JPH03209396A - アルブミンとグロブリンの分離方法 - Google Patents
アルブミンとグロブリンの分離方法Info
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- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［ａ業上の利用分野］
本発明はアルブミンとグロブリンの分離方法に係り、特
にアルブミンとグロブリンを温和な条件下で効率良く分
離する方法に関する。
にアルブミンとグロブリンを温和な条件下で効率良く分
離する方法に関する。
［従来の技術］
蛋白質の分離、精製は、学問的に重要であるばかりでな
く、−臨床的に広く応用されることから社会的にも重要
な技術である。
く、−臨床的に広く応用されることから社会的にも重要
な技術である。
蛋白質のうちアルブミン類とグロブリン類は動植物の細
胞や体液中に広く分布している重要なものであり、製剤
として利用されている。このため、アルブミンとグロブ
リンの分離は、それぞれの精製という点からも、また共
存するであろう他の特殊な有用物買の単離のための前段
階としても極めて重要である。
胞や体液中に広く分布している重要なものであり、製剤
として利用されている。このため、アルブミンとグロブ
リンの分離は、それぞれの精製という点からも、また共
存するであろう他の特殊な有用物買の単離のための前段
階としても極めて重要である。
従来、アルブミンとグロブリンの分画は、硫酸アンモニ
ウムに代表される塩析効果の大きい塩類や、エタノール
、ポリエチレングリコール等の有機物を用いて、一方を
沈殿させるという方法が採られてきた。これらの方法は
、ｐＨ１イオン強度、温度、蛋白質濃度、沈殿剤の量等
を巧みに変化させて行なうものであるため、多大な労力
を必要とする。また、用いた沈殿剤の除去工程が必要と
なるという欠点もある。
ウムに代表される塩析効果の大きい塩類や、エタノール
、ポリエチレングリコール等の有機物を用いて、一方を
沈殿させるという方法が採られてきた。これらの方法は
、ｐＨ１イオン強度、温度、蛋白質濃度、沈殿剤の量等
を巧みに変化させて行なうものであるため、多大な労力
を必要とする。また、用いた沈殿剤の除去工程が必要と
なるという欠点もある。
近年、液体クロマトグラフィーによる蛋白質の分離に関
する研究が進められ、例えば、主鎖に直接結合したアル
コール性水酸基とイオン交換基とを有する硬質の全多孔
性粒状架橋共重合体を固定相とし、ｐ）１６．５〜１０
．０、イオン強度０．０５〜１．５の穆動相を用いた液
体クロマトグラフィーによる分離方法が提案されている
（特開閉６２−８８９６１号）。
する研究が進められ、例えば、主鎖に直接結合したアル
コール性水酸基とイオン交換基とを有する硬質の全多孔
性粒状架橋共重合体を固定相とし、ｐ）１６．５〜１０
．０、イオン強度０．０５〜１．５の穆動相を用いた液
体クロマトグラフィーによる分離方法が提案されている
（特開閉６２−８８９６１号）。
［発明が解決しようとする課題］
しかしながら、特開昭６２−８８９６１号に開示される
ような液体クロマトグラフィーによる分離方法では、 ■ 蛋白質を変性させるおそれがある。
ような液体クロマトグラフィーによる分離方法では、 ■ 蛋白質を変性させるおそれがある。
■ 厳密かつ複雑な分離条件の操作が必要である。
■ 充填剤の強度不足のため、高負荷ができず、分離に
長時間を要する。
長時間を要する。
■ 処理量が少ない。
といった問題点があった。
本発明は上記従来の問題点を解決し、温和な条件下にて
、蛋白質の変性を招くことなく、アルブミンとグロブリ
ンとを容易かつ効率的に分離することができるアルブミ
ンとグロブリンの分離方法を）是供することを目的とす
る。
、蛋白質の変性を招くことなく、アルブミンとグロブリ
ンとを容易かつ効率的に分離することができるアルブミ
ンとグロブリンの分離方法を）是供することを目的とす
る。
［課題を解決するための手段］
本発明のアルブミンとグロブリンの分離方法は、長鎖界
面活性剤から形成される固定化有機薄膜に、アルブミン
とグロブリンを含む液を接触させることを特徴とする。
面活性剤から形成される固定化有機薄膜に、アルブミン
とグロブリンを含む液を接触させることを特徴とする。
