JPH01169359A - 哺乳動物の乳清及び血清中の腸管感染症ウィルスに対するＩｇＡ抗体の定量方法 - Google Patents
哺乳動物の乳清及び血清中の腸管感染症ウィルスに対するＩｇＡ抗体の定量方法Info
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- JPH01169359A JPH01169359A JP32883587A JP32883587A JPH01169359A JP H01169359 A JPH01169359 A JP H01169359A JP 32883587 A JP32883587 A JP 32883587A JP 32883587 A JP32883587 A JP 32883587A JP H01169359 A JPH01169359 A JP H01169359A
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は哺乳動物の乳清及び血清中の轟管感染症ウィル
スに対するｌＱＡ抗体の定量方法に関するものである。
スに対するｌＱＡ抗体の定量方法に関するものである。
（従来の技術）
Ｉｌｓ管感染症ウィルスの一種である豚伝染性胃腸炎（
以下ＴＧＥと略称する）ウィルスは、発育段階に関係な
くすべての豚に感染する。ＴＧＥは伝染性が極めて強い
ため、その診断には簡易、迅速、確実性が要求されてき
た。又、ＴＧＥの症状は幼齢豚はど重篤で死亡率も高い
ことから、そのワクチン開発は乳汁免疫を基盤とした受
動免疫法により進められている。
以下ＴＧＥと略称する）ウィルスは、発育段階に関係な
くすべての豚に感染する。ＴＧＥは伝染性が極めて強い
ため、その診断には簡易、迅速、確実性が要求されてき
た。又、ＴＧＥの症状は幼齢豚はど重篤で死亡率も高い
ことから、そのワクチン開発は乳汁免疫を基盤とした受
動免疫法により進められている。
豚の乳汁中の主な免疫グロブリンはＩＱＧとｌＱＡであ
る。ＩｇＧは初乳中に多量に含まれているが、その濃度
は分娩後２〜３日以内に急激に低下して約１／１０にな
る。これに対してＩｇＡ１１度は減少率が低く１／２〜
１／３に低下するに止まり、母乳中の主要な免疫グロブ
リンとなり新生豚の腸管感染防御に働くことになる。
る。ＩｇＧは初乳中に多量に含まれているが、その濃度
は分娩後２〜３日以内に急激に低下して約１／１０にな
る。これに対してＩｇＡ１１度は減少率が低く１／２〜
１／３に低下するに止まり、母乳中の主要な免疫グロブ
リンとなり新生豚の腸管感染防御に働くことになる。
この様な感染防御に必要なＩｇＡ抗体を乳汁中に分泌す
るためには、消化管関連リンパ組１！（以下ＧＡＬＴと
略称する。）がＴＧＥウィルスにより抗原刺激を受けな
くてはならない。又、ＧＡＬＴが抗原刺激を受ければ血
清中にもＩｏＡ抗体が誘導される。従って、新生豚の感
染防御の面及びワクチンの効果判定を考慮した時、血清
及び乳汁中のＴＧＥウィルスに対するＩｇＡ抗体を定量
することは極めて重要である。
るためには、消化管関連リンパ組１！（以下ＧＡＬＴと
略称する。）がＴＧＥウィルスにより抗原刺激を受けな
くてはならない。又、ＧＡＬＴが抗原刺激を受ければ血
清中にもＩｏＡ抗体が誘導される。従って、新生豚の感
染防御の面及びワクチンの効果判定を考慮した時、血清
及び乳汁中のＴＧＥウィルスに対するＩｇＡ抗体を定量
することは極めて重要である。
血清及び乳汁中の抗体価を測定する方法として、中和試
験法、間接赤血球凝集反応、酵素免疫測定法（以下ＥＬ
ＩＳＡと略称する）及び感染細胞を抗原とした酵素抗体
