JPH0288969A - Testing means for immunoassay - Google Patents

Testing means for immunoassay

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JPH0288969A
JPH0288969A JP24155088A JP24155088A JPH0288969A JP H0288969 A JPH0288969 A JP H0288969A JP 24155088 A JP24155088 A JP 24155088A JP 24155088 A JP24155088 A JP 24155088A JP H0288969 A JPH0288969 A JP H0288969A
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JP
Japan
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antibody
antigen
water
immunoassay
specimen
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JP24155088A
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Japanese (ja)
Inventor
Eiji Narita
成田 英司
Koichi Tsuji
辻 光一
Shigehiro Yamamoto
山本 茂博
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Terumo Corp
Original Assignee
Terumo Corp
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Publication date
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Abstract

PURPOSE:To provide a simpler structure, lower price and smaller size and to facilitate the operation for immunoassay by depositing an antibody or antigen in a fixed state and a labeling antibody or antigen in a non-fixed state on the same water absorptive carrier. CONSTITUTION:The testing means 1 for immunoassay has the water absorptive carrier 3 which carries the antibody (or antigen) 2 bondable with a material (specimen) to be detected and carries the labeling antibody (or labeling antigen) 5 in the non-fixed state. The testing means is extremely convenient for operation if this water absorptive carrier 3 is previously mounted on a handle 4. This water absorptive carrier 3 is impregnated with the specimen such as urine by a method such as dipping or dropping and after the reaction is effected for a specified period of time, the labeling antibody or labeling antigen which does not react is removed by washing. Decision is made by bringing the composite and the substrate into reaction to cause color development. Since the penetration of the specimen into filter paper is merely necessitated, the operation is hygienic and the measurement with a small volume of the specimen is possible.

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は簡単に製造することができ、少量の検体で短時
間に簡単な操作で免疫反応を利用した測定をすることの
できる免疫測定用試験具に関するものである。
[Detailed Description of the Invention] <Industrial Application Field> The present invention is applicable to immunoassays that can be easily manufactured and that can perform measurements using immune reactions in a short time and with simple operations using a small amount of sample. It concerns test equipment.

〈従来の技術〉 従来、種々の抗原または抗体を検出するのにイムノアッ
セイ法が利用されている。 従来行われている手順につ
いて簡単に説明すると、まず検体と結合しつる抗体(あ
るいは抗原)を固定したビーズのような担体を用意し、
これを尿のような検液に漬けて検液中の抗原(あるいは
抗体)と反応させた後、検波中からビーズを採り出して
洗浄する。 次いで、これを試験管等に入った標識抗体
(あるいは標識抗[)と反応させ、未反応の標識抗体(
あるいは標識抗原)を洗浄して除く、 最後に標識物を
検出することによって、検波中に検出すべき物質(検体
)が存在するか否かを判断している。
<Prior Art> Immunoassay methods have conventionally been used to detect various antigens or antibodies. To briefly explain the conventional procedure, first, a carrier such as a bead is prepared, on which an antibody (or antigen) that binds to the specimen is immobilized.
After immersing the beads in a test solution such as urine and reacting with the antigen (or antibody) in the test solution, the beads are extracted from the detection medium and washed. Next, this is reacted with the labeled antibody (or labeled anti[) in a test tube etc., and the unreacted labeled antibody (
Finally, by detecting the labeled substance, it is determined whether there is a substance (specimen) to be detected during detection.

〈発明が解決しようとする課題〉 上述した従来の免疫(抗原抗体)反応を利用した免疫測
定法では、多くの場合抗体結合担体、標識抗体などがそ
れぞれ別の形態として保存され、これらのキットを使用
して尿、血液などの検体から目的物を検出している。 
このように別々の形態のキットの場合、次のような問題
がある。 検体が尿である場合を例として説明する。
<Problem to be solved by the invention> In the conventional immunoassay method using the above-mentioned immune (antigen-antibody) reaction, the antibody-binding carrier, labeled antibody, etc. are often stored in separate forms, making it difficult to use these kits. It is used to detect target substances from samples such as urine and blood.
Kits in separate formats have the following problems. The case where the specimen is urine will be explained as an example.

