JPH0245639B2

JPH0245639B2 -

Info

Publication number: JPH0245639B2
Application number: JP56184198A
Authority: JP
Inventors: Kimikatsu Shirahata; Masaji Kasai
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1981-11-17
Filing date: 1981-11-17
Publication date: 1990-10-11
Also published as: JPS5885896A

Description

[Detailed description of the invention]

本発明は生理活性を有する含リンオリゴペプチ
ドおよびそれらの製造法に関する。さらに詳しくは、本発明は式（Ｘ）〔式中、R₂は水素、メチルまたはエチルを示
し、R₄はメチルまたはアセチルを示し、R₅は炭
素数１から４のアルキルを示し、R₄は水素また
は水酸基を示す。但し、R₂が水素、R₄がアセチ
ル、R₅がsec−ブチルのとき、R₆は水酸基ではな
い。〕で表わされる含リンオリゴペプチドに関する。上
記定義中、炭素数１から４のアルキルとしては、
メチル、エチル、イソプロピル、sec―ブチル、
イソブチルなどが例示される。式（）で表わされる化合物中下記式（）で
表わされるＮ−（Ｎ−アセチル−Ｌ−イソロイシ
ル−Ｌ−チロシル）−（−）−１−アミノ−２−（４
−ヒドロキシフエニル）エチルホスホン酸ジエチ
ルエステルおよび式（）で表わされるＮ（Ｎ−
メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−フエニルアラニル）−
（−）−１−アミノ−２−（４−ヒドロキシフエニ
ル）エチルホスホン酸およびそのジエチルエステ
ルは本発明化合物の代表的例である。〔式（）で表わされる化合物は、式（）に
おいてR₂がエチル、R₄がアセチル、R₅が
The present invention relates to physiologically active phosphorus-containing oligopeptides and methods for producing them. More specifically, the present invention relates to formula (X) [In the formula, R ₂ represents hydrogen, methyl or ethyl, R ₄ represents methyl or acetyl, R ₅ represents alkyl having 1 to 4 carbon atoms, and R ₄ represents hydrogen or a hydroxyl group. However, when R ₂ is hydrogen, R ₄ is acetyl, and R ₅ is sec-butyl, R ₆ is not a hydroxyl group. ] The present invention relates to a phosphorus-containing oligopeptide represented by the following. In the above definition, alkyl having 1 to 4 carbon atoms is
Methyl, ethyl, isopropyl, sec-butyl,
Examples include isobutyl. Among the compounds represented by the formula (), N-(N-acetyl-L-isoleucyl-L-tyrosyl)-(-)-1-amino-2-(4
-Hydroxyphenyl)ethylphosphonic acid diethyl ester and N(N-
Methyl-L-valyl-L-phenylalanyl)-
(-)-1-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)ethylphosphonic acid and its diethyl ester are representative examples of compounds of the present invention. [For the compound represented by formula (), R ₂ is ethyl, R ₄ is acetyl, and R ₅ is

[Process 1]

化合物−ｂはペプチド合成で通常用いられてい
るアミノ基の保護基を除去する方法で化合物−ａ
から得られる。例えば、X₁がベンジロキシカルボニル基の場
合には接触還元による方法で目的物を得ることが
できる。またｔ−ブトキシカルボニル基の場合に
は酸により容易に切断され目的物を得ることがで
きる。本工程における化合物−ａは新規化合物であ
り、本出願人が本出願と同時に出願する特願昭56
−184199号（特開昭58−85897号）に開示されて
いるが、具体的化合物ならびにその製造法につい
ては参考例に示す。〔工程２〕化合物−ｃは化合物−ｂをアミノ基が保護され
たアミノ酸とペプチド結合させて得られる。アミ
ノ基が保護されたアミノ酸として、例えば、Ｎ−
アセチル−Ｌ−イソロイシンあるいはＮ−ベンジ
ロキシカルボニル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリン等が
用いられ、一般にペプチド合成で用いられている
縮合剤の存在下に反応させ、通常に有機合成で用
いられている方法で分離、精製することにより得
られる。または上記のアミノ酸誘導体を一般にペ
プチド合成で用いられている活性エステル誘導体
に誘導した後に化合物−ｂを縮合させ、分離する
ことによつても化合物−ｃが得られる。ここで用いられる縮合剤としては、例えば、
Ｎ，N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（以
下DCCと略す）またはDCCとＮ−ヒドロキシス
クシンイミドあるいはDCCと１−オキシベンゾ
トリアゾール等が用いうる。反応溶媒は、通常ペ
プチド合成に用いられる溶媒であり、例えばテト
ラヒドロフラン、エチレングリコール、ジメチル
エーテル等のエーテル類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド等のアミド類、塩化メチレン等のハロゲ
ン化炭化水素類等、またはこれらの混合物が用い
られる。活性エステルとして、上記アミノ酸誘導
体のＰ−ニトロフエニルエステル等の置換フエニ
ルエステル類、またはＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミドエステル等のジカルボン酸イミドエステル類
あるいは上記アミノ酸の酸無水物等が用いられ
る。〔工程３〕化合物−ｄはペプチド合成で通常用いられてい
るアミノ基あるいは水酸基の保護基を除去する方
法で化合物−ｃから得られる。例えばX₂がベン
ジロキシカルボニル基の場合には接触還元による
方法で目的物を得ることができる。またｔ−ブト
キシカルボニル基の場合には酸により容易に切断
され目的物を得ることができる。さらに、Ｚがベ
ンジロキシカルボニル基、あるいはベンジル基等
の場合には、上記のX₂と同様な方法により目的
物を得ることができる。〔工程４〕化合物−ｅは化合物−ｄのリン酸エステルを加
水分解することにより得られる。例えば、化合物
−ｄを塩化水素あるいは臭化水素等を含む酢酸溶
液で反応させることにより、化合物−ｅが得られ
る。以上の工程で得られる化合物−ｄ、および化合
物−ｅは降圧作用を有している。尚、化合物−ｅでR₃がアセチル基、ＲがＬ−
イソロイシンのアルキル基部分、Ｙが水酸基で表
わされる化合物は同一出願人らにより、既に出願
されている生理活性物質Ｋ−26（特願昭56−
40651、特開昭57−156498）と同一の化合物であ
る。なお、Ｋ−26の降圧作用を示す実験結果を次に
