JPH01158353A - 悪性高熱症の血液による診断法 - Google Patents
悪性高熱症の血液による診断法Info
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- JPH01158353A JPH01158353A JP63248746A JP24874688A JPH01158353A JP H01158353 A JPH01158353 A JP H01158353A JP 63248746 A JP63248746 A JP 63248746A JP 24874688 A JP24874688 A JP 24874688A JP H01158353 A JPH01158353 A JP H01158353A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はヒト及びブタの悪性高熱症を血液によって診断
する方法に関するものである。
する方法に関するものである。
悪性高熱症は、遺伝性の筋肉の異常疾患であり、平生は
なんの異常もない人間が、手術室内で全身麻酔を受けた
時、筋肉が硬直し高熱を発する疾患で、死亡率が非常に
高い。
なんの異常もない人間が、手術室内で全身麻酔を受けた
時、筋肉が硬直し高熱を発する疾患で、死亡率が非常に
高い。
従来それを診断する唯一の方法は、足の股の部分より局
所麻酔下で、筋肉の小片を手術で取り出し、それを実験
室内で電気刺激により収縮させつつ、張力を測定する。
所麻酔下で、筋肉の小片を手術で取り出し、それを実験
室内で電気刺激により収縮させつつ、張力を測定する。
そこへ全身麻酔剤を加え、筋肉が硬直におちいるかどう
か、張力の測定により決定する方法であった。
か、張力の測定により決定する方法であった。
これは、患者に精神的肉体的苦痛を与えるだけでなく、
非常に複雑な検査法であり、世界中で２０数カ所しかこ
の診断をできる検査センターはない。
非常に複雑な検査法であり、世界中で２０数カ所しかこ
の診断をできる検査センターはない。
日本でも数ケ所しか診断できるところは無い。従って、
被験者は、遠隔地にある検査センターまで行って、手術
を受ける必要があり、危険な遺伝病 。
被験者は、遠隔地にある検査センターまで行って、手術
を受ける必要があり、危険な遺伝病 。
であるにも拘らず、検査を受ける人は少なかった。
又、ブタにもこの病気があり、この病気をもつブタは、
肉が不味いので、畜産業界の大問題であった。しかし、
節単に検査する方法がなかった。
肉が不味いので、畜産業界の大問題であった。しかし、
節単に検査する方法がなかった。
一方、本発明者は、この悪性高熱症が骨核筋向の小胞体
膜の異常によることを、ブタの小胞体を用いてまず発見
した（Ｏｈｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ、 Ａｒｃｈｉｖ。
膜の異常によることを、ブタの小胞体を用いてまず発見
した（Ｏｈｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ、 Ａｒｃｈｉｖ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 ２４７：２９４
−３０１．１９８６；０ｈｎｉｓｈｉ。
−３０１．１９８６；０ｈｎｉｓｈｉ。
Ｂｉｏｃｈｉｓ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ、 ８
９７：２６１−２６８．１９８７）。
９７：２６１−２６８．１９８７）。
その結果に基づき、もし筋肉以外の細胞膜にも遺伝的異
常が存在するならば、それを用いてこの疾患を診断でき
る筈だと考えた。その結果、簡単−に患者から取り出せ
る血液を用い、次の二種類の方法で測定する時、ヒト、
及びブタの正常な血液と悪性高熱症の血液に、顕著な差
があることを発見した。
常が存在するならば、それを用いてこの疾患を診断でき
る筈だと考えた。その結果、簡単−に患者から取り出せ
る血液を用い、次の二種類の方法で測定する時、ヒト、
及びブタの正常な血液と悪性高熱症の血液に、顕著な差
があることを発見した。
（１）電子スピン共鳴を用いる方法
スピンプローブである１２−ドキシルステアリン酸、１
６−ドキシルステアリン酸、或いは１２−ドキシルステ
アリン酸を脂肪酸の一つにもったフオスファチジルコリ
ンによって、赤血球の膜をスピンラベルし、電子スピン
共鳴測定装置で測定する。
６−ドキシルステアリン酸、或いは１２−ドキシルステ
アリン酸を脂肪酸の一つにもったフオスファチジルコリ
ンによって、赤血球の膜をスピンラベルし、電子スピン
共鳴測定装置で測定する。
そして、ハロセン（しばしば用いられる全身麻酔剤）を
加えると、悪性高熱症の赤血膜の流動性が、顕著に増加
することを発見した。
加えると、悪性高熱症の赤血膜の流動性が、顕著に増加
することを発見した。
（２）分光光度計により吸収を測る方法採血後、抗凝固
