JPH0227981A - Gel-like artificial medium - Google Patents
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Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野 )
本発明は、無菌培養や組織培養に必要なゲル状人工培地
に関し、より詳細には、合成スチブンサイト(5tev
ensiLe l を有効成分として、この有効成分に
、必要に応じて動物あるいは植物の組織体または成長増
殖に必要な成分を加え、水あるいは水混和性有機溶媒と
の混合液にコロイド状に分散させたゲル状人工培地に関
する。Detailed Description of the Invention (Field of Industrial Application) The present invention relates to a gel-like artificial medium necessary for sterile culture and tissue culture, and more specifically, the present invention relates to a gel-like artificial medium necessary for aseptic culture and tissue culture.
EnsiLe l is used as an active ingredient, and to this active ingredient, ingredients necessary for animal or plant tissue or growth and proliferation are added as necessary, and the mixture is colloidally dispersed in water or a mixed solution with a water-miscible organic solvent. This invention relates to a gel-like artificial medium.
(従来技術 )
従来、動物あるいは植物の組織培養に用いられれてきた
ゲル状人工培地の床材としては、寒天が一般に多用され
てきた。(Prior Art) Agar has been commonly used as a bedding material for gel-like artificial media that have been used for animal or plant tissue culture.
また、寒天以外にも種々の有機化合物や無機化合物が提
案されている。Moreover, various organic compounds and inorganic compounds other than agar have been proposed.
例えば、特開昭60−2041)81号公報には、海草
より精製したカラギーナンとガラクトマンナンの組み合
わせ等が開示されており、特開昭61−78:180号
公報には、水酸化アルミニウム、水酸化鉄、ベントナイ
ト、合成ヘクトライト等が開示されている。For example, JP-A-60-2041)81 discloses a combination of carrageenan and galactomannan purified from seaweed, and JP-A-61-78:180 discloses a combination of carrageenan and galactomannan purified from seaweed. Iron oxide, bentonite, synthetic hectorite, etc. are disclosed.
(解決すべき問題点 )
−IilQに使用されている寒天は、透明度、溶解性、
経時変性(酸化や腐敗)、価格等の点で問題があり、特
に透明性に関してはその改良が求められている。(Problems to be solved) - The agar used in IilQ has poor transparency, solubility,
There are problems in terms of deterioration over time (oxidation and decay), price, etc., and improvements are particularly needed in terms of transparency.
また、他の有機系の化合物を用いた人工培地でも、酸化
や腐敗などの劣化は生じやすく、こうした安定性の点で
無機系の化合物より劣っている。Artificial media using other organic compounds are also susceptible to deterioration such as oxidation and putrefaction, and are inferior to inorganic compounds in terms of stability.
無機系化合物であるベントナイトは天然に産出する鉱物
であり、半合成品の場合でも、そのケイ酸分原料に天然
の粘土鉱物を使用し、これをアルカリ活性処理して製造
しており、いずれの場合も天然の鉱物を基にしている。Bentonite, an inorganic compound, is a naturally occurring mineral, and even in the case of semi-synthetic products, natural clay minerals are used as the silicic acid raw material, and this is manufactured by alkali activation treatment. Cases are also based on natural minerals.
従って、不純物の混入は避けられず、このベントナイト
を水性媒体に膨潤分散させたとき、乳濁し、透明性なら
びに色調の点で劣る。更に、ベントナイトの水分散液は
比較的大きい増粘性は示すが、レオロジー特性の一つで
あるチクソトロピーの点でもやや劣るという問題がある
。Therefore, contamination with impurities is unavoidable, and when this bentonite is swollen and dispersed in an aqueous medium, it becomes turbid, resulting in poor transparency and color tone. Furthermore, although bentonite aqueous dispersions exhibit relatively high viscosity, they also have a problem of being somewhat inferior in thixotropy, which is one of the rheological properties.
一方、フィロケイ酸塩類の合成スメクタイト鉱物として
合成ヘクトライトが知られており、この合成へクトライ
トの水分散液は、透明性およびチクソトロピーの特性に
優れている。On the other hand, synthetic hectorite is known as a synthetic smectite mineral of the phyllosilicate class, and an aqueous dispersion of this synthetic hectorite has excellent transparency and thixotropic properties.
しかし、このヘクトライトは、1価金属成分としてリチ
ウム、およびアニオン成分としてフッ素イオンを含有し
ており、これらの不純成分を含有することから、培養し
ようとする生物体もしくは組織体への悪影響の心配があ
り、その用途が自ずと制限されている。However, this hectorite contains lithium as a monovalent metal component and fluorine ion as an anion component, and since it contains these impurity components, there is concern that it may have an adverse effect on the organism or tissue that is to be cultured. However, its use is naturally limited.
また一般に、スチブンサイトは下記式+1)、(Mga
、asMno、oaFeo、otlsi4010 (O
HI * ・(Ca、Mg)O,O?・・・・・ (1
)
で表わされる化学組成を有する粘土鉱物であり、この鉱
物はフィロケイ酸マグネシウム、即ち、1)1g3sj
40+。(OHI 2のマグネシウム成分の一部が他の
金属で置換されるとともに、他の一部が空位となった化
合物である。In general, the steven site is expressed by the following formula +1), (Mga
, asMno, oaFeo, otlsi4010 (O
HI * ・(Ca, Mg) O, O?・・・・・・ (1
) This mineral is magnesium phyllosilicate, i.e. 1) 1g3sj
40+. (This is a compound in which part of the magnesium component of OHI 2 is replaced with another metal, and the other part is vacant.
このスチブンサイトを合成しようとする試みも既に知ら
れており、例えばクレイズ・アンド・クレイ・ミネラル
ズ誌、第27巻、第4号、第253乃至260頁け97
9)には、セビオライト−水系を熱処理して、スチブン
サイトを合成することが記載されている。Attempts to synthesize stevensite have already been known, for example, in Clays and Clay Minerals, Vol. 27, No. 4, pp. 253-260, p. 97.
9) describes that stevensite is synthesized by heat-treating a Seviolite-water system.
然しなから、天然に産出されるスチブンサイトは前記(
1)式で示されるように、鉄、マンガン等の着色成分を
含有しており、また上記公知の合成法で得られるスチブ
ンサイトにあっては、未反応物のセビオライトがかなり
の量で含まれており、いずれも人工培地としては適当で
ない。However, the naturally occurring stevensite is
1) As shown in the formula, stevensite contains coloring components such as iron and manganese, and stevensite obtained by the above-mentioned known synthesis method contains a considerable amount of unreacted seviolite. Therefore, neither is suitable as an artificial culture medium.