示す。実験：観血的方法による降圧作用の測定本実験は津田恭介ら編：薬効の評価(1)薬理試験
法（中）（医薬品開発基礎講座Ｖ）地文書館（昭
和46年10月10日発行）464〜468頁記載の方法に準
じて行つた。実験動物としてSpontaneously Hypertensive
Rats（SHR）（雄性、体重300〜400ｇ）１群３匹
を用いた。該ラツトにウレタン600mg／Kgおよび
α−クロラロース60mg／Kgを腹腔内投与して麻酔
した。気管カニユーレで気道を確保し、血圧を左
頚動脈に挿入したポリエチレンカニユーレから圧
トランスデユーサ（日本光電MP−0.5）を介して
インク−オシログラフイーに記録した。薬物は、投与容量が0.1ml／100ｇとなるように
生理食塩水に溶解し、右股静脈に挿入したカニユ
ーレから静脈内投与し、麻酔下での血圧変化を測
定した。平均血圧の変化を第１表に示す。尚投与直前の
４例の平均血圧は143.5±21.3mmHg（平均値±標準
誤差）を示す。 Compound-b was prepared by compound-a using a method that removes the protecting group of the amino group, which is commonly used in peptide synthesis.
obtained from. For example, when X ₁ is a benzyloxycarbonyl group, the desired product can be obtained by catalytic reduction. Further, in the case of a t-butoxycarbonyl group, it can be easily cleaved with an acid to obtain the desired product. Compound-a in this step is a new compound, and the applicant filed a patent application in 1986 at the same time as this application.
-184199 (Japanese Unexamined Patent Publication No. 58-85897), specific compounds and methods for producing the same are shown in Reference Examples. [Step 2] Compound-c is obtained by peptide bonding compound-b with an amino acid whose amino group is protected. Examples of amino acids with protected amino groups include N-
Acetyl-L-isoleucine or N-benzyloxycarbonyl-N-methyl-L-valine is used, and is reacted in the presence of a condensing agent commonly used in peptide synthesis, which is commonly used in organic synthesis. It can be obtained by separating and purifying it by a method. Alternatively, Compound-c can also be obtained by deriving the above amino acid derivative into an active ester derivative generally used in peptide synthesis, condensing Compound-b, and separating the derivative. As the condensing agent used here, for example,
N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (hereinafter abbreviated as DCC), DCC and N-hydroxysuccinimide, or DCC and 1-oxybenzotriazole can be used. The reaction solvent is a solvent normally used for peptide synthesis, such as ethers such as tetrahydrofuran, ethylene glycol, dimethyl ether, amides such as N,N-dimethylformamide, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, or the like. A mixture of is used. As the active ester, substituted phenyl esters such as P-nitrophenyl ester of the above amino acid derivatives, dicarboxylic acid imide esters such as N-hydroxysuccinimide ester, or acid anhydrides of the above amino acids are used. [Step 3] Compound-d is obtained from compound-c by a method that removes the protecting group for the amino group or hydroxyl group, which is commonly used in peptide synthesis. For example, when X ₂ is a benzyloxycarbonyl group, the desired product can be obtained by catalytic reduction. Further, in the case of a t-butoxycarbonyl group, it can be easily cleaved with an acid to obtain the desired product. Furthermore, when Z is a benzyloxycarbonyl group or a benzyl group, the desired product can be obtained by the same method as for X ₂ above. [Step 4] Compound-e is obtained by hydrolyzing the phosphoric acid ester of compound-d. For example, compound -e can be obtained by reacting compound -d with an acetic acid solution containing hydrogen chloride or hydrogen bromide. Compound-d and compound-e obtained in the above steps have a hypotensive effect. In compound-e, R ₃ is an acetyl group and R is L-
A compound in which the alkyl group moiety of isoleucine, Y, is a hydroxyl group is a physiologically active substance K-26 (Japanese Patent Application No. 1983-1999), which has already been filed by the same applicant.