従来、炭素数が１２より大きい長鎖アルキル基を２つ持
つ界面活性剤、例えばジオクタデシルジメチルアンモニ
ウムブロマイドは生体膜類似構造の有機薄膜を形成する
ことが知られている。しかして、近年、このような有機
薄膜の吸着特性の検討が行なわれつつあり、匂い物質、
苦み物質等が良く吸着されセンサーへの応用が可能であ
ることが報告されている。しかしながら、有機薄膜の蛋
白質吸着特性については検討が進められていないのが現
状である。
つ界面活性剤、例えばジオクタデシルジメチルアンモニ
ウムブロマイドは生体膜類似構造の有機薄膜を形成する
ことが知られている。しかして、近年、このような有機
薄膜の吸着特性の検討が行なわれつつあり、匂い物質、
苦み物質等が良く吸着されセンサーへの応用が可能であ
ることが報告されている。しかしながら、有機薄膜の蛋
白質吸着特性については検討が進められていないのが現
状である。
本発明者らは、有機薄膜の蛋白質吸着特性について鋭意
検討を重ねた結果、有機薄膜が温和な条件下でアルブミ
ン及びグロブリンからグロブリンを選択的に吸・脱着す
ることを見出し、本発明を完成させた。
検討を重ねた結果、有機薄膜が温和な条件下でアルブミ
ン及びグロブリンからグロブリンを選択的に吸・脱着す
ることを見出し、本発明を完成させた。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明において、固定化有機薄膜を形成する長鎖界面活
性剤としては、炭素数１２より大、好ましくは１４〜２
０．より好ましくは１４〜１８の長鎖、好ましくは直鎖
アルキル基を有する化合物が挙げられる。このような化
合物としては、例えば、次の■〜ＩＩＩが挙げられる。
性剤としては、炭素数１２より大、好ましくは１４〜２
０．より好ましくは１４〜１８の長鎖、好ましくは直鎖
アルキル基を有する化合物が挙げられる。このような化
合物としては、例えば、次の■〜ＩＩＩが挙げられる。
■ ジアルキルジメチルアンモニウムポリ（スチレンス
ルホネート） （式中、ｎ＞１２．ｍ≧１００） ＩＩ ジアルキルジメチルアンモニウムポリ（アク リレート）又はメタクリレート （式中、 ｎ＞１２゜ ｍ≧１００．Ｒ＝Ｈ又はＣＨ２ ） ＩＩ レシチン ＣＨ３（Ｃ）１２）。−２−Ｃｏ−０−ＣＨ。
ルホネート） （式中、ｎ＞１２．ｍ≧１００） ＩＩ ジアルキルジメチルアンモニウムポリ（アク リレート）又はメタクリレート （式中、 ｎ＞１２゜ ｍ≧１００．Ｒ＝Ｈ又はＣＨ２ ） ＩＩ レシチン ＣＨ３（Ｃ）１２）。−２−Ｃｏ−０−ＣＨ。
ＣＨ３（ＣＨ２） ｎ−２−Ｇｏ−０−ＣＨ）＋２ＣＯ
−ＰＯ−０（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＬ）ｓｏ。
−ＰＯ−０（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＬ）ｓｏ。
本発明においては、これらのうち、特に上記Ｉ、ＩＩに
示されるようなイオン性界面活性剤、とりわけオクタデ
シル基を２個有するイオン性界面活性剤と該界面活性剤
と反対荷電を有する高分子の塩、例えば、ジオクタデシ
ルジメチルアンモニウムポリ（スチレンスルホネート）
が好適である。
示されるようなイオン性界面活性剤、とりわけオクタデ
シル基を２個有するイオン性界面活性剤と該界面活性剤
と反対荷電を有する高分子の塩、例えば、ジオクタデシ
ルジメチルアンモニウムポリ（スチレンスルホネート）
が好適である。
上記■〜■に代表される長鎖界面活性剤は、水中に分散
した状態で或いはその溶液から得られたキャスト膜の状
態で、生体膜類似構造の有機薄膜を形成する。特に、上
記■、ＩＩにあるような高分子対イオンを有するものは
、アルキル基のフレキシビリティを損なうことなく安定
な薄膜を形成するので本発明に好ましい。
した状態で或いはその溶液から得られたキャスト膜の状
態で、生体膜類似構造の有機薄膜を形成する。特に、上
記■、ＩＩにあるような高分子対イオンを有するものは
、アルキル基のフレキシビリティを損なうことなく安定
な薄膜を形成するので本発明に好ましい。
本発明による具体的な分離手段としては、例えば、前記
■〜ＩＩＩ等の長鎖界面活性剤の有機薄膜を、平膜状又
は球状の多孔室体等に固定化し、この固定化有機薄膜を
被処理蛋白質混合物、好ましくは被処理蛋白質混合物を