(問題点を解決するための手段 )
本発明者等は、Mg、Si、Naの3種の金属成分のみ
から成る合成スチブンサイトの製造に成功し、かかる合
成スチブンサイトを有効成分とするゲル状人工培地は、
透明性等の特性に優れ、上述した従来の人工培地の問題
点が解消されることを見出した。(Means for Solving the Problems) The present inventors have succeeded in producing synthetic stevensite consisting of only three metal components, Mg, Si, and Na, and a gel-like artificial medium containing such synthetic stevensite as an active ingredient. teeth,
It has been found that it has excellent properties such as transparency and solves the problems of the conventional artificial culture medium mentioned above.
即ち本発明によれば、金属成分が実質上マグネシウム、
ナトリウム及びケイ素のみから成るスチブンサイト型フ
ィロケイ酸マグネシウムナトリウムであって、エチレン
グリコール処理した状態で面間隔16乃至26人にX線
回折ピークを有する合成スチブンサイトが水にコロイド
状分散していることを特徴とするゲル状人工培地が提供
される。That is, according to the present invention, the metal component is substantially magnesium,
A stevensite-type magnesium sodium phyllosilicate consisting only of sodium and silicon, which is characterized by a colloidal dispersion of synthetic stevensite in water, which has an X-ray diffraction peak at a lattice spacing of 16 to 26 when treated with ethylene glycol. A gel-like artificial medium is provided.
(作 用 )
本発明において用いる合成スチブンサイトは、Mg、S
i、Naの3種の金属成分のみから成っており、着色金
属成分を含有しておらず、これを水と混合し、コロイド
状に分散させるときには優れたチクソトロピー特性を示
し、しかもこのコロイド状分散液は、乳濁することなく
透明となる。(Function) The synthetic stevensite used in the present invention contains Mg, S
It is made up of only three types of metal components, i. The liquid becomes clear without becoming milky.
この結果として、この合成スチブンサイトをゲル状人工
培地として用いるときは、そのチクソトロビー特性が人
工培地として有効に働き、しかも不純物を含まず、透明
性に優れたゲル状人工培地が調製される。As a result, when this synthetic stevensite is used as a gel-like artificial medium, its thixotropic properties work effectively as an artificial medium, and a gel-like artificial medium that does not contain impurities and has excellent transparency is prepared.
また本発明において用いる合成スチブンサイトは、金属
成分が実質上ug、 Si、 Naの3成分のみから成
るスチブンサイト型フィロケイ酸マグネシウムナトリウ
ムであって、フルオライドイオン(F−)を含まないこ
とから、生物体や生体組織等の培養体に対する安全性が
高い。Furthermore, the synthetic stevensite used in the present invention is a stevensite-type magnesium sodium phyllosilicate whose metal components are essentially only ug, Si, and Na, and does not contain fluoride ions (F-), so it is suitable for living organisms. It is highly safe for cultured bodies such as living tissues and tissues.
更に前記合成スチブンサイトを水溶性重合体と組み合わ
せて用いるときは、チクソトロピー特性が更に顕著に向
上し、好適なゲル状人工培地が調製される。Furthermore, when the synthetic stevensite is used in combination with a water-soluble polymer, the thixotropic properties are further significantly improved, and a suitable gel-like artificial medium is prepared.
(発明の好適態様 )
A成スチブンサイト
本発明の目的に好適に使用される合成スチブンサイトは
実質上下記式、
Mgx Nay S14010 (OH1z’Naz
” ’ (2)式中、XとY・は、)[+Y<3という
条件下で、Xは2以上の数であり、Yは0乃至0.1の
数であり、
2は0より大で1.0までの数である、で表わされる化
学組成を有する。(Preferred Embodiment of the Invention) A synthetic stevensite The synthetic stevensite preferably used for the purpose of the present invention substantially has the following formula, Mgx Nay S14010 (OH1z'Naz
`` ' In the formula (2), It has a chemical composition expressed as , which is a number up to 1.0.
上記式(2)の化学組成の決定は、次のように行なわれ
る。The chemical composition of formula (2) above is determined as follows.
即ち1合成化合物の組成分析から、Si4原子当りのM
gの原子数(x) i5よび(Na)の全原子数(X+
Z)が求められる。That is, from the compositional analysis of one synthetic compound, M per Si4 atom
Number of atoms of g (x) Total number of atoms of i5 and (Na) (X+
Z) is required.
次いで、合成化合物の陽イオンをアンモニウムイオンで
イオン交換したものの組成分析から、層内に存在するN
aの原子R(Y)が求められる。Next, from the compositional analysis of the cation-exchanged product of the synthesized compound with ammonium ions, the N existing in the layer was determined.
The atom R(Y) of a is determined.
かくして式(2)の各原子数(x、 y、 z)を求め
ることができる。ここで、Zは層間に存在する交換性N
aの原子数と単に付着しているNaの原子数(α)との
和である。In this way, the number of atoms (x, y, z) in formula (2) can be determined. Here, Z is the commutativity N that exists between the layers
It is simply the sum of the number of atoms of a and the number of attached Na atoms (α).
本発明で使用する合成スチブンサイトは、上記式(2)
において、x+Yは3よりも小さく、特に2以上の範囲
にある。The synthetic stevensite used in the present invention has the above formula (2)
, x+Y is less than 3, especially in the range of 2 or more.
又はこの条件を満足する範囲において2以上の値であり
、2.6乃至2.8の範囲が好適である。Or, within a range that satisfies this condition, it is a value of 2 or more, and a range of 2.6 to 2.8 is preferable.
Yも前記条件を満足する範囲において0乃至0.1の値
であり、0乃至0.05の範囲が好適である。Y also has a value of 0 to 0.1 within a range that satisfies the above conditions, and preferably a value of 0 to 0.05.
Zの値は一般に0乃至lの範囲である。The value of Z generally ranges from 0 to 1.
