JPH0217200A - デス―１７―ヒスチジンカルシトニン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は生物学的活性をもつカルシトニンおよび生物学
に活性なカルシトニンに転化しうるペプチドに関し、ま
たこのようなペプチド及びカルシトニン類似体を製造す
る方法に関する。

〔従来の技術〕

周知の天然カルシトニン・ペプチドのすべては３２個の
アミノ酸から成るアミノ酸系列を含む。天然のカルシ＋
−二ンはサーモン、イール（うなぎ）、牛、豚、羊、ラ
ットおよびヒトに含まれるカルシトニンを包含する。た
とえばす−モン（さけ）のカルシトニンは次の構造式を
もつ。

Ｅ−Ｃｙｓ−５ｅｔ−Ａｓｓ−Ｌａｗ−５ａｙ−Ｔｈデ
ーＣ１ａ−Ｖａｌ−Ｌａｓ−Ｇｌｙ−Ｌｙｅ−Ｌｍｓ−
５ｅｔ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌａｓ−Ｈｉａ−Ｌｙｍ−Ｌ
ｅ１１１−Ｇｉｎ−Ｔｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−
Ｔｈｒ−Ａｓｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−５ａｔ−ＧＬｙ−Ｔ
ｈｒ−Ｐｒａ−ＮＥＴ本国特許４３，９２６，９３８．
４，０６２，８１５．３．９２へ７５８．４，０３３，
９４０．４，３３６，１８７．４，４０１゜５９３．４
，５２８．１３２には上記のサーモン・カルシトニンを
包含するカルシトニン類の改良合成法が記載されている
。

〔発明が解決しようとする昧題とそのための手段〕我々
は周知のカルシトニン類と同じ生物学的活性をもつ３１
個のアミノ酸系列の上記天然カルシトニン・ペプチドの
類縁体を発見した。この類縁体の構造上の主要な相違点
は、我々の新規なペプチドにおいて、１７位のヒスチジ
ンがそのシーケンスから省略されていることにある。こ
れらの新規なペプチドはペプチド類の合成変性体のＩ　
Ｕ　Ｐ　Ａ　Ｃ−ＩＵＰ砧名法（Ｂｉｏｃｈｍｍ、　Ｊ
、、　（１９８４）　２１９．３４５．３７７〕？：使
用して、デス−１７−ヒスチシンーカルシトニンと称さ
れる。

この新規なペプチドは公知のカルシトニンに比しより高
い力価と品質を有する。この新規なペプチドはカルシト
ニンの形成に通常要求される順序でアミンｒＩｔを加え
、１７位からヒスチジンを省略することによってデス−
１７−ヒスチシンーカルシトニンをつ（ることにより製
造される。

公知のサーモン力ルシトニンと同じタイプの茫性なもつ
本発明の新規デス−１７−ヒスチシンーサーモンカルシ
トニンは次式で示されうる： Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａ
ｓ９Ｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−５ａｔ−Ｇｌｙ−Ｔｋｒ−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ。

本発明の新規なデス−１７−ヒスチシンーイール（うな
ぎ）カルシトニンは次式で示されうる：モニカワ等はＥ
ｚｐａｒｉｍｓＬｉα、３２（９）、１１０４−１１０
６（１９７６）で合成イールカルシトニンは約４３００
１Ｕ／■の低カルシウム力価をもつが合成類縁体の（ｌ
、７−アルファーム−アミノ−スペリン酸）イールカル
シトニンは約３００ＩＵ／■の低カルシウム力価しかも
たないことを示している。

それ故、本発明はまたサーモン、イール及びチキンカル
シトニンの３０−アミノ酸類縁体（第１及び第４７のシ
スティ／がα−Ｌ−アミノースペリン酸で置換され、ヒ
スチジン−１６がシーケンスから省略されている）を包
含する。

上式から明らかなように、３１−アミノ酸がこの式に包
含され、これらのアミノ酸の位置は前述の命名法により
鎖の一端にあるＣｙａ　の位置１で始まり鎖の他端のｐ
ｒｏの位Ｍ３１で終るように番号が付けられている。記
述を簡明にするために、この番号付けを合成サイクルの
８ピ述の際に使用−ｊろ。アミノ酸の組立はスレオニン
のカップリングを含むサイクル３１で始まる。

一般１ζ、我々は合成の固相方法論を使用し、ベンズヒ
ドリルアミン樹脂（ＢｌｉＡ樹脂）と呼ばれる樹脂を使
用して出発する。この種の樹脂は周知であり、その製造
はＰｉａｔｔａら［Ｐｉａｔｔａ、　Ｐ、Ｓ、　ａｎｄ
　Ｍａｒａｈａｌｌ　、　Ｇ、Ｒ，。

Ｃｋａｍ、（、ｏｍｍｕｓｓ、、６５０（１９７０））
、およびオルロウスキーら（／、Ｏｒｇ、（：’Ａｇｍ
、、４１．３７０１（１９７６））。Ｋよって記述され
ている。交差結合ポリスチレンＢＢＡ樹脂は化学薬品店
から入手しうる。我々はこのＢｌｉ　Ａａ１脂を表現す
るために次の表示を使用する。

〔式中ののはこの樹脂のポリスプレン部分である。〕〔
樹脂ペプチド合成〕 この合成において、アミノ酸類は全ペプチド系列が樹脂
上く形成されるまで不溶性樹脂に１度に１個づつ加える
。

アミノ酸の官能基はブロッキング基によって保護する。

アミノ酸のα−アミノ基は第３級ブチロキシカーボニル
基またはその均等物によって保護する。このα−第３級
ブチロキシカーボニル基をＢ　（Ｊ　Ｃ’と呼ぶ。セリ
ンおよびスレオニンのヒドロキシ官能基はベンジル基ま
たはベンジル誘導体基（たとえば４−メトキシベンジル
、４−メチルベンジル、３．４−ジｉｆルヘ／シル、４
−クロロベンジル、２．６−ジクロロベンジル、４−ニ
トロベンジル、ベンズヒドリルまたはそれらの均等物）
によって保護する。このベンジル基またはベンジル誘導
体基を表わすためにＢｔなる語を用いる。

チロシンのヒドロキシル官能基は非保護であってもよく
、あるいは上述のＢｆ４のようなベンジル基またはベン
ジル誘導体基で保護してもよ（、あるいはベンジロキシ
カーボニルまたはベンジロキシカーボニル誘導体（たと
えば２−クロロベンジロキシカーボニルマタは２−ブロ
モベンジロキシカーボニル、あるいはそれらの均等物）
で保護してもよい。非保護基、Ｂ１基、ベンジロキシカ
ーボニル基、マたはベンジロキシカーボニル誘導体基の
いづれがを表すためにＩＦなる飴を用いる。

