JPH0257179A - アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ - Google Patents
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼInfo
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- JPH0257179A JPH0257179A JP63208170A JP20817088A JPH0257179A JP H0257179 A JPH0257179 A JP H0257179A JP 63208170 A JP63208170 A JP 63208170A JP 20817088 A JP20817088 A JP 20817088A JP H0257179 A JPH0257179 A JP H0257179A
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Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアセチル−ＣｏＡのアセチル基にＣｏ２を結合
させ、脂肪酸の生合成の重要な中間体であるマロニル−
ＣｏＡを合成する反応を触媒する酵素であるアセチル−
ＣｏＡカルボキシラーゼに関する。
させ、脂肪酸の生合成の重要な中間体であるマロニル−
ＣｏＡを合成する反応を触媒する酵素であるアセチル−
ＣｏＡカルボキシラーゼに関する。
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ［Ｃ０２リガーゼ（
ＡＤＰ形成） 、ＥＣ８，４，１，２，１はビオチンを
補酵素として共有結合している細胞質酵素で、ＡＴＰの
存在下アセチル−ＣｏＡの炭酸化を触媒しマロニル−Ｃ
ｏＡ１ 即ち脂肪酸生合成に必要な２個単位の炭素原子
の活性化されたドナー（ｄｏｎｏｒ）を生成する。これ
までに蓄積された証拠はアセチル−ＣｏＡカルボキシラ
ーゼが長鎖脂肪酸の生合成の調節に決定的な役割を果た
していることを示している（文献１及び２）。
ＡＤＰ形成） 、ＥＣ８，４，１，２，１はビオチンを
補酵素として共有結合している細胞質酵素で、ＡＴＰの
存在下アセチル−ＣｏＡの炭酸化を触媒しマロニル−Ｃ
ｏＡ１ 即ち脂肪酸生合成に必要な２個単位の炭素原子
の活性化されたドナー（ｄｏｎｏｒ）を生成する。これ
までに蓄積された証拠はアセチル−ＣｏＡカルボキシラ
ーゼが長鎖脂肪酸の生合成の調節に決定的な役割を果た
していることを示している（文献１及び２）。
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの細胞内含量は栄養
、ホルモン、発生及び遺伝等の様々な条件の中での脂肪
酸合成速度とともに変動する。動物の均一なアセチル−
ＣｏＡカルボキシラーゼの標品は、これまでラット（文
献３〜５）及びチキンリバー（ｃｈｉｃｋｅｎ １ｉｖ
ｅｒ；文献６及び７）、ラット（文献８）、ウサギの乳
腺（文献９）及びガチョウの尾脂腺（文献１０）を含む
様々な組織から得られている。
、ホルモン、発生及び遺伝等の様々な条件の中での脂肪
酸合成速度とともに変動する。動物の均一なアセチル−
ＣｏＡカルボキシラーゼの標品は、これまでラット（文
献３〜５）及びチキンリバー（ｃｈｉｃｋｅｎ １ｉｖ
ｅｒ；文献６及び７）、ラット（文献８）、ウサギの乳
腺（文献９）及びガチョウの尾脂腺（文献１０）を含む
様々な組織から得られている。
この酵素は高度の１ｎｔｅｇｒａｔｅｄ ５ｔｒｕｃｔ
ｕｒｅを示し、分子量２２０，０００〜２１ｉ０，００
０を有する一種類のサブユニットからなる（文献３〜！
０）。この単一サブユニットは調節機能のみならずビオ
チンカルボキシルキャリアー蛋白質、ビオチンカルボキ
シラーゼ及びカルボキシルトランスフェラーゼからなる
三つの触媒機能ををしている（文献４）。
ｕｒｅを示し、分子量２２０，０００〜２１ｉ０，００
０を有する一種類のサブユニットからなる（文献３〜！
０）。この単一サブユニットは調節機能のみならずビオ
チンカルボキシルキャリアー蛋白質、ビオチンカルボキ
シラーゼ及びカルボキシルトランスフェラーゼからなる
三つの触媒機能ををしている（文献４）。
この酵素の調節の土台となる分子メカニズムを理解する
ために、該酵素の触媒ドメイン及び調節ドメインの構造
的な機構を解明することが重要である。
ために、該酵素の触媒ドメイン及び調節ドメインの構造
的な機構を解明することが重要である。
本発明者は最近、蛋白質化学及び分子クローニングの手
法を用いてチキンリバーのアセチル−ＣｏＡカルボキシ
ラーゼのビオチン結合部位近辺の一次構造を発表した（
文献１１）。本発明者は、ここにチキンリバーのアセチ
ル−ＣｏＡカルボキシラーゼの全アミノ酸配列を提供す
るものである。この配列はｃＤＮＡのヌクレオチド配列
から推定されたものである。これはビオチン依存性カル
ボキシラーゼに対して与えられた最初の完全なアミノ酸
配列である。
法を用いてチキンリバーのアセチル−ＣｏＡカルボキシ
ラーゼのビオチン結合部位近辺の一次構造を発表した（
文献１１）。本発明者は、ここにチキンリバーのアセチ
ル−ＣｏＡカルボキシラーゼの全アミノ酸配列を提供す
るものである。この配列はｃＤＮＡのヌクレオチド配列
から推定されたものである。これはビオチン依存性カル
ボキシラーゼに対して与えられた最初の完全なアミノ酸
配列である。
本発明者は先にエッダレイイングヘン リバーから得た
ｐｏｌｙ（Ａ）’″ＲＮＡ （文献１１）を用いて岡山
−バーブ法（文献１２）によりアセチル−ＣｏＡカルボ
キシラーゼに対する一つのｃＤＮＡクローンを分離した
。このクローンｐＡＣＣ３３は該酵素のポリペプチド配
列の限られた一部分のみをコードしていたので、本発明
者はこの最初のｃＤＮＡクローンをプローブとして用い
、該酵素の全蛋白をコードするヌクレオチド配列まで伸
びるｃＤＮＡクローン群を得ることを試みた（第１図参
照）。
ｐｏｌｙ（Ａ）’″ＲＮＡ （文献１１）を用いて岡山
−バーブ法（文献１２）によりアセチル−ＣｏＡカルボ
キシラーゼに対する一つのｃＤＮＡクローンを分離した
