JP7406846B1 - 快速的且つ鮮やかなデジタルパソロジー方法 - Google Patents
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Abstract
Description
固定液で、固定する過程と、
Gillヘマチン溶液と/或いは、Mayerヘマチン溶液で、H着色を行う過程と、
蒸留水と/或いは洗浄液で、洗浄を行う過程と、
アンモニア水で、青みづけ行程を行う過程と、
エオジン液で、E着色を行う過程と、
アルコール溶液と/或いは洗浄溶液で、洗浄行程を行う過程と、
カバーガラスで、切除された未定の生物標本を、カバー処理を行う過程とが、含まれる。
而RTS流れ所消費的HE着色時間少於6分間。
(1)発光スペクトルが、1000nm乃至1100nmの範囲内にあって、繊維ベースのパルスレーザソースであり、H着色の第三調波生成(THG)信号と/或いはE着色の2光子励起蛍光(TPEF)信号収集するか或いは、、
(2)発光スペクトルが、1200nm乃至1300nmの範囲にある、クロムフォルステライト(Cr:F)ベースのパルスレーザソースであり、その中、H着色から、THG信号を収集し、E着色から3光子励起蛍光(3PEF)信号を収集する。
(a)マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査で、光学虚像を切り出し[15]、マルチチャンネルのデジタル化と、実時間の非線形マルチハーモニックと/或いは非線形多光子励起蛍光信号HやE或いはHE特定の組織病理特徴のディジタル表示に適用され[17][27]、
(b)少なくとも、1mm2[162]のレーザラスタ走査による一枚のフィールド・オブ・ビュー(FOV)[161]において、有効デジタル分解能が、1ミクロン(μm)[163]より小さく、FOV解像度[164]が、1000より大きくて、
(c)一枚或いは複数の画像から組み合わせられた蓄積撮像エリア[162]の範囲が、1mm2乃至400mm2の間にあり、持続的な有効データ処理量[165]が、少なくとも、各秒に、500メガビット(Mbps)である。
(1)レーザラスタ走査の一枚の画像FOV[161]は、少なくとも、1mm2であり、有効デジタルの横置き解像度[163]が、1μmより小さく、FOV 解像度[164]が、1000より大きく、
(2)1mm2乃至400mm2 の範囲内の一枚或いは複数の画像から組み合わせられた総撮像エリア[162]は、持続的な有効データ処理量[165]が、少なくとも、各秒に500メガビット(Mbps)であり、
(3)2分間以下の時間で、10×10mm2領域の点スキャンを終了でき、同時に、170ナノメートル(nm)より小さい画素サイズ[166]を維持できる。また、多画像組合せ過程は、実時間のモーセステッチ[16]で行い、後処理ないセンチスケールレーザスキャン[26]に適用される。
(a)発光スペクトル範囲が、1000nm乃至1100nmである繊維ベースのパルスレーザソース[21]は、H着色と/或いはE着色からの2光子励起蛍光(TPEF)信号[25]を収集するか、
(b)発光スペクトルが、1200nm乃至1300nmの範囲にある、クロムフォルステライト(Cr:F)ベースのパルスレーザソース[21]は、H着色のTHG信号と/或いはE着色の3光子励起蛍光(3PEF)信号[25]を収集する。
11 切除された未定の生体試料
12 組織腔や組織容器に収納する
13 HやE或いはHE着色を行う
131 短時間の固定
132 ヘマチン着色
133 洗浄
134 青みづけ
135 E着色
136 洗浄
137 カバーガラスで、カバーする
14 マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査システム
15 マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査で、光学虚像を切り出す
16 実時間のモーセステッチで多画像組合せ過程を行う
161 視野
162 結像領域
163 有効デジタルの横置き解像度
164 FOV解像度
165 有効データ処理量
166 ポイントスキャン
17 マルチチャンネルのデジタル化と、実時間の非線形マルチハーモニックと/或いは非線形多光子励起蛍光信号HやE或いはHE特定の組織病理特徴のディジタル表示
21 パルスレーザソース
22 スキャナ
23 集束レンズ
24 エレクトロンステージユニット
25 マルチモーダル検測システム
26 実時間のモーセステッチ
27 HやE或いはHE特定の組織病理特徴のリアルタイムのディジタル表示
3 RTS
33 マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査システム
Claims (12)
- ヘマチン(H)やエオシン(E)或いは、ヘマチンとエオシン(HE)の染料によって着色され、切除された未定の、物理的に薄片化されていない生体試料に対して、組織病理学評価を行う、デジタルパソロジー(RFP)方法であって、
マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査で、光学虚像を切り出し、H着色された核を視覚化するための非線形マルチハーモニック生成信号と、E着色された組織病理特徴を視覚化するための非線形多光子励起蛍光信号と、を収集し、
