JPH03505672A

JPH03505672A - 高分子合成オペロンの相補アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗菌、バクテリヤ感染の処置方法

Info

Publication number: JPH03505672A
Application number: JP1509036A
Authority: JP
Inventors: リュープスキィ，ジェイムズ　アー．
Original assignee: ベイラーカレッジオブメディシン
Priority date: 1988-07-05
Filing date: 1989-06-30
Publication date: 1991-12-12
Also published as: CA1340796C; WO1990000624A1; EP0424473A4; EP0424473A1; EP0424473B1; DE68926455T2; ATE137806T1; DE68926455D1; AU4180889A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】高分子合成オペロンの相補アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗菌、バクテリヤ感染の処置方法技術分野この発明はメツセンジャＲＮＡをバインドする非転写オリゴヌクレチオードに関する。

より特別にはバクテリヤの高分子合成オペロンからトランスクライブされたメツセンジャＲＮＡをバインドする非転写オリゴヌクレチオードに関する。またこの発明はバクテリヤに非転写オリゴヌクレチオードを導入することによるバクテリヤ感染に関する。またこの発明はバクテリヤの高分子合成オペロンの遺伝子領域内における特有のシーケンスに非転写オリゴヌクレチオードをバインドすることによって、バクテリヤのアイデインナイフイケーションする方法に関する。またこの発明はＭＭＳオペロンタンパク質生酸生成物めの認識シーケンスとして作用することで知られているオリゴヌクレオチドを使用することによって生ずる高分子合成オペロン遺伝子の競走的抑制によるバクテリヤ感染の取扱いに関する。

発明の背景合成りＮＡ、ＲＮＡ及びバクテリヤのタンパク質を初期的に含む遺伝子は、高分子合成オペロン（ＭＭＳ）と命名されている単一ユニットに含まれていることは知られている。この遺伝子は単一のトランスクリブションユニットの一部であって、ｒｐｓＵで初期的トランスレーションに含まれるリポソームタンパク質Ｓ２１として、ｄｎａＧで初期ＤＮＡ複製のタンパク質として、ｒｐｏＤで初期トランスレーションを含むシグマ７０としてコード化されている。オペロン構造体は例えば大腸菌、ネズミチフス菌のようなグラム陰性バクテリヤ、及び枯草菌のようなグラム陽性バクテリヤの両方に発見される。個々の構造的遺伝子は保全され、大きな範囲の同族関係をもっている。他方オペロン内の構造的遺伝子間の遺伝子間シーケンスは、各バクテリヤの種に対して特異である。ＭＭＳオペロンは遺伝情報の流れを指向する中央情報処理とみなされる。オペロンの組織はある生理遺伝条件下でセル内における高分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ及びタンパク質）の合成情報の座標、したがって初期遺伝子の共変動率のために必要である。各クラスの高分子合成物が初期工程に変動され、ＭＭＳオペロンの変動は変動セル内における成長に最も大きな役割を演する。

ＭＭＳオペロンは３つの構造的遺伝子を含んでいる。ｒｐｓＵ遺伝子は初期のメツセンジャＲＮＡ　（ｍＲＮＡ）のトランスレーションのために必要なリポソームタンパク質Ｓ２１としてコード化している。タンパク質Ｓ２１は１６Ｓ　ｒＲＮＡの３′端部に位置するＳｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏと呼ばれるｍＲＮＡリポソームバインドに対して補足的なリポソームＲＮＡ　（ｒＲＮＡ）のストレッチと相互に作用する。

コリシンＥ３は１６ｓ　ｒＲＮＡの３′端部から５０ヌクレオチドを除去する。

Ｅ３処理されたリポソームは、初期のポリペプチドもその鎖の延長も実行することができない。再構成試験において、Ｅ３処理されたリポソームは３２１を除くすべての３ＯＳタンパク質をバインドする。ＲＮＡタンパク質の交鎖試験は、タンパク質Ｓ２１が１６Ｓ　ｒＲＮＡの３′ドデカヌクレオチドと交鎖することを示している。１６ＳｒＲＮＡの３′端部の塩基対ポテンシャルはＥコイルの初期及びフェーズＭＳ２ｍＲＮＡトランスレーションの所期状態のために必要な３０Ｓ副ユニツトの機能的状態及び３２１の存在によって決まる。

ＤＮＡ複製の初期はドナＧ遺伝子生成物のプリマス（ｐｒｉｍａｓｅ）によって合成されたブライミングＲＮＡを必要とする。このタンパク質は複製のフェーズＧ４オリジンをバインドする。プリマスはまた複数エンザイム複合プリモリモサムと共働してＥ、ｃｏｌｉのフォーク状上木の雑種複製にオカザキ破片の当初合成に着手することが知られている。

プリマスはＥ、　ｃｏ　ｌ　ｉのオリジンにＤＮＡ複製に着手するために必要なブライミングエンザイムである。ドナＧ遺伝子におけるｐａｒ　Ｂ突然変異は雑種における不正規部分を招き、感染性突然変異体として作用するＤＮＡ合成体と細胞状の分割物として隔離する。このようにしてＤＮＡの複製の着手に、ドナＧ遺伝子がセル分割を調節する役割を演するようにみえる。ｒｐｏＤ遺伝子の生成物シグマ−７０は、ＲＮＡ　トランスクリブションの着手のための認識プロモータシーケンスの中に含まれる。シグマ−７０はプロモータシーケンスのだめの特異性を授けるコアポリメラーゼα、ββ′と共働する。シグマ−７０はＲＮＡポリメラーゼシグマ要素の大きな族のメンバである。このようにして高分子組成物オペロン遺伝子は、共通のメカニズムの一部を占める。タンパク質核酸とＭＭＳオペロンの遺伝子生成物との共働をとおして、特殊な核酸シーケンスを連結する。例えばＳ２１はＳｈｉ−ｎｅ−Ｄａ１ｇａｒｎｏシーケンス／リポソームパインディングサイトを連結し、プリマスは複製のオリジンを連結し、シグマ−７０はプロモータシーケンスを連結する。このような相互作用はタンパク質、ＤＮＡ又はＲＮＡそれぞれの合成物の生成をもたらす。