。このクローンｐＡＣＣ３３は該酵素のポリペプチド配
列の限られた一部分のみをコードしていたので、本発明
者はこの最初のｃＤＮＡクローンをプローブとして用い
、該酵素の全蛋白をコードするヌクレオチド配列まで伸
びるｃＤＮＡクローン群を得ることを試みた（第１図参
照）。
ｐＡＣＣ３３のｃＤＮＡの３′部分はりｏ −７ｐＡＣ
０２０６の配列とオーバーラツプする７Ｂ３ｂｐの配列
を含んでいるが、ヌクレオチド３９２１より下流のミス
マツチ部分を有していた（第１図の説明参照）。
０２０６の配列とオーバーラツプする７Ｂ３ｂｐの配列
を含んでいるが、ヌクレオチド３９２１より下流のミス
マツチ部分を有していた（第１図の説明参照）。
同様にｐＡＣＣ２０Ｂの３′末端部分（ヌクレオチド４
５９Ｂより下流）はｐＡＣｏ ２４９とｐＡＣｏ ２５
Ｂの配列と−致しなかった。
５９Ｂより下流）はｐＡＣｏ ２４９とｐＡＣｏ ２５
Ｂの配列と−致しなかった。
これらｐＡＣＣ３３及びｐＡＣＣ２０［ｉの前記ミスマ
ツチ部分はイントロン配列であった。
ツチ部分はイントロン配列であった。
ｐａｃｅ ３３の蛋白をコードする配列の正確さを確認
するために、本発明者はｐＡＣＣ３３の蛋白をコードす
る領域から得たｃＤＮＡ断片［ＥｃｏＲＩ （１４８０
）〜Ｋｐｎ Ｉ （２９２（ｉ）］によりオリゴ（ｄＴ
）をプライマーとして作成したＣＤＮＡライブラリー（
オリゴ（ｄＴ）プラムドｃＤＮＡライブラリー）をスク
リーニングした。このようにしてｐＡＣＣ２６３、ｐＡ
ＣＣ２６８、及びｐＡＣＣ２７１を含む１２個の陽性ク
ローンを得た。得られた全てのクローンには１）ＡＣＣ
３３の制限酵素地図との相違点が全く無かった。
するために、本発明者はｐＡＣＣ３３の蛋白をコードす
る領域から得たｃＤＮＡ断片［ＥｃｏＲＩ （１４８０
）〜Ｋｐｎ Ｉ （２９２（ｉ）］によりオリゴ（ｄＴ
）をプライマーとして作成したＣＤＮＡライブラリー（
オリゴ（ｄＴ）プラムドｃＤＮＡライブラリー）をスク
リーニングした。このようにしてｐＡＣＣ２６３、ｐＡ
ＣＣ２６８、及びｐＡＣＣ２７１を含む１２個の陽性ク
ローンを得た。得られた全てのクローンには１）ＡＣＣ
３３の制限酵素地図との相違点が全く無かった。
５′末端領域のｃＤＮＡを保有するクローン群を単離す
るためにアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼをコードす
るｍＲＮＡに特異的なオリゴデオキシヌクレチドを用い
、プライマー伸長によりＣＤＮＡライブラリーを作成し
た。これらのＣＤＮＡライブラリーをスクリーニングし
てｐＡＣＣ７８、ｐＡｃｃ ９３、ｐＡＣＣ９４、ｐＡ
ｃｃ１５７、ｐＡｃｏ １９Ｂ及びｐＡＣＣ２４３を含
むクローン群を得た（図１）。これらのクローンの内ｐ
ＡＣＣ１９１１ｉは最も上流のｃＤＮＡ配列を保有して
いた。クローンｐＡＣＣ７８のｃＤＮＡとクローンｐｉ
ｃｃ ９３、ｐＡＣＣ９４及びｐＡｃｃ３８７とを比較
すると、ｐＡＣＣ７８には９３Ｇｂｐ （ヌクレオチド
５３１．−８８３に対応）の欠失が見られた。プライマ
ー伸長反応によるＣＤＮＡライブラリーから単離された
クローン群の中で分析された６クローンの内、ｐＡＣＣ
９３、ｐＡＣＣ９４及び一つのクローン（第１図には示
されていない）を含む３つのクローンは前記欠失部位が
存在しなかった。オリゴ（ｄＴ）プライムドｃＤＮＡラ
イブラリーから得たクローンＩＩＡＣＣ３８７のｃＤＮ
Ａにもこのような欠失は存在しなかった。ｃＤＮＡ配列
の読み取り枠を確認するために、本発明者はチキンリバ
ーアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの部分的なアミノ
酸配列を分析した。精製した該酵素をスタフィロコッカ
ルプロティナーゼで限定分解後、分離用５ＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動にかけ、ペプチド断片に分離
した。単離した３１ｋＤａ （文献１１）のペプチドと
４１ｋＤａのペプチドのアミノ酸配列を分析した（表１
）。
るためにアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼをコードす
るｍＲＮＡに特異的なオリゴデオキシヌクレチドを用い
、プライマー伸長によりＣＤＮＡライブラリーを作成し
た。これらのＣＤＮＡライブラリーをスクリーニングし
てｐＡＣＣ７８、ｐＡｃｃ ９３、ｐＡＣＣ９４、ｐＡ
ｃｃ１５７、ｐＡｃｏ １９Ｂ及びｐＡＣＣ２４３を含
むクローン群を得た（図１）。これらのクローンの内ｐ
ＡＣＣ１９１１ｉは最も上流のｃＤＮＡ配列を保有して
いた。クローンｐＡＣＣ７８のｃＤＮＡとクローンｐｉ
ｃｃ ９３、ｐＡＣＣ９４及びｐＡｃｃ３８７とを比較
すると、ｐＡＣＣ７８には９３Ｇｂｐ （ヌクレオチド
５３１．−８８３に対応）の欠失が見られた。プライマ
ー伸長反応によるＣＤＮＡライブラリーから単離された
クローン群の中で分析された６クローンの内、ｐＡＣＣ
９３、ｐＡＣＣ９４及び一つのクローン（第１図には示
されていない）を含む３つのクローンは前記欠失部位が
存在しなかった。オリゴ（ｄＴ）プライムドｃＤＮＡラ
イブラリーから得たクローンＩＩＡＣＣ３８７のｃＤＮ
Ａにもこのような欠失は存在しなかった。ｃＤＮＡ配列
の読み取り枠を確認するために、本発明者はチキンリバ
ーアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの部分的なアミノ
酸配列を分析した。精製した該酵素をスタフィロコッカ
ルプロティナーゼで限定分解後、分離用５ＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動にかけ、ペプチド断片に分離
した。単離した３１ｋＤａ （文献１１）のペプチドと
４１ｋＤａのペプチドのアミノ酸配列を分析した（表１
）。
又、精製した該酵素をアクロモバクタープロティナーゼ
Ｉで分解し、得られたペプチド断片を逆相ＨＰＬＣ（文
献１１）で分離した。配列が決定されたペプチドを第２
図及び表１に、ヌクレオチドと関連付けて示す。
Ｉで分解し、得られたペプチド断片を逆相ＨＰＬＣ（文
