JP7171602B2 - Akkermansia muciniphila propagating material - Google Patents

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Description

本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることが可能な増殖材に関する。 The present invention relates to a propagation material capable of propagating Akkermansia muciniphila.

アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）は、０．６～１．０μｍ程度の大きさを有し、芽胞を作らず、運動性を有さない偏性嫌気性のグラム陰性細菌である（非特許文献１）。アッカーマンシア・ムシニフィラは、ヒトをはじめとする多くの哺乳動物の腸内に通常存在する真性細菌である。 Akkermansia muciniphila is an obligate anaerobic Gram-negative bacterium that has a size of about 0.6 to 1.0 μm, does not form spores, and does not have motility (Non-Patent Document 1). Akkermansia muciniphila is a eubacterium normally present in the intestines of many mammals, including humans.

近年、アッカーマンシア・ムシニフィラは肥満や糖尿病の人の腸内においてはその量が減少していること、また、アッカーマンシア・ムシニフィラの投与によりマウスにおける脂肪増加の改善やインスリン抵抗性の改善が確認され（非特許文献２，３）、アッカーマンシア・ムシニフィラと肥満等の障害との関連性が指摘されている。さらに、アッカーマンシア・ムシニフィラは、虫垂炎の重症度と反比例していること、また、潰瘍性大腸炎やクローン病等の炎症を伴う疾患の患者腸内においては、その量が減少していることが報告されており（非特許文献４，５）、アッカーマンシア・ムシニフィラは抗炎症作用を有すると考えられている。 In recent years, it has been confirmed that the amount of Akkermansia muciniphila is reduced in the intestines of obese and diabetic people, and administration of Akkermansia muciniphila improves fat gain and insulin resistance in mice. (Non-Patent Documents 2 and 3), the relationship between Akkermansia muciniphila and disorders such as obesity has been pointed out. Furthermore, Akkermansia muciniphila is inversely proportional to the severity of appendicitis, and its amount is reduced in the intestines of patients with inflammatory diseases such as ulcerative colitis and Crohn's disease. (Non-Patent Documents 4, 5), Akkermansia muciniphila is believed to have anti-inflammatory effects.

このため、これらの疾患や障害を予防又は改善するための有望な手段として、アッカーマンシア・ムシニフィラに対する関心が高まっている。 For this reason, there is growing interest in Akkermansia muciniphila as a promising means for preventing or ameliorating these diseases and disorders.

腸内におけるアッカーマンシア・ムシニフィラの数を、プレバイオティクスの観点から増やそうとする試みが行われている。例えば、特許文献１には、ポリデキストロースを含む組成物を摂取したヒトの腸内菌叢において、アッカーマンシア属細菌の比率が増加したことが記載されている。特許文献２には、キシロースを投与したマウスの腸内において、アッカーマンシア属細菌が増殖したことが記載されている。特許文献３には、レプチン欠損肥満マウス及び高脂肪摂食マウスに認められるアッカーマンシア・ムシニフィラ量の減少が、フラクトオリゴ糖を摂取させることにより回復したことが記載されている。特許文献４には、水溶性酢酸セルロースを摂取したラットの盲腸内容物の細菌叢において、アッカーマンシア属細菌の比率が増加したことが記載されている。非特許文献５には、高分子プロシアニジンを摂取したマウスの腸内菌叢において、アッカーマンシア属細菌の比率が増加したことが記載されている。 Attempts have been made to increase the number of Akkermansia muciniphila in the intestine from a prebiotic point of view. For example, Patent Document 1 describes that the ratio of Akkermansia bacteria increased in the intestinal flora of humans who ingested a composition containing polydextrose. Patent Document 2 describes that bacteria of the genus Akkermansia proliferated in the intestine of mice to which xylose was administered. Patent Document 3 describes that the decrease in the amount of Akkermansia muciniphila observed in leptin-deficient obese mice and high-fat-fed mice was restored by ingesting fructo-oligosaccharides. Patent Document 4 describes that the ratio of bacteria belonging to the genus Akkermansia was increased in the cecal content of rats ingesting water-soluble cellulose acetate. Non-Patent Document 5 describes that the ratio of bacteria belonging to the genus Akkermansia increased in the intestinal flora of mice ingesting high-molecular-weight procyanidins.

しかしながら、当該分野においては依然として、アッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させるための新たな手段が切望されている。 However, there is still a need in the art for new means for growing Akkermansia muciniphila.

特表２０１４－５３２７１０号公報Japanese translation of PCT publication No. 2014-532710 ＷＯ２０１６／１２２８８９公報WO2016/122889 publication 特表２０１６－５０３４１８号公報Japanese Patent Publication No. 2016-503418 ＷＯ２０１５／１４６８５３公報WO2015/146853 publication

Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ ａｎｄ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５４：１４６９－１４７６（２００４）Int J Syst and Evol Microbiol. 54:1469-1476 (2004) Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２３，１０７－１１３，２０１７Nature Medicine 23, 107-113, 2017 Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １１０，９０６６－９０７１（２０１３）Proc Natl Acad Sci USA 110, 9066-9071 (2013) Ｇｕｔ．２０１１ Ｊａｎ；６０（１）：３４－４０Gut. 2011 Jan;60(1):34-40 Ａｍ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１０ Ｎｏｖ；１０５（１１）：２４２０－８Am J Gastroenterol. 2010 Nov;105(11):2420-8

本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることが可能な新たな増殖材を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a new propagation material capable of propagating Akkermansia muciniphila.

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、一部のポリフェノールにアッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させる作用があることを見出し、本発明を完成させるに至った。 As a result of intensive studies aimed at solving the above problems, the present inventors have found that some polyphenols have the effect of increasing Akkermansia muciniphila, and have completed the present invention.

すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。
［１］ ケルセチン配糖体、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、及びタンニン酸からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含む、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖材。
［２］ ケルセチン配糖体が、ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、及びペルタトシドからなる群から選択される一以上を含む、［１］の増殖材。
［３］ ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、シアニジングルコシド、ヘスペリジン、アピゲニン、又はタンニン酸を含む、［１］又は［２］の増殖材。
［４］ 飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物である、［１］～［３］のいずれかの増殖材。
［５］ ケルセチン配糖体、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、及びタンニン酸からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含む増殖材を用いて培養されたアッカーマンシア・ムシニフィラを含む、培養物。
［６］ ケルセチン配糖体が、ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、及びペルタトシドからなる群から選択される一以上を含む、[５]の培養物。
［７］ 増殖材がケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、シアニジングルコシド、ヘスペリジン、アピゲニン、又はタンニン酸を含む、［５］又は［６］の培養物。
［８］ 飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物である、［５］～［７］のいずれかの培養物。
［９］ アッカーマンシア・ムシニフィラを、ケルセチン配糖体、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、及びタンニン酸からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含む増殖材を用いて培養することを含む、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び／又はその培養物の製造方法。
［１０］ ケルセチン配糖体が、ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、及びペルタトシドからなる群から選択される一以上を含む、［９］の製造方法。
［１１］ 増殖材がケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、シアニジングルコシド、ヘスペリジン、アピゲニン、又はタンニン酸を含む、［１０］の製造方法。That is, the present invention includes the following inventions.
[1] A propagation material of Akkermansia muciniphila, containing one or more polyphenols selected from the group consisting of quercetin glycosides, isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, and tannic acid.
[2] The growth of [1], wherein the quercetin glycoside contains one or more selected from the group consisting of quercetin 3-D-galactoside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, and pertatoside material.
[3] The propagation material of [1] or [2], containing quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin, cyanidin glucoside, hesperidin, apigenin, or tannic acid.
[4] The propagation material according to any one of [1] to [3], which is food, drink, medicine, feed or feed additive.
[5] Ackermann cultured using a propagation material containing one or more polyphenols selected from the group consisting of quercetin glycoside, isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, and tannic acid A culture comprising Shea muciniphila.
[6] The culture of [5], wherein the quercetin glycoside contains one or more selected from the group consisting of quercetin 3-D-galactoside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, and pertatoside thing.
[7] The culture of [5] or [6], wherein the propagation material comprises quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin, cyanidin glucoside, hesperidin, apigenin, or tannic acid.
[8] The culture according to any one of [5] to [7], which is food, drink, medicine, feed or feed additive.
[9] Akkermansia muciniphila, a propagating material containing one or more polyphenols selected from the group consisting of quercetin glycosides, isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, and tannic acid A method for producing Akkermansia muciniphila and/or a culture thereof, comprising culturing using Akkermansia muciniphila.
[10] The production of [9], wherein the quercetin glycoside comprises one or more selected from the group consisting of quercetin 3-D-galactoside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, and pertatoside Method.
[11] The production method of [10], wherein the propagation material contains quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin, cyanidin glucoside, hesperidin, apigenin, or tannic acid.

