、自己の組織に対する生物の反応性によって引き起こされる炎症 である。この疾患を治療するための医薬組成物および方法は、動物を使用し、そ の中にその疾患の実験的なモデルを展開させることによって研究されている。実 験動物の中で展開するその様な疾患の一つは「実験的自己免疫性ブドウ膜炎」ま たはｒＥＡＵＪと呼ばれる。この自己免疫疾患の治療に効果的な方法は、他の自 己免疫疾患の治療にも有用である。

実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）は、眼炎症のＴ細胞依存モデルであり、 完全フロインドアジュバント（Ｆｅｒｕｎｄ’ｓ　ａｄｊｕｖａｎＬ）中の牛の 網膜Ｓ−抗原のフットパッド免疫法により、ルイスラットに誘発することができ る。網膜Ｓ−抗原は、網膜の光受容器に由来する４８にタンパク質である。網膜 Ｓ−抗原は光形質導入に作用する。この疾患モデルは、特殊なＴ−細胞系統によ って伝達されるが、血清によって伝達されることはない。能動免疫法によって誘 発された場合、臨床的な炎症はフットバッド注入の１０〜１２日後に始まる。低 レベルの抗体が免疫後の７日目までに検出され、膝窩リンパ球増殖応答が１００ 日目頂点に達する。炎症は、網膜の光受容器および松果腺の中で起こるが、その 両方ともＳ−抗原を含んでいる。眼炎症は、先受容器細胞の損失に続く、より拡 散した網膜破壊が特徴である。炎症は網膜萎縮および神経膠残遺物を残して７〜 １０日で消散し、自然に再発することはない。

この実験的な疾患は、人間の眼炎症の進展および調整を研究するのに便利なモデ ルである。というのは、両疾患状態が医薬組成物および治療方法に人体同じ様に 応答するためである。例えば、シクロスポリンＡは、実験動物における眼炎症並 びに自己免疫によると思われる人間のブドウ膜炎の両方を調整するのに有用であ る。実験的な自己免疫性ブドウ膜炎は、免疫後７日目以前にシクロスポリンを投 与すれば防止できる。しかし、シクロスポリン腎毒性があるために、この薬剤の ブドウ膜炎および他の自己免疫疾患への使用が限られている。０または７日目に 投与を開始した場合、毎日１０ｍｇ／ｋｇのシフロスポリス投与で、実験的な自 己免疫性ブドウ膜炎は１４４日目抑制されるが、薬剤投与を停止すると炎症がゆ っくり再発する。人間の自己免疫疾患の免疫調整に対する他の戦略を開発する必 要がある。

サクシニルアセトン（４，６−ジオキソへブタノン酸）はヘム生合成経路の第二 酵素、デルターアミノルベリン酸脱水酵素（ＡＬＡＤ）の不可逆抑制剤である。

この化合物の初期の研究は、そのヘム生合成の抑制による赤白血細胞の成長を抑 制する能力に注目したが、この化合物には、ヘム生合成とは無関係な機構による 他の腫瘍の成長を抑制する能力もある。この作用は、ここに参考として含める、 Ｔｓｃｈｕｄｙら、「サクシニルアセトンの成長抑制作用、Ｗａｌｋｅｒ　２５ Ｂ癌肉腫による研究（Ｇｒｏｗｔｈ　１ｎｈｉｂｉ−ｔｏｒｙ　ＡｃＬｉｖｔＬ ｙ　ｏｒ　５ｕｃｃｉｎｙｌａｃｅｔｏｎｅｓ：５Ｌｕｄｉｅｓ　ｖｉＬｈ　Ｗ ａ−！ｋｅｒ　２５６　Ｃａｒｃｉｎｏｓａｒｃｏｍａ）Ｊ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ 　４０：！４８（１９８３）の文献に記載されている。サクシニルアセトンには 、Ｗａｌｋｅｒ２５８１ｉ瘍の成長を最初は抑制する能力があるが、サクシニル アセトンによる治療を続けると、実際にラッ抗原応答を抑制する作用がある。こ の化合物のこの特性は、ここに参考として含める、Ｔｓｃｈｕｄｙら、「サクシ ニルアセトンの免疫抑制作用（ＩｌＩＩｌｕｎｏｓｕｐｐｒｃｓｓｉｖｅ　Ａｃ ｔｉｖ−ｉｔｙ　ｏｆ　５ｕｃｃｉｎｙｌａｃｃｔｏｎｃ）　Ｊ　Ｊ、Ｌａｂ、 ＆　Ｃｌ１ｎ、Ｍｃｄｌｃｉｎｃ　９９（４）　：５２Ｂ（１９Ｈ）に記載され ている。

