JPH0134114Y2 - - Google Patents

Description

【考案の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本考案は、電気泳動ゲル等からのトランスフ
ア・ブロテイング装置に関する。更に詳しくは、
本考案はスラブ電気泳動、特に二次元電気泳動ゲ
ルからの水平式トランスフア・ブロテイング
（transfer blotting、転位吸い取り）のための装
置に関する。

〔従来の技術〕

電気泳動は近年急速な進歩をとげつつある生化
学、バイオテクノロジー等の有用な物質、特に生
体成分の分離、分析方法として汎用されている。
なかでも、アガロースゲルやボリアクリルアミド
ゲル平板電気泳動法は微量な生体成分、例えば血
清中の抗原、抗体、微生物や生体細胞脂肪成分の
DNAフラグメント等の分離、分析、検出同定に
多く利用されている。

近年さらにトランスフア・ブロテイング（転位
吸い取り）の方法が開発された。この方法の原理
は、例えば二次元平板電気泳動等によつて分離さ
れた成分を別の基材に転位吸い取り（トランスフ
ア・ブロテイング）させるので、従来、このよう
なトランスフア・ブロテイング装置としては、ゲ
ル平板の１枚ごとにその基材１枚とともにホルダ
ーにセツトし、このホルダーの複数枚をタテ型に
配置し、１度に転位吸い取りする装置が知られて
いた。

〔考案が解決しようとする課題〕

しかしながら、このような装置では、一度に一
枚のゲル平板から一枚のコピーしか得られなかつ
た。また、そのコピー時間も30分以上を要し、さ
らに冷却装置が必要である等の欠点があつた。

本考案者らは自らの研究のためにこれらの欠点
を改良し、効率よい装置を得ようと努力した結
果、本考案を完成するに至つた。

この点に関して詳しく述べれば、オリジナル電
気泳動平板に分離保持されている各成分の少量づ
つを他の基材に転写し、同一パターンのものを数
種調製しようというものである。更に詳しくは、
電気泳動終了済みのゲル、特に二次元電気泳動平
板ゲルには、分離分析しようとした目的物質、例
えば血清からの蛋白質、DNAフラグメント等が
電気的に分離、保持されている。この保持されて
いる蛋白質等（100％量とすると）をさらに５〜
30％づつの量の別の基材に転位吸い取り（トラン
スフア・ブロテイング）させて、一枚のオユジナ
ルゲル平板から数枚のコピーを調製する。このよ
うにして、コピーされた（正確にいうと、オリジ
ナルの平板ゲル中に分離保持されている物質は、
コピーごとに量が減つていくから、コピーとは云
えないが、）基材にはオリジナル平板から分離さ
れたスポツト、例えば蛋白質やDNAフラグメン
ト等が保持される。

したがつて、各コピーを種々の方法でチエツク
できるので、一度の電気泳動により、分析、検
出、同定が可能となる訳けである。

本考案の目的は、電気量、転位吸い取り時間を
短縮し、かつ全体を小型化して試薬量も少量であ
りながら、鮮明な転位吸い取りを可能にしたトラ
ンスフア・ブロテイング装置を提供するにあり、
さらに数枚のゲル平板を用いることによりそれぞ
れ複数枚のコピーが一度に同時になし得るように
したものである。

〔課題を解決するための手段〕

上記のような目的を達成する本考案の装置は、
上面が開口するボツクス状の本体内に凹状をした
溶媒溜部と支持部を設け、かつ上記本体の開口部
には嵌挿体を被嵌し、該嵌挿体には水平方向に延
びるフランジと垂直方向に延びる嵌挿突出体とを
設け、嵌挿突出体はその先端側が前記の溶媒溜部
内に嵌挿され、フランジの下面には電源側と接続
されるコイルおよび該コイルを保護する保護材が
保持せしめられ、かつまた前記の支持部上には電
源側に接続されるコイルと該コイルを保護する保
護材を配置して構成したものである。

