JPH01104098A - Novel calcitonin derivative and salt thereof - Google Patents

Novel calcitonin derivative and salt thereof

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JPH01104098A
JPH01104098A JP62252592A JP25259287A JPH01104098A JP H01104098 A JPH01104098 A JP H01104098A JP 62252592 A JP62252592 A JP 62252592A JP 25259287 A JP25259287 A JP 25259287A JP H01104098 A JPH01104098 A JP H01104098A
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oct
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Abstract

NEW MATERIAL:A compound (salt) wherein amino acid residue in 1-position of calcitonin is a cyclic amino acid residue expressed by the formula (X is S or methylene; n is 0 or 1) and amino acid residue in 7-position is a cysteine residue which may be substituted by a protecting group. USE:A remedy for osteoporosis, bone Behcet disease, hypercalcemia, etc. PREPARATION:For example, proline which is C end amino acid of calcitonin derivative is linked to benzhydrinamine resin and protected amino acid is successively linked from C end side according to amino acid sequence of the calcitonin derivative to provide a protected peptide resin, which is then treated with HF, etc., and elimination from peptide resin and removal of protecting group other than mercapto protecting group is carried out to provide the novel calcitonin.

Description

【発明の詳細な説明】 [発明の目的] (産業上の利用分野) 本発明は、血清Ca”十濃度を低下させる作用を有し、
骨相に症、骨ベージェット病、高カルシウム血症等の治
療薬として有用な新規カルシトニン誘導体及びその塩に
関するものである。
[Detailed description of the invention] [Object of the invention] (Industrial application field) The present invention has the effect of lowering serum Ca' concentration,
The present invention relates to a novel calcitonin derivative and its salt useful as a therapeutic agent for osseous diseases, Beget's disease of bone, hypercalcemia, etc.

(従来の技術及びその問題点) カルシトニン(以下r GTJと称する)は、ヒトなど
の各種曲孔動物の甲状腺、あるいは、魚類、門口類、鳥
類の鯉後体に存在するペプチドホルモンである。このホ
ルモンは、副甲状1摩ホルモンと拮抗する作用を示し、
骨などに作用して血液中のCaz+濃度を低下させるこ
とが知られている。現在までのところ、ヒト、ウシ、ブ
タ、ヒツジ、ラット、ニワトリ、サケ、ウナギからCT
が抽出精製され、そのアミノ酸−次配列が明らかにされ
ている。これら動物由来0丁は、いずれも32個のアミ
ノ酸からなるポリペプチドで、 1位と7位のシスティ
ン残基が、ジスルフィド結合を形成し、カルボキシル基
末端(以下「C末端」と称する)がプロリンアミドであ
る点で共通している。
(Prior Art and its Problems) Calcitonin (hereinafter referred to as rGTJ) is a peptide hormone that is present in the thyroid gland of various foramina such as humans, or in the carp body of fish, stomates, and birds. This hormone shows an antagonistic effect to the parathyroid hormone,
It is known that it acts on bones and the like to lower the Caz+ concentration in the blood. To date, CT has been performed on humans, cows, pigs, sheep, rats, chickens, salmon, and eels.
has been extracted and purified, and its amino acid sequence has been revealed. All of these animal-derived proteins are polypeptides consisting of 32 amino acids, and the cysteine residues at positions 1 and 7 form a disulfide bond, and the carboxyl terminal (hereinafter referred to as the "C-terminus") is a polypeptide consisting of 32 amino acids. They have in common that they are amides.

これらCTは、骨相毬症、骨ベージェット病あるいは高
カルシウム血症なとの治療薬として期待される、しかし
ながら、CTの有するジスルフィド結合が溶液中で極め
て不安定であると推定され、生理活性の低下をまね〈可
能性があるため、医薬品としての利用が極めて限定され
てきた。
These CTs are expected to be used as therapeutic agents for phrenosis, Beget's disease of bone, or hypercalcemia. Because of the possibility of mimicking deterioration, its use as a medicine has been extremely limited.

この問題を解決する手段として、CTのシスチン残Ts
 (5丁=乃y s −)を、α−アミノスペリン酸残
基(Asu、””(CHz)rt 、。□。。−N11゜□。。−)で置換した誘導体(以
下1.7 rAsu−CTJと称する)が合成された。この誘導体
は高いCT活性を有し、しかも溶液中で高い安定性を示
すため、医薬品として有用であった。
As a means to solve this problem, cystine residue Ts in CT
Derivatives (hereinafter referred to as 1.7 rAsu- CTJ) was synthesized. This derivative has high CT activity and exhibits high stability in solution, so it was useful as a pharmaceutical.

1.7 しかし、 Asu−CTはAsuを含むため、合成が複
雑で、即ち、ペプチド化学における液相法によってのみ
合成が可能で、簡便かつ迅速な合成法である固相法が適
用できない、という問題点がある。
1.7 However, since Asu-CT contains Asu, its synthesis is complicated, that is, it can only be synthesized by the liquid phase method in peptide chemistry, and the solid phase method, which is a simple and rapid synthesis method, cannot be applied. There is a problem.

そこで、本発明者らは、高活性、高安定性を有し、かつ
固相法による合成が可能な誘導体を得ることを目的とし
て鋭意研究を重ねた結果、カルシトニンの1位のアミノ
酸残基を特定の環状アミノ酸残基とすることにより前記
目的が達成されることを見出し、本発明を完成するに至
った。
Therefore, the present inventors conducted intensive research with the aim of obtaining a derivative that has high activity, high stability, and can be synthesized by solid-phase methods. The present inventors have discovered that the above object can be achieved by using a specific cyclic amino acid residue, and have completed the present invention.

本願明細書において使用される略称、略号の意味、意義
は次の如くである。
The abbreviations and meanings of the abbreviations used in this specification are as follows.

1、アミノ酸について Ala:アラニン、 Arg:アルギニン、Asn :
アスパラギン、Asp :アスパラギン酸、Cys ニ
ジスティン、Gln:グルタミン、Glu:グルタモノ
醜、 Glyニゲリシン、His:ヒスチジン、Ile
:イソロイシン、Leu:ロイシン、Lys :リジン
、Met:メチオニン、Pheニアzニルアラニン、 
Proニブロリン、Ser:セリン、 丁hr:スレオ
ニン、Trp:)リブトファン、Tyr:チロシン、 
Val:バリン、 91s:シスチン、 Oct:3−
オキソ−5−カルボキシペルヒドロ−1,4−チアジン
、Kpc:2−ケト−ピペリジン−ローカルポン醜、C
ys(SO3H) ニジスティン酸、 pGlu: ピ
ログルタミン酸 各々、対応するアミノ酸残基を示す場合もある。
1. Regarding amino acids Ala: Alanine, Arg: Arginine, Asn:
Asparagine, Asp: aspartic acid, Cys nigistein, Gln: glutamine, Glu: glutamonougly, Gly nigericin, His: histidine, Ile
: Isoleucine, Leu: Leucine, Lys: Lysine, Met: Methionine, Phenylalanine,
Pronibroline, Ser: serine, Dhr: threonine, Trp:)ributophane, Tyr: tyrosine,
Val: Valine, 91s: Cystine, Oct: 3-
Oxo-5-carboxyperhydro-1,4-thiazine, Kpc:2-keto-piperidine-localponugly, C
ys(SO3H) Nidistic acid, pGlu: Pyroglutamic acid Each may indicate the corresponding amino acid residue.

2、保護基について Boa : t−ブチルオキシカルボニル、Fmoc 
: 9−フルオレニルメチルオキシカルボニル、Buj
:t−ブチル、Bzl:ベンジル、Cl24zl :2
,8−ジクeraベンジル、Z:ベンジルオキシカルボ
ニル、CI−Z:2−クロロベンジルオキシカルボニル
、 NP!19 : 3−ニトロピリジンスルフェニル
、0Bzl:ベンジルエステル、0But: t−ブチ
ルエステル、 0cHexニジクロヘキシルエステル、
Tosニドシル、Br−Z : 2−ブロモベンジルオ
キシカルボニル、Mtr:4−メトキシ−2,3,8−
トリメチルベンゼンスルホニル、For:ホルミル、A
cII:アセトアミドメチル、M−Bzl : 4−メ
トキシベンジル、4CH3・Bzl : 4−メチルベ
ンジル、Trt: )リチル、5BuE : t−ブチ
ルメルカプト、CA:カルバモイルメチル、CM:カル
ボキシメチル、AEニアミノエチル 3、試薬について OCCニジシクロへキシルカルボジイミド、HOBt 
:1−ヒドロキシベンゾトリアゾール、D丁Tニジチオ
スレイトール、DCNニジクロロメタン、 rJMFニ
ジメチルホルムアミド、DMSOニジメチルスルホキシ
ド、MeOH:メタノール、TEAニトリエチルアミン
、TFA ニトリフルオロ酢酸、HF:フッ化水素、H
CI:塩化水素又は塩酸、CH3CN ニアセトニトリ
ル、丁rrs−HCI ニドリス(ヒドロキシメチル)
アミノメタン塩酸塩 [発明の構成] (問題点を解決するための手段) 本発明は、カルシトニンの1位のアミノ酸残基が 次式(I): (式中、 Xはイオウ原子又はメチレン基を表し;nは
0又は1を表す、) で示される環状アミノ酸残基であり、 7位のアミノ酸
残基が適当な保護基で置換されていてもよいシスティン
残基であることを特徴とするカルシトこン誘導体及びそ
の塩に関するものである。
2. About protecting groups Boa: t-butyloxycarbonyl, Fmoc
: 9-fluorenylmethyloxycarbonyl, Buj
: t-butyl, Bzl: benzyl, Cl24zl: 2
, 8-dibenzyl, Z: benzyloxycarbonyl, CI-Z: 2-chlorobenzyloxycarbonyl, NP! 19: 3-nitropyridine sulfenyl, 0Bzl: benzyl ester, 0But: t-butyl ester, 0cHex dichlorohexyl ester,
Tos nidosyl, Br-Z: 2-bromobenzyloxycarbonyl, Mtr: 4-methoxy-2,3,8-
Trimethylbenzenesulfonyl, For: formyl, A
cII: acetamidomethyl, M-Bzl: 4-methoxybenzyl, 4CH3.Bzl: 4-methylbenzyl, Trt: ) lythyl, 5BuE: t-butylmercapto, CA: carbamoylmethyl, CM: carboxymethyl, AE niaminoethyl 3, reagent About OCC dicyclohexylcarbodiimide, HOBt
: 1-Hydroxybenzotriazole, DingT Nidithiothreitol, DCN Nidichloromethane, rJMF Nidimethylformamide, DMSO Nidimethylsulfoxide, MeOH: Methanol, TEA Nitriethylamine, TFA Nitrifluoroacetic acid, HF: Hydrogen fluoride, H
CI: hydrogen chloride or hydrochloric acid, CH3CN niacetonitrile, dirrs-HCI nidris (hydroxymethyl)
Aminomethane hydrochloride [Structure of the invention] (Means for solving the problems) The present invention provides that the amino acid residue at position 1 of calcitonin has the following formula (I): (wherein, X represents a sulfur atom or a methylene group) A cyclic amino acid residue represented by the following formula: n represents 0 or 1), wherein the amino acid residue at position 7 is a cysteine residue which may be substituted with an appropriate protecting group. This invention relates to derivatives and salts thereof.