サクシニルアセトンは、最初は、デルタ−ＡＬＡ脱水酵素およびしたがってヘム 生合成の不可逆抑制による、抗腫瘍作用を有すると考えられていた。しかし、そ の後の研究により、高水準のヘム合成を示さない、腫瘍の成長を抑制する能力が あり、長期間の投与によって、免疫抑制効果による、腫瘍の同種移植成長が高く なることが解かった。サクシニルアセトンの作用は強力であるが、１箇月の治療 では、非リンパ器官における重要な組織病理学的異常性を示さない。ヘム生産抑 制のために、ヘマトクリットが１２％減少し、ヘモグロビンが２０％減少する。

このヘモグロビンの減少は、ヘム生産を完全に抑制した場合に予想される減少の ４０％に過ぎない。

サクシニルアセトンは、同種骨髄移植における移植片対宿主反応による症状（Ｇ ＶＨＤ）を完全に抑制するのに効果的に使用されている。ヘム合成および免疫機 能に対する強力な作用にも拘らず、サクシニルアセトンは、造血再構成に対する 移植を妨害しない。１箇月の治療後、血液中のヘモグロビンおよびリンパ球が極 僅かに減少するが、薬剤投与を停止するとこれらのパラメータは正常に戻る。サ クシニルアセトンで治療した動物は体重が増加し、他の器官系に対する毒性は見 られない。

ここに参考として含める、ｌ１ｅｓｓらの米国特許第４．６７０，４６７号は、 移植片対宿主反応を制御する方法を開示している。この方法は、骨髄移植による この特表平３−５０５８６９　（３） 疾患を治療または調整するのにサクシニルアセトンを使用している。この開示並 びに上記の２つの開示は、自己免疫疾患の治療方法は示していない。

この分野では、自己免疫疾患を抑制するための方法が欠如している。その様な方 法は、実験的な自己免疫性ブドウ膜炎の作用を調整する上でも有益であろう。

発明の概要 本発明は、宿主中の自己免疫疾患を調整または抑制する方法である。この方法は 、罹病宿主に薬学的に有効量のサクシニルアセトンを投与する工程を含む。薬学 的に有効量のサクシニルアセトンは、宿主中の自己免疫疾患の影響を調整するに 十分でなければならない。

図面の簡単な説明 第１図は、サクシニルアセトン治療により、実験的な自己免疫性ブドウ膜炎にお ける組織学的な炎症が、７〜１４日目まで治療した動物において、投与量に応じ て減少することを示している（ｐｒｏ、００４ｐ＜０．０００１）。

第２図は、治療していない実験的な自己免疫性ブドウ膜炎には網膜炎症が見られ 、７〜１４日目まで１．８ｍｇ／ｈｒのサクシニルアセトンで治療した動物には 炎症が見られないことを示している（Ｈ＆Ｅ２００Ｘ）。

第３図は、７〜１４日目までサクシニルアセトンで治療した動物から得たリンパ 球における、１４日口のＳ−抗原リンパ球マイトジェネシス（１１ｉｔｏｇｅｎ ｅｓ４ｓ）を示す（ｐ　＜　０．　００９）。

第４図は、７〜１４日目までサクシニルアセトンで治療した動物における抗Ｓ− 抗原抗体応答を示す（ｐ＜本発明は、自己免疫性ブドウ膜炎、特に哺乳動物など の宿主における自己免疫性ブドウ膜炎、の治療方法である。サクシニルアセトン は、実験的自己免疫性ブドウ膜炎の強力な抑制剤である。この化合物つまり薬剤 は、免疫時に投与した場合のみならず、低水準の網膜Ｓ−抗原の抗体が通常検出 でき、免疫応答が始まっている７日後に投与を開始した場合にも、眼炎症を抑制 することができる。リンパ球増殖応答は、中程度の薬剤投与量で僅かに高くなり 、高投与量で著しく抑制されるが、血清抗体水準は高投与量でのみ低下する。