アンチセンスＲＮＡ５は遺伝子圧搾を自然に、しかも試験的に利用される。例えばアンチセンスＲＮＡはバクテリオファージＰ２２の開発において、プラスミドＤＮＡコピー数の制御で重要である。アンチセンスＲＮＡ５はＤｒｏｓｏｐｈｉ −１ａ　ｈｓｐ２３からｍ　ＲＮ　Ａコードのｖｉｔｒｏトランスレーションにおける特殊な抑制と、Ｒｏｕｓ肉腫ウィルスの複製と、腫瘍遺伝子が指向された際の３７３セルの増殖とを抑制するために試験的に使用されている。さらに短アンチセンスオリゴヌクレオチドが遺伝子表現を抑制できるので、全面的にアンチセンスｍＲＮＡを使用する必要はない。これはクロラムフェニコールアセチルトランスファラーゼ遺伝子表現の抑制と、Ｎタンパク質当初サイトを抑制することによって、細胞状の口内ビールスの抗ウイルス活動を抑制することにみられる。

ｃ−ｍｙｃ腫瘍遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、Ｓフェーズへのエントリを抑制するが、Ｇ、からＧ、への進展の際は抑制しない。結局核増殖の抑制は、アンチセンスオリゴヌクレオチドをＰＣＮＡサイクリンに使用することによって示された。

抗生物質は人間を含む各種の動物の感染性疾患のために重要な薬品である。抗生物質の大量の使用と効力は、最小のダメージをもって、または病原性有機体を宿す真核細胞を細面から助けて、バクテリヤ（原核生物）の核成長を妨害する結果をもたらす。すべての抗生物質は遺伝子伝達の通常の流れをもって干渉することによってバクテリヤを破壊する。

これはつぎのいずれか１つの抑制によって達成される。

ＤＮＡ複製、すなわちＤＮＡから５ＤＮＡ　（例えばノボビオシン及びナリジキン酸）、トランスクリブション、すなわちＤＮＡからＲＮＡ　（例えばリフアンビン（Ｒｉｆａｍｐｉｎ）　）トランスレーションすなわちＲＮＡからタンパク質（例えばテトラサイクリン、エリスロマイシン及びカマニシン（Ｋａｍａｎｙｃｉｎ））　、又は核壁合成物（例えばペニシリン）。

この発明は新しいクラスの抗生物質と、一般的に又は特別にバクテリヤ感染の処置方法を提供するにある。この抗生物質はアンチセンスオリゴヌクレチオードシーケンスであって、ＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡをバインドする。これはバクテリヤの成長と複製とを調節する基本的な構造ユニットで干渉することによって、バクテリヤの感染を処置する方法である。

発明の概略本発明の目的は、バクテリヤ感染の処置方法を提供するにある。

この発明の付加的目的は、バクテリヤ感染を処置するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いることにある。

この発明の他の目的は、バクテリヤを認識するための方法にある。

この発明の付加的目的は、バクテリヤにおける高分子合成物オペロンの作動を妨げる抗生物質を提供するにある。

この発明の他の目的は、高分子オペロン遺伝子生成物ヌクレオチド承認部位で干渉する競合抑制剤を用いることにある。

このように前記の目的を達成するに当り、この発明の１つの特徴により、アンチセンスオリゴヌクレオチドを前ＭＭＳオペロンからのトランスクリプトされたｍＲＮＡに結合する工程を含むＭＭＳオペロンの表現を抑制する方法を提供するにある。アンチセンスオリゴヌクレオチドシーケンスは、ｍ　ＲＮ　Ａにおけるユニークな遺伝子シーケンスに特別なものとすることができ、もしくはバクテリヤひずみ又はこれらの組合わせ間で異種同形であるシーケンスをｍＲＮＡのリージョンにとって特別なシーケンスとなることができる。

二の発明の他の特徴は、アンチセンスオリゴヌクレオチド抗生物質をＭＭＳオペロンからトランスクライブしたｍＲＮＡへ結合することにより、ＭＭＳオペロンの表現を妨げることによって、バクテリヤ感染を処置する方法である。

提示実施例において、アンチセンスオリゴヌクレオチド抗生物質は、次のシーケンスから選択することができる。

５’ＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴ３’　（ＡＯＡＭＭＳ−ｄｎａＧ）　。

５’ＴＣＡＣＣＧＡＴＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＡ３’　（ＡＯＡＭＭＳ−ｒｐｏＤ）　。

５’ＧＧＣＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＡＡ３’　（ＡＯＡＭＭＳ−Ｅｃｏ）　。

５’ＣＴＴＧＣＧＴＡＡＧＣＧＣＣＧＧＧＧ３’　（ＡＯＡＭＭＳ−５ｔｙ）及び５’ＴＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＧＣ３’　（ＡＯＡＭＭＳ−Ｂｓｕ）、この発明の他の特徴は、ユニークな遺伝子間アンチセンスオリゴヌクレオチドをＭＭＳＡオペロンからトランスクライブしたｍＲＮＡに結合する工程を有し、種の特殊のＭＭＳオリゴヌクレオチドと与えられたバクテリヤ種のＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍ　ＲＮ　Ａとの間の結合量を決定するバクテリヤの検出又は認識するための方法である。

バクテリヤ感染の処置又はバクテリヤの認識において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは少くともＩＯヌクレオチド（１０ｍｅｒ）である。提示実施例では１６ないし２６ｍｅｒのオリゴヌクレオチドが使用される。

この発明の付加的な特徴は少くともｌＯヌクレオチドのアンチセンスオリゴヌクレオチド抗生物質を提供するにあり、前記オリゴヌクレオチドはＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合する。抗生物質の１実施例ではさらにバクテリヤへのオリゴヌクレオチドの吸収を確実にするためオリゴヌクレオチドに連結された担体分子を有する。担体分子はアミノ酸でよく、ｌ実施例ではロイシンである。他の実施例ではオリゴヌクレオチドの３′端部はバクテリヤ吸収後エキソノクレアーゼによりオリゴヌクレオチドの減成を避けるため誘導される。