リン酸バッファー（ｐＨ７，０程度）等のＭ荷液に溶解
させた溶液と接触させる。接触形態は連続式、バッチ式
のいずれでも良い、これにより、混合物中のグロブリン
は固定化有機薄膜に吸着され、一方、アルブミンは液中
に残留する。残留したアルブミンはそのままの形で有効
利用でき、一方、吸着されたグロブリンも適当な脱着液
、例えば、純水等を用いて処理することにより、容易に
脱着され、はぼ定量的に回収される。
■〜ＩＩＩ等の長鎖界面活性剤の有機薄膜を、平膜状又
は球状の多孔室体等に固定化し、この固定化有機薄膜を
被処理蛋白質混合物、好ましくは被処理蛋白質混合物を
リン酸バッファー（ｐＨ７，０程度）等のＭ荷液に溶解
させた溶液と接触させる。接触形態は連続式、バッチ式
のいずれでも良い、これにより、混合物中のグロブリン
は固定化有機薄膜に吸着され、一方、アルブミンは液中
に残留する。残留したアルブミンはそのままの形で有効
利用でき、一方、吸着されたグロブリンも適当な脱着液
、例えば、純水等を用いて処理することにより、容易に
脱着され、はぼ定量的に回収される。
なお、本発明において、用いる長鎖界面活性剤の固定化
有機薄膜は、単分子膜であっても二分子以上の累積膜で
あっても良い。
有機薄膜は、単分子膜であっても二分子以上の累積膜で
あっても良い。
［作用］
長鎖界面活性剤から形成される固定化有機薄膜に、アル
ブミン及びグロブリンを接触させると、グロブリンだけ
が選択的に吸着され、しかも、吸着されたグロブリンは
純水等により該有機薄膜を洗浄することにより容易にか
つ定量的に回収することができる。
ブミン及びグロブリンを接触させると、グロブリンだけ
が選択的に吸着され、しかも、吸着されたグロブリンは
純水等により該有機薄膜を洗浄することにより容易にか
つ定量的に回収することができる。
このグロブリンの吸・脱着のメカニズムの詳細は明らか
ではないが、例えば、長鎖界面活性剤で形成される、ア
ルキル鎖等の長鎖が緻密に配向した数十Ａの厚みのフレ
キシブルな疎水相が極性基で狭まれた構造とされている
有機薄膜の特殊な構造により、本発明によるグロブリン
の選択的な吸・脱着が起こるものと考えられる。
ではないが、例えば、長鎖界面活性剤で形成される、ア
ルキル鎖等の長鎖が緻密に配向した数十Ａの厚みのフレ
キシブルな疎水相が極性基で狭まれた構造とされている
有機薄膜の特殊な構造により、本発明によるグロブリン
の選択的な吸・脱着が起こるものと考えられる。
［実施例］
以下に製造例及び実施例を挙げて本発明につきより具体
的に説明する。
的に説明する。
製造例１
長鎖界面活性剤の合成ニ
ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロマイド８．５
０ｇ （１３，５ｍｍｏｊＥ）に水２００ｍ１を加え、
約７０℃に加熱しながら振盪攪拌し、乳白色の液体を得
た。これをポリスチレンスルホン酸ナトリウム（分子量
約２００万）の０．５ （ｗｔ／ｖ）％水溶液４ｏｏｍ
ｉ（約７０℃）に加え攪拌した。生じた白い沈殿を濾別
、水洗した。これをクロロホルムに溶かし、エタノール
に注いで再沈させることにより精製し、乾燥後、約６．
５３ｇのジオクタデシルジメチルアンモニウムポリ（ス
チレンスルホネート）（２ＣＬＩＮｅ２ＣＩ／ＰＳＳｅ
と略）を得た。
０ｇ （１３，５ｍｍｏｊＥ）に水２００ｍ１を加え、
約７０℃に加熱しながら振盪攪拌し、乳白色の液体を得
た。これをポリスチレンスルホン酸ナトリウム（分子量
約２００万）の０．５ （ｗｔ／ｖ）％水溶液４ｏｏｍ
ｉ（約７０℃）に加え攪拌した。生じた白い沈殿を濾別
、水洗した。これをクロロホルムに溶かし、エタノール
に注いで再沈させることにより精製し、乾燥後、約６．
５３ｇのジオクタデシルジメチルアンモニウムポリ（ス
チレンスルホネート）（２ＣＬＩＮｅ２ＣＩ／ＰＳＳｅ
と略）を得た。
製造例２
固定化有機薄膜の調製ニ
ブチルトヨバール６５０Ｓ （東ソー製）を微粒子カッ
ト後、メタノールに置換し、ゲルを乾燥させた。乾燥ゲ
ル３．８６ｇを４０ｍ１のクロロホルムに懸濁した。２
ＣＵＩＮΦ２ＣＩ／ＰＳＳｅＯ，７５ｇを３０ｍＪ２の
クロロホルムに溶解し、ゲル懸濁液に加えた。よく振盪
攪拌してから、ロータリーエバポレーターでクロロホル
ムをゆっくり留去した。真空乾燥後、得られた白色固体