以下図面にしたがつて本考案の実施例について
詳細に説明する。

〔実施例〕

第１図において符号１は上面が開口されかつ長
方形状に形成されたボツクス状の本体である。ボ
ツクス状の本体１には蓋板２の下面に設けた嵌挿
体１３が着脱可能に被嵌される。符号３は本体１
の底面と蓋板２の上面１２とにかけ渡され、本体
１と嵌挿体１３とが離脱しないように保持するた
めのクランプである。

第１図において本体１の右側に位置する底壁４
の内面に凹状の溶媒溜部５が形成してある。溶媒
溜部５にはトランスフア・ブロテイングのための
溶媒が溜められる。トランスフア・ブロテイング
のための溶媒としては、通常電気泳動法において
汎用されている溶媒が用いられ、例えばpH8〜９
の範囲のベロナール緩衝液やトリス−塩酸緩衝液
が使用されるが、蛋白質等の変性のない範囲であ
れば特に限定されない。また、pH8以上では、抗
体等の蛋白質成分はマイナスに帯電するので陽極
側に移行される。溶媒溜部５は、底壁４を切り込
んで形成してもよく、また、例えば別部材を本体
の内底面に配置して本体１の内底面に前記と同様
の凹状をした溶媒溜部を形成するようにしてもよ
い。底壁４の上面は水平な支持面６を有する支持
部になつており、該支持面６上には陰極用のコイ
ル７が配置してある。陰極用コイル７の端子８は
本体１外に液密に延出させてある。陰極用コイル
の表面上には、例えばスポンジ状の保護材９が配
置され、表面全体を被覆せしめてある。保護材９
の表面上には膜状保護材１０、特に好ましくはろ
紙が配装してあり、このろ紙１０上にスラブ電気
泳動ゲル１１がセツトされる。このスラブ電気泳
動ゲル１１としては、例えばポリアクリルアミ
ド、ニトロセルロース、DEAE−セルロース、ア
ガロース、ろ紙等が挙げられる。

前記蓋板２の下面には、嵌挿体１３が設けてあ
る。嵌挿体１３は垂直配置の嵌挿突出体１４と水
平配置のフランジ１５とを備えている。嵌挿突出
体１４は、第２図においてその先端側の幅「Ｗ」
が第４図に示す溶媒溜部５の幅「W₁」より若干
小さく形成されている。したがつて、嵌挿突出体
１４が第１図に示されるように溶媒溜部５内にす
つぽりと挿入される。嵌挿突出体１４の根元部の
第１図において右側面はテーパ面１６に形成して
ある。このテーパー面１６を形成することによ
り、本体１の内面との間に余剰溜部１６０が形成
される。この余剰溜部１６０は、本体１から溢出
しようとする溶媒を受け入れるためのものであ
る。即ち、溶媒溜部５の近辺に存在する溶媒液が
嵌挿突出体１４により加圧されることによつて、
溶媒液面が上昇されたとき、溶媒溜部５内あるい
はその近辺に存在する溶媒が後で説明する陽極用
コイルよりも溶媒液面が上昇されたとき、その上
昇せしめられた溶媒を受け入れる。余剰溜部１６
０は、本例の場合、嵌挿突出体の根元部をテーパ
ー面１６に形成することにより形成したが、必ず
しもこれに限定されず、例えば嵌挿突出体に凹状
の切り込みを入れた構造であつてもよい。要する
に、溶媒溜部５内の溶媒液面が上昇されて本体１
外に溢出しようとする溶媒を受け入れる溜部であ
れば如何なる構造であつてもよい。なお、上記に
おいて、蓋板２とフランジ１５とは別体の構造の
場合を説明したが、必ずしもこれに限定されず、
フランジ１５と蓋板２とが一体構造型であつても
よい。