他のさらに別の目的、特徴、利点は添付図面に関連してこの発明を開示する目的をもって提示された実施例についての下記の説明から明らかになる。

図面の簡単な説明第１図は図式的に示されたＭＭＳオペロンを示し、トランスレーション（ｒｐｓＵ）　、複製（ドナＧ）、トランスクリプシヨン（ｒｐｏＤ）の開始に含まれる３つの遺伝子を含む図面である。

第２図はＥ、ｃｏｌｉ　ＭＭＳオペロンの調整の説明図である。

ＭＭＳオペロンにおける３つの遺伝子は閉鎖ボックス内に描かれている。ｃｉｓ −作用調整シーケンスは、助触媒（Ｐｘ。

Ｐ、、Ｐ、、　Ｐ、、Ｐａ、　Ｐｂ、　Ｐｈ５）　、明暗境界線（Ｔ、、　Ｔ、）、Ｌｅｘａ結合部位、ナツトｅｑ及びＲＮＡプロセッシング部位を有する。トランス作用要素はそれらが作用すると思われるところに矢印で示されている。ＮｕＳＡタンパク質はｒｐ。

Ｄ遺伝子の表現を増大するが、その作用部位は知られていない。グローバル調整ネットワークがＳＯＳ、熱衝撃、有力なレスポンスを含むＭＭＳオペロンと相互作用をする。

ｏｒｆｘのための機能的役割は譲られなしくが、Ｅ、ｃｏｌｉ及びｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍにおける近接Ｐｘ、　ｏｒｆｘシーケンスの保存が可能なＭＭＳオペロン調整役割を支持している。いくつかの他の開放読取枠が、非譲渡機能をもって上流側にあり、Ｅ、ｃｏｌｉ雑種上に一番近くマツプされた雑種が１４ｋｂ離れたＣＣａ遺伝子である。

第３図は異る種におけるＭＭＳオペロンの比較図である。

ＭＭＳオペロンの構造はＥ、ｃｏｌｉ、　Ｓ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ及びＢ、５ｎ−ｂｔｉｌｉｓに対して決定される。遺伝子はコードン（ｃｏｄｏｎ）決定を含む基礎対（ｂｐ）内で与えられた寸法をもって開放ボックスによって示されている。遺伝子間シーケンスの寸法は、下記のように与えられる。除触媒（Ｐ）の位置が示されている。ＡＯＡＭＭＳ−ＥｃｏはＥ、ｃｏｌｉ　ＭＭ　ＳオペロンｒｐｓＵ−ドナＧ遺伝子間シーケンスの補助的なものである。ＡＯＡＭＭＳ− ５ｔｙはＳ、ＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＭ　Ｍ　Ｓオペロンｒｐｓ　ＩＪ−ドナＧ遺伝子間シーケンスの補助的なものである。ＡＯＡＭＭＳ−ＢｓｕはＢ、ｓｕｂｔｉ１ｉｓＭＭｓオペロンｒｐｓＵ−ドナＧ遺伝子シーケンスの補助的なものである。

第４図はロイシンを付加的に含む５′形アンチセンスオリゴヌグレオチド抗生物質を示す。

第５図は３′形アンチセンスオリゴヌクレオチド抗生物質を示す。

第６図はプリマス遺伝子のためのバクテリヤストレイン間の同族関係を示す。情報はゲンバンク（Ｇｅｎ　Ｂａｎｋ）内のＤＮＡシーケンスで作られ、このシーケンスはモレキュラバイオロジーインフォメーション　リリーセスマルチアライン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｒｅ５ｏｕｒｃｅｓ　Ｍｕｌ−ｔｉａｌｉｇｎ）プログラムを使用し、タンパク質シーケンスデータの相似サーチを完成する。このデータはタンパク質のアミノ末端をカルボキシル末端部分へ横座標上で左から右へ整列される。数はタンパク質プライマリ　シーケンスにおけるアミノ酸の位置を表わす、（ａ）において、Ｂ、　５ｕｂ−ｔｉｌｉｓはＥ、ｃｏｌｉと比較され、（ｂ）においてＳ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍはＥ、ｃｏｌｉと比較され、（ｃ）においてＢ、５ｕｂｔｉｌｉｓはＳ、ｔｙｐ−ｈｉｍｕｒｉｕｍと比較される。（ｄ）においてはＳ、　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍとＢ、５ｕｂｔｉｌｉｓプリマスタンパク質シーケンスはアミノ末端レジオンにおいてＥ、ｃｏｌｉドナＧと整列された。上方の文字は、整列された非現実的アミノ酸を表わし、下方の文字は非整列アミノ酸を表わしている。

ダッシュは整列した実際ベースを表わし、点はギャップを表わしている。データはプリマスタンパク質がアミノ末端レジオンにおいて、相似ドメインを占める。

これらのアミノ酸相似の領域を符号化するヌクレオチドシーケンスはまた非常に異種同形である。

第７図はアンチセンス結合を示す１％アガローズ（ａｇａ−ｒｏｓｅ）ゲルの図面である。

図面は寸法を計る必要はなく、この発明の特徴は寸法上誇張されているか、又は明瞭にし、簡単にする目的で図形化して示されている。

詳細な記載この技術分野における当業者には明らかなように、この発明の請求の範囲及び精神から離れることなく、ここに開示された発明について種々の変更と変形がなされる。

高分子合成物（ＭＭＳ）オペロンは、初期トランスレーション、ｒｐｓＵ複製、ドナＧ及びトランスクリブション、ｒｐｏＤに含まれる遺伝子を有する。これらの遺伝子は第１゜２図で単一の転写ユニット内に含まれており、核の主伝達高分子の初期合成物中に含まれている。オペロンの組織はある生理遺伝状態下においいて、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び核内におけるタンパク質の合成物の同位化初期遺伝子の同期調整にとって必要である。各クラスの伝達高分子（ＤＮＡ。

