JPH03264863A - Detecting method of gene - Google Patents

Detecting method of gene

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JPH03264863A
JPH03264863A JP6253290A JP6253290A JPH03264863A JP H03264863 A JPH03264863 A JP H03264863A JP 6253290 A JP6253290 A JP 6253290A JP 6253290 A JP6253290 A JP 6253290A JP H03264863 A JPH03264863 A JP H03264863A
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JP
Japan
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gene
particles
antibody
immobilized
dna
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JP6253290A
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Japanese (ja)
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Yoshio Ishimori
石森 義雄
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Toshiba Corp
Original Assignee
Toshiba Corp
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Abstract

PURPOSE:To detect an object gene in a short time and with high sensitivity by a safe and simple operation by a method wherein two or more kinds of gene probes connecting specifically with the object gene at different portions are immobilized by one kind. CONSTITUTION:A single stranded gene is prepared from a sample, two or more kinds of particles prepared by immobilizing, by one kind, two or more kinds of gene probes connecting specifically with an object gene at different portions and a particle prepared by immobilizing an antibody or part thereof recognizing a DNA-RNA hybrid are made to react with the gene, and the object gene existing in the sample is detected by utilizing the agglutination of the particles. The gene probes are not limited particularly, provided that they are hybridized specifically with a part of the gene sequence of the single stranded gene prepared in this way, when the object gene exists therein. Besides, the gene probes of two kinds or more which connect specifically with the object gene at different portions are used.

Description

【発明の詳細な説明】 [発明の目的] (産業上の利用分野) 本発明は試料中に存在する特定の遺伝子を特異的に検出
する方法に関する。
Detailed Description of the Invention [Object of the Invention] (Industrial Application Field) The present invention relates to a method for specifically detecting a particular gene present in a sample.

(従来の技術) 遺伝子(DNA)に刻み込まれた遺伝情報は、メツセン
ジャーRNAを介して蛋白質又は酵素として表現される
。この蛋白質や酵素の働きにより、様々な化合物が生成
され、それらの集合体として生物が存在している。ヒト
の遺伝子の総数は5〜lO万といわれている。それらの
遺伝子の中に何らかの異常や変化、例えば欠損や重複な
どか生じると、生成される蛋白質の特性、種類、量など
が変化し、結果として生体系のバランスか崩れて疾病を
引き起こすことになる。したがって、逆に病因となって
いる遺伝子を検出することにより、疾患の同定や予防が
できることになる。
(Prior Art) Genetic information imprinted in genes (DNA) is expressed as proteins or enzymes via messenger RNA. Through the action of these proteins and enzymes, various compounds are produced, and living things exist as aggregates of these compounds. The total number of human genes is said to be 50,000 to 10,000. If any abnormalities or changes occur in these genes, such as deletions or duplications, the characteristics, type, amount, etc. of the proteins produced will change, and as a result, the balance of the biological system will be disrupted, causing diseases. . Therefore, conversely, by detecting genes that cause disease, it becomes possible to identify and prevent diseases.

このように、近年の遺伝子工学の進歩に伴って、遺伝子
そのものに基づく診断(遺伝子診断と呼ばれている)が
可能になってきた。この遺伝子診断には、従来の診断法
と比較して、いくつかの特色がある。
As described above, with recent advances in genetic engineering, diagnosis based on genes themselves (referred to as genetic diagnosis) has become possible. This genetic diagnosis has several features compared to conventional diagnostic methods.

まず、遺伝子発現の機構を考えると、はとんどの生化学
的なレベルでの変化に先行して遺伝子上での変化が生じ
ていることが推定される。したがって、遺伝子診断では
、病気という表現型での変化に先立って、すなわち発症
前や病気の潜伏期又は極めて初期に、診断や予測ができ
ることが大きな特色である。
First, considering the mechanism of gene expression, it is presumed that genetic changes occur prior to changes at the biochemical level. Therefore, a major feature of genetic diagnosis is that diagnosis and prediction can be made prior to the phenotypic change of the disease, that is, before the onset of the disease, during the latent period of the disease, or at an extremely early stage.