システィンのチオール官能基は上記のベンジル基または
ベンジル誘褥体保鏝基Ｂｚによって又は爲−アルキルチ
オ基（たとえはメチルチオ、エチルチオ、外−プロピル
チオ、邦−ブチルチオまたはそれらの均等物）によって
保護することができる。我々は３−アルキルチオＭｉ、
またはＢｆを表わすために文字Ｒ８を使用し、Ｒ２力ｉ
−フルキルチオであるときのＢｔを表わすために及びＲ
１がＢｔであるときの外−アルキルチオを表わすために
文字Ｒ１を使用する。

アルギニンのグアニジン負託基はニトロ基、トシル基−
またを工それらの均等物によって保護することができる
。我々はニトロ基オたはトシル基のいづれかを表わすた
めに文字Ｔを使用する。リジンのイプシロン−アミノ官
能基はベンジロキシカーボニル基またはベンジロキシカ
ーボニル誘導体４体基（たとえば２−クロロベンジロキ
シカーボニル、３，４−ジメチルベンジロキシカーボニ
ル筐たはそれらの均等物）によって保護することができ
る。我々はベンジロキシカーボニル基またはベンジロキ
シカーボニル誘導体基を表わすために文字Ｖを使用する
。ヒスチジ／のイミダゾール１４１ｆ。

に使用する保護基はヒスチジンについて上述したような
ベンジロキシカーボニル基およびベンジロキシカーボニ
ル誘導体基であつ、同様に〆と呼ぶ。グルタミン酸のガ
ンマ−カルボン酸基はセリンおよびスレオニンのヒドロ
キシ官能基の保護について前述したようなベンジルまた
はペンジル基またはベンジル調導体基によって保護され
、これらの保護基は文字Ｂｚによって表わされる。

サーモン・カルシトニン（例示のためにのみ使用）の合
成の３１サイクルのそれぞれに使用するための好ましい
アミノ酸反応試剤を次の表■に示す。

衣　　！ ＢＯＣ−オメガ−ニトロ−Ｌ−アルギニン又はＢＵＣ−
オメガ−トシル−Ｌ−アルギニンＢＯＣ−Ｌ−プロリン Ｂ　ＯＣ−（１）　−ブロモベンジロキシカーボニル−
Ｌ−チロシン Ｂ　ＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−スレオニンＢＯＣ−Ｌ−
グルタミン　ｐ−ニトロフェニルエステル ＢＵＣ−Ｌ−ロイシン ＢＵ（、’−Ｌ−プロリン Ｂｏｃ−ｏ−ベンジル−Ｌ−スレオニンＢＯＣ−グリシ
ン ＢＵＣ−（Ｊ−ベンジル−Ｌ−セリン ＨＵＣ−グリシン ＢＵＣ−０−ベンジル−Ｌ−スレオニンＢＯＣ−Ｌ−ア
スパラギン　ｐ−ニトロフェニルエステル ＨＵ　Ｃ−Ｕ−ベンジル−Ｌ−スレオニンロキシカーボ
ニルーＬ−リジン ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン ＢＯＣ−Ｌ−グルタミン酸−カンマ−ベンジルエステル ＢＯＣ−Ｌ−ｆルタミン　ｐ−二トロベンジルエステル ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン ロキシカーボニルーＬーリジン ＢＯＣ−グリシン Ｈ　Ｏ　Ｃ−　Ｌ−ロイシン ＩＪＯＣ−Ｌ−バリン ＢＯＣ−グリシン システィン ＢＵＣ−０−ベンジル−Ｌ−スレオニンＢυＣ−Ｏ−ベ
ンジル−Ｌ−セリン ＢＵＣ−Ｌ−ロイシン ＢＯ（、’−Ｌ−アスパラギン　ｐ−ニトロフェニルエ
ステル ＢＵＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン ンジルーＬーシスティンｙはＢｉｂ−ＢＵＣ−Ｌ−シス
ティン サイクル３１ ＢＥＡ樹脂へのプロリンの結合 樹脂ペプチド合成のすべての工程に使用する反応槽は頂
部に物質添加用の入口を備え、底部に可溶性反応混合物
と洗浄Ｍ媒を濾過によって除去するだめのガラス円板７
備えたガラス槽であり５る。濾過はＡ空または窒素圧の
使用によって行なうことができる。反応槽内容物は格全
体を伽盪することによって又は機械的攪拌によってかき
まぜることができろ。

サイクル３１において、１３１１Ａ樹脂を反応槽に入れ
、溶媒（たとえばメチレンクロライド、クロロホルム、
ジ，メチルホルムアミド、ベンゼン、またはそれらの均
等物）中に樹脂１当り溶媒３〜１２ゴの割合で恐陶させ
る。これにＢ　Ｏ　Ｃ−　Ｌ−プロリンを使用するＢＩ
ＩＡ倒脂の遊離アミン当轍当り約１〜６当世の蛍で加え
る。５〜１０分間混合した後、カップリング剤たとえば
ジシクロへキシル力ルポジイミド（ＤＣＣ）を加える。

他のジイミド・カップリング剤を使用することもできる
。ジイミド・カップリング剤は使用するＢＵＣ−Ｌ−プ
ロリン当量当り０．５〜２．０等量で使用することがで
きる。

ＨＵＣ−Ｌ−プロリンはその活性エステル誘導体、その
アジド誘導体、その対称無水物誘導体、または適当にえ
らばれた混合無水物誘導体を使用する場合にはカップリ
ング剤の不存在下で結合させることができる。使用しう
る活性エステル誘４体に−１２−ニトロフェニル・エス
テル、４−二トロフェニル・エステル、ペンタフルオロ
フェニル修エステル、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド・エ
ステルまたはその均等物である。活性エステルはＢ１１
Ａ倒脂の遊離アミン当鴛当り１〜１０当蓋の童で使用さ
れる。

