JPH01125327A - ヒト免疫不全ウイルスのエンベロープポリペプチドおよびその抗体 - Google Patents

Abstract

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め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、ヒト免疫不全ウィルスまたはＨＩＶ（ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ［１）のエンベロープ（ｅｎｖ）ポリペプチドの
使用に関し、さらに詳しくは、それらを望ましくない抑
制性の免疫応答およびその結果としての炎症に用いるこ
とに関する。また本発明は、ワクチン接種、ＨＩＶ感染
患者における治療、被検試料の診断的検定法、および他
の治療的指示を得るためにＨＩ　Ｖｅｎｖ変異体および
ＨＩ　Ｖｅｎｖの抗体を用いることに関する。とりわけ
、本発明は、自己免疫疾患および移植に伴う免疫抑制の
治療に関する。また本発明は、免疫毒性物質および他の
免疫抱合体（イムノコンジュゲート）およびそれらをＨ
ＩＶまたは細胞表面抗原をコードしている他のウィルス
類を死滅させるために用いることに関する。

発明の背景 様々な免疫異常に伴なう炎症性の応答は一般に４階級（
クラス）に分けることができる。しかしながら、本発明
の治療に含まれる多数の自己免疫疾患は、その起源が不
確かであるために分類が困難である（例、重症筋無力症
、グレーゲス病、シャガス病に起因する自己免疫疾患、
および若年型糖尿病）。クラス■応答はアトピーまたは
アナフィラキシ−を特徴とするレアギン性またはアレル
ギー性の反応である。クラス■応答は細胞毒性抗体に依
存性であり、例えば、自己免疫性溶血性貧血、および全
身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）に付随する血小板減少
症と関連している。クラス■応答は、ＩｇＧおよび／ま
たはＩｇＭを含有する免疫コンプレックス（複合体）の
慢性的な生成を特徴とする。

クラス■応答は遅延型過敏症反応と関連しており、サイ
トキン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）類およびＴ−リンパ球によ
って媒介され、一般に結核症、サルコイド−シス、多節
症、肉芽種および脈管炎に見出される。

慢性関節リウマチ（ＲＡ）は重篤なりラス■異常の１つ
である。溝膜炎はＲＡに特徴的な組織反応であり、そこ
では正常な薄い結合組織が過増殖した滑液性繊維芽細胞
で置き換えられ、溝膜がリンパ球、マクロファージおよ
び他の免疫細胞の浸潤によって侵されている。リウマチ
性滑液中では補体成分の逆転が増大し、補体の開裂生成
物、特にＣ５ａがリウマチ性滑液中に存在している。Ｃ
５ａおよび他の補体誘導体は免疫細胞の活性化および炎
症性サイトキンの生産に寄与しているので、このことは
重要である。滑液はまた、キニン（ｋｉｎｉｎ）および
ＬＴＢ４と一緒に、炎症細胞から導かれた加水分解酵素
（コラゲナーゼを含む）をも含有している。

慢性関節リウマチに特徴的な組織破壊の程度を明らかに
する様々な機構が提起されている。これらの機構は、Ｒ
Ａにおける炎症性応答の型および大きさを調節する活性
化および抑制の複雑な相互作用を含んでいる。これらの
機構にはアラキドン酸代謝物、特に白血球およびリウマ
チ性滑液によって産生されるグロスタグランジンＥ２、
ヒスタミンやセロトニンの如き生物活性アミン、補体の
分解産物、好酸球走化性因子、キニン、インターロイキ
ン、およびタンパク分解酵素、特にコラゲナーゼまたは
プロコラゲナーゼ活性化酵素が関与している。

ＲＡ誘発に関して一般に容認されている１つの仮定は、
ある不明の抗原が慢性的に溝膜に沈着し、そこでＡ型溝
膜細胞による食細胞作用を受けているということである
。Ｂ細胞は、抗原の供与に誘導されて形質球に分化し、
次いで、抗体、リウマチ因子およびサイトキンの生産が
導かれる。Ｔすンパ球の抗原による活性化はリンホカイ
ンの合成、幼若化、次いで、抗原に特異的なヘルパーお
よび細胞毒性Ｔ細胞の生成を引き起こす。抗体と抗原の
組み合わせ、並びに、抗体−抗原複合体とりウマチ様因
子との組み合わせ、あるいはリウマチ様因子の自己会合
（アソシエーション）がハーゲマン（）（ａｇｅｍａｎ
）因子の活性化を介して補体並びにキニン形成系を活性
化する。この結果、Ｃ５ａ、アラキドン酸代謝物、キニ
ンおよびフィブリノペプチド等のプロ炎症性産物が産生
され、それらが滑液中に、さらに溝膜血管に拡散する。

これらの物質は血管の透過性を増進させ、多形核白血球
およびマクロファージを引き付ける。多形核白血球は、
液中の多数の免疫コンプレックスを摂取し、リソソーム
性およびその他の破壊性酵素を放出し、過酸化陰イオン
を生成させる。これによって結合液中のヒアルロン酸ポ
リマーの破壊、および軟骨の損傷が起きる。溝膜でのサ
イトキン生産によって、マクロファージ、他の免疫細胞
、およびリウマチ性溝膜繊維芽細胞がさらに蓄積される
ことになる。

これらのセルタイプは全て、ＲＡの特徴である、免疫細
胞の補充サイクル、免疫媒体（例、サイドキン）の活性
化、および生産に寄与し、炎症状態を持続させ、組織を
破壊することができる。

滑液中に存在するか、または増殖性の溝膜病巣を構成す
る細胞によって滑液中に放出され、局所的に合成される
酵素は関節構造における病理学的事象に寄与しているの
で、結合空間の特異構造は重要である。軟骨破壊性のり
ソソーム酵素、即ち、コラゲナーゼおよびエラスターゼ
は主として炎症性細胞（免疫細胞およびリウマチ性溝膜
繊維芽細胞）から誘導される。染色細胞から放出される
タンパク分解酵素はコラーゲン細線維の交差結合の解除
に加担し、その結果、軟骨表面の破壊を助け、酵素によ
る破壊され易さを増進する。溝膜中のマクロファージは
プロスタグランジン、加水分解酵素、コラゲナーゼ、プ
ラスミノーゲン活性化因子、およびＩＬ−１を産生ずる
。マクロファージまたはりウマチ性溝膜繊維芽細胞によ
るコラゲナーゼ合成は、ＩＬＩまたは他の炎症性タンパ
ク質の存在によって大きく促進される。コラゲナーゼの
外、リソソーム性のタンパク分解酵素もプロテオグリカ
ンの集合物を分解し、これらの可溶成分は軟骨から放出
されると、その後の酵素による攻撃に対して敏感になる
。

抗原活性化の存続またはＴおよびＢ細胞の活性化におけ
る調節異常は、溝膜の慢性的な炎症性応答を招く。持続
的な細胞の増殖および流入は、溝膜を増殖させ、その周
辺構造への侵入を招く。コラゲナーゼ、ＰＧＥ類、加水
分解酵素類、およびサイトキン類の軟骨および骨への拡
散は、これらの組織のびらんを招く。このようにリウマ
チ様関節炎は遅延を過敏反応型の免疫応答によってもた
らされる慢性的な炎症性反応に起因する荒廃性の局所組
織破壊として表される。

今日のＲＡの治療はベツドでの安静、加温および投薬を
含む。サリチル酸塩は、現在入手可能な他の代替物、特
に免疫抑制剤およびアドレノコルチフステロイド類が根
本の疾患そのものよりも高い罹病率を示すことから、現
時点で好ましい薬物である。非ステロイド系の抗炎症性
薬物を用いることもでき、それらの多くはりウマチ様関
節炎患者において有効な鎮痛、解熱および抗炎症作用を
有する。それらにはインドメタシン、フェニルブタシン
およびイブプロフェンおよびフェノプロフェン等のフェ
ニル酢酸誘導体、ナフタレン酢酸（ナプロキセン）、ピ
ロールアルカン酸（トメチン）、インドール酢酸（サリ
ンダク）、ハロゲン化アントラニル酸（メクロフエナメ
ート　ソジウム）、ピロキシカム、ゾメビラック、およ
びディフルニサルが含まれる。一般にこれらはアスピリ
ンよりも有効でないと考えられているが、ある種の患者
においてはより耐容性に優れているかもしれない。

ＲＡに用い得る他の薬物にはクロロキン、金塩およびペ
ニシラミン等の抗マラリア剤が含まれる。

これらの代替物は網膜病変や腎臓および骨髄毒性を含む
重篤な副作用をもたらすことが多い。メトトレキセート
の如き免疫抑制剤は毒性があるので、重篤で非寛解性の
ＲＡの治療にのみ用いられる。

コルチコステロイド類もまた、望ましくない副作用をも
たらし、多くの患者が良く耐えることができない。

クラスＩ−ＩＶ応答に関連した慢性的な炎症性疾患また
は異常、とりわけ潰瘍性大腸炎（炎症性腸疾患）、ＲＡ
または５ＬＥ（全身性ユリテマトーデス）、重症筋無力
症、グレーゲス病、シャガス病、および若年期発生型糖
尿病に関連した免疫応答抑制の治療に有効な治療法およ
び組成物が必要とされている。

また本発明は、移植された細胞、器官または組織の、あ
るいはそれによる免疫拒絶反応の抑制に関する。移植に
おける拒絶反応は、シクロスポリン抗生物質またはステ
ロイド類のような免疫抑制剤を用いて制御されている。

そのような薬物は広範囲に及ぶ好ましくない副作用をも
たらす。

他の試みとして、移植拒絶反応に関連すると思われるリ
ンパ球サブセットを標的とし、それを中和するモノクロ
ーナル抗体が用いられている。これらの抗体はネズミ起
源である。ネズミのモノクローナル抗体の場合、それら
抗体の標的であるリンパ球サブセットに対する親和性効
果は低いのが普通である。また、それらは、治療をうけ
た患者のネズミ感受性を高める危険性を有しており、ネ
ズミの不変領域はヒト補体を活性化し得るので、抗Ｔサ
ブセット抗体は、Ｔ細胞を溶解し消耗させるおそれがあ
る。ネズミイムノグロプリンを用いない、組織移植にお
ける拒絶反応の治療のための組成物および治療法が必要
とされている。

後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）はヒト免疫不全ウィ
ルス（ＨＩＶＸＩ−６）として同定されているレトロウ
ィルスによって引き起こされる。Ｂ細胞機能の異常、抗
体応答の異常、単球機能の損傷、サイト力イン生産の損
傷（７−１０）、天然のキラー細胞および細胞毒性細胞
の機能の抑制（１１）、および可溶性抗原を認識し、応
答するリンパ球機能の低下（１２）等、ＡＩＤＳに関連
した多くの免疫異常に関する報告がある。その他のＡＩ
ＤＳ関連免疫異常も記載されている（１３．１４）。Ａ
ＩＤＳ患者におけるより重大な免疫損傷は、Ｔ４ヘルパ
ー／インジューサーリンパ球の消耗である（１、２．９
．１０）。

ＡＩＤＳにおける免疫不全は詳しく観察されているにも
拘わらず、免疫不全の機構（類）は明確に理解されてい
ない。幾つかの仮説がある。１つの認められている説は
、免疫応答における損傷の原因は、ＨＴＶが選択的にヘ
ルパーＴ細胞に感染し、その結果ヘルパーＴ細胞の機能
が損傷され、終局的に正常な免疫応答に必要な細胞の消
耗を招くことにあるというものである（１−６．１５）
。最近、インビボおよびインビトロでの研究により、免
疫応答において副細胞として不可欠な役割を果たすこと
が知られている半球細胞にもＨＩＶが感染することが分
かった（１６．１７）。ＨＩＶは、感染した細胞におけ
る正常なサイト力インの生産を妨害し、ＩＬ−１および
ＩＬ−２欠損のような二次的な免疫不全をもたらすこと
によっても免疫不全を引き起こす（１８）。その他のＨ
ＩＶによる免疫不全誘導は、免疫応答を抑制し得る因子
の生産にある（１９）。これらのモデルのどれも、複製
型ウィルスではなくＨＩＶ成分それ自身がＡＩＤＳ関連
の免疫異常に関与しているか否かを解決するものではな
い。

ＨＩ　Ｖｅｎｖタンパク質については広範な記述があり
、多数のＨＩＶ株由来のＨＩ　Ｖｅｎｖをコードしてい
るアミノ酸およびＲＮＡ配列も知られている（３４）。

ＨＩＶピリオンは宿主細胞の外膜から導かれた膜または
エンベロープによって被われている。この膜には、該膜
の脂質二重層にそのカルボキシ末端領域を介して固定さ
れた（アンカー）エンベロープ糖タンパ、り質（ｇｐ１
６０）類が含有されている。各糖タンパク質は２つのセ
グメントを含んでいる。その相対分子量が約１２０ｋＤ
であることに基づいてｇｐ１２０と称されるＮ末端セグ
メントは、ピリオンを囲む水性の周囲環境に突出してい
る。ｇｐ４１と称されるＣ末端セグメントは膜内にわた
っている。ｇｐ１２０８よびｇｐ４１は特にタンパク分
解的に開裂され易いペプチド結合によって共有結合して
いる。本発明の目的に照らし、ＨＩＶｅｎｖは、例えば
ｇｐ１６０またはｇｐ４１のＮ末端′フラグメンと融合
したｇｐ１２０の如き融合物、様々にグリコジル化され
ている、またはされていないＨＩ　Ｖｅｎｖ、並びにＨ
Ｉ　ＶｅｎｖのＴ細胞結合フラグメン等、あらゆる形の
ｇｐ１２０を包含するものとする。ＨＩ　Ｖｅｎｖおよ
びその変異体は、組換え培養により、常法通り調製され
る（欧州特許公開第１８７０４１号参照）。以前には、
組換え細胞培養によって得られたｇｐ１２０をｒｇｐ１
２０と称していた。安全性および経済性の理由から、組
換え合成が好ましいが、ウィルス培養物からのＨＩＶｅ
ｎｖ精製物およびそのようなｅｎｖ製剤もＨＩＶｅｎｖ
の定義範囲に含まれることは既知である。

現在の非感染細胞の保護を目的とするＡＩＤＳ治療法は
、約４時間ごとにウィルスＲＮＡの複製を阻止し得るヌ
クレオシド類似体（ＡＺＴおよびＤＤＣ等）を経口投与
することからなる。これらの薬物は５０−５００μＭの
濃度でウィルス複製を阻止するが、より高濃度（−１ｍ
Ｍ）では、健常な細胞の、細胞分割に必要なりＮＡポリ
メラーゼをも阻害する（ミツヤおよびブローダー、１９
８５）。

現行の治療法には非常に大量（Ｉｇ／ｄａｙまでも）の
薬物投与を必要とする。薬物は経口摂取され、全細胞に
吸収される剤形なので、全身がその薬物にさらされてい
ることになる。その使用は毒性によって極めて制限され
ている。もっとも重篤な副作用の１つは貧血である。ヌ
クレオシド誘導体がＤＮＡに組み込まれる（そしてその
鎖破壊□作用を現す）には、先にりん酸化されている必
要があり、それには、ウィルスに感染し易い細胞膜てが
等量含有しているとは限らないキナーゼが要求される。

従って、既に感染している細胞には無効であるヌクレオ
シド類似体の経口投与治療は、高濃度のヌクレオシドを
ヌクレオチドに変換し得る、感染のおそれある細胞（即
ち、分割細胞）のみを保護することができる。このよう
な理由から、この治療法には限界があり、疾患の進行を
遅らせるにすぎない。

少なくとも２種類の免疫系細胞（単球細胞および１９２
３球）がＨＩＶ（ヒト免疫不全ウィルス）の感染を受け
る（ストライヒャー、１９８６）。ＣＤ４リセブターを
有する単球およびＴ細胞のみがＨＩＶに感染すると考え
られていた（マッコピーガルら、１９８６）。ＨＩＶウ
ィルスのコートタンパク質の保存領域（ｇｐ１６０）は
、インターナリゼーションを行い、ＲＮＡウィルスを細
胞内に移行させるＣＤ４リセプターと結合する。細胞内
に入ると、ウィルスがその逆転写酵素によってＲＮＡの
ＤＮＡコピーを細胞内で作る。ヌクレオシド類似体は、
ウィルスＲＮＡ転写における鎖ブレーカ−として作用し
て細胞を保護する。それらは生長中のポリマーに取り込
まれるが次のヌクレオシドをポリマー中に取り込むのに
必要な官能基を有していないので、鎖は中断され、機能
を持たないことになる。