本発明の実施例として、ラットにおけるＳ−抗原により誘発された実験的自己免 疫性ブドウ膜炎の進展に対するサクシニルアセトンの影響を説明する。動物を、 浸透小型ポンプにより１．　８０ｍｇ／ｈｒの一定注入で処理した場合、Ｓ−抗 原は実験的自己免疫性ブドウ膜炎を１４日で完全に抑制する。この投与速度によ る治療を、０〜７日、７〜１４日または０〜１４日の３つの期間で行なう。

投与期間に関係なく、疾患の抑制は完全である。膝窩リンパ腺から得た細胞にお けるＳ−抗原により誘発されたリンパ球増殖応答が著しく抑制される（ｐ＜０． ００９）と共にＳ−抗原抗体生産が著しく低下する。０．９０■／ｈｒまたは０ ．４５■／ｈｒの速度でＳ−抗原で処理した動物では、投与量に対応して実験的 自己免疫性ブドウ膜炎が進展する。７〜１４日まで１．８■／ｈｒで処理したが 、３０日日目屠殺した動物では、疾患が１００９６進展している。サクシニルア セトンは、実験的自己免疫性ブドウ膜炎の衰微を抑制し、Ｓ−抗原に対する免疫 応答を著しく抑制する。しかし、治療を一度中断すると、出現率が高いので、免 疫調整の可逆的な非細胞毒性機構を示唆している。

サクシニルアセトンは、シクロスポリンＡと同程度の強力な免疫抑制剤であると 思われる。サクシニルアセトンには、さらに、血液網膜障壁を通過する浸透性を 与え得る、低分子量および高水溶性の利点がある。その結果、この化合物は、自 己免疫疾患の治療に対して、広範囲な治療上有効な投与量で投与することができ る。この化合物は、毎時体重キログラムあたり約２．５〜約２５■で治療応答を 得ることができる。より望ましい投与量範囲は、毎時体重キログラムあたり約５ 〜約１５ｍｇである。

好ましい投与量は、毎時体重キログラムあたり１０ｇ＋ｇである。これらの投与 量は、人間などの各種の哺乳動物を含む、各種の宿主種族間で異なることが予想 される。

サクシニルアセトンに関する投与量応答データは、非常に狭い範囲の効能および 毒性を示している。この薬剤を最適投与量の５０％増加させると体重低下が起こ り、５０％減少させると自己免疫性ブドウ膜炎を進展させる。

しかし、これらの低い投与量でも、炎症の程度はコントロールの動物におけるよ りも著しく低い。処理していない動物と比較して、０．９および０．４５ｍｇ／ ｈｒで処理した動物において、抗原特異的リンパ球増殖が僅かに増加することは 興味深い。このことは、抗原特異的リンパ球進展の速度論的な遅延を示でいる。

Ｓ−抗原で免疫し、処理していない動物は、リンパ腺増殖応答のピークを１１０ 目に有し、シクロスポリンはこのピークを遅らせることが以前から分かっている 。恐らく、本発明でも、低投与量を受けた動物において類似の遅延機構が起きて いる。このことは、免疫後１４日ロ一層殺した動物からの応答が僅かに増加して いることを説明ｊ７ている。サクシニルアセトンの投’ｊｆｆｉを高くすると、 この応答を完全に抑制する。

サクシニルアセトンの免疫抑制効果は、未知の機構による。Ｈｅ５ｓ特許に関し て上に述べた様な骨髄移植の抑制において得られたデータは、細胞成長に対する 細胞抑制的な、ただし細胞毒性ではない作用があることを示唆している。これは 、移植が起こり、免疫機能が戻るためである。この発明のデータは、炎症の再発 が遅れていることから、細胞作用の可逆機構を示唆している。サクシニルアセト ンの構造からは、作用の機構を示唆するものは無く、サクシニルアセトンは細胞 成長抑制剤のユニークなグループの最初のものと言って良い。免疫機構は、この 薬剤の効果に最も敏感であると思われる。この薬剤は、試験官内で、繊維芽細胞 並びに腫瘍細胞の成長も抑制するので、その作用はリンパ球に限定されるもので はない。

サクシニルアセトンの免疫機構に対する全体的な特異性は分かっていないが、そ れによって器官移植および自己免疫疾患の両方における効果的な免疫抑制剤とし ての、その潜在能力を否定するものではない。その特性、低分子量、水溶性、お よび生物学的機構に依存しない合成が、人間の疾患における免疫応答を調整する ための、重要な利点を示唆している。