法などがある。これらの方法では抗体価はＩｇＡ、Ｉａ
Ｇ、ＩｇＭ各抗体の抗体価の合計が測定され、各抗体別
の抗体価の測定はできない。そこで、従来ＩｇＡ抗体及
びＩ（７層抗体の測定は、血清及び乳汁をゲル濾過法に
よりＩｇＡ分画とＩａＧ分画とに分画し、ＩＣＩＡ分画
及びＩｇＧ分画についてそれぞれ中和抗体価を測定する
ことにより行なっていた。一方、酵素抗体法によって血
清及び乳汁中のＩｇＡ抗体を定量できることが報告され
ている。（Ａｍ Ｊ ＶｅｔＲｅｓ ４２：４３
７−４４２．１９８１）（発明が解決しようとする問題
点） ところが、前者のゲル濾過法により分画した各分画につ
いて中和抗体価を測定する方法では、迅速性、簡便性に
欠けるばかりでなく、ゲル濾過の操作により血清、乳汁
が希釈されるため、得られた結果に定量性がないという
問題がある。一方、後者の酵素抗体法は検体の大量処理
、迅速性、簡便性などの点で実用性に欠けるという問題
がある。
験法、間接赤血球凝集反応、酵素免疫測定法（以下ＥＬ
ＩＳＡと略称する）及び感染細胞を抗原とした酵素抗体
法などがある。これらの方法では抗体価はＩｇＡ、Ｉａ
Ｇ、ＩｇＭ各抗体の抗体価の合計が測定され、各抗体別
の抗体価の測定はできない。そこで、従来ＩｇＡ抗体及
びＩ（７層抗体の測定は、血清及び乳汁をゲル濾過法に
よりＩｇＡ分画とＩａＧ分画とに分画し、ＩＣＩＡ分画
及びＩｇＧ分画についてそれぞれ中和抗体価を測定する
ことにより行なっていた。一方、酵素抗体法によって血
清及び乳汁中のＩｇＡ抗体を定量できることが報告され
ている。（Ａｍ Ｊ ＶｅｔＲｅｓ ４２：４３
７−４４２．１９８１）（発明が解決しようとする問題
点） ところが、前者のゲル濾過法により分画した各分画につ
いて中和抗体価を測定する方法では、迅速性、簡便性に
欠けるばかりでなく、ゲル濾過の操作により血清、乳汁
が希釈されるため、得られた結果に定量性がないという
問題がある。一方、後者の酵素抗体法は検体の大量処理
、迅速性、簡便性などの点で実用性に欠けるという問題
がある。
本発明の目的は、各種感染症の抗体検査に広く利用され
ているＥＬＩＳＡを応用し、哺乳動物の乳清及び血清中
の腸管感染症ウィルスに対する特異■ｇＡ抗体を迅速に
定量でき、かつ−度に大量の検体を処理できる定量方法
を提供することである。
ているＥＬＩＳＡを応用し、哺乳動物の乳清及び血清中
の腸管感染症ウィルスに対する特異■ｇＡ抗体を迅速に
定量でき、かつ−度に大量の検体を処理できる定量方法
を提供することである。
く問題点を解決するための手段）
本発明者らは前記の問題点を解決するため鋭意研究の結
果、本発明を完成した。
果、本発明を完成した。
本発明は酵素免疫測定法を使用し、プレート上に固相化
する抗原としてウィルス感染細胞培養上清から精製した
ウィルスを使用するとともに、酵素標識抗体として酵素
標識波１（７層抗体を使用することを特徴とする哺乳動
物の乳清及び血清中の脚管感染症ウィルスに対するＩＣ
ＩＡ抗体の定量方法である。
する抗原としてウィルス感染細胞培養上清から精製した
ウィルスを使用するとともに、酵素標識抗体として酵素
標識波１（７層抗体を使用することを特徴とする哺乳動
物の乳清及び血清中の脚管感染症ウィルスに対するＩＣ
ＩＡ抗体の定量方法である。
ＥＬＩＳＡで乳清、血清を検体として抗体の測定を行な
う場合、同相として使用される抗原の状態により非特異
的なバックグラウンドが高くなる。
う場合、同相として使用される抗原の状態により非特異
的なバックグラウンドが高くなる。
このバックグラウンドが高いと測定結果に信頼性がなく
なるため、その値は光度計の吸光度（以下０、Ｄ、と略