また、遺伝性の疾患に関しては、生体内の細胞では全て
遺伝子は同一であるので、分析する臓器や組織には依存
しないことも特色の−っである。
Another feature of genetic diseases is that they do not depend on the organ or tissue being analyzed, since the genes are the same in all cells within the body.

このことは、特に胎児での診断では重要であり、妊婦か
ら羊水を採取し羊水中に浮遊している胎児の細胞を調べ
るだけで診断できる。
This is particularly important in fetal diagnosis, which can be diagnosed simply by collecting amniotic fluid from a pregnant woman and examining the fetal cells floating in the fluid.

以下、一般的な遺伝子診断の方法を簡単に説明する。す
なわち、試料から遺伝子を抽出し、適当な制限酵素で切
断し、電気泳動後、サザンブロ・ソトを行い、目的とす
る遺伝子に対応する遺伝子プローブ(通常は、放射性同
位元素でラベルされている)をハイブリダイズさせ、そ
の後に低温でX線フィルムに感光させて目的とする遺伝
子の有無を確認する。しかし、この方法では、放射性同
位元素を使用することから、検出場所が限定され、試薬
の取扱いにも充分注意しなければならない。
Below, common genetic diagnosis methods will be briefly explained. That is, a gene is extracted from a sample, cut with an appropriate restriction enzyme, electrophoresed, and then subjected to Southern blotting to generate a gene probe (usually labeled with a radioactive isotope) corresponding to the gene of interest. After hybridization, the DNA is exposed to X-ray film at low temperatures to confirm the presence or absence of the target gene. However, since this method uses radioactive isotopes, detection locations are limited and the reagents must be handled with great care.

この点を改善するために、放射性同位元素に代わる安全
なラベル剤の開発が望まれている。すでに、アビジン−
ビオチン結合を利用するもの、酵素や蛍光物質を使用す
るものなどか提案されている。しかし、いずれも感度の
点て放射性同位元素を超えるまでには至っていない。ま
た、遺伝子検出までに少なくとも2〜3日間を要し、測
定操作もかなり煩雑である。
In order to improve this point, it is desired to develop a safe labeling agent to replace radioactive isotopes. Already, avidin-
Proposals include methods that utilize biotin binding, and methods that use enzymes and fluorescent substances. However, none of these methods has reached the point where it exceeds that of radioactive isotopes in terms of sensitivity. Furthermore, it takes at least 2 to 3 days to detect the gene, and the measurement operation is also quite complicated.

一方、特許出願公表昭83−502875号公報には、
目的とする核酸配列に対して相補的な核酸配列を結合し
た粒子を、試料と反応させ、粒子の凝集を利用して試料
中に存在する目的の核酸配列を検出する、核酸の検出方
法が記載されている。また、この公報には、目的とする
核酸配列の異なった部位に対してそれぞれ相補的な2種
以上の遺伝子プローブのうち1種ずつを固定化した2種
以上の粒子を用いる方法が図示されている。しかし、本
発明者らかこの方法を検討した結果によれば、核酸配列
に対する相補的な核酸配列を結合した粒子を用いただけ
ては、粒子の凝集速度が遅く、放射性同位元素でラベル
された遺伝子プローブを用いる従来の方法と同程度の感
度を得るためには、数時間の反応時間か必要であるとい
う問題があった。
On the other hand, in patent application publication No. 83-502875,
A nucleic acid detection method is described in which particles to which a nucleic acid sequence complementary to a target nucleic acid sequence is bound are reacted with a sample, and the target nucleic acid sequence present in the sample is detected using particle aggregation. has been done. This publication also illustrates a method using two or more types of particles on which one of two or more types of gene probes each complementary to different sites of the target nucleic acid sequence is immobilized. There is. However, according to the results of studies conducted by the present inventors on this method, the aggregation rate of particles is slow when using particles bound with a complementary nucleic acid sequence to the nucleic acid sequence, and genes labeled with radioactive isotopes are There is a problem in that several hours of reaction time are required to obtain the same level of sensitivity as conventional methods using probes.