前記フランジ１５の下面には一定間隔毎に複数
の突起１７が設けてある。この突起１７上に陽極
用コイル１８が蛇行状に配置してある。陽極用コ
イル１８の表面上には前記で説明したと同様の保
護材１９が配置され、陽極用コイル１８が保護せ
しめられる。保護材１９と陽極用コイル１８は防
腐性の止着ピン２０により前記のフランジ１５に
対して保持してある。陽極用コイル１８の端子２
１は、フランジ１５の自由端面と本体１の内壁と
間に形成される隙間１５０から、外部に延出され
る。端子８および２１は電源２２に接続される。

符号２３はブロテイング支持体であつて、前記
のスラブ電気泳動ゲル１１上にセツトされる。こ
のブロテイング支持体としては、例えばニトロセ
ルロース、DEAE−セルロース、ポリアクリルア
ミド、アガロース、セルロースアセテート、ろ
紙、アミノベンジルオキシメチルペーパー等の材
質が使用される。前記本体１の外面には脚体１ａ
が設けてある。しかるに、本体１を机上３０に置
くと、本体１の全体は第１図に示されるように溶
媒溜部５側が若干高くなるようにセツトされる。
それ故、本体１内に上昇せしめられた溶媒は、電
気泳動ゲル１１およびブロテイング支持体２３の
ところを傾斜面に沿つて流れるため、溶媒が停留
することはない。したがつて、溶媒中に気泡が溜
り、電気泳動に支障を来すことはない。溶媒の流
れをスムースに行うために、脚体１ａにより本体
１を傾斜させる構造のみに限定されず、例えば支
持面６およびフランジ１５の内面を第１図におい
て右側から左側に沿つて傾斜する形状に構成し、
前記と同様の作用が営まれるようにすることもで
きる。更に、フランジ１５の下面に形成する突起
１７の代わりに波形状あるいは凹凸部に形成する
こともできる。

上記のような構成のトランスフア・ブロテイン
グ装置において、スラブ電気泳動ゲルが例えば４
×４cmである場合のゲル４枚の同時トランスフ
ア・ブロテイングについて説明する。

ボツクス状本体１の溶媒溜部５内にトランスフ
ア・ブロテイング用の溶媒を適当量入れる。次に
保護材９上にろ紙１０をセツトする（このろ紙を
セツトする理由は、スラブ電気泳動ゲル１１の損
傷を防止しかつ電気分布を一様にするためであ
り、また、スラブ電気泳動ゲル１１が例えば４×
４cmの大きさであつても、ろ紙は４×16cmの大き
さのものを使用する。）このようなろ紙１０上に
スラブ電気泳動ゲル（４×４cm）をセツト（ろ紙
が４×16cmであるからスラブ電気泳動ゲル１１は
４枚までセツトできることになる）し、さらにス
ラブ電気泳動ゲル１１上にトランスフア・ブロテ
イング支持体たとえばニトロセルロース膜２３を
セツトする。そして、嵌挿体１３と本体１の開口
面から嵌め込み、その嵌挿突出体１４の先端を溶
媒溜部５の内底面に到達するまで挿入するとフラ
ンジ１５は本体１の開口面近くにおいて、前記の
支持面６に対向される。また、蓋板２は本体１の
開口面に被嵌され、本体１とクランプ３，３によ
り一体化せしめる。しかして、上記の嵌挿突出体
１４が溶媒溜部５内に挿入されることにより、溶
媒液面は本体１内を上昇され、陰極用コイル７お
よび陽極用コイル１８間の全体が浸漬せしめられ
る。このとき、陽極用コイル１８よりさらに上方
に上昇された溶媒は、余剰溜部１６０内に入り込
み、本体１外への溶媒漏れが防止される。

また、上記のように溶媒液面の上昇に伴いかつ
本体１の全体は机上３０において傾斜配置となつ
ているために、溶媒が第１図において右側から左
側に斜めに流れて行くことになり、溶媒が電気泳
動ゲル１１、支持板２３上で滞留することがな
く、気泡抜きが確実に行えることになる。