称する）０．２以下にする必要がある。
なるため、その値は光度計の吸光度（以下０、Ｄ、と略
称する）０．２以下にする必要がある。
本発明では抗原としてウィルス感染細胞培養上清から精
製したウィルスを使用することにより、バックグラウン
ドのＯ，Ｄ、値が０．２以下となり高感度でしかも信頼
性の高い測定結果が得られる。精製ウィルスは、前記ウ
ィルス感染細胞培養上清からウィルスを回収する処理操
作過程で、フルオロカーボン処理を行なうことにより得
られる。
製したウィルスを使用することにより、バックグラウン
ドのＯ，Ｄ、値が０．２以下となり高感度でしかも信頼
性の高い測定結果が得られる。精製ウィルスは、前記ウ
ィルス感染細胞培養上清からウィルスを回収する処理操
作過程で、フルオロカーボン処理を行なうことにより得
られる。
酵素標識抗ＩｇＡ抗体の調整に使用する酵素は特に限定
されず、ＥＬＩＳＡで一般的に使用されるペルオキシダ
ーゼ、あるいはアルカリホスファターゼなどが使用され
る。
されず、ＥＬＩＳＡで一般的に使用されるペルオキシダ
ーゼ、あるいはアルカリホスファターゼなどが使用され
る。
（実施例）
以下、本発明を豚乳清及び血清中のＴＧＥウィルスに対
する特異ＩｇＡ抗体の定量に適用した場合についてより
具体的に説明するが、本発明はこの実施例に限定される
ものではない。
する特異ＩｇＡ抗体の定量に適用した場合についてより
具体的に説明するが、本発明はこの実施例に限定される
ものではない。
（１）ＥＬＩＳＡ用抗原の精製
ＴＧＥウィルス（Ｔｏ−１６３株）をＣＰＫ細胞で培養
し、その培養液の上溝を採取した。５０００×ｏで２０
分間遠心し、上滑を採取した。次に１５００００Ｘ（Ｉ
＋で２時間遠心し、ベレッ′ト状の沈澱物を回収した。
し、その培養液の上溝を採取した。５０００×ｏで２０
分間遠心し、上滑を採取した。次に１５００００Ｘ（Ｉ
＋で２時間遠心し、ベレッ′ト状の沈澱物を回収した。
この沈澱物をＴＮＥ緩衝液に浮遊させてフルオロカーボ
ン処理を行なった。
ン処理を行なった。
フルオロカーボン処理は前記沈澱物を浮遊させたＴＮＥ
！！衝液（ウィルス液）３に対し１の割合でフルオロカ
ーボンをウィルス液に加え、１分間振どうすることによ
り完了する。フルオロカーボンとしてトリクロロトリフ
ルオロエタン（ダイフロンソルベントＳ３：ダイキン工
業株式会社製：商品名）を使用した。
！！衝液（ウィルス液）３に対し１の割合でフルオロカ
ーボンをウィルス液に加え、１分間振どうすることによ
り完了する。フルオロカーボンとしてトリクロロトリフ
ルオロエタン（ダイフロンソルベントＳ３：ダイキン工
業株式会社製：商品名）を使用した。
フルオロカーボン処理溶液を１０００ＸＯで５分間遠心
し、２層に分離した上層のウィルス液層を回収した。次
にウィルス液を２０％ショ糖溶液上に重層し、１２００
００Ｘ！；Ｉで２時間遠心してベレット状の沈澱層を回
収した。この沈澱層をＴＮＥ緩衝液に溶解し、ショ糖密
度勾配遠心（１０−２０−４０％、１２００００Ｘｇ、
２時間）を行った。ウィルス液層を回収し、１２０００
０Ｘ９で２時間遠心してベレット状の沈澱層を回収した
。この沈澱層をＴＮＥ緩衝液に溶解し、ショ糖密度勾配
遠心（１０〜６０％、１２００００ｘａ、２時間）を行
なった。ウィルス液層を回収し、１２００００Ｘ９で２
時間遠心してベレット状の沈澱層を回収した。このベレ
ットをＴＮＥ！ｌ！ｉ液に浮遊させてＥＬＩＳＡ用抗原
（抗原Ａ）とした。
し、２層に分離した上層のウィルス液層を回収した。次
にウィルス液を２０％ショ糖溶液上に重層し、１２００
００Ｘ！；Ｉで２時間遠心してベレット状の沈澱層を回