ヌクレオシド類似体が核酸の鎖に取り込まれるためには
キナーゼによってりん酸化されている（ヌクレオチドに
変換されている）必要がある（ファーマンら、１９８６
）。迅速に分割し得るＴ細胞はＡＺＴやＤＤＣのような
抗ウイルス製剤をりん酸化するキナーゼを高レベルで含
有している。特殊な環境においてのみ分割する単球は比
較的低レベルでキナーゼを有しており、ヌクレオシド誘
導体による感染からの保護を受けない。りん酸化形のヌ
クレオチド類似体の投与は半溶液で行なわれる。

しかしながら、これらは細胞膜を通過しない。従って、
現行のヌクレオシド類似体による治療は単球をＨＩＶ感
染から保護する点では無効である。

ライアリ−ら（ＬｙｅｒｌｙＸＰ　Ｎ　Ａ　Ｓ　８４．
４６０１（１９８７））は、ｇｐ１２０と結合した非感
染Ｃ＋ Ｄ４　リンパ球は、天然のａｐ１２０に対して惹起され
たヤギ血清による、抗体依存性の細胞性細胞毒性の標的
となることを示した。しかしながら、ｇｐ１２０吸着細
胞と結合するヒト血清は補体存在下で、その破壊作用を
現さなかった。対照的に、これらの血清は抗体依存性の
細胞性細胞毒性作用を強力に仲介する。

ＨＩＶにコードされているタンパク質に特異的なモノク
ローナルおよびポリクローナル抗体が開発された（例、
ＰＣＴ／ＷＯ３６１０Ｏ２１７）。

リチントキシンのＡ鎖（ＩＴ−Ａｓ）と結合している細
胞反応性抗体からなる免疫毒性物質（ＩＴｓ）が、種々
の標的腫瘍細胞を特異的に死滅させるために用いられた
。クロツグら（カンサーリサーチ、４６（７）、３２９
５（１９８６））は、インターロイキン■リセプターの
モノクローナル抗体とりチンＡ鎖との抱合体（コンジュ
ゲート）がＨＴＬＶ−１感染白面球Ｔ細胞を死滅させた
ことを開示している。クロツグ、「ブラッドＪ６５（６
）、１４１６（１９８５）をも参照。

ショウパルら（米国特許第４．７１４，６１３号）は、
表面にＢ型肝炎表面抗原を発現する（ここで、表面抗原
はＨＢＶのＤＮＡにコードされている）Ｂ型肝炎ウィル
スに感染した肝細胞または肝細胞腫細胞の増殖を抑制す
る方法を開示した。ショウパルらの方法は、感染細胞に
、Ｂ型肝炎表面抗原に対するモノクローナル抗体を固定
している補体を投与することからなる。

即ち、本発明は免疫性炎症疾患の改良された治療法を提
供することを目的とするものである。

また本発明は、副作用が減少されたＡＩＤＳの改良治療
法に関するものである。

また本発明は、その細胞表面にコードされたウィルス性
抗原を発現する、非腫瘍原性細胞を死滅させる方法を提
供するものである。

本発明のその他の目的、特徴および特性は以下の記述お
よび特許請求の範囲の記載を考察すれば明らかとなるで
あろう。

発明の要約 ＨＩ　Ｖｅｎｖは免疫炎症性の応答および疾患の治療に
有用であり、本発明の目的は免疫炎症性応答を示す患者
に該免疫炎症性応答を抑制するのに十分な量のＨＩ　Ｖ
ｅｎｖ製剤を投与することからなる。

本発明の１態様で用いるＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖポリペプチド
は、Ｔヘルパー細胞のＴ４細胞表面マーカーとの結合に
寄与する、ＨＩ　Ｖｅｎｖのポリペプチド部分である。

ＨＩ　Ｖｅｎｖ配列のこの部分は、ＴＣＢドメインと呼
ばれ、残基４００から４６５を含む、予想外の領域に位
置していた。様々な類似体を含めて、ＨＩＶｅｎｖのＴ
ＣＢドメインも免疫性炎症の治療に有用である。ＴＣＢ
ドメインは、患者から得た試料中のＴＣＢドメイン中和
抗体の診断的アッセイにも有用である。

機能的なＴＣＢドメインを除去されたＨＩＶｅｎＶはＨ
ＴＶ感染に対する免疫を得るためのワクチンとして有用
である。

本発明はＴＣＢドメインの１領域に特異的なモノクロー
ナル抗体を提供するものである。この抗体はＴ４細胞表
面マーカーと結合するＴＣＢドメインの配列に隣接して
存在するエピトープに対するもののように思われる。こ
のことは、この抗体が、おそら＜Ｔ４細胞表面抗原上の
ＴＣＢドメイン結合部位に該ドメインが近付くことを立
体的に阻害することによって、組換えｇｐ１２０とＴ４
細胞表面マーカーとの結合を、少なくとも部分的に遮断
することができるということによって示される。またこ
の抗体は、さらにＨＩＶ感染患者で免疫抑制作用を現す
あらゆる遊離のＨＩＶｅｎｖと結合し得るという利点を
有することから、ＨＩＶ感染患者の受動免疫にも有用で
ある。

本発明はｇｐ１６０または他のウィルスにコードされて
いるタンパク質と特異的に結合する千ツクローナル抗体
、および該モノクローナル抗体に結合しているリチンＡ
鎖のような毒素とを含有する免疫毒性物質を、ウィルス
にコードされているタンパク質を標的として提供するも
のである。従って、毒性コンジュゲーと結合しているタ
ンパク質がヘルパーＴ細胞のような感染細胞に取り込ま
れるだけで、その細胞を死滅させる。また本発明は、細
胞表面で、ウィルスにコードされているｇｐ１６０のよ
うなタンパク質と特異的に結合する毒素と結合したモノ
クローナル抗体を含有する免疫毒性物質を、治療有効量
で患者に投与し、感染細胞を死滅させることからなる、
ウィルスに感染した細胞を死滅させる方法を提供するも
のである。

ＨＩ　Ｖｅｎｖまたはその免疫抑制フラグメント（ＴＣ
Ｂドメインを含む）を、それに対する細胞毒性Ｔ細胞の
細胞溶解性応答が望まれる細胞の細胞集団と結合し得る
ハプテンまたはポリペプチドと抱合体を形成させた。こ
れらの抱合体は抗腫瘍剤として、またはアレルギー性応
答の治療に特に有用である。

発明の詳しい記述 上記の如く、ＨＩ　Ｖｅｎｖを、ヒト免疫不全ウィルス
のエンベロープタンパク質、およびインビトロにおける
、その免疫抑制性のアミノ酸配列変異体およびＨＩ　Ｖ
ｅｎｖまたはその変異体の共有結合的な修飾で得られた
誘導体であると定義する。変異体には、ｅｎｖアミノ酸
配列配列、■またはそれ以上の残基が置換されたもの、
ｅｎｖ配列の１またはそれ以上の残基を欠失したもの、
およびそこに１またはそれ以上の残基が挿入されたもの
が含まれる。

本発明目的の主要な欠失変異体は、ＴＣＢドメイン以外
の免疫エピトープが欠失されているか、逆にＴＣＢドメ
インが欠失されＨＩ　Ｖｅｎｖの残余のエピトープが残
存している変異体である、これらの欠失変異体を、置換
変異体と同様、以下に詳しく説明する。他のクラスに属
する変異体は、ＨＩＶｅｎｖ配列またはその免疫抑制性
フラグメント（例えばＴＣＢドメイン）のアミノ末端ま
たはカルボキシ末端にＨＩ　Ｖｅｎｖにとって異種の（
ヘテロローガスな）ポリペプチドが融合しているもので
ある。

別法として、ｌ（Ｉ　ＶｅｎｖまたはＴＣＢドメインを
、異種ポリペプチドまたはハプテンと共有結合的に結合
させる。その他のクラスのＴＣＢドメイン変異体は、Ｔ
ＣＢドメインを、天然のＨＩ　Ｖｅｎｖ内で、正常な状
態ではＴＣＢドメインと境界を接していないＨＩＶ免疫
エピトープであって、特にＴＣＢドメインのＣ末端と境
界を接している式：ＦＲＰＧＧＧＤＭＲＤＮＷＲ３ＥＬ
ＹＫＹＫＶで示される配列以外のエピトープと融合させ
て得られる変異体である。

ＨＩｖｅｎｖのＴＣＢドメイと免疫原性ハプテンまたは
ポリペプチドとの融合物は、患者をＨＩＶ感染に対して
免疫するだめのワクチンの成分として有用である。ハプ
テンまたは異種ポリペプチドとＨＩ　Ｖｅｎｖまたはそ
の活性フラグメントとの融合物は、ハプテンまたは異種
ポリペプチドが標的細胞の表面リセブターまたは他の結
合パートナ−と結合し得る場合、それを標的細胞とする
細胞毒性Ｔ細胞を目的とする場合に有用である。例えば
、膜結合性の形質転換成長因子−α（ＴＧＦ−α）は、
多くの固形（非造血性）悪性腫瘍の表面に存在している
。ＴＧＦ−αと結合し得る抗体は分かっている。そのよ
うな抗体とＨＩ　ＶｅｎｖまたはそのＴＣＢドメイン含
有フラグメントとを、例えば共有結合的交差結合（３３
）によって結合させることにより、または組換え細胞培
養によってＨＩ　ＶｅｎｖまたはそのＴＣＢドメイン含
有フラグメントのＮ末端またはＣ末端融合物として発現
させることにより結合させる。後者の方法は、ＥＰ１２
５．０２３Ａに記載の一般的手法に従い、ＴＧＦ−α抗
体をコードしているＤＮＡを得ることにより、達成され
る。このＤＮＡを、適当なアダプターを用いてａｐ１２
０またはそのＴＣＢドメインを含有しているフラグメン
トのアミノまたはカルボキシ末端とライゲートさせ、Ｅ
Ｐ１８７．０４１Ａに記載されているような哺乳類細胞
発現ベクターに挿入し、得られたベクターを用いてＣＨ
Ｏ細胞、その他ＥＰ１８７，０４１Ａに記載されている
ような適当な宿主細胞を形質転換する。所望により、Ｔ
＝３２＝ ＧＦ−α抗体の可変領域をコードしているＤＮＡを、Ｅ
Ｐ１８４．１８７、ＥＰ　ｌ　９４，２７６Ａ。

ＥＰ１７１，４９６ＡまたはＢｏｕｌｉａｍｎｅらの文
献（３２）に記載のヒト不変領域の代わりにＴＣＢドメ
インをコードしているＤＮＡとライゲートさせる。

得られた融合物を、例えば、固定化したＴＧＦ−αまた
はＴＧＦ−α抗体の不変領域が保持されている場合には
、固定化された、該不変領域に対する抗体に吸着させる
ことにより回収し、治療上許容し得るビヒクル（例えば
生理食塩水）で製剤化し、ＴＧＦ−α発現性腫瘍を有す
る患者に投与する。

この融合物は、細胞毒性Ｔ細胞を、ＴＧＦ−α細胞表面
抗原を有する腫瘍に向かわせ、その結果、腫瘍細胞を溶
解させる。同様に、゛患者が、例えばアレルギー性の、
または移植後の拒絶反応の発現のような望ましくない免
疫応答を来している抗原とＴ（，１３ドメインとを融合
させ、自己免疫性細胞毒性Ｔ細胞の応答を望ましくない
応答に寄与するクローナル細胞に向けさせるに十分な用
量で患者に投与する。

ＨＩ　ＶｅｎｖのＴＣＢドメインはＥＰ１８７．０４１
Ａに記載のＨＩＶ株の、ヌクレオチド約７００６から約
７２０３に至る領域、または他のＨＩＶ株での同等な領
域を含んでいると考えられている（上流での欠損または
挿入によってウィルスゲノムおよびＨＩ　Ｖｅｎｖの長
さが変化している他の株では、同じヌクレオチドおよび
アミノ酸残基番号を得ることはできないが、各株におい
てＴＣＢドメインのこの部分をコードしている領域は、
アミノ酸配列の相同性（ホモロジー）に基づいて用意に
同定し得る）。ＴＣＢドメインは、式：％式％ で示される配列を有し、特に残基４１１−４５４．４１
６−４４３、および４４０−４４２の間に含まれる配列
を包含する。下記の表１は、複数のＨＩＶ株に由来する
ＴＣＢドメインのアミノ酸配列を、右の欄の「起源」の
下方に示し、予め定められた変異体ＴＣＢドメインを左
の欄に示した。「△３」で示される変異体（変異体ｌ）
により、ＨＩＶのＴＣＢドメインのこの部分を同定する
ことができる。部位特異的なＭ１３突然変異誘発によっ
てｒｇｐ１２０の△３残基を欠失させ、この変異体を他
の点ではＥＰ１８７，０４１に記載の如く組換えＣＨＯ
細胞培養において発現させると、選択したＡＩＤＳ患者
の血清による結合等によるアッセイに基づいて、ｒｇｐ
１２０とは区別し得ないにもかかわらず、ｒｇｐ１２０
のＴ４結合能力が失われていた。　驚くべきことに、表
１に示されているようＩこ、△３領域の欠失は、他のＨ
ＩＶ株に由来するホモローガスな配列との比較から認め
られるように、多くのＨＩＶ株においてＢＨＩＯよりも
高度に保存的ではなく全体としてＴＣＢドメインは極め
て変化し易いことを特徴とするＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖ領域を
含有していることが分かる（３４）。高度の保存性を有
する領域のみが、ウィルスが常にＴ４リセプターを認識
し、その結果受容宿主細胞に影響を及ぼすことを確かめ
るのに適した確実性を有すると考えられていた、がこの
仮説は本研究では通用しなかった。例えば、残基５−３
１が様々なＨＩＶ株において高度に保存的であるにもか
かわらず、ＨＩ　Ｖｅｎｖのアミノ末端から最初の２９
残基の欠失はｒｐｇ１２ＱのＴ４への結合になんらの影
響をも及ぼさなかった。

＝３６一 第１表に於いて番号２−１５で示した変異体を改良する
：即ちｒｇｐ１２０のＴ４結合性を排除させる。例えば
、４３１位に於けるアラニンをアスパラギン酸と置換さ
せると、変異体の結合性が、天然の配列を有するｒｇｐ
１２０が示す結合性の約１０−１５％にまで減退した。

しかし、本発明者らの検定では、Ｉｙｓ４３０をグルタ
ミン酸と、ｔｙｒ４３３をフェニルアラニルと、及びｐ
ｒｏ４３５　ｐｒ。

４３６をバリルバリルと置換させても、検出できるｒｇ
ｐ１２Ｑ結合性に何の変化も起こさなかった。

従って、個々の変異体の活性を測定して、常法である検
定法によってそれをスクリーニングすべきである。Ａｌ
ａ４３１残基の役割から見て、この部位に於ける置換、
欠失又は挿入が特に好ましく、これには、ヒスチジン、
トリプトファン、プロリン、フェニルアラニン、グリシ
ン、ロイシン、インロイシン、メチオニン、バリン、セ
リン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギ
ン、リジン、グルタミン酸、システィン及びアルギニン
との置換、又はこのような残基若しくはＡｌａ４３１に
隣接しているアスパラギン酸の挿入が包含される。上記
の変異体及び△３変異体は、診断用検定又はワクチンに
使用できるＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖ抗原を調製する上で有用で
ある。ＴＣＢドメインを含まないＨＩ　Ｖｅｎｖは免疫
抑制作用を示さないばかりか、所望の数の残存性ｇｐ１
２０エピトープを保持しているので、ワクチンとして特
に有用であり、従ってこれは、抗−ＨＩＶのより高い力
価及びこの力価の延長を導く。他の変異体は、当業者に
とっては明白に理解できるであろう。例えば、ＨＩＶｅ
ｎｖアゴニストとして機能する変異体を同定するため、
置換を残基４１６−４４２内に起こす。また、欠失又は
挿入をＴＣＢドメイン内に導入し、アゴニスト活性を評
価できる。本明細書に於いて使用する「アゴニストｊな
る用語は、変異体のＨＩＶｅｎｖ活性が天然の分子と比
較して高められること（例えば変異体が、天然のＨＩ　
Ｖｅｎｖよりも高いＴ４に対する親和性を示すこと）を
意味している。しかし、この活性は、ＨＩｖによる感染
に対してはアンタゴニスト（拮抗的）であることは理解
できるであろう。ＨＩ　Ｖｅｎｖアゴニスト類似体は、
無傷又は天然のＨＩ　Ｖｅｎｖに関して既述した態様と
同様に望ましくない免疫炎症を治療する上で有用な物質
である。アゴニスト類似体は、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊
死因子β、インターフェロン及び／又は、ＡｚＴなどの
ＨＩＶ感染症の治療に有用な他の治療剤と共に任意に使
用し、ＡＩＤＳ又はＡＲＣ患者のＨＩＶ感染を治療する
のに投与される。

