JPH03502879A - 植物組織培養用植込み切片の調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 植物組織培養用植込み切片の調製方法 発明の背景 １、発明の分野 本発明は植物組織培養用植込み切片の大量調製方法に関する。

λ　関連技術の記載 従来から、植物組織培養において培養物として使用される植物器官又は組織の切 片は、植物材料をメスで細断することにより又は植物材料からコルクポーラ−で 植物ディスクを切り出すことにより手作業で調製されている。これらの方法は作 業者が培養のために最も適当な植物材料の部分を選択することができ、そして植 物材料を培養のために最も好ましい形状に切り出すことができる点において有利 である。しかしながら、この操作は熟練を必要とし、そして多大の労働力と時間 を費やさねばならないといった欠点があった。従って、従来の方法は研究室での 実験的レベルでは使用することができるが、植物の商業的な大量増殖における培 養切片の作成のためにこの様な方法を適用することは困難である。

発明の概要 驚くべきことに本発明者らは、切断されるべき植物材料の種類に応じた適切な植 物材料切断法を選択することによって、機械的切断が、効率よく目的物を増殖す ることが期待できる植込み切片を容易に問題なく大量に提供することを見出した 。

従って、本発明に従えば、植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であっ て、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置に供給して植物切片を調製し、ここで該切断装置は、円板 ３又は５３の接線に対して一定の角度をもって配置された１又は複数の長い孔４ 又は５４を有し駆動ユニット２又は５２により回転する該円板３又は５３、及び １又は複数のブレード５又は５５を有し、該ブレードは前記円板３又は５３に固 定されており、該ブレード５又は５５の刃先６が前記孔４又は５４の上方に該円 板の該ブレードに近い側の表面から延びる平面と該刃先６との間に一定の間隔を 置いて配置されている、 ことを特徴とする方法が提供される。

さらに、本発明は、植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付けることによって植物切片を調製し、ここで該切断装置は相互に 平行に配置された複数の案内板１２、及び該案内板１２の間に且つそれに平行し て配置された切断要素１７を有し、該切断要素が回転、往復又は振動して前記案 内板１２の間を通過する植物材料を該切断要素１７により切断する、ことを特徴 とする方法を提供する。

さらに、本発明は、植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付けることにより植物切片を調製し、ここで該切断要素はサブ−要 素の２つの平面の交叉により形成される複数の刃先を有する不動のサブ−要素２ ０、及び可動サブ−要素の２つの表面の交叉により形成される複数の刃先を有す る可動サブ要素２１を有し、該可動サブ要素２１の表面の一方が不動サブ−要素 ２０の表面の一方と滑り接触しており、その結果不動サブ−要素２０に対する可 動サブ要素２１０回転、往復又は振動により１．前記切断要素に押し付けられた 植物材料を切断する、ことを特徴とする方法を提供する。

さらに、本発明は、植物組織培養用の多数の接種切片の調製方法であって 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に対して押し付け、ここで該切断装置、は一定の間隔を有しその間を通し て前記植物材料を輸送するための少なくとも一対の平行ローラー２５及び該ロー ラ２５の下流に配置された切断要素２７を有し、該切断要素は該ローラー２５の 軸と平行な軸のまわりを回転し、又は往復して該ローラーにより輸送される植物 材料を切断する、ことを特徴とする方法を提供する。

さらにまた、本発明は、植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって 、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付けることにより植物切片を調製し、ここで該切断装置は、一定の 間隔を有する少なくとも一対の平行ローラー３２、及び該ローラー３２の間に配 置されておりそして該ローラーの軸に平行なシャフトに固定されている切断要素 ３３を有し、該シャフトが駆動ユニットにより回転する、ことを特徴とする方法 を提供する。

本発明はまた、植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付け、ここで該切断装置は少なくとも２個のローラー３６を有し、 該ローラーの一方はその表面上に円周状に設けられた溝３７を有し、そして他方 のローラーはその表面上に円周状に、相対するローラーのそれとは異る高さに設 けられた溝を有し、各溝はその底部から突出した円形の切断要素を有する、こと を特徴とする方法を提供する。

本発明はまた、植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付け、ここで該装置は複数の切断要素４２を有し、該要素は平行に なっていて該要素４２の刃先４６は同じ方向を向いているか、格子状になってお り該要素の刃先４６は同じ方向を向いているか、あるいは放射状に配置されてい て該要素４２の刃先４６は放射中心を向いている、ことを特徴とする方法を提供 する。

さらにまた、本発明は、植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって 、 殺菌された又は汚染されていない植物材料片を含む液体媒体を調製し、そして該 植物片を回転、往復又は振動する切断要素により切断して植物の切片を調製する 、ことを特徴とする方法を提供する。