収した。この沈澱層をＴＮＥ緩衝液に溶解し、ショ糖密
度勾配遠心（１０−２０−４０％、１２００００Ｘｇ、
２時間）を行った。ウィルス液層を回収し、１２０００
０Ｘ９で２時間遠心してベレット状の沈澱層を回収した
。この沈澱層をＴＮＥ緩衝液に溶解し、ショ糖密度勾配
遠心（１０〜６０％、１２００００ｘａ、２時間）を行
なった。ウィルス液層を回収し、１２００００Ｘ９で２
時間遠心してベレット状の沈澱層を回収した。このベレ
ットをＴＮＥ！ｌ！ｉ液に浮遊させてＥＬＩＳＡ用抗原
（抗原Ａ）とした。
比較資料として前記培養液の上清から回収したベレット
状の沈澱層を、フルオロカーボン処理を行なわずに前記
と同様なショ糖密度勾配により精製した。得られたベレ
ットをＴＮＥｌ暫液に浮遊させて抗原Ｂとした。
状の沈澱層を、フルオロカーボン処理を行なわずに前記
と同様なショ糖密度勾配により精製した。得られたベレ
ットをＴＮＥｌ暫液に浮遊させて抗原Ｂとした。
（２）抗ＴＧＥウィルスＩｇＡ抗体の作成ＴＧＥウィル
ス強毒ＳＨ株に感染後回復した母豚の初乳に、レンニン
、１ＭＣａ Ｃ１工、１０％デキストラン硫酸塩を加え
、常法に従い乳清を分離した。乳清を透析チューブに入
れ、０．１ＭＴｒｉｓ −ＨＣｌ ｌｌｌ液液ｐ Ｈ８
，０＞を外液として２〜３日間透析を行なった。その間
外液は数回新鮮なものと交換した。次にジエチルアミン
エチル（ＤＥＡＥ）基を有するイオン交換樹脂であるＤ
Ｅ Ａ Ｅ −Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ Ａ −５０（ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ社製：商品名）を充填したカラムを用
いてイオン交換クロマトグラフィーを行なった。溶出に
は最初０゜１ＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐ Ｈ８，０
）を用い、次にＮａ Ｃ１の濃度を０．１Ｍ、０．１２
Ｍ、０゜１４Ｍ及び０．２Ｍと順次高めた０、１ＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐ Ｈ８，０＞を用いて溶出を行
なった。０．２Ｍに溶出されるＩｇＡ分画を回収した。
ス強毒ＳＨ株に感染後回復した母豚の初乳に、レンニン
、１ＭＣａ Ｃ１工、１０％デキストラン硫酸塩を加え
、常法に従い乳清を分離した。乳清を透析チューブに入
れ、０．１ＭＴｒｉｓ −ＨＣｌ ｌｌｌ液液ｐ Ｈ８
，０＞を外液として２〜３日間透析を行なった。その間
外液は数回新鮮なものと交換した。次にジエチルアミン
エチル（ＤＥＡＥ）基を有するイオン交換樹脂であるＤ
Ｅ Ａ Ｅ −Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ Ａ −５０（ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ社製：商品名）を充填したカラムを用
いてイオン交換クロマトグラフィーを行なった。溶出に
は最初０゜１ＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐ Ｈ８，０
）を用い、次にＮａ Ｃ１の濃度を０．１Ｍ、０．１２
Ｍ、０゜１４Ｍ及び０．２Ｍと順次高めた０、１ＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐ Ｈ８，０＞を用いて溶出を行
なった。０．２Ｍに溶出されるＩｇＡ分画を回収した。
次にＩｇＡを高度に精製するため３ ｅｐｈａｃｒｙｌ