まず、尿を深謀カップで採取し、その尿を一定量スボイ
ドなどでとり、抗体結合担体を反応させなければならな
い。 そのため、操作者に不衛生的な感覚を与え、操作
を煩雑にしている。 また、操作に用いる試験用具の部
品点数が多く、必然的に面倒な操作を何回も行わなくて
はならない。
First, urine must be collected with a cup, and then a certain amount of urine must be taken with a suction cup and reacted with the antibody-bound carrier. This gives the operator an unsanitary feeling and makes the operation complicated. In addition, the test equipment used for operation has a large number of parts, and it is inevitably necessary to perform troublesome operations many times.

したがって、本発明の目的は、少量の検体で短時間に簡
単な操作で免疫反応を利用した測定を行うことのできる
安価な免疫測定用試験具を提供しようとするにある。
Therefore, an object of the present invention is to provide an inexpensive immunoassay test device that can perform measurements using immune reactions with a small amount of specimen in a short time and with simple operations.

く課題を解決するための手段〉 本発明の第1の態様によれば、吸水性担体に、検体と結
合可能な抗体(あるいは抗原)が固定されて担持される
とともに、標識抗体(あるいは標識抗原)が固定されな
い状態で担持されていることを特徴とする免疫測定用試
験具が提供される。
Means for Solving the Problems> According to the first aspect of the present invention, an antibody (or antigen) capable of binding to a specimen is immobilized and carried on a water-absorbing carrier, and a labeled antibody (or labeled antigen) is immobilized on a water-absorbing carrier. ) is supported in an unfixed state.

本発明の第2の態様によれば、検体と結合可能な抗体(
あるいは抗原)が固定されて担持された第1の吸水性担
体と、標識抗体(あるいは標識抗原)が固定されない状
態で担持された第2の吸水性担体との組合わせからなる
ことを特徴とする免疫測定用試験具が提供される。
According to the second aspect of the present invention, an antibody (
Alternatively, it is characterized by a combination of a first water-absorbing carrier on which a labeled antibody (or antigen) is immobilized and carried, and a second water-absorbing carrier on which a labeled antibody (or labeled antigen) is carried in an unimmobilized state. A test device for immunoassay is provided.

第2の態様の発明において、第1および第2の吸水性担
体はこの順序で剥離が可能なように積層しておくのがよ
い。
In the second aspect of the invention, the first and second water-absorbing carriers are preferably laminated in this order so that they can be peeled off.

第1および第2の態様の発明において、吸水性担体ある
いはその積層体は把手上に付着させておくのが好適であ
る。
In the first and second aspects of the invention, it is preferable that the water-absorbing carrier or its laminate be attached to the handle.

本発明の免疫測定用試験具は、担体をろ紙とし、尿中の
ヒト絨毛性ゴナドトロピンを検出するいわゆる妊娠診断
具として好適に用いることができる。
The immunoassay test device of the present invention uses filter paper as a carrier and can be suitably used as a so-called pregnancy diagnostic device for detecting human chorionic gonadotropin in urine.

以下に本発明の免疫測定用試験具について更に詳細に説
明する。
The immunoassay test device of the present invention will be explained in more detail below.

本発明の第1の態様により免疫測定用試験具1は検出す
る物質(検体)と結合可能な抗体(あるいは抗原)2を
固定状態で担持するとともに、標識抗体(あるいは標識
抗原)5を固定されない状態で吸水性担体3を具える。
According to the first aspect of the present invention, the immunoassay test device 1 carries an immobilized antibody (or antigen) 2 capable of binding to a substance (sample) to be detected, and does not immobilize a labeled antibody (or labeled antigen) 5. The water-absorbent carrier 3 is provided in this state.

 この吸水性担体3は把手4上に装着しておくと、取扱
い操作上非常に便利である。
When this water-absorbing carrier 3 is mounted on the handle 4, it is very convenient for handling.