本発明によれば、アッカーマンシア・ムシニフィラを増殖させることが可能な新たな増殖材を提供することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a new propagation material capable of propagating Akkermansia muciniphila.

図１－１は、ケルセチン配糖体の培地への添加による、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖への影響を評価した結果を示すグラフ図である。結果は、対照の増殖量を１００％とする相対値（増殖比率［％］）にて示す。ｎ＝４。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１（ｖｓ対照、Ｄｕｎｎｅｔｔ 多重比較検定）FIG. 1-1 is a graph showing the results of evaluating the effect of addition of quercetin glycosides on the growth of Akkermansia muciniphila. The results are shown as a relative value (proliferation ratio [%]) with the amount of proliferation in the control set as 100%. n=4. *: p<0.05, **: p<0.01 (vs control, Dunnett's multiple comparison test) 図１－２は、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、又はタンニン酸の培地への添加による、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖への影響を評価した結果を示すグラフ図である。結果は、対照の増殖量を１００％とする相対値（増殖比率［％］）にて示す。ｎ＝４。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１（ｖｓ対照、Ｄｕｎｎｅｔｔ 多重比較検定）FIG. 1-2 is a graph showing the results of evaluating the effects of addition of isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, or tannic acid on the growth of Akkermansia muciniphila to the medium. is. The results are shown as a relative value (proliferation ratio [%]) with the amount of proliferation in the control set as 100%. n=4. *: p<0.05, **: p<0.01 (vs control, Dunnett's multiple comparison test) 図２は、ルチン、又はヘスペリジンの経口摂取による、生体内におけるアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖への影響を評価した結果を示すグラフ図である。結果は、水投与群（対照）、ルチン投与群、ヘスペリジン投与群より採取した糞便中のアッカーマンシア・ムシニフィラＤＮＡの定量結果を示す。ｎ＝４。＊＊：ｐ＜０．０５，＊：ｐ＜０．１（ｖｓ対照、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ検定）FIG. 2 is a graph showing the results of evaluating the effect of oral intake of rutin or hesperidin on the growth of Akkermansia muciniphila in vivo. The results show the quantitative results of Akkermansia muciniphila DNA in feces collected from the water-administered group (control), the rutin-administered group, and the hesperidin-administered group. n=4. **: p < 0.05, *: p < 0.1 (vs control, Mann-Whitney U test)

１．増殖材
本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖材に関する。1. Propagation Material The present invention relates to a propagation material for Akkermansia muciniphila.

「アッカーマンシア・ムシニフィラ」は公知であり、Ｍｕｒｉｅｌ Ｄｅｒｒｉｅｎら、Ｉｎｔ Ｊ Ｓｙｓｔ ａｎｄ Ｅｖｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５４：１４６９－１４７６．（２００４）等に記載される公知の菌学的性質に基づいて特徴付けられる。Ｍｕｒｉｅｌ Ｄｅｒｒｉｅｎら（上掲）には、基準株（ＡＴＣＣ ＢＡＡ－８３５株）について、グラム陰性、偏性嫌気性、非運動性、無芽胞、卵形、サイズ０．６～１．０μｍ、ムチン添加培地中にて増殖、及び莢膜形成あり等の特徴を有することが記載されている。 "Akkermansia muciniphila" is known and is described by Muriel Derrien et al., Int J Syst and Evol Microbiol. 54:1469-1476. (2004), etc., based on known mycological properties. Muriel Derrien et al., supra, describe the type strain (ATCC strain BAA-835) as Gram-negative, obligately anaerobic, non-motile, non-spore-forming, oval, 0.6-1.0 μm in size, mucin-loaded. It is described that it has characteristics such as growth in a medium and capsule formation.

また、アッカーマンシア・ムシニフィラの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列は公知であり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ等の公知のデータベースに開示されており、ＡＹ２７１２５４、ＮＲ＿０７４４３６として登録されている。これらの配列情報を利用して、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の分析を行うことにより、アッカーマンシア・ムシニフィラを同定することができる。１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の分析は、定量的ＰＣＲ法、ＤＧＧＥ／ＴＧＧＥ法、ＦＩＳＨ法、１６Ｓ ｒＤＮＡクローニングライブラリー法、Ｔ－ＲＦＬＰ法、ＦＩＳＨ－ＦＣＭ法、塩基配列決定法等の公知の手法に基づいて行うことができる。例えば、定量的ＰＣＲ法によれば、アッカーマンシア・ムシニフィラの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の公知の塩基配列情報に基づいて、当該菌に特異的なプライマーを作製する。選択された菌より抽出されたＤＮＡを鋳型として、当該プライマーを用いてＰＣＲ反応を行い、意図されたサイズのＰＣＲ増幅産物の有無に基づいて当該菌がアッカーマンシア・ムシニフィラであるか否かを判断することができる。特異的なプライマーの設計やＰＣＲ条件の決定は、定法に従って行うことができる（バイオ実験イラストレイテッド３ 本当にふえるＰＣＲ：細胞工学別紙 目で見る実験ノートシリーズ；中山広樹著 株式会社秀潤社）。 In addition, the base sequence of the 16S rRNA gene of Akkermansia muciniphila is known, and is disclosed in known databases such as GenBank, and registered as AY271254 and NR_074436. Using this sequence information, Akkermansia muciniphila can be identified by analyzing the 16S rRNA gene. Analysis of the 16S rRNA gene is performed based on known techniques such as quantitative PCR, DGGE/TGGE, FISH, 16S rDNA cloning library, T-RFLP, FISH-FCM, and sequencing. be able to. For example, according to the quantitative PCR method, primers specific to the bacterium are prepared based on known nucleotide sequence information of the 16S rRNA gene of Akkermansia muciniphila. Using the DNA extracted from the selected bacterium as a template, a PCR reaction is performed using the primers, and whether or not the bacterium is Akkermansia muciniphila is determined based on the presence or absence of a PCR amplification product of the intended size. can do. The design of specific primers and the determination of PCR conditions can be carried out according to standard methods (Bio Experiment Illustrated 3, PCR that really increases: cell engineering attached sheet, Visual Experiment Note Series; written by Hiroki Nakayama, Shujunsha Co., Ltd.).

本発明において「増殖材」とは、インビトロ又は哺乳動物の生体内におけるアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を支援し、アッカーマンシア・ムシニフィラの絶対数を増加させることを可能とする増殖作用を有する組成物を意味する。 In the present invention, the term "proliferation material" refers to a composition having a proliferation action that supports the proliferation of Akkermansia muciniphila in vitro or in vivo in mammals and enables the absolute number of Akkermansia muciniphila to be increased. means.

本発明の増殖材は、ケルセチン配糖体、イソラムネチン（３’－О－メチルケルセチンとも称される）、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、及びタンニン酸、からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含む。「一以上のポリフェノール」とは、上記より選択される１種のポリフェノール、あるいは、上記より選択される２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種又は１４種のポリフェノールの組み合わせを意味する。 The propagation material of the present invention is selected from the group consisting of quercetin glycosides, isorhamnetin (also referred to as 3′-O-methylquercetin), cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, and tannic acid. Contains one or more selected polyphenols. "One or more polyphenols" means one polyphenol selected from the above, or two, three, four, five, six, seven, eight, nine selected from the above, It means a combination of 10, 11, 12, 13 or 14 polyphenols.