剤と混合した血液を、室温で数時間以内、あるいは、０
〜４℃で１〜３日間以内に、その血液の分光吸収をとる
と、赤血球のヘモグロビンの吸収に、正常と悪性高熱症
の間で顕著な差があることがわかった。従って、筋肉を
手術で取り出さなくても、悪性高熱症が診断出来ること
が解った。
剤と混合した血液を、室温で数時間以内、あるいは、０
〜４℃で１〜３日間以内に、その血液の分光吸収をとる
と、赤血球のヘモグロビンの吸収に、正常と悪性高熱症
の間で顕著な差があることがわかった。従って、筋肉を
手術で取り出さなくても、悪性高熱症が診断出来ること
が解った。
以下に本発明の実施例を示す。これらは、本発明の例と
して挙げるのであり、方法、試薬の種類と量、装置の種
類等、色々な変化がありうる。
して挙げるのであり、方法、試薬の種類と量、装置の種
類等、色々な変化がありうる。
（ａ）血液の採集と保存
（１）クエン酸を抗凝固剤として用いる方法クエン酸を
抗凝固剤として用いた容’ｊ！ｋ ５ ｃｃの真空血液
採集管を用い、静脈血を約４ ｃｃ採集する。
抗凝固剤として用いた容’ｊ！ｋ ５ ｃｃの真空血液
採集管を用い、静脈血を約４ ｃｃ採集する。
採集後、静かに攪拌した後、ただちに別の注射器の針を
さして、内部の真空を破る。
さして、内部の真空を破る。
（２）ヘパリンを抗凝固剤として用いる方法ヘパリンを
抗凝固剤として用いた５ｃｃの真空血液採集管中に、約
４ ｃｃの血液をとり真空を注射器の針を刺して破り、
その後、０．６ｃｃの血液銀行の抗血液凝固剤（クエン
酸、リン酸、グルコース、アデニンを含む）を加えて、
静かに撹拌する。
抗凝固剤として用いた５ｃｃの真空血液採集管中に、約
４ ｃｃの血液をとり真空を注射器の針を刺して破り、
その後、０．６ｃｃの血液銀行の抗血液凝固剤（クエン
酸、リン酸、グルコース、アデニンを含む）を加えて、
静かに撹拌する。
（３）保存法
室温で数時間後に検査する場合は、静かに室温にて放置
しておく。もし必要があって遠方の検査センターへ送る
場合は、ただちに氷、あるいは人造米によって、採集し
た血液を０〜４°Ｃに冷やしておけば、３日間は検査の
ために保存することが可能である （口）電子スピン共鳴による診断法 （１）上に述べた方法で採集した血液を、生理的塩溶液
、例えば、１０８ｍＭ ＮａＣ１，５ｍＭ ＫＣｌ、
１．２ｍＭ ＭｇＣ１Ｚ、３０ａ＋Ｍグルコース、２．
４＋ｓＭリン酸、１ｍＭアデニン、１ｍＭイノシン、２
４ｍＭ重曹、ｐＨ７，４で二度洗浄し、ヘマトクリット
値２０％の懸濁液をつくる。
しておく。もし必要があって遠方の検査センターへ送る
場合は、ただちに氷、あるいは人造米によって、採集し
た血液を０〜４°Ｃに冷やしておけば、３日間は検査の
ために保存することが可能である （口）電子スピン共鳴による診断法 （１）上に述べた方法で採集した血液を、生理的塩溶液
、例えば、１０８ｍＭ ＮａＣ１，５ｍＭ ＫＣｌ、
１．２ｍＭ ＭｇＣ１Ｚ、３０ａ＋Ｍグルコース、２．
４＋ｓＭリン酸、１ｍＭアデニン、１ｍＭイノシン、２
４ｍＭ重曹、ｐＨ７，４で二度洗浄し、ヘマトクリット
値２０％の懸濁液をつくる。
その懸濁液に、６ａｇ／ｄの１６−ドキシルステアリン
酸を加え４℃で１５時間放置する。
酸を加え４℃で１５時間放置する。
１５時間後、その血液を生理的塩溶液で二度洗浄し、ヘ
マトクリット３０％に再懸濁する。
マトクリット３０％に再懸濁する。
（２）ハロセンを加えないときの測定法ヘマトクリット
３０％の懸濁液を、細いガラス管（例えば、内径０．０
８ｍｍ、長さ１２０ｍｏ＋）の中に入れ、両端を熱によ
り封する。そして、軽く遠心し、赤血球を細いガラス管
の一端に集める。そのガラス管を電子スピン共鳴装置に
挿入し、３７°Ｃにてスペクトルをとる。スペクトルか
らＧＡＦＦＮＥＹの方法（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 ＾
ｃａｄ、 Ｓｃｉ：（ＵＳＡ）７２：６６４−６６８．
！９７５）により、回転緩和時間を計算する。
３０％の懸濁液を、細いガラス管（例えば、内径０．０
８ｍｍ、長さ１２０ｍｏ＋）の中に入れ、両端を熱によ
り封する。そして、軽く遠心し、赤血球を細いガラス管
の一端に集める。そのガラス管を電子スピン共鳴装置に
挿入し、３７°Ｃにてスペクトルをとる。スペクトルか
らＧＡＦＦＮＥＹの方法（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 ＾
ｃａｄ、 Ｓｃｉ：（ＵＳＡ）７２：６６４−６６８．
！９７５）により、回転緩和時間を計算する。
（３）ハロセンの影響をみる方法
ジメチルサルフオキサイド中に、蒸留したハロセンを３
００ｍＭ溶かした溶液をつくり、−２０°Ｃに保存して
おく。これを、ヘマトクリット３０％の懸濁液に３ｍＭ
になる様に加え、よく攪拌する１゜そして、（１）の方
法で、回転緩和時間を測定する。３ｍＭのハロセンを加
えた時、正常の場合は、はとんど回転緩和時間は減少し
ないが、悪性高熱症の場合は、大きな減少がみられる。