本発明の第2の態様による免疫測定試験具10は上述し
た検体と結合可能な抗体(あるいは抗原)2を固定した
第1の吸水性担体3および標識抗体(あるいは標識抗原
)5を固定しない状態で担持した第2の吸水性担体6は
組合せよりなる。 これらの第1および第2の吸水性担
体3および6は分離した別体であってもよいが、第2図
に示すように積層体にしておくのが好ましい。 そして
積層体において両級水性担体はたがいに剥離して分離で
きるようにしておくのがよい。 さらに、この吸水性担
体の積層体は第2図に示すように第1の吸水性担体3、
第2の吸水性担体6という順序で把手4上に装着してお
くと、取扱い操作上非常に便利である。
The immunoassay test device 10 according to the second aspect of the present invention has a first water-absorbing carrier 3 on which the above-described antibody (or antigen) 2 capable of binding to a specimen is immobilized, and a labeled antibody (or labeled antigen) 5 is not immobilized thereon. The second water-absorbing carrier 6 supported by the above-mentioned water-absorbing carrier 6 is made of a combination. Although these first and second water-absorbing carriers 3 and 6 may be separate bodies, it is preferable that they are formed into a laminate as shown in FIG. In the laminate, it is preferable that both types of aqueous carriers be peeled and separated from each other. Furthermore, as shown in FIG.
If the second water absorbent carrier 6 is mounted on the handle 4 in this order, it will be very convenient for handling.

第3図には本発明の試験具の他の構成例を示す。 第3
図に示すのは第1図に示す例の変形例であり、吸水性担
体3を把手間に挟持したものである。
FIG. 3 shows another example of the configuration of the test device of the present invention. Third
The figure shows a modification of the example shown in FIG. 1, in which a water absorbent carrier 3 is held between the handles.

すなわち、第3a図に示すような大把手4a、小把手4
bそれぞれに対応する窓7を形成し、第3b図に示すよ
うに把手4a、4bを閉じたときに、第3C図に示すよ
うに吸水性担体3が把手4a、4b間に挟持されるよう
構成する。
That is, a large handle 4a and a small handle 4 as shown in FIG. 3a.
A window 7 corresponding to each of b is formed so that when the handles 4a and 4b are closed as shown in FIG. 3b, the water absorbent carrier 3 is sandwiched between the handles 4a and 4b as shown in FIG. 3C. Configure.

ここで、検出する物質(検体)としては、抗原もしくは
抗体であれば何でもよいが、例示すると、ヒト絨毛性ゴ
ナドトロピン(HCG。
Here, the substance (specimen) to be detected may be any antigen or antibody, but an example is human chorionic gonadotropin (HCG).

human chorionlc gonadotro
pin)  横体形成ホルモン(LH)などが挙げられ
る。
human chorionlc gonadotro
pin) and lateral body formation hormone (LH).

HCGは妊娠初期に妊婦の尿に出現するので妊娠の判定
に使用される。
HCG appears in a pregnant woman's urine during the early stages of pregnancy and is used to determine pregnancy.

吸水性担体としては、ろ紙、メツシュ(不織布、織物、
あみ物)、スポンジ、グラスファイバー ラテックスビ
ーズ、セルローズビーズなどを用いることができる。
Examples of water-absorbing carriers include filter paper, mesh (non-woven fabric, woven fabric,
(Ammono), sponge, glass fiber latex beads, cellulose beads, etc. can be used.

吸水性担体に固定される抗体(あるいは抗原)は所定の
検体に結合しうるものを用いる。
The antibody (or antigen) immobilized on the water-absorbing carrier is one that can bind to a predetermined specimen.

ここで、固定とは、抗体(あるいは抗原)が吸水性担体
に化学的、物理的結合により、洗浄等の物理的処理によ
り取り除けないよう結合されている状態をいう。
Here, immobilization refers to a state in which the antibody (or antigen) is chemically or physically bonded to a water-absorbing carrier so that it cannot be removed by physical treatment such as washing.

固定されていないと、洗浄などにより担体から流出して
しまう。
If it is not immobilized, it will flow out from the carrier during washing or the like.

抗体(あるいは抗原)を担体に固定する方法としては、
従来既知の任意の方法(例えば、グルタルアルデヒド法
)を用いればよい。
As a method for immobilizing antibodies (or antigens) on carriers,
Any conventionally known method (eg, glutaraldehyde method) may be used.

標識抗体あるいは標識抗原は担体上の抗体あるいは抗原
に結合した検体に特異的に結合する抗体あるいは抗原を
用いる。
As the labeled antibody or labeled antigen, an antibody or antigen that specifically binds to a sample bound to the antibody or antigen on a carrier is used.