ＲＮＡ及びタンパク質）の合成物がその初期工程に調整され、ＭＭＳオペロンの調整は各生長において役割を最大に演する。

ＭＭＳオペロンにおいてｃｉｓ作用調整シーケンスがコードレジオン内に生ずる。ダラム陰性バクテリヤにおいて、これらはｒｐｓＵ構造遺伝子内のナツトｇ部位及びドナＧ構造遺伝子内の助触媒Ｐａ、Ｐｂ、Ｐｈｓを含む。Ｂ、ｓｕｂｔｉｌｌｉｓＭＭＳオペロンの助触媒Ｐ６はＰ３．に対して符合化する遺伝子内にある。他のｃｉｓ作用調整シーケンスは、遺伝子間レジオン明暗境界線Ｔ、内に位置し、ＲＮＡプロセッシング部位がドナＧ　−ｒｐｏ　Ｄ遺伝子間シーケンス化に生ずる。このようにして複ｃｉｓ作用調整シーケンスが、このオペロン構造内の個々の遺伝子表現の差別相関レートと同じく非同位調整を許容する。

コードン使用は個々の遺伝子表現の相対的量に影響する。

コードン優先は核内における等受容ｔＲＮＡ種の相対的集中に反映する。レアコードンの使用は調整遺伝子の低レベル表現を確実にする手段を提供する。ドナＧ遺伝子は他のＥ、ｃｏｌｉ遺伝子のようにレア３連鎖コードンの数の１０倍より大きく、ドナＧ　ｍＲＮＡにおけるレアコードンの絶対数は、他の制御遺伝子（すなわちＩａｃ　Ｉ　、　ｔｒｐＲ）のそれより小さい。レアコードンはまたＳ、　ｔｐｈｉｍｕｒｉｕｍドナＧ　ｍＲＮＡ及びＢ、５ｎｂｔｉｌｉｓのドナＥ遺伝子内に生ずる。ＭＭＳオペロン内に作用する付加的な並進調整メカニズムは、５ｈｉｎｅ　Ｄａｌｇａ−ｒｎｏシーケンスに補助的な可変度でリボサム結合部位を生ずることに依頼する。これはＥ、ｃｏｌｉドナＧ遺伝子にみることができ、ＭＭＳｍＲＮＡのドナＧタンパク質にリブサムを不充分に結合する結合リード自由エネルギ内における差異による。これらの両並進的調整メカニズムとも、レアコード使用及び変換リブサム結合親和性はこのオペロンにおける遺伝子の観察した非同和性を部分的に述べている。Ｅ。

ｃｏｌｉ核内のＭＭＳオペロンタンパク生成物のための一定の状態の相対的存在度はプリマスのための３２１に対して４０，０００゜シグマ−７０のためにほぼ３０００である。

３つのシーケンス化されたＭＭＳオペロンの比較分析派、種々の興味深い特徴（第３図）を表わす。すべてのオペロンは３つの開放読取枠を含み、オペロンのトランスクリブションは５′端部において各種の助触媒によって開始される。主たる助触媒は重複するヌクレオチドシーケンス（−ＩＯ及び−３５レジオン）をもちｃｉｓ作用調整シーケンスは小さなレジオンでクラスタされるようにみえる。

各オペロンはドナＧまたはドナＥのＤＯＮＡ複製開始遺伝内の熱衝撃助触媒Ｐｈｓを含む。Ｅ、ｃｏｌｉ及びＳ、ｔｐｈｉｍｕｒｉｕｍオペロンは、外部助触媒Ｐ、、　Ｐ、、　Ｐ、の上流に開放読取フレームｏｒｆｘを含む。ただ７ｈｐはＥ、ｃｏｌｉにおいて一３５シーケンスＰｘ、　Ｐ。

を分離し、これらのシーケンスは実際上、Ｓ、　ｔｐｈｉｍｕｒｉｕｍオペロン内において重複する。

ＭＭＳオペロン内の中央遺伝子は初期のＤＯＮＡ複製内に含まれる１つである。

ドナＧ遺伝子生成物、プリマスは各種の活動をもち、それは（ｉ）プリモサムコンプレックスといっしょでタンパク質−タンパク質の相互作用、（ｉｉ）タンパク−核酸のオリジン承認のための相互作用、（ｉｉｉ）プライマＲＮＡを合成するためのＲＮＡ重合作用、（ｉｖ　）ドナＧ遺伝子内におけるパーＢの突然変異によって支持されたクロモサムの区割りにおける役割。ドナＧ遺伝子を直接トランスクライブする助触媒はない、５′トランスクリプション明暗境界線、不充分なリボサム結合部位、レアコードンの発生、レアコードンのクリスタリングは、この遺伝子の低レベル表現を保持するすべてのメカニズムである。自律的にプラスミドを複製する調整助触媒からドナＧ遺伝子を裏複表現するとホスト核を殺す。ドナＧの直接的な表現の調整は、Ｔｎ５突然変異誘発データからくる核生長を生ずる。ＭＭＳオペロン助触媒をもつクローン化されたドナＧ遺伝子は、複数複写プラスミド上でホスト核が受容する遅い率で生長する。Ｔｎ５をドナＧ助触媒レジオンに加入した後、増大したドナＧ遺伝子表現をリードし、生長率は増大したドナＧ表現が生長するように示される制御レベルに復帰する。パーＢ突然変異の隔離はまたクロモサム区画、核分裂、バクテリヤ核の生長内において、ドナＧのための直接的な役割を指示する。３つのシーケンス化されたＭＭＳオペロンからＤＮＡ複製初期遺伝子によってコード化されたプリマスタンパク質は幾つかの相似レジオン（第６図）を含む。

ＭＭＳオペロンは非常に複雑な制御下にあり、それは技術的に核生長の調整にとって重要な制御をされるユニットが期待される。本質的に複雑な調整に付加して、オペロンは熱衝撃、ストリンゼント応答、及びニスオーニスを含む各種のグローバルな調整ネットワークと相互作用をする。

このオペロンは単一ユニットとして、また並進的なストラドシック位置決め及び並進的な制御信号によって独立したユニット・群として調整される方法を含む。

この事実すなわちオペロンはＥ、ｃｏｌｉ及びＳ、　ｔｙｐｈｉｍｎｒｉｎｍにおけると同様であり、Ｂ、５１ｈｔｉｌｉｓにおいて非常に小さくて、そのような構造を発展させる選択的な利点のあることを指示している。