(発明か解決しようとする課題) 本発明は前記問題点を解決するためになされたものであ
り、安全かつ簡便な操作により短時間で実施でき、しか
も高感度で目的とする遺伝子を検出することができる遺
伝子検出方法を提供することを目的とする。
(Problems to be Solved by the Invention) The present invention has been made to solve the above-mentioned problems, and is capable of detecting a target gene with high sensitivity while being able to be carried out in a short time using safe and simple operations. The purpose of this study is to provide a gene detection method that allows for the detection of genes.

[発明の構成] (課題を解決するための手段) 本発明の遺伝子検出方法は、試料から1本鎖遺伝子を調
製し、目的とする遺伝子に対して異なった部位で特異的
に結合する2種以上の遺伝子プローブのうち1種ずつを
固定化した2種以上の粒子、及びDNA−RNAハイブ
リッドを特異的に認識する抗体又は抗体の一部を固定化
した粒子を反応させ、前記粒子の凝集を利用して試料中
に存在する目的の遺伝子を検出することを特徴とするも
のである。
[Structure of the Invention] (Means for Solving the Problems) The gene detection method of the present invention involves preparing a single-stranded gene from a sample, and detecting two types of genes that specifically bind to the target gene at different sites. Two or more types of particles on which one type of each of the above gene probes is immobilized and particles on which an antibody or a part of the antibody that specifically recognizes a DNA-RNA hybrid is immobilized are reacted to prevent aggregation of the particles. This method is characterized in that it is used to detect a gene of interest present in a sample.

本発明において、試料から1本鎖遺伝子を調製するまで
の操作は常法に従って行う(例えば、臨床検査、 Vo
l、32.No、4.p、401(1988)参照)。
In the present invention, operations up to the preparation of single-stranded genes from samples are performed according to conventional methods (e.g., clinical tests, Vo
l, 32. No, 4. p. 401 (1988)).

すなわち、試料から2本鎖遺伝子を抽出し、制限酵素で
断片化した後、例えばアルカリ変性して1本鎖遺伝子を
調製する。
That is, a double-stranded gene is extracted from a sample, fragmented with a restriction enzyme, and then denatured with an alkali, for example, to prepare a single-stranded gene.

本発明において、遺伝子プローブは、前記のようにして
調製された1本鎖遺伝子中に目的とする遺伝子が存在す
る場合、その遺伝子配列の一部と特異的にハイブリダイ
ズするものであれば特に限定されない。また、本発明に
おいては、目的とする遺伝子に対して異なった部位で特
異的に結合する2種以上の遺伝子プローブが用いられる
In the present invention, when the gene of interest is present in the single-stranded gene prepared as described above, the gene probe is particularly limited as long as it specifically hybridizes with a part of the gene sequence. Not done. Furthermore, in the present invention, two or more types of gene probes that specifically bind to the gene of interest at different sites are used.

本発明において、DNA−RNA7\イブリ・ンドを特
異的に認識する抗体又は抗体の一部は、IgG、IgE
、IgD、IgA、IgMなどのいかなるクラス又はサ
ブクラスでもよい。なお、感度の向上という点からは、
ポリクローナル抗体よりもモノクローナル抗体を用いる
ことが好ましい。
In the present invention, the antibody or a part of the antibody that specifically recognizes DNA-RNA7\ibrynd is IgG, IgE
, IgD, IgA, IgM, etc. In addition, from the point of view of improving sensitivity,
It is preferable to use monoclonal antibodies rather than polyclonal antibodies.

また、抗体のFc部分を除去して得たF (ab’) 
2抗体でもよい。
In addition, F (ab') obtained by removing the Fc part of the antibody
Two antibodies may be used.