40651, JP-A-57-156498). The experimental results showing the hypotensive effect of K-26 are shown below. Experiment: Measurement of antihypertensive effect by invasive method This experiment was conducted by Kyosuke Tsuda et al.: Evaluation of drug efficacy (1) Pharmacological test methods (middle) (Basic drug development course V) National Archives (published October 10, 1972) ) The procedure was carried out according to the method described on pages 464-468. Spontaneously Hypertensive as a laboratory animal
Three Rats (SHR) (male, weight 300-400 g) were used in each group. The rats were anesthetized by intraperitoneally administering 600 mg/Kg of urethane and 60 mg/Kg of α-chloralose. The airway was secured with a tracheal cannula, and blood pressure was recorded on ink-oscillography via a pressure transducer (Nihon Kohden MP-0.5) from a polyethylene cannula inserted into the left carotid artery. The drug was dissolved in physiological saline in an administration volume of 0.1 ml/100 g, and administered intravenously through a cannula inserted into the right femoral vein, and changes in blood pressure under anesthesia were measured. Table 1 shows the changes in mean blood pressure. The average blood pressure of the four patients immediately before administration was 143.5±21.3 mmHg (mean value±standard error).

【表】この結果Ｋ−26は降圧作用を有することがわか
る。以下に本発明を実施例および参考例により詳し
く説明する。実施例１〔工程３〕参考例５で得られた化合物15mgをメタノール２
mlに溶解し、10％・パラジウム−炭素10mgを加
え、室温下3.5時間接触還元を行なう。触媒を
別し、液を減圧留去後、クロロホルム：メタノ
ール＝９：１の混合溶媒50mlに溶解し、短かめの
シリカゲルカラムクロマトグラフイーに通塔す
る。溶出液を減圧留去後、メタノールより再結晶
することにより、目的物である無色針状結晶10mg
（収率86％）を得る。得られた化合物の物性が次に示される。融点292〜294゜（dec.）〔α〕²² _D＝−66.5゜（c0.10，MeOH） IR（KBr）：3240，1633，1544，1199，1049，
1020cm^-1 ¹ H−NMR（CD₃OD）：主なピークはδ：0.71（ｄ，
3H），0.82（ｔ，3H），1.31（ｔ，6H），1.94
（ｓ，3H），4.1（ｍ，4H），6.64（ｄ，2H），
6.66（ｄ，2H），7.00（ｄ，2H），7.04（ｄ，
2H）本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z591に示す。上記により本物質はＮ−（Ｎ−アセチル−Ｌ−
イソロイシル−Ｌ−チロシル）−（−）−１−アミ
ノ−２−（４−ヒドロキシフエニル）エチルホス
ホン酸ジエチルと特定される。実施例２〔工程３〕参考例６で得られた化合物17mgをメタノール−
酢酸（９：１）１mlに溶解し、10％パラジウム−
炭素10mgを加え１日接触還元を行なう。触媒を
別後、液を減圧留去し、残査を分取用シリカゲ
ル薄層クロマトグラフイー（クロロホルム：メタ
ノール＝９：１）にて分離して、目的化合物であ
る無色ガラス状物質６mg（収率41％）を得る。得られた化合物の物性が次に示される。〔α〕²⁶ _D＝−40.9゜（c0.56，MeOH） IR（CHCl₃）：3310，1673，1661，1509，1227，
1041，1020cm^-1 ¹ H−NMR（CD₃OD）：主なピークはδ：0.70（ｄ，
3H），0.76（ｄ，3H），1.33（ｔ，6H），1.93
（ｓ，3H），2.62（ｄ，1H），4.13（ｍ，4H），
6.64（ｄ，2H），7.04（ｄ，2H），7.22（ｓ，
5H）本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z533に示す。上記により本物質はＮ−（Ｎ−メチル−Ｌ−バ
リル−Ｌ−フエニルアラニル）−（−）−１−アミ
ノ−２−（４−ヒドロキシフエニル）エチルホス
ホン酸ジエチルと特定される。実施例３〔工程４〕実施例２で得られた化合物１mgを20％・臭化水
素酸−酢酸溶液0.3mlに溶解し、室温下４時間放
置する。参考例７と同様な処理を行ない、粗生成
物0.5mgを得る。粗生成物を少量の0.04N−苛性ソ
ーダ水溶液に溶解し、高速液体クロマトグラフイ
ー（参考例７と同一の条件）にて保持時間1.8分
の部分を集める。濃縮後、凍結乾燥することによ
り、精製された目的化合物である白色固体を得
る。得られた化合物の物性が次に示される。融点：300℃以上¹ H−NMR（D₂O，pD11.9）：主なピークはδ：
0.71（ｄ，3H），0.79（ｄ，3H），1.74（ｓ，
3H），2.69（ｄ，1H），4.08（bt，1H），6.53
（ｄ，2H），7.01（ｄ，2H），7.34（ｓ，5H）上記により本物質はＮ−（Ｎ−メチル−Ｌ−バ