ＢＩＩＡ樹脂、溶媒、ＢＯＣ−Ｌ−リジン、およびカッ
プリング剤せたはＢＣ）Ｃ−Ｌ−プａリン活性エステル
から成る反応混合物を、試験試料についてのニンヒドリ
ン試験（Ｅ、Ｋａｉｓｅｒ、ａｔ　　ａｌ　、、Ａｎａ
（、Ｅｓｏｃ五ａ倶＊Ｈ３４ｐ５９５−８（１９７０）
）によって示されるように反応が完了するまで、伎械的
に撹拌もしくは振盪する。カップリング反応の完了後、
ＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂を溶媒（たとえばメチレンク
ロライド、クロロホルム、メチルアルコール、ベンゼン
、ジメチルホルムアミド、ｆた）ま酢酸ンで洗浄するこ
とができる。洗浄溶媒は最初に使用した１３ＨＡ樹脂２
当ｐ５〜２０Ｉｎｔ溶媒が好適である。完了前にカップ
リング反応を終結させろことを望むならば、洗浄法を使
用することができ、セしてＩＪＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂
上の残存遊離アミノ基（工過剰のアセチル化剤を用いる
アセチル化によって更に反応が進むのを阻止すること力
Ｓできる。このアセチル化法はＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹
脂をアセチル化剤済液と共に０．５〜１２時間かきまぜ
ることによって行なうことができる。メチレンクロライ
ド溶液中のＮ−アセチルイミダゾール、またはクロロホ
ルム中の無水酢酸とトリエチルアミ／との混合物、のよ
５なアセチル化剤を使用することができる。アセチル化
剤は出発１１１１Ａ＜＠脂の遊離アミン当量当り０．５
〜５．０当量の量で使用することができる。

ＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂を製造するためのカップリン
グ反応は次の反応式によって表わすことができる。

上記のようにして製造したＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂は
上述のような溶媒で洗浄し、そしてこれを溶媒（たとえ
ばメチレンクロライド、クロロホルム、ベンゼンまたは
その均等物）中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の混合物
のような試剤と共にかきまぜることによって保護基を除
去することができる。溶媒中のＴＦＡの蛍は始めに使用
したＢＨＡ樹脂２当り３〜２０Ｉｎｔの範囲で変えるこ
とができる。反応時間は約ｌＯ分〜４時間の範囲であシ
うる。保護基除去工程はい過し″ＩＴＦＡ溶媒を除去す
ることによって終了する。

残存ＴＦＡはＢＨＡ樹脂？当り３〜２０Ｒｔの５〜３０
チドリエテルアミン溶液（メチレンクロライド、クロロ
ホルム、ベンゼン、またはそれらの均等物のよ５な溶媒
中）で洗浄することによってＬ−プロリン樹脂から除去
することができる。トリエチルアミンの代りに他の第３
級または第２級有機アミン（たとえばトリメチルアミン
、Ｎ−エチルピペリジン、ジイソプロピルアミン、また
はそれらの均等物〕を使用することもできろ。Ｌ−プロ
リン樹脂の遊離アミン墓はＤＯｒｍＣＬｎ　　滴定法に
よって測定することができるよって示される反応の完了
後に［Ｅ、Ｋａｉａｅｒ＊ｇｔ　ａｌ、。

［ＤｏｒｔｎｃＬ＠、Ｌ−Ｃ，、Ｔｅｔｒａｈａｄｒｏ
ｎ　　Ｌｍｔｔｅｒｍ、１９６９゜２３１９−２１：］
。上記の保護基除去反応は次の反応式によって表わすこ
とができる。

サイクル３０ サイクル３１の結果として見られたプロリル−ＢＨＡ樹
脂はカップリング溶媒に懸濁させ、ＢＯＣ−０−Ｂｔ−
Ｌ−スレオニンを加え、そして混合物を同様に平衡させ
ることができる。カップリング剤ＤＣＣを加え、イサチ
ン試験に反応温合物をＥ過によってＢＯＣ−０−Ｂｚ−
スレオニルプロリルＢＨＡ樹脂から除去することができ
ろ。ペプチド樹脂を溶媒で洗浄する。反応試剤の量、溶
媒の量、および反応時間はサイクル３１において述べた
のと同じでちってよい。ＢＯＣ基はサイクル３１におい
て述べた保護基除去法によってペプチド樹脂から除去す
ることができる。生成する０−Ｂｇ−スレオニルプロリ
ル−ＢＩＩＡ樹脂は次いでサイクル２９に供せられる。

サイクル３０の反応は矢の反応式によって表わすことが
できる。

Ｅｚ サイクル２９ サイクル２９において、カップリング反応も保護基除去
反応もサイクル３０と同様に行なわれるが、ＢＯＣ−０
−Ｉｈ−Ｌ−スレオニンの代りにＢＯＣ−グリシンが使
用される。カップリングおよび保護基除去の反応は次の
ように表わされる。

０Ｂ雰 重 便宜上、この生成樹脂ペプチドを略号を使用して次のよ
うに記述する。

ＴＡｒ　−Ｐｒｏ−ＮＢＣＨ−の サイクル２８ サイクル２８において、カップリングと保護基除去の反
応はサイクル３０と同様に行なわれるが、アミノ酸誘導
体と１．てＢＯＣ−０”Ｂｚ−Ｌ−セリンが使用される
。これに次のように表わされる。

このサイクルにおいて、同じアミノ酸試剤を使用してサ
イクル３０と同様にカップリングおよび保ｊ基除去の反
応が行なわれ、次の化合物かえられる。

サイクル２７ サイクル２７において、カップリングと保護基除去の反
応はサイクル３０と同様に行なわれるが、アミノ酸試剤
としてＢＯＣ−グリシンが使用されろ。これらのカップ
リングと保、ｉや基除去の反応は次のように表わされる
。

サイクル２６ サイクル２５ サイクル２５において、カップリング反応はＢＯＣ−Ｌ
−アスパラギンの活性エステル誘導体を使用して行なう
。

ＤＤＣカップリング剤の代りにＢＯＣ−Ｌ−アスパラギ
ンまたはＢＯＣ−Ｌ−グルタミンを用いる活性エステル
法を使用する。ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギ／の活性エステ
ルを使用する反応はＢＨＡ＠脂の遊離アミン当量当９２
〜１０当鍵の針で、始めに使用したＢｌｆＡ樹脂Ｖ当ｖ
２〜２０１ｎｔの童の溶媒（ジメチルホルムアミド；ジ
メチルホルムアミドとベンゼン、メチレンクロライド、
クロロホルムまたはそれらの均等物との混合物）中で行
な５ことができる。

反応時間は１〜７２時間の範囲にある。反応混合物はニ
ンヒドリン試験によって示される反応完了後Ｋ濾過によ
ってＢＯＣペプチド（耐層から除去することができる。

使用１−るｒｌエステル誘導体は２−ニトロフェニルエ
ステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロ
フェニルエステル、またはそれらの均等物でありうる。

我々は誘導体の活性エステル部分を示すためにＡＥを使
用する。カップリング反応は次のように記述することが
できる。

サイクル２４〜２１ サイク／ｌ／２４〜２６のそれぞれにおいて、カップリ
ング反応および保護基除去反応はＢＯＣ−０−Ｂ、−Ｌ
−スレオニン（サイクル２４）、ＢＯＣ−オメガ−Ｔ−
Ｌ−アルギニン（サイクル２３）、ＢＯＣ−Ｌ−プロリ
ン（サイクル２３）、ＢＯＣ−ＩＶ−Ｌ−ｆａ’／７（
”ｊイクに２１　）おＪ。