標識剤としては、酵素、ラジオライソト−ブ、蛍光色素
などがある。
Labeling agents include enzymes, radiolysothobes, fluorescent dyes, and the like.

操作上便利なように取り付ける把手の形状および材料は
免疫測定に悪影響を及ぼさないものであればいかなるも
のでもよい。 把握手材料としては、ポリスチレン、ポ
リプロピレンなどを用いることができる。
The shape and material of the handle attached for operational convenience may be of any material as long as it does not adversely affect the immunoassay. As the grasping material, polystyrene, polypropylene, etc. can be used.

く作用〉 第1図に示す試験具では、抗体(あるいは抗原)を固定
状態で、標識抗体(あるいは標識抗原)を固定しない状
態で担持する吸水性担体3に尿のような検体を浸漬、滴
下などの方法により含ましめ、たとえば、抗体一検体(
抗原)標識抗体の複合体形成反応を行わしめる。
In the test device shown in Fig. 1, a sample such as urine is immersed and dropped into a water-absorbing carrier 3 that supports antibodies (or antigens) in a fixed state and labeled antibodies (or labeled antigens) in an unfixed state. For example, one antibody sample (
A complex formation reaction of the antigen)-labeled antibody is performed.

一定時間反応させた後に、吸水性担体中の反応していな
い標識抗体あるいは標識抗原を洗浄により取り除く、 
例えば、標識剤として酵素を用いた場合反応基質液を上
記複合体を有する吸水性担体に含ましめ、複合体と基質
を反応させて発色させる。 発色により検体の存否を判
定する検体が、HCGの場合には発色すれば妊娠してい
ると判定される。
After reacting for a certain period of time, unreacted labeled antibodies or labeled antigens in the water-absorbing carrier are removed by washing.
For example, when an enzyme is used as a labeling agent, a reaction substrate solution is contained in a water-absorbing carrier having the above-mentioned complex, and the complex and substrate are reacted to develop color. If the specimen whose presence or absence is determined by color development is HCG, it is determined that the specimen is pregnant if it develops color.

第2図に示す積層体をなす試験具においても第1図に説
明したとほぼ同様である。 ただ、標識抗体あるいは標
識抗原は別個の吸水性担体内に含ましであるので、積層
体に検体を含浸せしため後、吸水性担体3から吸水性担
体6を剥離して、吸水性担体3を発色処理する点が異な
るだけである。
The laminated test device shown in FIG. 2 is also similar to that described in FIG. 1. However, since the labeled antibody or labeled antigen is contained in a separate water-absorbing carrier, after impregnating the laminate with the sample, the water-absorbing carrier 6 is peeled off from the water-absorbing carrier 3. The only difference is that the colors are processed.

〈実施例〉 次に本発明をHCGの検出の実施例につき説明するが、
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
<Example> Next, the present invention will be explained with reference to an example of HCG detection.
The present invention is not limited to these examples.

(実施例1) ろ紙に抗hCG抗体を公知の方法で結合、固定させ乾燥
させた。 次にこのろ紙にアルカリホスファターゼで標
識した抗hCG抗体を染み込ませ、−80℃で冷凍後こ
れを凍結乾燥し、ろ紙Aを得た。 このろ紙Aを6mm
四方に切りポリスチレン基材Cに第4図に示すように張
つつけた。 対照として標識抗体のみ染み込ませ凍結乾
燥したろ紙Bを同形に切り同様にポリスチレン基材Cに
張りつけてスティックを作製した。
(Example 1) An anti-hCG antibody was bound and fixed to a filter paper by a known method and dried. Next, this filter paper was impregnated with an anti-hCG antibody labeled with alkaline phosphatase, frozen at -80°C, and then freeze-dried to obtain filter paper A. This filter paper A is 6mm
It was cut into four sides and stuck to polystyrene base material C as shown in FIG. As a control, filter paper B impregnated with only the labeled antibody and lyophilized was cut into the same shape and attached to polystyrene substrate C in the same manner to produce a stick.