ここで使用する「オリゴヌクレオチド」という用語は、３つのデオキシリボムヌレオチド又はリボヌクレオチドより多くが含まれている高分子を規定している。

ここで使用する［異種同形シーケンス」という用語は、バクテリヤ種の中に保存されたＭＭＳオペロン内のシーケンスを規定し、そのようなシーケンスは種の変化内の実際と近い。このようにしてこのシーケンスはその同一性が異ったタイプのバクテリヤをそれら自身から分離するのに使用することはできないが、各種のバクテリヤ種を干渉させる単一エージェントによって攻撃することができ場所として用いることができる。

ここで使用する「ユニークな遺伝子間シーケンス」という用語は、特殊な遺伝子間の非コード化ＤＮＡの部分を規定している。ＭＭＳオペロンにおいて、第３図に示すように遺伝子間シーケンスはバクテリヤの異るストレインにとってユニークである。このようにして特異なシーケンスはバクテリヤの特殊なストレインに対して特徴を発揮し、バクテリヤを同一化するのに用いられ、またはバクテリヤの機能を抑制するのに用いられる。

二二で使用する「アンチセンス」という用語は、オリゴヌクレオチドを限定し、そのシーケンスはＭＭＳオペロンの検出ストランドの補助となる。アンチセンス　オリゴヌクレオチドはＭＭＳオペロンからトランスクライブされたメツセンジャのＲＮＡ分子に補助的な形で結合しくワトラン・クリック（Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ）基礎対によって複合体を形成）、ＭＭＳオペロンの単一ストランドＤＮＡを構成する。

ここで使用する「抗生物質」という用語は、ＭＭＳオペロンと干渉させて、バクテリヤの成長を遅くし、それによって成長を阻止し、核の死を誘発することができるオリゴヌクレオチドを意味する。

オリゴヌクレオチドの「微分化」はオリゴヌクレオチドの構造を特異な作用を行うように変換する（（１）５’端部に核内に吸収するように付加し、（２）３’ 端部をイグリヌクレオリテイク破壊を免れるようにブロックすること）ことを意味する。この工程はそれがバクテリヤ内にあるとき、さらに機能的で安定したオリゴヌクレオチドを提供する。例えば、３′端部がヌクレオチドと連鎖したホスホロジオエートを付加することによって、微分化できる。

この発明の１実施例において、アンチセンス　オリゴヌクレオチドをＭＭＳオペロンからトランスグライブしたｍＲＮＡに結合する工程を有するＭＭＳオペロンの表現を抑止する方法を含む。この方法において、アンチセンス　オリゴヌクレオチドをｍＲＮＡに結合し、このｍ　ＲＮ　ＡはＭＭＳオペロンからトランスクライブされる。アンチセンスオリゴヌクレオチドのｍＲＮＡへの結合は、ＭＭＳオペロンによってコード化されたタンパク質にトランスレートすることができる。ｍＲＮＡを微分化するために、ｍＲＮＡの少片がアンチセンス　オリゴヌクレオチドに結合されなければならない。

アンチセンス　オリゴヌクレオチドは、ユニークな抗生物質シーケンスに特殊なシーケンス、異種同形表現シーケンス及びそれらの組合わせからなる群から選ばれる。

単一ストランドＤＮＡ又はＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍ　ＲＮ　Ａにコード化された特殊なユニークな抗生物質シーケンスを結合することによって、抗生物質は抑制するためのターゲットとすることができ、特殊な型のバクテリヤを殺すことができる。異種同形シーケンスを結合することによって、抗生物質は異種同形シーケンスを含む広い範囲のバクテリヤをターゲットにすることができる。オリゴヌクレオチドの長さ、又は結合されるｍ　ＲＮ　Ａの位置により、オリゴヌクレオチドは重複し、ユニークなシーケンスと異種同形シーケンスとを結合する。

ｍ　ＲＮ　Ａの作用を阻止するのに必要なオリゴヌクレオチドの長さは不知であるが、少くとも１０ヌクレオチド（１０ｍｅｒ）である。この発明の１実施例において、オリゴヌクレオチドは１６ないし２６ｍｅｒの範囲にある。

この発明の付加的な特徴は、バクテリヤの感染を処置する方法であって、前記ＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡにアンチャンス　オリゴヌクレオチド抗生物質を結合して、ＭＭＳオペロンの表現を抑制する工程を有する。

アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質は異種同形シーケンス、ユニークな抗生物質シーケンスまたはそれらの組合わせのいずれかと結合される。シーケンスの幾つかの例がＭＭＳオペロンの作用を抑制するためにｍＲＮＡに結合され、表１にみられるようにバクテリヤの感染を処置することができる。

表　　１ＭＭ５オペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合されるシーケンス（］）５’ＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴ３’（ＡＯＡＭＭＳ−ｄ　ｎ　ａ　Ｇ）（２）５’ＴＣＡＣＣＧＡＴＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＡ３’　（ＡＯＡＭＭＳ−ｒ凹皿）（３）５’ＧＧＣＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＡＡ３’　（ＡＯＡＭＭＳ −Ｅｃｏ）（４）　　５’ＣＴＴＧＣＧＴＡＡＧＣＧＣＣＧＧＧＧ３’　　（ＡＯＡＭＭＳ−３ｔｙ）（５）５’ＴＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＧＣ３’　（ＡＯＡＭＭＳ−Ｂｓｕ）最初の２つのシーケンス（１）（２）は、バクテリヤの異種同形シーケンスに結合されて、他のタイプのバクテリヤには向かない。これらのシーケンスはグラム陰性及びグラム非陰性バクテリヤを攻撃するので、広いクラスのバクテリヤ感染を処置するのに使用される。最後の３つのシーケンス（３）　（４）　（５）は特殊バクテリヤにおける特殊シーケンスに結合できるユニークな抗生物質シーケンスである。例えばシーケンス（３）はＥ、ｃｏｌｉに特効がある。このようにしてこのアンチセンスオリゴヌクレオチド抗生物質を用いると、Ｅ、ｃｏｌｉのＭＭＳオペロンを抑止するが、他のバクテリヤのＭＭＳオペロンは攻撃しない。シーケンス（４）は特にＳ、　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍのトランスクライブされたｍＲＮＡを結合し、シーケンス（５）は特にＢ、５ｕｂｔｉｌｉｓのｍＲＡＮを結合する。このようにしてアンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質（３）　（４）　（５）を用いることによって、特殊な抗生物質が特殊なバクテリヤを殺すのに用いられる。このようにして特殊なバクテリヤストレインの再生産に対してこれを殺し、又は干渉するための処置がターゲットを定めることができる。