びＢＯＣ−０−１ｈ−Ｌ−スレオニン（サイクル２１）
を使用して、サイクル３０に述べたような方法と反応試
剤割合を用いて行なうことができる。サイクル２１の完
了かうえられる化合物は次のように表わされる。

ＢＯＣ基を除去するための保護基除去反応はサイクル３
１のようにして行なう。

サイクル２０ サイクル２０におい℃、カップリング反応および保護基
除去反応はＢ　ＯＣ−０−１ｈ−Ｌ−スレオニンをアミ
ノ酸誘導体として使用し、サイクル２５に述べた方法と
反応試剤割合を使用して行なうことができ、次の化合物
がえられる。

サイクル１９ サイクル１９において、ＢＯＣ−Ｌ−グルタミン活性エ
ステルをアミノ酸誘導体として使用し、サイクル２５に
述べ１こようにして反応を行なう。サイクル１９かもえ
られる化合物を１次のとおりである。

サイク／Ｉ／１８ サイクル１８において、ＢＯＣ’−Ｌ−ロイシンをアミ
ノ酸誘導体として使用して、サイクル３０で述べたよ５
１’１て行なうことができろ。次の化合物かえられる。

サイクル１７ サイクル１７ではＢＯＣ−イプシロン−Ｖ−Ｌ−１，１
シンをアミノ叡誘導体として用いる。またサイクル１７
はサイクル３０と同様に行なうことができ、次の化合物
がえられる。

サイクル１５かも１６への反応は、サイクル１６におけ
全反応剤としてＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを使用し、サイク
ルエ５の反応剤としてＢＯ（、’−Ｌ−グルタミン酸Ｂ
ｔエステル（Ｂｔはセリン、スレオニンにおけると同じ
基を示す）を使用する以外はサイクル３０と同様にして
行なわれ、サイクル１５かも次の化合物かえられる：サ
イクル１４〜８ −９−イクル１４はＢＯＣ−Ｌ−グルタミン酸をアミノ
酸誘導体として使用し、サイクル１９と同様にして行な
５ことができる。サイクル１３〜８はＢＯＣ−０−Ｂｔ
−Ｌ−セリン（サイクルｘ３）、ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン
（サイクル１２）、ＢＯＣ−イプシロン−Ｖ−Ｌ−リジ
ン（サイクル１１）、１１０　Ｃ−グリシン（サイクル
１０）、ＨＯＣ−Ｌ−ロイシン（サイクル９）、および
Ｂ　（Ｊ　Ｃ−Ｌ−バリン（サイクル８）を使用し、サ
イクル３０で述べたようにして行なうことができる。次
の化合物がえられる。

サイクル７ サイクル７はＢＯＣ−５−エチルチオ−Ｌ−システィン
ｆたはその均等物をアミノ酸誘導体として使用する以外
はサイクル３０で述べたようにして行なうことができる
。サイクル７かうえられる化合物は次式によって表わさ
れる。

２）、およびＥＯＣ−Ｌ−ｏイ７ン（？イクｒｖ４）　
を７　ミノ酸誘導体として使用し、サイクル３０のよう
にして行なうことができる。サイクル３はＢＯＣ−Ｌ−
アスパラギン活性エステルを使用してサイクル２５と同
保に行なプことができる。サイクル２かもえられる化合
物は次のとおりである。

ＣＲｔはアルキルチオまたをよりｚ基である。〕サイク
ル６〜２ サイクル６かも１２はＢＯＣ−０−１に一スレオニン（
サイクル６）、Ｂ　ＯＣ−０−１ｈ−Ｌ−セリン（サイ
クル５とサイクルｌ このサイクルはＥＯＣ−５−Ｒ，−Ｌ−システィン誘導
体を使用してサイクル７と同様に行なわれる。このシス
ティンのためにえらばれるＲ１基はサイクル７で使用し
たものと同じであってもよ（、あるいは異なっていても
よい。たとえば、サイクル７についてえらばれた誘導体
がＢＯＣ−。

Ｓ−エチルチオ−Ｌ−７ステインでおるならば、サイク
ル１の誘導体をより０Ｃ−５−４−メトキシベンジル−
Ｌ−システィンであってもよく、あるいはＢＯＣ−５−
４−メトキシベンジルがサイクル７にえもばれたならば
、この誘導体またはＢＯＣ−５−エチルチオ−Ｌ−シス
ティンをサイクルｌに使用してもよい。サイクル１かう
えられろ化合物は次式によって表わされる。

（Ｒ，はＳ−ｎ−アルキル、ｃｙ、またはＢｇであり；
Ｒ２は５−ｎ−アルキルまたはＢｚであるが、Ｒ２がＢ
ｇであるときＲ２をま５−ｎ−アルキルまたはＣｙ　ａ
であり；Ｒ２が５−ｎ−アルキルであるとぎＲ，はＢｇ
である。〕サイクルｌは樹脂ペプチドの完成を表わす。

このす（脂ペプチドは反応槽から取出して真空中で乾燥
することができる。樹脂ペプチドの重量は合成の始めに
使用したＢＥＡａ１脂の２．０〜３．５倍であると予期
される。

樹脂ペプチドの開裂 ペプチドは液体弗化水素（ＨＦ）による処理によって、
アシル化サイクルからえらばれる樹脂ペプチドから開裂
される。このＨＦ開裂反応は樹脂ペプチドとアニソール
（樹脂ペプチド２当９０．５〜５ｙ＋ｚ）との混合物を
（（ｌ（脂ペブチドノ当り２〜２０Ｗｌｔの液体１１Ｆ
で）０．５〜２０時間−２０℃〜＋１５℃のｈｙで処理
することによって行なわれる。

反応期間の後に、過剰のＲＦを蒸発によつ℃除き、生成
するペプチドと樹脂ビーズとの混合物を有機溶媒（たと
えばエチルアセテート、ジエチルエーテル、ぺ／ゼンな
と）で抽出してアニソールと残ＴｊＭＦを除くことがで
きる。ペプチドは抽出によって樹脂ビーズから水性酢酸
中に分離することができる。このｊ２１．Ｓでのペプチ
ドはｈｌ状ではな（、分子中の位ｅｌのシスティンと位
置７のシスティンとの間にジサルファイド結合のない非
環状生成物の状態にある。

ＢＰ処理を工、位ｔｌまたは位置７のシスティン残基の
チオール官能基上の５−アルキルチオ保ａ基を除いて、
すべての保ａ基をペプチドから除去する。５−ｎ−アル
キルチオ−Ｌ−システィン残基はＩＩＦ開裂法に対して
安定であり、開裂および抽出の操作を通してそのまま残
る。５−Ｂｔ−Ｌ−７ステイン残基はＩＩＦによって開
裂して遊離チオール官能基をもつシスティン残基な生ず
る。我々の合成過程において、位置１および位１１１７
において両種の保護基を相互に組合せ℃使用した。