献１１）で分離した。配列が決定されたペプチドを第２
図及び表１に、ヌクレオチドと関連付けて示す。
分解されていない完全なまま（１ｎｔａｃｔ）での該酵
素のポリペプチドのアミン末端配列を、自動エドマン分
解により決定する試みは成功しなかった。
素のポリペプチドのアミン末端配列を、自動エドマン分
解により決定する試みは成功しなかった。
図２にチキンリバーアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ
に対するｃＤＮＡの７３６８ヌクレオチド配列を示す。
に対するｃＤＮＡの７３６８ヌクレオチド配列を示す。
２３２４個のアミノ酸配列をコードするただ一つの読み
取り枠（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｌｎｇ ｆｒａｍｅ）が存
在する。
取り枠（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｌｎｇ ｆｒａｍｅ）が存
在する。
このアミノ酸配列は、それぞれのペプチドをエドマン分
解することによって決定されたアミノ酸配列と同一であ
る。
解することによって決定されたアミノ酸配列と同一であ
る。
本発明者は翻訳開始コドンとして最初のＡＴＧ （ヌク
レオチド１−３）を特定した。この推定上の開始コドン
の周辺のヌクレオチド配列はＫｏｚａｋ （文献２Ｉ）
に記載された真核生物の開始コドンに対するコンセンサ
スシーケンス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ５ｅｑｕｅｎｃｅ
）とよく一致する。読み取り枠とは無関係である、ｃＤ
ＮＡの５”非翻訳領域には更にその上流のＡＴＧは全く
見られなかった。前記コンセンサスシーケンス（文献２
１）と一致する２番目のメチオニン（アミノ酸残基の１
３番目）ではなく、１番目のメチオニン（アミノ酸残基
の１番目）を翻訳開始コドンとして選んだことが正当で
あることを証明する蛋白解析のデータはないが、真核生
物においては第１番目のＡＴＧが開始コドンではないケ
ースは稀である。
レオチド１−３）を特定した。この推定上の開始コドン
の周辺のヌクレオチド配列はＫｏｚａｋ （文献２Ｉ）
に記載された真核生物の開始コドンに対するコンセンサ
スシーケンス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ５ｅｑｕｅｎｃｅ
）とよく一致する。読み取り枠とは無関係である、ｃＤ
ＮＡの５”非翻訳領域には更にその上流のＡＴＧは全く
見られなかった。前記コンセンサスシーケンス（文献２
１）と一致する２番目のメチオニン（アミノ酸残基の１
３番目）ではなく、１番目のメチオニン（アミノ酸残基
の１番目）を翻訳開始コドンとして選んだことが正当で
あることを証明する蛋白解析のデータはないが、真核生
物においては第１番目のＡＴＧが開始コドンではないケ
ースは稀である。
チキンリバーから得た全ＲＮＡをｃＤＮＡ断片で調べた
ところ、大きさが約１２，０００ヌクレオチドであると
推定される、ハイブリダイゼーション陽性のＲＮＡが認
められた。この大きさはクローン化したｃ ＤＮＡ （
７３ｆ；８ヌクレオチド）の長さを考慮すると、アセチ
ル−ＣｏＡカルボキシラーゼをコードするｍＲＮＡの３
′側の非翻訳領域がかなり長いことを示唆するものであ
る。即ち第２図に示されている長さ２４２ｂｐの３′非
非翻訳列部分は、前記の３′非翻訳領域の上流の一部分
に相当しているに過ぎない。
ところ、大きさが約１２，０００ヌクレオチドであると
推定される、ハイブリダイゼーション陽性のＲＮＡが認
められた。この大きさはクローン化したｃ ＤＮＡ （
７３ｆ；８ヌクレオチド）の長さを考慮すると、アセチ
ル−ＣｏＡカルボキシラーゼをコードするｍＲＮＡの３
′側の非翻訳領域がかなり長いことを示唆するものであ
る。即ち第２図に示されている長さ２４２ｂｐの３′非
非翻訳列部分は、前記の３′非翻訳領域の上流の一部分
に相当しているに過ぎない。
チキンリバーのアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼは、
そのｃＤＮＡ配列から計算上の分子量が２６２゜７０８
であり、開始メチオニンを含む２３２４個のアミノ酸残
基からなることが予想される。チキンリバーのアセチル
−ＣｏＡカルボキシラーゼの考え得るビオチンカルボキ
シルキャリアー蛋白質の一次構造が報告されている（文
献１１）。本研究において、その領域の存在箇所は、以
前に提案されたビオチン結合部位（文献！ｌ）、即ち第
２図に示すアミノ酸残基７８６番目のＬｙｓを含む箇所
であることが解明された。
そのｃＤＮＡ配列から計算上の分子量が２６２゜７０８
であり、開始メチオニンを含む２３２４個のアミノ酸残
基からなることが予想される。チキンリバーのアセチル
−ＣｏＡカルボキシラーゼの考え得るビオチンカルボキ
シルキャリアー蛋白質の一次構造が報告されている（文
献１１）。本研究において、その領域の存在箇所は、以
前に提案されたビオチン結合部位（文献！ｌ）、即ち第
２図に示すアミノ酸残基７８６番目のＬｙｓを含む箇所
であることが解明された。
以下本発明を実施例に基づき説明する。
（実施例）
■ｃＤＮＡＣＤＮＡライブラリースクリーニングエッダ
レイイングヘン リバー（ｅｇｇ−１ａｙｉｎｇ ｈｅ
ｎｌ １ ｖｅｒ ）から得たｐｏｌｙ（Ａ）” ＲＮ
Ａを用いて岡山−バーブ法（文献１２）によりＣＤＮ
Ａライブラリー（以下箱−岡山−バーグｃＤＮＡライブ
ラリーという）を作成した（文献１１）。更に６日齢チ
キンリバーから得たｐｏｌｙ（Ａ）” ＲＮ Ａ １９
．２μｇとベクターブライマーＤＮＡ４．２μｇとによ
り上記と同様にＣＤＮＡライブラリー（以下以下第二岡
山−バーグｃＤＮＡライブラリーという）を作成した。
レイイングヘン リバー（ｅｇｇ−１ａｙｉｎｇ ｈｅ
ｎｌ １ ｖｅｒ ）から得たｐｏｌｙ（Ａ）” ＲＮ
Ａを用いて岡山−バーブ法（文献１２）によりＣＤＮ
Ａライブラリー（以下箱−岡山−バーグｃＤＮＡライブ
ラリーという）を作成した（文献１１）。更に６日齢チ
キンリバーから得たｐｏｌｙ（Ａ）” ＲＮ Ａ １９