ｅ Ｓ −３００（ｐｈａｒｍａｃｉａ社製；商品名
）を用いてゲル濾過を２回行なった。溶出には０．２Ｍ
のＮａ Ｃｌを含む０．１ＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（
ｐ Ｈ８，０）を使用した。Ｉ製されたＩｇＡの純度は
ゲル内沈降反応及び免疫電気泳動によって確認した。
ｅ Ｓ −３００（ｐｈａｒｍａｃｉａ社製；商品名
）を用いてゲル濾過を２回行なった。溶出には０．２Ｍ
のＮａ Ｃｌを含む０．１ＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（
ｐ Ｈ８，０）を使用した。Ｉ製されたＩｇＡの純度は
ゲル内沈降反応及び免疫電気泳動によって確認した。
（３）酵素標識抗体の調整
酵素標識抗体はベルオキンターゼ（ＳＩＧＭＡ。
Ｔ Ｖｌ）ｅ Ｖｌ ： Ｓ ｉｇｍａ社製）をヤギ抗
ブタα鎖ＩｇＧに標識して調整した。
ブタα鎖ＩｇＧに標識して調整した。
（４）ＥＬＩＳＡによるＩｑＡ抗体の測定前記のように
して得た抗原及び酵素標識抗体を使用して、次の手順に
従ってＴＧＥウィルスに対する特異ＩｇＡ抗体の測定を
行なった。
して得た抗原及び酵素標識抗体を使用して、次の手順に
従ってＴＧＥウィルスに対する特異ＩｇＡ抗体の測定を
行なった。
■ 炭酸緩衝液（Ｄ Ｈ９，６）で抗原をＥＬＩＳＡ用
プレー上プレート（２μｇ ／ｗｅｌｌ）する。
プレー上プレート（２μｇ ／ｗｅｌｌ）する。
４℃で一夜放置。
■ 洗浄液（０，０５％トウイーン２０加ＰＢＳ）で５
回洗浄後、３％ウシ血清アルブミン加ＰＢＳをウェル当
り１５０μｍ加え、３７℃で９０分反応させる。
回洗浄後、３％ウシ血清アルブミン加ＰＢＳをウェル当
り１５０μｍ加え、３７℃で９０分反応させる。
■ 洗浄液で５回洗浄後、サンプルをウェル当り１００
μ＋ （０，５％トウイーン２０加ＰＢＳで３００倍
に希釈）加え、３７℃で３０分反応させる。
μ＋ （０，５％トウイーン２０加ＰＢＳで３００倍
に希釈）加え、３７℃で３０分反応させる。
■ ５回洗浄後、ベルオキシグ−ゼで標識したヤギ抗ブ
タα鎖１ｇＧの希釈溶液をウェル当り１００μｍ加え、
２５℃で３０分反応させる。
タα鎖１ｇＧの希釈溶液をウェル当り１００μｍ加え、
２５℃で３０分反応させる。
■ 洗浄液で５回洗浄後、０−フェニレンジアミンのク
エン酸・リン酸緩衝液溶液（ＨｚＯｔ含有）を加え、２
５℃で２０分反応させる。
エン酸・リン酸緩衝液溶液（ＨｚＯｔ含有）を加え、２
５℃で２０分反応させる。
■ ３Ｎ Ｈβ０４溶液を加えて反応を停止させた後
、分光光度計で４９２ ｎｍの吸光度を測定する。
、分光光度計で４９２ ｎｍの吸光度を測定する。
（５）ＥＬ ＩＳＡ用抗原の精製におけるフルオロカー
ボン処理の影響 精製処理操作過程においてフルオロカーボン処理を行な
った場合の抗原Ａと、フルオロカーボン処理を行なわな
かった場合の抗原Ｂとについて、中和抗体価陰性の乳清
及び血清をサンプルとしてＥＬＩＳＡ Ｏ，Ｄ、値を
測定した結果を表１に示す。
ボン処理の影響 精製処理操作過程においてフルオロカーボン処理を行な
った場合の抗原Ａと、フルオロカーボン処理を行なわな
かった場合の抗原Ｂとについて、中和抗体価陰性の乳清
及び血清をサンプルとしてＥＬＩＳＡ Ｏ，Ｄ、値を
測定した結果を表１に示す。
表１から明らかなようにフルオロカーボン処理を行なっ
た抗原ＡではＯ，Ｄ、値が常に０．２以下であるのに対
して、フルオロカーボン処理を行なわなかった抗原Ｂで
は０．Ｄ、値が０．１８〜１．１０と大きくばらついた
。すなわちフルオロカーボン処理を行なうことにより、