このようにして、ＨＦ開裂後にえもれるペプチドは樹脂
ペプチド合成中に使用したシスティン誘導体のチオール
官能基としてえらんだ保護基に応じて４種のうちのＩｎ
でありうる。

ＢＯＣ−５−１ｈ−Ｌ−システィン誘導体を樹脂ペプチ
ド合成のサイクル１に使用し、ＢＯＣ−５−ｎ−アルキ
ルチオ−Ｌ−システィンをサイクル７に使用する場合、
ＨＦ開裂後に足られるペプチドは型ｒであり、位置Ｉに
おいて遊離のチオール官能基をもち、位Ｒ７においてシ
スティン残基上に５−ｎ−アルキルチオ基をもつ。我々
はこの種のペプチドな型１のペプチドと呼ぶ。このもの
は次式によって表わされる。

５−ｎ−アルキル Ｃｙｓ−５ａｒ−Ａａｎ−Ｌｍｓ−５ａｙ−Ｔんｒ−Ｃ
ｙａ−Ｖａｌ−Ｌａｓ−ＧＥｙ−Ｌｙｅ−Ｌａｓ−５Ｈ
−Ｇｉｎ−Ｇｌｓ−Ｌｍｓ−Ｌｙｅ−Ｌａｓ　−Ｇｉｎ
−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａａｎ−
Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−５ａｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｎ
ｉｌ。

逆に、ＢＯＣ−５−ｎ−アルキルチオ−Ｌ−システィン
誘導体がサイクル１に使用され、ＨＯＣ−５−１３ｔ−
Ｌ−システィンが位置７に使用されると、開裂から生じ
るペプチドは型…であって次式によって表わされる。

Ｇｉｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａ
ａｎ−Ｔｈｅ−Ｇｌｙ−５ａｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｎｌｌ。

位置１において保護基５−ｎ−アルキルの代りにＳ−シ
ステイニル基を使用することができる（この場合、この
位置のシスティンをニジスティン基を形成する）。これ
を行なうとき我々を工位置７のシスティンを保訛するた
めにＢｔ基を使用する。Ｂｉｇ−ＢＯＣ−Ｌ−システィ
ンをサイクル１の試剤として使用し、ＢＯＣ−５−Ｂｚ
−Ｌ−システィンをサイクル７の試剤として使用するな
らば、開裂から生ずるペプチドは型■のものであり、次
式によって表わされる。

Ｃｙａ Ｃｙａ−５ａｙ−Ａａｎ−Ｌｍｓ−５ａｙ−Ｔｈｅ−Ｃ
ｙａ−Ｖａｌ−Ｌｇｓ−ＧＬｙ−Ｌｙｅ−Ｌａｓ−さ−
ｒ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌａｗ−Ｌｙｅ−Ｌｇ％−Ｇｉｎ
−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−
Ｔｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｌｙｅ−Ｌｍｓ−Ｓａｒ−
Ｇｉｎ−ＧＥｓ−Ｌｍｓ−Ｌｙｅ−Ｌｅｓ　−５ａｒ−
Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＨＥ。

ＢＯＣ−５−１ｈ−Ｌ−システィンを位ｆｌと位置７の
双方の試剤として使用すると、開裂から生じるペプチド
は型■のものであり、次式によって表わされる。

Ｃｙｚ−５ｕｒ−Ａａｎ−Ｌａｓ−５°ｇｒ−Ｔｈｒ−
Ｃｙａ−Ｖａｌ−Ｌａｓ−ＧＬｙ−Ｌｙａ−Ｌｍｍ−５
ａｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｓ−Ｌｍｓ−Ｌｙａ−Ｌｅｓ−Ｇｌ
ｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｘｎ
−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ　
−ＮＨ２型！、ｎおよび■のペプチドから環状ジサルフ
ァイド・ペプチドへの変換は、ＨＦ開裂からの粗ペプチ
ドの酢酸水溶液を蒸留水で、開裂した樹脂ペプチド１当
９５０〜２００ｍ１の最終容置にまで希釈することによ
って行なわれろ。この溶成のｐＢは水酸化アンモニウム
溶液の添加１ｃより５〜ｌＯに調節することができ、そ
して混合物は不活性ガス（たとえば窒素）の流れのもと
て約２〜４８時間密閉容器中で撹拌することができる。

流出ガス流がもはやｎ−アルキルメルカプタンを含まな
くなったとき反応を停止させることができる。反応混合
物のμｓ′は氷酢酸の添加によって約３．５〜５．５に
低下させることができる。

型ＩＶのペプチドから環状ジサルファイド・ペプチドへ
の変換は、当業技術にとって周知の古典的方法によって
行なわれ、そこではペプチドが酸化されて位［１および
位置７においてシスナインを含むように環化される。

中間体ペプチドが型【、バ、１［［または■のいづれで
あっても、周知の任慧のカルシトニンに対応するアミノ
酸の鎖をもつペプチドを合成することができる。ここに
述べたようにして合成されたこのようなペプチドは精製
することができ、そして周知のカルシトニンと同じ種類
の生物学的活性をもつことがわかった。このように合成
されたカルシトニンはデス−１７−ヒスチシンーカルシ
トニント呼ばれる。

これはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ命名法に準拠している。

粗デスー１７−ヒステジンーサーモンΦカルシトニンの
精製 上記の合成からのｐＨ５の粗ペプチド溶液はイオン交換
法を使用して濃縮することができる。濃縮物はゲル濾過
法、イオン交換クロマトグラフ法、および分配クロマト
グラフ法の組合せによってｆ＃製することができる。最
終の精製物は溶液からの凍結乾燥によって「ふわふわし
た」白色固体として見られる。生成物は所望のペプチド
の正しいアミノ酸分析値を与える。

〔実施例〕

下記の実施例によって本発明を更に具体的に説明する。

実施例１゜ 樹脂活性化 ０．６１溝−ｑ／？のアミン滴定量？もりＢＨＡＭＢ脂
（５ｙ）をペプチド合成器〔米国アリシナ州タクソンの
ベガ・バイオケミカルスかも市販〕に入れた。樹脂を次
の溶媒（各２５１）で処理し、それぞれの処理後に濾過
した。

