JPH03255028A - 免疫抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野］ 本発明は免疫抑制剤、特に臓器移植における拒絶反応を
防止し得る免疫抑制剤に関する。

［従来の技術およびその問題点］ 肝臓・心臓・腎臓などの臓器はそれぞれ生命の維持に必
要な働きをしている。これらの臓器の機能が生命を支え
ることができないレベルまで低下したとき、すなわち、
肝硬変や心筋症や慢性腎炎の末期には、人工臓器でその
臓器の機能を補うか、臓器移植を行なって機能不全に陥
った臓器を取り換えることによってのみ生存が可能とな
る。しかし、人工腎臓以外の人工臓器は、生命を長期に
わたって支えることができるところまでは発達していな
い。人工腎臓にしても病院に備えつけられている大きな
機械であり、それを体につけて社会生活ができるもので
はないし、その働きも老廃物の除去には有効であるが、
本来の腎臓がもっている、エリスロポイエチンのような
造血因子の内分泌機能まで補うことはできない。

従って、臓器の機能不全で生命を失おうとしている患者
に対する治療法としては臓器移植が現実的で有効な治療
法である。しかし、臓器移植は、他人の臓器の提供を受
けなけれはならず、移植した後も他人の臓器が持つ抗原
（移植抗原あるいは組織適合抗原とよはれ、マウスでは
Ｈ−２抗原、ヒトではＨＬ　Ａ抗原である）に対する免
疫反応である拒絶反応の問題がある。

拒絶反応に対する対策として、現在、臨床的に２つのこ
とが行われている。ひとつは臓器の提供者（ドナー）と
臓器移植を受ける患者（レシピエンド）との間で、組織
適合抗原（ＨＬ　Ａ）を合わせて臓器移植を行なうこと
、もうひとつは移植後に免疫抑制剤を投与して拒絶反応
を抑制することである。

後者の免疫抑制剤の投与による拒絶反応の抑制のために
、サイクロスポリンなどの免疫抑制剤が従来用いられて
いる。

しかしながらサイクロスポリンなどの従来の免疫抑制剤
は、臓器毒性または感染症を起こす危険性が非常に高い
という問題がある。

［発明の目的］ 従って本発明の目的は、従来の免疫抑制剤の問題点を解
消した新規な免疫抑制剤を提供することにある。

［目的を達成するための手段］ 上記目的は、Ｎ−アセチルノイラミノシルーガラクトシ
ルセラミドを有効成分とする本発明の免疫抑制剤によっ
て達成された。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明の免疫抑制剤において有効成分であるＮ−アセチ
ルノイラミノシルーガラクトシルセラミド（以下ＧＭ３
と略称する）は、 式　　　　Ｇａ１−Ｇｆｌ　ｃ−ｃ　ｅ　ｒＮ　ｅ　ｕ
　Ａ　ｃ （式中、Ｇａ４はガラクトース、Ｇ１１ｃはグルコース
、ＮｅｕＡｃはＮ−アセチルノイラミネート、ｃｅｒは
セラミドを示す） で表わされる構造を有し、細胞の外膜に主として存在す
る複合グリコスフィンゴリピドである。また０Ｍ３は、
脳、肝臓および赤血球から単離されている。又ウシＧＭ
３は米国、セントルイスのシグマ社より市販されている
。またＧｌｙｃ。

ｃｏｎｊｕｇａｔｅ　　Ｊ、２　５−９（１９８５）に
よれば、ＧＭａは合成法によっても得られている。

０Ｍ３を有効成分とする本発明の免疫抑制剤は、特に臓
器移植における免疫学的拒絶反応を防止するために有効
である。

対象となる臓器移植としては、心臓移植、肺移植、腎臓
移植、膵臓移植、肝臓移植、腸移植、異種間移植、血管
の異種移植等が挙げられる。また、０Ｍ３を有効成分と
する本発明の免疫抑制剤は自己免疫疾患の治療にも有効
である。

０Ｍ３は細胞や組織に容易に吸収し得るので、カテーテ
ル等を用いて移植片（又は臓器）に直接投与できる。従
って０Ｍ３を用いて局所的免疫抑制も可能であり、サイ
クロスポリン等の従来の免疫抑制剤において認められた
全身的な副作用が軽減される。

ラットを用いた実験結果によれば、０Ｍ３の投与量は臓
器の湿潤重量１００ｇ当り約２ｍｇ以上とするのが好ま
しい。

０Ｍ３は生体内に存在する物質であり、従って全身的に
も、局所的にも毒性を示さないことが確認されている。

［作用］ 本発明者による研究によれば、０Ｍ３の免疫抑制作用の
機構として、下記の２つの機構（ａ）および（ｂ）が考
えられる。

（ａ）組織に吸収された０Ｍ３が移植片の抗原性に変化
を与え、抗体による組織への侵襲を受けにくくする。

（ｂ）遊離ＧＭ３がリンパ球、マクロファージ又は他の
免疫学的に関係する細胞と相互作用し、免疫抑制効果を
発揮する。

［実施例］ 以下実施例を挙げて本発明を更に説明する。

全ての実験において近交系雄性ラット（体重２５０〜３
００ｇ）を用いた。ルイスラット（Ｌｅｗ、ＲＴ’　）
を臓器受容体（レシピエンド）とし、バッファローラッ
ト（Ｂｕｆ　　ＲＴＩｂ）を心臓および肺供与体（ドナ
ー）として用いた。