．２μｇとベクターブライマーＤＮＡ４．２μｇとによ
り上記と同様にＣＤＮＡライブラリー（以下以下第二岡
山−バーグｃＤＮＡライブラリーという）を作成した。
又、ｌＯμｇのオリゴ（ｄＴ）＋ｐ−＋ｓをプライマー
としてチキンリバーｐｏｌｙ（Ａ）’″ＲＮＡｌ０μｇ
を鋳型にしてｃＤＮＡライブラリー（以下第三のｃＤＮ
Ａライブラリーという）を作成した（文献１３）。
としてチキンリバーｐｏｌｙ（Ａ）’″ＲＮＡｌ０μｇ
を鋳型にしてｃＤＮＡライブラリー（以下第三のｃＤＮ
Ａライブラリーという）を作成した（文献１３）。
上流部位のヌクレオチド配列を持つＣＤＮＡ群をクロー
ニングするため、自動ＤＮＡ合成器により合成した三種
類のオリゴデオキシヌクレオチド（後述する）をプライ
マーとして逆転写により上流部分のＣＤＮＡ群を合成し
た。即ち、前記プライマー０．１〜ｌｎｍｏｌを用い、
チキンリバーから得たｐｏｌｙ（Ａ）’ＲＮＡ１００〜
２００μｇを鋳型にして一本鎖ＣＤＮＡを合成し、つい
で二本鎖とし、Ｓｌエンドヌクレアーゼで処理し、その
３′末端にｐｏｌｙ（ｄＣ）鎖を付加した。このｃＤＮ
Ａ断片をプラスミドｐＢＲ３２２の、ｐｏｌｙ（ｄＧ）
鎖を付加したＰｓｔ Ｉ部位に挿入した。
ニングするため、自動ＤＮＡ合成器により合成した三種
類のオリゴデオキシヌクレオチド（後述する）をプライ
マーとして逆転写により上流部分のＣＤＮＡ群を合成し
た。即ち、前記プライマー０．１〜ｌｎｍｏｌを用い、
チキンリバーから得たｐｏｌｙ（Ａ）’ＲＮＡ１００〜
２００μｇを鋳型にして一本鎖ＣＤＮＡを合成し、つい
で二本鎖とし、Ｓｌエンドヌクレアーゼで処理し、その
３′末端にｐｏｌｙ（ｄＣ）鎖を付加した。このｃＤＮ
Ａ断片をプラスミドｐＢＲ３２２の、ｐｏｌｙ（ｄＧ）
鎖を付加したＰｓｔ Ｉ部位に挿入した。
これらの操作は本質的に文献１４に記載された操作と同
様であった。形質転換とスクリーニングは文献１５に記
載されたものと同様に行なった。
様であった。形質転換とスクリーニングは文献１５に記
載されたものと同様に行なった。
他に特に指定しない限りスクリーニングはｃＤＮＡ断片
をプローブとして用い、ＧＯ’ＣでＩｎ ５ｉｔｕハイ
ブリダイゼ一シ日ンにより実施した。クローン選別のた
めのハイブリッド形成用プローブはこれラフローブの５
′末端を、Ｔ４ポリヌクレオキナーゼと［γ−”Ｐ］Ａ
ＴＰとにより標識するか（文献１Ｂ）、ニックトランス
レージロンにより標識するか（文献１７）、又は［γ−
３２ｐコｄＣＴＰによるランダムプライミング法（文献
１８）により標識した。
をプローブとして用い、ＧＯ’ＣでＩｎ ５ｉｔｕハイ
ブリダイゼ一シ日ンにより実施した。クローン選別のた
めのハイブリッド形成用プローブはこれラフローブの５
′末端を、Ｔ４ポリヌクレオキナーゼと［γ−”Ｐ］Ａ
ＴＰとにより標識するか（文献１Ｂ）、ニックトランス
レージロンにより標識するか（文献１７）、又は［γ−
３２ｐコｄＣＴＰによるランダムプライミング法（文献
１８）により標識した。
■ｃＤＮＡクローン群の単離
ｃＤＮＡクローン群の単離を第１図に基づき説明する。
クローンｐＡｃｃ ３３の３′末端部分から得た１、［
ｉｋｂのＫｐｎ 工断片を用いて第二岡山−バーグｃＤ
ＮＡライブラリーからの形質転換体７Ｘ１０’個をスク
リーニングしてクローンｐＡＣＣ２０Ｇを得た。コ１７
） ｐＡｃｃ ２０ＧのｃＤＮＡフラグメント（ヌクレ
オチド４２１９４５９Ｂを含む）を用いて第三のｃＤＮ
Ａライブラリーからの形質転換体４Ｘ１０６個をスクリ
ーニングしてクローンＩ）ＡＣＣ２４９及びｐＡＣＣ２
５Ｂを含む７個の陽性クローンを得た。更にこのＩ）Ａ
ＣＣ２４９のｃＤＮＡインサートを用いて前記第三のｃ
ＤＮＡライブラリーからの形質転換体５ＸＩＰ個をスク
リーニングしてクローンｐＡＣＣ３１１ｉ７を含む約３
０個の陽性クローンを得た。前記クローンｐＡＣＣ２４
９の旧ｎｆ Ｉ （４７７２）−旧ｎｆＩ （５２［１
１）ｃ ＤＮＡ断片を用いて第二岡山−バーグｃＤＮＡ
ライブラリーからの形質転換体７×ｔＯＳ個をスクリー
ニングしてクローンｐＡＣＣ３２９を得た。前記同じフ
ィルターを、ｐＡｃｃ ３２９のＰｖｕ ＩＩ（５５３
Ｂ）−ＰＶｕＩＩ （Ｉｌｉ７１１ｉ３）を用いてスク
リーニングするために再使用した。その結果ｐＡＣ０３
９２を含む３個の陽性クローンを得た。クローンｐＡＣ
Ｃ４０３はｐＡＣＣ３２９のＰｖｕＩＩ （５５３Ｇ）
−ＰＶｕｎ （［ｉ７［ｉ３）断片による第三のｃＤＮ
Ａライブラリーからの形質転換体５Ｘ１０６個をスクリ
ーニングすることによって得られた。
ｉｋｂのＫｐｎ 工断片を用いて第二岡山−バーグｃＤ
ＮＡライブラリーからの形質転換体７Ｘ１０’個をスク
リーニングしてクローンｐＡＣＣ２０Ｇを得た。コ１７
） ｐＡｃｃ ２０ＧのｃＤＮＡフラグメント（ヌクレ
オチド４２１９４５９Ｂを含む）を用いて第三のｃＤＮ
Ａライブラリーからの形質転換体４Ｘ１０６個をスクリ
ーニングしてクローンＩ）ＡＣＣ２４９及びｐＡＣＣ２
５Ｂを含む７個の陽性クローンを得た。更にこのＩ）Ａ
ＣＣ２４９のｃＤＮＡインサートを用いて前記第三のｃ
ＤＮＡライブラリーからの形質転換体５ＸＩＰ個をスク
リーニングしてクローンｐＡＣＣ３１１ｉ７を含む約３
０個の陽性クローンを得た。前記クローンｐＡＣＣ２４
９の旧ｎｆ Ｉ （４７７２）−旧ｎｆＩ （５２［１
１）ｃ ＤＮＡ断片を用いて第二岡山−バーグｃＤＮＡ
ライブラリーからの形質転換体７×ｔＯＳ個をスクリー
ニングしてクローンｐＡＣＣ３２９を得た。前記同じフ
ィルターを、ｐＡｃｃ ３２９のＰｖｕ ＩＩ（５５３
Ｂ）−ＰＶｕＩＩ （Ｉｌｉ７１１ｉ３）を用いてスク
リーニングするために再使用した。その結果ｐＡＣ０３
９２を含む３個の陽性クローンを得た。クローンｐＡＣ
Ｃ４０３はｐＡＣＣ３２９のＰｖｕＩＩ （５５３Ｇ）
−ＰＶｕｎ （［ｉ７［ｉ３）断片による第三のｃＤＮ
Ａライブラリーからの形質転換体５Ｘ１０６個をスクリ
ーニングすることによって得られた。
ｐＡＣＣ３３のＥｃｏＲＩ （１４８０）−Ｋｐｎ Ｉ
（２９２Ｇ）断片を用いて第三のｃＤＮＡライブラリ
ーからの形質転換体４Ｘ１０６個をスクリーニングして
クローンＩ）ＡＣＣ２６３、ｐＡＣＣ２６８及びｐＡＣ