ＨＩ　Ｖｅｎｖアゴニスト活性は、Ｔ４レセプターへの
結合性に関し、標識化ｒｇｐ１２０若しくは天然のｇｐ
１２０、又はフルオレセインイソシアネート・コンジュ
ゲート抗−Ｔ４Ａ抗体と競合するそのアゴニスト能を測
定することによって以下の実施例に於いて説明している
蛍光励起細胞分離捕集装置（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃｅｌｌ　５ｏｒｔｅｒ　ｓｙ
ｓｔｅｍ）で測定する。ＰＥＭＣに於いて、Ｔｍ胞結合
性に対して標識化コンジュゲート体と競合する変異体候
補に係るこの能力は、その活性の１つの目安である：変
異体に於ける、Ｔ４結合部位に対する標識化コンジュゲ
ート体との競合性が増大するに連れ、変異体のアゴニス
ト活性が増大する。

ＨＩ　ＶｅｎｖＴ　ＣＢドメイン又はその変異体を、そ
れ自体既知の方法で調製する。１つの方法は、メリフィ
ールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）合成などのイン・ビト
ロ操作法によってＴＣＢドメインを合成することである
。もう１つの方法は、組換え細胞培養法でそのドメイン
を調製することである。従来からのイン・ビトロ法によ
ってそのドメインをコードしているＤＮＡを調製し、適
当な５″及び３″アダプター又はリンカ−を作成して細
菌発現のための通常のベクターにライゲートすることを
容易ならしめることが実際的である。この１つの好まし
い態様では、このドメインをコードしているＤＮＡの５
′末端に、宿主によって認識されるシグナル配列をコー
ドしているＤＮＡをライゲートする。

このようなシグナルは周知であり、例としてはＳＴＩ工
、アルカリホスファターゼ、ｌｐｐ及びペニシリナーゼ
・シグナルが挙げられる。ある種の異種シグナル例えば
哺乳動物又は酵母シグナルも、細菌によって認識される
。このようなシグナルをコードしているＤＮＡは長さが
約４５から７５ヌクレオチドにすぎないので、これを調
製してＴＣＢドメインをコードしているＤＮＡの５′末
端にそのシグナルＤＮＡをライゲートし、得られた融合
遺伝子を従来からのベクター例えばＩ）ＢＲ３２２内に
ライゲートして宿主大腸菌（Ｅ、ｃｏｌ　ｉ）に形質移
入し、その細胞を培養すれば、宿主細胞の周縁質に分泌
されるＴＣＢドメインの量を測定できるであろう。ある
いは、このＴＣＢドメインを、組換え細胞培養法で、分
泌性又は非分泌性の融合物として合成し、これを回収す
る。

ＴＣＢドメインを阻害又は結合できる抗体は、Ｂａ１ｂ
／ｃ又は好ましくはＣ５７ブラツク／６などのマウスを
ｇｐ１２０に対して免疫し、ｇｐ１２０と前インキュベ
ートし、た時にＴ４Ｔ細胞マーカーに対する結合性を妨
げるクローナル抗体をスクリーニングすることによって
得られる。５Ｃ２Ｅ５抗体はこのような抗体の一例であ
るが、質的に同じ活性を示す他の抗体が本明細書に記載
の方法によって得られることからこれは特異なものでは
ない。「質的」な活性なる用語は、抗体がＨＩＶｅｎＶ
のＴ４結合部位又は両側領域に結合することを意味し、
後者の場合が、Ｔ４部位にｒｇｐ１２０又はＨＩ　Ｖｅ
ｎｖが結合することを立体的に阻害するような結合であ
る。４４残基のＴＣＢドメインをトリプシン消化するこ
とにまり、５Ｃ２Ｅ５抗体が、残基４２０−４３０にま
たがっている（ｓｐａｎｎｉｎｇ）ペプチドに結合する
ことを確認した。従って、このドメインはＴＣＢドメイ
ンに包含されているか、又はそれに隣接しているもので
ある。この５Ｃ２Ｅ５抗体は、ｇｐ１２０で免疫したマ
ウスから回収した、ネズミＢ細胞との１から５００個の
骨髄腫融合物中に見いだされた。もうひとつの阻害抗体
は７Ｆｌｌであり、これは残基４３０−４５９にまたが
っているペプチドに結合する。

抗体５Ｃ２Ｅ５のＴＣＢドメイン結合性は、ヘルパー・
リンパ球のＴ４レセプターに対するｒｇｐ１２０の結合
性に於ける阻害能として特定される。

このような作用を示すことのできる、５Ｃ２Ｅ５以外の
モノクローナル抗体は、親和性、免疫グロブリンのクラ
ス、起源の種又は正確なＴＣＢ配列が異なっていても、
この特定の範囲内に属するものであり、例えば、組換え
細胞培養に於いて発現される抗体又はアミノ酸配列があ
らかじめ決められている５Ｃ２Ｅ５抗体の変異体例えば
５Ｃ２Ｅ５抗体の可変領域とヒト定常領域とのキメラが
挙げられる。

本明細書に於いて説明する抗体は、従来、保存血漿由来
のＩｇＧ又はＩｇＭを精製するために用いられてきたよ
うなこれらの免疫グロブリンの通常の精製方法、例えば
エタノール又はポリエチレングリコール沈澱法によって
ハイブリドーマ細胞培養物から回収される。このように
精製した抗体を滅菌濾過し、要すればＡＩＤＳ治療に使
用できるリチンなどの細胞毒性物質とコンジュゲートさ
せるか、又は被検試料中のＨＩＶ診断検定に使用できる
酵素若しくはスピン標識などの検出可能なマーカーにコ
ンジュゲートさせる。

免疫毒性物質（イムノトキシン）の新たな適用例を発見
した。驚くべきことに、非腫瘍化ウィルスに感染された
細胞のウィルス誘導性の表面抗原に特異的に結合する免
疫毒性物質が、その感染細胞を死滅させることを見いだ
した。詳細には、ｇｐ１６０結合性の免疫毒性物質はＨ
ＩＶ感染細胞を死滅させる。

以下に、既に感染され、新たなウィルスを活発に産生じ
ている細胞を死滅させるように意図した処置について説
明する。死滅は、感染細胞上に発現されるウィルス被覆
タンパク質に結合する免疫毒性物質によって為される。

従って、この免疫毒性物質が細胞にインターナライズ（
ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｅ）され、細胞を死滅させる。ウ
ィルスのゲノムがＤＮＡに組込まれているが、ウィルス
タンパク質を合成していない感染細胞（即ち、そのウィ
ルスが潜在性である細胞）は、ウィルスの合成を開始す
るまで免疫毒性物質による死滅化を受けないかもしれな
い。

ウィルスを活発に産生じている、ＨＩＶに感染された細
胞が、その原形質膜上にウィルスのコートタンバク質（
ｇｐ１６０）を発現することを発見した。この分子は、
感染細胞を標的にし、死滅させるのに使用することので
きる感染細胞特異性の抗原を代表する。ｇｐ１６０上の
保存領域に特異的なモノクローナル抗体（株依存性）は
、感染細胞に毒性物質を運搬するための攻撃化分子とし
て使用することができる。更に、あるいはこれに代わっ
て、非保存領域に対する免疫毒性物質の［カクテル（ｃ
ｏｃｋｔａｉｌ）Ｊが使用される。更に、毒性物質−抗
体のコンジュゲート体は、循環性のウィルス又はウィル
スのコートタンパク質に結合することができ、従ってこ
れにより、ウィルス又はコートタンパク質をインターナ
ライズしている細胞を死滅させることができる。

本発明の目的は、ＨＩＶ感染細胞を破壊するための高度
に選別された方法を提供することである。

これらの抗体は、感染されていない場合の細胞には存在
しない抗原に特異的に結合するので、本発明の方法は、
抗体が、破壊されるべき細胞を非常に正確に攻撃するこ
とを許容している。抗原の損失を招き、耐性を発生させ
る免疫コンジュゲート体による腫瘍治療とは異なり、活
発なウィルス感染に伴う、抗原の発現は常に起こる。

本発明の実施に関し、特定の理論を強いて説くつもりは
ないが、感染細胞表面上の標的抗原の発現は一過性であ
ると考えられる。この抗体は、抗原が存在し、それと相
互作用を起こすところである、細胞表面上の部位に到達
できなければならない。抗体が抗原と複合化した後に、
飲食作用（エンドシトシス）が起こり、毒性物質が細胞
内に運ばれる。

免疫毒性物質は、ＨＩＶウィルスによって感染された単
球／マクロファージを死滅させるのに特に有用である。

Ｔ細胞からの一過性のウィルス産生とは対照的に、マク
ロファージは高レベルのウィルスを長時間産生ずる。通
常行われている治療は、これらの細胞に於ける新たなウ
ィルスの産生を阻害するには非能率的である。

ｇｐ１６０に特異的なモノクローナル抗体のすべてが必
ずしも、リチンＡ鎖にカップリングさせた場合（ｒＴ−
Ａ）に、高レベルの細胞毒性免疫毒性物質を創製しない
。ＩＴ−Ａの部分体として機能する抗体の能力を予測す
るのに採用される検定を行った。この検定を行い、各種
の抗−ＨＩＶ抗体を、ＨＩＶ−感染細胞に対して有効な
Ｉ　Ｔ−Ａの創製能力ｌこ関し、スクリーニングした。

この結果は、ある種のＨＩＶ−特異的抗体のみが、有効
なＩＴ−Ａｓを創製することを示している。これらの抗
体を精製し、リチンＡ鎖にカップリングさせ、これを使
用してＨＩＶ−感染細胞を特異的に死滅させる。都合が
良いのは、これらの抗体が幾つかの（又はすべての）Ｈ
ＩＶ株と交叉反応することである。

免疫毒性物質は、様々な方法によって調製することがで
きる（詳細は下記参照）。幾つかの交叉連結試薬を使用
し、コンジュゲート体を調製し、安定なコンジュゲート
体を得ることができる。

好ましい態様は、リチンＡ鎖を脱グリコジル化するか、
又はオリゴサツカロイドを用いずに調製し、無関係なり
リアランスのメカニズムによって−４８〜 そのクリアランスを減少させる（即ち、肝）。他の態様
は、Ｂ鎖に於けるガラクトース結合能を阻害できる場合
（「阻害リチン」）には、全リチン（Ａ鎖十Ｂ鎖）を抗
体にコンジュゲートする。

更に、毒性物質−コンジュゲート体はＦａｂ又はＦ（Ａ
ｂ″）２フラグメントとを用いて作成される。

これらは比較的小さなサイズなので、より好適に組織に
浸透し、感染細胞に到達する。

捩生 本発明に従って、ｇｐ１６０のエピトープに特異的に結
合するモノクローナル抗体、又は抗原活性を有する細胞
表面に露出されたそのフラグメント（例えばｇｐ１２０
、ｇｐ４１％ＴｃＢなどから選ばれるエピトープ）に特
異的なモノクローナル抗体を、抗原で初回免疫したリン
パ球と骨髄腫細胞との融合によって生成される無限継代
雑種セルラインから単離した。都合の良いことに、本発
明に係る、ｇｐ１６０に結合するモノクローナル抗体は
、細胞表面上に露出されたこのタンパク質のドメインに
結合する。本発明に係るもう一つの態様は、ｇｐ１６０
に特異的に結合するポリクローナル抗体を使用すること
である。

本発明の目的物である抗体は、スクリーニング法によっ
て得られる。モノクローナル抗体を、免疫毒性物質を含
有するＡ鎖と同様に強力なその細胞毒性に関してスクリ
ーニングする検定法を行う。

この検定法は、細胞を被検抗体の希釈液に適用し、次い
でリチンＡ鎖にカップリングさせた二次抗体のＦａｂフ
ラグメントに適用することに関する（間接検定法）。こ
の間接検定法に於ける細胞毒性を、モノクローナル抗体
をリチンＡ鎖に結合させている直接検定法に於けるそれ
と比較する。この間接検定法では、免疫毒性物質として
の該モノクローナル抗体の有効性を正確に予測でき、従
って免疫毒性物質として有用なモノクローナル抗体をス
クリーニングする上に利用できる。ビテッタ（Ｖｉｔｅ
ｔｔａ）らのサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２３８ＳＩ
　Ｏ９８−１１０’４　（１９８７）　、及びウェルラ
マン（Ｗｅｌｔｍａｎ）らのカンサー・リサーチ（Ｃａ
ｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、）土Ｌ１５５５２　（１９８７）を
参照（これらも本発明の範囲内に属する）。

モノクローナル抗体は、極めて特異的であり、単一の抗
原性部位に対するものである。更に、異なる決定基（エ
ピトープ）に対する種々の抗体を〜　　通常含有する従
来からの抗体（ポリクローナル）調製物とは対照的に、
モノクローナル抗体は個々に、抗原に於ける単一の決定
基を目的としている。

モノクローナル抗体は、抗原−抗体の結合性を利用する
診断及び分析法の選択感度及び特異性を改善するのに有
用である。モノクローナル抗体の第二の利点は、これら
がハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロ
ブリンによって汚染されないことである。モノクローナ
ル抗体は、培養しているハイブリドーマ細胞の上清から
又はハイブリドーマ細胞をマウスの腹腔内に植え付けて
誘導させた腹水から調製できる。

コーラ−とミルスタイン（Ｋｏｈｌｅｒ　ａｎｄ　Ｍｉ
ｌｓｔｅｉｎ）［Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、６．５
１１　（１９７６）］によって当初、開示されたハイブ
リドーマ操作法が、多くの特異抗原に対するモノクロー
ナル抗体を高しベルで分泌する雑種セルラインを調製す
るのに広範に利用されている。

宿主動物を免疫するか、又はそれ由来の抗体産生細胞を
培養する工程及び計画は、一般に、抗体の刺激及び産生
に関して確立された通常の操作法として行われている。

ヒトを包含する哺乳動物の雑種セルラインを産生ずる基
礎として本発明の方法を利用すれば、ヒト対象を包含す
るあらゆる哺乳動物対象又はこれら由来の抗体産生細胞
を巧みに利用できると考えられるが、本発明者らは試験
モデルとしてマウスを使用した。

免疫した後、免疫リンパ系細胞を骨髄腫細胞と融合させ
、無制限に培養及び継代培養できる雑種セルラインを生
成させ、大量のモノクローナル抗体を調製する。本発明
の目的のため、融合に関して選別した免疫リンパ系細胞
は、免疫した動物のリンパ節組織又は肺臓組織のいずれ
かから取り出したリンパ球及びこれらの正常に分化した
後代である。本発明者らは、マウス系に関しては免疫肺
臓細胞がより高濃度で簡便な抗体産生細胞の供給源を提
供することから、むしろこの免疫肺臓細胞を使用する。