ＥＬＩＳＡにおけるＱＤ。
た抗原ＡではＯ，Ｄ、値が常に０．２以下であるのに対
して、フルオロカーボン処理を行なわなかった抗原Ｂで
は０．Ｄ、値が０．１８〜１．１０と大きくばらついた
。すなわちフルオロカーボン処理を行なうことにより、
ＥＬＩＳＡにおけるＱＤ。
値の非特異的なバックグラウンドを低くすることができ
、高感度でしかも信頼性の高い測定結果を得ることが可
能となる。
、高感度でしかも信頼性の高い測定結果を得ることが可
能となる。
（６）ＩｇＡ抗体のＥＬＩＳＡ Ｏ，Ｄ、値と中和抗
体価の相関性 ＴＧＥウィルスに感染後回復した母豚の初乳から、前述
のように調整した抗ＴＧＥウィルスＩｇＡ抗体を中和試
験で中和抗体価が２〜５１２となるように調整し、抗原
Ａを用いてＥＬＩＳＡを行なった。その結果第１図に示
すように中和抗体価とＥＬＩＳＡ Ｏ，０，値（０，
２１〜１．６１）との間にγ−０，８９の相関が認めら
れた。従って、このＥＬＩＳＡによってＩｇＡ抗体の定
ｍが可能である。
体価の相関性 ＴＧＥウィルスに感染後回復した母豚の初乳から、前述
のように調整した抗ＴＧＥウィルスＩｇＡ抗体を中和試
験で中和抗体価が２〜５１２となるように調整し、抗原
Ａを用いてＥＬＩＳＡを行なった。その結果第１図に示
すように中和抗体価とＥＬＩＳＡ Ｏ，０，値（０，
２１〜１．６１）との間にγ−０，８９の相関が認めら
れた。従って、このＥＬＩＳＡによってＩｇＡ抗体の定
ｍが可能である。
（７）実験感染母豚の乳清及び血清内のＩｇＡ抗体の測
定 分娩３週間前の妊娠豚２頭に強ＩｓＨ株を経口接種し、
その後経時的に乳清及び血清を採取した。
定 分娩３週間前の妊娠豚２頭に強ＩｓＨ株を経口接種し、
その後経時的に乳清及び血清を採取した。
各乳清及び血清について行なった中和試験と、ＥＬＩＳ
Ａによる１ｇＡ抗体の測定結果、並びにゲル濾過による
Ｉ（ＩＡ分画についての中和試験結果を、母豚別に第２
図（ａ）、（ｂ）、第３図（ａ ）、（ｂ）に示す。な
お、各図の（ａ ）は乳清、（ｂ ）は血清のデータで
ある。
Ａによる１ｇＡ抗体の測定結果、並びにゲル濾過による
Ｉ（ＩＡ分画についての中和試験結果を、母豚別に第２
図（ａ）、（ｂ）、第３図（ａ ）、（ｂ）に示す。な
お、各図の（ａ ）は乳清、（ｂ ）は血清のデータで
ある。
個体間で差はあるが２頭とも乳清及び血清についてＩｇ
Ａ抗体で検出された。乳清では高いレベルのＩｇＡ抗体
が検出され、ＩｇＡ分画の中和抗体価の推移ともよく一
致している。血清中のＩｇＡ抗体の量は少なく、ＩｇＡ
分画の中和抗体価は一方の豚〈第２図のもの）では陰性
となったが、ＥＬＩＳＡでは検出が可能であった。
Ａ抗体で検出された。乳清では高いレベルのＩｇＡ抗体
が検出され、ＩｇＡ分画の中和抗体価の推移ともよく一
致している。血清中のＩｇＡ抗体の量は少なく、ＩｇＡ
分画の中和抗体価は一方の豚〈第２図のもの）では陰性
となったが、ＥＬＩＳＡでは検出が可能であった。
発明の効果
以上詳述したように、この発明によれば検体の大量処理
、迅速性、簡便性に優れたＥＬＩＳＡにより哺乳動物の
乳清及び血清中の層管感染症ウィルスに対する特異１ｇ
Ａ抗体を高感度で検出でき、しかも定量性があるため、
ワクチンの効果判定、血清学的診断を簡易、迅速、高感
度で確実に行なうことができるという優れた効果を奏す
る。
、迅速性、簡便性に優れたＥＬＩＳＡにより哺乳動物の
乳清及び血清中の層管感染症ウィルスに対する特異１ｇ
Ａ抗体を高感度で検出でき、しかも定量性があるため、
ワクチンの効果判定、血清学的診断を簡易、迅速、高感
度で確実に行なうことができるという優れた効果を奏す