また理論上、上記組成式の分子量当りの陽イオン交換容
ffi (Z−α)の値は、下記式、12−a l =
Y + 2(3−X−Yl =i:l)式中、aは
単に付着しているNaの原子数を表わす、
でボされる。In addition, theoretically, the value of the cation exchange capacity ffi (Z-α) per molecular weight in the above compositional formula is calculated by the following formula, 12-a l =
Y + 2 (3-X-Yl = i:l) In the formula, a simply represents the number of Na atoms attached.
本発明に用いる合成スチブンサイトは、スメクタイト枯
上鉱物に特有のX線回折像を示す。添付図面第1図は、
上記合成スチブンサイトのxls回折像である。The synthetic stevensite used in the present invention exhibits an X-ray diffraction pattern characteristic of smectite karikami mineral. Figure 1 of the attached drawings shows
This is an XLS diffraction image of the above synthetic stevensite.
また、スメクタイトおよび含スメクタイトの混合層鉱物
にエチレングリコール処理したものは、X線の底面反射
が、16乃至26人に現われる。本発明に用いる合成ス
チブンサイトは、添付図面第1図に示すように、この特
徴を有する。Furthermore, when smectite and smectite-containing mixed layer minerals are treated with ethylene glycol, bottom reflection of X-rays appears in 16 to 26 people. The synthetic stevensite used in the present invention has this characteristic, as shown in FIG. 1 of the accompanying drawings.
上述した合成スチブンサイトは、スメクタイト系に属す
るケイ酸マグネシウムの水和物であるという点では、ヘ
クトライトと軌を−にしている。The synthetic stevensite described above is different from hectorite in that it is a hydrate of magnesium silicate belonging to the smectite family.
しかしながら、本発明に用いるこの合成スチブンサイト
は、層内のアルカリ金属成分がNaであるのに対して、
ヘクトライトでは層内のアルカリ金属成分がLiである
こと、およびヘクトライトでは層内のMgとLiとの合
計原子u fX+Ylが3であるのに対して、前記合成
スチブンサイトでは層内のMgとNaとの合計原子!&
(X+Ylが3よりも小さいことにおいて相違するも
のである。However, while the alkali metal component in the layer of this synthetic stevensite used in the present invention is Na,
In hectorite, the alkali metal component in the layer is Li, and in hectorite, the total atoms u fX + Yl of Mg and Li in the layer is 3, whereas in the synthetic stevensite, Mg and Na in the layer are Total atoms with! &
(The difference is that X+Yl is smaller than 3.
本発明において用いられる合成スチブンサイトにおいて
、層内のMgとNaとの合計原子数fX+Ylが3より
も小さいという事実は、MgO,八面体層における41
g原子の一部がNaで置換されるとともに、残りの一部
が空位となっていることを物語っている。更には、Mg
原子の他の一部が水素原子で置換されていることもあり
得る。Mg原子の一部がNaで置換されていること及び
Mg原子の残りの一部が空位となっていることによる電
荷の不足を補う形で、5104四面体層−M(< (N
al Da八面体層−5i04四面体層から成る基本層
構造の積層層間には、Naイオンが存在しているに
の合成スチブンサイトに水を混合すると、基本層(板状
体)同士の層間に水が入り、膨潤するが、やがては基本
層がバラバラなコロイド状に分散し、流動状態(状態■
)となる。In the synthetic stevensite used in the present invention, the fact that the total number of atoms fX+Yl of Mg and Na in the layer is smaller than 3 means that 41
This indicates that some of the g atoms are substituted with Na, and the remaining parts are vacant. Furthermore, Mg
Other parts of the atoms may also be substituted with hydrogen atoms. The 5104 tetrahedral layer -M (< (N
Al Da octahedral layer - 5i04 Tetrahedral layer Basic layer structure has Na ions between the laminated layers. When water is mixed with synthetic stevensite, water is formed between the basic layers (plates). enters and swells, but eventually the basic layer disperses into a colloidal state and becomes a fluid state (state
).
これ(状態I)を静置すると、基本層同士の吸引反発に
より、カード・ハウス構造が形成され、高度に増粘され
るか、あるいはゲル化された状態(状態II)となる。When this (state I) is allowed to stand, a house of cards structure is formed due to attraction and repulsion between the basic layers, resulting in a highly thickened or gelled state (state II).
この状態IIから状態■に復帰させるのに必要な剪断応
力がゲル応力である。The shear stress required to return from state II to state (4) is gel stress.
本発明で用いる合成スチブンサイトは、このゲル応力、
即ち、下記測定法、
固形分濃度4重量%の濃度でファンVG回転粘度計を用
い、600回転/分で10秒間回転させ、回転を止めて
10秒間放置後、3回転/分の回転をさせて測定される
剪断応力(ffb/lo口ft、2)
で定義されるゲル応力が極めて大きく、一般に5以上、
特にIO乃至100の範囲にあり、安定したゲル状態の
形成が可能となる。これは1本発明で用いる合成スチブ
ンサイトでは、単位容積あたりに形成されるカード・ハ
ウス構造の数が多く、構成が緻密であることを物語って
いる。The synthetic stevensite used in the present invention has this gel stress,
That is, the measurement method is as follows: Using a fan VG rotational viscometer at a solid content concentration of 4% by weight, rotate at 600 revolutions/minute for 10 seconds, stop the rotation, leave for 10 seconds, and then rotate at 3 revolutions/minute. The gel stress, defined as the shear stress (ffb/loft, 2) measured by
In particular, it is in the range of IO to 100, making it possible to form a stable gel state. This indicates that the synthetic stevensite used in the present invention has a large number of card house structures formed per unit volume and has a dense structure.
またこのゲル応力は、値が大きくなればなるほどチクソ
トロピーであることを意味しており、このことから、本
発明に用いる合成スチブンサイトは、著しく大きいチク
ソトロピー的性質を有することが理解される。Further, the larger the value of this gel stress, the more thixotropic it is. From this, it is understood that the synthetic stevensite used in the present invention has significantly thixotropic properties.
A成スチブンサイトの製造
本発明で用いる合成スチブンサイトは塩基性炭酸マグネ
シウムと、ケイ酸ナトリウム又は非晶質シリカ及び水酸
化ナトリウムの組合せとを含有する水性混合物を水熱処
理に賦することにより得られる。Preparation of A-formed stevensite The synthetic stevensite used in the present invention is obtained by subjecting an aqueous mixture containing basic magnesium carbonate and a combination of sodium silicate or amorphous silica and sodium hydroxide to a hydrothermal treatment.