骨髄腫細胞は、融合した雑種の連続した増殖の基礎をも
たらす。骨髄腫細胞は、形質細胞由来の腫瘍細胞である
。

ある１つの種の細胞を他の種の細胞に融合させることは
可能である。しかし、免液する抗体産生細胞及び骨髄腫
の供給源は、同じ種由来であることが好ましい。

この雑種セルラインは、細胞培養培地に於けるイン・ビ
トロ培養で維持させることができる。本発明に係るセル
ラインは、既知のヒボキサンチン−アミノプテリン−チ
ミジン（ＨＡＴ）培地に於ける無限継代セルラインから
なる組成物中で選択及び／又は維持できる。実際、−旦
、ハイブリドーマセルラインを株化させれば、栄養学的
に適当な各種の培地で維持させることができる。更に、
雑種セルラインは、凍結保存及び液体窒素下での保存な
どの数あるあらゆる従来からの方法によって、保存及び
保護することができる。凍結したセルラインは、生き返
らせ、無制限に培養することができ、モノクローナル抗
体の合成及び分泌を再び始めさせることができる。分泌
した抗体は、沈澱法、イオン交換クロマトグラフィー、
アフィニティークロマトグラフィーなどの常法によって
組織培養の上清から回収される。

本発明は、マウスのモノクローナル抗体を使用して説明
しているが、これに限定されるものでなく、実際、ヒト
抗体も使用することができ、好適であることをためすこ
とができる。このような抗体は、ヒトハイブリドーマを
使用して得ることができる［コート（Ｃｏｔｅ）らのモ
ノクローナル・アンチボディーズ・アンド・カンサー・
セラピー（Ｍａｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ　ａｎｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ）、アラン
・アール・リス（Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ）、７７頁（
］９８５）］。実際、本発明に従えば、適当な抗原特異
性のマウス抗体分子由来の遺伝子、並びに適当な生物学
的活性を有する（例えば、ヒト補体を活性化させ、ＡＤ
ＣＣを媒介できる）ヒト抗体分子由来の遺伝子をスプラ
イシングさせて行う「キメラ抗体」の調製を行う方法［
モリソン（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）らのブロシーデインダス
・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（
Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、）ｌ上、６８
５１（１９８４）：ナーベルガー（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ
）らのネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）　３１２．６０４
（１９８４）：タケダ（Ｔａｋｅｄａ）らのネイチャー
３上土、４５２（１９８５）］　を利用できる；このよ
うな抗体も本発明の範囲内に属するものである。

細胞融合法に於ける別法としては、ＥＢＶ不滅化Ｂ細胞
を使用して本発明に係るモノクローナル抗体を調製する
。更に、モノクローナル抗体を調製する組換えＤＮＡな
どの他の方法も行うことができる。

本発明の抗体に係る最も重要な免疫化学的誘導体は免疫
毒性物質（抗体と細胞毒性部分とのコンジュゲート体）
である。この抗体も、天然の補体反応による細胞溶解を
誘導させ、通常存在している抗体依存性細胞毒性細胞と
相互作用させるのに使用することができる。

免疫毒性物質 免疫毒性物質の細胞毒性部分は、細菌、真菌、＝５５− 植物若しくは動物起源の細胞毒又は酵素的に活性な毒素
、又はこれらの毒素の酵素的に活性なフラグメント（Ａ
鎖）であり得る。使用される酵素的に活性な毒素及びそ
れらの７ラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア
毒素の非結合型活性フラグメント、エキソトキシンＡ鎖
（シュードモナスｅアエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リチンＡ鎖、ア
ブリンＡ鎖（ａｂｒｉｎ　Ａ　ｃｈａｉｎ）、モデクシ
ン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サルシン（ａｌｐｈ
ａ−ｓａｒｃｉｎ）、アレウリテス・７オルデイイプロ
テイン（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ　ｆｏｒｄｉｉ　ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ）、ジアンチ′プロティン（ｄｉａｎｔｈｉｎ
　ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、ピトラク力・アメリカナプロテ
イン（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ　ａｍｅｒｉｃａｎａ　ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ）　（Ｐ　Ａ　Ｐ　Ｉ、ＰＡＰＩＩ及び
ＰＡＰ−５）、モモルディ力・カランチア・インヒビタ
ー（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ　ｃｈａｒａｎｔｉａ　１ｎｈ
ｉｂｉｔｏｒ）、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン
（ｃｒｏｔｉｎ）、サバオナリア・オフィシナリス争イ
ンヒビター（ｓａｐａｏｎａｒｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａ
ｌｉｓ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎ
ｉｎ）、ミトゲリン（ｍ　ｉ　ｔｏｇｅｌｌｉｎ）、リ
ストリフトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノ
フイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃ　ｉｎ）、エノマイシン（
ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテセネス（ｔｒ　１ｃｏ
ｔｈｅｃｅｎｅｓ）がある。

他の態様では、抗体を小分子の抗癌剤にコンジュゲート
する。モノクローナル抗体と上記の細胞毒部分とのコン
ジュゲート体は、各種の二機能性タンパク質カップリン
グ剤を使用して調製される。

このような試薬の例としては、５ＰＤＳ、ＩＴ。

イミドエステル類の二機能性誘導体例えばジメチル・ア
ジピミデートＨＣＱ、活性エステル類例えばジスクシン
イミジル・スベレート、アルデヒド類例えばグルクルア
ルデヒド、ｂｉｓ−アジド化合物例えばビス（ｐ−アジ
ドベンジル）ヘキサンジアミン、ビスジアゾニウム誘導
体例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレン
ジアミン、ジイソシアネート類例えばトリレン２．６−
ジイソシアネート、及びビス活性化フッ素化合物例えば
Ｉ。

５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンが挙げられ
る。毒素の細胞溶解性部分は、抗体のＦａｂフラグメン
トに結合させることができる。

感染細胞上に露出しているタンパク質のドメインに特異
的に結合するモノクローナル抗体をリチンＡ鎖にコンジ
ュゲートすると好適である。最も好適には、リチンＡ鎖
を脱グリコジル化し、組換え法によって調製する。リチ
ン免疫毒性物質を作成するために好適な方法は、ビッテ
タ（Ｖｉｔｅｔｔａ）らのサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ
）　２３８．１０９８（１９８７）に開示されており、
これらも本発明の範囲内に属する。

感染されたヒト細胞を、イン・ビトロ診断を目的として
死滅させる時にコンジュゲート体を使用する場合は、こ
れを、通常、少なくとも１０ｎＭの濃度で細胞培養培地
に加える。イン・ビトロ適用のための投与剤形及び投与
方法は、臨界的でない。培養又は潅流培地に適合する水
性剤形を通常使用できるであろう。細胞毒性は、常法に
よって読み取ることができる。

感染細胞を処理するための細胞毒性放射医薬製剤は、放
射活性同位体（例えばＩ、Ｙ、Ｐｒ）を抗体にコンジュ
ゲートすることによって作成できる。α粒子を放出する
同位体を使用すれば好適である。本明細書に於いて使用
している「細胞毒性部分」なる用語は、このような同位
体を包含するものである。

他の態様では、７ソゲニツク（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）リ
ボゾームに細胞毒を充填し、得られたりポゾームをｇｐ
１６０に特異的に結合する抗体で被覆する。

抗体依存性細胞毒性作用 本発明は、更に、（ａ）ｇｐ１６０に対し、（ｂ）抗体
分子が結合しているＨＩＶウィルスに感染された細胞の
溶解を媒介することのできるサブクラス又はアイソタイ
プに属している、抗体を使用する方法に関する。より詳
細には、これらの抗体は、細胞表面タンパク質と複合化
し、血清補体を活性化、及び／又はナチュラルキラー細
胞若しくはマクロファージのようなエフェクター細胞（
ｅｆｆｅｃｔ。

ｒ　ｃｅｌｌ）を活性化することによって抗体依存性細
胞障害作用（ＡＤＣＣ）を媒介するサブクラス又はアイ
ソタイプに属する。

また、本発明は、ＡＩＤＳ治療のための天然型であるこ
れら抗体の用途も目的とする。例えば、ＨＩＶ関連細胞
表面抗原に結合するＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ３マウス抗体
は、ＡＩＤＳ治療のためにイン・ビポ適用することがで
きる。実際、ｇｐ１６０は感染された単球及びＴ−リン
パ球に存在しているので、目的の抗体及びこれらの治療
用途は広範に適用できる。

抗体の生物学的活性は、抗体分子のＦｃ領誠によって大
部分が測定できることが知られている［ウアナネとベナ
セラフ（Ｕａｎａｎｕｅ　ａｎｄ　Ｂｅｎａｃｅｒｒａ
ｆ）、テキストブック・オブ・イムノロジ＝（Ｔｅｘｔ
ｂｏｏｋｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、二版、ウィリ
アムス＆ウィルキンス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉ
ｎｓ）２１８頁（１９８４）］。

これには、補体を活性化し、白血球によって行われる抗
体依存性細胞毒性作用（ＡＤＣＣ）を媒介する能力が包
含される。異なるクラス及びサブクラスの抗体は、この
点で異なっており、本発明に従えば、所望の生物学的活
性を有するクラスの抗体を選別する。例えば、Ｉ　ｇＧ
　３及びＩｇＧ２ａクラスのマウス免疫グロブリンは、
同族抗原を発現する標的細胞に結合した時に、血清補体
を活性化させることができる。

一般に、ＩｇＧ２ａ及びＩ　ｇＧ　３サブクラス、並び
に、常ではないがＩｇＧ１の抗体は、ＡＤＣＣを媒介す
ることができ、１ｇＧ３、並びにＩ　ｇＧ　２ａ及びＩ
ｇＭサブクラスの抗体は血清補体に結合してそれを活性
化する。補体の活性化には、一般に少なくとも２個のＩ
ｇＧ分子が極めて近接して標的細胞に結合することが必
要である。しかし、ＩｇＭ分子が１個だけ結合しても血
清補体は活性化される。

補体及び／又はＡＤＣＣの活性化によって標的細胞の溶
解を媒介するあらゆる特定の抗体の能力は、検定するこ
とが可能である。注目した細胞を増殖させ、イン・ビポ
標識する：即ち、抗体を、抗原−抗体の複合化によって
活性化することのできる血清補体又は免疫細胞のいずれ
かと共に細胞培養物に入れる。標的細胞の細胞溶解は、
溶解された細胞から放出される標識物によって検出され
る。実際、抗体は、補体及び／又は免疫細胞の供給源と
して患者自身の血清を使用すればスクリーニングするこ
とができる。従って、イン・ビトロ検定に於いて補体を
活性化できるか、又はＡＤＣＣを媒介できる抗体は、そ
の患者の治療に使用することができる。

あらゆるウィルス起源の抗体も、これらがｇｌ）１６０
エピトープに結合し、補体を活性化できるか、又はＡＤ
ＣＣを媒介できるならば、本発明に於けるこの態様とし
て使用することができる。モノクローナル抗体は、連続
した豊富な起源としての利点を有する。実際、マウスを
ｇｐ１６０で免疫し、ｇｐ１６０に対する抗体を産生ず
るハイブリドーマを樹立させ、次いで、ヒトの補体の存
在下に感染細胞を溶解することのできる抗体を産生ずる
ハイブリドーマを選ヌｌＩすることによって、感染細胞
と反応してそれを溶解することのできる抗体のパネルを
素早く樹立させることができる。

本発明の抗体の治療的使用 イン・ビポに於いて治療に使用する場合は、本発明に係
る抗体を、治療的に有効な量［即ち、Ｔ細胞のカウント
を回復させる量］で患者に投与する。通常、これは非経
口的に投与する。投与量及び投与方法は、感染の程度、
個々の免疫毒性物質（使用した場合）の特性、例えばそ
の治療指数、患者の状態、及び患者の病歴によって異な
る。免疫毒性物質は、１−２週間連′続して、血管系の
細胞を処置するために静脈内投与、並びに局所のリンパ
節を処置するために皮下及び腹腔的投与するのが好適で
ある。要すれば、腫瘍壊死因子及びインターフェロンを
組合わせたサイクルのような補助治療期に投与してもよ
い。

非経口的に投与するには、抗体を、薬学的に許容できる
非経口用ビヒクルと共に、注入用単位投与剤形（溶液、
懸濁液、エマルジョン）に製剤化する。ビヒクルは、本
質的に無毒であり、治療作用のないものである。このよ
うなビヒクルには、例えば水、生理食塩水、リンゲル液
、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが
ある。

固定油及びオレイン酸エチルなどの非水性ビヒクルも使
用することができる。担体としてリポゾームを使用する
ことができる。このようなビヒクルには、等張性及び化
学的安定性を高める物質、例えば緩衝液及び保存剤など
の添加剤を少量含有させてもよい。通常、抗体は、この
ようなビヒクルを約１ｍｇ／ｒｎＱから１０ｍｇ／ｖｄ
ｌの濃度で含有させて製剤化する。

ＩｇＭ抗体は、その抗原が極めて標的細胞に特異的であ
り、めったに正常細胞上には現れないので都合がよい。

ＩｇＧ分子は、ＩｇＭ分子よりも小さいので、より感染
細胞に集中し易いかもしれない。

イン・ビボに於ける補体活性化が、種々の生物学的作用
、例えば炎症反応の誘発及びマクロファージの活性化を
導くことが証明されている［ウアナネとベナセラフ（Ｕ
ａｎａｎｕｅ　ａｎｄ　Ｂｅｎａｃｅｒｒａｆ）、テキ
ストブック・オブ・イムノロジー（Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　
ｏｆＴｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、二版、ウィリアムス＆ウ
ィルキンス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ）２１
８頁（１９８４）］、この炎症に伴う増加した血管拡張
は、各種の抗ＡＩＤＳ剤が感染細胞に集中する作用を増
加させるかもしれない。従って、本発明により特定した
型の＝６４− 抗原−抗体の組合わせは、多くの治療的用途として使用
することができる。更に、このような抗原に関連する精
製抗原［ハコモリ（Ｈａｋｏｍｏｒ　ｉ）、Ａｎｎ　。

Ｒｅｖ、１ｍｍｕｎｏ１．２．　１０３（１９８４）］
又は］抗−イディオタイプ抗体ネポム（Ｎｅｐｏｍ）ら
のＰｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、８　Ｌ　２８６４（１９８５）：コ
ブロースキ（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉ）らのＰｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　８上、２１６（１９８４）
］は、ヒト患者に於ける活性な免疫応答を誘導させるの
に使用できるであろう。

このような応答には、ヒト補体を活性化させ、ＡＤＣＣ
を媒介することのできる抗体の形成、及びこの機序によ
って感染細胞の破壊を招くことが挙げられる。

本発明に係る抗体は、被検試料中のＨＩＶを診断する上
で有用である。これは、ＨＩＶｅｎｖの立体的に自由な
他のエピトープに対するポリクローナル又はモノクロー
ナル抗体と共に、ＨＩＶｅｎｖを検定するためのサンド
ウィッチ検定のひとつの軸として使用される。幾つかの
具体的なサンドウィッチ検定に使用するため、５Ｃ２Ｅ
５抗体又はそれと等価な物を、不溶性支持体に結合させ
るか、又は他のモノクローナル抗体を使用する常法に従
って検出可能な部分で標識する。標識化抗体の他の例と
しては、例えば５Ｃ２Ｅ５抗体に結合できる標識化ヒツ
ジ抗−マウスＩｇＧを使用して、それ自体は従来から知
られている操作法によってＨＩＶｅｎｖ結合性を検出す
る。　′ 最後に、もうひとつの態様として挙げれば、抗体を水不
溶性の支持体に固定化し、以下により詳細に説明するよ
うに、ＨＩ　Ｖｅｎｖｌｒｇｐｌ　２０又はＴＣＢドメ
インのイムノアフィニティー精製に使用する。この目的
のためには、モノクローナル抗体を固定化するためのあ
らゆる既知の方法を利用することができる。

一般に、ＨＩ　Ｖｅｎｖで処置すべき炎症又は免疫強化
された炎症は、治療的な関連性から見て望ましくない外
来性又は自己の標的組織に対する体液性及び／又は細胞
毒性の細胞応答を特徴とする。