Ｃ２７１を含む１２個の陽性クローンを得た。
（２９２Ｇ）断片を用いて第三のｃＤＮＡライブラリ
ーからの形質転換体４Ｘ１０６個をスクリーニングして
クローンＩ）ＡＣＣ２６３、ｐＡＣＣ２６８及びｐＡＣ
Ｃ２７１を含む１２個の陽性クローンを得た。
クローンｐＡｃｃ ３８７はｐＡＣＣ３３のｃＤＮＡイ
ンサートの５′側に位置するＰｓｔ Ｉ部位から旧ｎｄ
ｎＩ（１２２９）へ延びる３５１ｂｐの断面を用いて、
第三のｃＤＮＡライブラリーからの形質転換体５Ｘ１０
６個から単離されｐＡＣＣ３３のヌクレオチド１１２４
−１１３７に相補的な第一の合成オリゴヌクレオチド５
’−ＧＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＡＣ−３′をプライマ
ーとして、ヘンリバー（ｈｅｎ １１ｖｅｒ）ｐｏｌｙ
（Ａ）”ＲＮＡを鋳型にして逆転写により一本鎖ｃＤＮ
Ａを合成した。二本鎖ｃＤＮＡとした後、ｐＢＲ３２２
に導入し、クローン化した。得られたクローンを２回ス
クリーニングした（１４Ｘ１０’個の形質転換体を２回
）。その５ａｕ３ＡＩ （９２７）−Ｓａｕ３ＡＩ （
１０８３）断片はｐＡＣｏ ７Ｂを含む５個の陽性クロ
ーンを与えた。そしてこのｐＡＣＣ７８のヌクレオチド
２７７−４７１を含むｃＤＮＡフラグメントはｐＡＣＣ
９３とｐＡｃｅ ９４を含む６個の陽性クローンを与え
た。ヌクレオチド４１８−４３４に相補的な第二の合成
オリゴヌクレオチド５’−ＡＡＣＡＴＣＴＣＡＴＡＧＧ
ＡＣＣＡ−３’をプライマーとして、６日齢チキンリバ
ーｐｏｌｙ（Ａ）◆ＲＮＡを鋳型にしてＣＤＮＡを合成
し、得られた５ Ｘ １０Ｇ個の形質転換体を、ＣＤＮ
Ａでスクリーニングして約３９０個の陽性クローンを得
た。これらのクローンの中で分析された１０２個のクロ
ーンの内、ｐＡＣＣ１５７とＩ）ＡＣＣ１９［ｉが−１
４＝ 最も上流に伸長しているようであった。
ンサートの５′側に位置するＰｓｔ Ｉ部位から旧ｎｄ
ｎＩ（１２２９）へ延びる３５１ｂｐの断面を用いて、
第三のｃＤＮＡライブラリーからの形質転換体５Ｘ１０
６個から単離されｐＡＣＣ３３のヌクレオチド１１２４
−１１３７に相補的な第一の合成オリゴヌクレオチド５
’−ＧＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＡＣ−３′をプライマ
ーとして、ヘンリバー（ｈｅｎ １１ｖｅｒ）ｐｏｌｙ
（Ａ）”ＲＮＡを鋳型にして逆転写により一本鎖ｃＤＮ
Ａを合成した。二本鎖ｃＤＮＡとした後、ｐＢＲ３２２
に導入し、クローン化した。得られたクローンを２回ス
クリーニングした（１４Ｘ１０’個の形質転換体を２回
）。その５ａｕ３ＡＩ （９２７）−Ｓａｕ３ＡＩ （
１０８３）断片はｐＡＣｏ ７Ｂを含む５個の陽性クロ
ーンを与えた。そしてこのｐＡＣＣ７８のヌクレオチド
２７７−４７１を含むｃＤＮＡフラグメントはｐＡＣＣ
９３とｐＡｃｅ ９４を含む６個の陽性クローンを与え
た。ヌクレオチド４１８−４３４に相補的な第二の合成
オリゴヌクレオチド５’−ＡＡＣＡＴＣＴＣＡＴＡＧＧ
ＡＣＣＡ−３’をプライマーとして、６日齢チキンリバ
ーｐｏｌｙ（Ａ）◆ＲＮＡを鋳型にしてＣＤＮＡを合成
し、得られた５ Ｘ １０Ｇ個の形質転換体を、ＣＤＮ
Ａでスクリーニングして約３９０個の陽性クローンを得
た。これらのクローンの中で分析された１０２個のクロ
ーンの内、ｐＡＣＣ１５７とＩ）ＡＣＣ１９［ｉが−１
４＝ 最も上流に伸長しているようであった。
第三の合成ヌクレオチド５ ’−ＴＯＣＡＣＴＴＣＣＡ
ＡＡＡＴＧＡＡ−３′（ヌクレオチド−７３−−５７に
相補的）をブライマーとして６日齢のチキンリバーｐｏ
ｌｙ（Ａ）◆ＲＮＡを鋳型とし、プライマー伸長反応に
よりｃＤＮＡを合成した。得られたクローン３Ｘ１０ｓ
個の形質転換体を、ヌクレオチド−１５４−−７８を含
むｃＤＮＡフラグメントでスクリーニングしてクローン
Ｉ）ＡＣＣ２４３を得た。
ＡＡＡＴＧＡＡ−３′（ヌクレオチド−７３−−５７に
相補的）をブライマーとして６日齢のチキンリバーｐｏ
ｌｙ（Ａ）◆ＲＮＡを鋳型とし、プライマー伸長反応に
よりｃＤＮＡを合成した。得られたクローン３Ｘ１０ｓ
個の形質転換体を、ヌクレオチド−１５４−−７８を含
むｃＤＮＡフラグメントでスクリーニングしてクローン
Ｉ）ＡＣＣ２４３を得た。
■ｃＤＮＡの配列分析
色々な制限酵素断片又はＢＡＬ ３１ヌクレアーゼによ
り連続して短く切断した断片をプラスミドｐＵＣＩ８又
はｐＵｃｌＢにサブクローニングした。ヌクレオチドの
配列決定はジデオキシチエインターミネータ−法（文献
１９．２０）を用いて二本鎖プラスミ゛ドＤＮＡから直
接決定した。又は、色々の制限酵素断片の５′末端をＴ
４ポリヌクレオキナーゼと［γ−３２Ｐ］ＡＴＰを用い
て標識し、マキサム・ギルバート法により決定した。こ
の結果を第１図に示す。
り連続して短く切断した断片をプラスミドｐＵＣＩ８又
はｐＵｃｌＢにサブクローニングした。ヌクレオチドの
配列決定はジデオキシチエインターミネータ−法（文献
１９．２０）を用いて二本鎖プラスミ゛ドＤＮＡから直
接決定した。又は、色々の制限酵素断片の５′末端をＴ
４ポリヌクレオキナーゼと［γ−３２Ｐ］ＡＴＰを用い
て標識し、マキサム・ギルバート法により決定した。こ
の結果を第１図に示す。
■ペプチド分離とアミノ酸配列決定
表１
チキンリバーアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼをアク
ロモバクタープロテイナーゼＩ又はスタフイロコッ力ル
セリンプロテイナーゼによって消化して得られたペプチ
ドの配列分析。
ロモバクタープロテイナーゼＩ又はスタフイロコッ力ル
セリンプロテイナーゼによって消化して得られたペプチ
ドの配列分析。
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼをチキンリバーから
精製した（文献７）。該酵素をスタフィロコッ力ルセリ
ンブロテアーゼ（Ｓｔａｐｈｙ １ｏｃｏｃｃａ １ｓ
ｅｒ１ｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）又はアクロモバク