第4図に示すスティックを用いた測定にあたフては、P
BS液とhcG50mIυ/111PBS液の2溶液を
検体サンプルとした。 検体サンプルをステックに染み
込ませ一定時間放置し、水道流水により洗浄した。 洗
浄後、基質液(2mMS−ブロモ−4−クロロ−3−イ
ンドリルフォスフェートを含むpH10トリスバツフア
ー)で一定時間反応させた。
For measurements using the stick shown in Figure 4, P
Two solutions, BS solution and hcG50 mIυ/111 PBS solution, were used as specimen samples. The stick was soaked with the specimen sample, left for a certain period of time, and washed with running tap water. After washing, the plate was reacted with a substrate solution (pH 10 Tris buffer containing 2mMS-bromo-4-chloro-3-indolylphosphate) for a certain period of time.

スティック上のろMBをブランクとしてAについて65
3nmの波長で反射吸光度を測定した。 その結果を表
1に示す。
65 for A with the filter MB on the stick as a blank
Reflection absorbance was measured at a wavelength of 3 nm. The results are shown in Table 1.

表     1 (実施例2) ろ紙に抗hCG抗体を公知の方法で結合、固定させ乾燥
させて得たろ紙りを6mm四方に切りポリスチレン基材
Cに第5図に示すように張りつけた。 対照として未処
理のろ紙Eを同形にポリスチレン基材Cに張りつけた、
別のろ紙にアルカリフォスファターゼ標識抗体湿潤させ
た後−40℃で時間凍結後、凍結乾燥を4時間行い乾燥
させて得たろ紙Fを6mmX20mm程度に切り、これ
を第5図に示すように先の抗体を結合したろ紙りおよび
未処理のろ紙Eに重ねてスティックを作製した。
Table 1 (Example 2) An anti-hCG antibody was bound and fixed to filter paper by a known method and dried, and the obtained filter paper was cut into 6 mm squares and pasted on polystyrene base material C as shown in FIG. 5. As a control, untreated filter paper E was attached to polystyrene base material C in the same shape.
Another filter paper was wetted with the alkaline phosphatase-labeled antibody, then frozen at -40°C for 4 hours, and then lyophilized for 4 hours. A stick was made by stacking antibody-bound filter paper and untreated filter paper E.

第5図に示すスティックを用いた測定にあたっては、P
BS液とh CG 50 m1ll/mj2PBS液の
2溶液を検体サンプルとした。 検体サンプルをろ紙F
上に滴下し一定時間放置し、ろ紙Fをはがしろ紙りおよ
びEを水により洗浄した。 洗浄後、基質液(2m、M
S−ブロモ−4−クロロ−3−インドリルフォスフェー
トを含むpH10トリスバツフアー)で一定時間反応さ
せた。 スティック上のろ紙EをブランクとしてDにつ
いて653nmの波長で反射吸光度を測定した。 その
結果を表2に示す。
When measuring using the stick shown in Figure 5, P
Two solutions, BS solution and hCG 50 ml/mj2 PBS solution, were used as specimen samples. Place the specimen sample on filter paper F.
After dropping the filter paper onto the filter and leaving it for a certain period of time, the filter paper F was removed and the filter paper and E were washed with water. After washing, add substrate solution (2 m, M
The reaction was carried out for a certain period of time in a pH 10 Tris buffer containing S-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate. Using the filter paper E on the stick as a blank, the reflection absorbance of D was measured at a wavelength of 653 nm. The results are shown in Table 2.

表 れる簡単な構造体にまとめられ、従来全部が別個であっ
たものに比べ、装置全体として安価で小型化され、免疫
測定操作上も非常に便利になった。
The device has been assembled into a simple structure that can be seen, making the device as a whole cheaper and more compact than conventional devices in which everything was separate, making it extremely convenient for immunoassay operations.

この試験具を用いれば、検体は、ろ紙に染み込ませるだ
けでよいので、衛生的であるばかりか、少量の検体で測
定が可能である。
If this test tool is used, it is only necessary to soak the sample into the filter paper, so it is not only hygienic, but also enables measurement with a small amount of sample.

いずれの実施例においても、hCG含有検体サンプルで
は発色して妊娠の徴候があることが確認された。
In all Examples, it was confirmed that hCG-containing specimen samples developed color and showed signs of pregnancy.

