JPH0231673A

JPH0231673A - 細菌用培地

Info

Publication number: JPH0231673A
Application number: JP18157888A
Authority: JP
Inventors: Kanji Suzuki; 鈴木　寛二
Original assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Current assignee: Eiken Chemical Co Ltd
Priority date: 1988-07-22
Filing date: 1988-07-22
Publication date: 1990-02-01

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は細菌検索に有用な培地に関するものである。更
に詳しくは、特に真菌以外のグラム陰性菌及びダラム陽
性菌を分離又は増殖するための細菌用培地に関するもの
である。

［従来の技術］一般に微生物の同定は、種々の試料から細菌を純粋な形
で分離し、純培養菌を得ることから始まる。微生物の分
離は、通常、寒天平板培地に試料を接種して培養した後
、生じた独立集落を釣菌することにより行なわれている
。独立集落は、原則として１個の微生物細胞が増殖した
ものと考えられるので、この手法により純培養菌を得る
ことができる。

ところで細菌の中にはプロテウス・ブルガリス（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ）やプロテウス・ミラビリ
ス（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍ１ｒａｂｉｒｉｓ）のように寒
天平板上で遊走するものがある。このような細菌が遊走
すると、寒天平板における細菌種の独立集落表面を覆っ
てしまうため、前記のような釣菌による分離は困難にな
る。

この細菌の遊走という現象は、培地中の食塩によって促
進されることが知られている。

現在、臨床検査領域で腸内細菌分離用培地として広く利
用されているトリガルスキー改良培地やＣＬＥＤ培地等
の重版の培地に食塩が含有されていないのは、この理由
によるものである。

一方、細菌の中には食塩が含有されていない培地上では
、生育できないものの存在が知られている。このような
細菌は好塩菌と呼ばれ、陽炎ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ　
ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｇ）等が、このグループ
に属する。

従って、前記の食塩を含有しない培地は、遊走を阻止し
得る反面、好塩菌の分離ができないという短所をもって
いるといえる。

遊走の阻止については、食塩を含まない培地の利用の他
にも、培地中への界面活性剤の添加（板端　利−著、近
代出版社ｒ腸内細菌■、各論３゜満足するものではない
０例えば、ラウリル硫酸ナトリウムがプロテウス属の遊
走を阻止することは知られているが、他方、グラム陽性
菌に対して発育抑制作用を示すため、一般細菌の増殖分
離には不向きである。同様に、胆汁酸塩は遊走を阻止す
る反面、グラム陽性菌等の発育を抑制する。

このような一部の細菌に対して抑制的に作用する遊走阻
止剤は、特定の選択培地においては使用可能なばかりで
なく、場合により選択剤としても機能するという便利な
ものであるが、逆に広範囲にわたる細菌の発育を目的と
する培地においては利用できない。

［発明の目的１本発明は、プロテウスの遊走を効果的に阻止することが
でき、且つ好塩菌等の真菌以外の広範囲の菌が十分な発
育を示す細菌≠萼用培地の提供を目的とする。

［発明の構成］本発明は、サポニンとラウリル硫酸ナトリウムを必須成
分として含有することを特徴とする細菌用培地である。

本発明におけるサポニンとしては、重版の精製サポニン
を利用することができ、その由来は特に限定されるもの
ではない。

サポニンの使用量は、特に限定されるものではなく、ラ
ウリル硫酸ナトリウム量や食塩含量に左右され、培地１
０００ｍｌあたり、約０．１ｇ以下では、遊走阻止効果
が得にくくなり、　２０ｇを越えると一部の細菌に対す
る毒性が無視できなくなるので０．１〜２０ｇの範囲で
適宜、選択すると良い。

一方、ラウリル硫酸ナトリウム（以下、ＳＬＳと略称す
る）の使用量は、サポニンの使用量によって左右される
が、培ｊ′Ｉ！！１０００ｍｌあたり０．０５〜１、Ｏ
ｇの範囲とするのが好ましい。ＳＬＳは、特にグラム陽
性菌に対し発育抑制作用を示すので、サポニン同様多量
には用いない方が良い。