通常、免疫強化性の炎症は、（１）望ましくない自己免
疫疾患の場合若しくは移植片対宿主病に於ける宿主抗原
、又は（２）移植組織、例えば器官移植片に於ける抗原
に対する抗体の生成及び／又は細胞毒性Ｔ細胞の応答を
特徴とする。このようなことは、多形核好中球及び単核
白血球の標的組織への浸潤、痛み、集中した浮腫、考え
られる血管内皮損傷、及び刺激細胞によるサイト力イン
の広範な産生によって臨床的に特徴付られる。

治療への使用を目的としたＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖ組成物は、
処置するべき障害、個々の患者の状態、ｅｎｖポリペプ
チドの分散部位、投与方法、及びその他、開業医にとっ
て既知の要因を考慮に入れ、良好な治療を行うのに相応
したやり方で製剤化し、投与量を確立するべきである。

）（Ｉ　Ｖｅｎｖは、所望の適度にまで精製したＨＩＶ
　ｅｎｖを生理学的に許容できる担体、即ち使用される
投与量及び濃度では受容者にとって無毒である担体に混
合して投与用に調製する。通常は、ＨＩＶｅｎｖを緩衝
液、低分子量（約ｌＯ残基よりも少ない）のポリペプチ
ド、タンパク質、アミノ酸、炭水化物例えばグルコース
又はデキストラン、キロ７− レート剤例えばＥＤＴＡ、及び他の賦形剤と一緒にする
。治療投与に使用するためのＨＩ　Ｖｅｎｖは、無菌で
なければならない。このことは、（０，２ミクロン）膜
で滅菌濾過することによって容易に行える。ＨＩ　Ｖｅ
ｎｖは、普通、再調製するための凍結乾燥品として保存
するが、水性製剤として保存しても安定である。

一般に、障害が許すところでは、部位特異的な分配用に
ＨＩ　Ｖｅｎｖを製剤化し、投与するべきである。これ
は、ＲＡ及び炎症性腸疾患の場合には便利である。前者
の場合、ＨＩ　Ｖｅｎｖは、関節液への注入、又は溝膜
内層（ｓｙｎｏｖｉａｌ　ｌｉｎｉｎｇ）若しくは溝膜
嚢（ｃａｐｓｕｌｅ）への移植に適する無菌の徐放性組
成物に製剤化する。炎症性腸疾患の場合、ＨＩ　Ｖｅｎ
ｖは、当業界周知の薬学的に許容できる油性物質を用い
て平割に製剤化する。　　、徐放性製剤は、マイクロカ
プセル粒子及び移植可能な物品の中から選ばれる。リポ
ゾームに於けるカプセル化は、関節部への脂質の移入を
伴うので１滑膜腔（ｓｙｎｏｖｉａｌ　ｃａｖｉｔｙ）
に直接注入することには好ましくない。しかし、リポゾ
ームに於けるカプセル化は、溝膜嚢に徐放性ＨＩ　Ｖｅ
ｎｖを移植するには適している。徐放性ＨＩ　Ｖｅｎｖ
を使用してＲＡを治療するには、好ましくはＨＩ　Ｖｅ
ｎｖを、生体内分解性のマトリックス又はマイクロカプ
セルに入れる。この目的に適う適当な物質は、ポリラク
チド（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ）であるが、ポリ−Ｄ−
（−）−３−ヒドロキシ酪酸などのポリ（α−ヒドロキ
シカルボン酸）の他のポリマー類も使用することができ
る［ＥＰ　　１３３，９８８Ａ］。他の生体内分解性ポ
リマーには、ポリ（ラクトン類）、ポリ（アセタール類
）、ポリ（オルトエステル類）、又はポリ（オルトカー
ボネート類）などが包含される。ここに、第一に考慮し
なければならないのは、担体自身、又はその分解生成物
は標的組織にとって無毒であること、並びにこれらが疾
患を更に悪化させないことである。このことは、標的障
害の動物モデル、又はこのようなモデルが入手できない
場合は正常動物に於いて常法のスクリーニングを行うこ
とによって検定できる。徐放性組成物の例に関しては、
例えば米国特許第３．７７３．９１９号、ＥＰ５８．４
８１Ａ１米国特許第３．８８７゜６９９号、ＥＰ１５８
．２７７Ａ、カナダ特許１１７６５６５、シトマン（Ｕ
、Ｓｉｄｍａｎ）らの「パイオポリマーズ（Ｂｉｏｐｏ
ｌｙｍｅｒｓ）Ｊ、２２：５４７（１９８３）、及びラ
ンガー（Ｒ，Ｌａｎｇｅｒ）らのｒｃｈｅｍ、Ｔｅｃｈ
Ｊ　１２＋９８（１９８２）を参照。

使用するべきＨＩ　Ｖｅｎｖの投与量は、ＨＩ　Ｖｅｎ
ｖ調製物のＴ４結合親和性、ｅｎｖ調製物の半減期、投
与経路、患者の臨床上の状態（感染の有無など）、抗−
ＨＩ　Ｖｅｎｖ抗体の存在、並びにＨＩ　Ｖｅｎｖが疾
病の予防に使用できるか否か、又は急性の自己免疫疾患
若しくは移植拒絶の発現（ｅｐｉｓｏｄｅｓ）に対する
治療に使用できるか否か、などの多くの要因に左右され
る。一般的な案としては、標的部位に到達させるＨ　Ｉ
　Ｖｅｎｖ投与量は、約０．５Ｘ１０−’Ｍかも５Ｘ１
０−’Ｍとするべきである。通常、治療用投与剤形中に
於けるＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖ濃縮物を、連続的な点滴、徐放
性の注入又は経験的に決定される回数の注入によって投
与する。ＲＡ関節液は、例えばひざの関節で５０ｍ（ｌ
にまでになる可能性があるので、ＨＩＶｅｎｖの正確な
量は、関節液に於ける希釈度、並びに内因性プロテアー
ゼに対するＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖの経験的に測定される損失
、全身性循環への漏出、及び存在している抗−ＨＩ　Ｖ
ｅｎｖによる隔離（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎ）によ
って決定される。

従って、適正な投与量計画を決定するためには、治療の
初期の段階に、ＨＩ　ＶｅｎｖＴ　４結合性検定するた
めに関節液試料を抜き取り、初期投与量のプロトコール
に於ける有効性を評価することが最善である。

ＨＩ　Ｖｅｎｖ療法は、他の抗炎症性物質、例えばサリ
チル酸塩、非ステロイド抗炎症剤、ペニシラミン、金塩
、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α又はＴＮＦ−βアンタゴニス
ト（係属中のＵ、Ｓ、Ｓ、Ｎ　８９８　。

２７２に開示）、γ−インターフェロン・アンタゴニス
ト及び／又はＩＬ−１アンタゴニストと一緒に行うこと
ができる。このような物質がＨＩＶｅｎｖ組成物自体に
包含されることは必須のことではないが、これら抗炎症
性物質をＨＩ　Ｖｅｎｖと共に製剤化してもよい。

炎症部位に集中するＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖ濃度は、全身に於
ける最高の治療投与量を越えてもよい。炎症性浸潤に於
けるＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖ濃度を検定することにより、特に
、集中する投与が実用的でない場合には、静脈注入する
ためのＨＩ　Ｖｅｎｖの量に関する指針が得られる。こ
れにより得られた結果が、適当な投与量を選択するため
に重要な要因である。患者の炎症反応が、投与後約４８
時間以内に少なくとも一部でも消散しない場合は、所望
の効果に達成するまで投与量を徐々に上昇させていく。

これに対応して、必要とされるＴ４結合能及び／又はＴ
４に対する親和性が低いＨＩ　Ｖｅｎｖ調製物の投与量
が上昇するが、能力及び親和性の高い調製物の投与量も
上昇する。また、急性の拒絶又は炎症の発現、即ち急性
の器官移植拒絶の患者又は関節炎発赤の発現した患者を
治療する場合、初期には比較的高い用量が必要である。

急性拒絶の発現に伴う緊急の治療に関しては、症状が発
現した時若しくは拒絶が血清学的に明らかになった時に
、ＨＩＶｅｎｖを静脈内注入するか、又は炎症の損傷部
位に直接導入する。あるいは、筋肉内又は皮下投与によ
って、適当に予防ができる。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが
、これらは本発明を限定しようとするものではない。引
用した文献はすべて参照文献として挙げた。

実施例１ ＨＩＶによるＴ−ヘルパー感染の始めには、ＨＩＶエン
ベロープ糖タンパク質と１４表面構造の間の選択的な相
互作用が関与していることがわかっていた（１〜６．１
５．２３〜２６）。もっと具体的に言うと、マクドーガ
ル等（ＭｃＤｏｕｇａｌ　ｅｔ　ａｔ、）は、ＨＩＶが
Ｔ４抗原複合体のＴ４Ａエピトープに選択的に結合する
ことができることを示した（２５）。さらに、ＡＩＤＳ
ウィルスに感染した患者の損なわれた免疫学的機能の多
数が、ヘルパー細胞群に感染し、ついにはこれらを破壊
するＨＩＶの選択的な能力に関係していた（Ｌ　２．９
．１０）。また、ＡＩＤＳ患者からのＰＢＭＣが、おそ
らくはＨＩＶに関連するヘルパー細胞機能の低下によっ
て、ミトゲンおよび抗Ｗ（特に破傷風トキソイド）刺激
に対して低応答性であることも示唆されていた（１２）
。本実施例は、主として、正常なＰＢＭＣでの破傷風ト
キソイド応答におけるｒｇｐ１２０の活性を測定するこ
とに関する。

材料および方法 組換えＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（ｒｇｐ１２０
）：ＨＩＶエンベロープ遺伝子発現プラスミド（２０）
でトランスフェクションしたチャイニーズ・ハムスター
卵巣細胞を、これら実施例で用いるｒｇｐ１２０の調製
に用いた。免疫アフィニイティークロマトグラフィーに
よって、ならし細胞培養培地からｒｇｐ１２０を精製し
た。このｒｇｐ１２０は、５ＤＳ−ポリアクリルアミド
電気泳動で測定すると〉９８％の純度であった。

末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）の単離：ヘパリン処理し
た注射器を用いて健康な供与者から血液を集めた。それ
ぞれの血液試料を等容量の食塩水で希釈し、フィコール
−ハイパクー（Ｆｉｃｏｌ　１−Ｈｙｐａｑｕｅ）勾配
（ｓｐ、ｇｒ、１．０８）で層にし、室温で４０分間、
４００ｘｇで遠心した。血漿−フィコールの界面のＰＢ
ＭＣを取り、ハング（Ｈａｎｋ）のバランス塩溶液（Ｈ
Ｂ　Ｓ　Ｓ）［ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）；グランド・アイ
ランド・バイオロジカル社（Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ
　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ、。

Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、ＮＹ）］で３回洗浄し、完
全培地に再懸濁し、その数を数えた。トリパンブルー排
除で測定したときの細胞生存率は常に９５％以上であっ
た。

培養培地：ＲＰＭＩ　　１６４０培地をギブコから購入
して用いた。これに、１０％の熱不活性化ウシ胎児血清
［ハイクローン（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａ
ｈ）］、２２ｍのし一グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥ
Ｓ。

ペニシリン／ストレプトマイシン（ギブコ）、および５
Ｘ１０−’Ｍの２−メルカプトエタノール［シグマ（Ｓ
ｉｇｍａ、ＳＬ、Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）］を追加した。２
−メルカプトエタノールを含まない同一の培地をポリク
ローナル活性化に用いた。２％の熱不活性化ウシ胎児血
清を含むＲＰＭＩ　　１６４０をモノクロ−ナル抗体に
よる細胞の染色に用いた。

破傷風トキソイド（ＴＴ）誘導の増殖活性：この検定に
用いるＲＰＭＩ　　１６４０培地には、１０％のオート
ローガスな血漿、２ｍＭのし一グルタミンおよび抗生物
質を追加した。最適の応答を得るために予備実験で確か
めた１　：　３００の最終希釈のＴＴ［ムックモア−（
Ｄｒ、Ａ、Ｍｕｃｈｍｏｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａ
ｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍ
Ｄ）から入手できる］の存在下、または非存在下、微量
滴定プレートのウェルあたり２００μＱの培地中１０６
細胞となるようにＰＢＭＣを４重に培養した。さまざま
な濃度のｒｇｐ１２０を含んでいる複製培養物を平行し
て確かめた。６日間のインキュベートの後、ピークの応
答が現れたときに、培養物を［３Ｈ］−チミジンととも
にパルス処理し、加工し、上記のようにして数えた。

モノクローナル抗体による細胞の染色：蛍光イソチオシ
アネート（ＦＩＴＣ）とコンジュゲートしたモノクロー
ナル抗体（Ｍａｂ）　ＯＫ　Ｔ　３．０ＫＴ４．０ＫＴ
４Ａ、および０ＫＴ８をオルソ・シア７ロー グノスチツク・システムズ社（Ｏｒｔｈｏ　Ｄｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃＳｙｓｔｅｍｓ、　Ｉｎｃ、　、Ｒａｒｉｔ
ａｎ、Ｎ、Ｊ　、）から購入した。細胞の一部（１０’
１５０ｕＯ）を、ＦＩＴＣとコンジュゲートした０ＫＴ
３．０ＫＴ４．０ＫＴ４Ａ、０ＫＴ８またはネズミＩｇ
Ｇ２ａｂ対照（５μＱ）と混合した。氷上で４０分間イ
ンキュベートした後、細胞を培地で２回洗浄し、２％パ
ラホルムアルデヒドで固定し、この試料を、波長４８８
ｎｍの４ワツトのアルゴンレーザーを装着した蛍光活性
化細胞ソーター［ＦＡＣ３ＩＶ、ベクトン・ディキンソ
ン（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｍｔ、Ｖｉｅ
ｗ、ＣＡ）］を用いて分析した。１０’細胞が表示様式
で得られ、単一の細胞ベースで測定を行い、これを度数
分布ヒストグラム（２１）で表した。死んだ細胞および
残骸は、前方光散乱に基づく分析から除外した。この゛
結果を、非特異的な染色（ＩｇＧ２ａｂ−Ｆ　ＩＴＣ対
照）を差し引いた特異的に染色された細胞の割合（％；
蛍光ラベルした細胞数／分析された細胞数Ｘ１００）で
表す。また、染色された細胞の強さの平均チャンネルも
測定したが、これは示さなかった。

統計学的な分析：対設計のスチューデント検定、および
多重群比較のための変動分析によって結果を分析した。

糀−來 可溶性の特異的な抗原に対するＰＢＭＣの応答に及ぼす
ｒｇｐ１２０の影響を調べた。６つの実験を行い、培養
物に加えたｒｇｐ１２０を含むが、または含まずに刺激
剤としてＴＴを用いた。この結果を第２表に示すが、こ
の表は、正常なＰ　ＢＭＣにおいて特異的な抗原に応答
するＰＢＭＣの増殖をｒｇｐ１２０が有意に（ｐ＝０．
０５）阻害しうろことを示している。阻害度は、対照値
の１９〜５１％の範囲内であり、５つの実験で異なって
いた。