〈発明の効果〉 本発明においては、抗体あるいは抗原が固定状態で、標
識抗体あるいは標識抗体が非固定状態で、同一または別
個の吸水性担体上に担持さ
<Effects of the Invention> In the present invention, antibodies or antigens are supported in a fixed state, and labeled antibodies or labeled antibodies are supported in an unimmobilized state on the same or separate water-absorbing carriers.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第1図および第2図は、本発明の免疫測定用試験具の構
成例を示す側面図である。 第3図は本発明の免疫測定用試験具の他の構成例を示し
、第3a図は分解図、第3b図は側面図、第3C図は断
面図である。 第4図および第5図は、それぞれ実施例1および2で用
いた試験具の平面図および側面図である。 符号の説明 1.10・・・本発明の免疫測定用試験具、2・・・抗
体あるいは抗原、 3・・・2を固定し5を担持する吸水性担体、4.4a
、4b・・・把手、 5・・・標識抗体あるいは標識抗原、 6・・・5を担持する吸水性担体、 7・・・窓
FIG. 1 and FIG. 2 are side views showing an example of the structure of the immunoassay test device of the present invention. FIG. 3 shows another example of the structure of the immunoassay test device of the present invention, in which FIG. 3a is an exploded view, FIG. 3b is a side view, and FIG. 3C is a sectional view. 4 and 5 are a plan view and a side view of the test device used in Examples 1 and 2, respectively. Explanation of symbols 1.10... Test device for immunoassay of the present invention, 2... Antibody or antigen, 3... Water-absorbing carrier that immobilizes 2 and supports 5, 4.4a
, 4b...handle, 5...labeled antibody or labeled antigen, 6...water-absorbent carrier supporting 5, 7...window

Claims (7)

【特許請求の範囲】[Claims] (1)吸水性担体に、検体と結合可能な抗体(あるいは
抗原)が固定されて担持されるとともに、標識抗体(あ
るいは標識抗原)が固定されない状態で担持されている
ことを特徴とする免疫測定用試験具。
(1) An immunoassay characterized in that an antibody (or antigen) capable of binding to a specimen is immobilized and carried on a water-absorbing carrier, and a labeled antibody (or labeled antigen) is carried in an unfixed state. test equipment.
(2)前記吸水性担体は把手上に付着されている請求項
1に記載の免疫測定用試験具。
(2) The immunoassay test device according to claim 1, wherein the water-absorbing carrier is attached to a handle.
(3)前記吸水性担体は把手に挟持されている請求項1
に記載の免疫測定用試験具。
(3) Claim 1, wherein the water-absorbing carrier is held between a handle.
The immunoassay test device described in .
(4)検体と結合可能な抗体(あるいは抗原)が固定さ
れて担持された第1の吸水性担体と、標識抗体(あるい
は標識抗原)が固定されない状態で担持された第2の吸
水性担体との組合わせからなることを特徴とする免疫測
定用試験具。
(4) A first water-absorbing carrier on which an antibody (or antigen) capable of binding to a specimen is immobilized, and a second water-absorbing carrier on which a labeled antibody (or labeled antigen) is carried in an unimmobilized state. A test device for immunoassay comprising a combination of the following.
(5)前記第1吸水性担体および第2吸水性担体が剥離
可能なように積層されている請求項4に記載の免疫測定
用試験具。
(5) The test device for immunoassay according to claim 4, wherein the first water-absorbing carrier and the second water-absorbing carrier are laminated in a peelable manner.
(6)前記第1および第2の吸水性担体はこの順序で把
手上に付着されている請求項5に記載の免疫測定用試験
具。
(6) The test device for immunoassay according to claim 5, wherein the first and second water-absorbing carriers are attached on the handle in this order.
(7)前記担体がろ紙であり、検体が尿中のヒト絨毛性
ゴナドトロピンである請求項1ないし6のいずれかに記
載の免疫測定用試験具。
(7) The immunoassay test device according to any one of claims 1 to 6, wherein the carrier is a filter paper and the specimen is human chorionic gonadotropin in urine.
JP24155088A 1988-09-27 1988-09-27 Testing means for immunoassay Pending JPH0288969A (en)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05273211A (en) * 1992-01-31 1993-10-22 Boehringer Mannheim Gmbh Analytical element for immunoassay

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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05273211A (en) * 1992-01-31 1993-10-22 Boehringer Mannheim Gmbh Analytical element for immunoassay

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