本発明において、遺伝子プローブを固定化するための粒
子、及びDNA−RNAハイブリッドを特異的に認識す
る抗体又は抗体の一部を固定化するための粒子を構成す
る材料は、ハイブリダイゼイションさせる温度で安定で
あれば特に限定されないが、一般的にはメチルメタクリ
レートなどを主原料とするラテックス粒子などが望まし
い。ラテックス粒子は、メチルメタクリレートなどを主
原料として、通常の乳化重合により調製することができ
る。
In the present invention, the materials constituting the particles for immobilizing the gene probe and the particles for immobilizing the antibody or a part of the antibody that specifically recognizes the DNA-RNA hybrid are heated at a temperature for hybridization. Although there is no particular limitation as long as it is stable, latex particles made mainly of methyl methacrylate or the like are generally preferred. Latex particles can be prepared by ordinary emulsion polymerization using methyl methacrylate or the like as a main raw material.

また、RNA遺伝子プローブ及び抗体は、例えばカルボ
ジイミド法によりラテックス粒子の表面に固定化するこ
とができる(r免疫測定法の新しい活用事例と診断試薬
・治療薬開発への応用」(経営教育出版発行) 、pp
、105−113.1986参照)。
In addition, RNA gene probes and antibodies can be immobilized on the surface of latex particles using, for example, the carbodiimide method (rNew use cases of immunoassay methods and applications to the development of diagnostic reagents and therapeutic drugs" (published by Management Education Publishing) , pp.
, 105-113.1986).

以下、本発明の遺伝子検出方法をより詳細に説明する。Hereinafter, the gene detection method of the present invention will be explained in more detail.

ここでは、ヒト血液から肝炎ウィルス(HB V)遺伝
子を検出する場合を例として説明する。なお、予め、H
BV遺伝子に対する2種類のRNA遺伝子プローブのう
ち1種ずつを固定化した2種類のラテックス粒子、及び
DNA−RNAハイブリッドを特異的に認識する抗体を
固定化したラテックス粒子を調製しておく。
Here, the case of detecting the hepatitis virus (HBV) gene from human blood will be explained as an example. In addition, in advance, H
Two types of latex particles on which one of two types of RNA gene probes for the BV gene are immobilized, and latex particles on which an antibody that specifically recognizes a DNA-RNA hybrid is immobilized are prepared in advance.

まず、常法に従って、試料(ヒト血清)から2本鎖DN
Aを抽出し、これを適当な制限酵素で切断して断片化し
た後、電気原動て分画し、アルカリ変性して1本鎖DN
Aを調製する。このとき、1本鎖DNAどうしのセルフ
ハイブリダイゼーションを防止するために、反応は70
℃以上で行うことか望ましい。これを中和した後、50
〜60℃まで冷却し、HBV遺伝子に対する2種類のR
NA遺伝子プローブのうち1種ずつを固定化した2種類
のラテックス粒子を、50%ホルムアミド存在下で反応
させる。試料中にHBV遺伝が存在する場合には、この
反応によってDNA−RNAハイブリッドが形成され、
ラテックスの凝集か起こる。次いで、適当な温度まで冷
却した後、DNA−RNAハイブリッドを特異的に認識
する抗体を固定化したラテックス粒子を加えて一定時間
反応させる。
First, double-stranded DNA was extracted from a sample (human serum) according to a conventional method.
A is extracted, fragmented by cutting it with an appropriate restriction enzyme, fractionated by electrophoresis, and denatured with alkaline to obtain single-stranded DNA.
Prepare A. At this time, in order to prevent self-hybridization between single-stranded DNAs, the reaction was
It is preferable to carry out the test at temperatures above ℃. After neutralizing this, 50
Cool to ~60°C and test with two types of R against the HBV gene.
Two types of latex particles each immobilized with one type of NA gene probe are reacted in the presence of 50% formamide. If HBV genes are present in the sample, a DNA-RNA hybrid is formed by this reaction,
Latex agglomeration occurs. Next, after cooling to an appropriate temperature, latex particles immobilized with an antibody that specifically recognizes the DNA-RNA hybrid are added and reacted for a certain period of time.