タープロティナーゼＩ （Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉ）で２旧ヒし、ついで各ペ
プチド断片に分離した。ペプチドの断片とネイティブ（
ｎａｔｉｖｅ）なアセチル−ＣｏＡカルボキラーゼのア
ミノ末端配列はガスフェイズシークエンサー（（ｉａｓ
−ｐｈａｓｅ ５ｅｑｕｅｎｃｅｒ）とＰＴＨ−アミノ
酸分析器（バイオシステム社製、モデル４７０Ａ及び１
２ＯＡ）を用いて分析した。その結果を表１に示す。
精製した（文献７）。該酵素をスタフィロコッ力ルセリ
ンブロテアーゼ（Ｓｔａｐｈｙ １ｏｃｏｃｃａ １ｓ
ｅｒ１ｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）又はアクロモバク
タープロティナーゼＩ （Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉ）で２旧ヒし、ついで各ペ
プチド断片に分離した。ペプチドの断片とネイティブ（
ｎａｔｉｖｅ）なアセチル−ＣｏＡカルボキラーゼのア
ミノ末端配列はガスフェイズシークエンサー（（ｉａｓ
−ｐｈａｓｅ ５ｅｑｕｅｎｃｅｒ）とＰＴＨ−アミノ
酸分析器（バイオシステム社製、モデル４７０Ａ及び１
２ＯＡ）を用いて分析した。その結果を表１に示す。
ａ 、ＰＴＨ−アミノ酸の生成量は（）内にｐｍｏ ｌ
で示す。
で示す。
ｂ、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの推定−次構造
における各アミノ酸残基の位置番号を示す。
における各アミノ酸残基の位置番号を示す。
以上に記したように、チキンリバー由来のアセチル−Ｃ
ｏＡカルボキシラーゼのｍＲＮＡに相補的なｃＤＮＡを
クローニングしてその配列分析をした結果から推定され
た全アミノ酸配列は該酵素の部分的なアミノ酸配列分析
とよく一致した。
ｏＡカルボキシラーゼのｍＲＮＡに相補的なｃＤＮＡを
クローニングしてその配列分析をした結果から推定され
た全アミノ酸配列は該酵素の部分的なアミノ酸配列分析
とよく一致した。
（以下余白）
引用文献
１、Ｎｕｍａ、 Ｓ、、 ａｎｄ Ｔａｎａｂｅ、 Ｔ
、 （１９８４） ｉｎ ＦａｔｔｙＡｃｉｄ Ｍｅｔ
ａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏ
ｎ （Ｎｕｍａ。
、 （１９８４） ｉｎ ＦａｔｔｙＡｃｉｄ Ｍｅｔ
ａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏ
ｎ （Ｎｕｍａ。
Ｓ、、 ｅｄ、） Ｎｅｗ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖ
ｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。
ｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。
ｖｏｌ、 ７ ｐｐ、 １−２７． Ｅｌｓｅｖｌｅｒ
５ｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｕｌｌｓｈｅｒｓ Ｂ、 Ｖ
、、 Ａｍｓｔｅｒｄａｍ２、Ｗａｋｌｌ、 ｓ、 Ｊ
、ｌ ５ｔｏｏｐｓ、 Ｊ、 Ｋ、、 ａｎｄ Ｊｏｓ
ｈｌ、 ｖ。
５ｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｕｌｌｓｈｅｒｓ Ｂ、 Ｖ
、、 Ａｍｓｔｅｒｄａｍ２、Ｗａｋｌｌ、 ｓ、 Ｊ
、ｌ ５ｔｏｏｐｓ、 Ｊ、 Ｋ、、 ａｎｄ Ｊｏｓ
ｈｌ、 ｖ。
Ｃ，（１９８３） Ａｎｎｕ、 Ｒｅｖ、 Ｂｌｏｃｈ
ｅｍ、 ５２．５３７−５７９３、Ｓｏｎｇ、 Ｃ，Ｓ
、、 ａｎｄ Ｋｉｍ、 Ｋ、 Ｂ、 （１９８１）
Ｊ、 Ｂｌｏｌ。
ｅｍ、 ５２．５３７−５７９３、Ｓｏｎｇ、 Ｃ，Ｓ
、、 ａｎｄ Ｋｉｍ、 Ｋ、 Ｂ、 （１９８１）
Ｊ、 Ｂｌｏｌ。
ＣｈｅＩａ、 ２５１Ｅ、 ７７８Ｂ−７７８８４、Ｔ
ａｎａｂｅ、 Ｔ、、 Ｗａｄａ、 Ｋ、、 ０ｋａｚ
ａｋ１． Ｔ、、 ａｎｄ ＮｕｍａＳ、 （１９７５
） Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｌｏｃｈｅｍ、 ５７．１５−
２４５、Ｔｉｐｐｅｒｓ、 Ｊ、 Ｐ、、 ａｎｄ Ｗ
ｌｔｔｅｒｓ、 Ｌ、 Ａ、 （１９８２）Ｂｌｏｃｈ
ｌｍ、 Ｂｌｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ ７１５．１１Ｅ
２−１６９Ｇ、Ｂｅａｔｙ、 Ｎ、 Ｂ、、 ａｎｄ
Ｌａｎｅ、 Ｍ、 Ｄ、 （１９Ｂ２） Ｊ。
ａｎａｂｅ、 Ｔ、、 Ｗａｄａ、 Ｋ、、 ０ｋａｚ
ａｋ１． Ｔ、、 ａｎｄ ＮｕｍａＳ、 （１９７５
） Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｌｏｃｈｅｍ、 ５７．１５−
２４５、Ｔｉｐｐｅｒｓ、 Ｊ、 Ｐ、、 ａｎｄ Ｗ
ｌｔｔｅｒｓ、 Ｌ、 Ａ、 （１９８２）Ｂｌｏｃｈ
ｌｍ、 Ｂｌｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ ７１５．１１Ｅ
２−１６９Ｇ、Ｂｅａｔｙ、 Ｎ、 Ｂ、、 ａｎｄ
Ｌａｎｅ、 Ｍ、 Ｄ、 （１９Ｂ２） Ｊ。
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ、 ２５７．９２４−９２９７、
Ｗａｄａ＋ Ｋ、、 ａｎｄ Ｔａｎａｂｅ、 Ｔ、
（１９８３） Ｅｕｒ、 Ｊ。
Ｗａｄａ＋ Ｋ、、 ａｎｄ Ｔａｎａｂｅ、 Ｔ、
（１９８３） Ｅｕｒ、 Ｊ。
Ｂｌｏｃｈｅｍ、 １３５．１７−２３８、Ｍａｎｎｌ
ｎｇ、 Ｒ，、Ｄｌｌｓ、 Ｒ，、ａｎｄ Ｍａｙｅｒ
、 Ｒ，Ｊ。
ｎｇ、 Ｒ，、Ｄｌｌｓ、 Ｒ，、ａｎｄ Ｍａｙｅｒ
、 Ｒ，Ｊ。
（１９７Ｇ） Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 １５３．４８
３−４ｔｉ８９、■ａｒｄｌｅ、 Ｄ、 Ｇ、、 ａｎ
ｄ Ｃｏｈｅｎ、 Ｐ、 （１９７８） Ｅｕｒ、 Ｊ
。