図面の簡単な説明 第１図は、本発明の方法において使用される装置の具体例の垂直断面図であり； 第２図は、第１図と同じ具体例の水平断面図であり；第３図は、第２図中の線Ａ −Ａにそって得られる断面図であり； 第４図は、本発明の方法において使用される装置の具体例の断面図であり； 第５図は、第４図に示される具体例の平面図であり；第６図は、第５図中の線Ｂ −Ｂにそって得られる断面図であり； 第７図は、本発明の方法において使用される装置の具体例の模式図であり； 第８図は、本発明の方法において使用される装置の他の具体例の模式図であり； 第９図は、本発明の方法において使用される装置の更なる具体例の模式図であり ； 第１０図は、第９図中の線Ｃ−Ｃにそって得られる断面図であり； 第１１図は、本発明の方法において使用される装置の他の具体例の模式図であり ； 第１２図は、第１１図中の線Ｄ−Ｄにそって得られる断面図であり； 第１３図は、本発明の方法において使用される装置のさらに他の具体例の模式図 であり； 第１４図は、本発明の方法において使用される装置の更なる具体例の模式図であ り； 第１５図は、本発明の方法において使用される装置の他の具体例の模式図であり ： 第１６図は、本発明の方法において使用される装置のさらに他の具体例の模式図 であり； 第１７図は、植物材料が流れる液体媒体中で切断される、本発明の方法において 使用される装置の更なる具体例の模式図であり； 第１８図は、植物材料が液体媒体中で切断される、本発明の方法において使用さ れる装置の具体例の模式図であり：第１９図は、植物材料が液体媒体中で切断さ れる、本発明の方法において使用される装置の他の具体例の模式図であり；第２ ０図は、第１９図において示される装置の切断要素の拡大図であり； 第２１図は、第１９図において示される装置の切断要素の底面図であり； 第２２図は、第２０図において示される装置の切断要素の透視図であり； 第２３図は、第１図において示される装置を用いて柱状のジャガイモを切断した 結果を示すグラフであって、回転速度と得られる切片の厚さ及びそのバラツキと の関係を示し；そして、 第２４図は第２３図のそれに類似するグラフであるが、第２４図はジャガイモに 適用される重量と得られる切片の厚さ及びそのバラツキとの関係を示している。

好ましい態様の記載 本発明に従えば、色々な種類の植物の大量の植込み切片を調製することができる 。すなわち、球根、塊茎、茎等を含む植物の器官又は部分（以後、「植物材料」 と称する）を本発明の方法によって切片化することができる。植物材料は、細菌 又は真菌のごとき植物病原体により汚染されていない植物、例えば無菌条件下で 栽培された植物から得ることができ、あるいは植物の生存を破壊しない任意の常 法、例えば殺細菌剤、殺真菌剤、洗剤等による植物材料の処理により植物材料を 無菌化することができる。

本発明の具体例に従えば、第１〜６図に示す装置を用いて植物切片が調製される 。第１図に示すように、この装置はハウジング１、及び駆動ユニット２により駆 動される円板３を有する。第２図に詳細に示すように、円板３は該円板３の接線 に対して所定の角度で配置された１又は複数の孔４を有する。この具体例におい て、この角度はおよそ直角であり、すなわち孔はおよそ放射上に配置される。さ らに第２図に示すように、ブレード５は該ブレードの刃先６が前記孔の上に位置 するように円板３に取り付けられ、これによって、ブレード５によって植物材料 から切り出された植物切片が孔４を通ってハウジング１に落される。刃先６と、 円板３のブレード５に近い方の表面から伸びる平面７との間に間隔が設けられる 。この間隔は、切り出される植物切片の厚さを調節するために、ブレード５の厚 さを選択することにより、又は所望の厚さを有するスペーサー（示されていない ）をブレード５と円板３との間に挿入することにより調整することができる。

植物組織の破壊を最小にするため、植物材料、特に球根又は塊茎は好ましくは、 「押切」ではなくむしろ「滑空」される。これに関して、「滑空」は植物材料の 切口端を刃先が滑り（スリップし又はスライドする）ながら植物材料を切断する ことを意味する。この目的のため、第２図に示す具体例においてはブレード５及 び孔４が弧状を有する。刃先６が鈍化した場合、又は刃先と円板３の表面にそっ て伸びる平面との間の間隔を再調整する必要がある場合、ブレード５は取り替え られる。従って、ブレード５は板３に例えばねじ８により取りはずし可能に取り 付けられる。板３はシャフトを介して電気モーターのごとき駆動ユニットにより 駆動される。ハウジング１中にたまった切片が容易に回収できるように、板３は シャフトの先端に取りはずし可能に取り付けられる。

好ましくは、第１図に示す装置はさらに入口９を有するカバー１０を有する。

第１図に示す装置の運転中、電気モーターのごとき駆動ユニット２により駆動さ れる円板３の回転速度は例えば１００〜４００ｒｐｍに調整され、そして刃先６ と板の表面にそって伸びる平面７との間の間隔は例えば１〜４薗に調整される。