カルシトニンとは、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ラット
、ニワトリ、サケ、ウナギ等の臓器から抽出精製される
32個のアミノ酸残基からなる天然型カルシトニン、合
成カルシトニン(例えば、特開昭81−474138号
公報、特開昭81−233899号、米国特許第4,8
16,012号、同第4,497,732号、同i4,
804,238 号、同wS4,805,515 号、
同第4,805,514号、同第4,804,237号
、同第4.604,238号公報記載のカルシトニン)
及びカルシトニン誘導体をい)。
Calcitonin refers to natural calcitonin consisting of 32 amino acid residues extracted and purified from organs of humans, cows, pigs, sheep, rats, chickens, salmon, eels, etc., and synthetic calcitonin (e.g., JP-A-81-474138). Publication No. 81-233899, U.S. Patent No. 4,8
No. 16,012, No. 4,497,732, i4,
No. 804,238, wS4,805,515,
Calcitonin described in Publications No. 4,805,514, No. 4,804,237, and No. 4.604,238)
and calcitonin derivatives).

1位の環状アミノ酸残基としては、特にOct、Kpc
 、Cblが好ましい。
The cyclic amino acid residue at position 1 is particularly Oct, Kpc,
, Cbl are preferred.

7位のアミノ酸残基であるシスティン残基は、適当な保
護基で置換されていてもよい。
The cysteine residue, which is the amino acid residue at position 7, may be substituted with an appropriate protecting group.

かかるシスティン残基の保護基は、ペプチド化学上慣用
されるメルカプト基の保護基であればよく1例えば、ペ
プチドの合成時の保護基として用いられる40H3・B
z I基、 Acm基、↑ri基、あるいは、メルカプ
ト基と修飾剤の反応によって導入されるGA基、0M基
、AE基等が挙げられる。特に、Ac1m基、GA基が
好ましい。
The protecting group for cysteine residues may be any mercapto group that is commonly used in peptide chemistry.
Examples include z I group, Acm group, ↑ri group, or GA group, 0M group, and AE group introduced by reaction of a mercapto group with a modifier. In particular, Ac1m group and GA group are preferred.

1位及び7位以外のアミノ酸残基は、カルシトニンを構
成しうるちのであれば制限はなく、例えば、以下のよう
なものが挙げられる。
Amino acid residues other than positions 1 and 7 are not limited as long as they can constitute calcitonin, and include, for example, the following.

2位: Ala 、 Set又はcry3位:Ser又
はASn 4位: Leu 5位:5er 6位:Thr 8位:Val又はNet 8位: Leu 10位: Gl!又は5er 11位: Lys 、 Thr又はAla12位: L
eu又はTyr 13位: Ser 、 Thr又はTrp14位: G
ln 、 L7g又はArg15位: Glu 、 A
sp又はAsn16位: Leu又はPhe 17位: His又はAsn 18位: Lys又はAsn 18位: Leu 、 Phe又はTyr20位: O
ln又は旧S 21位:Thr又はArg 22位:Tyr又はPhe 23位: Pro又は5ar 24位: Arg 、 Gln又はcry25位: T
hr又はNet 26位: Asp 、 Asn 、 Ser 、 Gl
7又はAla27位: Val 、 Thr 、 Il
e又はPhe28位: cry 28位: Ala 、 Ser 、 Val又はPr。
2nd place: Ala, Set or cry 3rd place: Ser or ASn 4th place: Leu 5th place: 5er 6th place: Thr 8th place: Val or Net 8th place: Leu 10th place: Gl! or 5er 11th place: Lys, Thr or Ala 12th place: L
eu or Tyr 13th position: Ser, Thr or Trp 14th position: G
ln, L7g or Arg15th position: Glu, A
sp or Asn 16th position: Leu or Phe 17th position: His or Asn 18th position: Lys or Asn 18th position: Leu, Phe or Tyr 20th position: O
ln or old S 21st: Thr or Arg 22nd: Tyr or Phe 23rd: Pro or 5ar 24th: Arg, Gln or cry 25th: T
hr or Net 26th place: Asp, Asn, Ser, Gl
7 or Ala 27th position: Val, Thr, Il
e or Phe 28th position: cry 28th position: Ala, Ser, Val or Pr.

30位: cry又はGlu 31位: Thr 、 Val又はAIaこれらのアミ
ノ酸残基のうち、特に、ニワトリカルシトニン、ウナギ
カルシトニン、サケカルシトニンを構成するアミノ酸残
基の組合せが好ましい。
30th position: cry or Glu 31st position: Thr, Val or AIa Among these amino acid residues, combinations of amino acid residues constituting chicken calcitonin, eel calcitonin, and salmon calcitonin are particularly preferred.

本発明のカルシトニン誘導体の具体例は次の如くである
Specific examples of the calcitonin derivatives of the present invention are as follows.

Oc t−A I a−Se r−Leu−9e r−
Th r−Cys−Va l −Leu−G l 7−
L、’s −Leu−5er−Gln−Glu−Leu
−11is−Lys−Leu−Gln−Thr−Tyr
−P r o−A rg−Th r−Asp−Va l
 −G I y−A 1a−(71y−Th r−P 
ro−NO3[(Oct’  、  Cyg(GA)’
 )−CCTIAca+ 0ct−AIa−9sr−Leu−9er−Thr−C
ys−Val−LeuJ12=Lys−Leu=Ser
−Gln−Glu−Leu−旧5−Lys−Leu−G
ln−Thr−Tyr−P ro−A tg−Th r
−Asp−Va 1J17−A 1a−G 17−Th
 r−Pro−NO3[(Oct’  、 Cys(A
ca+)’ )−CC↑Icm 0c t−Se r−Asn(eu−5e r−Th 
r−Cys−Va l −Leu−G 17−L 1 
s −Leu−Se r−G In−G Iu−Leu
−H1s−Lys−Leu−G In−Th r−Ty
 r−P ro−A rg−Th r−Asp−Va 
1−Gl y−A 1a−(i 1y−Th r−P 
ro −NO3[(Oct’  、C2sC25(A’
 )−ECTJl中、 OCTはニワトリカルシトニン
を表し。
Oct-A I a-Ser-Leu-9e r-
Thr-Cys-Val-Leu-G17-
L,'s -Leu-5er-Gln-Glu-Leu
-11is-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr
-P r o-A rg-Th r-Asp-Va l
-G I y-A 1a-(71y-Th r-P
ro-NO3[(Oct', Cyg(GA)'
)-CCTIAca+ 0ct-AIa-9sr-Leu-9er-Thr-C
ys-Val-LeuJ12=Lys-Leu=Ser
-Gln-Glu-Leu-old 5-Lys-Leu-G
ln-Thr-Tyr-Pro-A tg-Thr
-Asp-Va 1J17-A 1a-G 17-Th
r-Pro-NO3[(Oct', Cys(A
ca+)' )-CC↑Icm 0c t-Ser r-Asn(eu-5e r-Th
r-Cys-Val-Leu-G17-L1
s -Leu-Ser-G In-G Iu-Leu
-H1s-Lys-Leu-G In-Th r-Ty
r-Pro ro-A rg-Th r-Asp-Va
1-Gly-A 1a-(i 1y-Th r-P
ro -NO3[(Oct', C2sC25(A'
)-ECTJl, OCT represents chicken calcitonin.

ECTはウナギカルシトニンを表す、以下同様)本発明
のカルシトニン誘導体は、塩酸、硫酸、リン酸等の鉱酸
、あるいは酢酸、クエン酸等の有機酸との川の形態であ
ってもよく、また、ナトリウム、カリウム、カルシウム
等の金属塩、あるいは、アンモニア、ジシクロヘキシル
アミン、ピリジン等の有aiM基との塩の形態であって
もよい。
The calcitonin derivative of the present invention may be in the form of a mineral acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, or an organic acid such as acetic acid or citric acid; It may be in the form of a metal salt such as sodium, potassium, or calcium, or a salt with an aiM group such as ammonia, dicyclohexylamine, or pyridine.

本発明のカルシト−4ン誘導体は、ペプチドの合成に常
用される固相法又は液相法によって合成することができ
る。この合成は、例えば、矢島治明、榊原俊平著、日本
生化学全編、生化学実験講座(I);”蛋白質の化学″
 4巻、東京化学同人発行(1117?) ;及び、泉
屋信夫ほか著“ペプチド合成の基礎と実験゛°丸善■発
行(+985)K記載されている方法に準じて行うこと
ができる0本発明のカルシトニン誘導体の合成法として
は、固相法が好ましい。
The calciton-4 derivative of the present invention can be synthesized by a solid phase method or a liquid phase method commonly used for peptide synthesis. This synthesis can be explained, for example, by Haruaki Yajima and Shunpei Sakakibara, Complete Japanese Biochemistry, Biochemistry Experiment Course (I): "Chemistry of Proteins"
Volume 4, published by Tokyo Kagaku Dojin (1117?) A solid phase method is preferred as a method for synthesizing calcitonin derivatives.

以下、固相法により本発明のカルシトニン誘導体を合成
する場合について説明する。
Hereinafter, a case will be described in which the calcitonin derivative of the present invention is synthesized by a solid phase method.