メチレンクロライド　　　　　　　　２分間クロロホル
ム　　　　　　　　　　　２分間ツつ２回りロロホルム
中１０チドリエチル　　５分間づつ２回アミン クロロホルム ２分間 メチレンクロライド　　　　　　　　２分間づつ３回サ
イクル３１ カップリング二　上記のＥＲＡ＠脂、２５Ｎのメチレン
クロライド、および１．３ｘＰ（ｏ、ｏｏ６ｔモル）の
ＢＯＣ−Ｌ−−ｆロリンを１０分間かぎまぜた。ジシク
ロへキシルカルボジイミドのメチレンクロライド溶液６
．１　ｔｎｔ　（Ｈ液１ｊｌｔ当りＤＣＣ１ミリ当りを
反応器に加え、混合物を６時間かきまぜた。反応混合物
を濾過によって反応器から除き、ＢＯＣ−プロリルＢＨ
Ａ樹脂を濾過によって反応器から除き、次の溶ｇＸ（各
２５紅）で次々に２分間づつ処理した。

メチレンクロライド　　　　　　　２回メチルアルコー
ル　　　　　　　　２回メチレンクロライド　　　　　
　　３回アセチル化：　次いでこの樹脂を１，５ｍｌの
トリエチルアミン（ＴＥＡ）、ＩＲＩの無水酢酸、およ
び２５Ｒｔのクロロホルムから成る混合物と２時間かき
まぜた。この反応混合物を濾過により除き、樹脂を次の
溶媒（各２５′ｌ１ｔ）で２分間づつ洗った。

クロロホルム　　　　　　　　　　２回メチルアルコー
ル　　　　　　　　２回メチレンクロライド　　　　　
　　３回保護基除去：　　ＥＯＣ保護樹脂を１５１Ｌｔ
のトリフルオロ酸９（ＴＦＡ）と１５ｍ１のメチレンク
ロライドとの混合物と５分間かきまぜた。この混合物’
ｆ濾過によって除き、樹脂を１５紅のＴＦＡと１５１ｎ
ｌのメチレンクロライドとの第２混合物と３０分間かき
まぜた。反応混合物を０５過によつ℃除き、樹脂を次の
溶媒（各２５ａ）で洗浄した。

メチレンクロライド　　　　　　　　２分間づつ２回メ
チルアルコール　　　　　　　　　２分間づつ２回クロ
ロホルム　　　　　　　　　　　２分間づつ２回りロロ
ホルム中ｌＯ％ＴＥＡ　　　　１０分間づつ２回クロロ
ホルム　　　　　　　　　　　２分間つつ２回メチレン
クロライド　　　　　　　　２分子ｌＪｊづつ２回この
Ｌ−プロリンＢＩｉＡ便脂を滴定してアミン又はプロリ
ンの滴定ｉを求めた。この値は樹脂ｆ当９０．５５ミリ
当愈のアミン又はプロリンであった。

サイクル３０ カップリング二　上記の樹脂、２５ｊｌｔのメチレンク
ロライド、および１．６４Ｆ（０，００５３モル）のＥ
ＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−スレオニンを１０分間かきま
ぜた。次いでジシクロへキシルカルボジイミドのメチレ
ンクロライド溶液５，５紅（１ミリ当量）を反応器に加
え、混合物を２時間かきまぜた。反応混合物を反応器か
ら除き、樹脂を次の溶媒（各２５１）で久々に２分間つ
つ洗浄し、洗浄液を濾過により除いた。

メチレンクロライド　　　　　　　２回メチルアルコー
ル　　　　　　　　２回メチレンクロライド　　　　　
　　３回イサチン試験は陰性であった。

保護基除去：　サイクル３１に述べた保護基除去操作を
このサイクルについてくりかえした。

これらのサイクルに使用したカップリングおよび保護基
除去の操作はスレオニン誘導体の代りに次のアミノｒＲ
誘導体を使用した以外はサイクル３０と同じであった。

サイクル２９・・・ｏ、９３ｙ（ｏ、ｏｏｓ３モル）の
ＢＱＣ−グリシン サイクル２”８・・・１．５５Ｆ（０，００５３モル）
のＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン サイクル２７・・・サイクル３０で使用した試剤と同じ
サイクル２６・・・サイクル３１で使用した試剤と同じ
サイクル２５ カップリング：　サイクル２６でえたペプチド樹脂を各
２５紅のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で２回代った
。

次いでこの樹脂をＤＭＦ　３５ｆｆｌｌｊ中のＢＯＣ−
Ｌ−アスパラギン−ｐ−ニトロフェニルエステル２．８
２Ｆ（０，００８モル）の溶液と２４時間かきまぜた。

反応混合物を濾過し、樹脂ペプチドを次の溶媒各２５ｒ
ｔで各２回次々に洗浄した：ＤＭＦ、メチレンクロライ
ド、メタノール、メチレンクロライド。それぞれの個々
の溶媒を濾過によって除いた。ニンヒドリン試験は陰性
であった。

保護基除去：　サイクル３１に使用した保護基除去操作
をくりかえした。

サイクル２４ カップリングと保護基除去の操作はサイクル３０で使用
のと同じであり、同じ試剤を同じ量使用した。

サイクル２３ カップリング：　サイクル２４でえた樹脂ペプチドを１
）ＭＰ各２５１ｎｔで２回洗った。欠いで賀脂ペプチド
を３．４２ｙ（ｏ、ｏｏｓモル）のＢＯＣ−Ｎ−オメガ
−トシル−Ｌ−アルギニンと２５１ＬｔのＤＭＦとの混
合物と１０分間かきまぜた。次いでメチレンクロライド
中のＤＣＣｓ＊（ｏ、ｏｏｓモルのＤＣＣに相当）を加
え、混合物を６時間かきまぜた。

反応混合物を濾過によって除いた。使脂ペプチドを次の
溶媒（各２５酊）で２回づつ次々に洗った：　ＤＭＦ、
メチレンクロライド、メチルアルコール、メチレンクロ
ライド。

ニンヒドリン試験は陰性でめった。

保護基除去：　サイクル３１で使用した保護基除去操作
なくりかえした。

サイクル２２ カップリング：　サイクル２３でえたペプチド樹脂を１
．７２Ｐ（ｏ、ｏ　ｏ　ｓモル）のＢＯＣ−Ｌ−プロリ
ンと２５紅のメチレンクロライドとの混合物と１０分間
かきまぜた。

メチレンクロライド中のＤ（、’Ｃ３ｒｎｌ（０，００
８モルのＩ）ＣＣに相当）を加え、混合物を６時間かき
まぜた。反工６混合物を濾過によって除き、樹脂ペプチ
ドを次の溶媒（各２５１）で２回づつ次々に洗った：メ
チレンクロライド、メチルアルコール、メチレンクロラ
イド。それぞれの個々の洗浄液を濾過によって除いた。