実験Ｎｏ、６では阻害は観察されなかった（示されてい
ない）。

策２２　ＴＴ−誘導のＰＢＭＣ増殖応答のｒｇｐ１２０
またはＴＴ＋５μ９のｒｇｐ１２０／　＋＋＋Ｑ（＋ｒ
ｇｐ１２０）の存在下、１０５細胞／２００μａ／ウエ
ルの平底微量滴定プレートで測定した。６日間のインキ
ュベートの後、培養物を［３Ｈ１−チミジンでパルス処
理し、集め、加工し、数えた。各データは平均ｃｐｍを
表し、阻害％は次のようにして計算した；ｌ（ｒｇｐ１
２０の存在下でのｃｐｍ／対照のｃｐｍ）Ｘ　１００　
；　ｐ＜０．０５゜ ｒｇｐ１２０と種々のＴ−細胞群との相互作用：ＨＩＶ
によるＴ−細胞の感染は、ウィルスエンベロープ糖タン
パク質と、Ｔ−ヘルパー膜受容体複合体のＴ４成分との
選択的な相互作用から始まることが示唆されていた（１
〜６．１５．２３〜２６）。従って、ｒｇｐ１２０がヒ
トリンパ様細胞に結合する同一の選択的な能力を有して
いるがどうかを測定するのは興味あることであった。ｒ
ｇｐ１２０（５μｇ／ｍＱ）の存在下または非存在下、
４°Ｃおよび３７°Ｃで２４時間、ＰＢＭＣをインキュ
ベートした。この細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ−コンジュゲ
ートした０ＫＴ４および０ＫＴ４Ａで直接染色した。Ｆ
ＡＣ３分析の結果は、ｒｇｐ１２０にょる４°Ｃでの細
胞の処理が０ＫＴ４の結合を阻害しないことを示す。し
かし、３７℃でｒｇｐ１２０によって処理すると、Ｔ４
＋細胞の蛍光度の減少で示される０ＫＴ４結合の変化が
生じた。逆に、３７℃でｒｇｐ１２０によって細胞をイ
ンキュベートした後には、０ＫＴ４Ａの結合は全くなか
った。これらの結果は、ｒｇｐ１２０がＨＩＶと同様（
２５，２６）、Ｔ４ヘルパー膜受容体のＴ４Ａエピトー
プまたは隣接エピトープを占めることができることを示
している。

ｒｇｐ１２０のＴ４Ａエピトープへの選択的な結合を、
３７°Ｃで２４時間、高濃度のｒｇｐ１２０（１−８０
＝ 〇〇μｇ／ｍ（１）で細胞を処理することを含む一連の
実験でさらに調べた。次いで、この細胞を洗浄し、ＦＩ
ＴＣ−１ンジユゲートした０ＫＴ３．０ＫＴ４．０ＫＴ
４Ａ、および０ＫＴ８で染色した。ＦＡＣ３分析の結果
は、ＰＢＭＣをｒｇｐ１２０で前処理するとＴ−ヘルパ
ー膜表面抗原の７４Ａエピトープを完全に遮断すること
を示した。ｒｇｐ１２０処理した細胞への０ＫＴ３およ
び０ＫＴ８の結合は未処理細胞調製物のものと同様であ
り、たとえ高濃度であってもｒｇｐ１２０はＴ３または
Ｔ８膜表面抗原に結合しないことが示された。ｒｇｐ　
１２０処理がＴ４受容体を完全に遮断せず、Ｔ４染色し
た細胞の蛍光の平均チャンネルを減少させるだけである
ことは興味あることである。このことは、Ｔ−ヘルパー
受容体の膜構造における部分的な結合および／または変
化を示しているのかもしれない。

実施例２抗−ＴＣＢドメインモノクローナル抗体 本実施例は、モノクローナル抗体５Ｃ２Ｅ５を得る方法
を説明するものである。酸Ｂａ１ｂ／ｃマウスを、約７
カ月にわたり、■投与あたり約３０μ９ノｒｇｐ１２０
で免疫した。完全フロインドアジュバント中のｒｇｐ１
２０による最初の３一部位の皮下ワクチン接種に次いで
、不完全フロインドアジュバント中で４３一部位皮下注
射を行い、さらにリン酸緩衝食塩水中で２３一部位皮下
注射を行った。

最後の腹腔内ブースター注射もリン酸緩衝食塩水中で行
った。

モノクローナル抗体５Ｃ２Ｅ５を分泌するハイブリドー
マを、上記のｒｇｐ１２０免疫処理した動物由来の肺臓
細胞およびマウスのミエローマ細胞セルラインＮＰ　ｓ
ｘ６３−Ａｇ８．６５３を用い、オイ等（Ｏｉ　ｅｔａ
ｌ、Ｘ３７）の常法によって得た。このセルラインは広
く一般的に入手することができる。融合細胞培養物を、
それぞれが６０ウエルのプレート１０枚に移した。約４
８０ウエル（８０％）が生細胞を含んでいた。放射線免
疫沈澱法またはＥＬＩＳＡ法により、ｒｇｐｔ２０に対
する抗体について各ウェルをスクリーニングした。この
ＥＬＩＳＡは、（ａ）ｒｇｐｌ　２０被覆した微量滴定
ウェルを、室温で３０分間、１％（重量／容量）でイン
キュベートすることによって非特異的な結合部位をブロ
ックしりｒｇｐ　ｌ　２０被覆ウエノ呟および（ｂ）西
洋ワサビペルオキシダーゼでラベルしたヤギ抗−マウス
ＩｇＧを用いる通常の２重抗体サンドインチ検定である
。

４８０ウエルの内ｌＯウェルがｒｇｐ１２０の抗体に対
して陽性であった。次いで、これら１０ウエルを、ｒｇ
ｐ１２０のヒトＴ４ヘルパー細胞への結合をブロックす
る能力についてスクリーニングした。このブロッキング
の検定は次のようにして行った： 、腹水症体液のインビトロ培養液上清、または精製した
腹水症調製物あるいは上清を通常の検定でスクリーニン
グする。たとえば、この精製法は、不溶化したブドウ球
菌タンパク質Ａのカラムに吸着させ、次いで抗体を溶離
することからなる。モノクローナル抗体調製物の連続希
釈液（未希釈〜１：１０００）を検定緩衝液で調製した
。検定緩衝液は次の成分を含んでいる： ａ）ギブコＦ−１２／ＤＭＥＭ　５０：５０混合物（培
地）ｂ）１０％の厳格に透析したウシ胎児血清ｃ）０．
２ｍＭ　７ツ化フエニルメチルスルボニルｄ）リン酸緩
衝食塩水中の０．０５％ツイーン８゜ｅ）０．０６ＭＮ
ａＣｆｆ ｆ）０．２５ｍｇ／＋＋ｏ２　ＢＳＡ（ウシ血清アルブ
ミン）ｇ）１２．５ｍＭ　ヘペス緩衝液Ｔ）Ｈ７，４そ
れぞれの連続希釈液（５０μＱ）を、１２Ｘ７５ポリス
チレン試験管中で、放射線ヨウ素化したｒｇｐｉ　２０
（−１００，０００ｃｐｍ）の検定緩衝液溶液（５０−
１００ｐのおよび３−５　Ｘ　Ｉ　Ｏ”ＣＨＯ（チ＋イ
ニーズ・ハムスター卵巣）セルラインＳＶＥ　ＯＫＴ　
４（クロー７１７）検定緩衝液（１００ｇｆｆ）と混合
し、４℃で１時間インキュベートした。この細胞を遠心
してペレット化し、上清を吸引し、ペレットを検定緩衝
液（１、ＯｒｎＱ）に再懸濁し、再ペレット化し、吸引
し、このベレットをγカウンターで計測した。

このＣＨＯセルラインは、ヒトＴ４受容体をコードして
いる遺伝子を５Ｖ−４０初期プロモータ一のコントロー
ル下でＤＨＦＲをコードシテいるベクター中に配置し、
ｃＨｏ細胞中にトランスフェクションし、そしてそのＴ
４受容体遺伝子を増幅して形質転換細胞表面での発現を
増加させるために５００ｎＭメトトレキセイト中で増幅
した形質転換ＣＨＯセルラインである。本検定に用いる
のに適したその他のＴ４形質転換体は当分野で知られて
おり、一般に入手可能な出発原料から容易に調製される
（３８．３９．４０）。このようなＴ４形質転換体をＤ
ＨＦＲと同時形質転換し、Ｔ４細胞表面発現を最大にす
るため常法によって増幅するのが好ましい。多量のＴ４
を含んでいるこのような細胞は検定に高い感度を与える
。

放射線ヨウ素化するｒｇｐ１２０に留意して用いること
が重要である。他のいくつかの常法によると、トレーサ
ーをこの検定で使用不能にする結合性を有する”６１−
ｒｇｐｌ　２０になることがわかった。使用した成功裏
の方法は次のようであった：ｌ　ｍｇ／　４００μＱの
ｒｇｐｌ　２０（４００ｕＱ）を１ｍｃｉの１２５■、
０．３５ｒｎｙ／ｒｎＱのラクトペル、ｔ　キシ）ｊ　
−−ｔ’（２０μＱ）および１ｍＭのＨ２ｏ２（２０ｕ
ｃ）と混合し、室温で１０分間インキュベートし、１ｍ
Ｍのβ−メルカプトエタノール（２０μＱ）を加え、こ
の反応混合物を室温で２分間インキュベートし、０．５
重量／容量％のＢ　Ｓ　Ａ（５０μＩ２）を加え、この
反応混合物を０．５重量／容量％ＢＳＡを含むＰＢＳ緩
衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ　−Ｂ　Ｓ　Ａ）で２．５　ｍＱに希
釈し、Ｇ−２５カラムにかけ、そしてＰ　Ｂ　Ｓ　−Ｂ
　Ｓ　ＡＣ３。

５　ｍＱ）で溶離した。１２５Ｉ　−ｒｇｐｌ　２０を
溶出液中に回収した。

唯一のブロック抗体を産生ずるウェル（５Ｃ２）中の細
胞をサブクローンした。同じ阻害活性体がウェルＥ５か
ら得られた。ＩｇＧに起因するこの活性体を硫酸アンモ
ニウム沈澱などによって所望の形態に精製した。この５
Ｃ２Ｅ５モノクロ一ナル抗体は、ペレットＣｐｍでの減
少で測定すると結合数をネズミモノクローナル抗体対照
の約ｌＯ〜１５％に減少させることから、”５Ｉ　−ｒ
ｇｐｌ　２０Ｔ４受容体結合の最大の阻害を示した。こ
の５０２Ｅ５ハイブリドーマは一般に入手することがで
きる（ＡＴＣＣＨＢ　９４３５）。

実施例３ｒｇｐ１２０からのＴＣＢドメインの回収 本実施例は、残基４１１〜４５４にわたるＴＣＢドメイ
ン部分の調製に用いる方法を説明するものである。

ｐＡ　Ｉ　Ｄ　５ｅｎｖＴｒＤ　ＨＦ　Ｒでトランスフ
ェクションし、ＥＰ　　１８７，０４１記載のようにし
て培養したＣＨＯ細胞の培養液から本実施例に用いるｒ
ｇｐ１２０を精製した。このｒｇｐ１２０を免疫アフィ
ニティークロマトグラフィーでほぼ均質になるまで精製
した。この精製ｒｇｐ１２０を、インダラム（■ｎｇｒ
ａｍ）の方法（３５）に従い、０．２５Ｍ氷酢酸中、減
圧酸素雰囲気下、１１０°Ｃで１８時間加水分解した。

このような条件下で、ｒｇｐ１２０タンパク質の骨格は
アスパルチル残基のＮおよびＣ末端の両側で切断される
。この消化ｒｇｐ１２Ｑにトリス緩衝液を加えて中和し
、ｐＨを７に調節した。

次いで、この消化ｒｇｐ１２０を、常法（３６）によっ
てアルデヒド−シリカに共有結合させたネズミモノクロ
ーナル抗体５Ｃ２Ｅ５のカラムにかけた。このカラムを
、ｐＨ３に緩衝化した食塩水溶液で洗浄した。モノクロ
ーナル抗体５Ｃ２Ｅ５が、Ｔ４＋ヘルパーＴ細胞の１４
表面抗原へのｒｇｐ　１２０の結合を妨げるように、ｒ
ｇｐ１２０に結合することがわかった（実施例２参照）
。５Ｃ２Ｅ５のカラムからの溶出液を通常のアミノ酸定
量分析法によって分析し、以下のアミノ酸組成を得たニ
アミノ酸　　　　　　　Ｄ／ＮＴ　　　　Ｓ　　　　Ｅ
／ＱＰ　　　　Ｇ　　　　Ａ　　　　Ｃモル／ｒｇｐ１
２０モル　３．０　３．９　２．８　４．２　３．４　
３．１　１．９　０．８アミノ酸　　　　　　　ＶＭＩ
ＬＹＦＫＲモル／ｒｇｐ１２０モル　１．４　１．５　
５．２　３．８　１．０　１．６　２．１　２．６分析
を行ったこの条件はＣおよびＷの正確な測定を妨げる。

また、５Ｃ２Ｅ５のカラムからの溶出液をＮ−末端配列
決定によっても分析し、次の配列だけを得た：　　Ｉ　
　ＬＰ　　ＲＩＫＱＦ。

このアミノ酸分析およびＮ−末端配列決定の結果により
、５０２Ｅ５カラムに結合したｒｇｐ１２０の酢酸消化
物中のペプチドだけがＨＩ　Ｖ　ｅｎｖ配列のトレオニ
ル残基４１１からアルギニン残基４５４までの４４アミ
ノ酸フラグメントであることが確認された。この領域は
次の配列を有している：　ＴＩＴＬＰＣＲＩＫＱＦ、Ｉ
ＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱＩＲＣ３ＳＮＩ
ＴＧＬＬＬＴＲ０このペプチドは、Ｔ４＋ヘルパーＴ細
胞の１４表面抗原へのｒｇｐ１２０の結合をブロックす
るネズミモノクローナル抗体５Ｃ２Ｅ５のエピトープ、
および上記のグルタ３突然変異体で削除した配列を含有
しているので、このペプチドがＴＣＢドメインの部分で
あると結論される。

実施例４免疫毒性物質 独立して、またはカクテルとして、脱グリコジル化すチ
ンＡ鎖（ｄｇＡ）にカップリングさせ、多種多様のウィ
ルス・サブタイプ（ｓｕｂｔｙｐｅ）由来のＨＩＶに感
染した細胞を殺すのに用いられる、ＨＩＶにコードされ
ているタンパク質に指向性のモノクローナル抗体は次の
ようにして得られる：Ｈ，ＩＶ感染したヒトＨｐ（ＣＤ
４つ細胞由来の熱処理（３０秒／６０°）ＮＰ−４０リ
ゼイトで免疫（多重膜腔内注射）したマウスから血清を
得る。また、ｇｐ１２０またはｇｐ１５０で免疫したマ
ウスから血清を得ることもできる。タンパク質ｇｐ１５
０は、ｇｐ１２０およびｇｐ４１を得るために切断して
除かれる領域を有するｇｐ１６０の細胞外ドメインであ
る。すべての血清を以下の検定で試験する＝１、ＨＩＶ
感染したＨ９細胞、未感染のＨ９細胞、またはｇｐ１２
０被覆した未感染のＨ９細胞を用いる間接免疫毒性物質
（ＩＴ：ｌｌａ定２、放射線免疫検定（ＲＩ　Ａ）−陽
性の血清を、ＲＩＡにより、精製したｇｐ１２０および
ｇｐ１５０に対して試験して、マウスがこれらのタンパ
ク質に対して抗体を作ったかどうかを測定する。

ＲＩＡおよび間接ＩＴ検定の一方または両方で陽性であ
るマウスからの血清を集め、セファロース−ｇｐ１２０
またはセファロース−ｇｐ１５０でアフィニティー精製
した。この精製抗体をもう一度３つの検定で試験した。

陽性であれば、このマウスをＨＩＶ−Ｈ９、±ｇｐｌ　
２０　　＝ｌ＝ｇｐｌ　５０のリゼイトでブースター処
理する。数匹のマウスを犠牲にし、その肺臓を５ｐ２１
０またはＮＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３ミエローマ細胞
と融合した。増殖中のハイブリドーマを含有するウェル
からの上溝（Ｓ　Ｎ）を、（ａ）Ｈ９■、（ｂ）ＨＩＶ
−Ｈ９に対し、間接ＩＴ検定で試験した。（ｂ）で陽性
であり、（ａ）で陰性であるハイブリドーマをさらにサ
ブクローンし、ＲＩＡ。

間接ＩＴ、免疫沈澱などで試験した。陽性のクローンか
らの抗体をアイソタイプ化し、抗体の産生量を大きくし
た。この抗体をｄｇＡに直接カップリングさせた。これ
らのＩＴ−ｄｇＡを、ＡＩＤＳ患者からの細胞およびＨ
ＩＶ感染した細胞で試験した。