ケルセチン配糖体は、ケルセチンに糖（例えば、グルコース、マンノース、ガラクトース、ラムノース、フルクトース、グルクロン酸、キシロース、マルトース、ラクトース、ゲンチオビオース、ルチノース等）がグリコシド結合した構造を有する化合物であればよく、特に限定はされない。本発明に用い得るケルセチン配糖体としては、特に限定はされないが、例えば、ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン（ケルセチン３－ルチノシドとも称される）、及びペルタトシド（ケルセチン３－О－α－アラビノピラノシル－β－グルコピラノシドとも称される）が挙げられる。好ましくは、ケルセチン配糖体は、ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、及びペルタトシドからなる群から選択される一以上（例えば、１種、又は２種、３種、４種、もしくは５種の組み合わせ）を含む。ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、及びペルタトシドはそれぞれ、以下の構造式で表される。

Figure 0007171602000001
A quercetin glycoside may be a compound having a structure in which a sugar (e.g., glucose, mannose, galactose, rhamnose, fructose, glucuronic acid, xylose, maltose, lactose, gentiobiose, rutinose, etc.) is glycoside-bonded to quercetin, particularly Not limited. Quercetin glycosides that can be used in the present invention are not particularly limited. ), and pertatoside (also called quercetin 3-O-α-arabinopyranosyl-β-glucopyranoside). Preferably, the quercetin glycoside is one or more selected from the group consisting of quercetin 3-D-galactoside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, and pertatoside (e.g., one or two species, combinations of three, four, or five). Quercetin 3-D-galacside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, and pertatoside are each represented by the following structural formulas.
Figure 0007171602000001

イソラムネチンはケルセチンのメチル化体であり、以下の構造式で表される。

Figure 0007171602000002
Isorhamnetin is a methylated form of quercetin and is represented by the following structural formula.
Figure 0007171602000002

シアニジングルコシドは、シアニジン配糖体の一種であり、以下の構造式で表される。

Figure 0007171602000003
Cyanidin glucoside is a kind of cyanidin glycoside and is represented by the following structural formula.
Figure 0007171602000003

ヘスペリジンは、フラバノン配糖体の一種であり、以下の構造式で表され、ヘスペレチンは、ヘスペリジンのアグリコンであり、以下の構造式で表される。

Figure 0007171602000004
Hesperidin is a kind of flavanone glycoside and is represented by the following structural formula, and hesperetin is an aglycone of hesperidin and is represented by the following structural formula.
Figure 0007171602000004

アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、及びノビレチンはそれぞれ、フラボン配糖体のアグリコンであり、以下の構造式で表される。

Figure 0007171602000005
Apigenin, chrysin, tangeretin, and nobiletin are aglycones of flavone glycosides, and are represented by the following structural formulas.
Figure 0007171602000005

タンニン酸は、グルコースに複数の没食子酸が結合してなるガロタンニンの一種であり、以下の構造式で表される。

Figure 0007171602000006
Tannic acid is a kind of gallotannins in which a plurality of gallic acids are bound to glucose, and is represented by the following structural formula.
Figure 0007171602000006

これらのうち特に、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、シアニジングルコシド、ヘスペリジン、アピゲニン、及びタンニン酸からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含むことが好ましい。ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、シアニジングルコシド、ヘスペリジン、アピゲニン、及びタンニン酸は、上記の他のポリフェノールと比べて、高い増殖作用を有する。 Among these, it is particularly preferable to contain one or more polyphenols selected from the group consisting of quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin, cyanidin glucoside, hesperidin, apigenin, and tannic acid. Quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin, cyanidin glucoside, hesperidin, apigenin, and tannic acid have a high proliferative effect compared to the other polyphenols mentioned above.

本発明において上記一以上のポリフェノールは、植物から抽出された天然物であってもよいし、化学合成されたものであってもよい。天然物である場合、その原料となる植物や抽出方法は特に限定されず、上記一以上のポリフェノールは植物から単離されたものや、抽出物の形態で用いることができる。 In the present invention, the one or more polyphenols may be natural products extracted from plants, or may be chemically synthesized. In the case of a natural product, there are no particular restrictions on the plants used as raw materials and the extraction method, and the one or more polyphenols can be used in the form of those isolated from plants or in the form of extracts.

増殖材には上記一以上のポリフェノールを、０．００１～９９重量％、好ましくは０．００１～９０重量％、より好ましくは０．００１～８０重量％、さらに好ましくは０．００１～７０重量％の範囲より選択される量にて含めることができるが、その量は特に限定されず、ポリフェノールの種類や数、増殖材の形態や使途に応じて変化し得る。増殖材に２種以上のポリフェノールの組み合わせが含まれる場合、各ポリフェノールは任意の割合で含めることができる。本発明の増殖材は、液体、半固体、固体（粉体、粒体等）等、使途に適した任意の形態とすることができるが、例えば、増殖材が液体の形態を有する場合、１種のポリフェノールにつき、５μｇ／ｍＬ以上、好ましくは１０μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは２０μｇ／ｍＬ以上、さらに好ましくは３０μｇ／ｍＬ以上となる量を含めることができる。上限は、特に限定されないが、例えば、２０００μｇ／ｍＬ以下、好ましくは１５００μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは１０００μｇ／ｍＬ以下、さらに好ましくは５００μｇ／ｍＬ以下とすることができる。 0.001 to 99% by weight, preferably 0.001 to 90% by weight, more preferably 0.001 to 80% by weight, still more preferably 0.001 to 70% by weight of one or more polyphenols However, the amount is not particularly limited, and may vary depending on the type and number of polyphenols, the form and use of the propagation material. When the propagation material includes a combination of two or more polyphenols, each polyphenol can be included in any proportion. The propagation material of the present invention can be in any form suitable for use, such as liquid, semi-solid, solid (powder, granules, etc.). Amounts of 5 μg/mL or greater, preferably 10 μg/mL or greater, more preferably 20 μg/mL or greater, even more preferably 30 μg/mL or greater, can be included per seed polyphenol. The upper limit is not particularly limited, but can be, for example, 2000 μg/mL or less, preferably 1500 μg/mL or less, more preferably 1000 μg/mL or less, and even more preferably 500 μg/mL or less.

増殖材に含まれる上記一以上のポリフェノールの量は、公知の質量分析法（例えば、液体クロマトグラフィー質量分析法、高速液体クロマトグラフィー法等）を用いて定量することができる。 The amount of the one or more polyphenols contained in the propagation material can be quantified using a known mass spectrometry method (eg, liquid chromatography mass spectrometry, high performance liquid chromatography, etc.).

本発明の増殖材には、上記一以上のポリフェノールに加えて、微生物培養に通常使用される炭素源、窒素源、無機塩類等を含めることができる。例えば、炭素源としては、グルコース、フルクトース、スクロース、スターチ、糖蜜等を利用することができ、窒素源としては、例えばペプトン、酵母エキス、トリプトン、カゼイン加水分解物、肉エキス、硫安等を利用することができ、無機塩類としては、燐酸、カリウム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、鉄、マンガン等の塩類を利用することができる。さらに、必要に応じて、寒天やゼラチン、ビタミン類、アミノ酸類、界面活性剤等を含めることができる。 In addition to the one or more polyphenols described above, the propagating material of the present invention can contain carbon sources, nitrogen sources, inorganic salts and the like that are commonly used for microbial culture. For example, glucose, fructose, sucrose, starch, molasses, etc. can be used as the carbon source, and peptone, yeast extract, tryptone, casein hydrolyzate, meat extract, ammonium sulfate, etc. can be used as the nitrogen source. As inorganic salts, salts of phosphoric acid, potassium, magnesium, calcium, sodium, iron, manganese and the like can be used. Furthermore, if necessary, agar, gelatin, vitamins, amino acids, surfactants, etc. can be included.