マグネシウム原料としては塩基性炭酸マグネシウムを選
択することにより、スチブンサイトの合成が可能となり
、更に高収率及び高純度での製造が可能となる。By selecting basic magnesium carbonate as the magnesium raw material, stevensite can be synthesized, and production with high yield and high purity becomes possible.
塩基性炭酸マグネシウムとしては、任意のものを使用し
得るが、炭酸マグネシウムや、水酸化マグネシウム或い
はこれらの混合物を使用したのではスチブンサイトの高
収率及び高純度での製造は期待できない。Any basic magnesium carbonate can be used, but if magnesium carbonate, magnesium hydroxide, or a mixture thereof is used, it is not possible to produce stevensite in high yield and purity.
塩基性炭酸マグネシウムとしては、ハイドロマグネサイ
トを使用するのが特に望ましく、このものは下記式
%式%)
で示される化学組成と、AST152−513に帰属さ
れるX−線回折像とを有する。As the basic magnesium carbonate, it is particularly desirable to use hydromagnesite, which has a chemical composition represented by the following formula (%) and an X-ray diffraction pattern assigned to AST152-513.
Si及びNa成分原料としては、ケイ酸ナトリウム水溶
液が有利に使用されるが、非晶質シリカと水酸化ナトリ
ウム及び非晶質シリカとケイ酸ナトリウムとの組合せを
使用することもできる。ケイ酸ナトリウムとしては式
%式%(51
式中、nはl乃至5の数、特に2.0乃至3.5の数で
ある、
のケイ酸ナトリウムが使用される。また、非晶質シリカ
としては、シリカのヒドロシル、ヒドロゲル、キセロゲ
ルや、湿式性非晶質シリカ或いは気相法非晶質シリカ等
が使用される。As the Si and Na component raw materials, a sodium silicate aqueous solution is advantageously used, but combinations of amorphous silica and sodium hydroxide and amorphous silica and sodium silicate can also be used. As the sodium silicate, sodium silicate of the formula % formula % (51 where n is a number from 1 to 5, particularly from 2.0 to 3.5) is used.Also, amorphous silica As the material, silica hydrosil, hydrogel, xerogel, wet amorphous silica, vapor phase amorphous silica, etc. are used.
塩基性炭酸マグネシウムとケイ酸ナトリウム或いは非晶
質シリカ及び水酸化ナトリウムとの使用割合は、マグネ
シウム分とケイ酸分とがMg:Siの原子比で3ニア乃
至5:5の範囲で用いるのがよく、またナトリウム分は
化学量論酌量以上に用いるのがよい。ケイ酸ナトリウム
を使用するときには、格別の水酸化ナリウムを添加しな
くともナトリウム分が系中に過剰に存在することになる
。The ratio of basic magnesium carbonate to sodium silicate or amorphous silica and sodium hydroxide is such that the atomic ratio of magnesium to silicate is Mg:Si in the range of 3 to 5:5. It is better to use more than the stoichiometric amount of sodium. When sodium silicate is used, an excess of sodium will be present in the system even without the addition of special sodium hydroxide.
水熱反応に先立って、用いる原料を可及的に均一に混合
させて、均質化した水性スラリーを形成させることが、
収率及び純度向上の見地から望ましい。この均質混合は
強剪断撹拌下に行なうのがよ(、この目的に、高速何段
ミキサー、ボールミル、サンドミル、コロイドミル、超
音波照射等を用いることができる。Prior to the hydrothermal reaction, the raw materials used are mixed as uniformly as possible to form a homogenized aqueous slurry.
Desirable from the standpoint of improving yield and purity. This homogeneous mixing is preferably carried out under strong shear stirring (for this purpose, a high-speed multi-stage mixer, ball mill, sand mill, colloid mill, ultrasonic irradiation, etc. can be used).
また、少量のケイ酸ナトリウムは、水溶液中で塩基性炭
酸マグネシウムを均一に分散させる効果があるので、原
料としてケイ酸ナトリウムを用いる場合は、あらかじめ
塩基性炭酸マグネシウムをケイ酸ナトリウムで分散させ
た分散スラリーを調合してから残りの原料を加えても、
均一混合の目的を達成できる。この場合に用いるケイ酸
ナトリ・クムは水性スラリーに対してO0■乃至10重
量%の範囲で用いるのか望ましい。In addition, a small amount of sodium silicate has the effect of uniformly dispersing basic magnesium carbonate in an aqueous solution, so when using sodium silicate as a raw material, it is necessary to disperse basic magnesium carbonate with sodium silicate in advance. Even if you add the remaining ingredients after mixing the slurry,
The purpose of uniform mixing can be achieved. The sodium silicate cum used in this case is preferably used in an amount of 0 to 10% by weight based on the aqueous slurry.
また水性混合物中の固形分濃度は、一般に1乃至30重
量%、特に5乃至15重量%の範囲にあることが望まし
い。It is also desirable that the solid content concentration in the aqueous mixture is generally in the range of 1 to 30% by weight, particularly 5 to 15% by weight.
この混合物をオートクレーブに仕込み、水熱処理を行な
う、水熱処理条件は、従来法に比して比較的温和な条件
であってよく1例えば一般に100乃至300℃、特に
150乃至200℃の温度で、0乃至100 kg/c
+s” (ゲージ)、特に6乃至40 kg/cI12
Gの圧力下に行なうのがよい。反応時間は一般に0.5
乃至20時間のオーグーで十分である0反応により得ら
れる合成スチブンサイトは母液から個−液分離し、水洗
し、乾燥して製品とする。This mixture is charged into an autoclave and subjected to hydrothermal treatment.The hydrothermal treatment conditions may be relatively mild compared to conventional methods. ~100 kg/c
+s” (gauge), especially 6 to 40 kg/cI12
It is best to do this under pressure of G. The reaction time is generally 0.5
Synthetic stevensite obtained by a reaction in which a reaction time of 20 to 20 hours is sufficient is separated into individual liquids from the mother liquor, washed with water, and dried to obtain a product.