実施例 下記の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示す。

実験を行なうために、以下に示す方法および材料を使用した。

実験的自己免疫性ブドウ膜炎の誘発は、生後６〜８週間の雌のルイスラットで開 始した。ラットの体重は１７５〜２００グラムであった。牛の網膜Ｓ−抗原を上 記の様にして調製した。動物は、それぞれの後ろのフットパッドに、１５ｕｇの Ｓ−抗原をリン酸塩緩衝食塩水（Ｐ　Ｂ　Ｓ）に溶解し、等体積の、Ｇｉｂｃｏ 、Ｇｒａｎｄ　Ｉｓ！ａｎｄ。

ＮＹから市販されており、ＨＪ　３７Ｒａ結核菌で２．５ｍｇ　／　ｍｌ　濃度 に増強した完全フロインドアジュバントと混合したエマルション０．１ｃｃを注 入することによって免疫した。動物は、免疫後、１４または３０日後にＣＯっ吸 入により２殺した。１４０目に層殺した動物では、Ｃｏ２誘発麻酔を使用して、 血液を得るために心臓穿刺も行なった。この血液は冷蔵庫内に一装置いて凝固さ せた。血清を除去し、−２５℃で保管した。さらに、１４日口の動物から膝窩排 出リンパ腺および松果腺を摘出した。

サクシニルアセトンによる治療は、下記の様に行なった。結晶化したサクシニル アセトンを、コロラドバイオテクノロジー、キャスバー、ワイオミングから入手 した。

滅菌溶液をリン酸塩緩衝食塩水中で調製し、６Ｎ−ＮａＯＨでｐＨ７，４に中和 した。薬剤は、Ａｌｚａ　Ｃｏｒｐ、。

Ｐａ１ｏ　Ａｌｔｏ　、カリフォルニアから市販されている小型浸透ポンプ２Ｍ Ｌ２で２週間、または２ＭＬ１で１週間投与した。１００　ｍｇ／　ｍｌ、２０ ０１１ｇ／ｍｌ、　４　（’）　０１１ｇ／ｍｌおよび６００ｍｇ／ｍｌの溶液 を使用した。ポンプは、ポンプ充填とポンプのラット内埋め込みとの間の短い間 隔、つまり３０分間以内は滅菌リン酸塩緩衝食塩水中に浸漬した。

動物は、１１０ｌ１１のケタミンおよびｌｌｌ１ｇのＲｏｌｌｐｕｎ　ＩＮの組 み合わせで麻酔をかけ、その後必要に応じて同じ混合物を補充した。ラットの背 中中央の皮膚部は電気バリカンで剃−Ｑ、７０％エチルアルコールで十分に清掃 した。

２．５〜３．　０ｃｍの横切開を行ない、尾の区域から切開区域まで下掘りし、 ポンプを埋め込んだ。

免疫後の１４日間、４３匹の動物を追跡した。２９匹の動物に、下記のサクシニ ルアセトンを含むポンプを埋め込んだ。５匹の動物に０〜１４日用の６００ｍｇ ／ｍｌポンプを埋め込み、４匹の動物に０〜１４日用の４００ｍｇ／ｍｌポンプ を埋め込み、４匹の動物に０〜７日用の４００　ｍｇ／　ｍｌポンプを埋め込み 、４匹の動物に７〜１４日用の４００ｔｎｇ／ｍｌポンプを埋め込み、６匹の動 物に７〜１４日用の２００　ｔｎｇ／　ｍｌポンプを埋め込み、６匹の動物に７ 〜１４日用の１００　ｒｒ＋ｇ／　ｍｌポンプを埋め混んだ。

コントロールグループは、実験的自己免疫性ブドウ膜炎を進展させるために上記 の様に免疫し、通常の食塩水を含むＡＬＺＥＴ小型浸透ポンプを埋め込んだ１４ 匹のラットからなる。すべての動物は１４日口のだ殺した。さらに６匹の動物を Ｓ−抗原で免疫し、７〜１４日用の４００ｔｎｇ／ｍｌを含むポンプを埋め込み 、３０日ロ一層殺した。