DNA−RNAハイブリッドが形成されている場合には
、この反応により更にラテックスの凝集が起こる。した
がって、反応後に適当な分光光度計で反応溶酸の濁度変
化(ラテックス粒子の凝集に対応する)を測定すること
により、HBV遺伝子の有無を判定することかできる。
This reaction further causes latex aggregation if a DNA-RNA hybrid is formed. Therefore, the presence or absence of the HBV gene can be determined by measuring the change in turbidity of the reaction solution (corresponding to the aggregation of latex particles) using a suitable spectrophotometer after the reaction.

前述した各々の反応に要する時間・温度・pHなどの反
応条件は、被検遺伝子、対応する遺伝子プローブの種類
(長さ、塩基配列など)、ラテックス粒子の特性(特に
粒径)、更にはラテックス粒子の表面に固定化されるD
NA−RNAハイブリッドを特異的に認識する抗体又は
抗体の一部の種類、量、純度などによって異なる。この
ため、個々の場合に応じて、最適反応条件及び最適緩衝
液を設定することが望ましい。
The reaction conditions such as time, temperature, and pH required for each of the above-mentioned reactions depend on the gene to be tested, the type of corresponding gene probe (length, base sequence, etc.), the characteristics of the latex particles (particularly particle size), and even the latex. D immobilized on the surface of the particle
It varies depending on the type, amount, purity, etc. of the antibody or part of the antibody that specifically recognizes the NA-RNA hybrid. Therefore, it is desirable to set optimal reaction conditions and buffer solutions depending on each individual case.

(作 用) 本発明の遺伝子検出方法では、目的とする遺伝子に対し
て異なった部位で特異的に結合する2種以上の遺伝子プ
ローブのうち1種ずつを固定化した2種以上の粒子だけ
でなく、DNA−RNAハイブリッドを特異的に認識す
る抗体又は抗体の一部を固定化した粒子を用いているの
で、反応に伴って粒子の凝集か極めて速やか起こる。ま
た、ハイブリッドなどを分離する操作を行わなくてもよ
いので、測定時間か短くてすみ、装置化も容易である。
(Function) The gene detection method of the present invention uses only two or more types of particles on which one of two or more types of gene probes that specifically bind to the target gene at different sites is immobilized. However, since particles on which an antibody or a portion of an antibody that specifically recognizes a DNA-RNA hybrid is immobilized are used, aggregation of particles occurs extremely quickly as a result of the reaction. In addition, since there is no need to perform an operation to separate hybrids, the measurement time is shortened and the device is easy to implement.

そして、遺伝子プローブのラベル剤として放射性同位元
素を使用する従来広と同程度の感度が得られる。しかも
、放射性同位元素を使用しないので、測定場所を選択す
る必要もなく安全に操作できる。
Furthermore, it is possible to obtain the same level of sensitivity as conventional methods that use radioactive isotopes as labeling agents for gene probes. Furthermore, since no radioactive isotopes are used, there is no need to select a measurement location, and operation is safe.

(実施例) 以下、本発明の詳細な説明する。(Example) The present invention will be explained in detail below.

■ラテックス粒子の調製 メチルメタクリレートなどを主原料として、乳化重合に
よりラテックス粒子を調製した。このラテックス粒子の
粒径は約10 Or+mてあった。
■Preparation of latex particles Latex particles were prepared by emulsion polymerization using methyl methacrylate as the main raw material. The particle size of the latex particles was about 10 Or+m.