りまず、目的とするカルシトニン誘導体のC端アミノ酸
、即ちProを不溶性樹脂に結合させる0次いで、該誘
導体のアミノ酸配列に従ってC端側から保護アミノ酸を
順次結合させ、保護ペプチドIM脂を得る。不溶性樹脂
としては、当該技術分野で知られたもののいずれであっ
てもよく1例えば、+(F″c脱雌可能なりコロメチル
4M脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン
樹脂CBOA樹Ill’s) 、 TFAで脱離可能な
4−(オキシメチル)フェノキシメチル樹脂、 4−(
アミノメチル)フェノキシメチル樹脂等が挙げられるが
、BIIA樹脂あるいは4−(アミノメチル)フェノキ
シメチル樹脂は該樹脂とペプチド鎖間の開裂によって直
接アミドを与えるので、特に好ましい。
First, the C-terminal amino acid of the desired calcitonin derivative, ie, Pro, is bound to an insoluble resin. Next, protected amino acids are sequentially bound from the C-terminal side according to the amino acid sequence of the derivative to obtain a protected peptide IM fat. The insoluble resin may be any of those known in the art, such as + (F''c defemizable colomethyl 4M resin, hydroxymethyl resin, benzhydrylamine resin CBOA resin), 4-(oxymethyl)phenoxymethyl resin, 4-(
Examples include aminomethyl) phenoxymethyl resin, and BIIA resin or 4-(aminomethyl)phenoxymethyl resin is particularly preferred since it directly provides an amide by cleavage between the resin and the peptide chain.

「保護アミ“ノ酸」とは、官能基を公知の方法により保
護基で保護したアミノ酸であり、各種の保護アミノ酸が
市阪されている0本発明のカルシトニン誘導体を合成す
る場合には、以下に示す保護基のいずれかを選択するの
が好ましい、まず、アミノ酸のα−アミノ基の保護基は
Boc又はFmocである。 Set 、 Thrの水
酸基の保護基は、Bu’ 、 Bzlである。 T7r
の水酸基の保護基は、C12・Bzl 、 Butであ
るか、あるいは保護しなくてもよい、 Lysのε−ア
ミノ基の保護基は、Z、  CI−Z 、 Boa 、
 Np’sである。
"Protected amino acid" is an amino acid whose functional group is protected with a protecting group by a known method.When synthesizing the calcitonin derivative of the present invention, various protected amino acids are used as follows. It is preferable to select one of the protecting groups shown below. First, the protecting group for the α-amino group of an amino acid is Boc or Fmoc. The hydroxyl protecting groups of Set and Thr are Bu' and Bzl. T7r
The protecting group for the hydroxyl group of is C12・Bzl, But or may not be protected.The protecting group for the ε-amino group of Lys is Z, CI-Z, Boa,
Np's.

Glu 、 Aspのカルボキシル基の保護基は、OB
z I、0But、’0cHaiである。 Argのグ
アニジノ基の保護基は、 Tos、 NO2、Mtrで
ある。旧Sのイミダゾリル基の保護基は、Tas、 F
mocである。 Netの保護基は酸素でもよいが、保
護しない方が好ましい、 Trpのインドリル基の保護
基は、 Forであるか、あるいは保護しなくても゛よ
い、 Cpmのメルカプト基の保護基は、Bzl 、 
M−Bzl 、  4CH3・Bzl、Ace 、 T
rt 、 Np’s、 But、 SBu’である。メ
ルカプト基の保護基には、後述のようなメルカプト基と
修飾剤の反応によって導入されるCM、 CA、 AM
等の保護基もあるが固相法における使用は好ましくない
、各保護基は、ペプチドの合成条件に応じ適切なものを
選択する必要がある。
Glu, the protecting group for the carboxyl group of Asp is OB
z I, 0But, '0cHai. Protecting groups for the guanidino group of Arg are Tos, NO2, and Mtr. The protecting group for the imidazolyl group of former S is Tas, F
It is moc. The protecting group for Net may be oxygen, but it is preferable not to protect it. The protecting group for the indolyl group of Trp may be For or it may not be protected. The protecting group for the mercapto group of Cpm is Bzl,
M-Bzl, 4CH3・Bzl, Ace, T
rt, Np's, But, and SBu'. Protecting groups for mercapto groups include CM, CA, and AM, which are introduced by the reaction of a mercapto group with a modifier as described below.
Although there are protecting groups such as, it is not preferable to use in the solid phase method, it is necessary to select an appropriate protecting group according to the synthesis conditions of the peptide.

前記式(I)で示される環状アミノ庸残基に対応する環
状アミノ酸であるOct 、 Kpc等は公知の方法に
従って合成することができる。この合成は1例えば、特
公昭41−20827号公報;J。
Cyclic amino acids such as Oct, Kpc, etc. corresponding to the cyclic amino acid residue represented by formula (I) can be synthesized according to known methods. This synthesis is described in, for example, Japanese Patent Publication No. 41-20827; J.

(:hromatogr、、 294(1984)、 
413; Bull、 Chera。
(: hromatogr, 294 (1984),
413; Bull, Chera.

Sac、 Japan、 3B(1983)、 920
;特開昭52−118485号公報等に記載されている
方法に準じて行なうことができる。 Octの場合、例
えば、以下に示す方法に従って合成する。
Sac, Japan, 3B (1983), 920
; It can be carried out according to the method described in JP-A-52-118485 and the like. In the case of Oct, it is synthesized, for example, according to the method shown below.

システィン又はその塩を水に懸濁し、モノヨードアセト
アミド、モノブロモアセトアミド等のカルボキシメチル
化剤を加える。適切な坩基、例えば、水酸化ナトリウム
、リン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、
水酸化アンモニウム等の無機塩基、あるいは、TEA 
、ジシクロヘキシルアミン等の有機塩基を添加し、混合
溶液をpH8〜10、好ましくはpH7〜9に調整する
0反応温度20〜60℃、好ましくは室温〜5G”Cで
、反応時間0.1〜1(Mtr間、好ましくは0.5〜
5時間で反応させ、システィンのメルカプト基をカルバ
モイルメチル化する。続いて、反応溶液を封管中で、反
応温度80〜150℃、好ましくは8o−120℃テ、
反応時間0.5〜50時間、好ましくは1〜10時11
flで反応させ、 Octを得る。得られたOctは再
結晶、各種クロマトグラ2イー等の方法を用いて精製す
る。
Cysteine or a salt thereof is suspended in water, and a carboxymethylating agent such as monoiodoacetamide or monobromoacetamide is added. Suitable crucibles such as sodium hydroxide, sodium phosphate, sodium carbonate, potassium carbonate,
Inorganic bases such as ammonium hydroxide, or TEA
, an organic base such as dicyclohexylamine is added, and the mixed solution is adjusted to pH 8 to 10, preferably pH 7 to 9. Reaction temperature is 20 to 60°C, preferably room temperature to 5G"C, and reaction time is 0.1 to 1. (between Mtr, preferably 0.5~
The reaction is carried out for 5 hours to carbamoylmethylate the mercapto group of cysteine. Subsequently, the reaction solution was placed in a sealed tube at a reaction temperature of 80 to 150°C, preferably 8o to 120°C.
Reaction time 0.5-50 hours, preferably 1-10:11
React with fl to obtain Oct. The obtained Oct is purified using methods such as recrystallization and various chromatography methods.

保護アミノ酸の結合は、通常の縮合法、例えば、 DC
C法、活性エステル法、混合あるいは対称酸無水物法、
カルボニルジイミダゾール法、DCC−HOBt法、ジ
フェニルホスホリルアジド法等に従って行なうことがで
きるが、DCC法、DCC−HOBt法、対称酸無水物
法が好ましい、これらの縮合反応は1通常、DCM 、
口NF 、クロロホルム、[1NSO、ベンゼン等の有
機溶媒又はそれらの混合溶媒中で行なわれる。 DCM
 、 DMF又はこれらの混合溶媒中で行なうのが好ま
しい、α−アミン基の保護基の脱離試薬としては、 T
FA/ DON、HCI/ジオキサン、ピペリジン10
MF #−が用いられ、該保護基の種類により適宜選択
する。また1合成の各段階における縮合反応の進行の程
度はE、カイザーらの方法[Anal、 Bioche
m、、 34.595(1970)1にンヒドリン反応
法)によって検査される。
Attachment of protected amino acids can be accomplished by conventional condensation methods, e.g. DC
C method, active ester method, mixed or symmetrical acid anhydride method,
The condensation reaction can be carried out according to the carbonyldiimidazole method, the DCC-HOBt method, the diphenylphosphoryl azide method, etc., but the DCC method, the DCC-HOBt method, and the symmetrical acid anhydride method are preferred.
The reaction is carried out in an organic solvent such as NF, chloroform, [1NSO, benzene, etc.] or a mixed solvent thereof. DCM
, DMF, or a mixed solvent thereof, the protecting group removal reagent for the α-amine group is T
FA/DON, HCI/dioxane, piperidine 10
MF #- is used and is appropriately selected depending on the type of the protecting group. In addition, the degree of progress of the condensation reaction at each stage of the synthesis is determined by the method of E, Kaiser et al. [Anal, Bioche et al.
m, 34.595 (1970) 1).

以上のようにして、所望のアミノ酸配列を有する保護ペ
プチド樹脂を得るがその具体的な例を以下に示す。
In the manner described above, a protected peptide resin having a desired amino acid sequence is obtained, and specific examples thereof are shown below.

HA 保護ペプチド樹脂は、ペプチドを樹脂から脱離させ、更
に、メルカプト保護基以外の保護基を脱離させる試薬、
例えば、)IF、 TFA等で処理すること(M終脱保
護反応)により、目的とするカルシトニン誘導体を得る
HA protected peptide resin is a reagent that removes the peptide from the resin and also removes protecting groups other than mercapto protecting groups.
For example, by treating with IF, TFA, etc. (M-terminal deprotection reaction), the desired calcitonin derivative is obtained.