■−1
本発明に用いる合成スチブンサイトは、水あるいは水と
メタノール、エタノール、エチレングリコール、プロピ
レングリコール、グリセリン等のアルコール類:アセト
ン、メチルエチルケトン等のケトン類:メチルエーテル
、エチルエーテル、テトラヒドラフラン、ジオキサン等
のエーテル類:セルソルブ系溶媒:酢酸エチル等エステ
ル類等の水混和性有機溶媒、どの混合液により膨潤し。■-1 The synthetic stevensite used in the present invention can be prepared by combining water or water with alcohols such as methanol, ethanol, ethylene glycol, propylene glycol, and glycerin; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; methyl ether, ethyl ether, tetrahydrofuran, and dioxane. Ethers such as: Cellsolve solvents: Water-miscible organic solvents such as esters such as ethyl acetate, etc. Swell with any mixture.
透明なコロイド状増粘液乃至ゲル状固体を与える。Gives a clear colloidal thickened liquid or gel-like solid.
このように、ここに合成したスチブンサイトは、水或は
水混和性有機溶媒との混合液に分散させる時は、チクソ
トロピー的性質を付与し、或は透明なコロイド状増粘液
乃至ゲル状固体を付与することから、動物や植物の組織
培養成は植物の成長培養の床材として用いることができ
る。In this way, the stevensite synthesized here imparts thixotropic properties or imparts a transparent colloidal thickened liquid or gel-like solid when dispersed in water or a mixture with a water-miscible organic solvent. Therefore, tissue culture of animals and plants can be used as a bedding material for growing and culturing plants.
この合成したスチブンサイトと、水或は水混和性有機溶
媒との混合液との混合割合は、培養床材に要求されるチ
クソトロピー的性質によっても相違するが、一般には、
最終の水を含有した培養床材当たり0.5乃至10重量
%、特にl乃至8重量%の範囲が適当である。The mixing ratio of the synthesized stevensite and the mixture of water or a water-miscible organic solvent varies depending on the thixotropic properties required of the culture bed material, but in general,
A range of 0.5 to 10% by weight, in particular 1 to 8% by weight, based on the final water-containing culture bed is suitable.
この合成したスチブンサイトと、水成は水混和性有機溶
媒とを混合させ、チクソトロピー特性を定押させるため
には、合成スチブンサイトを水或は水混和性有機溶媒の
混合液と十分よく混合し、コロイド状分散液とすること
が重要である。In order to maintain the thixotropic properties by mixing the synthesized stevensite with a water-miscible organic solvent, the synthesized stevensite must be thoroughly mixed with water or a water-miscible organic solvent mixture, and the colloid must be mixed with water or a water-miscible organic solvent. It is important to form a dispersion liquid.
コロイド状分散液とする条件は、常温乃至加熱下で、撹
拌の常套手段を用いることによって行なうことができる
。またこの分散は加圧下で行なうことも可能であり、培
地に求められる加熱加圧下での滅菌操作と同時に行なう
ことも出来る。−射的に撹拌時の温度は常温から200
℃の範囲とすることが好ましく、撹拌時間は5乃至12
0分の範囲とするのが良い。The conditions for forming a colloidal dispersion can be achieved by using conventional means of stirring at room temperature or under heating. Further, this dispersion can be performed under pressure, and can be performed simultaneously with the sterilization operation under heat and pressure required for the culture medium. -Temperature during radiation stirring ranges from room temperature to 200℃
It is preferable to keep the temperature in the range of ℃, and the stirring time is 5 to 12
It is preferable to set it in the range of 0 minutes.
コロイド状分散液は、最低10分間以上静置しておくこ
とにより、ゲル状態とすることができる。The colloidal dispersion can be turned into a gel by leaving it to stand for at least 10 minutes.
本発明によれば、この合成スチブンサイトを水或は水混
和性有機溶媒の混合液と混合するに際して、水溶性重合
体を組み合わせて使用すると、チクソトロピー特性の付
与効果を一段と向上させ得る。According to the present invention, when this synthetic stevensite is mixed with water or a mixture of water-miscible organic solvents, if a water-soluble polymer is used in combination, the effect of imparting thixotropic properties can be further improved.
合成スチブンサイトと水溶性重合体との組み合わせ比率
は、広範囲に変化させ得るが、一般に10:0乃至2:
8.特に9:l乃至5:5の重量比で用いることが好ま
しい。The combination ratio of synthetic stevensite and water-soluble polymer can vary over a wide range, but is generally between 10:0 and 2:0.
8. In particular, it is preferable to use a weight ratio of 9:1 to 5:5.
水溶性重合体としては、各種デンプン、シアノエチル化
デンプン、メチルセルロース、エチルセルロース ヒド
ロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース
(CMC)、l−ラガントゴム、アラビヤゴム、アルギ
ン酸ソーダ、ポリビニルアルコール、部分ケン化ポリ酢
酸ビニル、部分アセタール化ポリビニルアルコール、ポ
リビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリ
アクリルアミド、水溶性アクリル樹脂等の1種または2
種以上の組み合わせを挙げることができる。Water-soluble polymers include various starches, cyanoethylated starch, methyl cellulose, ethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, carboxymethyl cellulose (CMC), l-laganth gum, gum arabic, sodium alginate, polyvinyl alcohol, partially saponified polyvinyl acetate, partially acetalized polyvinyl alcohol. , polyvinyl methyl ether, polyvinyl pyrrolidone, polyacrylamide, water-soluble acrylic resin, etc. or two.
Combinations of more than one species can be mentioned.
これらのうちでも、カルボキシメチルセルロース等の水
溶性セルロース誘導体が好ましい。Among these, water-soluble cellulose derivatives such as carboxymethyl cellulose are preferred.
本発明のゲル状人工培地は、無菌培養や組織培養の床材
として用いる時には、必要に応じて他のゲル化剤、増量
剤、栄養成分等を含有することができる。When the gel-like artificial medium of the present invention is used as a bed material for aseptic culture or tissue culture, it may contain other gelling agents, fillers, nutritional components, etc. as necessary.
例えば、ゲル化剤としては、寒天、カラギーナン、ファ
セレラン等を、増量剤としては、多糖類等を、栄養成分
としては、グルコース、蔗糖の炭水化物、植物ホルモン
(成長調整物質)、ビタミン、アミノ酸、天然物(ココ
ナツトミルク、バナナ、ジャガイモ等)、無機塩類(窒
素、リン酸、カリウム等が既に配合された市販肥料)等
が挙げられる。これらの具体的培地としての配合例示は
実施例中で示す。For example, gelling agents include agar, carrageenan, phaseleran, etc., fillers include polysaccharides, etc., and nutritional components include glucose, carbohydrates such as sucrose, plant hormones (growth regulators), vitamins, amino acids, natural Fertilizers (coconut milk, bananas, potatoes, etc.), inorganic salts (commercially available fertilizers containing nitrogen, phosphoric acid, potassium, etc.), etc. Examples of specific formulations of these media are shown in the Examples.