ウシ脳から精製された０Ｍ３　（米国、セントルイス、
シグマ社製）を使用前に食塩水に溶解して本発明の免疫
抑制剤を調製した。

２９回の異所性心臓および肺移植を行ない、３群に分け
た。Ａ群の９匹のラットは０Ｍ３を投与せず、対照群と
した。Ｂ群の１２匹のラットは移植後３日間連続して３
００　ｕｇ／ｄａｙの０Ｍ３を投与した。０群の８匹の
ラットは移植後６日間連続して３００■／ｄａｙの０Ｍ
３を投与した。なお、移植手術はり−らの方法［Ｌｅｅ
　　ｅｔ　　ａｌ。

Ａｍ、Ｊ、Ｐａｔｈｏｌ　　５９　２７９−２９８（１
９７０）及びＴｒａｎｓｐｌａｎｔ　　３３４３８−４
４２　（１９８２）コによって行った。

すなわち、供与体ラッＩ・を滅菌手法を用いて、エーテ
ルおよびネンブタール麻酔下に常法により用意し、０．
　３ｍｌのヘパリン注射後、供与体ラットから心臓およ
び肺を摘出した。シラスチックチューブ（米国、ミシガ
ン州、ダウコーニング社製シラスチック　メディカル　
グレードチューブ、０゜０２インチ）を工大静脈中に配
置し、４−０シルク糸で固定した。このようにして０Ｍ
３含有免疫抑制剤を工大静脈を経由して移植心に直接投
与した。

受容体ラットに関して、腹部静脈および動脈を露出し、
血管用遮断鉗子を用いて固定した。腹部大動脈上に適当
な開口部を開け、８−０プロリン縫合糸（米国、ニュー
シャーシー州、エチイコン社製）を用いて、移植心の動
脈を、端側縫合にて吻合した。遮断鉗子を除去して心臓
と肺が循環を開始すると自発的に移植した心臓の製動が
始まった。同種移植心の平均虚血時間は約１７分であっ
た。カテーテルの先端部を腹部の外部に導入し、シラス
チックチューブを経由して３００■／ｄａｙの０Ｍ３を
、Ｂ群においては３日間、０群においては６日間投与し
た。

０Ｍ３の効果は２種の異なる指標、すなわち移植心の生
存期間および移植心の組織学的所見により評価した。心
臓の活動性は腹壁からの触診により毎日検査した。移植
臓器が拒絶されたか否かは心筋収縮か完全停止した時点
を尺度として評価した。

同種移植心の拒絶反応の組織学的変化を評価するために
Ｂ群の５匹のラットを７日目に、０群の３匹のラットを
１４日間に殺し、切り取られた同種移植心を直ちに１０
％ホルマリン中で固定し、パラフィン中に封入した。断
片を４μの厚さに切り出し、常法従ってヘマトキシリン
とエオシン染色で処理した。組織学的評価はＨｅａｒｔ
ａｎｄ　　Ｖｅｓｓｅｌｓ　　１　（Ｓｕｐｐｌ）：８
６−９０　（１９８５）に記載されたビリンガム氏の分
類法に従って行った。

第１図は、各群における移植心生存期間を示す。

第１図より平均移植心生存期間は、対照群のＡ群におい
ては６．９±０．７８日（６〜８日）、ＧＭ３投与群の
Ｂ群においては１４±２．２日（１０〜１６日）、同じ
＜ＧＭｓ投与群の０群においては２１．０±２．５日（
１０〜２３日）であり、生存期間の有意の相違がＡ群と
Ｂ群間、Ａ群と０群問およびＢ群とＣ群間において認め
られた。（ｐ＜０．０１）。７日目にＡ群とＢ群間で組
織学的所見を対比したところ、Ａ群においては９匹のラ
ット中の８匹が死亡したが、Ｂ群においては１２匹のラ
ットの全てが生存していた。Ａ群においては心筋変性が
顕著になり、多量のリンパ球の浸潤が認められた。間質
リンパ球浸潤および心筋壊死が両方の心室の心筋組織に
亘って認められた。

一方、Ｂ群の移植心は、心筋組織の血管周囲部分および
間質部分においてリンパ球浸潤は殆んど認められなかっ
た。また間質出血および心筋壊死も認められなかった。

さらに心臓に顕著な拒絶反応の兆候もπ忍められなかっ
た。１４日目においてＢ群とＣ群間で生存期間の顕著な
相違が認められたので、１４日目におけるＢ群とＣ群間
での組織学的比較を行なった。その結果、Ｂ群の移植心
の組織学的試験において末期拒絶反応が認められ、全て
の移植心は血管周囲部分および間質において顕著な節度
性と高度リンパ球浸潤が観察された。

これに対して０群の移植心は血管周囲部分および間質に
リンパ球浸潤を伴なうが、弱い拒絶反応しか示さなかっ
た。また心筋壊死も認められなかった。これらの変化は
右心室のみに限局されていた。

また投与されたＧＭ　３の血清濃度は生理学的量よりも
はるかに低く、組織への直接的な毒性も認められず、０
Ｍ３投与中および投与後に、ラットに下痢、異常行動、
原因不明の死亡も観察されなかった。

［発明の効果コ 本発明によれは、（ｉ）臓器移植における拒絶反応を防
止し得る、（１１）局所的免疫抑制が可能であり、従来
の免疫抑制剤において認められた全身的副作用を軽減し
得る、（１１１）全身的にも局所的にも毒性を示さない
等の利点を有する免疫抑制剤が提供された。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の免疫抑制剤の３日間投与群（Ｂ群）
および６日間投与群（０群）の移植心生存率の経時変化
を無投与、対照群（Ａ群）のそれと対比したグラフであ
る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｎ−アセチルノイラミノシル−ガラクトシルセラ
   ミドを有効成分とする免疫抑制剤。