また、本発明の増殖材には、アッカーマンシア属菌の増殖又は腸内比率の増大に効果を有することが知られているその他の成分を含めることができる。このような成分としては、ムチン、グルコース、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン（Ｍｕｒｉｅｌ Ｄｅｒｒｉｅｎら（上掲））、ポリデキストロース（特表２０１４－５３２７１０）、キシロース（ＷＯ２０１６－１２２８８９）、フラクトオリゴ糖（特表２０１６－５０３４１８）、水溶性酢酸セルロース（ＷＯ２０１５／１４６８５３）、高分子プロシアニジン（Ｍａｓｕｍｏｔｏ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．，６，３１２０８（２０１６））等が挙げられるが、これらに限定はされない。 In addition, the propagation material of the present invention can contain other ingredients known to be effective in increasing the growth of Akkermansia or the intestinal ratio thereof. Examples of such components include mucin, glucose, N-acetylglucosamine, N-acetylgalactosamine (Muriel Derrien et al. (cited above)), polydextrose (2014-532710), xylose (WO2016-122889), fructooligosaccharides ( 2016-503418), water-soluble cellulose acetate (WO2015/146853), polymeric procyanidins (Masumoto S et al., Sci.Rep., 6, 31208 (2016)) and the like, but are not limited to these. .

本発明の増殖材は、アッカーマンシア・ムシニフィラを培養するための培地として、又は、基本培地に添加して利用することができ、インビトロにおけるアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を支援し、アッカーマンシア・ムシニフィラの絶対数を増加させることができる。 The propagation material of the present invention can be used as a medium for culturing Akkermansia muciniphila or added to a basal medium, and supports the growth of Akkermansia muciniphila in vitro. Absolute numbers can be increased.

あるいは、本発明の増殖材は、医薬や飲食品、あるいは飼料又は飼料添加物の形態とすることができ、哺乳動物に投与又は摂取させることができる。 Alternatively, the propagation material of the present invention can be in the form of pharmaceuticals, food and drink, feeds or feed additives, and can be administered or ingested to mammals.

本発明の増殖材は、医薬や飲食品の製造において通常用いられている、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等の添加剤を含めることができ、企図される投与経路や摂取方法に適した剤型又は形態を有する医薬や飲食品として製造、提供することができる。 The propagation material of the present invention can contain additives such as excipients, lubricants, binders, and disintegrants that are commonly used in the production of pharmaceuticals and food and beverages, and can be used by the intended route of administration and ingestion. It can be produced and provided as a medicine or food or drink having a dosage form or form suitable for the method.

賦形剤としては、乳糖、白糖、Ｄ－マンニトール、Ｄ－ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、ブドウ糖、コーンスターチ、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、プルラン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等が挙げられる。 Excipients include lactose, sucrose, D-mannitol, D-sorbitol, starch, pregelatinized starch, dextrin, glucose, cornstarch, crystalline cellulose, low-substituted hydroxypropylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, gum arabic, pullulan, light Anhydrous silicic acid, synthetic aluminum silicate, magnesium aluminometasilicate and the like can be mentioned.

滑沢剤としては、例えば、ショ糖脂肪酸エステルやグリセリン脂肪酸エステル等のシュガーエステル類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリルアルコール、粉末植物油脂等の硬化油、サラシミツロウ等のロウ類、タルク、ケイ酸、ケイ素等が挙げられる。 Lubricants include, for example, sugar esters such as sucrose fatty acid esters and glycerin fatty acid esters, calcium stearate, magnesium stearate, stearic acid, stearyl alcohol, hardened oils such as powdered vegetable oils and fats, waxes such as white beeswax, Talc, silicic acid, silicon and the like.

結合剤としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ－マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。 Binders include pregelatinized starch, sucrose, gelatin, gum arabic, methylcellulose, carboxymethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, crystalline cellulose, sucrose, D-mannitol, trehalose, dextrin, pullulan, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinyl pyrrolidone and the like.

崩壊剤としては、乳糖、白糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、軽質無水ケイ酸、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。 Disintegrants include lactose, sucrose, starch, carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium, croscarmellose sodium, carboxymethylstarch sodium, light anhydrous silicic acid, low-substituted hydroxypropylcellulose and the like.

また、本発明において利用可能な、医薬や飲食品の製造において通常用いられている添加剤の例としては、各種油脂（例えば、大豆油、コーン油、サフラワー油、オリーブ油等の植物油、牛脂、イワシ油等の動物油脂）、生薬（例えばロイヤルゼリー、人参等）、アミノ酸（例えばグルタミン、システイン、ロイシン、アルギニン等）、多価アルコール（例えばエチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、糖アルコール、例としてソルビトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、マンニトール等）、天然高分子（例えばアラビアガム、寒天、水溶性コーンファイバー、ゼラチン、キサンタンガム、カゼイン、グルテン又はグルテン加水分解物、レシチン、澱粉、デキストリン等）、ビタミン（例えばビタミンＣ、ビタミンＢ群等）、ミネラル（例えばカルシウム、マグネシウム、亜鉛、鉄等）、食物繊維（例えばマンナン、ペクチン、ヘミセルロース等）、界面活性剤（例えばグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル等）、精製水、希釈剤、安定化剤、等張化剤、ｐＨ調製剤、緩衝剤、湿潤剤、溶解補助剤、懸濁化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、香料、酸化防止剤、甘味料、呈味成分、酸味料等が挙げられる。 In addition, examples of additives that can be used in the present invention and are commonly used in the production of pharmaceuticals and food and drink include various oils and fats (e.g., vegetable oils such as soybean oil, corn oil, safflower oil, and olive oil, beef tallow, animal oils and fats such as sardine oil), crude drugs (e.g. royal jelly, carrots, etc.), amino acids (e.g., glutamine, cysteine, leucine, arginine, etc.), polyhydric alcohols (e.g., ethylene glycol, polyethylene glycol, propylene glycol, glycerin, sugar alcohols, sorbitol, erythritol, xylitol, maltitol, mannitol, etc.), natural polymers (e.g. gum arabic, agar, water-soluble corn fiber, gelatin, xanthan gum, casein, gluten or gluten hydrolysates, lecithin, starch, dextrin, etc.) , vitamins (e.g. vitamin C, vitamin B group etc.), minerals (e.g. calcium, magnesium, zinc, iron etc.), dietary fiber (e.g. mannan, pectin, hemicellulose etc.), surfactants (e.g. glycerin fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester etc.), purified water, diluent, stabilizer, tonicity agent, pH adjuster, buffer, wetting agent, solubilizer, suspending agent, coloring agent, flavoring agent, flavoring agent, fragrance, antioxidant agents, sweeteners, taste components, acidifiers and the like.

医薬や飲食品の剤型又は形態は、特に制限されない。医薬としては例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤、吸入剤、坐剤等の剤型とすることができるが、好ましくは、経口剤である。液剤、懸濁剤等の液体製剤は、凍結乾燥化し保存し得る状態で提供され、用時、水や生埋的食塩水等を含む緩衝液等で溶解して適当な濃度に調製した後に使用されるものであってもよい。また錠剤等の固形の剤形を有するものは、必要に応じてコーティングを施されていてもよいし（例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶錠等）、公知の技術を使用して、徐放性製剤、遅延放出製剤又は即時放出製剤等の放出が制御された製剤としてもよい。 There are no particular restrictions on the dosage form or form of the medicine or food or drink. Pharmaceuticals can be in dosage forms such as tablets, capsules, granules, powders, powders, syrups, dry syrups, liquids, suspensions, inhalants, suppositories, etc., but oral agents are preferred. is. Liquid formulations such as liquid formulations and suspensions are provided in a lyophilized and storable state, and are used after being dissolved in a buffer solution containing water, living saline, etc., to an appropriate concentration before use. It may be In addition, solid dosage forms such as tablets may optionally be coated (e.g., sugar-coated tablets, gelatin-coated tablets, enteric-coated tablets, etc.). Controlled release formulations such as sustained release formulations, delayed release formulations or immediate release formulations may also be used.