この合成スチブンサイトを水成は水混和性有機溶媒の混
合液とのコロイド状分散液は、ゲル状人工培地として、
透明性に優れ且つゲル状態が安定していることから、各
種の細菌、酵母、かび類の培養ならびに保存用、動物お
よび植物の細胞培養、植物の実生、胚、器官、組織等の
培養、園芸類の繁殖や育種用、各種病理研究用等の床材
として、好適に使用することができる。A colloidal dispersion of this synthetic stevensite with a mixture of water-miscible organic solvents is used as a gel-like artificial medium.
Due to its excellent transparency and stable gel state, it can be used for the cultivation and preservation of various bacteria, yeast, and molds, animal and plant cell culture, cultivation of plant seedlings, embryos, organs, tissues, etc., and horticulture. It can be suitably used as a bedding material for the breeding and breeding of species, for various pathological research, etc.
(発明の効果 )
本発明によれば、金属成分が実質上Mg、Si、Naの
3成分のみから成り、フルオライドイオン(F−1を含
まない合成スチブンサイトをゲル状人工培地として、水
にコロイド状に分散させて用いることによって、生物体
や生体組織に対する安全性が高くしかもまた、透明性に
優れており、コロイド状でありながら硬度のあるゲル状
態を形成し得るという利点が得られる。(Effects of the Invention) According to the present invention, the metal component is substantially composed of only the three components Mg, Si, and Na, and a synthetic stevensite containing no fluoride ions (F-1) is used as a gel-like artificial medium and colloidal in water. By dispersing and using it in the form of a colloid, it is highly safe for living organisms and living tissues, has excellent transparency, and has the advantage of being able to form a gel state that is colloidal but has hardness.
(実施例 )
本発明を次の具体例で説明する。なお、本実施例は、適
用できる多くの培養培地のほんの一例に過ぎず、この培
地が多方面で有用に採用される例を示すに過ぎない6
合成スチブンサイトに対する試験方法は、下記の方法に
従った。(Example) The present invention will be explained with the following specific example. Note that this example is just one example of the many culture media that can be used, and only shows an example of how this culture medium can be usefully employed in a variety of fields.6 The test method for synthetic steven sites was as follows: Ta.
(1)X!1回折
理学電気(株)製型X線回折装置(X線発生製装置40
36^1.ゴニオメータ−212501,計数装置50
71)を用いた0回折条件は下記の通りである。(1)X! 1 diffraction X-ray diffraction device manufactured by Rigaku Denki Co., Ltd. (X-ray generation device 40
36^1. Goniometer-212501, counting device 50
The zero diffraction conditions using 71) are as follows.
ターゲット Cu
フィルター Ni
検出器 SC
電圧 35KVP
電流 15mA
カウント・フルスケール 8000C/S時定数
1 sec
走査速度 2°/sinチヤ一ト速度
2 cm/n+in放射角
l。Target Cu Filter Ni Detector SC Voltage 35KVP Current 15mA Count/Full Scale 8000C/S Time Constant
1 sec Scanning speed 2°/sin Chat speed
2 cm/n+in radiation angle
l.
スリット巾 0.3m■
照角 6゜
(2)エチレングリコール処理試料のxIi回折1)0
℃で2時間乾燥した試料を1.0g採取する。Slit width 0.3m ■ Viewing angle 6° (2) xIi diffraction of ethylene glycol treated sample 1) 0
Collect 1.0 g of a sample that has been dried at ℃ for 2 hours.
これに10%エチレングリコール水溶液をホールピペッ
トで5ml加える。撹拌棒でよ(掻混ぜてから、60℃
で12時間乾燥する。乾燥物はメノウ乳鉢で磨り潰す。Add 5 ml of 10% ethylene glycol aqueous solution to this using a whole pipette. Use a stirring rod (stir and then heat to 60°C.
Dry for 12 hours. Grind the dried material in an agate mortar.
ここに回収した粉末を下記の条件でX線回折測定を行な
った。The powder thus recovered was subjected to X-ray diffraction measurement under the following conditions.
ターゲット Cu
フィルター Ni
検出器 SC
電圧 40KVP
電流 20mA
カウント・フルスケール 2000C/S
時定数 2 sec
走査速度 1’/win
チャート速度 1 cm/win
放射角 1/6゜
スリット巾 0.3mm
照角 6゜
測定回折角範囲 1°〜12° (2θ)面間隔(d
)は、半価幅の中点から求めた回折角度(2θ)から下
記式によって算出した。Target Cu Filter Ni Detector SC Voltage 40KVP Current 20mA Count/Full Scale 2000C/S
Time constant: 2 sec Scanning speed: 1'/win Chart speed: 1 cm/win Radiation angle: 1/6° Slit width: 0.3 mm Glancing angle: 6° Measurement diffraction angle range: 1° to 12° (2θ) Plane spacing (d
) was calculated by the following formula from the diffraction angle (2θ) determined from the midpoint of the half width.
d=(え/ 2 ) 5in−’ (θ)但し、先はX
線波長1.542人である。d=(E/2) 5in-' (θ) However, the tip is
The line wavelength is 1.542 people.
(3)ゲル応力
固形分濃度で4重量%になるように合成スチブンサイト
粉末を水に分散せしめた試料液を、25℃の恒温槽に2
4時間保存する。この試料液を、ミキサーを用いて15
00rpmの回転数で1分間解砕する。次いで、ファン
VG回転粘度計を用い、まず600rpmで10秒間回
転させ、回転を止めて10秒間放置後:lrpmの回転
をさせて剪断応力(lb/100ft2)をlj1定す
る。(3) Gel stress A sample solution in which synthetic stevensite powder was dispersed in water to a solid content concentration of 4% by weight was placed in a constant temperature bath at 25°C for 2 hours.
Store for 4 hours. This sample solution was mixed with a mixer for 15 minutes.
Disintegrate for 1 minute at a rotation speed of 00 rpm. Next, using a fan VG rotational viscometer, first rotate it at 600 rpm for 10 seconds, stop the rotation and leave it for 10 seconds, then rotate it at l rpm to determine the shear stress (lb/100 ft2).