眼および松果腺の組織は、次の様にして検査した。眼および松果腺を摘出し、１ ０％ホルマリン中に固定し、パラフィン中に埋め込み、切開し、清掃し、次いで ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。眼内リンパ球の存在および光受容器 の破壊により決定される眼炎症の存在は、公平な観察者により、以前に発表され た、実験的自己免疫性ブドウ膜炎を０〜＋４で等吸付けする基準を使用して読み 取った。１匹の動物の両目における眼等級を平均し、実験的自己免疫ブドウ膜炎 の発生を示すのに使用【、た。公平な観察者が松果腺内にリンパ球の浸潤を観察 した場合に、松果体炎症が存在すると考えた。

リンパ球増殖評価は、次の様に行なった。１４日間に屠殺した各グループの動物 について培養を行なった。各動物の腋窩リンペ腺から細胞を緩やかにそいで採取 し、コスタ−、ケムブリッジ、ＨＡから市販されている、９６穴の培養プレート 中で、１×１０６細胞／ｍｌの濃度で培養した。それぞれ、０．２ｃｃの、Ｇｊ ｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ。

ＮＹから市販されているｌ？ＰＭ１−１６４０に、Ｈｙ−ｃｌｏｎｅ、　Ｌｏｇ ａｎ。

ユタから市販されている１００６牛脂児血清および１００Ｕ　／　ｍｌのペニシ リンおよびＩＯＵ／ｍｌのストレプトマイシンを追加した、０．２ｍｌの培養培 地中に２００．０００個の細胞を含む。各動物に対して、媒体、コンカナバリン Ａ　（Ｃａｎ　Ａ）　１　ｕｇ／穴およびＳ−抗原５ｕｇ／穴を使用して細胞の ４倍培養穴を行なった。この培養液を３７℃で、５９０ＣＯっ中で３日間培養し 、ニューイングランドニュークリア、ボストン、ＨＡから人手した３Ｈ−チミジ ンの１ｕＣｉでパルスし、さらに１６時間培養した。次いて、このプレートをＭ ａｓｈＩＩバーヘスター上に採り、シンチレーション計数器で計数し、４倍穴の 計数を平均した。刺激計数（Ｓ、１．）は、実験平均値を各動物に対する比較平 均で割ることにより、４倍の各セットに対して計算した。

次いで、抗Ｓ−抗原抗体に対する酵素免疫抗体法（Ｅｌ　１ｓａａｓｓａｙ）を 行なった。この検査では、コスタ−、ケムブリッジ、ＨＡから入手した９６穴平 底プレートに、リン酸塩緩衝食塩水中に８　ｕｇ／　ｍｌのＳ−抗原を含む溶液 ５０ｕ１を塗布し、３７℃で１時間培養した。次いで、このプレートを、リン酸 塩緩衝食塩水中もしくは１％牛血清アルブミン中で３回洗い、リン酸塩緩衝食塩 水中牛血清アルブミンで、３７℃で１時間培養し７、空にし、４℃で貯蔵した。

リン酸塩緩衝食塩水中１：２５００の血清希釈液を使用した。予めコートしであ る先のプレート中で、５０ｕ１の血清を３７℃で１時間培質した。次いでこのプ レートをシグマ、セントルイス、ＭＯから入手したリン酸塩緩衝食塩水中０，１ ％Ｔ冒ｅｅｎで３回洗い、Ｋｉｒｋｅ−ｇａａｒｄ　ａｎｄ　Ｐｅｒｒｙ、Ｇａ ｉＬｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤから入手した、重および軽鎖の両方を有するヤギの 抗ラットｉｇＧの１＝２０００希釈液の５０ｕ１で３７℃で培養し、Ｔｗｅｅｎ とリン酸塩緩衝食塩水で３回洗い、各５０ｕ１の、Ｋ１　ｒｋＲａａｒｄａｎｄ 　Ｐｅｒｒｙから入手したペルオキシダーゼサブストレート溶液ＡおよびＢで１ ５分間培養した。陽性および陰性の標準を各プレート上で実行し、吸光度をダイ ナチック、アレキサンドリア、ＶＡから入手したミニリーダー■エリザリーダー 上で読み取った。すべての試料は、１日の内に二つずつ実行した。比較のために 、試料の吸光度は、標準に合わせた。Ｅ１１ｓａプレートの標準の吸光度間で５ ％の変動があった。

データは、統計的解析システム、Ｃａｒｙ、　ＮＣを使用して解析した。Ｅｉｓ ｈｅｒ’ｓ　Ｅｘａｃｔ試験を使用して、明確なデータの２Ｘ２比較を行なった 。処理グループ間の連続データを比較するために、５ＬｕｄｅｎＬ　を試験を行 なった。データはすべて平均±Ｓ、Ｅ、Ｍ、とじて報告する。この実施例の結果 を第１表に示す。