切片の所望の厚さ、切断されるべき植物材料の硬さ等に従って特定の条件が選択 される。

第１図に示される装置は好ましくはユリ等の球根、又はジャガイモ等の塊茎から 植物切片を調製するために使用される。

植物材料が入口９の中に挿入され、そして円板３の回転により動くブレード５に より植物材料が切断される。ユリの球根のごとき軟い材料を切断する場合、刃に 対して該材料を押し付けるのに該植物材料自体の重量で十分であり、そしてそれ 故にオペレーターは単に材料を円板上に置けばよい。しかしながら、ジャガイモ の塊茎のごとき比較的硬い材料を切断すべき場合、材料自体の重さに加えて追加 の力を該材料に適用しなければならず、そしてそれ故に約５０〜１００　ｇ　／ ｃｄの力が植物材料に加えられる。この力は、植物材料に直接に又は押板を介し ておもりを置くことにより、あるいは押仮にバネの力をかけることにより、ある いは押板を手でおさえることにより適用することができる。

この運転の間、植物材料は多数の切片に切断され、そしてウジフグ１中に蓄積し 、そして次にカバー１０及び円板３が取り外されそして切片が回収される。

第４〜６図は、第１図に示す具体例の変形を示す、この変形においては、円板５ ３が４個の孔５４を有し、そしてそれ故に４個のブレード５５が円板５３上にネ ジ５７により取り付けられる。

この変形においてはブレード５５が直線状の刃先を有する。この場合、植物材料 の「滑空」を促進するため、第５図に示すように、ブレード５５、そしてそれ故 に孔５４は、円板５３の接線に対して直角ではない角度で配置される。

第６図は、第５図に示す板５３の第５図中線Ｂ−Ｂがら見た断面図を示す。第６ 図に示す具体例においては、ブレード５５はスペーサー５６を介して板５３に取 り付けられる。このスペーサー５６の目的は、第１図に示す具体例の記載におい て詳細に説明した通りである。第４図に示す変形において、円板５３及びその上 に取り付けられたブレード５５はハウジング５１中に収容される。ハウジング５ １は窓５９を有し、これを通してハウジング５１の内部を観察して、例えばその 中に蓄積された切片の量を決定することができる。ハウジング５１はまた空気濾 過機６３を付した空気導入チューブ６２を有する。従って、運転の開始前に装置 全体が殺菌されておれば、空気濾過機６３及び導入チューブ６２を通して無菌空 気を導入することにより、運転の間ハウジング５１の内部を無菌条件下に維持す ることができる。

なお、装置全体を金属で作ることができ、そしてこうして加熱、例えば蒸気によ り殺菌することができる。

ハウジング５１外部に設けられる電気モーター５２のごとき駆動ユニットから柔 軟性駆動シャフト６１を介して伝達される駆動力により円板５３が回転する。

第４図に示される装置はさらに、植物材料が供給される入口６０、及び植物切片 が回収される出口６１を有する。この変形において、柔軟性駆動シャフト６４の 存在を考慮して、植物材料の導入を容易にするために入口６０は傾斜している。

第４図に示される装置は第１図に示される装置について詳細に記載したのと同様 にして用いることができる。

さらに、第４図に示される装置は好ましくは、液体媒体、例えば水、緩衝液、植 物組織培養用培地等の中で植物材料を切断するために用いることができる。この 場合、液体媒体及び植物材料片は入口６０を通して導入され、そして切断された 植物切片を含有する液体媒体は出口６２を通して取り出される。

第７図は、本発明の方法において使用される装置の具体例を模式的に示しており 、この装置はハウジング１１、該ハウジング１１に固定された複数の案内板１２ 、該案内板１２の間に且つそれと平行に配置された可動切断要素１４、及び押板 １５を有する。切断要素１４は通常、その周囲に１又は複数の刃先を有する円板 であり、そして回転し、往復し又は振動して植物材料を切断するように駆動され る。

この具体例の好ましい変法においては、第７図に示すように、切断要素は円板１ ４であってその周囲に刃先１７を有する。

円形切断要素１４は回転シャフト１３に固定されており、該回転シャフトは各案 内板１２中の孔を通って伸びそして駆動ユニット１８により回転される。ハウジ ング１１は植物材料を供給するための入口１６、及び切片を取り出すための出口 １７を有する。

この装置の運転においては、植物材料片が入口１６を通して供給され、そして該 植物材料は押板１５により案内板１２に輸送される。この押板は、第７図に示す ように入口１６の後方の位置から案内板１２に近い位置に手動で又は機械的に動 かされ、そして植物材料片を隣接する２つの案内板１２の間の空間に押し込み、 そこで２枚の案内板１２の間に配置された回転する円形切断要素１４により植物 材料片が切断される。

第８図は、本発明の方法において使用される装置の他の具体例を模式的に示し、 この装置はハウジング１９、切断要素２０及び２１並びに押板２２を有する。ハ ウジング１９は植物材料を該ハウジング１９に供給するための入口２２及び切断 された植物切片を該ハウジング１９から取り出すための出口２３を備えている。