(4)透明性
ゲル応力を測定した試験液に、更に水を加え、固形分濃
度で2重量%の試料液を調整する。この試料液を、光路
長10n+■の光学セルに入れ、620止における透過
率を、純水を比較として測定し、透過率%をもって示す
。(4) Transparency Add water to the test solution in which the gel stress was measured to prepare a sample solution with a solid content concentration of 2% by weight. This sample solution is placed in an optical cell with an optical path length of 10n+■, and the transmittance at 620° is measured using pure water as a comparison, and is expressed as transmittance %.
(5)経時変化
固形分濃度で2重量%の試料液を調整し、この試料液5
0gを10On+1の三角フラスコに採り、アルミホイ
ルでキャップし、オートクレーブに入れ、120℃で2
0分間水蒸気滅菌を行なう。(5) Prepare a sample solution of 2% by weight based on the solid content concentration that changes over time, and use this sample solution 5
0g was placed in a 10On+1 Erlenmeyer flask, capped with aluminum foil, placed in an autoclave, and incubated at 120℃ for 2 hours.
Steam sterilize for 0 minutes.
次いで滅菌された試験液を、クリーンベンチ内でシャー
レに移し、放冷する。Next, the sterilized test solution is transferred to a petri dish in a clean bench and left to cool.
シャーレ内の試料液力1ゲル化したことを確認した後、
シャーレを転倒させ、 31’Cの保温器内に保存する
。After confirming that the sample liquid in the Petri dish has turned into a gel,
Invert the petri dish and store it in a 31'C incubator.
2週間経過後、シャーレ内のゲルプレートにひび割れが
生じているかどうかを肉眼で観察し、ひび割れの無いも
のを、経時変化無(、良好とした。After 2 weeks, the gel plate in the petri dish was visually observed to see if there were any cracks, and those with no cracks were rated as "no change over time" (good).
A スチブンサイトの;−。A Steven site ;-.
市販塩基性炭酸マグネシウム(徳山曹達製TT)14.
5g (マグネシア分6g)を約150m1の水に入れ
、3号珪酸ナトリウム54g(シリカ分12g)を加え
て撹拌し、分散スラリーを調合する。Commercially available basic magnesium carbonate (TT manufactured by Tokuyama Soda) 14.
Put 5g (magnesia content: 6g) into about 150ml of water, add 54g of No. 3 sodium silicate (silica content: 12g), and stir to prepare a dispersion slurry.
この分散スラリーを、内容積lβのオートクレーブに入
れる。撹拌しながら170℃で5時間水熱処理をする。This dispersed slurry is placed in an autoclave having an internal volume lβ. Hydrothermal treatment is carried out at 170° C. for 5 hours while stirring.
途中発生する気体を時々排気する0反応終了後、放冷し
てから内容物を取り出し、濾過、乾燥し、46gの生成
物を得た。After the reaction was completed, the contents were taken out, filtered and dried to obtain 46 g of product.
この生成物をサンプルミルで粉砕して得られた合成スチ
ブンサイト粉末20gに水を加えて500gとし、撹拌
混合し、4重量%のゲル状液(A)を調製した。This product was ground in a sample mill to obtain 20 g of synthetic stevensite powder, water was added to make 500 g, and the mixture was stirred and mixed to prepare a 4% by weight gelled liquid (A).
なお、上記合成スチブンサイト粉末のX線回折スペクト
ルおよびエチレングリコール処理したもののX線回折ス
ペクトルを、それぞれ第1図および第2図に示す6
比較例の寒天溶液について、ゲル化応力、透明性、経時
変化の各特性について測定し、その結果を第1表に表示
した。The X-ray diffraction spectrum of the synthetic stevensite powder and the X-ray diffraction spectrum of the ethylene glycol-treated powder are shown in Figures 1 and 2, respectively. Each characteristic was measured and the results are shown in Table 1.
第 1 表
上記方法で調製した合成スチブンサイト粉末に水を加え
、固形分濃度10重量%のゲル状液を得た。Table 1 Water was added to the synthetic stevensite powder prepared by the above method to obtain a gel-like liquid with a solid content concentration of 10% by weight.
このゲル状液180gに1重量%のカルボキシメチルセ
ルロース液(ダイヤル化学工業社製1)50 ) 42
0gを加え、撹拌混合し、4重量%の混合ゲル状液(B
)を調製した。Add 1% by weight of carboxymethyl cellulose solution (manufactured by Dial Kagaku Kogyo Co., Ltd. 1) to 180 g of this gel-like liquid (50) 42
Add 0g and mix with stirring to obtain 4% by weight mixed gel liquid (B
) was prepared.
上玉1生且刃
比較例として、粉末状寒天(和光紬薬工業製)を選び、
この寒天20gに水300m 12を加え加熱撹拌し、
均質に溶解せしめた。Powdered agar (manufactured by Wako Tsumugi Kogyo Kogyo) was selected as a comparative example of the first raw and blade.
Add 300 m 12 of water to 20 g of this agar, heat and stir,
Dissolved homogeneously.
更に水を加えて全量が500gとなるようにして、寒天
溶液(C)を調製した。Further, water was added to make the total amount 500 g to prepare an agar solution (C).
試験例 l
上記で調製したゲル状液、混合ゲル状液および* 1
:
* 2 :
○・・・ひび割れ無し、×・・・ひび割れ有りゲル化状
態(状態II )から流動状態(状態■)に戻れない。Test Example l Gel-like liquid prepared above, mixed gel-like liquid and *1
: * 2 : ○... No cracks, ×... Cracks, unable to return from gel state (state II) to fluid state (state ■).
試験例 2
上記方法で調製された混合ゲル状液(Bl 80gに、
藺、S、 fMurashige Skoogl培地用
水溶液(主成分:第2表参解)12[1mlを加え、混
合攪拌した。Test Example 2 Mixed gel liquid prepared by the above method (80 g of Bl,
1 ml of Murashige Skoogl medium aqueous solution (main components: see Table 2) was added and mixed and stirred.
得られた混合液は円18.2であり、30分間放置後は
、組織培養培地として良好なゲル強度を有し、試験用ゲ
ル状培地プレートを形成した。The resulting mixed solution had a diameter of 18.2 mm, had good gel strength as a tissue culture medium after being left for 30 minutes, and formed a gel-like medium plate for testing.