を７１μｍの篩にかけ、２．５ｇの篩通過粉末を回収し
た。８通通分は真球状であった。この粒子のＤＳＣ測定
を行なったところ、約３５℃に吸熱ピー１が認ａｂ６ｈ
、２Ｃｕ＋ Ｎ’ ２Ｃ＋ ／ＰＳＳｅが二分子膜構造
を有する有機薄膜を形成していることが確認された。
ト後、メタノールに置換し、ゲルを乾燥させた。乾燥ゲ
ル３．８６ｇを４０ｍ１のクロロホルムに懸濁した。２
ＣＵＩＮΦ２ＣＩ／ＰＳＳｅＯ，７５ｇを３０ｍＪ２の
クロロホルムに溶解し、ゲル懸濁液に加えた。よく振盪
攪拌してから、ロータリーエバポレーターでクロロホル
ムをゆっくり留去した。真空乾燥後、得られた白色固体
を７１μｍの篩にかけ、２．５ｇの篩通過粉末を回収し
た。８通通分は真球状であった。この粒子のＤＳＣ測定
を行なったところ、約３５℃に吸熱ピー１が認ａｂ６ｈ
、２Ｃｕ＋ Ｎ’ ２Ｃ＋ ／ＰＳＳｅが二分子膜構造
を有する有機薄膜を形成していることが確認された。
実施例１
フタ付きサンプルチューブ（エツベンドルフ社製）に、
製造例２で調製した２ＣＩＩＮΦ２Ｃ＋ ／Ｐ Ｓ Ｓ
８ゲル０．１０ｇと第１表に示す蛋白質溶液１．２ｍＡ
を加え、１時間室温で振盪攪拌した後、ゲルを濾別して
濾液の吸光度（ｚ８０ｎｍ）より蛋白質の濃度を定量し
、吸着量を求めた。
製造例２で調製した２ＣＩＩＮΦ２Ｃ＋ ／Ｐ Ｓ Ｓ
８ゲル０．１０ｇと第１表に示す蛋白質溶液１．２ｍＡ
を加え、１時間室温で振盪攪拌した後、ゲルを濾別して
濾液の吸光度（ｚ８０ｎｍ）より蛋白質の濃度を定量し
、吸着量を求めた。
別ニ、２ Ｃｍ Ｎ’ ２ ＣＩ／ Ｐ Ｓ ３ｅ ’
ｌル（Ｄ代’）にブチルトヨバール６５０Ｓを用いたこ
と以外は上記と同様にして吸着実験を行ない、吸着量を
求めた。
ｌル（Ｄ代’）にブチルトヨバール６５０Ｓを用いたこ
と以外は上記と同様にして吸着実験を行ない、吸着量を
求めた。
結果を第１表に示す。
第１表ヨリ、２ｅｍ Ｎ’ ２Ｃ＋ ／ＰＳＳｅ（７）
有機薄膜をコーティングしたゲルは、０．０５Ｍリン酸
バッファー（ｐＨ７，０）中で牛血清アルブミンを全く
吸着し〃いが（Ｒｕ ｎ １ ） 、イムノガンマグロ
ブリンやチログロブリンを吸着する（Ｒｕ ｎ ２
． ３ ） 。
有機薄膜をコーティングしたゲルは、０．０５Ｍリン酸
バッファー（ｐＨ７，０）中で牛血清アルブミンを全く
吸着し〃いが（Ｒｕ ｎ １ ） 、イムノガンマグロ
ブリンやチログロブリンを吸着する（Ｒｕ ｎ ２
． ３ ） 。
これに対して、母材のブチルトヨバール６５０Ｓでは、
アルブミンもグロブリンも吸着し、蛋白質に対する選択
性は認められなかった（Ｒｕｎ４，５）。
アルブミンもグロブリンも吸着し、蛋白質に対する選択
性は認められなかった（Ｒｕｎ４，５）。
次に、Ｒｕｎ２で分離したゲルを１．２ｍｌ１の純水（
ｐＨ５，６）で洗浄したところ、チログロブリンが定量
的に回収され、吸着した蛋白質の脱着も可能であること
が確認された。
ｐＨ５，６）で洗浄したところ、チログロブリンが定量
的に回収され、吸着した蛋白質の脱着も可能であること
が確認された。
第
表
※ＢＳＡ溶液：牛血清アルブミン５００ｐｐｍの０．０
５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０） チログロブリン溶液：チログロブリン２００ｐｐｍの０
．０５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０） ＩｇＧ溶液：イムノガンマグロプリン２００ｐｐｍの０
．０５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０） 実施例２ 製造例２で調製した２Ｃｕ＋ Ｎｅ２Ｃ＋ ／ＰＳＳｅ
ゲル０．５ｇを、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）１０ｍｇ
とチログロブリン５ｍｇを含む０．０５Ｍリン酸バッフ
ァ −（ＰＨ７，０）１０ｍＪＺに加え、３０分間室温
で振盪攪拌した後、ゲルを濾別し上澄み■を得た。
５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０） チログロブリン溶液：チログロブリン２００ｐｐｍの０
．０５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０） ＩｇＧ溶液：イムノガンマグロプリン２００ｐｐｍの０