提示した実施例において、ユニークなシーケンス、アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質の抗生物質シーケンスの使用は、ＤＮＡ複製開始遺伝子（ドナＧ又はドナＥ）（第３図）の５′側の抗生物質レジオンに対して補足的なものである。ＭＭＳオペロンのこのレジオンは、複製開始遺伝子がオペロン内で低レベル表現をもっているので選ばれる。さらにＥ、ｃｏｌｉ及びＳ、　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、この遺伝子は明暗境界線からその下流に位置し、他の助触媒によって直接はトランスクライブされない。ｍ　ＲＮ　Ａともっと安定した相互作用をするために、アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質の主シーケンスはＧＣ基礎対を最大にするように選ばれる。しかし通常シーケンスのユニークさとＧＣ基礎対の最大化はバランスをもって保持する。

この発明の他の実施例は、バクテリヤの同定方法であり、与えられた種のＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡにユニークな種の特殊な抗生物質アンチ・センスオリゴヌクレオチドを結合する２種と、前記結合量を決定する工程とを有する。ユニークなシーケンスは特殊なバクテリヤストレインとのみ結合し、それによって異ったストレインとは結合せず、特殊なシーケンスをもつストレインと結合する。各バクテリヤのストレインはそれ自身のユニークな抗生物質シーケンスをもち、このシーケンスは各ストレインをユニークに同定するのに用いられる。ＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡは全オペロンを測り、ユニークな抗生物質シーケンスを含む。これらのユニークなシーケンスと結合するオリゴヌクレオチドを指定することによって、記相と処置はユニークなシーケンスをもつバクテリヤストレインにおいて、ＭＭＳオペロンの作用に干渉するように仕立てられる。このようにして各種のアンチセンス　オリゴヌクレオチド　プローブを用いることによって、バクテリヤは各個のストレインのためのタイプ化が可能である。結合量はラジオアイソトープ、酵素、蛍光物質、抗体、化学物質を含む当業者には良く知られている各種の方法で決定される。例えばユニークな種特殊抗生物質アンチセンス　オリゴヌクレオチドは、ビオチンとラベルされることができ、ストレッグ（Ｓｔｒｅｐ）アビジン複合体、又は蛍光物質札によって同定される。

例えば表１シーケンス（３）のアンチセンス　オリゴヌクレオチドはＥ、ｃｏｌｉに使用されることができ、シーケンス（４）のアンチセンスオリゴヌクレオチドはＳ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの同定に使用することができ、シーケンス（５）のアンチセンスオリゴヌクレオチドはＢ、５ｕｂｔｉｌｉｓの同定に使用することができる。当業者は付加的なＭＭＳオペロン抗生物質シーケンスは、シーケンス化された付加的バクテリヤがアンチセンス　オリゴヌクレオチドをユニークな抗生物質シーケンスに合成することによって同定することができることを知っている。　バクテリヤのアンチセンス　オリゴヌクレオチドの長さのタイプ化において、ユニークシーケンスに特別に嵌合するのに必要な寸法によって決定される。

オリゴヌクレオチドは少くとも１０ｍｅｒである。ｌ実施例ではシーケンスは、１６ないし２６ｍｅｒの間にある。提示シーケンスの例は表１シーケンス（３）　（４）　（５）にみられる。

アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質をＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＡＮに結合することによってＭＭＳオペロンの作用に効果的に干渉させるために、アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質はバクテリヤ核に入らなければならない。あるオリゴヌクレオチドはあるバクテリヤ核（ハエモフイラス（Ｈａｅｍｍａｐｈｉｌｌｎｓ）　）によって取上げることができ、他のオリゴヌクレオチドは吸収を確実にするために、変形される必要がある。このようにして例えばアミノ酸のような担体分子をオリゴヌクレオチドに連鎖させる必要がある。第４図においてオリゴヌクレオチドは、これに担体分子を付加することによって、５′端部が変形している。このアミノ酸をオリゴヌクレオチドに付加することは、バクテリヤ内にオリゴヌクレオチドを確実に吸収させ、ｍＲＮＡ分子へアンチセンス　オリゴヌクレオチドが結合するのに干渉しない。

当業者はアンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質をバクテリヤ内に確実に吸収させるために、他の方法を使用してもよいことがわかる。例えば他のアミノ酸の付加が特殊のアミノ酸トランスポートシステムとして用いられることもできる。共有連鎖によってオリゴヌクレオチドにラクトーゼを付加することがラクトーゼ透過酵素（ｌａｃオペロンＹ遺伝子の生成物）によってトランスポートされることができる。バクテリヤにおける作用であると知られている他の角形トランスポートシステムが、バクテリヤ核内に吸収されることを確実にするために用いられる。

担体とともに、又は担体なしで、オリゴヌクレオチドをバクテリヤ核に入れると、ＭＭＳオペロンによってトランスクライブされたｍ　ＲＮ　Ａを結合するために必要な時間安定となっていることが重要である。この発明の１実施例において、オリゴヌクレオチドはその退化を避けるために３′端部に誘導される（第５図）。他の方法はイントラセルラ（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ）ライフを延ばし、ｍ　ＲＮ　Ａの結合能力を増大するために、オリゴヌクレオチドの３′又は５ ′端部を変更する方法として知られている。

オペロンからトランスクライブされたｍ　ＲＮ　Ａに結合することによってＭＭＳオペロンを抑制するための付加において、バクテリヤを抑制し、バクテリヤ感染を処置するために、ＭＭＳオペロンの他の下流生成物を制御することができる。例えばＭＭＳオペロン内にコード化されたタンパク質の作用を抑制することは、ＭＭＳオペロンの作用を抑制し、バクテリヤの死をリードする。

この発明の１実施例は、バクテリヤ感染処置のための方法であって、Ｓ２１、プリマス及びシグマ−７０からなる群から選ばれたタンパク質の作用を制御する工程を有する。この方法はバクテリヤに競走的オリゴヌクレオチドを導入することにより、ＭＭＳオペロンによってコード化されたタンパク質の承認部位を競走的に抑止する工程を有する。