2)また、 7位のCysのメルカプト基の保護基に前
述の最終脱保護条件下で脱離可能な保護基を用いた場合
には、保護ペプチド樹脂の最終脱保護反応により、 C
ysのメルカプト基が遊離のペプチドを得る。このペプ
チド自身も、本発明のカルシトニン誘導体に含まれるが
、このペプチドを緩衝液中で、修飾剤と反応させ、メル
カプト基を保護することにより、 7位のCpsが保護
された本発明のカルシトニン誘導体を得ることができる
。修飾剤としては、メルカプト基と反応して、保護基を
導入しうるものであれば、どのようなものでもよい6例
えば、モノヨード酢酸、モノブロモ酢酸、モノヨードア
セドアどド、エチレンイミン、アクリロニトリル、ビニ
ルピリジン等のアルキル化又は7リール化剤、 5.5
°−ジチオビス−(2−二トロ)安息香酸又は2,2゛
−ジピリジルジスルフィドのような非対称ジスルフィド
形成剤、トエチルマレイミド、2−ニトロ−5−チオシ
ア7安息香酸等が挙げられる。修飾反応は、通常pH2
〜11の、好ましくはpH8〜8の緩衝液中で行なわれ
る。かかる反応に用いられる11i液は公知のもので、
例えば、クエン酸−クエン酸ナトリウム、酢酸−酢酸ナ
トリウム、リン酸、イミダゾール−塩酸、 Tris−
IC+、ホウ酸、ジェタノールアミン−塩酸、グリシン
−水加化ナトリウム等が挙げられる。修飾反応の条件は
、修飾剤の種類によって異なるが1例えば、モノヨード
アセトアミドを用いる場合には、通常p)I G〜10
の各種の緩衝液を用いる。この場合。
2) In addition, when a protecting group that can be removed under the final deprotection conditions described above is used as the protecting group for the mercapto group of Cys at position 7, C
The mercapto group of ys gives a free peptide. This peptide itself is also included in the calcitonin derivative of the present invention, but by reacting this peptide with a modifier in a buffer to protect the mercapto group, the calcitonin derivative of the present invention in which Cps at position 7 is protected is obtained. can be obtained. Any modifier may be used as long as it can react with a mercapto group and introduce a protecting group.6 For example, monoiodoacetic acid, monobromoacetic acid, monoiodoacetic acid, ethyleneimine, acrylonitrile, Alkylating or 7-arylating agents such as vinylpyridine, 5.5
Examples include asymmetric disulfide forming agents such as °-dithiobis-(2-nitro)benzoic acid or 2,2'-dipyridyl disulfide, toethylmaleimide, 2-nitro-5-thiocia-7benzoic acid, and the like. Modification reactions are usually carried out at pH 2.
-11, preferably in a buffer with a pH of 8-8. The 11i solution used in this reaction is a known one,
For example, citric acid-sodium citrate, acetic acid-sodium acetate, phosphoric acid, imidazole-hydrochloric acid, Tris-
IC+, boric acid, jetanolamine-hydrochloric acid, glycine-sodium hydride, and the like. Conditions for the modification reaction vary depending on the type of modifier; for example, when monoiodoacetamide is used, it is usually p) I G ~ 10
Various buffer solutions are used. in this case.

モノヨードアセトアミドは、メルカプト基の通常0.1
−10倍当量、好ましくは1〜2倍当量であり、反応温
度は1通常0−SO℃、好ましくは20〜40゛0であ
り1反15時間は1通常0.1〜10時間、好ましくは
0.5〜2時間である。
Monoiodoacetamide usually has a mercapto group of 0.1
-10 times equivalent, preferably 1 to 2 times equivalent, reaction temperature is usually 0-SO℃, preferably 20 to 40゛0, and 1 to 15 hours is usually 0.1 to 10 hours, preferably It is 0.5 to 2 hours.

3)また、本発明のカルシトニン誘導体のうち、1位の
7ミノ酩残基がOctであるペプチドは、以下に示す方
法により合成してもよい、即ち、前述の最終脱保護条件
下で脱離可能な保護基、例えば、M−Bzl 、 4C
H3・Bzlで保護した(ysをOctの代わりに用い
て保護ペプチド樹脂を合成する。この保護ペプチド樹脂
の具体的な例を以下に示す。
3) Furthermore, among the calcitonin derivatives of the present invention, a peptide in which the 7-min residue at position 1 is Oct may be synthesized by the method shown below, that is, desorption under the final deprotection conditions described above. Possible protecting groups, e.g. M-Bzl, 4C
A protected peptide resin is synthesized by using H3·Bzl-protected (ys in place of Oct. A specific example of this protected peptide resin is shown below.

+1−Gys−9er−A、5n−Leu−Ser−T
hr−Cys−Val−Leu−Gly−Lys−Le
u−9er−Gln−Glu−Leu−旧5−L7s−
Leu−Gln−Pro−NH−BHA この保護ペプチド樹脂は、前述の方法に従って、最終脱
保護を行ない、mmのメルカプト基をもつペプチドを得
る。このペプチドのメルカプト基は、例えば、モノヨー
ドアセトアミド、モノブロモアセトアミド等の修飾剤を
用いてカルバモイルメチル(OA)化して保護する。得
られたCA化ペプチドを緩衝液中で加熱することにより
、目的とするペプチドを得る。かかる反応に用いられる
緩衝液は前述のごとく公知のものであり、そのpHは、
通常2〜lO1好ましくは3〜7である。また、ペプチ
ドの濃度は、通常0.1〜100 ILH、好ましくは
0.5〜l0Ij、Mであり、反応温度は、通常30〜
150℃、好ましくは60〜!00℃であり、反応時間
は1通常0.1〜100時間、好ましくは0,5〜50
時間である。
+1-Gys-9er-A, 5n-Leu-Ser-T
hr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Le
u-9er-Gln-Glu-Leu-old 5-L7s-
Leu-Gln-Pro-NH-BHA This protected peptide resin undergoes final deprotection according to the method described above to obtain a peptide with mm of mercapto groups. The mercapto group of this peptide is protected by carbamoylmethyl (OA) using a modifier such as monoiodoacetamide or monobromoacetamide. The desired peptide is obtained by heating the obtained CA-modified peptide in a buffer solution. The buffer solution used in such a reaction is a known one as mentioned above, and its pH is:
Usually 2 to 1O1, preferably 3 to 7. In addition, the concentration of the peptide is usually 0.1 to 100 ILH, preferably 0.5 to 10 IJ,M, and the reaction temperature is usually 30 to 100 ILH.
150℃, preferably 60~! 00°C, and the reaction time is usually 0.1 to 100 hours, preferably 0.5 to 50 hours.
It's time.

4)更に、本発明のカルシトニン誘導体のうち、7位の
アミノ酸残基がカルバモイルメチルで保護されたCys
であるペプチドは、以下に示す方法により合成してもよ
い。
4) Furthermore, among the calcitonin derivatives of the present invention, Cys in which the amino acid residue at position 7 is protected with carbamoylmethyl
The peptide may be synthesized by the method shown below.

天然型カルシトニンを塩基性水溶液中で適切な還元剤を
作用させ1分子内ジスルフィド結合を還元し、メルカプ
ト基をmMさせる0次いで、前述3)の方法と同様の方
法で、目的とするペプチドを得る。かかる還元反応に用
いる塩基性水溶液は、pH7〜13の各種緩衝液を用い
る。かかる緩衝液としては、前述と同様のものを用いる
。還元剤としては、有機合成で一般に用いられる還元剤
をすべて用いることができる0例えば、口TT 、チオ
グリコール酸、2−メルカプトエタノール等のチオール
類、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチ
ウム、亜鉛等が挙げられる0例えば、DTTを使用する
場合、その使用量は、ペプチドの通常0.1−100倍
当■、好ましくは1〜10倍当量であり、反応温度は1
通常1〜80℃、好ましくは20〜40°Cであり、反
応時間は1通常1〜24時間、好ましくは3〜5時間で
ある。修飾反応において、モノヨードアセトアミドやモ
ノブロモアセトアミド等の修飾剤は、還元剤に対し、通
常0.1〜100倍当量、好ましくは1〜2倍当量加え
る。
Natural calcitonin is treated with an appropriate reducing agent in a basic aqueous solution to reduce the disulfide bonds within one molecule and bring the mercapto group to mM.Next, the desired peptide is obtained in the same manner as in 3) above. . As the basic aqueous solution used in this reduction reaction, various buffer solutions having a pH of 7 to 13 are used. As such a buffer solution, the same one as mentioned above is used. As the reducing agent, all reducing agents commonly used in organic synthesis can be used. For example, thiols such as TT, thioglycolic acid, 2-mercaptoethanol, sodium borohydride, lithium aluminum hydride, zinc, etc. For example, when DTT is used, the amount used is usually 0.1 to 100 times, preferably 1 to 10 times the equivalent of the peptide, and the reaction temperature is 1 to 1.
The temperature is usually 1 to 80°C, preferably 20 to 40°C, and the reaction time is usually 1 to 24 hours, preferably 3 to 5 hours. In the modification reaction, a modifier such as monoiodoacetamide or monobromoacetamide is usually added in an amount of 0.1 to 100 times, preferably 1 to 2 times the amount of the reducing agent.

かくして得られたペプチドは、ペプチドの常套的手段、
例えば、抽出、再結晶、各種クロマトグラフィー(ゲル
濾過、イオン交換、分配、吸着、逆相)、電気泳動、自
流分配等により単離精製することができるが、逆相高速
液体クロマトグラフィー(逆相HPLC)による方法が
最も効果的である。
The peptide thus obtained can be prepared by conventional methods for peptides,
For example, isolation and purification can be carried out by extraction, recrystallization, various chromatography (gel filtration, ion exchange, distribution, adsorption, reversed phase), electrophoresis, self-flow distribution, etc. HPLC) is the most effective method.

(発明の実施例) 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、こ
れらの実施例は本発明の範囲を何ら制限するものではな
い。
(Examples of the Invention) Hereinafter, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples, but these Examples are not intended to limit the scope of the present invention in any way.