サポニンとＳＬＳ以外の組成は、ペプトン、ソとができ
る。

［発明の作用］本発明におけるサポニンは、遊走阻止剤として作用し、
その作用は少量のＳＬＳによって、更に増強される。同
時に、サポニンはＳＬＳのグラム陽性菌に対する発育抑
制を中和する作用も有している。

特公昭５５−２５８３９号公報には、サポニンや各種ビ
タミン等、発育促進因子、指示薬としてブロームチモー
ルブルー、ブロムクレゾールパープル、フェノールレッ
ドで対象とする菌に毒性を示さないものであれば、特に
限定されるものではない。

固形成分も一般的な寒天の他、ゼラチンやポリアクリル
アミド等のゲル化剤を利用することができる。

本発明による細菌≠着用培地は、即使用可能な生培地の
形の他、粉末乾燥培地の形で供給するこついて開示され
ているが、プロテウス属の遊走を阻止する効果について
は、新たな発見である。

更に、本発明におけるサポニンは、グラム瞼性菌及びグ
ラム陽性菌に対し、増殖因子としても作用している。

このように、本発明による細菌≠着用培地は、サポニン
とＳＬＳの相乗効果によって、プロテウスの遊走を完全
に阻止し、かつ広範囲にわたる細菌の発育を支持する。

以下、実施例に基づき本発明を更に詳細に説明する。

［実施例］実施例１．　サポニンとＳＬＳの効果の確認１）寒天培
地の調製次のような組成を有する培地を基礎培地とし、これに種
々の濃度の食塩、サポニン（和光紬薬工業■製）、及び
５ＬＳ（和光紬薬工業■製）を加え、ｐＨを７．３に調
整した後、１２１℃で１５分間高圧滅菌し、滅菌シャー
レに２０１づつ分注して、寒天モ板培地を調製した。

基礎培地（培地＋００ｈｌあたり）；ペプトン　　　　　　　　　　　１０　ｇ肉エキス　　
　　　　　　　　　　４ｇ乳糖　　　　　　　　　　　
　　　ｔｏ　ｇブロムチモールブルー　　　　　　０．
０４　ｇ寒天　　　　　　　　　　　　　　１５　ｇ２
）培養試験次のような供試間を用いて、培地の性能を試験した。

供試間；プロテウス・ブルガリス（Ｐｒａｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａ
ｒｉｓ）、ブドウ球菌としてスタフィロコッカス・アウ
レウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ
）　、腸炎ビブリオ菌としてビブリオ・パラへモリティ
力（Ｖｉｂｒｉｏ　ｐａｒａ−ｂａｅｍａｌｉｔｉｃｕ
ｓ）試験方法は、以下の通りである。

すなわち、ハートインフュージョンブイヨン培地（栄研
化学■製）を用い、３７℃で１８〜２４時間培養して増
菌した供試間を、滅菌生理食塩水で１０−Ｉ〜１Ｏ−６
まで１０倍連続希釈して接種菌液とした。

この接種菌液０．０２■ｌをミスチー法により各種培地
に接種した後、３７℃で２４時間培養して、その発育状
態を１！５１察した。

なお、判定基準は次の通りである。

〈判定基準〉（１）遊走の程度プロテウス・ブルガリス菌株１０−１の希釈菌液を適下
して発育した菌苔の縁から遊走の先端までの距離（■■
）の測定（２）ブドウ球菌及び腸炎ビブリオ菌の発育性；良好な
発育が認められたもの（す；わずかな発育が認められたもの；発育が認められなかったもの３）培養試験の結果 ■、サポニンによるプロテウスの遊走抑制効果を第１表
に示す、なお、表中の使用培地は以下の通りである。

使用培地Ａ；基礎培地Ｂ；基礎培地（１０００ｍｌあたり）に食塩を８ｇ添加
した培地Ｃ，Ｂの培地（１００ｈｌあたり）にサポニンを０．５
〜２０ｇ添加した培地以下余白サポニンの添加量が増すにつれて遊走が抑制され、サポ
ニンの添加効果が確認されたが、・完全に阻止するまで
には至らなかった。