リル−Ｌ−フエニルアラニル）−（−）−１−アミ
ノ−２−（４−ヒドロキシフエニル）エチルホス
ホン酸と特定される。参考例１１−アミノ−２−（４−ベンジロキシフエニル）
エチルホスホン酸ジエチル138mgとＮ−ｔ−ブト
キシカルボニル−０−ベンジル−Ｌ−チロシン
142mgおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミド44mg
を無水エチレングリコールジメチルエーテル４ml
に溶解し、食塩・氷浴中で撹拌する。DCCを86
mg加え、冷却下２時間撹拌し、さらに室温下26時
間撹拌する。生成したＮ，N′−ジシクロヘキシ
ル尿素を別し、液に酢酸エチル100mlを加え、
水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶
媒を減圧留去後、残査を分取用シリカゲル薄層ク
ロマトグラフイーに付し、クロロホルム：アセト
ン＝９：１の混合溶媒で展開すると、Rf＝0.39と
Rf＝0.27に分離される。Rf＝0.39部分をかきと
り、同一の溶媒で溶出し、溶媒を減圧留去すると
目的化合物の無色ガラス状物質100mg（収率73％）
を得る。得られた化合物の物性が次に示される。〔α〕²⁶ _D＝−40.2゜（c0.92，MeOH） IR（CHCl₃）：1673，1504，1234，1042，1018cm^-1 ¹ H−NMR（CDCl₃）：主なピークはδ：1.23（ｔ，
3H），1.28（ｔ，3H），1.38（ｓ，9H），2.5〜
4.8（ｍ，10H），4.99（ｓ，2H），5.01（ｓ，
2H），6.8〜7.1（ｍ，8H），7.36（bs，10H）本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z716に示す。上記により本物質はＮ−（Ｎ−ｔ−ブトキシカ
ルボニル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル）−（−）
−１−アミノ−２−（４−ベンジロキシフエニル）
エチルホススン酸ジエチルと特定される。参考例２１−アミノ−２−（４−ベンジロキシフエニル）
エチルホスホン酸ジエチル408mgとＮ−ベンジロ
キシカルボニル−Ｌ−フエニルアラニン336mgお
よびＮ−ヒドロキシスクシンイミド129mgを無水
エチレングリコールジメチルエーテル11mlに溶解
し、食塩・氷浴中で撹拌する。DCC225mgを加え
2.5時間撹拌する。その後、冷蔵庫（約５℃）中
に2.5日放置しておく。生成したＮ，N′−ジシク
ロヘキシル尿素を別し、液に酢酸エチル150
mlを加える。参考例５と同様な処理を行ない、残
査をシリカゲルカラムクロマトグラフイー（クロ
ロホルム：アセトン＝９：１、同一の溶媒でのシ
リカゲル薄層クロマトグラフイーでRf＝0.33、
Rf＝0.25に分離される。）に付し、Rf＝0.33の目
的化合物の無色ガラス状物質265mg（収率73％）
を得る。得られた化合物の物性が次に示される。〔α〕²⁶ _D＝−48.5゜（c1.14，MeOH） IR（CHCl₃）：1715，1677，1507，1231，1043，
1020cm^-1 ¹ H−NMR（CDCl₃）：主なピークはδ：1.20（ｔ，
3H），1.27（ｔ，3H），2.6〜5.0（ｍ，10H），
4.95（ｓ，2H），5.01（ｓ，2H），6.82（ｄ，
2H），7.08（ｄ，2H），7.1〜7.3（15H）本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z644に示す。上記により本物質はＮ−（Ｎ−ベンジロキシカ
ルボニル−Ｌ−フエニルアラニル）−（−）−１−
アミノ−２−（４−ベンジロキシフエニル）エチ
ルホスホン酸ジエチルと特定される。参考例３〔工程１〕Ｎ−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−ベン
ジル−Ｌ−チロシル）−（−）−１−アミノ−２−
（４−ベンジロキシフエニル）エチルホスホン酸
ジエチル（参考例１参照）41mgを酢酸エチル４ml
に溶解後、10％−塩酸・メタノール溶液１mlを加
え、室温下１日撹拌する。酢酸エチル50mlを加
え、重曹水で洗浄後、水洗し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥する。分取用シリカゲル薄層クロマトグ
ラフイー（クロロホルム：メタノール＝95：５）
にて分離し、無色ガラス状物質26mg（収率73％）
を得る。得られた化合物の物性が次に示される。〔α〕²⁶ _D＝−40.4゜（c0.92，MeOH） IR（CHCl₃）：3340，1679，1505，1231，1044，
1019cm^-1 本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z616に示す。上記により、本物質はＮ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−
チロシル）−（−）−１−アミノ−２−（４−ベンジ
ロキシフエニル）エチルホスホン酸ジエチルと特
定される。参考例４〔工程１〕Ｎ−（Ｎ−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−フエ
ニルアラニル−（−）−１−アミノ−２−（４−ベ
ンジロキシフエニル）エチルホスホン酸ジエチル
（参考例２参照）75mgをメタノール酢酸（４：１）
５mlに溶解し、10％・パラジウム−炭素40mgを加
え、８時間接触還元を行なう。触媒を別後、
液を減圧留去し、分取用シリカゲル薄層クロマト
グラフイー（クロロホルム：メタノール＝９：
１）にて分離して、目的化合物である無色ガラス
状物質40mg（収率83％）を得る。得られた化合物の物性が次に示される。〔α〕²⁶ _D＝−63.0゜（c1.36，MeOH） IR（CHCl₃）：3320，1660，1508，1226，1041，
1020cm^-1 ¹ H−NMR（CD₃OD）：主なピークはδ：1.29（ｍ，
6H），2.5〜3.7（ｍ，5H），4.1（ｍ，4H），
4.56（ｍ，1H），6.70（ｄ，2H），7.05（ｄ，
2H），7.2（5H）本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z420に示す。上記により本物質はＮ−（Ｌ−フエニルアラニ
ル）−（−）−１−アミノ−２−（４−ヒドロキシフ
エニル）エチルホスホン酸ジエチルと特定され