．０５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０） 実施例２ 製造例２で調製した２Ｃｕ＋ Ｎｅ２Ｃ＋ ／ＰＳＳｅ
ゲル０．５ｇを、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）１０ｍｇ
とチログロブリン５ｍｇを含む０．０５Ｍリン酸バッフ
ァ −（ＰＨ７，０）１０ｍＪＺに加え、３０分間室温
で振盪攪拌した後、ゲルを濾別し上澄み■を得た。
次に分離したゲルを１０ｍＡの純水（ｐＨ５，６）に入
れ、３０分間室温で振盪攪拌した後、ゲルを濾別し上澄
み■を得た。
れ、３０分間室温で振盪攪拌した後、ゲルを濾別し上澄
み■を得た。
上澄みの、■をそれぞれゲル濾過したところ、上澄み■
はＢＳＡのみ、上澄み■はチログロブリンのみのピーク
を示し、アルブミンとグロブリンとが分離されたことが
確認された。そして、もとの混合試料に対する回収率は
、ＢＳＡが９８％、チログロブリンが９７％と著しく高
し）回収率であった。
はＢＳＡのみ、上澄み■はチログロブリンのみのピーク
を示し、アルブミンとグロブリンとが分離されたことが
確認された。そして、もとの混合試料に対する回収率は
、ＢＳＡが９８％、チログロブリンが９７％と著しく高
し）回収率であった。
［発明の効果］
以上詳述した通り、本発明のアルブミンとグロブリンの
分離方法によれば、アルブミンとグロブリンとを容易か
つ効率的に分離することｂ＜可能とされる。しかも、本
発明によれば、蛋白質を変性させるおそれもなく、分離
したものを安定に高回収率にて回収することができるた
め、本発明の工業的有用性は極めて高い。
分離方法によれば、アルブミンとグロブリンとを容易か
つ効率的に分離することｂ＜可能とされる。しかも、本
発明によれば、蛋白質を変性させるおそれもなく、分離
したものを安定に高回収率にて回収することができるた
め、本発明の工業的有用性は極めて高い。
Claims (1)
- （１）長鎖界面活性剤から形成される固定化有機薄膜に
、アルブミンとグロブリンを含む液を接触させることを
特徴とするアルブミンとグロブリンの分離方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP292090A JPH03209396A (ja) | 1990-01-10 | 1990-01-10 | アルブミンとグロブリンの分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP292090A JPH03209396A (ja) | 1990-01-10 | 1990-01-10 | アルブミンとグロブリンの分離方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03209396A true JPH03209396A (ja) | 1991-09-12 |
Family
ID=11542789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP292090A Pending JPH03209396A (ja) | 1990-01-10 | 1990-01-10 | アルブミンとグロブリンの分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03209396A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015524416A (ja) * | 2012-07-27 | 2015-08-24 | シーエスエル、リミテッド | アルブミンを精製するための方法 |
-
1990
- 1990-01-10 JP JP292090A patent/JPH03209396A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015524416A (ja) * | 2012-07-27 | 2015-08-24 | シーエスエル、リミテッド | アルブミンを精製するための方法 |
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