実施例! 0ct−Ala−Ser−Leu−Ser−丁hr−C
ys−Val−Leu−Gly−Lys−Leu −9
e r−Gin−G Iu−Leu−His−Lys−
Leu−Gln−Th r −T y r−P r o
−A rg−Th r−Asp−Va 1−Gl y−
A 1a−017−Th r−P ro −NII2(
TI 、 (Oat’ 、  Cys(OA)’ )−
COT )の合成(1)(1)3−オキソ−5−カルボ
キシペルヒドロ−1,4−チアジンの合成 L−システィン塩酸・塩−水和物1.75g(10mm
ol)を水50m1に溶解し、1M炭酸ナトリウムでp
H8,0に調整した。窒素気流下、モノヨードアセトア
ミド1.85g (10mm+ol)と1M炭酸すトリ
ウム交互に、 pH8,0に保ちながら加えた。室温で
1時間反応させた後、更に100°0で2時間封管中で
反応させた。
Example! 0ct-Ala-Ser-Leu-Ser-Dinghr-C
ys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu -9
e r-Gin-G Iu-Leu-His-Lys-
Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro
-A rg-Th r-Asp-Va 1-Gly-
A 1a-017-Thr-Pro-NII2(
TI, (Oat', Cys(OA)')-
(1) (1) Synthesis of 3-oxo-5-carboxyperhydro-1,4-thiazine L-cystine hydrochloride salt hydrate 1.75 g (10 mm
ol) in 50 ml of water and diluted with 1M sodium carbonate.
Adjusted to H8.0. Under a nitrogen stream, 1.85 g (10 mm+ol) of monoiodoacetamide and 1M thorium carbonate were added alternately while maintaining the pH at 8.0. After reacting at room temperature for 1 hour, the reaction was further carried out at 100° 0 for 2 hours in a sealed tube.

反応液に4N IC+を加え、pHを3.25に調整し
た後。
After adding 4N IC+ to the reaction solution and adjusting the pH to 3.25.

濃縮乾固した。残渣を熱エタノールで抽出し、冷却後、
結晶を枦取し、熱エタノールより再結晶した。収量5θ
Qmg (34,8%)、融点182〜184℃、Fe
b質量分析[M−旧+=!62 (2)  B)IA樹脂へのプロリンの導入81(Av
A脂(ペプチド研究新製、ジビニルベンゼン2%、 1
00〜200メツシユ、アミノ基当量0.81meq/
g ) 2gをペプチド固相合成用反応容器(ベガ社製
)に入れ、下記の溶媒各30III文で順次処理し、各
々の処理後に濾過した。
It was concentrated to dryness. The residue was extracted with hot ethanol, and after cooling,
The crystals were collected and recrystallized from hot ethanol. Yield 5θ
Qmg (34,8%), melting point 182-184℃, Fe
b Mass spectrometry [M-old+=! 62 (2) B) Introduction of proline into IA resin 81 (Av
Fat A (Peptide Research New Product, divinylbenzene 2%, 1
00-200 mesh, amino group equivalent 0.81 meq/
g) 2 g was placed in a reaction vessel for peptide solid-phase synthesis (manufactured by Vega), treated with 30 of each of the following solvents in sequence, and filtered after each treatment.

DCHC3回、各2分) Meal((3回、各i分) ・DCM(3回、各2分) lO%TEA/DCN溶液(5分、10分 各1回)次
いで、BHA#M脂をDCM 15o+iに溶解したB
oc−Pro 0.32g(1,5ma+ou )とと
もに2分攪拌した。
DCHC 3 times, 2 minutes each) Meal ((3 times, i minutes each) ・DCM (3 times, 2 minutes each) 10% TEA/DCN solution (5 minutes, 10 minutes each, once) Then, BHA#M fat B dissolved in DCM 15o+i
The mixture was stirred for 2 minutes with 0.32 g (1.5 ma+ou) of oc-Pro.

DCG 0.31g(1,5ma+o見)のDCM 1
5IIJL溶液を加え。
DCM 1 of DCG 0.31g (1.5ma+o view)
5 Add IIJL solution.

120分攪拌した0反応混合物を濾過して、Boc−P
ro−樹脂を次の溶媒各30tJlで洗浄・濾過した。
The reaction mixture stirred for 120 min was filtered and Boc-P
The ro-resin was washed and filtered with 30 tJl of each of the following solvents.

DCM(3回、各2分) MeOH(3回、各2分) DON(3回、各2分) 更に、Baa−Pro−m脂に1−7セチルイミダゾー
ル1.34g(12,211+moJL )のDON 
3G+m見溶液を加え、12時間かけてアセチル化を行
なった。これにより、BHA樹脂中の未反応のアミノ基
がf*I?lされ。
DCM (3 times, 2 minutes each) MeOH (3 times, 2 minutes each) DON (3 times, 2 minutes each) In addition, 1.34 g (12,211+moJL) of 1-7 cetyl imidazole was added to Baa-Pro-m fat. DON
3G+m solution was added and acetylation was carried out over 12 hours. As a result, unreacted amino groups in the BHA resin become f*I? I have been treated.

以下、保護アミノ酸のイ;1加延長はプロリンのN末端
が反応開始点となる。
In the following explanation, the N-terminus of proline is the starting point for the reaction of the protected amino acid.

(3) 31位スレオニンの導入 (2)で得られたBoc−Pro−411脂全量をDO
Nで3回、MeOHで3回、  DCMで3回、各2分
洗浄し、濾過した。この樹脂に50%丁FA溶液(溶媒
;  DCM)30、 ra9.を加え、5分攪拌後、
濾過した。更に、同様のTFA溶液下で30分攪拌し、
 Baa基を脱離させた。得られた樹脂を(2)と同様
にして下記の溶媒各30+allで順次処理し、各々の
処理後に濾過した。
(3) The total amount of Boc-Pro-411 fat obtained in step (2) of introducing threonine at position 31 was DO
Washed 3 times with N, 3 times with MeOH, 3 times with DCM for 2 minutes each and filtered. A 50% DCM solution (solvent; DCM) was added to this resin at ra9. Add and stir for 5 minutes,
Filtered. Further, stirred for 30 minutes under the same TFA solution,
The Baa group was eliminated. The obtained resin was sequentially treated with 30+all of each of the following solvents in the same manner as in (2), and filtered after each treatment.

DCM(3回、各2分) MeOll(3回、各2分) DON(3回、各2分) IO%TEA/DON溶液(5分、10分 各1回)D
CM (3rrfJ、各2分) 次いで、Pro−樹脂にBoc−Thr(Bzl)0.
48g(1,5mmafL)のDCM 15IIft溶
液を加え、2分攪拌した0次に、DCG O,31gの
DON 15mJl溶液を加え、 240分攪拌した0
反応後、 ロCNで3回、HeOHで3回、rJCMで
3回、各2分洗浄し、濾過した。
DCM (3 times, 2 minutes each) MeOll (3 times, 2 minutes each) DON (3 times, 2 minutes each) IO%TEA/DON solution (5 minutes, 10 minutes each)D
CM (3rrfJ, 2 min each) The Pro-resin was then treated with Boc-Thr (Bzl) 0.
Added 48g (1.5mmafL) of DCM 15IIft solution and stirred for 2 minutes. Next, added DCGO, 31g of DON 15mJl solution and stirred for 240 minutes.
After the reaction, it was washed 3 times with RoCN, 3 times with HeOH, and 3 times with rJCM for 2 minutes each, and filtered.

この樹脂の極Wk量を採取し、ニンヒドリン試験が陰性
であることを確認した0次いで、樹脂の一部を採取し、
そのC末端アミノ酸結合量を測定したところ、 0.1
511110文7gであった・(4)30−1位の各7
ミノ厳の導入 (3)と同様にしテ、  Boc−Thr(Bzl)−
Pro−vA脂に、前記式(II )で示されるCTの
30位から1位までの各構成アミノ酸に対応する保護ア
ミノ酸を順次カップリングした0表1に各反応段階で用
いた保εにアミノ酸とその使用量を示す。
The amount of the resin was collected and the ninhydrin test was confirmed to be negative. Then, a part of the resin was collected,
When the amount of C-terminal amino acid bond was measured, it was 0.1
It was 511,110 sentences and 7g (4) 30-1st place each 7
Similar to the introduction of Minogon (3), Boc-Thr (Bzl)-
Protected amino acids corresponding to each constituent amino acid from position 30 to position 1 of CT shown by formula (II) were sequentially coupled to Pro-vA fat. and its usage amount.

カップリング反応は(3)に述べた通り、同一の保護ア
ミノ酸量で2回行ない、第1回目は120分、第2回目
は300分のカップリング反応時間とした。ここで、L
ysはBaa−Lys(CI ・Z)TO^ (ペプチ
ド研究新製)の丁BAを脱離してBoc−L7s(CI
・Z)として用いた。  Boa−Leu−H2O及び
Octは00M単一溶媒には難溶のため、Hoe−Le
u−H2Oは口にFと DCNの混合溶媒(1:4)の
混合溶媒に、OctはDMFに溶解して用いた。更に、
  Octのカップリング時の洗浄溶媒はDCMに代え
てDMFを用いた。 14位及び20位(7)Glll
の導入においては、 HO8t0.23gとBoc−G
lr+0.37gとを同時に反応容器へ添加した。
As described in (3), the coupling reaction was performed twice with the same amount of protected amino acid, and the coupling reaction time was 120 minutes for the first time and 300 minutes for the second time. Here, L
ys is Boc-L7s (CI
・Used as Z). Boa-Leu-H2O and Oct are poorly soluble in 00M single solvent, so Hoe-Le
U-H2O was dissolved in a mixed solvent of F and DCN (1:4), and Oct was dissolved in DMF. Furthermore,
DMF was used instead of DCM as a washing solvent during Oct coupling. 14th and 20th place (7) Gllll
In the introduction of HO8t0.23g and Boc-G
lr+0.37g was simultaneously added to the reaction vessel.

1位のアミノ酸の導入後、(2)と同様にしてBoa基
脱離操作を行なった。樹脂ペプチドを一昼夜減圧乾燥し
て乾燥加脂ペプチドを得た。
After introducing the amino acid at position 1, the Boa group removal operation was performed in the same manner as in (2). The resin peptide was dried under reduced pressure for a day and night to obtain a dried lipophilic peptide.

(5)  HFによる分解 乾燥した樹脂ぺ、プチドの一部(200mg)を秤量し
、IF分解用反応容器(テフロン製)に入れ、アニソー
ル1.0+++jLを加え、−夜装置し、樹脂を膨潤さ
せた。PIl拌子を入れた前記反応容器をHF分解装置
(ペプチド研究新製)に取り付はドライアイス−エタノ
ール浴中に置き、HF 10mJlを反応容器中に導入
した。この泥゛合物を水浴中において1時間<O’Oで
I児拌した。減圧下にHFを徐々に留去した。3時間後
、反応容器を取りはずし、ジエチルエーテルを用いて反
応容器から樹脂ペプチド分解物を取出し、ジエチルエー
テルで洗浄した。  2M酢酸2OmJL中に樹脂ペプ
チド分解物を加え、脱保護されたペプチドを溶解した。
(5) Decomposition with HF Weigh a portion (200 mg) of the dried resin PETIDE, place it in a reaction vessel for IF decomposition (made of Teflon), add 1.0+++jL of anisole, and leave it overnight to swell the resin. Ta. The reaction vessel containing the PIl stirrer was attached to an HF decomposition device (manufactured by Peptide Kenkyushin) and placed in a dry ice-ethanol bath, and 10 mJl of HF was introduced into the reaction vessel. The slurry was stirred in a water bath for 1 hour at <O'O. HF was gradually distilled off under reduced pressure. After 3 hours, the reaction vessel was removed, and the resin peptide decomposition product was taken out from the reaction vessel using diethyl ether and washed with diethyl ether. The resin peptide decomposition product was added to 20 mJL of 2M acetic acid to dissolve the deprotected peptide.