る。参考例５〔工程２〕参考例３で得られた化合物26mg、Ｎ−アセチル
−Ｌ−イソロイシン７mgとＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミド５mgを無水エチレングリコールジメチル
エーテル１mlに溶解し、食塩−氷浴中で撹拌す
る。DCC9mgを加え撹拌し、そのまま室温まで上
げ26時間反応させる。生成したＮ，N′−ジシク
ロヘキシル尿素を除去し、溶媒を減圧留去後、分
取用シリカゲル薄層クロマトグラフイー（クロロ
ホルム：メタノール＝97：３）にて分離して、目
的化合物である白色固体15mg（収率46％）を得
る。得られた化合物の物性が次に示される。融点：145〜147℃ 〔α〕²⁶ _D＝−46.4゜（c0.53，MeOH） IR（CHCl₃）：3290，1650，1506，1230，1019cm^-1 ¹ H−NMR（CD₃OD）主なピークはδ：0.67（ｄ，
3H），0.78（ｔ，3H），1.30（ｔ，6H），1.91
（ｓ，3H），4.1（ｍ，4H），5.00（ｓ，4H），
6.84（ｄ，2H），6.86（ｄ，2H），7.09（ｄ，
2H），7.13（ｄ，2H），7.3（bs，10H）本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z771に示す。上記により、本物質はＮ−（Ｎ−アセチル−Ｌ
−イソロイシル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル）
−（−）−１−アミノ−２−（４−ベンジロキシフ
エニル）エチルホスホン酸ジエチルと特定され
る。参考例６〔工程２〕参考例４で得られた化合物40mg、Ｎ−ベンジロ
キシカルボニル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリン26mg、
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド11mgを無水エチレ
ングリコールジメチルエーテル１mlに溶解し、食
塩・氷浴中で撹拌する。DCCをを22mg加え３時
間撹拌後、室温に上げ26時間撹拌する。生成した
Ｎ，N′−ジシクロヘキシル尿素を別し、液
に酢酸エチル50mlを加え、有機層を重曹水で洗浄
し、水洗後、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶
媒を減圧留去後、残査を分取用シリカゲル薄層ク
ロマトグラフイー（クロロホルム：メタノール＝
96：４）にて分離して、目的化合物である無色ガ
ラス状物質17mg（収率27％）を得る。得られた化合物の物性が次に示される。〔α〕²⁶ _D＝−95.7゜（c0.68，MeOH） IR（CHCl₃）：3410，1674，1509，1222，1040，
1020cm^-1 ¹ H−NMR（CD₃OD）主なピークはδ：0.76（ｄ，
6H），1.33（ｔ，6H），2.52（bs，3H），4.12
（ｍ，4H），5.14（ｓ，2H），6.66（ｄ，2H），
7.05（ｄ，2H），7.10（ｓ，5H），7.37（ｓ，
5H）本物質のマススペクトルは分子イオンピークを
ｍ／z667に示す。上記により本物質はＮ−（Ｎ−ベンジロキシカ
ルボニル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−フエニ
ルアラニル）−（−）−１−アミノ−２−（４−ヒド
ロキシフエニル）エチルホスホン酸ジエチルを特
定される。参考例７〔工程４〕実施例１で得られた化合物２mgを20％臭化水素
酸−酢酸溶液0.3mlに溶解し、室温下４時間放置
する。反応液に水５mlを加え、2N−苛性ソーダ
水溶液でPH２に調整し、HP−20（三菱化成製、
非イオン性多孔性樹脂）に通塔し水で洗浄後、
0.1N−アンモニア性50％メタノール水溶液で溶
出し、溶媒を減圧乾固することにより粗生成物を
１mg得る。粗生成物を少量のメタノールに溶解
し、高速液体クロマトグラフイー〔μBondapack
C₁₈〔ウオーターズ社製〕、0.01M−酢酸アンモニ
ウム（PH5.0）：アセトニトリル＝９：１、４ml／
min〕にて保持時間2.7分の部分を集める。濃縮
後、凍結乾燥することにより、精製された目的化
合物である白色固体を得る。得られた化合物の物性が次に示される。融点：300℃以上¹ H−NMR（D₂O，PD4.5）：主なピークはδ：
0.65（ｄ，3H），0.81（ｔ，3H），2.00（ｓ，
3H），3.99（ｄ，1H），4.30（bt，1H），4.65
（dd，1H），6.83（ｄ，4H），7.14（ｄ，2H），
7.20（ｄ，2H）上記により本物質はＮ−（Ｎ−アセチル−Ｌ−
イソロイシル−Ｌ−チロシル）−（−）−１−アミ
ノ−２−（４−ヒドロキシフエニル）エチルホス
ホン酸と特定される。[Table] The results show that K-26 has a hypotensive effect. The present invention will be explained in detail below using Examples and Reference Examples. Example 1 [Step 3] 15 mg of the compound obtained in Reference Example 5 was mixed with methanol 2
ml, add 10 mg of 10% palladium on carbon, and perform catalytic reduction at room temperature for 3.5 hours. After separating the catalyst and distilling off the liquid under reduced pressure, it was dissolved in 50 ml of a mixed solvent of chloroform:methanol=9:1, and passed through a short silica gel column chromatography. After distilling off the eluate under reduced pressure, recrystallization from methanol yields 10 mg of the target product, colorless needle-like crystals.