飲食品としては例えば、錠菓、錠剤、チュアブル錠、錠剤、粉剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤等の形態を有する健康飲食品（サプリメント、栄養補助食品、健康補助食品、栄養調整食品等）、清涼飲料、茶飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、コーヒー飲料、炭酸飲料、野菜飲料、果汁飲料、醗酵野菜飲料、醗酵果汁飲料、発酵乳飲料（ヨーグルト等）、乳酸菌飲料、乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、菓子（例えば、ビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、チューインガム、タブレット）、ゼリー等の形態とすることができる（これらに限定はされない）。 Examples of food and drink include health food and drink (supplements, dietary supplements, health supplements, nutritionally adjusted foods) in the form of tablets, tablets, chewable tablets, tablets, powders, powders, capsules, granules, drinks, etc. etc.), soft drinks, tea drinks, jelly drinks, sports drinks, coffee drinks, carbonated drinks, vegetable drinks, fruit juice drinks, fermented vegetable drinks, fermented fruit juice drinks, fermented milk drinks (yogurt, etc.), lactic acid drinks, milk drinks, powders It can be in the form of beverages, cocoa beverages, confectionery (eg, biscuits and cookies, chocolate, candy, chewing gum, tablets), jelly, etc. (but not limited to these).

飲食品は、保健機能食品（特定保健用食品（条件付き特定保健用食品を含む）、栄養機能食品、機能性表示食品や、健康食品、美容食品等とすることができる。 Food and drink can be food with health claims (food for specified health use (including food for specified health use with certain conditions), food with nutrient function claims, food with function claims, health food, beauty food, and the like.

また、本発明の増殖材は、ヒト用の飲食品だけでなく、家畜、競走馬、ペット等の飼料又は飼料添加物の形態とすることもできる。 In addition, the breeding material of the present invention can be in the form of feed or feed additive for livestock, racehorses, pets, etc., as well as food and drink for humans.

本発明の増殖材は飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物として、哺乳動物（例えばヒト、サル、チンパンジー、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット等）、好ましくはヒトに投与又は摂取させることができ、投与又は摂取された哺乳動物の生体内におけるアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を支援し、アッカーマンシア・ムシニフィラの絶対数を増加させることができる。 The propagation material of the present invention is used as a food, drink, medicine, feed, or feed additive for mammals (e.g., humans, monkeys, chimpanzees, cows, horses, pigs, sheep, dogs, cats, mice, rats, etc.), preferably humans. It can be administered or ingested, and can support the growth of Akkermansia muciniphila in vivo in mammals to which it is administered or ingested, and can increase the absolute number of Akkermansia muciniphila.

本発明の増殖材の投与量又は摂取量は、対象の年齢及び体重、投与経路、投与・摂取回数、含まれるポリフェノールの種類や数等の要因に応じて変化し得、任意の投与量又は摂取量を採用し得る。例えば、経口的に投与又は摂取する場合には、含まれる１種のポリフェノールにつき、１日当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ～６００ｍｇ／ｋｇより選択される量を１回又は複数回（例えば、２～５回、好ましくは２～３回）に分けて投与又は摂取することができる。２種以上のポリフェノールの組み合わせが含まれる場合、各ポリフェノールが、１日当たり上記範囲より選択される量にて１回又は複数回に分けて投与又は摂取されればよい。 The dosage or intake of the propagation material of the present invention may vary depending on factors such as the age and weight of the subject, route of administration, frequency of administration/ingestion, type and number of polyphenols contained, and any dosage or intake. quantity can be employed. For example, in the case of oral administration or ingestion, an amount selected from 0.01 mg / kg to 600 mg / kg per day per polyphenol contained once or multiple times (for example, 2 to 5 times , preferably 2 to 3 times) can be administered or taken in divided doses. When a combination of two or more polyphenols is included, each polyphenol may be administered or ingested in an amount selected from the above range in one or more divided doses per day.

本発明の増殖材は、微量かつ短期間で効果を奏することができるが、長期間にわたって投与又は摂取することができる。例えば、本発明の増殖材を、上記用法用量にしたがい、１週間以上、２週間以上、１か月以上、２か月以上、６ヶ月以上、１年以上、又はそれ以上の期間にわたって継続して投与又は摂取することができる。 The propagation material of the present invention can be effective in a very small amount and in a short period of time, but can be administered or ingested over a long period of time. For example, the propagation material of the present invention is continuously administered for a period of 1 week or more, 2 weeks or more, 1 month or more, 2 months or more, 6 months or more, 1 year or more, or more according to the above dosage and administration. It can be administered or ingested.

２．培養物
また、本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラの培養物及びその製造方法に関する。2. Culture The present invention also relates to a culture of Akkermansia muciniphila and a method for producing the same.

本発明において「培養物」とは、上記増殖材を用いて培養されたアッカーマンシア・ムシニフィラ、ならびに、培地成分及び代謝産物を含む組成物である。培地成分には、好ましくは、上記一以上のポリフェノールが含まれる。 In the present invention, the "culture" is a composition containing Akkermansia muciniphila cultured using the above propagation material, medium components, and metabolites. Media components preferably include one or more polyphenols as described above.

本発明において「アッカーマンシア・ムシニフィラ」は、哺乳動物（例えばヒト、サル、チンパンジー、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット等）、好ましくはヒトの腸内より単離されたものを用いることができる。アッカーマンシア・ムシニフィラは公知の手法（Ｍｕｒｉｅｌ Ｄｅｒｒｉｅｎら（上掲））に準じて、哺乳動物の糞便、糞便物、又は便を含むサンプルを、ムチンを添加した培地中嫌気条件下での培養し、生育した菌体より単離することができる。 In the present invention, "Akkermansia muciniphila" is isolated from the intestine of mammals (e.g., humans, monkeys, chimpanzees, cows, horses, pigs, sheep, dogs, cats, mice, rats, etc.), preferably humans. can use things. Akkermansia muciniphila is cultured under anaerobic conditions in a medium supplemented with mucin, according to a known method (Muriel Derrien et al., supra), in a sample containing mammalian feces, fecal matter, or stool, It can be isolated from grown cells.

本発明においては、アッカーマンシア・ムシニフィラに分類される任意の菌株、又はその変異株もしくは育種株を利用することができる。本発明において利用可能なアッカーマンシア・ムシニフィラ株としては、ＡＴＣＣ ＢＡＡ－８３５株、ＹＬ４４株、ＪＣＭ ３０８９３株などが挙げられるが、これらに限定はされない。 In the present invention, any strain classified into Akkermansia muciniphila, or a mutant strain or breeding strain thereof can be used. Akkermansia muciniphila strains that can be used in the present invention include, but are not limited to, ATCC BAA-835 strain, YL44 strain, JCM 30893 strain, and the like.

本発明の培養物は、アッカーマンシア・ムシニフィラを上記増殖材を用いて培養することにより得ることができる。増殖材はアッカーマンシア・ムシニフィラを培養するための培地として、又は、基本培地に添加して利用することができる。培地には、１種のポリフェノールにつき、５μｇ／ｍＬ以上、好ましくは１０μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは２０μｇ／ｍＬ以上、さらに好ましくは３０μｇ／ｍＬ以上となる量を含めることができる。上限は、特に限定されないが、例えば、２０００μｇ／ｍＬ以下、好ましくは１５００μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは１０００μｇ／ｍＬ以下、さらに好ましくは５００μｇ／ｍＬ以下とすることができる。培地には、必要に応じてさらに、寒天やゼラチンを添加してもよい。 The culture of the present invention can be obtained by culturing Akkermansia muciniphila using the above propagation material. The propagation material can be used as a medium for culturing Akkermansia muciniphila or by adding it to a basal medium. The medium can contain an amount of 5 μg/mL or more, preferably 10 μg/mL or more, more preferably 20 μg/mL or more, and still more preferably 30 μg/mL or more per polyphenol. The upper limit is not particularly limited, but can be, for example, 2000 μg/mL or less, preferably 1500 μg/mL or less, more preferably 1000 μg/mL or less, and even more preferably 500 μg/mL or less. Agar or gelatin may be added to the medium as necessary.

培養は、ｐＨ５．５～８．０、好ましくはｐＨ６．５、２０℃～４０℃、好ましくは３７℃にて、嫌気条件下で行うことができる。「嫌気条件」とは、アッカーマンシア・ムシニフィラが増殖可能な程度に低酸素環境であればよく、例えば、嫌気チャンバー、嫌気ボックス、脱酸素剤を入れた密閉容器もしくは培養容器等を用いて、嫌気条件とすることができる。 Cultivation can be carried out under anaerobic conditions at pH 5.5-8.0, preferably pH 6.5, at 20°C-40°C, preferably 37°C. "Anaerobic conditions" may be a low-oxygen environment to the extent that Akkermansia muciniphila can proliferate. can be a condition.