ニンヒドリン試験は陰性であった。

保護基除去：　サイクル３１で使用した保護基除去操作
を（りかえした。

サイクル２１および２０ このサイクルで使用したカップリングと保遭基除去の操
作はカンプリング反応においてＢＯＣ−Ｌ−プロリンの
代りに次のアミノｒＲ誘導体を使用した以外はサイクル
２２と同じであった。

サイクル２１・・・４．０７Ｆ（０，００８モル）のＢ
ＯＣ−０−２−ブロモベンジル−オキ７カー ボニルーＬ−チロシン サイクル２０・・・２．４７９　（０，００８モル）の
ＢＯＣ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−スレオニ／ サイクル１９ このサイクルの操作はアスパラギン誘導体の代りに２．
９４Ｆ（０，００８モル）のＢＯＣ−Ｌ−グルタミン−
ｐ−二トロフェニルエステルを使用した以外はサイクル
２５と同じである。

サイクル１８〜工５ これらのサイクルの操作をエスレオニン訪導体の代りに
次のアミノ酸３４体を使用した以外はサイクル３ｏと同
じである。

サイク、ｖ１Ｂ−１，３２１１（０，００５３モル）ｆ
）ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン サイクルエアー２．２０Ｆ　（０，００５３モル）ａ）
ＢＯＣ−イプシロン−２−カルボベンジロキ シ−Ｌ−リジン サイクルｉ　６−１．３２３Ｅ　（０，００５３モル）
ｃＱＢＯｃ−Ｌ−ロイシ／ サイクル１５・・・１．７９Ｆ（０，００５３モル）の
ＢＯＣ−Ｌ−ｆルタミン酸−ガンマ−ベンジ ルエステル サイクル１４ サイクル１９と同じ。

サイクル１３ このサイクルの操作はカップリング反応においてプロリ
ン誘導体の代りに２．３６ノ（０，００８モル）のＢＯ
Ｃ−０−ベンジル−Ｌ−セリンを使用した以外はサイク
ル２２と同じである。

サイクル１２〜９ このサイクルの操作はカップリング反応においてスレオ
ニン誘導体の代りに次のアミノ酸誘導体を使用した以外
はサイクル３０と同じである。

サイクル１２・・・サイクル１９で使用した試剤と同じ
サイクル１１・・・サイクル１７で使用した試剤と同じ
サイクル１０・・・サイクル２９で使用した試剤と同じ
サイクル９・・・サイクル１６で使用した試剤と同じサ
イクル８ カップリング：　サイクル９かもの樹脂ペプチドを１．
７４ノ（ｏ、ｏｏｓモル）のＥＯＣ−Ｌ−バリンおよび
２５ばのメチレンクロライドと１０分間かきまぜた。次
いでメチレンクロライド中のＤＣＣ８ｍｌ（０，００８
モｙのＤＣＣＶＣ相当）を加え、混合物を１６時間かき
まぜた。反応混合物を濾過によって除いた。樹脂ペプチ
ドを次のｍＩｓ＜各２５Ｒｔ）で２回づつ洗った：メチ
ノンクロライド、メチルアルコール、メチレンクロライ
ド。それぞれの個々の洸＃ｇを濾過によって除いた。

保護基除去：　ナイン／Ｉ／３０と同じ。

サイクル７ サイクル７の操作はカップリング反応においてスレオニ
ン誘導体の代りにｘ、５９ｐ（ｏ、ｏｏｓ３モル）のＢ
ＯＣ−５−ｘｆルｆｙＦ−Ｌ−システィンを使用した以
外はサイクル３０と同じであった。

サイクル６ 使用した試剤と操作ヲエサイクル３０と同じであった。

サイクル５ 使用した試剤と操作はサイクル２８と同じであった。

サイクル４ 使用した試剤と操作はサイクル１６と同じでめった。

サイクル３ 使用した試剤と操作はサイクル２５と同じであった。

サイクル２ 使用した試剤と操作はサイクル２８と同じであった。

サイクルｌ スレオニン誘導体の代りに１．５ｘＰ（ｏ、ｏｏｓ３モ
ル）のＢＯＣ−５−ｐ−メトキシベンジル−Ｌ−シスナ
インを使用した以外は使用した試剤と操作をエサイクル
３０と同じであった。

サイクルｌの完了後、樹脂ペプチドを最後に各２５１１
１４のｎ−へキサンで２回洗った。ヘプテド物質を反応
器から除き、真空オーブン中で０．　ｌ　ｒｎＨｇの圧
力、４０℃の一度で２４時間乾燥した。

弗化水素による開裂 乾燥樹脂ペプチド（２））およびアニソール（２１１ｔ
）をテア０ン反応槽に入れた。テフロン被ｏｉ磁石カベ
Ｇ工ん機付きの反応槽をドライアイス・アセト／浴に入
れ、１５ｍＪの弗化水素ガスを反応槽中で縦組させた。

この混合物を水浴中で０℃に１時間かくはんした。弗化
水素を減圧で蒸発させて除いた。残渣な２５ｍ１つつ６
回のエチルアセテートですりつぶした。０．１モル濃度
酢酸水溶液１２０Ｒｔによりペプチドを樹脂ビーズから
抽出した。

ペプチドの環化 弗化水素開裂から見られた水性酢酸抽出物を蒸留水８０
Ｖの添加により２００νに１で希釈した。濃水酸化アン
モニウムの添加によジｇｉのｐＨを７．５に調節した。

この溶液を窒素気流下に密閉容器中でカベを工んした。

この時点で流出窒素気流中にエテルメルカプタンは検出
されなかった。

窒素気流中のエテルメルカプタンは該気流をエルマン試
薬溶液（Ｅｌ　１ｍａｘ、Ｇ、Ｌ、、Ａｒｃｈ　、Ｂｉ
ｏｃｈｇｍ、Ｂｉｏｐｈｙｘ、。

８２．７Ｏ−７（１９６９））に通すことによって測定
した。反応混合物のｐｉＩは氷酢酸の添加により５．０
に調節した。

粗デス−Ｅｉａ”−５ＣＴの精製 上記合成からのｐＺ／　５．０の浴液２００ゴを５Ｐ−
２５イオン交換カラムを使用し″′Ｃ濃縮した。０．７
５モル濃度の塩化ナトリウム溶液を用いてカラムから除
いた２５ｒ！Ｌｔの濃縮物をセファテックスＧ−２５（
微細）ゲル濾過カラムを通すことｒこよって脱塩および
精製し、０．０３モル濃度の酢酸水溶液で溶離させた。

このカラムからのテスーＨｓｌ”−５ＣＴ留分を水酸化
アンモニウム溶液の添加によりｐＢ　６に調節した。こ
の溶液をｌ〆ｈａｔｒｒＬαｎｃＭ−５２カラムを用い
酢酸アンモニウムバッファで溶出するイオン交換クロマ
トグラフィーでさらに精製した。このカラムからのデス
−１１ｉｉ丁−５ＣＴを氷酢酸を加えて餠５，０に調節
した。この溶液をＳＰ−セファデックスＣ−２５イオン
交換カラムを用いて濃縮した。