切断要素は２個のサブ要素、すなわちハウジング１９に固定された不動サブ要素 ２０及び可動サブ要素２１である。サブ要素２０及び２１のそれぞれは、各サブ 要素の２つの表面の交叉により形成される複数の刃先を有する。可動サブ要素２ １の刃先を構成する１つの表面は不動サブ要素２０の刃先を構成する１つの表面 と滑り接触している。サブ要素２０及び２１のそれぞれは、例えば、多数の孔ま たは穴、例えば長い孔又は円い穴を有する金属板により容易に構成することがで きる。この場合、刃先は板２０又は２１の１つの表面と前記孔の内側の表面との 交叉により形成される。あるいは、サブ要素２０及び２１は、少なくとも２つの 角を有しそして相互に平行に配置された複数の棒の列により形成することができ る。

好ましくは、植物材料の動きの方向に関して不動サブ要素２０は上流に配置され そして可動サブ要素２１は下流に配置される。刃先への植物材料の接近を促進す るため、第８図に示すように、上流のサブ要素２０の刃先の反対側は丸みを有す るか又は先細の形状を有する。

第８図に示す装置は例７に示した装置と同様に運転されるが、植物材料を切断す るために可動サブ要素２１が回転し、往復し又は振動する。

第９図及び第１０図は本発明の装置の他の具体例を示し、この装置はハウジング ２４、間隔を置いて配置された少な（とも一対のローラー２５、該ローラー２５ の下流に配置された切断要素２７、及び押板２８を有する。この具体例において は、植物材料はローラ一対２５の動きにより切断要素に押し付けられる。

切断要素２７は、典型的にはその周囲に刃先を有する板であり、ローラー２５の 軸に対して垂直に配置され、そしてローラー２５の軸に平行な軸のまわりに回転 するか、又は往復運動する。

好ましい態様において、切断要素２７はそれぞれがその周囲に刃先を有する多数 の円板により構成され、これらの板はローラー２５の軸に平行に配置されたシャ フト２６に固定されそして電気モーター（示してない）のごとき駆動ユニットに より駆動される。第１０図に示す好ましい態様において、ローラー２５はその表 面に円周状の溝３１を備えており、そして円形切断要素２７は該溝３１にはまる がしかしそれに接触しない、この配置において、切断要素２７は、切断要素２７ とローラーとの間の接触を回避しながら植物材料を切断する。第１０図は、第９ 図の線Ｃ−Ｃにそってのローラー２５及び切断要素２７の断面図である。

第９図に示す装置は例７の装置について詳細に記載したのと同様に運転されるが 、押板２８により輸送された植物材料は切断要素２７に押し付けられる。この目 的のため、ローラー２５のそれぞれは、電気モーターのごとき駆動ユニット（示 してない）により他方のローラー２５とは逆の方向に回転することによって植物 材料を切断要素に押し付ける。なお、切断要素２７は、電気モーターのごとき駆 動ユニット（示してない）によりいずれの方向にも回転せしめることができる。

第９図に示される具体例の変形として、回転する円形切断要素の代りに、植物材 料の動きの方向にそって往復する切断要素を用いることができる。さらに、切断 要素を、相互に対向する刃先を有しそしてローラーの軸の平面に平行な２個の切 断板から構成することができる。この場合、切断板の１方はハウジングに固定さ れそして他方は往復運動し、こうして切断要素が離れて窓を形成する間に植物材 料がローラーの回転により該窓を通して送られそして前記刃先が相互に接触する ときに該植物材料が切断されるようにすることができる。

第１１図及び第１２図は本発明の方法のための装置の他の具体例を模式的に示す 。第１１図に示される装置は第９図に示される装置と類似するが、第１１図にお いては切断要素がそれぞれ周囲に刃先を有する回転する円板であり、そして第１ ２図に示すように一対の平行ローラー３２の間に配置されている。ローラー３２ はその表面上に円周状溝３４を有し、そして切断要素３３は線溝３４にはまるが しかしそれと接触しない。

第１３図に示す装置において、ローラー３２はかぎ３５を有する。

なお、これらのかぎは第９図及び第１１図に示す装置にも設けることができる。

この構成は、植物材料が切断されることなくハウジングの壁とローラーの表面と の間の空間に入り込むのを防止し、そして植物材料をローラーの上流点にもどす 。

第１４図は本発明の方法のための装置の他の具体例を模式的に示す、この装置は 少な（とも２個のローラーを有し、その一方はその表面のまわりに円周状溝３７ を有し、そして他方は反対のローラーの溝３７の高さとは異る高さに円周状溝３ ８を有する。各溝はその底から突出する円形切断要素を有する。

例１５は本発明の方法において使用される装置の他のタイプを示し、この装置は 入口４４及び出口４５を有するハウジング４１、切断要素４２、並びに押板４３ を有する。この装置において、切断要素４２はそれぞれが刃先を有する多数の板 から構成される。