次いで、臨床用のＩＴを調製した。

リチンＡ鎖抗体結合体 （１）抗体のＦ　（ａｂ　’　）２およびＦＡＢ　’断
片の調製抗体調製物を以下の条件下、ペプシン（４５０
０Ｕ／ｍｌＸシグマ。セント・ルイス、ＭＯ）で３７°
Ｃで６時間処理する。ｐＨ＝３．７（０，１Ｍクエン酸
バッファー）、タンパクｆｆ濃度：２〜３ｍｇ／ｍ＋、
酵素／タンパク質比：２／１００（重量比）。ｌＮＮａ
ＯＨでｐＨを８．０に上げることによって消化を終わら
せる。Ｆ　（ａｂ　’　）断片の単離は、０．３Ｍ　　
ＮａＣｌリン酸バッファーで平衡化したセファクリルＳ
−２００ＨＲ（ファルマシア、ビス力タウエイ、ＮＪ）
上でのゲル濾過により行うか、またはＯ，１Ｍクエン酸
バッファー（ｐＨ３，７）で平衡化したＳＰ−セファデ
ックスカラム（ｌｏｘ２ｃｍ）に未中和消化物を吸着し
、リン酸バッファー食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７，２）でＦ
（ａｂ’）２断片を溶出することによって行う。ｐ　（
ａｂ　’　）ｚ断片の収率は一般に３５〜５０％である
。

Ｆａｂ’断片は、上記で得られたＦ（ａｂ’）、断片を
、エチレンジアミンテトラ酢酸（２ナトリウム塩ＸＥＤ
ＴＡＸＰＢＥ）０．００３Ｍを含有する０゜１モルリン
酸バッファー（ｐＨ７，５）中での最終濃度が５ｍＭの
ジチオトレイトール（ＤＴＴ）で室温で１時間処理して
還元することによって得ることができる。過剰のＤＴＴ
はセファデックスＧ−２５上のゲル濾過により除くこと
ができ、Ｆａｂ′断片（５ｍｇ／ｍｌ）のチオール基は
フルトンらの文献［Ｆｕｌｔｏｎ　　ｅｔ　　ａｌ、　
、Ｊ　、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、上３６．３１０３〜
３１０９（１９８６）］記載のようにして最終濃度が２
ｍＭのエルマン試薬（Ｅ　ｌｌｍａｎ　’　ｒｅａｇｅ
ｎｔ）（５，５’−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸
））（ＤＴＮＢ）で誘導することができる。未反応ＤＴ
ＮＢは、ＰＢＥで平衡化したセファデックスＧ−２５カ
ラム（３０Ｘ２ｃｍ）上のゲル濾過により除くことがで
きる。　Ｆ（ａｂ’）、断片およびＦ　ａｂ　’断片の
純度は、５ＤＳ−ＰＡＧＥ、およびＦａｂ’とＦＣの両
断片と反応しない抗マウスＩｇＧ血清を用いた二元拡散
および免疫電気泳動法により測定する。

本調製物はＦｃ断片および完全なＩｇＧを含んでいない
。

（２）リチンＡ鎖 脱グリコジル化したＡ鎖（ｄｇＡ）を、ソープらの文献
［Ｔｈｏｒｐｅ　　ｅｔ　　ａｌ、　、Ｅｕｒ、　Ｊ、
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　。

上４７，１９７〜２０６（１９８５）］記載の方法に従
って調製する。マウス２５ｇ当たりの天然および脱グリ
コジル化Ａ鎖のＬＤ、。値は、それぞれ約０．７ｍｇお
よび０．３ｍｇである。無細胞系のウサギ網赤血球アッ
セイにおけるＩＣ５ｏ値は、天然および脱グリコジル化
Ａ鎖共に約１０−”〜ＩＱ−１２モルである。

抗体と結合させるために、Ａ鎖をフルトンらの文献（上
述）記載のようにして５ｍＭ　　ＤＤＴで還元する。

（３）ＳＰＤＰによるＩＴ−Ａｓの精製抗体のＩｇＧま
たはＦ（ａｂ’）２断片を用いフルトンらの文献（上述
）記載の方法によりＩＴ−Ａｓを調製する。ＰＢＥ（ｐ
Ｈ７，５）中のＩｇＧまたはＦ　（ａｂ　’　）２断片
の溶液（１０ｍｇ／　ｍｌ）にジメチルホルムアミドに
溶解した５ＰＤＰを加えて最終濃度が］、ｍＭとなるよ
うにする。室温で３０分間装いた後、上記溶液をＰＢＥ
で平衡化したセファデックスＧ−２５カラム（３０％２
ｃｍ）で濾過する。誘導したＩｇＧまたはＦ（ａｂ’）
２断片の置換割合は、約３〜４分子ＦＤＰ／タンパク質
分子である。誘導したタンパク質は、ついでＰＢＥに溶
解した還元Ａ鎖１．３ｍｇ／ｍｌと混合し、２５℃で２
時間、４°Ｃで一夜放置する。この混合物をついで精製
する。

（４）ＤＴＮＢによるＦａｂ’Ａｓの調製ＤＴＮＢで誘
導したＦａｂ’によるマウスＦ　ａｃ　’−Ａの調製は
、ウサギＦａｂ’−Ａについてフルトンらの文献（上述
）に記載された方法に従って行う。

１〜２個のＴＮＢ置換したチオール基を含有するエルマ
ン試薬で誘導したＦ　ａｂ　’断片（上記Ｆａｂ’断片
の調製参照）をＰＢＨに溶解しく５ｍｇ／ｍｌ）、これ
を還元Ａ鎖（１，３ｍｇＡ鎖／ｍｇＦａｂ’）と室温で
最終濃度が２ｍｇタ、ンパク質／ｍｌとなるように混合
する。ＴＮＢ−Ｆａｂ’とＡ鎖との間の反応は４１２ｎ
ｍでの吸収の増加で追跡し、２５℃では約２時間で完了
する。この混合物はついで直ちに精製する。

（５）ＩＴ−Ａｓの精製 完全な抗体またはその断片で調製したＩ　Ｔ−Ａｓを、
ノウルズおよびソープの文献［Ｋｎｏｔｐｌｅｓ　　ａ
ｎｄＴｈｏｒｐｅ、　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、上
６０．４４０〜４４３（１９８７）］記載の方法を少し
変えてブルーセファロース上のアフィニティークロマト
グラフィーで精製する。クロマトグラフィーは０．０５
Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０）中で行い、Ａ鎖およ
びＩＴ−Ａｓを同じバッファーで調製したｌＭ　　Ｎａ
Ｃ１で溶出する。溶出液を超遠心分離で５ｍｇ／ｍｌに
濃縮し、リン酸バッフｙ　−０、３Ｍ　　Ｎ　ａＣｌ（
ｐＨ７，２）で平衡化したセファクリルＳ−２００ＨＲ
に流す。精製ＩＴ−Ａｓを含むピークを集め、超遠心分
離で少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌまで濃縮し、アリコー
トに７０°Ｃで保存する。

（６）Ｆａｂ’−ＧＡＭＩｇ　　Ａの調製および間接免
疫毒素アッセイ アフィニティー精製したヤギ抗マウス免疫グロブリン（
ＧＡＭＩｇ）のＦａｂ断片を、０．１Ｍ　　ＥＤＴＡお
よびシスティンを含有する０、１Ｍ　　ＮａＰＯ４中の
２％パパイン溶液を用いたパパイン消化により調製する
。ＯｌＯＩＭ　　ＮａＰＯ４（ｐＨ７−６）で平衡化し
た５ＥＡＥ−セファセル上のアフィニティークロマトグ
ラフィーによりＦａｂ断片をＦｃ断片から分離する。Ｆ
ａｂ断片をセファデックスＧ−２５上で脱塩する。つい
で還元Ｆａｂ断片を１００倍モル過剰の５．５ジチオ−
ビス（２−ニトロ安息香酸ＸＤ　Ｔ　Ｎ　Ｂ　、エルマ
ン試薬）と反応させる。

エルマン試薬で置換したＦａｂ−ＧＡＭＩｇをｓ２００
上のクロマトグラフィーで遊離のＦａｂ−ＧＡＭｌｇお
よび遊離のエルマン試薬から分離する。

フルトンらの文献［Ｊ　、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　
２６　ｌ５５３１４（１９８６）］記載の方法により調
製し試験したりチンＡ鎖を５ｍＭ　　ＤＴＴで還元する
。

Ａ鎖をセファデックスＧ−２５上で脱塩し、Ｆａｂ−Ｇ
ＡＭＩｇ−Ｅと結合させる。ついでＦａｂ−ＧＡＭＩｇ
−Ａを８２００およびブルーセファロース上のアフィニ
ティークロマトグラフィーで精製する。

（７）間接免疫毒素アッセイ 対数成長期にある生菌数が９５％よりも大きい細胞を用
いる。濃度が２Ｘ１０−’〜２Ｘ１０−１３Ｍの範囲に
ある最初の非結合抗体の系列希釈を適当な媒質中に調製
し、１００μＱのアリコートを９６ウエルプレート中に
３個ずつブレーティングする。同じ媒質中の容積１００
μｇの１０’Ｈ９またはＨＩＶ−Ｈ９細胞を各ウェルに
加え、プレートを４℃で１時間インキュベートする。つ
いでＦａｂ−ＧＡＭＩｇ−Ａを最終濃度ｂｕｇ／ｍｌで
適当なプレートに加える。コントロール群には（ａ）未
処理細胞、（ｂ）Ｆａｂ−ＧＡＭＩｇ−Ａのみで処理し
た細胞、（ｃ）抗体のみで処理した細胞、および（ｄ）
抗体で処理した後Ｆａｂ−ＧＡＭＩｇ（Ａ鎖を含まない
）で処理した細胞が含まれる。ついでプレートを５％Ｃ
Ｏ２中、３７°Ｃで３６時間インキュベートする。細胞
を３７℃で４〜８時間３Ｈ−チミジンで処理し、ついで
タイターチック（Ｔ　１ｔｅｒｔｅｋ）自動収集器を用
いてガラス繊維フィルター上に集める。

３Ｈ−チミジンの取り込みをＬ　Ｋ　Ｂベータカウンタ
ーの液体シンチレーションカウントで測定する。

結果は未処理細胞によって取り込まれた３Ｈ−チミジン
の％で表す。すべてのコントロールの培養細胞では未処
理細胞によって８０〜１００％の３Ｈ−チミジンが取り
込まれる。

（８）データ分析 間接ＩＴアッセイにおけるモノクローナル抗体の予期さ
れる能力は、標的細胞の５０％を殺すことのできる抗体
の濃度（Ｆａｂ−ＧＡＭｌｇ−Ａを最適濃度で使用）（
ＩＣ６゜）に基づく。ＩＴ−Ａｓがインビボで有用であ
るためにはＩＣ，。は１０−”〜１Ｏ−Ｉ０でなければ
ならない。

ＩＣ，。はつぎのようにランク付けされる。

１０−”Ｍ　　＝　　４＋ ｔｏ−”Ｍ　　＝　　３＋ １０−’Ｍ　　＝　　２＋ １０−’Ｍ　　＝　　１＋ ４＋および３＋抗体はＩＴ−Ａｓとして適当であると思
われるので、さらにｇｐ１５０およびｇ＋）１２０に対
するＲＩＡで試験する。

（９）ＲＩ　ｐ。

９６ウエルマイクロタイタープレートのウェルを、１０
０ｐｆｆＰＢｓ中のｇｐ１２０またはｇｐ１５０５μｇ
／蛯で１６時間／４°Ｃコーティングする。ウェルをデ
カントし、ｄＨ２０で５回洗浄し、ＰＢＳ−１０％ＦＣ
５２００μＱで２４時間／４０Ｃブロックする。ウェル
をデカントしｄＨ２０で５回洗浄する。血清または上澄
み（Ｓ　Ｎ）の希釈液を２５℃で４時間かけて加える。

物質を除き、ウェルをｄＨ，Ｏで５回洗浄する。１０’
ｃｐｍのＧＡＭ１ｇを４〜６時間／２５°Ｃかけて加え
る。試料を除き、プレートをｄＨ２０で５回洗浄し、乾
燥し、切り離してカウントする。

（１０）試験した抗体および血清 （ａ）ウサギ抗ｇｐ４１ （ｂ）ＭｏＡｂｓ　　Ｎｏｓ、　１．２．３，４，５．
６，７，８，１０．１２（コード） （ｃ）ＭｏＡｂｓ　　７Ｆ１１．１Ｆ９．５Ｂ９．ＬＤ
ｌｏ、５Ｇ９，５Ｃ２，６Ｄ８Ｅ９゜９Ｆ６（コード） （ｄ）ＨＩＶ−Ｈ９細胞からの溶解物でＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ
　／　ｃマウスを免疫することによって産生じたポリク
ローナルマウス血清 （１１）結果 モノクローナル抗体 （ａ）Ｒａｇｐ４１　：　　Ｉ　Ｃ６０１Ｘ　Ｉ　Ｏ’
Ｍ（アフィニティー精製していない） （ｂ）モノクローナル抗体 ７Ｆ１］　　：　　＋１ １Ｆ９　　：　　− ５Ｂ９　　：　　− 一］００− １０１０　　：　　− ５Ｇ９　　　：　　− ５Ｃ２：　　− ６Ｄ８Ｅ９　：　　− ９Ｆ６　　　：　　− わずかに１種のモノクローナル抗体のみが間接アッセイ
において少し有効であるだけであった。

まずＨＩ　Ｖ−Ｉに感染させたｌＸｌ０’個のＨ９細胞
から調製した溶解物で５０匹のＢＡＬＢ／Ｃマウスを免
疫した。これらのマウスから採った血清を間接アッセイ
でスクリーニングした。３８匹の生存マウスのうち１５
匹が間接ＩＴアッセイにおいて３十〜４＋であった。Ｒ
ＩＡを行い、２回の免疫の後、３匹のマウスはｇｐ１２
０に対する抗体を有為に産生じた（第３表参照）。

第貧火 間接ＩＴアッセイおよびＲＩＡの結果 間接ＩＴ　　　　　ＲＩＡ ｌ十またはこれより大きい値はｌｐｇ／ｍＱよりも太き
かった。

以上、本発明をその好ましいと思われる実施態様を中心
に述べたが、本発明はもとよりこれら開示の実施態様に
限定されるものではなく、反対に添付のクレームの範囲
内に含まれる種々の変更および等価物をカバーするもの
である。クレームの範囲は、それら変更および等価物の
すべてを包含するもの２して最も広い解釈を与えられる
べきである。

又状 １　、　Ｂａｒｒｅ−５ｉｎｏｕｓｓｉ、　Ｆ、ら、　
５ｃｉｅｎｃｅ　２２０：８６８　（１２、　Ｐｏｐｏ
ｖｉｃ、　Ｍ、ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４：　４９
７　（１９８４）。

３　、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，ら、、　５ｃｉｅｎｃ
ｅ　２２４：　５００　（１９８４）。

４　、５ｃｈｕｐｂａｃｈ、　Ｊ、ら、　５ｃｉｅｎｃ
ｅ　２２４：　５０３　（１９８４）。

５　、　Ｓａｒｎｇａｄｈａｒａｎ、　Ｍ、Ｇ、ら、　
５ｃｉｅｎｃｅ　２２４：５０６　（１９８４）　。

６　、　Ｆａｕｃｉ、　Ａ、Ｓ、ら、　Ａｎｎａｌｓ、
　Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。

ぜ１２：　８００　（１９８５）。

７　、　Ｌａｎｅ、　Ｈ，Ｃ，ら、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、
　Ｊ、　Ｍｅｄ、　３０９：４５３　（１９８３）。

８　、　Ｍｅｒｒａｙ、　Ｈ，Ｗ、ら、　Ｎ、　Ｅｎｇ
ｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　３１０：　８８３　（１９８４
）。

９　、　Ｂｏｗｅｎ、　Ｄ、Ｌ、ら、　Ａｎｎａｌｓ　
Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｍｅｄ、１０３：　７０４　（１９８
５）。

１０、　Ｆａｕｃｉ、　Ａ、Ｓ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｒｅｓ
、　３２：　４９１　（１９８４）。