(6)メルカプト基のカルバモイルメチル化この溶液を
!Vtf5し、アンモニア水でpH8、0に調整した(
40m文) 、 DT730.8mgを加え、37℃で
4時間攪拌した。この還元操作で、メルカプト基の酸化
によって生成する可能性がある二量体が単量体にもどる
0次に、モノヨード酢酸37.0mgを加え、37℃で
30分間暗所で反応させた。
(6) Carbamoyl methylation of mercapto group Use this solution! Vtf was adjusted to 5 and pH was adjusted to 8.0 with aqueous ammonia (
730.8 mg of DT was added to the mixture, and the mixture was stirred at 37°C for 4 hours. In this reduction operation, the dimer that may be generated by oxidation of the mercapto group returns to the monomer. Next, 37.0 mg of monoiodoacetic acid was added, and the reaction was carried out at 37° C. for 30 minutes in the dark.

この反応液をオクタデシルシリルシリカを充填したカラ
ム(ODSカラム、φ2X 30sm)に吸着させ、水
で洗浄後、60%アセトニトリル溶液でペプチドを溶出
した。溶出液を凍結乾燥し、粗(Oct’  、  C
ys(GA)’ )−CO728,8mgを得た。
This reaction solution was adsorbed on a column packed with octadecylsilyl silica (ODS column, φ2X 30sm), and after washing with water, the peptide was eluted with a 60% acetonitrile solution. The eluate was lyophilized and crude (Oct', C
ys(GA)')-CO728, 8 mg was obtained.

(7)粗(Oct’ 、  (ys(GA)’ )−O
CTの精製得られた粗(Oct’ 、’  Gys(C
A)フ)−COTを1M酢酸に溶解(5mg/all 
) L、濃度勾配型高速液体クロマトグラフィーにて精
製した。カラムはケムコ社製ケムコパック0DS−H(
φ10mwX 250m■)を用い、溶離液はA液とし
て水(too)−to%TFA(1)、B液として水(
40)−アセトニトリル(80)−10%TFA(1)
を用い、A液からB液への直線型濃度勾配条件下で溶出
した。ここで、()内は溶媒の体積比である。 (Oc
t’ 、  02s(CA)’ )−OCTに相当する
両分を分取し、凍結乾燥して白色粉末2.8mgを得た
。IJ4られた白色粉末の生物活性を特開昭80−12
3500号公報記載の方法に従い測定したところ、天然
型COTの生物活性が4500 MRCU/mgであっ
たのに対し54QOMRCU/rrrgであった。その
アミノ醋分析値を表2に示す。
(7) Crude (Oct', (ys(GA)')-O
Purification of CT Obtained crude (Oct', 'Gys(C
A) F) -COT was dissolved in 1M acetic acid (5mg/all
) L, purified by concentration gradient high performance liquid chromatography. The column is Chemco Pack 0DS-H (manufactured by Kemco).
φ10mwX 250m■), the eluent was water (too)-to%TFA (1) as liquid A and water (too) as liquid B.
40)-Acetonitrile (80)-10% TFA (1)
Elution was carried out using a linear concentration gradient from solution A to solution B. Here, the number in parentheses is the volume ratio of the solvent. (Oc.
Both fractions corresponding to t', 02s(CA)')-OCT were separated and freeze-dried to obtain 2.8 mg of white powder. Biological activity of white powder produced by IJ4
When measured according to the method described in Publication No. 3500, the biological activity of natural COT was 4500 MRCU/mg, whereas it was 54QOMRCU/rrrg. The amino acid analysis values are shown in Table 2.

表2  (Oct” 、  C:ys(OA)’ )−
COTのアミノ酸組成本  Leuを5.00に換算し
て求めた。
Table 2 (Oct", C:ys(OA)')-
COT's Amino Acid Composition Book Leu was calculated by converting it to 5.00.

11   ^sn及びAsp 本本本 Gln及びGlu 2本京本Q(:を及びCys(CA)は加水分解されて
Cys(CM)として検出される。
11 ^sn and Asp Gln and Glu 2 Kyomoto Q(: and Cys (CA) is hydrolyzed and detected as Cys (CM).

得られた白色粉末を高速液体クロマトグラフィーで検定
した。
The obtained white powder was analyzed by high performance liquid chromatography.

測定条件■: カラム;ケムコ社製ケムコパック0口5−H(φ4.8
s+m X15G+sm) 流 速;1.01文7分 溶離液;A液(水ニアセトニトリル:lO%TF^= 
100:0:1) B液(水ニアセトニトリル:10%TFA= 40:8
0:1) を用い、A液からB液へ直線型濃度勾 配溶出(30分) 測定波長;  210nm その結果、保持時間24.7分にペプチドに基づく単一
の強い吸収を認め、これが本発明の(Oct’ 。
Measurement conditions ■: Column: Chemco Pack 0-mouth 5-H (φ4.8
s+m
100:0:1) Solution B (water niacetonitrile: 10% TFA = 40:8
Linear concentration gradient elution from solution A to solution B (30 minutes) using 0:1) Measurement wavelength: 210 nm As a result, a single strong absorption based on the peptide was observed at a retention time of 24.7 minutes, which is the cause of the present invention. (Oct'.

Cys(OA)’ )−COTであった。It was Cys(OA)')-COT.

次に水晶15μgをトリプシンsPg含有の1%炭酸水
素アンモニウム水溶液(P)18.0) 5oonに溶
解し、37℃で2時間トリプシン消化を行なった。
Next, 15 µg of crystal was dissolved in 5 ounces of a 1% ammonium bicarbonate aqueous solution (P) containing trypsin sPg, and trypsin digestion was performed at 37°C for 2 hours.

本消化物を前述の測定条件■と同一条件で分析したとこ
ろ、保持時間11.2分、1.9分、13.0分、18
.8分にペプチドに基づくピークを検出した。これらの
ペプチドのFeb質量分析の結果を表3に示す、その結
果、(Oat’ 、  Cyg(OA)’ )−OCT
は予想通り、Lys 、 ArgのG末端側で切断され
て4つのペプチドフラグメントを与え、それぞれが理論
値に一致する質量数([8481勺を示した。
When this digest was analyzed under the same conditions as measurement conditions ① above, retention times were 11.2 minutes, 1.9 minutes, 13.0 minutes, and 18 minutes.
.. A peptide-based peak was detected at 8 minutes. The results of Feb mass spectrometry of these peptides are shown in Table 3, resulting in (Oat', Cyg(OA)')-OCT
As expected, it was cleaved at the G-terminus of Lys and Arg to give four peptide fragments, each of which had a mass number ([8481]) consistent with the theoretical value.

表3  (Oct’ 、  Cys(CA)? )−C
OTのトリプシン分解物のFabjij量分析(表中、
  T、 、  T2、?、、T、はそれぞれ(Oct
’ 、  Cys(CA)’ )−CCTのトリプシン
消化物を■の条件で逆相HPLCに供した時、保持時間
11.2分、12.3分、13.0分、18.9分にピ
ークを示すペプチドを表わす、) また、本市の溶液中での安定性試験を以下のようにして
行った。
Table 3 (Oct', Cys(CA)?)-C
Fabjij amount analysis of trypsin-digested products of OT (in the table,
T, , T2,? , ,T, are each (Oct
When the tryptic digest of Cys(CA)')-CCT was subjected to reverse-phase HPLC under the conditions of ) In addition, a stability test in Motoichi's solution was conducted as follows.

0.1Mクエン酸ナトリウム緩衝液(pHEl、o)に
(Oct’ 、  Gys(CA)’ )−COTを溶
解し、 IQpLg /1afL濃度とした。この溶液
1mjlを80”0.24時間封管中で放置した。測定
条禎:■を用いた逆相HPLCで分析し:残存する(O
ct’ 、  Gys(CA)’ )−OCTの溶出ピ
ーク面積Aを求めた。同様にして、加熱処理しティA−
1,%試ネイ溶液中(7)(Oct’ 、’ CysC
CA)’ )−COTの溶出ピーク面積Bを求め、Aの
Bに対する割合(%)を安定性の指標とした。同様にし
て、0CT1.7 及びAsu  CCTの安定性試験を行なった結果を表
4にまとめる。
(Oct', Gys(CA)')-COT was dissolved in 0.1 M sodium citrate buffer (pHEl, o) to give a concentration of IQpLg/1afL. 1 mjl of this solution was left in a sealed tube for 0.24 hours at 80 mm.It was analyzed by reverse phase HPLC using measurement conditions:
ct', Gys(CA)')-OCT elution peak area A was determined. Similarly, heat treated tea A-
(7) (Oct',' CysC
The elution peak area B of CA)')-COT was determined, and the ratio (%) of A to B was used as an index of stability. Similarly, stability tests were conducted on 0CT1.7 and Asu CCT, and the results are summarized in Table 4.