■モノクローナル抗−DNA−RNAノ\イブリッド認
識抗体の修飾、及びそのラテックス粒子上への固定化 モノクローナル抗−DNA−RNAハイブリッド認識抗
体(サブクラス:IgG、)を調製し、その100μg
を0.1Mの酢酸緩衝液(p H4,5)て透析し、ペ
プシン(シグマ社製)10μgを添加し、37℃で1時
間反応させた。次に、高速液体クロマトグラフィーによ
りF (ab’) 2分画のみを分取した。このタンパ
ク分画の溶液の容量は9.5mj7゜濃度は0D280
カー m lであった。
■Modification of monoclonal anti-DNA-RNA/hybrid-recognizing antibody and its immobilization on latex particles Prepare monoclonal anti-DNA-RNA hybrid-recognizing antibody (subclass: IgG), and 100 μg of it
The mixture was dialyzed against 0.1 M acetate buffer (pH 4,5), 10 μg of pepsin (manufactured by Sigma) was added, and the mixture was reacted at 37° C. for 1 hour. Next, only the F (ab') 2 fraction was collected by high performance liquid chromatography. The volume of this protein fraction solution is 9.5mj7゜Concentration is 0D280
It was a car.

ラテックス粒子懸濁液(50mg/mD)に、ε−アミ
ノカプロン酸及び水溶性カルボジイミドを加え、4℃で
2時間撹拌して反応させた。充分に遠心洗浄した後、前
記修飾抗体の溶液を加え、10℃で24時間撹拌して反
応させた。反応後、ゼラチン・ベロナール緩衝液(以下
、GVB−と記す)で3回洗浄した。最後に、得られた
ラテックス粒子をGVB  2mρに懸濁させて使用す
るまで4℃で保存した。
ε-Aminocaproic acid and water-soluble carbodiimide were added to the latex particle suspension (50 mg/mD), and the mixture was stirred at 4° C. for 2 hours to react. After thorough centrifugal washing, the solution of the modified antibody was added and stirred at 10° C. for 24 hours to react. After the reaction, it was washed three times with gelatin veronal buffer (hereinafter referred to as GVB-). Finally, the obtained latex particles were suspended in GVB 2mρ and stored at 4°C until use.

■RNA遺伝子プローブのラテックス粒子上への固定化 HBV遺伝子に対する2種類の、RN A遺伝子プロー
ブを調製した。
(2) Immobilization of RNA gene probes on latex particles Two types of RNA gene probes for the HBV gene were prepared.

ラテックス粒子懸濁a (50m g / ml )に
、ε−アミノカプロン酸及び水溶性カルボジイミドを加
え、4℃で2時間撹拌して反応させた。充分に遠心洗浄
した後、2種類のRNA遺伝子プローブの溶液を別々に
加え、10℃で24時間撹拌して反応させた。反応後、
ゼラチン・ベロナール緩?に1M(以下、GVB−と記
す)で3回洗浄した。最後に、得られたラテックス粒子
をGVB  2rrlに懸濁させて使用するまで4℃で
保存した。
ε-aminocaproic acid and water-soluble carbodiimide were added to latex particle suspension a (50 mg/ml), and the mixture was stirred at 4°C for 2 hours to react. After thorough centrifugal washing, two types of RNA gene probe solutions were added separately and stirred at 10°C for 24 hours to react. After the reaction,
Gelatin veronal loose? It was washed three times with 1M (hereinafter referred to as GVB-). Finally, the obtained latex particles were suspended in 2rrl of GVB and stored at 4°C until use.

■ヒト血清中のHBV遺伝子の検出 前述したRNA遺伝子プローブ固定化ラテックス粒子及
びモノクローナル抗−D N A −RN A ハイブ
リッド認識抗体固定化ラテックス粒子を用い、ヒト血清
中の遺伝子からHBV道伝子の検出を試みた。
■Detection of HBV genes in human serum Detection of HBV gene from genes in human serum using the aforementioned RNA gene probe immobilized latex particles and monoclonal anti-DNA-RNA hybrid recognition antibody immobilized latex particles. I tried.