該試験用ゲル状培地プレートにマツジグのランナーを置
床し、30日間25°Cに保持して組織培養を行ない、
その培養状態を観察した。Matusig runners were placed on the test gel-like medium plate and kept at 25°C for 30 days to perform tissue culture.
The culture status was observed.
その結果、培地がひび割れせず、透明であるため、根の
発育状態の観察が細部まで容易であり、本発明の合成ス
チブンサイトからなる人工培地の優位性が確認された。As a result, since the medium did not crack and was transparent, it was easy to observe the state of root growth in detail, confirming the superiority of the artificial medium made of the synthetic stevensite of the present invention.
第 2 表
Murashige Skoog液(1g/42 )C
aC1z4Hz0 440
KN0. 190O
NH,NO,1650
KIItPO4170
FeSO44H*0 27.8Nag−EDT
A 37.3Mn5O,・4H,022
,3
ZnSOn−7HzO8,6
H3B0. 6.2蔗糖
30000
試験例 3
上記方法で調製されたゲル状液(A) 150gに、B
5培地用無機塩(主成分;第3表参照) 300m1を
加え、混合撹拌した。Table 2 Murashige Skoog solution (1g/42)C
aC1z4Hz0 440 KN0. 190O NH,NO,1650 KIItPO4170 FeSO44H*0 27.8Nag-EDT
A 37.3Mn5O,・4H,022
,3 ZnSOn-7HzO8,6 H3B0. 6.2 Sucrose
30000 Test Example 3 To 150 g of the gel-like liquid (A) prepared by the above method, B
5. 300 ml of inorganic salt for medium (main components; see Table 3) was added and mixed and stirred.
得られた混合液は、PH7,6であり、30分間放置後
は、種子発芽用培地として良好なゲル強度を有し、試験
用ゲル状培地プレートを形成した。The resulting mixed solution had a pH of 7.6, had good gel strength as a seed germination medium after being left for 30 minutes, and formed a gel-like medium plate for testing.
該試験用ゲル状培地プレー・トに貝割れ大根の種子を蒔
き、7日間20℃に保持して貝割れ大根の発芽状態を観
察した。Seeds of Kaiwari radish were sown on the test gel-like medium plate and kept at 20°C for 7 days to observe the germination state of Kaiwari radish.
発芽した子葉は、この試験用培地プレート上で約5c+
++に生育し、徒長しても倒れることなく、順調に生育
していく状態がよく観察された。The germinated cotyledons were approximately 5c+ on this test medium plate.
It was often observed that the plants were growing smoothly and did not fall over even if they became elongated.
しかもなお、この合成スチブンサイトから成る人工培地
は、合成スチブンサイトの持つレオロジー特性から、培
地プレートに振動等の応力を外部から与えることによっ
て、ゲル状から流動状態に戻るため、生育した植物の根
の毛根を痛めることなく、この培地より生育植物を取り
出すことができ、本発明の特徴を知ることができた。Moreover, due to the rheological properties of synthetic stevensite, this artificial medium made of synthetic stevensite can return from a gel-like state to a fluid state by externally applying stress such as vibration to the medium plate. We were able to take out the grown plants from this medium without damaging them, and were able to understand the characteristics of the present invention.
第3表 B5培地用無機塩(g/l にOH3,33 HNO34,00 1)3Po4 1.73Table 3 Inorganic salt for B5 medium (g/l OH3,33 HNO34,00 1) 3Po4 1.73
第1図は、本発明の実施例で調製された合成スチブンサ
イトのCu−にα線によるx線回折スペクトルであり、
第2図は、前記合成スチブンサイトをエチレングリコー
ル処理したもののCu−Ka線によるx!s底面反射の
回折スペクトルである。FIG. 1 shows the x-ray diffraction spectrum of the synthetic stevensite prepared in the example of the present invention using α-rays on Cu-. FIG. ! This is a diffraction spectrum of s bottom surface reflection.
Claims (3)
ケイ素のみから成るスチブンサイト型フィロケイ酸マグ
ネシウムナトリウムであって、エチレングリコール処理
した状態で面間隔16乃至26ÅにX線回折ピークを有
する合成スチブンサイトが水にコロイド状分散している
ことを特徴とするゲル状人工培地。(1) Synthetic stevensite-type sodium phyllosilicate whose metal components are essentially only magnesium, sodium, and silicon, and which has an X-ray diffraction peak in the interplanar spacing of 16 to 26 Å when treated with ethylene glycol, is colloided in water. A gel-like artificial medium characterized by dispersion.
a_YSi_4O_1_0(OH)_2・Na_Z式中
、XとYは、X+Y<3という条件下で、Xは2以上の
数であり、Yは0乃至0.1の数であり、 Zは0より大で1.0までの数である、 で表わされる化学組成を有するものである請求項1記載
のゲル状人工培地。(2) The synthetic stevensite is substantially of the following formula Mg_XN
a_YSi_4O_1_0(OH)_2・Na_Z In the formula, X and Y are a number of 2 or more, Y is a number of 0 to 0.1, and Z is larger than 0, under the condition that X+Y<3. The gel-like artificial medium according to claim 1, which has a chemical composition represented by the following, which is a number up to 1.0.
い、600回転/分で10秒間回転させ、回転を止めて
10秒間放置後、3回転/分の回転をさせて測定される
剪断応力 (lb/100ft^2) で定義されるゲル応力が、5以上のものである請求項1
記載のゲル状人工培地。(3) Synthetic stibunsite was measured using the following method, using a fan VG rotational viscometer at a solid content concentration of 4% by weight, rotating at 600 rpm for 10 seconds, stopping the rotation and leaving it for 10 seconds, then 3 rotations/min. Claim 1, wherein the gel stress defined by the shear stress (lb/100ft^2) measured by rotating the gel is 5 or more.
The described gel-like artificial medium.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17822988A JPH0227981A (en) | 1988-07-19 | 1988-07-19 | Gel-like artificial medium |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17822988A JPH0227981A (en) | 1988-07-19 | 1988-07-19 | Gel-like artificial medium |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0227981A true JPH0227981A (en) | 1990-01-30 |
Family
ID=16044851
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP17822988A Pending JPH0227981A (en) | 1988-07-19 | 1988-07-19 | Gel-like artificial medium |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0227981A (en) |
-
1988
- 1988-07-19 JP JP17822988A patent/JPH0227981A/en active Pending
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