培養は、静置培養、振とう培養、タンク培養等の任意の形式で行うことが可能であり、また、培養時間は、特に制限されないが、例えば３時間～７日間とすることができる。培養は、バッチ式行ってもよいし、連続式で行ってもよい。 Cultivation can be performed in any format such as static culture, shaking culture, tank culture, etc. The culture time is not particularly limited, but can be, for example, 3 hours to 7 days. Cultivation may be performed in a batch mode or in a continuous mode.

培養後、得られた培養物をそのまま本発明の培養物として使用してもよいし、あるいは培養物よりアッカーマンシア・ムシニフィラを濃縮又は粗精製したものを本発明の培養物として使用してもよい。培養物からの菌体の濃縮又は粗精製は任意の手段を用いて行うことができ、例えば、遠心分離や濾過等を用いて行うことができる。 After culturing, the obtained culture may be used as it is as the culture of the present invention, or Akkermansia muciniphila may be concentrated or crudely purified from the culture and used as the culture of the present invention. . Concentration or crude purification of the cells from the culture can be performed using any means, for example, centrifugation, filtration, or the like.

培養物は、低温殺菌に付してもよい。培養物の低温殺菌は、６０℃～８０℃、好ましくは７０℃の温度にて、３０分間程度加熱することにより行うことができる。 The culture may be subjected to pasteurization. Pasteurization of the culture can be performed by heating at a temperature of 60° C. to 80° C., preferably 70° C. for about 30 minutes.

上記培養法によれば、増殖材により、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を支援し、アッカーマンシア・ムシニフィラの絶対数を増加させることができ、アッカーマンシア・ムシニフィラの培養物を効率的に製造することができる。 According to the culture method, the growth material supports the growth of Akkermansia muciniphila, increases the absolute number of Akkermansia muciniphila, and efficiently produces a culture of Akkermansia muciniphila. can.

本発明の培養物は、医薬や飲食品の製造において通常用いられている、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等の添加剤を含めることができ、企図される投与経路や摂取方法に適した剤型又は形態を有する医薬や飲食品として製造、提供することができる。賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等の添加剤は上述のものを利用することができ、上述の剤型又は形態を有する飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物を得ることができる。 The culture of the present invention can contain additives such as excipients, lubricants, binders, and disintegrants that are commonly used in the manufacture of pharmaceuticals and food and drink, and can be used for the intended route of administration and ingestion. It can be produced and provided as a medicine or food or drink having a dosage form or form suitable for the method. Additives such as excipients, lubricants, binders, disintegrants, etc., can be used as described above, and it is possible to obtain food and drink, pharmaceuticals, feeds, or feed additives having the dosage form or form described above. can.

本発明の培養物は飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物として、哺乳動物（例えばヒト、サル、チンパンジー、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット等）、好ましくはヒトに投与又は摂取させることができ、投与又は摂取された哺乳動物の生体内における、アッカーマンシア・ムシニフィラの絶対数を増加させることができる。 The culture of the present invention is applied to mammals (e.g., humans, monkeys, chimpanzees, cows, horses, pigs, sheep, dogs, cats, mice, rats, etc.), preferably humans, as food, drink, pharmaceuticals, feeds, or feed additives. It can be administered or ingested, and can increase the absolute number of Akkermansia muciniphila in vivo in a mammal to which it is administered or ingested.

本発明の培養物の投与量又は摂取量は、対象の年齢及び体重、投与経路、投与・摂取回数等の要因に応じて変化し得、任意の投与量又は摂取量を採用し得る。例えば、経口的に投与又は摂取する場合には、アッカーマンシア・ムシニフィラの菌体の数にして、１日当たり１×１０５個／ｋｇ～１×１０１５個／ｋｇ、好ましくは１日当たり１×１０６個／ｋｇ～１×１０１４個／ｋｇ、より好ましくは１日当たり１×１０８個／ｋｇ～１×１０１３個／ｋｇから選択される量を１回又は複数回（例えば、２～５回、好ましくは２～３回）に分けて投与又は摂取することができる。The dosage or intake of the culture of the present invention may vary depending on factors such as the age and weight of the subject, route of administration, frequency of administration and intake, and any dosage or intake may be adopted. For example, in the case of oral administration or ingestion, the number of cells of Akkermansia muciniphila is 1×10 5 to 1×10 15 /kg per day, preferably 1×10 per day. 6 pieces/kg to 1×10 14 pieces/kg, more preferably 1×10 8 pieces/kg to 1×10 13 pieces/kg per day, once or several times (for example, 2 to 5 (preferably 2 to 3 times) can be administered or taken in divided doses.

本発明の培養物は、微量かつ短期間で効果を奏することができるが、長期間にわたって投与又は摂取することができる。例えば、本発明の培養物を、上記用法用量にしたがい、１週間以上、２週間以上、１か月以上、２か月以上、６ヶ月以上、１年以上、又はそれ以上の期間にわたって継続して投与又は摂取することができる。 The culture of the present invention can be effective in a very small amount and in a short period of time, but can be administered or ingested over a long period of time. For example, the culture of the present invention is continued for a period of 1 week or more, 2 weeks or more, 1 month or more, 2 months or more, 6 months or more, 1 year or more, or more according to the above dosage and administration. It can be administered or ingested.

本発明の培養物は、上記増殖材と一緒に投与又は摂取されてもよい。 The culture of the present invention may be administered or ingested together with the growth material described above.

以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to Examples, but the present invention is not limited to these.

実施例１．ポリフェノール添加によるアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖効果
１．方法
（１）菌株
アッカーマンシア・ムシニフィラ菌株は、Ｍｕｒｉｅｌ Ｄｅｒｒｉｅｎら（上掲）に記載の手法に従って、健常なヒト（成人）の糞便試料より、ムチン添加培地を使用してクローニングを行い、得られた菌株について１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列を決定し、ＧｅｎＢａｎｋに登録されたアッカーマンシア・ムシニフィラの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（ＡＹ２７１２５４）との配列比較に基づいて、アッカーマンシア・ムシニフィラであることが確認された菌株を用いた。Example 1. Akkermansia muciniphila growth effect by addition of polyphenol 1. Method (1) Strains Akkermansia muciniphila strains were obtained by cloning from healthy human (adult) fecal samples using a mucin-added medium according to the procedure described by Muriel Derrien et al. (supra). The strain was determined to be Akkermansia muciniphila by determining the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene and comparing it with the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene of Akkermansia muciniphila registered in GenBank (AY271254). strain was used.

（２）培地の調製
アッカーマンシア・ムシニフィラの培養培地（本培地）は、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２３，１０７－１１３，２０１７に記載の合成培地に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で様々な濃度に希釈した各ポリフェノールを、培地全体の１質量％となる量にて添加した。(2) Preparation of medium The culture medium (main medium) of Akkermansia muciniphila is a synthetic medium described in Nature Medicine 23, 107-113, 2017, and each polyphenol diluted to various concentrations with dimethyl sulfoxide (DMSO). , was added in an amount of 1% by mass of the entire medium.