これらの切断要素４２は平行に配置されそして同じ方向を向いている。あるいは 、格子状に配置されそして同じ方向を向いていてもよい。この装置の操作におい ては、植物材料が入口４４から供給され、そして実質的な量の植物材料がハウジ ング４１に蓄積された後、押板４３が手動で又は機械的に入口４４の後方の位置 から切断要素４２に近い位置に動かされ、そしてそれ故に植物材料が切断要素４ ２に動かされ、刃先４６に対して押し付けられそして切片に切断される。切断さ れた切片は出口４５から取り出される。しかしながらこの態様においては隣接す る切断要素４２間の空間が切断された植物切片により閉塞されることが時々ある 。

この問題点を解決するため、第１６図に示す変形が提供される。この装置は第１ ５図に示す装置に類似するが、切断要素４９が放射状に配置されている。この態 様においては押板４７が凸形表面を有し、この表面は切断要素４９の刃先により 形成される凹形と一致している。ハウジング４８は好ましくは円筒状である。

第１５図及び第１６図において、植物材料は押板４３又は４７により切断要素４ ６又は４９に動かされるが、しかし他の態様においては切断要素を板４３又は４ ７に向けて動かして植物材料を押し付けそして切断することができる。この場合 、板４３又は４７は動かさない。

第７図〜第１６図に示す装置を、流体媒体を用いないで植物材料を切断すること に言及しながら詳細に説明したが、これらの装置は液体媒体中にある間に植物材 料を切断するために用いることもできる。この目的のため、この装置は、第１７ 図に模式的に示される様に、植物材料を含有する媒体の流路に挿入される。

第７図〜第１６図に示す装置は水平配置を有するが、垂直配置も可能である。

第７図〜第１６図に示す装置は好ましくは、側芽を有する植物、例えばバラ、ミ ニバラ、カーネーション、キク等から切片を調製するために用いられる。なお、 これらの植物のためには無傷の側芽を有する切片を調製すれば十分であり切片の 他の部分は破壊されてもよい。上記の装置は無傷の側芽を存する切片を提供する から、これらの装置の使用により上記の植物の植込み切片を多量に工業的に作成 することが可能になる。

第１８図〜第２２図は、流体媒体中に浮遊している間に植物材料を切断するため に設計された切断装置の２つのタイプを示す。

第１８図はバラｍ　（Ｒｏｓａ）に属する植物からの植込み切片の調製に特に適 する装置を示す。この装置は、好ましくは透明材料から作られたハウジング７４ 、電気モーターのごとき駆動ユニット（示してない）を収容した箱７５、該駆動 ユニットにより回転される回転シャフト７３、上部切断要素７１、及び下部切断 要素７２を有する。好ましくは、ハウジング７４は箱７５から脱着可能である。

第１８図に示すように、下部切断要素７２は好ましくは直線状のブレードであり 、そして上部切断要素は好ましくは弧状のブレードである。切断要素７１及び７ ２の両者はシャフト７３にその異る位置でそして好ましくは約１８０°Ｃの角度 で固定されている。

第１８図に示す装置の操作においては、植物材料及び液体媒体、例えば水、緩衝 液又は培地がハウジング７４に導入され、そして切断要素７１及び７２が所望の 回転速度で所望の時間にわたり回転される。バラの切片の調製のためには、例え ば、切断要素７１及び７２は５０〜１１００００ｒｐ、好ましくは５００〜５０ ００ｒｐｍで０．１〜１００秒間、好ましくは０．５〜２０秒間回転される。

第１９図は、液体媒体中での植物切片の調製のために有用な他の装置を示す。こ の装置はハウジング８１、回転シャフト８４のボス部８５に取り付けられた切断 要素８６、及びじゃま板８９を有する。この装置はさらに、液体媒体中に含有さ れる切片を取り出すための出口９２、該装置に植物材料を供給するための入口９ １、及び空気濾過器９３を備えた空気チューブ９６を有する。

切断要素は２個の上部ブレード及び２個の下部ブレードを有する。第２１図に示 すように、２個の上部ブレードはボス部８５から１８０°の角度で伸び、そして ２個の下部ブレードはボス部８５から１８０°の角度で、しかし上部ブレードに 対して９０゜の角度で伸びる。第２０図は第１９図に示す切断要素の拡大図であ る。第２０図に示すように、下部ブレード８６はボス部８５に水平に固定される が、上部ブレード８６は水平面に対して一定の角度をもってそれに取り付けられ る。なお、この角度は変えることができ、そしてこの目的のため、第２０図及び 第２２図に示すように、上部ブレード８６はボス部８５に、各ブレード８６を２ 個の半円形片８８間に挟持し全体をボス部８５中の孔に挿入することにより取り 付けられる。ブレード８６及び半円形片８８はボス部８５に、ボス部８５の頂部 から挿入されるネジにより固定される。