ＩＩ　、　Ｓ　Ｌ　Ｓによるプロテウスの遊走阻止効果
を第２表に示す、なお、表中の使用培地は以下の通りで
ある。

使用培地Ａ；基礎培地Ｂ；基礎培地（１０００ｍｌあたり）に食塩を８ｇ添加
した培地Ｃ，Ｈの培地（１０００鱈あたり）にＳＬＳを０．０５
〜１．０ｇ添加した培地以下余白ＳＬＳ（ｌ１ｇ以上の添加で遊走を完全に阻止したが、
ブドウ球菌の発育も阻止された。

■、サポニン及びＳＬＳの相乗効果によるプロテウスの
遊走阻止効果、並びにブドウ球菌の発育性の測定結果を
第３表に示す、なお、表中の使用培地は、基礎培地（ｔ
ｏｏ（１＋＋１あたり）に食塩を８ｇ、サポニンを０．
１〜２０ｇ、ＳＬＳを０．０５〜１．０ｇ添加した培地
を用いた。なお１表中の上段にプロテウスの遊走圧＃（
■）を、下段にブドウ球菌の発育性（＋；増殖、　（÷
）；わずかな発育−：発育抑制）を示した。

以下余白サポニン０．１〜２０ｇ　、Ｓ　Ｌ　Ｓ　０．０５〜１
．０ｇの添加でプロテウスの遊走が完全に阻止され、ブ
ドウ球菌の良好な発育が確認された。

以上の結果から、培地１０００ｍｌあたりのサポニンと
ＳＬＳの最適添加量は、サポニン２．Ｏｇ、５ＬＳ０．
１ｇとして、更に培地性能について検討を行なった・実施例２．　本発明による細菌用培地の性能試験実施例
１における基礎培地１０００ｍｌあたり、食塩を８．０
ｇ、サポニンを２ｇ、ＳＬＳをＯ，Ｉｇ加えたものを、
本発明による細菌用培地とし、実施例１の培地Ａ及び培
地Ｂを対照として性能試験を行なった結果を第４表〜第
６表に示す、なお、各培地は実施例１と同様に調製した
。供試菌としては、以下に示す各種の菌株を用い、実施
例１と同様の操作により希釈、接種、培養し、次の判定
基準にて判定した。