前記合成培地は公知の手法に準じて、１Ｌあたり、０．４ｇ ＫＨ２ＰＯ４、０．５３ｇ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．３ｇ ＮＨ４Ｃｌ、０．３ｇ ＮａＣｌ、０．１ｇ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１１ｇ ＣａＣｌ２、１ｍｌ アルカリ性微量元素溶液（アルカリ性微量元素溶液は以下の組成を有する：０．１ｍＭ Ｎａ２ＳｅＯ３、０．１ｍＭ Ｎａ２ＷＯ４、０．１ｍＭ Ｎａ２ＭｏＯ４、及び１０ｍＭ ＮａＯＨ）、１ｍｌ 酸性微量元素溶液（酸性微量元素溶液は以下の組成を有する：７．５ｍＭ ＦｅＣｌ２、１ｍＭ Ｈ３Ｂ０４、０．５ｍＭ ＺｎＣｌ２、０．１ｍＭ ＣｕＣｌ２、０．５ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．５ｍＭ ＣｏＣｌ２、０．１ｍＭ ＮｉＣｌ２、及び５０ｍＭ ＨＣｌ）、１ｍｌ ビタミン溶液（ビタミン溶液は以下の組成を有する：０．０２ｇ／Ｌ ビオチン、０．２ｇ／Ｌ ナイアシン、０．５ｇ／Ｌ ピリドキシン、０．１ｇ／Ｌ リボフラビン、０．２ｇ／Ｌ チアミン、０．１ｇ／Ｌ シアノコバラミン、０．１ｇ／Ｌ ｐ－アミノ安息香酸、及び０．１ｇ／Ｌ パントテン酸）、０．５ｍｇ レザズリン、４ｇ ＮａＨＣＯ３、０．２５ｇ Ｎａ２Ｓ・７－９Ｈ２Ｏを含む滅菌した基礎培地に、０．７％（ｖ／ｖ）の滅菌精製ルーメン液を添加し、さらに、１６ｇ／Ｌ大豆ペプトン、４ｇ／Ｌトレオニン、ならびにグルコース及びＮ－アセチルグルコサミンの混合物（それぞれ２５ｍＭ）を添加して調製した。The synthetic medium contains 0.4 g KH 2 PO 4 , 0.53 g Na 2 HPO 4 , 0.3 g NH 4 Cl, 0.3 g NaCl, 0.1 g MgCl 2 6H 2 per 1 L according to a known method. O, 0.11 g CaCl 2 , 1 ml alkaline trace element solution (alkaline trace element solution has the following composition: 0.1 mM Na 2 SeO 3 , 0.1 mM Na 2 WO 4 , 0.1 mM Na 2 MoO 4 , and 10 mM NaOH), 1 ml acidic trace element solution (the acidic trace element solution has the following composition: 7.5 mM FeCl2 , 1 mM H3B04 , 0.5 mM ZnCl2 , 0.1 mM CuCl2 , 0.5 mM MnCl2 , 0.5 mM CoCl 2 , 0.1 mM NiCl 2 and 50 mM HCl), 1 ml vitamin solution (vitamin solution has the following composition: 0.02 g/L biotin, 0.2 g/L niacin, 0.5 g/L pyridoxine, 0.1 g/L riboflavin, 0.2 g/L thiamine, 0.1 g/L cyanocobalamin, 0.1 g/L p-aminobenzoic acid, and 0.1 g/L pantothenic acid), 0.5 mg resazurin, 4 g NaHCO 3 , 0.25 g Na2S.7-9H 2 O, sterile basal medium, supplemented with 0.7% (v/v) sterile purified ruminal fluid, 16 g/L soy peptone, 4 g/L It was prepared by adding threonine and a mixture of glucose and N-acetylglucosamine (25 mM each).

このようにして、ケルセチン配糖体、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、タンニン酸のいずれかを、３１．２５μｇ／ｍＬ、６２．５μｇ／ｍＬ、１２５μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ、又は５００μｇ／ｍＬの量で含む培地を調製し、以下の本培養に用いた。 In this way, any of quercetin glycosides, isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, tannic acid was added at 31.25 μg/mL, 62.5 μg/mL, 125 μg/mL, A medium containing 250 μg/mL or 500 μg/mL was prepared and used for the following main culture.

ケルセチン配糖体としては、ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、ペルタトシドを用いた。 As quercetin glycosides, quercetin 3-D-galactoside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin and pertatoside were used.

コントロール培地は、公知の合成培地にポリフェノールを含まない同量のＤＭＳＯを添加して調製した。 A control medium was prepared by adding the same amount of polyphenol-free DMSO to a known synthetic medium.

（３）培養
菌株を、０．４％（ｖ／ｖ）のムチンを添加したＧＡＭ培地（Ｇｉｆｕ Ａｎａｅｒｏｂｉｃ Ｍｅｄｉｕｍ）に播種して、嫌気条件下、３７℃で２４時間、前培養した。(3) Cultivation The strain was inoculated in GAM medium (Gifu Anaerobic Medium) supplemented with 0.4% (v/v) mucin and precultured at 37° C. for 24 hours under anaerobic conditions.

前培養終了後、前培養液（１０μＬ）を、上記本培地（２００μＬ）に添加して、嫌気条件下、３７℃で９０時間、本培養した。 After completion of the pre-culture, the pre-culture solution (10 μL) was added to the main medium (200 μL), and main culture was carried out at 37° C. for 90 hours under anaerobic conditions.

対照は、本培地に代えてコントロール培地を用いて同様に培養した。 Controls were similarly cultured using a control medium instead of the main medium.

（４）増殖比率の測定
本培養終了後、本培養液より菌体を回収し、腸内細菌学雑誌 ２０：２４５－２５８，２００６に記載の手法に従ってガラスビーズ法により、菌体よりＤＮＡを抽出した。(4) Measurement of growth ratio After completion of the main culture, the cells are collected from the main culture medium, and DNA is extracted from the cells by the glass bead method according to the method described in Journal of Enterobacteriology 20: 245-258, 2006. did.

次いで、得られたＤＮＡを鋳型にして、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００７ ｖｏｌ．７３ ｎｏ．２３ ７７６７－７７７０に記載の手法に従って、アッカーマンシア・ムシニフィラの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の配列に基づいて作製されたプライマーセットを用いて定量的ＰＣＲを行い、回収された菌体のＤＮＡ量を測定した。 Then, using the obtained DNA as a template, Appl. Environ. Microbiol. December 2007 vol. 73 no. 23 7767-7770, quantitative PCR was performed using a primer set prepared based on the sequence of the 16S rRNA gene of Akkermansia muciniphila, and the DNA content of the recovered cells was measured.

対照についても、同様に、菌体よりＤＮＡを抽出し、回収された菌体のＤＮＡ量（対照ＤＮＡ量）を測定した。 As for the control, DNA was similarly extracted from the cells, and the amount of DNA in the collected cells (control DNA amount) was measured.

得られたＤＮＡ量を、対照ＤＮＡ量を１００％とする相対値で示し（ｎ＝４）、各培地におけるアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を評価した。 The amount of DNA obtained was shown as a relative value with the amount of control DNA as 100% (n=4), and the growth of Akkermansia muciniphila in each medium was evaluated.

２．結果
添加したポリフェノールの種類及び量に関し、対照を超えるアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖が認められたものを、図１－１、図１－２に示す。2. Results Figures 1-1 and 1-2 show the growth of Akkermansia muciniphila exceeding that of the control with respect to the types and amounts of added polyphenols.

ケルセチン配糖体は、いずれの化合物についても、培地への添加により、対照を超えるアッカーマンシア・ムシニフィラのＤＮＡ量の増大が認められた（図１－１）。この結果は、ケルセチン配糖体はその化合物の種類を問わず、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を促すことが可能であることを示唆する。 All of the quercetin glycosides were found to increase the amount of Akkermansia muciniphila DNA over the control when added to the medium (Fig. 1-1). This result suggests that any quercetin glycoside can promote the growth of Akkermansia muciniphila regardless of the type of compound.

また、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、又はタンニン酸の培地への添加によっても、対照を超えるアッカーマンシア・ムシニフィラのＤＮＡ量の増大が認められ（図１－２）、各ポリフェノールの添加によりアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖が促されたことが確認された。 In addition, addition of isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, or tannic acid to the medium also increased the amount of Akkermansia muciniphila DNA over the control (Fig. 1-2). ), it was confirmed that the addition of each polyphenol promoted the growth of Akkermansia muciniphila.