第１９図に示す装置の操作において、植物材料及び液体媒体が入口９１を通して 導入され、そして切断要素、すなわちブレード８６が電気モーターのごとき駆動 ユニット８２により、柔軟性シャフト８３、シャフト８４及びボス部８５を介し て回転される。

ハウジング８１中の液体媒体の流れは、通常ハウジング８１中の相対する側に位 置するじゃま板８９により撹乱され、切断要素８６による植物材料の切断が助け られる。切断が終った後、液体媒体中に含まれる植物切片は出口９２から取り出 される。操作の間、空気濾過器９３及び空気チューブ９４を通して空気がハウジ ング８１に導入され、ハウジングの内部が無菌状態に維持される。ハウジング８ １に導入された空気はまた、液体媒体中の切片を出口９２を通して植物組織培養 用容器（示してない）に輸送するためにも使用される。

本発明に従えば、植物組織培養用の多量の植込み切片が汚染及び植物組織の壊死 を伴わないで容易に調製される０本発明の方法は、全植物体から、あるいは植物 の部分、例えば花、葉、茎、頂部、球根、塊茎、カルス等から切片を調製するた めに使用することができ、そして得られる切片は有用物質の製造のため又は完全 な植物の再生のために培養することができる。

ここで、本発明を実施例により詳細に説明する。

ス１１１に この実施例においては第１図に示す装置を使用し、刃先６と円板３の表面から伸 びる平面との間の間隔を２ｍに調整した。キャップ１０を有する装置全体をアル ミニウムフォイルに包み、そしてオートクレーブ殺菌した。次に、茎頂培養によ り得られた直径５〜８ＩＩｎのリリウム・ロンギフロルム（ＬｉｌｉｕｍＩｏｎ 　ｉｆｌｏｒｕｍ）のウィルス−フリー球根６０個を入口９を通して導入し、入 口中の球根の上に押板（示してない）を置き、そしてこの押板上におもりを置い て球根に４００ｇ／ｃＩｉの圧力をかけた。円板形の切断刃を３５Ｏｒｐｍの速 度で回転せしめた。切片を１！のミニ−ジャーファーメンタ−中で１００％０□ を通気しながら１５週間培養し、そして直径約３ｔｍの球根２３６０個を得た。

実】１１４ 実施例１で使用したのと同じ装置を使用したが、刃先と円板の表面から伸びる平 面との間の間隔を２−に調整した。

直径２８ｍａ＋及び長さ６５ｍのジャガイモの塊を入口９を通して挿入し、そし てこの塊に４５　ｇ　／ｄの圧力をかけた０回転速度を２Ｏｒｐｍと４０Ｏｒｐ ｍとの間で変化せしめた０回転速度の関数としての切片の厚さ及びそのバラツキ を第２３図に示す、第２３図かられかるように、１１００ｒｐと３０Ｏｒｐｍと の間の回転速度が均一な厚さを有する切片を提供した。

１１桝１ 例２に記載したのと同じ方法を用いたが、回転速度を３５０ｒｐ−に調整し、そ してジャガイモ塊にかける圧力を５０ｇ／ＣＩｉと４００ｇ／ｃｄとの間で変化 せしめた。第２４図に示すように、２００　ｇ　／　ｃｄと３５０　ｇ　／　ｃ ｄとの間の圧力が均一な厚さを有する切片を提供した。

実施■玉 第４図に示す装置を用いてリリウム・ロンギフロルム（区い」」１虹叩）の球根 の切片を調製し、そして実施例１において得られた結果に類似する結果が得られ た。

１隻拠Ｓ ミニバラ・マリーアントワネットの側芽を、ガラス製培養ビン中の、３％シュー クロースを含有しそして０．３　ｍベンジルアデニンが補充されたムラシゲ・ス クーグ培地（ｐ）１５．７）に植え、そして２５°Ｃにて、１６時間の明期間（ ４０００ルツクス）及び８時間の暗照間の照明条件下で４週間培養して再生植物 を得た。第１８図に示す装置を用い、そしてその０．４２のハウジング７４に再 生植物１００本及び０．３２の液体培地を加えた。

切断要素を２００Ｏｒｐｍで回転させて植物を切断し、そして１０秒間で切断を 完了した。切片を、１戸ベンジルアデニンを補充した上記培地に接種し、そして 通気しながら４週間培養し、そして１本の出発再生植物から３．２４本の植物が 新たに得られた。

ｆ」Ｌ媚 実施例５において得られた再生植物１００本をメスを用いて手作業で切断し、そ して切片を実施例５のようにして培養した。切断に必要な時間は５時間であり、 そして１本の出発再生植物当り２．２８本の植物が得られた。