(yield 86%). The physical properties of the obtained compound are shown below. Melting point 292-294° (dec.) [α] ²² _D = -66.5° (c0.10, MeOH) IR (KBr): 3240, 1633, 1544, 1199, 1049,
1020cm ^-1 ¹ H-NMR (CD ₃ OD): The main peak is δ: 0.71 (d,
3H), 0.82 (t, 3H), 1.31 (t, 6H), 1.94
(s, 3H), 4.1 (m, 4H), 6.64 (d, 2H),
6.66 (d, 2H), 7.00 (d, 2H), 7.04 (d,
2H) The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z591. According to the above, this substance is N-(N-acetyl-L-
It is identified as diethyl isoleucyl-L-tyrosyl)-(-)-1-amino-2-(4-hydroxyphenyl)ethylphosphonate. Example 2 [Step 3] 17 mg of the compound obtained in Reference Example 6 was dissolved in methanol.
10% palladium dissolved in 1 ml of acetic acid (9:1)
Add 10 mg of carbon and perform catalytic reduction for one day. After separating the catalyst, the liquid was distilled off under reduced pressure, and the residue was separated by preparative silica gel thin layer chromatography (chloroform:methanol = 9:1) to obtain 6 mg of a colorless glassy substance (yield), which is the target compound. rate of 41%). The physical properties of the obtained compound are shown below. [α] ²⁶ _D = −40.9° (c0.56, MeOH) IR (CHCl ₃ ): 3310, 1673, 1661, 1509, 1227,
1041, 1020cm ^-1 ¹ H-NMR (CD ₃ OD): The main peak is δ: 0.70 (d,
3H), 0.76 (d, 3H), 1.33 (t, 6H), 1.93
(s, 3H), 2.62 (d, 1H), 4.13 (m, 4H),
6.64 (d, 2H), 7.04 (d, 2H), 7.22 (s,
5H) The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z533. Based on the above, this substance is identified as diethyl N-(N-methyl-L-valyl-L-phenylalanyl)-(-)-1-amino-2-(4-hydroxyphenyl)ethylphosphonate. Example 3 [Step 4] 1 mg of the compound obtained in Example 2 was dissolved in 0.3 ml of 20% hydrobromic acid-acetic acid solution and left at room temperature for 4 hours. The same treatment as in Reference Example 7 was carried out to obtain 0.5 mg of a crude product. The crude product was dissolved in a small amount of 0.04N aqueous sodium hydroxide solution, and a portion with a retention time of 1.8 minutes was collected using high performance liquid chromatography (same conditions as Reference Example 7). After concentration, a white solid, which is the purified target compound, is obtained by freeze-drying. The physical properties of the obtained compound are shown below. Melting point: 300℃ or higher ¹ H-NMR (D ₂ O, pD11.9): Main peak is δ:
0.71 (d, 3H), 0.79 (d, 3H), 1.74 (s,
3H), 2.69 (d, 1H), 4.08 (bt, 1H), 6.53
(d, 2H), 7.01 (d, 2H), 7.34 (s, 5H) According to the above, this substance is N-(N-methyl-L-valyl-L-phenylalanyl)-(-)-1-amino-2- It is identified as (4-hydroxyphenyl)ethylphosphonic acid. Reference example 1 1-amino-2-(4-benzyloxyphenyl)
138 mg of diethyl ethylphosphonate and N-t-butoxycarbonyl-0-benzyl-L-tyrosine
142mg and N-hydroxysuccinimide 44mg
4 ml of anhydrous ethylene glycol dimethyl ether
and stir in a salt/ice bath. DCC86
mg was added, stirred for 2 hours under cooling, and further stirred at room temperature for 26 hours. Separate the generated N,N'-dicyclohexylurea, add 100 ml of ethyl acetate to the liquid,
After washing with water, dry with anhydrous sodium sulfate. After distilling off the solvent under reduced pressure, the residue was subjected to preparative silica gel thin layer chromatography and developed with a mixed solvent of chloroform:acetone = 9:1, giving Rf = 0.39.