表4  (Octl、  Cys(GA)’ )−OC
T、AL晶7COT、 CCTの安定性試験A ■ Oc t−A 1a−Se r−Leu−9s r−T
h r−(4s’−Va l −Leu−G I 7−
Lys−Leu−9er−Gln−Glu−Leu−旧
5−Lys−Leu−Gln−Thr−T2r−P r
o−A rg−Th r−Asp−Va l −Gl 
7−A 1a−G l 2−Th r−P ro−N)
12(II )の合成(2) L7s−Leu−Ser−Gln−Glu−Lsu−旧
5−Lys−Lau−Gln−Thr−T7 r−Pr
o−Arg−Th r−Asp−Va l−CI !−
A 1a−C1y−Thr−P ro −H2 を 200 ILg秤量し、0.2M Trix−11
CJI Il衝液液CpH82,0,2%EDTA含有
)150IL見に溶解した。この溶液に、DTT  1
851Lgを溶解した同一緩衝液100ル文を窒素気流
下添加し、37°0で5時間反応させた0次いで、モノ
ヨードアセトアミド444 g gを溶解した0、IM
 NaOH25jLlを添加し、37℃暗所で30分間
反応させた。 IN AcOHを添加し、 PHを2〜
3に調整した。
Table 4 (Octl, Cys(GA)')-OC
T, AL crystal 7COT, CCT stability test A ■ Oct-A 1a-Ser-Leu-9s r-T
h r-(4s'-Va l -Leu-G I 7-
Lys-Leu-9er-Gln-Glu-Leu-old 5-Lys-Leu-Gln-Thr-T2r-P r
o-A rg-Th r-Asp-Val-Gl
7-A 1a-G l 2-Th r-P ro-N)
Synthesis of 12(II) (2) L7s-Leu-Ser-Gln-Glu-Lsu-old 5-Lys-Lau-Gln-Thr-T7 r-Pr
o-Arg-Thr-Asp-Val-CI! −
200 ILg of A 1a-C1y-Thr-Pro -H2 was weighed, and 0.2M Trix-11
CJI Il buffer solution (CpH 82, containing 0.2% EDTA) was dissolved in 150 IL. In this solution, DTT 1
100 l of the same buffer in which 851 L g of monoiodoacetamide was dissolved was added under a nitrogen stream and reacted for 5 hours at 37°0.
25jLl of NaOH was added, and the mixture was allowed to react for 30 minutes at 37°C in the dark. Add IN AcOH and adjust pH to 2~
Adjusted to 3.

この混合液を逆相npt、cを用いて精製し、主ピーク
を分画して凍結乾燥し、下記構造を有するペプチドを得
た。
This mixture was purified using reverse phase npt,c, and the main peak was fractionated and lyophilized to obtain a peptide having the following structure.

)1−Cys−Ala−Ser−Leu−Ser−Th
r−Cys−Val−Leu−Gly−Lys−Leu
−Ser−Gln−Glu−Leu−旧5−Lys−L
eu−Gln−Thr−1Ty r−Pr o−Arg
−Th r−Asp−Va 1−Gl 2−A 1a−
Gly−Th r−P ro−N)+2 逆相1(P L Cの条件は下記のとおりである。
)1-Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Th
r-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu
-Ser-Gln-Glu-Leu-Old 5-Lys-L
eu-Gln-Thr-1Tyr-Pr o-Arg
-Th r-Asp-Va 1-Gl 2-A 1a-
Gly-Thr-Pro-N)+2 Reverse phase 1 (PLC conditions are as follows.

カラム;ケムコ社製ケムコパック0口5−H(φ4.8
m+* X 150+wm)流 速; 1.Om見/分 溶離液;A液(水ニア七ト二トリル=100:0)B液
(水ニアセトニトリル−80:4G )を用い、A液か
らB液へ直線型濃度勾 配溶出(30分) 測定波長;  21Qn腸 このペプチドを0.2Mクエン酸ナトリウム緩衝液(p
H8,0) ニ溶解しく10ILg/li濃度) 、 
80”0.24時間封管中で放置した0反応液を逆相H
PLC(条件は測定条件■と同一)を用いて精製し、主
ピークを分画し、凍結乾燥して白色粉末78.8ggを
得た。この白色粉末の逆相HPLCによる検定、アミノ
酸分析及びトリプシン分解物のFab買量分量分析果は
、実施例1に示す(Oct” 、  Cys(CA)’
 )−CCTと一致した。また、本ペプチドのトリプシ
ン分解によって得られるN末端側フラグメントペプチド
のカルボキシペプチダーゼY分解物のアミノ酸分析及び
Fab質量分析の結果も、実施例1に示す(Oct” 
、  Cys(CA)フ)−OCTと一致し、本ペプチ
ドは、(Octl、  Cys(CA)’ )−OCT
であることが判明した。木ペプチドの生物活性を実施例
1に示す方法に従って測定したところ、実施例1で得ら
れたものと同等であった。
Column: Chemco Pack 0-mouth 5-H (φ4.8
m+*X 150+wm) flow rate; 1. Eluent: Linear concentration gradient elution from solution A to solution B (30 minutes) using solution A (water niacetonitrile = 100:0) and solution B (water niacetonitrile - 80:4G). Measurement wavelength; 21Qn intestine This peptide was added to 0.2M sodium citrate buffer (p
H8,0) 10 ILg/li concentration),
80" 0.0 Reaction solution left in a sealed tube for 24 hours was subjected to reverse phase H
It was purified using PLC (conditions are the same as measurement conditions ①), the main peak was fractionated, and lyophilized to obtain 78.8 gg of white powder. The results of reverse-phase HPLC assay, amino acid analysis, and Fab purchasing amount analysis of the trypsin-digested product of this white powder are shown in Example 1 (Oct", Cys(CA)'
) - consistent with CCT. In addition, the results of amino acid analysis and Fab mass spectrometry of the carboxypeptidase Y-digested product of the N-terminal fragment peptide obtained by tryptic digestion of the present peptide are also shown in Example 1 (Oct”
, Cys(CA))-OCT, and this peptide corresponds to (Octl, Cys(CA)′)-OCT.
It turned out to be. The biological activity of the wood peptide was measured according to the method shown in Example 1 and was found to be equivalent to that obtained in Example 1.

実施例3 Ac+n Oc t−A l a−9e r−Leu−9e r−
Th r−Cys−Va 1−Leu−G I ! −
L ys −Leu−SerJln−Glu−Leu−
)1is−Lys−LeuJIn−Thr−77r−P
ro−Arg−Thr−Asp−Val−Gly−Al
a−Gly−丁hr−Pro−NH2[(Oct’ 、
 Cys(Act)’ )−CC丁]cy)合成7位の
アミノ酸の導入において、 Bac−Cys(4GH3
・Bzl)の代わりにBoa−07s(Act) 0.
44g(1,5mmol)を用いる以外は、実施例1と
同様の条件にて固相合成を行ない、保護ペプチド樹脂を
得た。
Example 3 Ac+n Oct-Al a-9e r-Leu-9e r-
Thr-Cys-Va1-Leu-GI! −
Lys -Leu-SerJln-Glu-Leu-
)1is-Lys-LeuJIn-Thr-77r-P
ro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Al
a-Gly-Dinghr-Pro-NH2[(Oct',
Cys(Act)')-CCD]cy) In the introduction of the amino acid at the 7th position of the synthesis, Bac-Cys(4GH3
・Boa-07s (Act) 0.
Solid-phase synthesis was performed under the same conditions as in Example 1 except that 44 g (1.5 mmol) was used to obtain a protected peptide resin.

保護ペプチド樹脂の一部(200mg)を実施例1と同
様にして)HF分解した。得られたペプチドの酢酸溶液
をそのまま凍結乾燥し、粗(Oct’ 、  Cpg(
^c+x) ’ )−OCT 31.OBを得た。この
ペプチドを実施例1〜(8)と同様の方法で精製し、(
Oct’ 、  Cys(Acm) ’ )−OCT 
3.7mgを得た0本ペプチドの生物活性を実施例1と
同様にして測定したところ、天然型CTT (7)生物
活性が4500 MRCU/sg テあッタノに対し5
500 MRCU/wgであった。
A portion (200 mg) of the protected peptide resin was HF-digested (as in Example 1). The obtained acetic acid solution of the peptide was directly freeze-dried to obtain crude (Oct', Cpg(
^c+x) ' )-OCT 31. Obtained an OB. This peptide was purified in the same manner as in Examples 1 to (8), and (
Oct', Cys(Acm)')-OCT
The biological activity of the obtained 3.7 mg peptide was measured in the same manner as in Example 1, and it was found that the biological activity of natural CTT (7) was 4500 MRCU/sg.
It was 500 MRCU/wg.

実施例4 Acm Oc t−Se r−Agn−Leu−9er−↑hr
−Cys−Val−Leu−G17−Lys−Le u
−9e r−Gln−G Iu−Leu−His−Ly
s−Leu−G In−Th r−T7 r −P r
 o−A rg−Th r−Asp−Va 1−Gly
−A 1a−G Iy−Th r−P ro −NO3
[(Oct’ 、 C7sC75(A’ )−ECTb
7)合成2位、 3位、 7位のアミノ酸の導入におい
て、Boc−Ala (7)代わりにHoe−Ser(
Bzl) 0.44gを、Boc−5er(Bzl)の
代わりにBoc−Asn 0.35gとHOBt O,
23gを、Baa−Cys(40H3−Bzl) f)
代わりにBac−Cys(Acm)0.44gをそれぞ
れ用いる以外は、実施例1と同様の条件で固相合成を行
ない、保護ペプチド樹脂を得た。保護ペプチド樹脂の一
部を実施例1と同様にしてHF分解し、得られた粗ペプ
チドを実施例1−(7)と同様の方法で精製し、 (O
ct” 、  Cys(Act) ’ )−ECTを得
た0本ペプチドの生物活性を実施例1と同様にして測定
したところ、天然型ECTの生物活性が4500 MR
CU/mgであったのに対し5400 MRCU/■g
であった。
Example 4 Acm Oct-Ser-Agn-Leu-9er-↑hr
-Cys-Val-Leu-G17-Lys-Leu
-9e r-Gln-G Iu-Leu-His-Ly
s-Leu-G In-Th r-T7 r -P r
o-A rg-Th r-Asp-Va 1-Gly
-A 1a-G Iy-Th r-Pro -NO3
[(Oct', C7sC75(A')-ECTb
7) In the introduction of amino acids at synthetic positions 2, 3, and 7, Hoe-Ser (
Bzl) 0.44 g, Boc-Asn 0.35 g and HOBt O, instead of Boc-5er (Bzl),
23g of Baa-Cys(40H3-Bzl) f)
Solid-phase synthesis was performed under the same conditions as in Example 1, except that 0.44 g of Bac-Cys (Acm) was used instead, to obtain a protected peptide resin. A part of the protected peptide resin was subjected to HF decomposition in the same manner as in Example 1, and the obtained crude peptide was purified in the same manner as in Example 1-(7).
ct", Cys(Act)')-ECT obtained, the biological activity of the peptide obtained was measured in the same manner as in Example 1, and the biological activity of the natural ECT was 4500 MR.
5400 MRCU/g compared to CU/mg
Met.