００ｍＭ溶かした溶液をつくり、−２０°Ｃに保存して
おく。これを、ヘマトクリット３０％の懸濁液に３ｍＭ
になる様に加え、よく攪拌する１゜そして、（１）の方
法で、回転緩和時間を測定する。３ｍＭのハロセンを加
えた時、正常の場合は、はとんど回転緩和時間は減少し
ないが、悪性高熱症の場合は、大きな減少がみられる。
表−１に示すように、ヒト、ブタとも回転緩和時間の減
少が、０．０３ Ｘ １０−’秒以下の場合は正常であ
り、０．０３Ｘ１０−”〜０．１０ Ｘ１０− ’秒の
場合は、悪性高熱症であった。
少が、０．０３ Ｘ １０−’秒以下の場合は正常であ
り、０．０３Ｘ１０−”〜０．１０ Ｘ１０− ’秒の
場合は、悪性高熱症であった。
表−１
（Ｃ）分光法による診断法
（１）室温において数時間放置した血液、あるいは、０
〜４℃で１〜３日間保存した血液を第１図に示すような
、光路（ｔ）０．１ａｕｓのキュベツトにいれる。
〜４℃で１〜３日間保存した血液を第１図に示すような
、光路（ｔ）０．１ａｕｓのキュベツトにいれる。
このキュベツトは平行する１対の辺を長尺にした全長（
ｑ）５０ ｍｍ、全幅（ｕ）１２ｔｒｍの大角形の２枚
のガラス製又は透明プラスチック製の板２と、この２枚
の板２の長尺方向両側部に介在して間隔を０．１ｎｎｎ
に保持する２枚のスペーサ１からなっている。その後、
キュベツトの両側を粘土によって塞ぎ、空気が入らない
ようにする。それから、このキュベツトを分光光度計に
挿入し、４５０〜６５０ｎｍの間で波長スキャンを行い
、吸収曲線を取る。
ｑ）５０ ｍｍ、全幅（ｕ）１２ｔｒｍの大角形の２枚
のガラス製又は透明プラスチック製の板２と、この２枚
の板２の長尺方向両側部に介在して間隔を０．１ｎｎｎ
に保持する２枚のスペーサ１からなっている。その後、
キュベツトの両側を粘土によって塞ぎ、空気が入らない
ようにする。それから、このキュベツトを分光光度計に
挿入し、４５０〜６５０ｎｍの間で波長スキャンを行い
、吸収曲線を取る。
第２図に示すように、正常では、５４２ｎｍの吸収より
も、５７８ｎｍのヘモグロビンの吸収の方が高く、一方
、第３図に示すように、悪性高熱症の血液のほうは、５
４２ｎｍの吸収よりも５７８ｎｍの吸収が低かった。
も、５７８ｎｍのヘモグロビンの吸収の方が高く、一方
、第３図に示すように、悪性高熱症の血液のほうは、５
４２ｎｍの吸収よりも５７８ｎｍの吸収が低かった。
５４２．５７８ｎｓの吸光度をそれぞれＬ及びＨとする
と、判定指数を、Ｍ＝（Ｌ−Ｈ）／Ｈで定義する。表−
２に示すように、Ｍが正数の場合は、悪性高熱症であり
、負数の場合はそうではなかった。
と、判定指数を、Ｍ＝（Ｌ−Ｈ）／Ｈで定義する。表−
２に示すように、Ｍが正数の場合は、悪性高熱症であり
、負数の場合はそうではなかった。
表−２
（２）第３図に示すように、５００ｎｍ付近の吸収の極
小点を求め、その波長をｍ ｎｍとする０判定指数Ｓを
、５＝４９５−ｔａで定義すると、上記の表−２に示す
ように、ヒト、ブタともＳが正の時は悪性高熱症であり
、Ｓが負の時は、正常であった。
小点を求め、その波長をｍ ｎｍとする０判定指数Ｓを
、５＝４９５−ｔａで定義すると、上記の表−２に示す
ように、ヒト、ブタともＳが正の時は悪性高熱症であり
、Ｓが負の時は、正常であった。
（ｄ）血液ガス分析装置を用いて、クエン酸を抗凝固剤
として、室温で数時間、或いは、０〜４℃で３日間以内
保存した血液のＰＨ、ＰＣＯ２、ＰＯ□を測定する。
として、室温で数時間、或いは、０〜４℃で３日間以内
保存した血液のＰＨ、ＰＣＯ２、ＰＯ□を測定する。
悪性高熱症では、平静時そも筋肉内の代謝が高い為に、
正常のものに比べて乳酸生成量が多い為に、ｐｉが低い
。又、酸素消費量が多い為に、ｐｃｏｚが高く、ｐｏｔ
が低い。従って、指数１ ＝ＰＣＯｇ／（ｐＨｘＰＯ□
）が正常のものより高い。ヒト、ブタで実験したところ
、表−３に示すように、正常では、■は２００以下、悪
性高熱症では２００以上であった。
正常のものに比べて乳酸生成量が多い為に、ｐｉが低い
。又、酸素消費量が多い為に、ｐｃｏｚが高く、ｐｏｔ
が低い。従って、指数１ ＝ＰＣＯｇ／（ｐＨｘＰＯ□
）が正常のものより高い。ヒト、ブタで実験したところ
、表−３に示すように、正常では、■は２００以下、悪
性高熱症では２００以上であった。
表−３
悪性高熱症の有無 ■
〔発明の効果〕
本発明は、従来のものと比べて、次の特徴をもつ。
（１）手術が不必要であり、簡単に採取出来る血液を用
いる。
いる。
（２）僅か４ｃｃの血液ですむので、小児の検査も出来
る。
る。
（３）分光光度計を用いる方法は、簡単で安価である。
（４）血液は０〜４°Ｃで５時間まで保存出来るので、
遠隔の検査センターまで血液を送って検査することが可
能である。
遠隔の検査センターまで血液を送って検査することが可
能である。
第１図は本発明の方法の一実施例で使用されるキュベツ
トの形状を示す図である。第２図は正常人の血液のそし
て第３図は悪性高熱症の患者の血液の吸収曲線の例をそ