スＪｆＬｆＬ謂 上部ブレードがシャフトのボス部に水平に取り付けられておりそして上部ブレー ドがボス部に水平面に対して１５°の角度で取り付けられている第１９図に示す 装置に２１の培地を入れ、そして全体を１２１°Ｃにて１５分間オートクレーブ で殺菌した。冷却後、ミニバラの苗条１００本を入口９１を通してハウジング８ １に供給し、そして切断要素を１２００ｒｐｎ＋にて９０分間回転せしめた。そ の結果、９５％以上の苗条が鋭く切断され４〜５朧のサイズの約４００個の側芽 が生じた。培養した場合、これらの側芽から３５０本の植物が得られた。

１扇■工 実施例６に記載したのと同じ方法を反復したが、上部ブレードを水平面に対して ２０°傾斜せしめた。この場合、３〜４閤のサイズの側芽２６０個が得られた。

国際調査報告 Ｉｎｌ＊ｆｆ１Ｎｌ＊Ｍｊｌ　＆ｅｅｌｉｅａ＋ｌ＠、Ｎ、、ＰＣＴ／ＪＰＢ８ １０１２３２国際調査報告

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. １．植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置に供給して植物切片を調製し、ここで該切断装置は円板の 接線に対して一定の角度をもって配置された１又は複数の長い孔を有し、駆動ユ ニットにより回転する該円板、及び１又は複数のブレードを有し、該刃は前記円 板に固定されており、該ブレードの刃先が各孔の上方に該円板の該ブレードに近 い側の表面から延びる平面と該刃先との間に一定の間隔を置いて配置されている 、ことを特徴とする方法。
2. ２．前記ブレードが放射状に配置されておりそして弧状を有し、これによって植 物材料が滑切される、請求項１に記載の方法。
3. ３．前記ブレードがネジにより前記円板に取り外し可能に固定されている、請求 項１に記載の方法。
4. ４．前記ブレードがスペーサーにより前記円板から離されている、請求項１に記 載の方法。
5. ５．前記円板が容器内に配置されており、該板及び容器の両者が金属で作られて おり、これにより全体を加熱により殺菌することができる、請求項１に記載の方 法。
6. ６．前記ブレードの刃先と前記円板の該ブレードに近い側の表面から伸びる平面 との間の間隔が１〜４ｍｍであり、該板が１００〜４００ｒｐｍの速度で回転し 、そして切断されるべき植物が該ブレードに対して０〜５００ｇ／ｃｍの圧力で 押し付けられ、そしてこれらの条件が植物の種、植物の器官の種類及び切断され るべき植物の部分に依存して選択される、請求項１に記載の方法。
7. ７．植物の球根又は塊茎が切断される、請求項１に記載の方法。
8. ８．前記ブレードが、前記円板の直線に対して直角より小さい角度で配置されて いる、請求項１に記載の方法。
9. ９．植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付けることによって植物切片を調製し、ここで該切断装置は相互に 平行に配置された複数の案内板、及び該案内板の間に且つそれに平行して配置さ れた切断要素を有し、該切断要素が回転、往復又は振動して前記案内板の間を通 過する植物材料を該切断要素により切断する、ことを特徴とする方法。
10. １０．前記切断装置がさらに、それに固定された前記案内板及び切断要素を包囲 するハウジング並びに押板を有し、該押板が植物材料を切断要素に押し付け、こ れによって該植物材料が該案内板の間を通りそして該切断要素により切断される 、請求項９に記載の方法。
11. １１．前記切断要素が周囲に刃先を有する円板であり、該円板は前記案内板中の 孔を通って伸びる回転シャフトに固定されており、そして該シャフトが駆動ユニ ットにより回転する、請求項９に記載の方法。
12. １２．植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付けることにより植物切片を調製し、ここで該切断装置は、サブ− 要素の２つの平面の交叉により形成される複数の切刃を有する不動のサブ−要素 、及び可動サブ−要素の２つの表面の交叉により形成される複数の切刃を有する 可動サブ要素を有し、可動サブ要素の表面の一方が不動サブ−要素の表面の一方 と滑り接触しており、その結果不動サブ−要素に対する可動サブ要素の回転、往 復又は振動により、前記切断要素に押し付けられた植物材料を切断する、ことを 特徴とする方法。
13. １３．前記切断装置がさらに前記切断要素を包囲するハウジングを有し、前記不 動サブ要素が該ハウジングに固定されており、そしてさらに植物材料を切断要素 に押し付けるための押板を有する、請求項１２に記載の方法。
14. １４．植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に対して押し付け、ここで該切断要素は、一定の間隔を有しその間を通し て前記植物材料を輸送するための少なくとも一対の平行ローラー及び該ローラの 下流に配置された切断要素を有し、該切断要素が該ローラーの軸と平行な軸のま わりを回転し、又は往復して該ローラーにより輸送される植物材料を切断する、 ことを特徴とする方法。