０．７モル濃度の塩化ナトリウム溶液によりカラムから
除いた３０ＩＩＬｔの濃縮物をセファデックスに−２５
（微Ｍｆｉ）ゲル濾過カラムを用いて脱塩した。ペプチ
ド留分を集め工凍結乾燥した。生成物をＷａｔｅｒｓ　
Ｍｉｃｒｏｂｏｎｄａｐａｋ　ＣＨ＠を充填したｌ０ｃ
ｍカラムを用いる逆相高能率液体クロマトグラフィーを
用いてさらにｖＪ製した。既に平衡にしだカラム（１０
％アセトニトリル、０．１％（マ／マ）トリフルオロ酸
ｌ！２）を平衡バッファからなる蔵勾配でデベロップし
、制限バッファ（６０チアセトニトリル、０．１％（マ
／Ｖ））リフルオロ酢酸）を４０分デベロップし、２ａ
の留分なえた。

主ビーク留分を果め２回凍結乾燥した。回収した生成物
をＣＭ−５２カラム上でのイオン交換クロマドグ２フイ
ーによってＨＣｌ塩にかえ、セファデックスＧ−２５（
微細）カラム上でゲル濾過した。精製したペプチド留分
な集め凍結乾燥した。

生成物を「ふわふわした」白色固体として得た。生成物
のアミノ酸分析はカッコ内に示す埋鍮値に対して次の比
を与えた：Ａａｐ２゜０　（２０）、ｒｈデ　５．２　
（５３、Ｓ＃デ　３．８（４）、Ｇｌ＊　　２．８（３
３、Ｐｒｏ　　　２．０（２）、　Ｇｌｙ　　　３．０
（４Ｊ、　ＶａＬ　　　Ｏ，９（１）、　Ｌａｗ　　　
５．０（５）％　Ｌｙｊ　　１．９（２入　Ａｒｇ　　
　Ｏ，９４（１入　Ｃ，ａｌ、９１（２）、Ｔｙｒ　　
Ｏ，９１（υ。

生体内でのカルシトニン類似体の生物学的分析デス−１
７−ヒステジンーサーモン０カルシトニンの生物学的能
力をデス−Ｅｉ＃Ｉ？−５ＣＴおよび合成サーモン・カ
ルシトニン標準物の等吸付は調剤量の投与後の血清カル
シウム濃度の減少を比較することによって測定した。ラ
ットを７匹づつの４つのグループに分け、それぞれのグ
ループに標準溶液また（工試験溶液の調剤量をランダム
に与えた。

調剤量応答曲線の線状部分から低調剤量および晶調剤量
をえらんだ。サーモンφカルシトニン標準物についテ、
コレらの値はそれぞれ０．７および２．Ｉｎ？ペプチド
／１ｏｏｙｊＦＢテｌ＞−’）り。コｔＬｋ’５ｊｌｔ
ｌ　３オｊヒ９　ＭＵ　／　１００１　ＢＷである。ペ
プチドを皮下注射（０，２１１１ｔ／１００ｊｌ　　Ｂ
Ｗ）によって与え、１時間後に採血し℃血清カルシウム
を測定した。採血後２時間以内に血清を処理し分析した
。結果を２Ｘ２平行線分析［：　Ｇａ　ｄ　ｄ　％ｎ　
＋）、ｌｉ、、Ｊ、Ｐｈａｎｍ。

Ｐｈａｒｎｈａｃｏｌ−ｐ　　６　ｐ　３４５　（１９
５３）　）によって分析した。使用した標準サーモン・
カルシトニンは独立に４．０００１　Ｕ／■より多（を
含むと測定された。デス−１ｊｉａ”　−Ｓ　ＣＴは４
，２５０１Ｕ／〜で分析された。

本発明のおる釉の具体例を詳細に記述したけれども、多
くの他の特定の具体例が実施し５ること、多（の変化が
行ないうろこと、およびこれらのすべてが本発明の精神
および特許請求の範囲内にあることが当業者にとって明
らかであろう。

平成１年τ月３ 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿 １、事件の表示 平成１年特許願第１２８０１４号 ２、発明の名称 デス−１７−ヒスチジン−カルシトニン３、＠正をする
者 事件との関係

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、デス−１７−ヒスチジン−カルシトニンからなる変
   性カルシトニン。 ２、該カルシトニンがサーモンカルシトニン欠失（ｄｅ
   ｌｅ−ｔｉｏｎ）類縁体、イールカルシトニン欠失類縁
   体又はチキンカルシトニン欠失類縁体である請求項１記
   載のカルシトニン。 ３、式 【遺伝子配列があります】 式 【遺伝子配列があります】（イール）又は 式 【遺伝子配列があります】（チキン）なる構造を有する
   請求項１記載のカルシトニン。 ４、式 【遺伝子配列があります】 （サーモン） 式 【遺伝子配列があります】 （イール）又は 式 【遺伝子配列があります】 （チキン） 但しＲ＿１はＳ−ｎ−アルキル、Ｃｙｓ又はＨであり、
   Ｒ＿２はＳ−ｎ−アルキル又はＨであり、Ｒ＿２がＨの
   ときはＲ＿１はＳ−ｎ−アルキル、Ｃｙｓ又はＨであり
   Ｒ＿１がＨのときはＲ＿２はＳ−ｎ−アルキル又はＨで
   ある、 なる構造を有する請求項１記載のカルシトニン。 ５、該カルシトニンが式 【遺伝子配列があります】 （サーモン）なる 構造をもつ〔１，７−アルフア−Ｌ−アミノスベリン酸
   デス−１６−ヒスチジン−サーモンカルシトニンである
   請求項１記載のカルシトニン。 ６、該カルシトニンが式 【遺伝子配列があります】 （イール構造をも つ〔１，７−アルファ−Ｌ−アミノスベリン酸デス−１
   ６−ヒスチジン−イールカルシトニンである請求項１記
   載のカルシトニン。 ７、該カルシトニンが式 【遺伝子配列があります】 （チキン）なる構造を もつ〔１，７−アルフア−Ｌ−アミノスベリン酸デス−
   １６−ヒスチジン−チキンカルシトニンである請求項１
   記載のカルシトニン。 ８、請求項１記載の変性カルシトニンを有効成分として
   含む血中カルシウム濃度調節剤。９、カルシトニンの単
   位ドースが体重１００ｇ当り約０．７〜２１ｍｇである
   請求項８記載の血中カルシウム濃度調節剤。