少なくとも1平方ミリメートル(mm2)の一枚の画像のフィールド・オブ・ビュー(FOV)において、有効デジタルの横置き解像度が、1ミクロン(μm)より小さく、
一枚の画像或いは、複数の画像から組み合わせられた蓄積撮像エリアの範囲が、1mm2乃至400mm2の間にあり、
持続的な有効データ処理量が、少なくとも、各秒に、500メガビット(Mbps)である
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、切除された未定の生体試料は、肝組織や乳腺組織、膵臓組織、脳組織、胸腺組織、前立腺組織、結腸組織、リンパ組織及び実体組織から得られ、不透明な完全体積組織であり、固定や、冷凍、物理スライス及び組織透明化が、行われていない、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
組織着色の流れで、上記の、切除された未定の生体試料に対して、H-やE-或いはHE-着色を行う、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項3に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、組織着色の流れは、組織腔や組織容器において、上記の、切除された未定の生体試料に対して行われる、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項3に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、切除された未定の生体試料に対して、上記の、組織着色の流れを行うことは、
固定液で、短時間に固定することと、
Gillヘマチン溶液と/或いは、Mayerヘマチン溶液で、H着色を行うことと、
蒸留水と/或いは洗浄液で、洗浄行程を行うことと、
アンモニア水で、青みづけ行程を行うことと、
エオジン液で、E着色を行うことと、
アルコール溶液と/或いは洗浄溶液で、洗浄行程を行うことと、
カバーガラスで、上記の、切除された未定の生体試料を、カバーすることが、含まれる、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項3または請求項5に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、組織着色の流れの時間は、6分間より短い、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査は、2分間より少ない時間で、10×10平方ミリメートル領域の点スキャンを行い、また、170ナノメートル(nm)より小さい画素サイズを維持できる、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
1平方センチメートルの試料面積の表面に対して、オプティカルセクショニングのレーザラスタ走査を行い、消費する着色時間が、6分間より少なく、スキャン時間が、2分間より少ないため、切除された未定の生体試料に対して、総評価時間が8分間より少なくなる、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査は、
発光スペクトルが、1000nm到1100nmの範囲内にあって、繊維ベースのパルスレーザソースであり、H着色の第三調波生成(THG)信号と/或いはE着色の2光子励起蛍光(TPEF)信号を収集するか、
発光スペクトルが、1200nm乃至1300nmの範囲にある、クロムフォルステライト(Cr:F)ベースのパルスレーザソースであり、H着色の第三調波生成(THG)信号と/或いはE着色の3光子励起蛍光(3PEF)を収集する、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査に利用された集束レンズは、対物レンズの開口数が、少なくとも、0.7である、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、マルチモーダル非線形光レーザラスタ走査に利用されるレゾナントスキャナー或いは、ポリゴンスキャナは、少なくとも、4kHzのラインレートで、高速軸スキャンを行う、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。 - 請求項1に記載のデジタルパソロジー方法において、
上記の、複数の画像から組み合わせられた蓄積撮像エリアは、補助として、2つの互いに垂直して連接される電子リニア移動ステージからなる、2次元のエレクトロンステージユニットが、設置される、
ことを特徴とするデジタルパソロジー方法。
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LUO, Teng et al.,Enhanced Visualization of Hematoxylin and Eosin Stained Pathological Characteristics by Phasor Approach,Analytical Chemistry,米国,American Chemical Society,2017年08月01日,Vol.89, No.17,pp.9224-9231 |
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