そこで、陰極−陽極間に電圧（例えば15〜
20V，150mA，10分）をかける。すると、スラ
ブ電気泳動ゲル１１のゲル部より少量の蛋白（５
〜10％宛）がブロテイング支持体２３にトランス
フアされる。このようにして、トランスフアブロ
テイングしたならば、本体１から嵌挿体１３を取
り外して、トランスフア・ブロテイングされる支
持体２３を剥ぎ取り、新たなブロテイング支持体
を再び前記と同じようにスラブ電気泳動ゲル１１
上にセツトし、前記と同様の操作を繰り返えせば
よい。このようにして、スラブ電気泳動ゲル１１
の蛋白質がなくなるまで、ブロツテイング支持体
２３を逐次取り替えてトランスフア・ブロテイン
グさせればよい。以上のように、１枚のオリジナ
ルスラブ電気泳動ゲルから適宜数枚例えば５枚程
度のトランスフア・ブロテイングされたブロテイ
ング支持体を作製する。このようにして、作製さ
れた複数枚のトランスフア・ブロテイングされた
ブロテイング支持体は、同一に蛋白質スポツトを
有するため、それぞれのトランスフア・ブロテイ
ングされたブロテイング支持体に対して、その一
枚は例えば免疫学的の判定用として、又、他の一
枚は染色等の異なつた判定用に利用することがで
きる。

なお、本考案の装置による転位吸い取りのオリ
ジナル平板ゲルは、スラブ電気泳動平板ゲルばか
りでなく、二次元薄層クロマトグラフイ平板、二
次元ペーパークロマトグラフイにも応用可能であ
る。

〔考案の効果〕

本考案による装置は、従来のものに比べ水平式
であり、かつ陽極−陰極が狭く、電気量、転位吸
い取り時間が少なくて済む。そのため、冷却装置
が不要である。またそれ故、装置の小型化も可能
となり、したがつて、試薬量も少なくて済む。ま
た、一枚づつのコピーであるため、極めて短時間
に転位吸い取りが可能であり、さらにコピーされ
たスポツトがオリジナルと同じ大きさを保つこと
ができる（ボケが少ない）。更に、転位基材を取
り替えるだけの極めて簡便作業であるなどの種々
の効果がある。

【図面の簡単な説明】

図面は本考案の好適な実施例を示すものであつ
て、第１図は装置の縦断面図、第２図は嵌挿体の
斜面図、第３図は陽極側コイルの取付状態の側面
図、第４図は本体の断面斜視図、第５図は陰極側
コイルの配置状態の縦断面図、第６図は装置の電
気配線図である。 符号の説明、１……ボツクス状本体、５……溶
媒溜部、６……支持面、７……陰極用コイル、９
……保護材、１３……嵌挿体、１５……フラン
ジ、１８……陽極用コイル、１９……保護材。

Claims (1)

1. 【実用新案登録請求の範囲】 (1) 上面が開口するボツクス状の本体内に水平な
   支持面を有する支持部と該水平面より凹状に陥
   没した溶媒溜部とを設け、かつ上記本体の開口
   部には嵌挿体を被嵌し、該嵌挿体には水平方向
   に延びるフランジと垂直方向に延びる嵌挿突出
   体とを設け、嵌挿突出体はその先端側が前記の
   溶媒溜部内に嵌挿され、フランジの下面には電
   源側と接続されるコイルおよび該コイルを保護
   する保護材が保持せしめられ、かつまた前記の
   支持部上には電源側に接続されるコイルと該コ
   イルを保護する保護材を配置して構成したこと
   を特徴とするトランスフア・ブロテイング装
   置。 (2) フランジの下面に複数個の突起を形成してな
   る請求項１記載のトランスフア・ブロテイング
   装置。 (3) 嵌挿突出体の外面側の根元部から先端側に沿
   つてテーパー面を形成して溶媒の余剰溜部を形
   成してなる請求項１記載のトランスフア・ブロ
   テイング装置。