実施例5 HF分解処理後において、メルカプト基を保護する操作
、即ちモノヨードアセトアミド処理を実施しないこと以
外は、実施例1と同様の方法で合成を行ない、(Oct
’ 、  C7s’ )−COTを得た0本ペプチドの
安定性、生物活性を実施例1と同様にして測定したとこ
ろ、実施例1の(Oct” 、  Cys(GA)’ 
)−(GETとほぼ同等であった。
Example 5 Synthesis was carried out in the same manner as in Example 1, except that after the HF decomposition treatment, the operation to protect the mercapto group, that is, the monoiodoacetamide treatment was not performed.
' , C7s' )-COT The stability and biological activity of the obtained peptide were measured in the same manner as in Example 1.
) - (approximately equivalent to GET).

実施例6 1位のアミノ酸の導入において、Octの代わりにKp
c 0.21g(1,5mmol)を用いる以外は、実
施例1と同様の方法で合成を行ない、(Kpc” 、 
 Cys(CA)’ )−1ll:CTを得た0本ペプ
チドの安定性、生物活性を測定したところ、いずれも実
施例1の(Oat’ 、  Cys(CA)’ )−0
0丁とほぼ同等であった。
Example 6 Introducing the amino acid at position 1, Kp was used instead of Oct.
Synthesis was carried out in the same manner as in Example 1 except that 0.21 g (1.5 mmol) of c was used, and (Kpc'',
Cys(CA)')-1ll: When the stability and biological activity of the 0 peptide obtained from CT were measured, both were found to be (Oat', Cys(CA)')-0 of Example 1.
It was almost equivalent to 0 guns.

実施例7 1位のアミノ酸の導入において、Octの代わりにpG
lu O,19g(1,5mmal)を用いる以外は、
実施例1と同様の方法で合成を行ない、(pG1u’ 
Example 7 In the introduction of amino acid at position 1, pG was used instead of Oct.
Except using lu O, 19 g (1,5 mmal),
Synthesis was carried out in the same manner as in Example 1, and (pG1u'
.

Cys(GA)’ >−CCTを得た0本ペプチドの安
定性、生物活性を測定したところ、いずれも実施例1の
(Oatl、  Cys(OA)’ )−OCTとほぼ
同等であった。
When the stability and biological activity of the 0 peptide for which Cys(GA)'>-CCT was measured, both were almost equivalent to (Oatl, Cys(OA)')-OCT of Example 1.

これまでに記載し、又は各実施例に述べた化合物の製法
は多くの点で変更可能である0例えば、用いる保護アミ
ノ酸は保護基の異なるアミノ酸が数多く市販されている
。これら市販の保護アミノ酸を適宜変更して用いること
ができ、得られるペプチドはすべて本発明のカルシトニ
ン誘導体と同等である。
The methods for producing the compounds described so far or in each example can be modified in many respects. For example, as for the protected amino acids to be used, many amino acids with different protecting groups are commercially available. These commercially available protected amino acids can be used with appropriate modifications, and all of the resulting peptides are equivalent to the calcitonin derivatives of the present invention.

比較例 本発明のカルシトニン誘導体とA″1u7CCT及びC
CTとの活性の比較を下の表に示す。
Comparative Example Calcitonin derivative of the present invention and A″1u7CCT and C
A comparison of activity with CT is shown in the table below.

1)   Y、5ako、M、5hibata  ら°
、  PeptideChea+1stry In2.
189(19135)2)  M、 Hon+ma、 
N、 Watanabe ら、J。
1) Y, 5ako, M, 5hibata et al.
, PeptideChea+1stry In2.
189(19135)2) M, Hon+ma,
N., Watanabe et al., J.

Biochem、、  100.4513(198f1
)[発明の効果] 本発明によれば、高活性、高安定性を有するカルシトニ
ン誘導体を安定にかつ安価に供給することができる。ま
た、本発明のカルシトニン誘導体は、実験用試薬として
、更にこれを用いてアッセイ系を確立し診断薬として用
いうるし、生物活性に基づいて医薬又は動物薬として利
用することも可能である。
Biochem,, 100.4513 (198f1
) [Effects of the Invention] According to the present invention, calcitonin derivatives having high activity and high stability can be stably supplied at low cost. Further, the calcitonin derivative of the present invention can be used as an experimental reagent, and furthermore, can be used as a diagnostic agent by establishing an assay system using it, and can also be used as a medicine or veterinary drug based on its biological activity.

手続補正書 昭和63年 2月16日 特許庁長官  小 川 邦 夫 殿 1、事件の表示 昭和62年特許願第252592号 2、発明の名称 新規カルシトニン誘導体及びその塩 3、補正をする者 事件との間係  特許出願人 名称(6051三菱油化株式会社 4、代理人 5、補正命令の日付 自 発 6、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄手続補
正書 昭和83年8月 8日 特許庁長官 吉 1)文 毅 殿 1、事件の表示 昭和62年特許願第252592号 2、発明の名称 新規カルシトニン誘導体及びその塩 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 (805)三菱油化株式会社 4、代理人 5、補正命令の日付 自発 6、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄7、補
正の内容 (1)明細書筒4頁14行目のr C313(SO,H
l ニジスティン酸、」を削除する。
Procedural amendment February 16, 1988 Kunio Ogawa, Commissioner of the Patent Office 1. Indication of the case 1988 Patent Application No. 252592 2. Name of the invention Novel calcitonin derivatives and salts thereof 3. Person making the amendment Case and Intermediate Patent applicant name (6051 Mitsubishi Yuka Co., Ltd. 4, Agent 5, Date of amendment order Voluntary 6, Subject of amendment Detailed explanation of the invention in the specification Procedural amendment document August 1983 8 Director General of the Japan Patent Office Yoshi 1) Takeshi Moon 1, Indication of the case, Patent Application No. 252592 of 1988, 2, Title of the invention, Novel calcitonin derivatives and salts thereof 3, Person making the amendment, Relationship to the case, Name of patent applicant (805) ) Mitsubishi Yuka Co., Ltd. 4, Agent 5, Date of amendment order Voluntary action 6, Subject of amendment Column 7 for detailed explanation of the invention in the specification, Contents of amendment (1) r on page 4, line 14 of the specification cylinder C313(SO,H
l Nidistic acid," is deleted.

(2)明細書筒5頁7行目のrオキシカルボニル、」の
後にrNO□:ニトロ基、」を挿入する。
(2) Insert "rNO□: nitro group" after "roxycarbonyl" on page 5, line 7 of the specification cylinder.

(3)明細書筒7頁4行目の「米国特許第4.616.
012号」を「米国特許第4.622.387号」と補
正する。
(3) “U.S. Patent No. 4.616.
No. 012'' is amended to read ``U.S. Patent No. 4.622.387''.

(4)明細書第7頁下か65行目のrTri基」をr 
Trt基」と補正する。
(4) "rTri group" at the bottom of page 7 or line 65 of the specification
Trt group”.

(5)明細書第11頁最下行及び第27頁表1の「C端
」を「C末端」と補正する。
(5) "C-end" in the bottom line of page 11 of the specification and Table 1 on page 27 is corrected to "C-terminus."

(6)明細書筒14頁9〜10行目の「カルボキシメチ
ル」をrカルバモイルメチル」と補正する。
(6) "Carboxymethyl" in lines 9-10 on page 14 of the specification is corrected to "rcarbamoylmethyl".

(7)明細書第16頁下から10行目の「保護ペプチド
樹脂は、」を「この保護ペプチド樹脂の」と補正する。
(7) On page 16 of the specification, line 10 from the bottom, "the protected peptide resin" is amended to "of this protected peptide resin."

(8)明細書第19頁下から8行目のr (CAI J
を削除する。
(8) r on page 19 of the specification, line 8 from the bottom (CAI J
Delete.

(9)明細書筒20頁3行目のr本発明の」を「3)で
述べた」と補正する。
(9) In the third line of page 20 of the specification, amend "r of the present invention" to "as described in 3)."

(10)明細書第16頁14行目の「(3)に述べた通
り」を削除する。
(10) Delete "as stated in (3)" on page 16, line 14 of the specification.

(11)明細書筒26頁4行目並びに第27頁表1のア
ミノ酸の位置の欄20及び14に相当する備考の欄のr
HOBtJをr)IOBtJと補正する。
(11) r in the remarks column corresponding to columns 20 and 14 of the amino acid position in Table 1 on page 27 and on page 26 of the specification tube, line 4.
Correct HOBtJ to r)IOBtJ.

(12)明細書筒26頁6〜7行目の「1位のアミノ酸
の・・・・・・を行なった。」を削除する。
(12) Delete "... was performed for the amino acid at position 1" on page 26 of the specification, lines 6-7.

(13)明細書筒37頁1行目の「B液(水ニアセトニ
トリル=60:40 ) Jを「B液(水ニアセトニト
リル=40:60 ) Jと補正する。
(13) Correct "Liquid B (water niacetonitrile = 60:40) J" on page 37, line 1 of the specification cylinder to "Liquid B (water niacetonitrile = 40:60) J.

(14)明細書第38頁下から6〜5行目の「実施例1
− (6) Jを「実施例1−17)Jと補正する。
(14) "Example 1" on page 38 of the specification, lines 6-5 from the bottom
- (6) Correct J to "Example 1-17) J.

(15)明細書第42頁の表のペプチド名の欄のr C
TTJをr CCTJと補正する。
(15) rC in the peptide name column of the table on page 42 of the specification
Correct TTJ with r CCTJ.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 カルシトニンの1位のアミノ酸残基が 次式: ▲数式、化学式、表等があります▼( I ) (式中、Xはイオウ原子又はメチレン基を表し;nは0
又は1を表す。) で示される環状アミノ酸残基であり、7位のアミノ酸残
基が適当な保護基で置換されていてもよいシステイン残
基であることを特徴とするカルシトニン誘導体及びその
塩。
[Claims] The amino acid residue at position 1 of calcitonin has the following formula: ▲ Numerical formula, chemical formula, table, etc. ▼ (I) (In the formula, X represents a sulfur atom or a methylene group; n is 0
Or represents 1. ) Calcitonin derivatives and salts thereof, characterized in that the amino acid residue at position 7 is a cysteine residue which may be substituted with an appropriate protecting group.
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