常法(臨床検査、 Vol、32.No、4.p、40
1(1988)参照)に従い、ヒト血清から2本鎖DN
Aを抽出し、制限酵素Pstlて断片化した後、アルカ
リ変性して1本鎖DNAを調製し、これを中和した。1
mlの50%ホルムアミド含有GVB”  (GVBに
0 、5m MのMgCj!2と0.15m MのCa
Cl2とを添加したもの)中において、これに2種類の
RNA遺伝子プローブ固定化ラテックス粒子を加え、6
0℃で30分間反応させてハイブリダイズさせた。次に
、GVE+で反応液を10倍に希釈し、予めGVB”で
10倍に希釈したモノクローナル抗−DNA−RNAハ
イブリッド認識抗体固定化ラテックス粒子の懸濁液10
0μρを添加し、37℃で10分間インキュベートした
。この反応後、分光光度計て850niにおける吸光度
の増加(ラテックス粒子の凝集に対応する)を測定した
。なお、対照として、試料(ヒト血清)から得られる遺
伝子のみを除いた反応溶液の吸光度を用いた。
Conventional method (clinical examination, Vol. 32. No. 4. p. 40
(1988)), double-stranded DNA was extracted from human serum.
A was extracted, fragmented using the restriction enzyme Pstl, and then denatured with alkali to prepare single-stranded DNA, which was neutralized. 1
ml of GVB containing 50% formamide (GVB containing 0, 5 m M MgCj!2 and 0.15 m M Ca
Two types of RNA gene probe-immobilized latex particles were added to the solution (added with Cl2), and 6
Hybridization was carried out by reacting at 0°C for 30 minutes. Next, the reaction solution was diluted 10 times with GVE+, and a suspension of latex particles immobilized with a monoclonal anti-DNA-RNA hybrid recognition antibody previously diluted 10 times with GVB'' was added.
0 μρ was added and incubated at 37° C. for 10 minutes. After this reaction, the increase in absorbance at 850 ni (corresponding to agglomeration of latex particles) was measured using a spectrophotometer. As a control, the absorbance of a reaction solution obtained from a sample (human serum) excluding only the gene was used.

第1表にlO検体の相対蛍光強度を示す。このうち、#
l〜7は肝炎患者、#8〜10は正常人の血清試料であ
る。
Table 1 shows the relative fluorescence intensities of the IO samples. this house,#
Samples #1 to 7 are serum samples from patients with hepatitis, #8 to #10 are serum samples from normal subjects.

第1表から明らかなように、肝炎患者のみからHBV遺
伝子が検出されていることがわかる。
As is clear from Table 1, it can be seen that the HBV gene was detected only from hepatitis patients.

また、標準のHBV遺伝子に対する検出感度を調べたと
ころ、約5pgのDNAJitから検出可能であり、放
射性同位元素でラベルした遺伝子プローブを用いる従来
法とほぼ同感度であることが示された。
Furthermore, when the detection sensitivity for the standard HBV gene was investigated, it was shown that it was possible to detect from about 5 pg of DNAJit, which was approximately the same sensitivity as the conventional method using a gene probe labeled with a radioactive isotope.

[発明の効果] 以上詳述したように本発明の遺伝子検出方法によれば、
安全かつ簡便な操作により短時間で、目的とする遺伝子
を高感度に検出することかできる。
[Effect of the invention] As detailed above, according to the gene detection method of the present invention,
Genes of interest can be detected with high sensitivity in a short time using safe and simple operations.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] 試料から1本鎖遺伝子を調製し、目的とする遺伝子に対
して異なった部位で特異的に結合する2種以上の遺伝子
プローブのうち1種ずつを固定化した2種以上の粒子、
及びDNA−RNAハイブリッドを特異的に認識する抗
体又は抗体の一部を固定化した粒子を反応させ、前記粒
子の凝集を利用して試料中に存在する目的の遺伝子を検
出することを特徴とする遺伝子検出方法。
A single-stranded gene is prepared from a sample, and two or more particles each have immobilized one of two or more gene probes that specifically bind to the target gene at different sites;
and a particle on which an antibody or a part of the antibody that specifically recognizes the DNA-RNA hybrid is immobilized is reacted, and the target gene present in the sample is detected using the aggregation of the particles. Gene detection method.
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