る。
第１図はＩＩＩＩＡ抗体のＥＬＩＳＡ Ｏ，Ｄ、値と
中和抗体価の相関を示す図、第２図（ａ）、（ｂ）及び
第３１（ａ）、（ｂ）は乳清及び血清の■９Ａ抗体のＥ
ＬＩＳＡ Ｏ，Ｄ、値及び中和抗体価の推移を示す図
である。 特許出願人 株式会社ゲン・コーポレーション代 理
人 弁理士 恩１）博宣 ン−りＩｇＡ分画中和抗体価 ←−→ＥＬ工ＳＡ Ｏ，Ｄ、値
中和抗体価の相関を示す図、第２図（ａ）、（ｂ）及び
第３１（ａ）、（ｂ）は乳清及び血清の■９Ａ抗体のＥ
ＬＩＳＡ Ｏ，Ｄ、値及び中和抗体価の推移を示す図
である。 特許出願人 株式会社ゲン・コーポレーション代 理
人 弁理士 恩１）博宣 ン−りＩｇＡ分画中和抗体価 ←−→ＥＬ工ＳＡ Ｏ，Ｄ、値
Claims (1)
- 酵素免疫測定法を使用し、プレート上に固相化する抗
原としてウィルス感染細胞培養上清から精製したウィル
スを使用するとともに、酵素標識抗体として酵素標識抗
ＩｇＡ抗体を使用することを特徴とする哺乳動物の乳清
及び血清中の腸管感染症ウィルスに対するＩｇＡ抗体の
定量方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32883587A JPH01169359A (ja) | 1987-12-24 | 1987-12-24 | 哺乳動物の乳清及び血清中の腸管感染症ウィルスに対するＩｇＡ抗体の定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32883587A JPH01169359A (ja) | 1987-12-24 | 1987-12-24 | 哺乳動物の乳清及び血清中の腸管感染症ウィルスに対するＩｇＡ抗体の定量方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01169359A true JPH01169359A (ja) | 1989-07-04 |
Family
ID=18214619
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32883587A Pending JPH01169359A (ja) | 1987-12-24 | 1987-12-24 | 哺乳動物の乳清及び血清中の腸管感染症ウィルスに対するＩｇＡ抗体の定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01169359A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103698514A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-04-02 | 广西大学 | 检测猪胞内劳森氏菌抗体的elisa试剂盒 |
-
1987
- 1987-12-24 JP JP32883587A patent/JPH01169359A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103698514A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-04-02 | 广西大学 | 检测猪胞内劳森氏菌抗体的elisa试剂盒 |
| CN103698514B (zh) * | 2013-12-17 | 2015-11-18 | 广西大学 | 检测猪胞内劳森氏菌抗体的elisa试剂盒 |
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