れぞれ示す図である。
トの形状を示す図である。第２図は正常人の血液のそし
て第３図は悪性高熱症の患者の血液の吸収曲線の例をそ
れぞれ示す図である。
Claims (4)
- （１）被験者或いはブタより血液を取り出して、抗凝固
剤と混合し、スピンプローブにより赤血球膜をスピンラ
ベルして、電子スピン共鳴法で赤血膜の流動性に対する
ハロセンの影響を調べる方法であって、スピンプローブ
を用いて、膜の流動性を測定することを特徴とする悪性
高熱症の血液による診断法 - （２）被験者或いはブタより採取し抗凝固剤と混合した
血液を光学キュベットに移して、分光光度計で、ヘモグ
ロビンの５４２ｎｍをピークとする吸収と５７８ｎｍを
ピークとする吸収を測定することを特徴とする悪性高熱
症の血液による診断法 - （３）被験者或いはブタより採取し抗凝固剤と混合した
血液の５００ｎｍ付近での吸収の谷の波長を分光光度計
で測定することを特徴とする悪性高熱症の血液による診
断法 - （４）被験者或いはブタより採取し抗凝固剤と混合した
血液のｐＨ、ＰＣＯ＿２及びＰＣ＿２を血液ガス分析装
置で測定することを特徴とする高熱症の血液による診断
法
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/104,463 US4837163A (en) | 1987-10-02 | 1987-10-02 | Simple blood test for diagnosing malignant hyperthermia |
| US07/104,463 | 1987-10-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01158353A true JPH01158353A (ja) | 1989-06-21 |
Family
ID=22300618
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63248746A Pending JPH01158353A (ja) | 1987-10-02 | 1988-10-01 | 悪性高熱症の血液による診断法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4837163A (ja) |
| JP (1) | JPH01158353A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009094459A1 (en) * | 2008-01-22 | 2009-07-30 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Volatile anesthetic compositions comprising extractive solvents for regional anesthesia and/or pain relief |
| CN103575864A (zh) * | 2013-11-07 | 2014-02-12 | 合肥工业大学 | 一种韧性剪切带形成年代的界定方法 |
| AU2015200210B2 (en) * | 2008-01-22 | 2016-08-11 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Volatile anesthetic compositions comprising extractive solvents for regional anesthesia and/or pain relief |
| JP2017062239A (ja) * | 2011-07-13 | 2017-03-30 | ティー２ バイオシステムズ，インコーポレーテッド | 血餅形成をモニタリングするためのｎｍｒ法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1341094C (en) * | 1989-09-25 | 2000-09-05 | Ronald G. Worton | Diagnosis for malignant hyperthermia |
| US5242801A (en) * | 1990-08-06 | 1993-09-07 | University Of Iowa Research Foundation | Diagnosing malignant hyperthermia susceptibility by detection of abnormal proteolytic enzyme digestion fragments of the ryanodine receptor |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4362645A (en) * | 1978-09-28 | 1982-12-07 | Akzona, Inc. | Temperature indicating compositions of matter |