〈判定基準〉（１）プロテウスの遊走阻止ｌＯ司の希釈菌液を適下して発育した菌苔の縁から遊走
り先端までの距ｌ１ｌ（■）の測定（２）菌の発育性独立集落の直径（１層）の測定供試菌；１、プロテウス書ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓｖｕｌｇ
ａｒｉｓ）ａａ＃１０株２、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍｉｒ
ａｂｉｒｉｇ）φ・・９株３、ビブリオ会パラへモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ　ｐ
ａｒａ−ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）＊　　＊　　＊　
　６　　株４、シゲラ・７レキシネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌ
ａ　ｆｒｅｘｎｅｒｉ）５、シゲラ・ンンネイ（Ｓｈｉ
ｇｅｌｌａ　５ｏｎｎｅｉ）６、サルモネラ争エンテリ
チディス（Ｓａ１層ｏｎｅ　Ｉ　Ｉａｅｎｔｅｒｉｔｉ
ｄｉｓ）７、サルモネラ嗜アリシナ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ａ
ｒｉｚｏｎａｅ）８、サルモネラ・チフス（Ｓａｌｍｏ
ｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉ）９、サイトロバイタ−”７リ
ユンデイ（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎｄｉｉ）１０、クレブシェラ・ニュウモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅ
ｌ　１ａｐｎ＠ｕ腸ｏｎｉａｅ）１１、エンテロバクタ−参アグロメテンス（Ｅｎｔｅｒ
ｏ−ｂａｃｔｅｒ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）１２、セ
ラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃ
ａ−ｓｅｎｓ）１３、ハフニア・アルベイ（Ｈａｆｎｉａ　ａｌｖｅｉ
）１４、ニドワードシェラ昏タルダ（Ｅｄｗａｒｄｓ、
１ｅｌｌａｔａｒｄａ）１５、プロビデンシア・アルカリファシェンス（Ｐ「ｏ
ｖｉｄｅｎｃｉａ　ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎＳ）１Ｇ
、エルシニア・エンテロコリチ力（Ｙｅｒｓｉｎｉａｅ
ｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）１７、１セリキア＋１コリー（Ｅｓｃｈｉｒｉｃｈｉａ
　ｃｏｌｉ）１Ｂ、パスツレラ−マルトシダ（Ｐａｓｔ
ｕｒｅｌｌａ　ｍａｒｕ−ｔｏｓｉｄｅ）１９、エロモナス・ツブリア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　５
ｏｂｒｉａ）２０、ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ　
ｃｈｏｌｅｒａｅ）２１、ビブリオ・アルギノリティカ
ス（Ｖｉｂｒｉｏ　ａｌｇ−ｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）２２、ビブリオ・ミミカス（Ｖｉｂｒｉｏ　ｍ１ｍ１ｃ
ｕｓ）２３、ビブリオ争プルーフイカス（Ｖｉｂｒｉｏ
　ｖｕｌｎｉｆｉ−ａｕｇ）２４、ビブリオ・フルビアリス（Ｖｉｂｒｉｏ　ｆｌｕ
ｖｉａｌｉｓ）２５、スタヒロコ７カス・アウレウス（
Ｓｔａｐｂｙ　１ｏｃｏ−ｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）２６、スタヒロコッカスΦエビデルミゾイス（Ｓｔａ−
ｐｔ＋ｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ
）２７、ストレプトコッカス・フェカーリス（Ｓｔｒｅ
ｐ−ｔｏｃｏｃｃｕｔ　ｆａｓｃａｌｉＳ）２８、シュ
ウトモナスｅエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａ
ｅｒｕｇｉｎｏｓａ）２９、シュウトモナス・フルオレ−、センス（Ｐｓｅｕ
ｄｏ−ｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）３０、シ
ュウトモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｐｕ
ｔｉ−ｄａ）３１、シュウトモナス・スタッツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓｓｔｕｔｚｅｒｉ）３２、キサントモナス・マルトフィリア（Ｘａｎｔｈｏ
■〇−ｎａＳｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）３３、フルテロモナスφプッレファシェンス（Ａｌｔｅ
−ｒｏｍｏｎａｓ　ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎＳ）３４、
シュウトモナス幸アルカリゲネス（ＰＳｅｕｄｏ層０−
ｎａｓ　ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）３５、シュウトモナス・シュウドアルカリゲネス（Ｐｓ
ｅｕｄｏ濡ｏｎａｓ　ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎ
ｅｓ）３６、シュウトモナス・ディミヌタ（Ｐｓｅｕｄ
ｏ■ｏｎａｓｄｉｍｉｎｕｔａ）３７、アクロモバクタ−・キシロースオキシダンス（Ａ
ｃｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ）
３８．７シネトバクター・カルコアセティカス（Ａｃｉ
ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）
３９、モラキセラｅウレスラリ７．　（Ｍｏｒａｒｅｌ
ｌａ　ｕｒｅ−ｔｈｒａｌｉｓ）４０、フラボバクテリウム・メニンゴセプティカム（Ｆ
ｒａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｍａｎｉｎｇｏｓｅｐ
ｔｉｃｕｍ）以下余白ゝ〜、（単位、ｍ）［発明の効果］第４表〜第６表で明らかなように、本発明による新規な
細菌用培地でのプロテウスの遊走抑制効果は、供試した
プロテウス１９例の全てで明確に認められた。更に、多
くの菌種についてもサポニン添加による発育促進効果が
確認され、同定の指標の一つとなる乳糖の分解性も良好
であった。

本発明による細菌≠参用培地は冷所に保存した場合、数
ケ月間安定であり、従来の基礎培地と安定性の点で劣る
ものではなく、疫学上きわめて有用なものである。

Claims

【特許請求の範囲】１）サポニンとラウリル硫酸ナトリウムを必須成分とし
て含有することを特徴とする細菌用培地２）培地１０００ｍｌあたり、サポニンを０．１〜２０
ｇ、ラウリル硫酸ナトリウムを０．０５〜１．０ｇ含有
することを特徴とする請求項１記載の細菌用培地