Separated by Rf=0.27. The Rf = 0.39 portion was scraped off, eluted with the same solvent, and the solvent was distilled off under reduced pressure to yield 100 mg of a colorless glassy substance containing the target compound (yield 73%).
get. The physical properties of the obtained compound are shown below. [α] ²⁶ _D = −40.2° (c0.92, MeOH) IR (CHCl ₃ ): 1673, 1504, 1234, 1042, 1018 cm ^-1 ¹ H-NMR (CDCl ₃ ): The main peak is δ: 1.23 ( t,
3H), 1.28 (t, 3H), 1.38 (s, 9H), 2.5~
4.8 (m, 10H), 4.99 (s, 2H), 5.01 (s,
2H), 6.8-7.1 (m, 8H), 7.36 (bs, 10H) The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z716. According to the above, this substance is N-(N-t-butoxycarbonyl-O-benzyl-L-tyrosyl)-(-)
-1-amino-2-(4-benzyloxyphenyl)
Identified as diethyl ethylphosunate. Reference example 2 1-amino-2-(4-benzyloxyphenyl)
408 mg of diethyl ethylphosphonate, 336 mg of N-benzyloxycarbonyl-L-phenylalanine and 129 mg of N-hydroxysuccinimide are dissolved in 11 ml of anhydrous ethylene glycol dimethyl ether and stirred in a salt/ice bath. Add 225mg of DCC
Stir for 2.5 hours. After that, leave it in the refrigerator (approximately 5℃) for 2.5 days. Separate the generated N,N'-dicyclohexyl urea and add 150 ml of ethyl acetate to the liquid.
Add ml. The same treatment as in Reference Example 5 was carried out, and the residue was subjected to silica gel column chromatography (chloroform:acetone = 9:1, silica gel thin layer chromatography using the same solvent, Rf = 0.33,
Separated to Rf=0.25. ), 265 mg of colorless glassy substance of the target compound with Rf = 0.33 (yield 73%)
get. The physical properties of the obtained compound are shown below. [α] ²⁶ _D = −48.5° (c1.14, MeOH) IR (CHCl ₃ ): 1715, 1677, 1507, 1231, 1043,
1020cm ^-1 ¹ H-NMR (CDCl ₃ ): The main peak is δ: 1.20 (t,
3H), 1.27 (t, 3H), 2.6-5.0 (m, 10H),
4.95 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 6.82 (d,
2H), 7.08 (d, 2H), 7.1-7.3 (15H) The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z644. According to the above, this substance is N-(N-benzyloxycarbonyl-L-phenylalanyl)-(-)-1-
It is identified as diethyl amino-2-(4-benzyloxyphenyl)ethylphosphonate. Reference Example 3 [Step 1] N-(N-t-butoxycarbonyl-O-benzyl-L-tyrosyl)-(-)-1-amino-2-
41 mg of diethyl (4-benzyloxyphenyl)ethylphosphonate (see Reference Example 1) was added to 4 ml of ethyl acetate.
After dissolving in , add 1 ml of 10% hydrochloric acid/methanol solution and stir at room temperature for 1 day. Add 50 ml of ethyl acetate, wash with aqueous sodium bicarbonate, then water, and dry over anhydrous sodium sulfate. Preparative silica gel thin layer chromatography (chloroform:methanol = 95:5)
26 mg of colorless glassy substance (yield 73%)
get. The physical properties of the obtained compound are shown below. [α] ²⁶ _D = −40.4° (c0.92, MeOH) IR (CHCl ₃ ): 3340, 1679, 1505, 1231, 1044,
1019cm ^-1 The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z616. According to the above, this substance is N-O-benzyl-L-
It is identified as diethyl tyrosyl)-(-)-1-amino-2-(4-benzyloxyphenyl)ethylphosphonate. Reference Example 4 [Step 1] 75 mg of diethyl N-(N-benzyloxycarbonyl-L-phenylalanyl-(-)-1-amino-2-(4-benzyloxyphenyl)ethylphosphonate) (see Reference Example 2) Methanol acetic acid (4:1)
Dissolve in 5 ml, add 40 mg of 10% palladium-carbon, and perform catalytic reduction for 8 hours. After separating the catalyst,
The liquid was distilled off under reduced pressure and subjected to preparative silica gel thin layer chromatography (chloroform: methanol = 9:
Separation is performed in step 1) to obtain 40 mg (yield: 83%) of a colorless glassy substance, which is the target compound. The physical properties of the obtained compound are shown below. [α] ²⁶ _D = −63.0° (c1.36, MeOH) IR (CHCl ₃ ): 3320, 1660, 1508, 1226, 1041,
1020cm ^-1 ¹ H-NMR (CD ₃ OD): The main peak is δ: 1.29 (m,
6H), 2.5-3.7 (m, 5H), 4.1 (m, 4H),
4.56 (m, 1H), 6.70 (d, 2H), 7.05 (d,