未処理　　　　　　　　１３／１４　　８／８２．７　　　０−１４　　０／２ ：　　　　−１，８０−１４０／４＊　　Ｏ／４＊ １．８　　　０−１４　　０／４１　　０／４１１．８　　　０−７　　　０／ ４＊　　　Ｏ／４＊１．８　　　７−１４　　０／４＊　　　Ｏ／４＊０．９　 　　７−１４　　４／６　　　　−０．４５　　７−１４　　５／６　　　　一 本　ｐ＜０．００４比較グループと比較して（ＦｉｓｈｅｒＥｘａｃｔ　Ｔｅ５ ｔ） ２　薬剤により、３匹死亡 第１表は、比較動物およびサクシニルアセトンで処理した動物における、眼炎症 および松果体炎症の組織学的な発生を示す。未処理動物の１４４匹中１匹が、著 しい網膜破壊を伴うひどい実験的自己免疫性ブドウ膜炎を起こし、試験した８匹 中８匹が松果腺炎を起こしている。

１．８■／ｈｒでサクシニルアセトン処理することにより、０〜７日まで、並び に、７〜１４日まで投与してだけであるいは０〜１４日までの投与で、実験的自 己免疫性ブドウ膜炎および松果腺炎の進展を完全に抑制した。サクシニルアセト ンの投与量が低い場合には、部分的に抑制しただけで、動物中に破壊程度の低い 炎症が生じ、実験的自己免疫性ブドウ膜炎が進展した。１４日間、２．７１１Ｋ 　／　ｈ　ｒの投与量では、体重減少または死亡率が著しい。

第１図は、７〜１４日まで処理した動物における眼内炎症の程度に対する投与量 応答のデータを示す。目盛４は網膜の完全破壊を示し、目盛１は部分的な先受容 器損失を伴う穏やかな炎症を示す。炎症の程度は、比較動物（２，７土０．３２ 　（ｐ＜０．００４それぞれ）に比べて、１　、８＋ｎｇ／ｈｒ　（０±））お よび０．９ｍｇ／ｈｒ（０，９２±０．３５）の両グループで著しく低下してい る。

第２図は、処理しなかった動物の眼においては組織学的炎症応答があり、サクシ ニルアセトンで７〜１４日まで１．８■／ｈｒの率で処理した動物においては炎 症が無いことを示している。

第３図は、７〜１４日まで処理した動物における、Ｓ−抗原に対するリンパ腺増 殖応答を示している。

０、４５　（１１，４±４．５）および０．９ｍｇ／ｈｒ（］、０．１±２．４ ）を投与した動物の刺激指数応答は、処理しなかった動物（５，４土１，０）よ りも高いが、その差は統＝１的には重要ではない。１．　８ｍｇ／ｈｒ（０，８ ４±０．１３）の動物は応答が著しく低い（ｐ＜　０．　００９）。その上、０ 〜１４０までまたは０〜７日まで１．８ａ＋ｇ／ｈｒで処理した動物は、リンパ 球応答の著しい低下を示した。これら二つのグループの平均は、処理しなかった 動物に比べて、０．７±０．０６および０．７４±０．０８　（ｐ＜０．００９ ）であった。

第４図は、７〜１４Ｂまでサクシニルアセトンで処理した動物における、Ｓ−抗 原抗体（ＩｇＧＨおよびＬ鎖）生産の変化を示す。処理しなかった動物におｌす る１４日口の血清抗体に相当するＥｌｉｓａ吸光度は、（０，５８±０．０３） であった。著しい低下は、１．８ｍｇ／ｈｒ投与皿で見られただけである（０． ０３±０．０２）（ｐ＜０．００４）。さらに、１．８１ＤＫ／ｈｒで０〜１４ 日または０〜７日まで処理した動物から得た血清に対する、Ｓ−抗原Ｅｌｉｓａ を使用する平均吸光度は、それぞれＯおよび０．００３±０．１であった（ｐ＜ ０．００４）。これは、抗体力価の少なくとも５０倍低下に相当する。

７〜１４日まで処理し、署殺を３０日目処で延ばした動物では、松果腺および網 膜の両方に、程度が２．９±０．２の組織学的な疾患が１００％生じ、著しい網 膜損傷を示した。