１１、　Ｒｏｏｋ、　Ａ、Ｈ，ら、　Ｊ、、　Ｃｌ１ｎ
、　Ｉｎｖｅｓｔ、、　７２：３９８　（１９８３）　
。

１２、Ｌａｎｅ、　Ｈ，Ｃ，ら、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　
Ｊ、　Ｍｅｄ、　３１３ニア９　（１９８５）。

１３、　Ａｍｍａｎｎ、　Ａ、Ｊ、ら、　Ｃｌ１ｎ、　
Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、　２７
：　３１５　（１９８３）。

１４、５ｔａｈｌ、　Ｒ，Ｅ、ら、　Ａｍ、　Ｊ、　Ｍ
ｅｄ、　７３：　１７１（１９８２）：１５、　Ｖｊ］
ｍａｒ、　Ｅ、ら、　Ｌａｎｃｅｔ　］：　７５３　（
１９８４）。

１６、　Ｋｏｅｎｉｇ、　Ｓ、ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　
２３３：　１０８９　（１９８６）−１７、Ｌｅｖｙ、
　ＬＡ、ら、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１４７：　４４１　
（１９８５）１８、　Ｓｉｅｇｅｌ、　Ｊ、Ｐ、ら、　
Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７５：　１９５７
　（１９８５）。

１９、　Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ−Ｒｕｎｄｌｅｓ、　Ｓ
、ら、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、Ｉｍｍｕｎ。

１、３：　１５６（１９８３）。

２０、Ｌａ５ｋｙ、　Ｌ、Ａ、ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　
２３影２０９　（１９８６）。

２１、　Ｓｔｅｉｎｋａｍｐ、　Ｊ、Ａ、ら、　５ｃｉ
ｅｎｃｅ　２１５：　６４（１９８２）。

２３、　Ｋｌａｔｚｍａｎｎ、　Ｄ、ら、　Ｎａｔｕｒ
ｅ　３１２：　７６７　（１９８４）−２４、Ｄａｌｇ
ｅｉｓｈ、　Ａ、Ｇ、ら、　Ｎａｔｕｒｅ　３１２：　
７６３　（１９８４）。

２５、　ＭｃＤｏｕｇａｌ、　Ｊ、Ｓ、ら、　５ｃｉｅ
ｎｃｅ　２３１：　３８２（１９８６）。

２６、　ＭｃＤｏｕｇａｌ、　Ｊ、Ｓ、ら、　Ｊ、　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、　１３影３１５１（１９８５）。

３２、　Ｂｏｕｌａｉｍｎｅ、　Ｇ、ら、　Ｎａｔｕｒ
ｅ　３１２：　６４３　（１９８４）。

３３、　Ｐｅｒｅｚ、　Ｐ、ら、　Ｎａｔｕｒｅ　３１
６：　３５４　（１９８５）。

３４、　Ｍｏｄｒｏｗ、　Ｓ、ら、　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ
ｏｇｙ　６１（２）：　５７０　（１９８７）。

３５、　Ｉｎｇｒａｍ、　Ｖ、Ｍ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　
ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　ＶＩ巻＝８３１−８４８
　（１９６３）。

３６、　Ｒａｙ、　Ｓ、に、ら、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ。

ヌは：　２２５−２２ｓ　（１９８４）。

３７、　Ｏｉ、　Ｖ、ら、　　Ｉｎ：　５ｅｌｅｃｔｅ
ｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｃｅ１ｌｕＪａｒ　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｂ、　Ｍｉｓｈｅｌｌら版、　Ｗ、
Ｊ、　ＦｒｅｅｍａｎＣｏ、、サンフランシスコ、カル
フォルニア、２５１頁（１９８０）。

３８、　Ｍａｄｄｏｎ、　Ｐ、ら、　Ｃｅ１ｌ　４７：
　３３３−３４８　（１９８６）。

３９、　Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ、　Ａ、ら、要約、　Ｉｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ
　ＡＩＤＳ、　パリ　（１９８６）。

４０．　Ｔｅｒｓｍｅｔｔｅ、　Ａ、ら、要約、　Ｉｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ
　ＡＩＤＳ、パリ　（１９８６）。

特許出願人　ジェネンテク、インコーポレイテッド代理
人　弁理士前　山　葆　はか１名

Claims (63)

【特許請求の範囲】
1. （１）免疫抑制に有効な量のヒト免疫不全ウィルスのエ
   ンベロープを、免疫性炎症を発現している患者に投与す
   ることからなる、該免疫性炎症疾患の発現の治療法。
2. （２）免疫性炎症疾患の発現が炎症性腸疾患、慢性関節
   リウマチ、全身性エリテマトーデス、若年型糖尿病、グ
   レーヴス病、重症筋無力症、移植対宿主拒絶反応、およ
   び宿主対移植拒絶反応に関するものである請求項（１）
   に記載の治療法。
3. （３）ヒト免疫不全ウィルスのエンベロープがｒｇｐ１
   ２０である請求項（１）に記載の治療法。
4. （４）ヒト免疫不全ウィルスのエンベロープが、該エン
   ベロープのＴＣＢドメインを含んでいる請求項（１）に
   記載の治療法。
5. （５）ヒト免疫不全ウィルスエンベロープのＴＣＢドメ
   インがヒト免疫不全ウィルス単離体３Ｂエンベロープの
   残基４１１−４５４である請求項（４）に記載の治療法
   。
6. （６）ＴＣＢドメインが、通常該ＴＣＢドメインのＣ末
   端またはＮ末端と接しているヒト免疫不全ウィルス免疫
   エピトープを含んでいないものである請求項（５）に記
   載の治療法。
7. （７）ＴＣＢドメインが、式： ＴＥＧＳＮＮＴＥＧＳＤＴＩＴＬＰＣＲＩＫＱＦＩＮＭ
   ＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱＩＲＣＳＳＮＩＴＧ
   ＬＬＬＴＲＤＧＧＮＮＮＮＥＳＥＩで示されるアミノ酸
   配列を有するるものであるか、またはＴ４ヘルパーリン
   パ球のＴ４リセプターと結合し得るそのフラグメントで
   ある請求項（６）に記載の治療法。
8. （８）投与量が約０．５×１０＾−＾８〜５×１０＾−
   ＾９モルである請求項（１）に記載の治療法。
9. （９）治療有効成分を徐放性組成物の形で投与する請求
   項（１）に記載の治療法。
10. （１０）徐放性組成物がポリラクチドである請求項（９
    ）に記載の治療法。
11. （１１）治療有効成分を静脈注射によって投与する請求
    項（１）に記載の治療法。
12. （１２）通常、ＴＣＢドメインのＣ末端またはＮ末端と
    接しているヒト免疫不全ウィルス免疫エピトープを含ん
    でいないヒト免疫不全ウィルスエンベロープのＴＣＢド
    メインを含んでいる組成物。
13. （１３）ＴＣＢドメインのＣ末端またはＮ末端と接して
    いるヒト免疫不全ウィルスエンベロープ配列を含んでい
    ないヒト免疫不全ウィルスエンベロープのＴＣＢドメイ
    ンを含んでいる組成物。
14. （１４）ＴＣＢドメインが、ヒト免疫不全ウィルス単離
    体３Ｂエンベロープの残基４１１−４５４またはＴ４ヘ
    ルパー細胞のＴ４リセプターと結合し得るそのフラグメ
    ントである請求項（１３）に記載の組成物。
15. （１５）ＴＣＢドメインが、式： ＴＥＧＳＮＮＴＥＧＳＤＴＩＴＬＰＣＲＩＫＱＦＩＮＭ
    ＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱＩＲＣＳＳＮＩＴＧ
    ＬＬＬＴＲＤＧＧＮＮＮＮＥＳＥＩで示されるアミノ酸
    配列を有している請求項（１４）に記載の組成物。
16. （１６）ＴＣＢドメインが、式： ＣＲＩＫＱＦＩＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱ
    ＩＲＣ で示されるアミノ酸配列を有している請求項（１４）に
    記載の組成物。
17. （１７）さらに薬学的に許容し得る担体を含んでおり、
    無菌である請求項（１２）、（１３）または（１４）に
    記載の組成物。
18. （１８）薬学的に許容し得る担体と請求項（１２）、（
    １３）または（１４）に記載の組成物からなる無菌組成
    物の治療有効量をヒト免疫不全ウィルス感染患者に投与
    することからなるエイズの治療法。
19. （１９）アジュバント、薬学的に許容し得る担体、およ
    び請求項（１２）、（１３）または（１４）に記載の組
    成物からなる無菌組成物の治療有効量を患者に投与する
    ことからなるヒト免疫不全ウィルス感染に対するワクチ
    ン接種法。
20. （２０）組成物が、さらに腫瘍壊死因子またはインター
    フェロンを含んでいる請求項（１８）に記載の治療法。
21. （２１）腫瘍壊死因子が腫瘍壊死因子−αであり、イン
    ターフェロンがインターフェロン−γである請求項（２
    ０）に記載の治療法。
22. （２２）アジュバントが腫瘍壊死因子またはインターフ
    ェロンである請求項（１９）に記載の治療法。
23. （２３）腫瘍壊死因子が腫瘍壊死因子−αであり、イン
    ターフェロンがインターフェロン−γである請求項（２
    ２）に記載の治療法。
24. （２４）Ｔ４ヘルパーリンパ球のＴ４リセプターと結合
    し得ないヒト免疫不全ウィルスエンベロープ変異体を含
    んでいるヒト免疫不全ウイルスワクチン。
25. （２５）ヒト免疫不全ウィルスエンベロープのＴＣＢド
    メイン内のアミノ酸残基が置換または削除されているか
    、または他の残基がヒト免疫不全ウィルスエンベロープ
    残基の隣に挿入されており、これによって、ヒト免疫不
    全ウィルスエンベロープ変異体がＴ４ヘルパーリンパ球
    のＴ４リセプターと結合することができない請求項（２
    ４）に記載のワクチン。
26. （２６）ヒト免疫不全ウィルスエンベロープが３Ｂ株か
    ら得られ、残基４２４−４３５が削除されている請求項
    （２５）に記載のワクチン。
27. （２７）モノクローナル抗体５Ｃ２Ｅ５（ＡＴＣＣＨＢ
    ９４３５）のＴＣＢドメイン結合特性を有する抗体。
28. （２８）細胞毒性物質とコンジュゲートしている請求項
    （２７）に記載のモノクローナル抗体。
29. （２９）細胞毒性物質がリチンである請求項（２８）に
    記載のモノクローナル抗体。
30. （３０）検出可能なマーカーまたは水不溶性マトリック
    スに共有結合している請求項（２７）に記載のモノクロ
    ーナル抗体。
31. （３１）無菌の薬学的に許容し得る担体中の請求項（２
    ７）に記載のモノクローナル抗体。
32. （３２）治療許容量の請求項（２７）に記載の抗体をヒ
    ト免疫不全ウィルス感染患者に投与する方法。
33. （３３）細胞表面マーカーと結合し得る物質（ａ）、お
    よびヒト免疫不全ウィルスエンベロープまたはヘルパー
    リンパ球のＴ４リセプターに結合し得るそのフラグメン
    ト（ｂ）のコンジュゲートを調製することからなる、選
    択された細胞表面マーカーに細胞毒性リンパ球を指向さ
    せる方法。
34. （３４）コンジュゲートがヒト免疫不全ウィルスエンベ
    ロープフラグメントを含んでいる請求項（３３）に記載
    の方法。
35. （３５）フラグメントが、式： ＴＥＧＳＮＮＴＥＧＳＤＴＩＴＬＰＣＲＩＫＱＦＩＮＭ
    ＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱＩＲＣＳＳＮＩＴＧ
    ＬＬＬＴＲＤＧＧＮＮＮＮＥＳＥＩで示される配列を有
    する請求項（３４）記載の方法。
36. （３６）マーカー結合物質がハプテンである請求項（３
    ５）に記載の方法。
37. （３７）マーカー結合物質が抗体の可変領域を含んでい
    る請求項（３３）に記載の方法。
38. （３８）抗体が腫瘍壊死因子−αと結合し得る請求項（
    ３７）に記載の方法。
39. （３９）細胞表面マーカーと結合し得る物質（ａ）、お
    よびヒト免疫不全ウィルスエンベロープまたはヘルパー
    リンパ球のＴ４リセプターに結合し得るそのフラグメン
    ト（ｂ）のコンジュゲート。
40. （４０）細胞表面マーカーがタンパク質である請求項（
    ３９）にコンジュゲート。
41. （４１）タンパク質に結合し得る物質が抗体の可変領域
    を含んでいる請求項（４０）に記載のコンジュゲート。
42. （４２）コンジュゲートが、式： ＴＥＧＳＮＮＴＥＧＳＤＴＩＴＬＰＣＲＩＫＱＦＩＮＭ
    ＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱＩＲＣＳＳＮＩＴＧ
    ＬＬＬＴＲＤＧＧＮＮＮＮＥＳＥＩで示される配列を有
    するヒト免疫不全エンベロープフラグメントを含んでい
    る請求項（４０）に記載のコンジュゲート。
43. （４３）細胞表面マーカーと結合し得る物質と、ヒト免
    疫不全ウィルスエンベロープまたはそのフラグメントと
    が共有結合によって架橋されている請求項（４０）に記
    載のコンジュゲート。
44. （４４）共有結合がペプチド結合である請求項（４３）
    に記載のコンジュゲート。
45. （４５）コンジュゲートが、そのＮ末端側に細胞表面マ
    ーカーと結合し得る抗体の可変領域を、Ｃ末端側にヒト
    免疫不全ウィルスエンベロープＴＣＢドメインを有して
    いる融合物である請求項（４４）に記載のコンジュゲー
    ト。
46. （４６）ヒト免疫不全ウィルスにコードされている細胞
    表面抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体、およ
    び該モノクローナル抗体に結合した毒素、からなる免疫
    毒性物質。
47. （４７）毒素がリチンＡ鎖である請求項（４６）に記載
    の免疫毒性物質。
48. （４８）リチンＡ鎖が脱グリコシル化されている請求項
    （４７）に記載の免疫毒性物質。
49. （４９）リチンＡ鎖が組換えＤＮＡ法によって作成され
    る請求項（４７）に記載の免疫毒性物質。
50. （５０）モノクローナル抗体がネズミモノクローナル抗
    体である請求項（４６）に記載の免疫毒性物質。
51. （５１）モノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体
    である請求項（４６）に記載の免疫毒性物質。
52. （５２）モノクローナル抗体がネズミ−ヒトハイブリッ
    ド抗体である請求項（４６）に記載の免疫毒性物質。
53. （５３）細胞表面抗原がｇｐ１６０である請求項（４６
    ）に記載の免疫毒性物質。
54. （５４）毒素と結合させた、ヒト免疫不全ウィルスコー
    ド化細胞表面抗原と特異的に結合するモノクローナル抗
    体とからなる免疫毒性物質の治療有効量を患者に投与す
    ることからなる、ヒト免疫不全ウィルス感染細胞を死滅
    させる方法。
55. （５５）毒素がリチンＡ鎖である請求項（５４）に記載
    の方法。
56. （５６）リチンＡ鎖が脱グリコシル化されている請求項
    （５５）に記載の方法。
57. （５７）リチンＡ鎖が組換えＤＮＡ法によって作成され
    る請求項（５６）に記載の方法。
58. （５８）モノクローナル抗体がネズミモノクローナル抗
    体である請求項（５４）に記載の方法。
59. （５９）モノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体
    である請求項（５４）に記載の方法。
60. （６０）モノクローナル抗体がネズミ−ヒトハイブリッ
    ド抗体である請求項（５４）に記載の方法。
61. （６１）細胞表面抗原がｇｐ１６０である請求項（５４
    ）に記載の方法。
62. （６２）ウィルスによってコードされた細胞表面抗原を
    発現する非腫瘍発生ウィルス感染細胞を死滅させる方法
    であって、毒素と結合した、該細胞表面抗原に特異的に
    結合するモノクローナル抗体からなる免疫毒性物質の治
    療有効量を患者に投与することからなる方法。
63. （６３）毒素がリチンＡ鎖である請求項（６２）に記載
    の方法。