15. １５．前記切断要素が、それぞれ周囲に刃先を有する円板でありそして駆動ユニ ットにより回転する回転シャフトに固定されている、請求項１４に記載の方法。
16. １６．前記ローラーが円周状溝を有しそして円板の刃先が該溝にはまるがしかし 相互に接触しない、請求項１５に記載の方法。
17. １７．前記装置がさらに、植物材料をローラーに向けて動かすための押板、並び に該ローラー、前記切断要素及び該押板を包囲するハウジングを有する、請求項 １４に記載の方法。
18. １８．植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付けることにより植物切片を調製レ、ここで該切断装置は一定の間 隔を有する少なくとも一対の平行ローラー、及び該ローラーの間に配置されてお りそして該ローラーの軸に平行なシャフトに固定されている切断要素を有し、該 シャフトが駆動ユニットにより回転する、ことを特徴とする方法。
19. １９．前記装置がさらに、植物材料を前記ローラーに向けて動かすための押板、 並びに該ローラー、切断要素及び該押板を包囲するハウジングを有する、請求項 １８に記載の方法。
20. ２０．前記ローラーが円周状溝を有し、そして前記刃の刃先が該溝にはまるが相 互に接触しない、請求項１８に記載の方法。
21. ２１．植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付け、ここで該切断装置は少なくとも２個のローラーを有し、該ロ ーラーの一方はその表面上に円周状に設けられた溝を有し、そして他方のローラ ーはその表面上に円周状に、相対するローラーのそれとは異る高さに設けられた 溝を有し、各溝はその底部から突出した円形の切断要素を有する、ことを特徴と する方法。
22. ２２．植物組織培養用の多数の植込み切片の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料を用意し、そして 該植物材料を切断装置の切断要素に押し付けるか又は切断装置の切断要素を該植 物材料に押し付け、ここで該装置は複数の切断要素を有し、該要素は平行になっ ていて該要素の刃先が同じ方向を向いているか、格子状になっており該要素の刃 先が同じ方向を向いているか、あるいは放射状に配置されていて該要素の刃先が 放射中心を向いている、ことを特徴とする方法。
23. ２３．前記切断要素が放射状に配列されておりそして該要素の刃先が凸形を有す るように配置されている、請求項２２に記載の方法。
24. ２４．前記装置がさらに、植物を前記切断要素に押し付けるための押板を有し、 そして該板の該要素に近い側の表面が次の様な形状、すなわち、該板がブレード に対して押し付けられた場合に該ブレードの刃先のすべてに該板の表面が接触す る様な形状を有している、請求項２２又は２３に記載の方法。
25. ２５．植物組織培養用の多数の植込み材料の調製方法であって、 殺菌された又は汚染されていない植物材料片を含む液体媒体を調製し、そして該 液体媒体中の植物材料を回転、往復又は振動する切断要素により切断して植物の 切片を調製する、ことを特徴とする方法。
26. ２６．前記方法が、請求項１，９，１２，１４，１８，２１又は２２に記載され ておりそして液体媒体が流れる流路に挿入されている装置を用いて行われる、請 求項２５に記載の方法。
27. ２７．前記植物材料が側芽を有する植物の茎である、請求項２５に記載の方法。
28. ２８．前記方法が、駆動ユニットにより回転する回転シャフトの上部及び下部に 取り付けられた切断要素を有する装置を用いて行われる、請求項２５に記載の方 法。
29. ２９．前記下部切断要素が前記シャフトから放射上に伸びる１又は複数のブレー ドを有する、請求項２８に記載の方法。
30. ３０．前記下部切断要素が前記シャフトに水平に固定されており、そして前記上 部切断要素が水平面に対して一定の角度をもって該シャフトに取り付けられてお り、この角度は変えることができる、請求項２８に記載の方法。
31. ３１．前記下部切断要素が前記シャフトに水平に固定されており、そして前記上 部切断要素が垂直方向に弧状となっている、請求項２８に記載の方法。
32. ３２．前記上記切断要素が、２個の半円形片の間にブレードを挟持しそしてこの 全体を前記シャフトのポス部の孔に挿入することにより前記シャフトに取り付け られたブレードを有する、請求項２８に記載の方法。
33. ３３．前記切断要素及びシャフトがハウジングに収容されており、そして該ハウ ジングがその内に１個又は複数個のじゃま板を有する、請求項２８に記載の方法 。
34. ３４．前記じゃま板と前記容器との間との角度を変えることができる、請求項２ ８に記載の方法。
35. ３５．前記ハウジングが、その頂壁に植物材料を供給するための入口を有し、該 入口が外側に傾斜している、請求項３３に記載の方法。
36. ３６．前記切断要素の回転速度が５０〜５００００ｒｐｍ、好ましくは５００〜 １００００ｒｐｍである、請求項２８に記載の方法。
37. ３７．前記植物材料が側芽を有する茎であり、そして切片が個別の側芽であるか 又は１個の側芽を有する切断された茎である、請求項２８に記載の方法。
38. ３８．前記植物材料がバラ属（Ｒｏｓａ）の材料である、請求項２８に記載の方 法。