Ｓ２１承認部位は１６ＳｒＲＮＡの３′端部に位置するシャインーダラガルノ　（Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌａｇａｒｎｏ）シーケンスを含み、バクテリヤへの３２１の結合を競走的に抑止するオリゴヌクレオチドを導入することによって抑止できる。例えばシーケンス５’ＧＡＴＣＣＡＣＣＴＣＣＴＴＡ３’のオリゴヌクレオチドは、１６ＳｒＲＮＡ（シャインーダラガルノ　シーケンス）の３′端部である。

プリマス承認部位は複製部位のフェーズＧ４レジオンを含む。このようにしてバクテリヤにこの承認部位と衝突する競走的オリゴヌクレオチドを導入することによって、バクテリヤの成長と復帰は抑止される。この競走的抑止材はバクテリヤフェーズＧ４ｏｒｉのループｍである５’ＧＧＣＣＧＣＣＣＣＡＣＡＴＴＧＧＧＣＡＧＧＴＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＴＡＧＡＧＧＧＧＣＧＧＣＣ３’である。

シグマ−７０承認部位はコアポリマラーゼα、ＢＢ’を含み、この相互作用は助触媒シーケンスに対して特殊性を与える。

この競走的な抑止材の例としては、５’ＴＴＧＡＣＡＴＡＡＡＴＡＣＣＡＣＴＧＧＣＧＧＴＧＡＴＡＣＴ３’がある。

このシーケンスはバクテリヤフェーズｌａｍｂｄａ　ＰＬ助触媒である。これはＥ、ｃｏｌｉにおける最も強い助触媒であり、ＲＮＡポリマラーゼと公知のように最も強い結合をもっている。

このようにしてバクテリヤにこれらのシーケンスのための、競走的オリゴヌクレオチドの導入は、タンパク質承認部位と競走的相互作用をもたらし、このようにしてＳ２１、プリマス又はシグマ−７０分子を承認部位に結合するのを避ける。

これは通常の核作用、成長及び複製を抑制する。バクテリヤへのこれらのオリゴヌクレオチドの導入は、ＭＭＳオペロンの作用を分裂させ、バクテリヤ感染を効果的に処置させる。

実施例Ｉ核成長を抑止するために、Ｅ、ｃｏｌｉ及び１３，５ｕｌ）ｔｉｌｉｓの接種材料は単一の試験管内で混合され、Ｅ、ｃｏｌｉ　（ＡＯＡＭＭＳ−Ｅｃｏ）へのアンチセンス　オリゴヌクレオチドは、核接種材料に付加される。数時間の生長後培養がグラムストレイレドされる。グラム陽性生物がみられ、グラム陽性生物の休止がある。花冠試験において、Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ　（ＡＯＡＭＭ　Ｓ− Ｂ　ｓ　ｕ　）に対するアンチセンス　オリゴヌクレオチドＥ、　ｃｏｌ　ｉ及びＢ、５ｕｂｔｉｌｉｓの混合接種材料を付加し、数時間の間生長する。順次グラムストレインには、ファウンド陰性ロッドがある。これらの試験はバクテリヤ有機体の種特殊アンチセンス　オリゴヌクレオチド　デミスを表わす。

実施例■ ＭＭＳオペロン（ｒｐｓＵ、　ｄｎａＧ、　ｒｐｏＤ）内の表現されたシーケンスは、保存された異種同形ＤＮＡシーケンスを含み、オリゴヌクレオチドはドナＧ遺伝子内の保存ＤＮＡシーケンスとして承認された。

ＡＯＡＭＭＳ−ドナＧ５’ＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴ３’は合成された（表１１シーケンスｌ）、。

このオリゴヌクレオチドは端末ラベルが張られ、サザン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ）プロッティング（ｂｌｏｔｔｉｎｇ）におけるプルーブとして用いられる。ＤＮＡは感染した患者の体液がらえられたサルモネラの１２異った病原性ストレインから隔離され、ＨｉｎｄＩＩＩで消化し、１％アガロスゲルでランする。この消化された染色体ＤＮＡは端部−ラベル化ドナＧオリゴヌクレオチドＡＯＡＭＭＳとプルーブされた。

第７図にみられるように、サルモネラの異った病原性ストレインにおけるオリゴヌクレオチドＡＯＡＭＭＳ−ドナＧの保存がある。サザンプロットはサルモネラ（ＬＴ−２）（レーン１）の実験室制御ストレインにオリゴヌクレオチドＡＯＡＭＭＳ−ドナＧの相似を示し、１２の異った病原性ストレインが患者（レーン２ −１３）の体液から保存される。人間のＤＮＡ　（レーン１４の陰性制＃Ｍ）への混合はなく、陽性制御として混合信号（レーン１６）を示すプルーブにおいて、ＤＮＡシーケンスをプラスミドは含む。レーン１５はマーカとしてＨｉｎｄＩＩ［でカットしたラムダＤＮＡをもっている。ずっと右方にはサザントランスファー前にアガローズゲル上に決定されたキロベース対内の寸法がある。

当業者はこの発明は目的達成に適し、端部と優れた説明がえられる。ここに述べられているオリゴヌクレオチド、抗生物質、混合物、方法、手段及び技術は提示実施例を表わして模範となっており、その範囲を制限しはしない。それらの内部の変更及び他の用法は当業者にとって、この発明の精神内に包含され、又は添付クレームの範囲によって制限される。

Ｆ／（３，７国際調査報告に＋ｅ＋ｓａ＋ｒｅｎａｌ　Ａｅ＋ｌｌ＋＋１．＋８．、ＰＣ’ｒ１０ｓ８９１０２８８４１ｆｆｉ１６１Ｍｍｌ＋ｅ＋ｕ−＾ｏｍ＋ｃａｂｅｎＮｏ、ＰＣＴ／ υＳ８９１０２８８４