３−４ｔｉ８９、■ａｒｄｌｅ、 Ｄ、 Ｇ、、 ａｎ
ｄ Ｃｏｈｅｎ、 Ｐ、 （１９７８） Ｅｕｒ、 Ｊ
。
Ｂｌｏｃｈｅｍ、 ９２．２５−３４
１０、Ｒａｉｎｗａｔｅｒ、Ｄ、Ｌ、、ａｎｄ Ｋｏｌ
ａｔｔｕｋｕｄｙ、Ｐ、Ｅ。
ａｔｔｕｋｕｄｙ、Ｐ、Ｅ。
（１９８２） Ａｒｃｈ、 Ｂｌｏｃｈｅｍ、 Ｂｌｏ
ｐｈｙｓ、 ２１３．３７２−３８３１１．７ａｋａ１
． Ｔ、、 Ｗａｄａ、 Ｋ、、 ａｎｄ Ｔａｎａ
ｂｅ、 Ｔ、 （１９８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ、、２
１２．９８−１０９１２、Ｏｋａｙａｍａ、 Ｈ，、ａ
ｎｄ Ｂｅｒｇ、 Ｐ、 （１９８２） Ｍｏ１． Ｃ
ｅ１ｌ。
ｐｈｙｓ、 ２１３．３７２−３８３１１．７ａｋａ１
． Ｔ、、 Ｗａｄａ、 Ｋ、、 ａｎｄ Ｔａｎａ
ｂｅ、 Ｔ、 （１９８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ、、２
１２．９８−１０９１２、Ｏｋａｙａｍａ、 Ｈ，、ａ
ｎｄ Ｂｅｒｇ、 Ｐ、 （１９８２） Ｍｏ１． Ｃ
ｅ１ｌ。
Ｂｌｏｔ、 ３＋ １６１−１７０
１３、Ｍａｎｌａｔｌｓ、 Ｔ、、 Ｆｒ１ｔｓｃｈ、
Ｅ、Ｆ、、 ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ。
Ｅ、Ｆ、、 ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ。
Ｊ、 （１９８２） Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｌｎｇ： Ａ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｎｕａｌ、
ｐｐ、２３０−２４１．Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｌ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ１４、Ｎｏｄ
ａ、 Ｍ、、 Ｆｕｒｕｔａｎｆ、 Ｙ、、 Ｔａｋａ
ｈａｓｈｌ、■、。
ｌｎｇ： Ａ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｎｕａｌ、
ｐｐ、２３０−２４１．Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、 Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｌ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ１４、Ｎｏｄ
ａ、 Ｍ、、 Ｆｕｒｕｔａｎｆ、 Ｙ、、 Ｔａｋａ
ｈａｓｈｌ、■、。
Ｔｏｙｏｓａｔｏ、 ＭＢ旧ｒｏｓｅ、 Ｔ、、 Ｉｎ
ａｙａｍａ、 Ｓ、。
ａｙａｍａ、 Ｓ、。
Ｎａｋａｎｌｓｈｌ、 Ｓ、、 ａｎｄ Ｎｕｍ
ａ、 Ｓ、 （夏９８２） Ｎａｔｕｒｅ。
ａ、 Ｓ、 （夏９８２） Ｎａｔｕｒｅ。
釘喝、 ２０２−２０１１ｉ
１５、Ｔａｋａｌ、 Ｔ、、 Ｎｏｄａ、 Ｍ、、 Ｆ
ｕｒｕｔａｎｌ、 Ｙ、、 Ｔａｋａｈａ−ｓｈｌ、
Ｈ，、Ｎｏｔａｋｅ、Ｍ、、Ｓｈｉｍｌｚｕ、Ｓ、、Ｋ
ａｙａｎｏ。
ｕｒｕｔａｎｌ、 Ｙ、、 Ｔａｋａｈａ−ｓｈｌ、
Ｈ，、Ｎｏｔａｋｅ、Ｍ、、Ｓｈｉｍｌｚｕ、Ｓ、、Ｋ
ａｙａｎｏ。
Ｔ、、 Ｔａｎａｂｅ、 Ｔ、、旧ｒｏｓｅ、 Ｔ、、
Ｉｎａｙａｍａ、 Ｓ、。
Ｉｎａｙａｍａ、 Ｓ、。
ａｎｄ Ｎｕｍａ、 Ｓ、 （１９８４） Ｅｕｒ、
Ｊ、 Ｂｌｏｃｈｅｍ、 １４３゜１Ｅｉ、Ｍａｘａｍ
、 Ａ、 Ｍ、、 ａｎｄ Ｇ１１ｂｅｒｔ、 Ｗ、
（１９８０） Ｍｅｔｈ−ｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、
［ｉ５．４９９−５［１０１７Ｊｅｌｎｓｔｏｃｖｋ
、Ｒ，、Ｓｗｅｅｔ、Ｒ，、ＷｅＩｓｓ、Ｍ、。
Ｊ、 Ｂｌｏｃｈｅｍ、 １４３゜１Ｅｉ、Ｍａｘａｍ
、 Ａ、 Ｍ、、 ａｎｄ Ｇ１１ｂｅｒｔ、 Ｗ、
（１９８０） Ｍｅｔｈ−ｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、
［ｉ５．４９９−５［１０１７Ｊｅｌｎｓｔｏｃｖｋ
、Ｒ，、Ｓｗｅｅｔ、Ｒ，、ＷｅＩｓｓ、Ｍ、。
Ｃｅｄａｒ、 Ｈ，、ａｎｄ Ａｘｅｌ、 Ｒ，（１９
７８） Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
７８） Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ７５． １２９９
−１３０３１８、Ｆｅｌｎｂｅｒｇ、 Ａ、 Ｐ、、
ａｎｄ Ｖｏｇｅｌｓｔｅｌｎ、 Ｂ、 （１９８３）
Ａｎａｌ、Ｂｌｏｃｈｅｍ、１３２．Ｂ−１３１Ｂ、Ｓ
ａｎｇｅｒ、Ｆ、、Ｎ１ｃｋｌｅｎ、Ｓ、、ａｎｄ Ｃ
ｏｕｌｓｏｎ、Ａ、Ｒ。
−１３０３１８、Ｆｅｌｎｂｅｒｇ、 Ａ、 Ｐ、、
ａｎｄ Ｖｏｇｅｌｓｔｅｌｎ、 Ｂ、 （１９８３）
Ａｎａｌ、Ｂｌｏｃｈｅｍ、１３２．Ｂ−１３１Ｂ、Ｓ
ａｎｇｅｒ、Ｆ、、Ｎ１ｃｋｌｅｎ、Ｓ、、ａｎｄ Ｃ
ｏｕｌｓｏｎ、Ａ、Ｒ。
（１９７７） Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ７４゜５４［１３−５４６７ ２θ、Ｆｕｒｕｔａｎｉ＋ ｙ、、Ｎｏｔａｋｅ、 Ｍ
、、Ｆｕｋｕｉ、 Ｔ、ｌ ０ｈｕｅ。
Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、 ７４゜５４［１３−５４６７ ２θ、Ｆｕｒｕｔａｎｉ＋ ｙ、、Ｎｏｔａｋｅ、 Ｍ
、、Ｆｕｋｕｉ、 Ｔ、ｌ ０ｈｕｅ。
Ｍ、、 Ｎｏｍｕｒａ、 Ｈ，、Ｙａｍａｄａ、 Ｍ、
、 ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ。
、 ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ。
Ｓ、 （１９８Ｇ） Ｎｕｃｌｅｌｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒ
ｅｓ、 １４．３１６７−３１７９２１、Ｋｏｚａｋ、
Ｍ、 （１９８１） Ｎｕｃｌｅｌｃ Ａｃ１ｄｓ
Ｒｅｓ、 旦。
ｅｓ、 １４．３１６７−３１７９２１、Ｋｏｚａｋ、
Ｍ、 （１９８１） Ｎｕｃｌｅｌｃ Ａｃ１ｄｓ
Ｒｅｓ、 旦。
（以下余白）
第１図はチキンリバー由来のアセチル−ＣｏＡカルボキ
シラーゼに対するｃＤＮＡの配列決定戦略と制限酵素地
図。 第２図はチキンリバーアセチル−ＣｏＡカルボキシラー
ゼのクローン化したｃＤＮＡのヌクレオチド配列と該酵
素蛋白の推定アミノ酸配列である。 出 願 人 明 治 乳 業 株 式 手続補正書 （方式） 事件の表示 昭和６ ３年特許願第２０８１７０号 発明の名称 アセチル ｏＡ カルボキシラーゼ 補正有する者 事件との関係
シラーゼに対するｃＤＮＡの配列決定戦略と制限酵素地
図。 第２図はチキンリバーアセチル−ＣｏＡカルボキシラー
ゼのクローン化したｃＤＮＡのヌクレオチド配列と該酵
素蛋白の推定アミノ酸配列である。 出 願 人 明 治 乳 業 株 式 手続補正書 （方式） 事件の表示 昭和６ ３年特許願第２０８１７０号 発明の名称 アセチル ｏＡ カルボキシラーゼ 補正有する者 事件との関係
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、第２図に示すヌクレオチド配列とアミノ酸配列を有
するチキンリバー（ｃｈｉｃｋｅｎｌｉｖｅｒ）由来の
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ。 ２、請求項１記載のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列
の一部が、下記のヌクレオチド及びアミノ酸に置換され
たヌクレオチド配列とアミノ酸配列を有するチキンリバ
ー由来のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ。 ３１番目のＣがＴ；１２３番目のＣがＧ又はＴ；１４１
番目のＧがＡ；１６８番目のＣがＧ又はＡ；１８７番目
のＧがＡ；６５７番目のＡがＧ；６６３番目のＴがＧ；
７８２番目のＡがＧ；９６５番目のＧがＡ；１５８４番
目のＡがＧ；１７００番目のＧがＡ；３０９３番目のＴ
がＣ；３１７７番目のＣがＧ又はＡ；４００８番目のＴ
がＣ；４３３９番目のＧがＡ；４５０４番目のＧがＡ；
４５４０番目のＧがＡ；４７１２番目のＧがＡ；４８８
１番目のＧがＡ；４９５７番目のＧがＡ；５３０２番目
のＧがＡ；５３６７番目のＧがＡ；６０４０番目のＧが
Ａ；６４４７番目のＧがＡ；６５６１番目のＧがＡ；６
７０６番目のＧがＡ６３番目のＧｌｙがＡｒｇ；２６１
番目のＡｓｎがＳｅｒ；３２２番目のＡｒｇがＬｙｓ；
５６７番目のＡｒｇがＨｉｓ；１４６７番目のＧｌｕが
Ｌｙｓ；１５０２番目のＡｌａがＴｈｒ；１５１４番目
のＧｌｙがＳｅｒ；１５７１番目のＧｌｙがＧｌｕ；１
６５３番目のＡｓｐがＡｓｎ；１７６８番目のＧｌｙが
Ａｒｇ；２０１４番目のＧｌｙがＡｒｇ；２２３６番目
のＶａｌがＩｌｅ ３、請求項１記載のヌクレオチド配列５３１−６８３番
目及びアミノ酸配列の１９８−２２８番目が削除された
ヌクレオチド配列とアミノ酸配列を有するチキンリバー
由来のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63208170A JPH0257179A (ja) | 1988-08-24 | 1988-08-24 | アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63208170A JPH0257179A (ja) | 1988-08-24 | 1988-08-24 | アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0257179A true JPH0257179A (ja) | 1990-02-26 |
Family
ID=16551818
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63208170A Pending JPH0257179A (ja) | 1988-08-24 | 1988-08-24 | アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0257179A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5910626A (en) * | 1992-10-02 | 1999-06-08 | Arch Development Corporation | Acetyl-CoA carboxylase compositions and methods of use |
| US6306636B1 (en) | 1997-09-19 | 2001-10-23 | Arch Development Corporation | Nucleic acid segments encoding wheat acetyl-CoA carboxylase |
-
1988
- 1988-08-24 JP JP63208170A patent/JPH0257179A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5910626A (en) * | 1992-10-02 | 1999-06-08 | Arch Development Corporation | Acetyl-CoA carboxylase compositions and methods of use |
| US6306636B1 (en) | 1997-09-19 | 2001-10-23 | Arch Development Corporation | Nucleic acid segments encoding wheat acetyl-CoA carboxylase |
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