特に、ケルセチン３－О－グルコピラノシド（３１．２５μｇ／ｍＬ、１２５μｇ／ｍＬ）、ルチン（６２．５μｇ／ｍＬ）、シアニジングルコシド（６２．５μｇ／ｍＬ、１２５μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ）、ヘスペリジン（３１．２５μｇ／ｍＬ、６２．５μｇ／ｍＬ、１２５μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ）、アピゲニン（３１．２５μｇ／ｍＬ、６２．５μｇ／ｍＬ）、タンニン酸（３１．２５μｇ／ｍＬ）において、良好な増殖が認められた（カッコ内の数値は、培地における含有量を示す）。 In particular, quercetin 3-O-glucopyranoside (31.25 μg/mL, 125 μg/mL), rutin (62.5 μg/mL), cyanidin glucoside (62.5 μg/mL, 125 μg/mL, 250 μg/mL), hesperidin (31 .25 μg/mL, 62.5 μg/mL, 125 μg/mL, 250 μg/mL), apigenin (31.25 μg/mL, 62.5 μg/mL), tannic acid (31.25 μg/mL). (Numbers in parenthesis indicate the content in the medium).

以上の結果より、ケルセチン配糖体、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、又はタンニン酸により、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を支援し、アッカーマンシア・ムシニフィラの絶対数を増加させることが可能であることが確認された。 Based on the above results, quercetin glycosides, isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, or tannic acid support the growth of Akkermansia muciniphila and reduce the absolute number of Akkermansia muciniphila. It was confirmed that it is possible to increase

実施例２．アッカーマンシア・ムシニフィラ増殖効果の検討
マウスに高脂肪食を与えて、ルチン及びヘスペリジンを８週間投与した際のアッカーマンシア・ムシニフィラ増殖効果を検証した。Example 2. Examination of Akkermansia muciniphila Proliferative Effect A high-fat diet was given to mice, and the Akkermansia muciniphila proliferative effect was examined when rutin and hesperidin were administered for 8 weeks.

１．方法
（１）使用動物
９週齢マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）３０匹に対し、高脂肪食飼料Ｄ１２４９２（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ）を摂取させた。それぞれ、水投与群（対照）、ルチン投与群、ヘスペリジン投与群に群分けし（１群１０匹）、ルチン投与群、ヘスペリジン投与群では、６００ｍｇ／ｋｇとなる量を水に懸濁し、毎日経口投与した。この経口投与は、投与開始から８週間行った。1. Method (1) Animals used Thirty 9-week-old mice (C57BL/6J) were fed high-fat diet D12492 (Research Diets, Inc.). Each group was divided into a water-administered group (control), a rutin-administered group, and a hesperidin-administered group (10 animals per group). dosed. This oral administration was continued for 8 weeks from the start of administration.

（２）被験物質
ルチンは、αＧルチンＰＳ（東洋製糖）を使用した。ヘスペリジンは、αＧヘスペリジンＰＡ（東洋製糖）を使用した。(2) Test Substance αG Rutin PS (Toyo Sugar Co., Ltd.) was used as rutin. As hesperidin, αG hesperidin PA (Toyo Sugar Co., Ltd.) was used.

（３）ＤＮＡの抽出
経口投与から８週間後の糞便を採取し、糞便およそ１００ｍｇから、腸内細菌学雑誌 ２０：２４５－２５８，２００６に記載の手法に従ってガラスビーズ法により、ＤＮＡを抽出した。(3) Extraction of DNA Eight weeks after oral administration, feces were collected, and DNA was extracted from about 100 mg of feces by the glass bead method according to the method described in Journal of Enterobacteriology 20:245-258, 2006.

（４）アッカーマンシア・ムシニフィラの定量
得られたＤＮＡを鋳型にして、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００７ ｖｏｌ．７３ ｎｏ．２３ ７７６７－７７７０に記載の手法に従って、アッカーマンシア・ムシニフィラの１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の配列に基づいて作製されたプライマーセットを用いて定量的ＰＣＲを行い、回収された糞便中の菌体のＤＮＡ量を測定した。(4) Determination of Akkermansia muciniphila
Using the obtained DNA as a template, Appl. Environ. Microbiol. December 2007 vol. 73 no. 23 7767-7770, quantitative PCR is performed using a primer set prepared based on the sequence of the 16S rRNA gene of Akkermansia muciniphila, and the amount of DNA in the collected feces is measured. did.

２．結果
８週間経口投与を行ったマウスから採取した糞便中のアッカーマンシア・ムシニフィラのＤＮＡ定量値を図２に示す。
ルチン投与群、ヘスペリジン投与群においては、対照群と比べて、アッカーマンシア・ムシニフィラのＤＮＡ量が増大していることが確認された。2. Results FIG. 2 shows the DNA quantification values of Akkermansia muciniphila in the feces collected from mice orally administered for 8 weeks.
It was confirmed that the amount of Akkermansia muciniphila DNA increased in the rutin-administered group and the hesperidin-administered group compared to the control group.

以上の結果より、ルチンやヘスペリジンを経口摂取することにより、生体内のアッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を支援することが可能であり、生体内のアッカーマンシア・ムシニフィラの絶対数を増加させることが可能であることが確認された。 From the above results, it is possible to support the proliferation of Akkermansia muciniphila in the body and increase the absolute number of Akkermansia muciniphila in the body by taking rutin or hesperidin orally. One thing has been confirmed.

本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２０１７－２１５５５８号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。This specification includes the contents described in the specification and/or drawings of Japanese Patent Application No. 2017-215558, which is the basis of priority of this application.
All publications, patents and patent applications cited herein are hereby incorporated by reference in their entirety.

Claims (8)

ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、ペルタトシド、イソラムネチン、シアニジングルコシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、及びタンニン酸からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含む、アッカーマンシア・ムシニフィラの増殖を促すために利用される増殖材。 selected from the group consisting of quercetin 3-D-galacside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, pertatoside, isorhamnetin, cyanidin glucoside, hesperetin, hesperidin, apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, and tannic acid; A propagation material utilized to promote the growth of Akkermansia muciniphila, comprising one or more polyphenols. ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、シアニジングルコシド、ヘスペリジン、アピゲニン、又はタンニン酸を含む、請求項１に記載の増殖材。 2. The propagation material of claim 1, comprising quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin, cyanidin glucoside, hesperidin, apigenin, or tannic acid. 飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物である、請求項１又は２に記載の増殖材。 3. The propagation material according to claim 1 or 2, which is a food or drink, a medicine, a feed, or a feed additive. ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、ペルタトシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、及びタンニン酸からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含む増殖材とアッカーマンシア・ムシニフィラを含む、培養物。 one or more selected from the group consisting of quercetin 3-D-galacside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, pertatoside , hesperetin, hesperidin , apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, and tannic acid A culture comprising propagating material containing polyphenols and Akkermansia muciniphila. 増殖材がケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、ヘスペリジン、アピゲニン、又はタンニン酸を含む、請求項４に記載の培養物。 5. The culture of claim 4, wherein the propagation material comprises quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin , hesperidin , apigenin, or tannic acid. 飲食品、医薬又は飼料もしくは飼料添加物である、請求項４又は５に記載の培養物。 6. The culture according to claim 4 or 5, which is a food or drink, a medicine, a feed or a feed additive. アッカーマンシア・ムシニフィラを、ケルセチン３－Ｄ－ガラクシド、ケルセチン３－О－グルコピラノシド、ケルセチン３，４ジグルコシド、ルチン、ペルタトシド、ヘスペレチン、ヘスペリジン、アピゲニン、クリシン、タンゲレチン、ノビレチン、及びタンニン酸からなる群から選択される一以上のポリフェノールを含む増殖材を用いて培養することを含む、アッカーマンシア・ムシニフィラ及び／又はその培養物の製造方法。 Akkermansia muciniphila from the group consisting of quercetin 3-D-galacside, quercetin 3-O-glucopyranoside, quercetin 3,4 diglucoside, rutin, pertatoside, hesperetin, hesperidin , apigenin, chrysin, tangeretin, nobiletin, and tannic acid A method for producing Akkermansia muciniphila and/or a culture thereof, comprising culturing using a propagation material containing one or more selected polyphenols. 増殖材がケルセチン３－О－グルコピラノシド、ルチン、ヘスペリジン、アピゲニン、又はタンニン酸を含む、請求項７に記載の製造方法。 8. The production method according to claim 7, wherein the propagation material comprises quercetin 3-O-glucopyranoside, rutin , hesperidin , apigenin, or tannic acid.
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