Claims

【特許請求の範囲】

１．アンチセンス　オリゴヌクレオチドをＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合する工程を有するＭＭＳオペロンの表現を抑制する方法。
２．アンチセンス　オリゴヌクレオチドは、特異な遺伝子シーケンスヘの特異シーケンス、バクテリヤの異種同型シーケンス及びそれらの組合せを含む群から選ばれる請求の範囲１に記載の抑制方法。
３．アンチセンス　オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ｍｅｒの請求の範囲２に記載の抑制方法。
４．アンチセンス　オリゴヌクレオチドは、１６ないし２６ｍｅｒの請求の範囲３に記載の抑制方法。
５．アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質をＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合することによって、ＭＭＳオペロンの表現を抑制する工程を有するバクテリヤ感染を処置する方法。
６．アンチセンス　オリゴヌクレオチドをＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡにおけるバクテリヤの異種シーケンスに結合する請求の範囲５に記載の処置方法。
７．アンチセンス　オリゴヌクレオチドは、５′ＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴ３′及び５′ＴＣＡＣＣＧＡＴＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＡ３′からなる群から選ばれる請求の範囲６に記載の処置方法。
８．アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質を遺伝子間シーケンスに結合し、この遺伝子間シーケンスはバクテリヤの各歪みに対してユニークである請求の範囲５に記載の処置方法。
９．アンチセンス　オリゴヌクレオチドは、Ｅ．ｃｏｌｉからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合される５′ＧＧＣＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＡＡ３′，Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合される５′ＣＴＴＧＣＧＴＡＡＧＣＧＣＣＧＧＧＧ３′及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合される５′ＴＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＧＣ３′からなる群から選ばれる請求の範囲８に記載の処置方法。
１０．アンチセンス　オリゴヌクレオチド抗生物質を異種同形シーケンスとユニークな遺伝子シーケンスの両方に結合する請求の範囲５に記載の処置方法。
１１．ユニークな遺伝子アンチセンス　オリゴヌクレオチドをＭＭＳオペロンからトランスクライブされたｍＲＮＡに結合し、前記結合量を決定する工程を有するバクテリヤの同定方法。
１２．オリゴヌクレオチドは、５′ＧＧＣＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＡＡ３′ 及びＥ．ｃｏｌｉとして同定されたバクテリヤである請求の範囲１１に記載の同定方法。
１３．オリゴヌクレオチドは、５′ＣＴＴＧＣＧＴＡＡＧＣＧＣＣＧＧＧＧ３′ 及びＳ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍとして同定されたバクテリヤである請求の範囲１１に記載の同定方法。
１４．オリゴヌクレオチドは、５′ＴＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＴＧＣ３′及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓとして同定されたバクテリヤである請求の範囲１１に記載の同定方法。
１５．少なくとも１０ｍｅｒのオリゴヌクレオチドを有し、前記オリゴヌクレオチドはＭＭＳオペロンの検出ストランドの補助であって、前記検出ストランドによってトランスクライブされたｍＲＮＡに結合する抗生物質。
１６．オリゴヌクレオチドは、５′ＧＧＣＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＡＡ３′ ，５′ＣＴＴＧＣＧＴＡＡＧＣＧＣＣＧＧＧＧ３′，５′ＴＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＧＣ３′，５′ＣＡＴＣＣＡＡＡＧＣＡＧＴＡＡＡＡＣＴＧＴＴＴ３′，及び５′ＴＣＡＣＣＧＡＴＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＡ３′からなる群から選ばれる請求の範囲１５に記載の抗生物質。
１７．前記オリゴヌクレオチドに連鎖した担体分子を有し、前記坦体分子は前記オリゴヌクレオチドをバクテリヤに確実に吸収させる請求の範囲１５に記載の抗生物質。
１８．坦体分子はアミノ酸である請求の範囲１５に記載の抗生物質。
１９．前記オリゴヌクレオチドは該オリゴヌクレオチドの減成を避けるために、３′端部で誘導される請求の範囲１５に記載の抗生物質。
２０．ヌクレオチドが連鎖されたホスホロジオエート（ｐｈｏｓ−ｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ）が誘導によって３′端部に付加される請求の範囲１９に記載の抗生物質。
２１．Ｓ２１プリマス及びシグマ−７０からなる群から選ばれたタンパク質の機能を抑制する工程を有するバクテリヤの感染を処置する方法。
２２．バクテリヤに競争的なオリゴヌクレオチドを導入することにより、ＭＭＳオペロンによってコード化されたタンパク質の承認部位を競争的に抑制する工程を有するバクテリヤの感染を処置する方法。
２３．Ｓ２１承認部位はバクテリヤに５′ＧＡＴＣＡＣＣＴＣＣＴＴＡ３′を導入することによって抑制される請求の範囲２２に記載の処置方法。
２４．プリマス承認部位はバクテリヤに５′ＧＧＣＣＧＣＣＣＡＣＡＴＴＧＧＧＣＡＧＧＴＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＴＡＧＡＧＧＧＣＧＧＣＣ３′を導入することによって抑制される請求の範囲２２に記載の処置方法。
２５．シグマ−７０承認部位はバクテリヤに５′ＴＴＧＡＣＡＴＡＡＡＴＡＣＣＡＴＧＧＣＧＧＴＧＡＴＡＣＴ３′を導入することによって抑制される請求の範囲２２に記載の処置方法。
２６．ＭＭＳオペロンを単一のストランド化したＤＮＡを形成するように処理する工程と、アンチセンス　オリゴヌクレオチドをＭＭＳオペロンの単一ストランド化したＤＮＡにおいて、ユニークな遺伝子間シーケンスに結合する工程と、前記結合量を測定する工程とを有するバクテリヤの同定方法。
２７．オリゴヌクレオチドは、５′ＧＧＣＣＣＣＧＡＴＴＴＴＴＡＧＣＡＡＣ３ ′及びＥ．ｃｏｌｉとして同定されたバクテリヤである請求の範囲２６に記載の同定方法。
２８．オリゴヌクレオチドは、５′ＣＴＴＧＣＧＴＡＡＧＣＧＣＣＧＧＧ３′及びＳ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍとして同定されたバクテリヤである請求の範囲２６に記載の同定方法。
２９．オリゴヌクレオチドは、５′ＴＡＴＴＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＣ３′及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓとして同定されたバクテリヤである請求の範囲２６に記載の同定方法。