2H), 7.2 (5H) The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z420. Based on the above, this substance is identified as diethyl N-(L-phenylalanyl)-(-)-1-amino-2-(4-hydroxyphenyl)ethylphosphonate. Reference Example 5 [Step 2] 26 mg of the compound obtained in Reference Example 3, 7 mg of N-acetyl-L-isoleucine, and 5 mg of N-hydroxysuccinimide are dissolved in 1 ml of anhydrous ethylene glycol dimethyl ether and stirred in a salt-ice bath. Add 9 mg of DCC, stir, and then raise to room temperature and allow to react for 26 hours. The generated N,N'-dicyclohexylurea was removed, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the target compound, a white solid, was separated using preparative silica gel thin layer chromatography (chloroform:methanol = 97:3). Obtain 15 mg (46% yield). The physical properties of the obtained compound are shown below. Melting point: 145-147℃ [α] ²⁶ _D = -46.4゜ (c0.53, MeOH) IR (CHCl ₃ ): 3290, 1650, 1506, 1230, 1019 cm ^-1 ¹ H-NMR (CD ₃ OD) Main The peak is δ: 0.67 (d,
3H), 0.78 (t, 3H), 1.30 (t, 6H), 1.91
(s, 3H), 4.1 (m, 4H), 5.00 (s, 4H),
6.84 (d, 2H), 6.86 (d, 2H), 7.09 (d,
2H), 7.13 (d, 2H), 7.3 (bs, 10H) The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z771. According to the above, this substance is N-(N-acetyl-L
-isoleucyl-O-benzyl-L-tyrosyl)
It is identified as diethyl -(-)-1-amino-2-(4-benzyloxyphenyl)ethylphosphonate. Reference Example 6 [Step 2] 40 mg of the compound obtained in Reference Example 4, 26 mg of N-benzyloxycarbonyl-N-methyl-L-valine,
11 mg of N-hydroxysuccinimide is dissolved in 1 ml of anhydrous ethylene glycol dimethyl ether and stirred in a salt/ice bath. Add 22 mg of DCC and stir for 3 hours, then raise to room temperature and stir for 26 hours. The generated N,N'-dicyclohexylurea is separated, 50 ml of ethyl acetate is added to the liquid, and the organic layer is washed with aqueous sodium bicarbonate, water, and dried over anhydrous sodium sulfate. After distilling off the solvent under reduced pressure, the residue was subjected to preparative silica gel thin layer chromatography (chloroform: methanol =
96:4) to obtain 17 mg (yield 27%) of a colorless glassy substance, which is the target compound. The physical properties of the obtained compound are shown below. [α] ²⁶ _D = −95.7° (c0.68, MeOH) IR (CHCl ₃ ): 3410, 1674, 1509, 1222, 1040,
1020cm ^-1 ¹ H-NMR (CD ₃ OD) main peak is δ: 0.76 (d,
6H), 1.33 (t, 6H), 2.52 (bs, 3H), 4.12
(m, 4H), 5.14 (s, 2H), 6.66 (d, 2H),
7.05 (d, 2H), 7.10 (s, 5H), 7.37 (s,
5H) The mass spectrum of this substance shows a molecular ion peak at m/z667. Based on the above, this substance is identified as diethyl N-(N-benzyloxycarbonyl-N-methyl-L-valyl-L-phenylalanyl)-(-)-1-amino-2-(4-hydroxyphenyl)ethylphosphonate. be done. Reference Example 7 [Step 4] 2 mg of the compound obtained in Example 1 was dissolved in 0.3 ml of 20% hydrobromic acid-acetic acid solution and left at room temperature for 4 hours. Add 5 ml of water to the reaction solution, adjust the pH to 2 with a 2N aqueous solution of caustic soda, and add HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei,
After passing through the column (non-ionic porous resin) and washing with water,
Elution was performed with a 0.1N ammoniacal 50% aqueous methanol solution, and the solvent was dried under reduced pressure to obtain 1 mg of a crude product. The crude product was dissolved in a small amount of methanol and subjected to high performance liquid chromatography [μBondapack
C ₁₈ [manufactured by Waters], 0.01M ammonium acetate (PH5.0):acetonitrile = 9:1, 4ml/
min] with a retention time of 2.7 minutes. After concentration, a white solid, which is the purified target compound, is obtained by freeze-drying. The physical properties of the obtained compound are shown below. Melting point: 300℃ or higher ¹ H-NMR (D ₂ O, PD4.5): Main peak is δ:
0.65 (d, 3H), 0.81 (t, 3H), 2.00 (s,
3H), 3.99 (d, 1H), 4.30 (bt, 1H), 4.65
(dd, 1H), 6.83 (d, 4H), 7.14 (d, 2H),
7.20(d,2H) According to the above, this substance is N-(N-acetyl-L-
It is identified as isoleucyl-L-tyrosyl)-(-)-1-amino-2-(4-hydroxyphenyl)ethylphosphonic acid.

Claims

[Claims] 1 Formula () [In the formula, R ₂ represents hydrogen, methyl or ethyl, R ₄ represents methyl or acetyl, R ₅ represents alkyl having 1 to 4 carbon atoms, and R ₆ represents hydrogen or a hydroxyl group. However, when R ₂ is hydrogen, R ₄ is acetyl, and R ₅ is sec-butyl, R ₆ is not a hydroxyl group. ] A phosphorus-containing oligopeptide represented by