| US4260678A (en) * | 1979-02-23 | 1981-04-07 | Corning Glass Works | Determining creatine kinase isoenzmes via immobilized antibody-isoenzyme complexes |
| US4543359A (en) * | 1982-10-01 | 1985-09-24 | Eaton Laboratories, Inc. | Treating cardiac arrhythmias with dantrolene sodium |
| US4600696A (en) * | 1984-06-22 | 1986-07-15 | Solomons Clive C | Process and kit for determining blood platelet stress |
-
1987
- 1987-10-02 US US07/104,463 patent/US4837163A/en not_active Expired - Fee Related
-
1988
- 1988-10-01 JP JP63248746A patent/JPH01158353A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009094459A1 (en) * | 2008-01-22 | 2009-07-30 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Volatile anesthetic compositions comprising extractive solvents for regional anesthesia and/or pain relief |
| JP2011510091A (ja) * | 2008-01-22 | 2011-03-31 | ボード オブ リージェンツ， ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム | 抽出溶媒を含む、局部的な麻酔および／または疼痛低減のための揮発性麻酔薬組成物 |
| AU2009206390B2 (en) * | 2008-01-22 | 2014-10-30 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Volatile anesthetic compositions comprising extractive solvents for regional anesthesia and/or pain relief |
| AU2015200210B2 (en) * | 2008-01-22 | 2016-08-11 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Volatile anesthetic compositions comprising extractive solvents for regional anesthesia and/or pain relief |
| US9675544B2 (en) | 2008-01-22 | 2017-06-13 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Volatile anesthetic compositions comprising extractive solvents for regional anesthesia and/or pain relief |
| US10420720B2 (en) | 2008-01-22 | 2019-09-24 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Volatile anesthetic compositions comprising extractive solvents for regional anesthesia and/or pain relief |
| JP2017062239A (ja) * | 2011-07-13 | 2017-03-30 | ティー２ バイオシステムズ，インコーポレーテッド | 血餅形成をモニタリングするためのｎｍｒ法 |
| CN103575864A (zh) * | 2013-11-07 | 2014-02-12 | 合肥工业大学 | 一种韧性剪切带形成年代的界定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4837163A (en) | 1989-06-06 |
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