この実施例の結果から、１，８■／ｈｒの投与量で実験的自己免疫性ブドウ膜炎 が完全に抑制されることが分かる。７８目から薬剤使用を開始した場合にも眼炎 症を抑制できることから、免疫の初期の段階が生じた後でも、免疫抑制作用が起 こり得ることを示している。その上、０〜７日目ロー投与した場合の治療効果は 、それを中断した後も数日間は免疫抑制効果が持続することを示している。これ と対照的に、７〜１４日目まロー剤を与えた場合に３０日目処炎匡が１００％起 こることは、免疫抑制作用の可逆性を示している。これは、骨髄移植を受けたラ ットの正常な免疫学的な再構成によっても示唆されており、サクシニルアセトン の抑制効果の可逆性を示している。

ＦＩＧ、　１ ブクンこノｐｙｔＦシにｉｔ　（ｍｇ／ｈｒ）ＦＩＧ、　４ ０　　　　　０４５　　　　　０．９　　　　　１Ｊ３７７＞二／ｌ／７ｔ１： Ｊ’Ｑ＋Ｉ（ｍｇ／ｈｒ）手続補正音（方式） ％式％ １　事件の表示 平成　１年　特許願　第５０５９１６号。

ＰＣＴ／ＵＳ　　８９１０１７９１ 、発明の名称 サクシニルアセトンを使用する自己免疫疾患の治療方法 ３　補正をする者 事件どの関係　　　　特許出願人 アメリカ合衆国 ５　補正命令の日付 発送日　　平成　３年　８月　２７日 ６　補正の対象 ７　補正の内容 国際調査報告

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. １．宿主中の自己免疫疾患を抑制する方法であって、該宿主に薬学的に有効な量 のサクシニルアセトンを投与して、該宿主中の自己免疫疾患の影響を調整するこ とを特徴とする方法。
2. ２．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあたり 約２．５〜約２５ｍｇである、請求項１に記載の方法。
3. ３．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあたり 約５〜約１５ｍｇである、請求項２に記載の方法。
4. ４．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあたり 約１０ｍｇである、請求項３に記載の方法。
5. ５．前記宿主が哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
6. ６．前記宿主がルイスラットである、請求項１に記載の方法。
7. ７．宿主中の自己免疫疾患を抑制する方法であって、該宿主に薬学的に有効な量 のサクシニルアセトンを投与して、該宿主中の自己免疫性ブドウ膜炎の影響を調 整することを特徴とする、方法。
8. ８．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあたり 約２．５〜約２５ｍｇである、請求項７に記載の方法。
9. ９．サクシェルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあたり 約５〜約１５ｍｇである、請求項８に記載の方法。
10. １０．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な童が毎時体重１キログラムあた り約１０ｍｇである、請求項９に記載の方法。
11. １１．前記宿主が哺乳動物である、請求項７に記載の方法。
12. １２．前記宿主がルイスラットである、請求項１１に記載の方法。
13. １３．前記サクシニルアセトンを浸透ポンプにより連続的に注入する、請求項７ に記載の方法。
14. １４．前記自己免疫性ブドウ膜炎が、実験的自己免疫性ブドウ膜炎である、請求 項７に記載の方法。
15. １５．人工的に誘発したブドウ膜炎を調整する方法であって、 実験的自己免疫性ブドウ膜炎を有する哺乳動物に業学的に有効な量のサクシニル アセトンを投与すること、および 該サクシニルアセトンを連続的に注入して、該哺乳動物の、サクシニルアセトン の治療的に有効な血液レベルを維持すること、 を特徴とする方法。
16. １６．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあた り約２．５〜約２５ｍｇである、請求項１５に記載の方法。
17. １７．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあた り約５〜約１５ｍｇである、請求項１６に記載の方法。
18. １８．サクシニルアセトンの前記薬学的に有効な量が毎時体重１キログラムあた り約１０ｍｇである、請求項１７に記載の方法。
19. １９．前記宿主が哺乳動物である、請求項１５に記載の方法。
20. ２０．前記宿主がルイスラットである、請求項１９に記載の方法。
21. ２１．薬学的に有効な量のサクシニルアセトンを含んでなり、該薬学的に有効な 量が哺乳動物の自己免疫性ブドウ膜炎の影響を調整するのに十分なものである、 医薬組成物。