JP7148913B2 - Method for producing triterpenoid-rich seed extract and triterpenoid-rich seed extract - Google Patents
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Description
本発明は、シークヮーサーなどの柑橘類の種子を用いたトリテルペノイド高含有種子抽出物の製造方法及びトリテルペノイド高含有種子抽出物に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing a triterpenoid-rich seed extract using citrus seeds such as shikuwasa, and to a triterpenoid-rich seed extract.
柑橘類が生合成するトリテルペノイドとして、リモニン、ノミリン、イーチャンギン、オバクノンなどのリモノイドが知られている。リモノイドは一般的には苦味を呈することから、リモノイドが多く含まれる部分、例えば、果皮や種子などは、柑橘類を加工する際に除かれる。 As triterpenoids biosynthesized by citrus, limonoids such as limonin, nomirin, echangin and obakunon are known. Since limonoids generally have a bitter taste, parts rich in limonoids, such as peels and seeds, are removed when citrus fruits are processed.
一方で、リモノイドの中には、抗腫瘍作用、解毒代謝酵素の活性作用、麻酔時の睡眠時間短縮作用、鎮痛作用、血清脂質代謝改善作用などの生理活性を有するものがある(特許文献1を参照)。 On the other hand, some limonoids have physiological activities such as antitumor action, activity of detoxifying enzymes, shortening of sleep time during anesthesia, analgesic action, and improvement of serum lipid metabolism (see Patent Document 1). reference).
リモノイドのうち、オバクノンの製造方法については、特許文献2において知られている。
Among the limonoids, a method for producing obacunone is known in
特許文献2に記載の方法によれば、ノミリンをアセトニトリルに溶解し、次いで得られた溶液を、アルカリ処理に供することにより、オバクノンが得られる。しかし、特許文献2には、柑橘類の種子からノミリンを単離する方法については、詳細な開示がない。
According to the method described in
また、例えば、柑橘類の果皮に含まれるリモノイドの総量は0.01wt%程度であり、非常に微量である。このような微量のリモノイドを、工業的規模で効率良く得る方法は、ほとんど知られていない。 Also, for example, the total amount of limonoids contained in citrus peels is about 0.01 wt %, which is a very small amount. Little is known of a method for efficiently obtaining such a trace amount of limonoid on an industrial scale.
そこで、本発明は、工業的規模での実施が可能であるように、簡便かつ経済的な、リモノイドなどのトリテルペノイドを高濃度で含有するトリテルペノイド含有抽出物を製造する方法を提供することを、発明が解決しようとする課題とする。 Therefore, the present invention provides a simple and economical method for producing a triterpenoid-containing extract containing a high concentration of triterpenoids such as limonoids so that it can be implemented on an industrial scale. is the problem to be solved.
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、柑橘類の種子を抽出処理に供することにより得た種子粗抽出液を、加水処理に供し、次いで酸処理及び加塩処理に供することにより、ノミリンやリモニンなどのトリテルペノイドの含有量が大きい種子抽出物が得られることを見出した。さらに得られた種子抽出物を、該種子抽出物の水分含量に応じた処理に供することにより、ノミリン及びリモニンのいずれか一方の含有量が大きく、かつ、これらの量が全体の60wt%以上を占めるトリテルペノイド高含有物を製造することに成功した。本発明はこのような知見や成功例に基づいて完成された発明である。 As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that a crude seed extract obtained by subjecting citrus seeds to extraction treatment is subjected to hydration treatment, and then to acid treatment and salting treatment. produced a seed extract with a high content of triterpenoids such as nomilin and limonin. Furthermore, by subjecting the obtained seed extract to a treatment according to the water content of the seed extract, the content of either nomirin or limonin is large, and these amounts account for 60 wt% or more of the total We succeeded in producing triterpenoid-rich content. The present invention is an invention completed based on such knowledge and successful examples.
したがって、本発明の一態様によれば、以下の[1]~[8]に示す方法が提供される。
[1]以下の工程(1)~(3)を含む、トリテルペノイド含有種子抽出物の製造方法。
(1)柑橘類の種子を、トリテルペノイド可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、種子粗抽出液を得る工程
(2)前記種子粗抽出液を、加水処理及び濃縮処理に供することにより、種子粗抽出物を得る工程
(3)前記種子粗抽出物を、酸処理及び加塩処理に供することにより、第1の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
[2]さらに下記の工程(4)及び(5)を含む、[1]に記載の方法。
(4)前記第1の沈殿物を、乾燥処理及び洗浄処理に供することにより、第2の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第2の上清を得る工程
(5)前記第2の上清を、静置処理に供することにより、第3の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
[3]さらに下記の工程(6)及び(7)を含む、[1]に記載の方法。
(6)前記第1の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第4の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第4の上清を得る工程
(7)前記第4の上清を、乾燥処理、溶媒添加処理及び静置処理に供することにより、第5の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第5の上清を得る工程
[4]さらに下記の工程(8)を含む、[3]に記載の方法。
(8)前記第5の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第6の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
[5]前記柑橘類は、シークヮーサー(Citrus depressa)、ウンシュウミカン(C.unshiu)、タチバナ(C.tachibana)、コウジ(C.leiocarpa)、ギリミカン(C.tardiva)、ジミカン(C.succosa)、キシュウ(C.kinokuni)、コベニミカン(C.erythrosa)、スンキ(C.sunki)、チチュウカイマンダリン(C.deliciosa)、キング(C.nobilis)、ポンカン(C.retuculata)、ダンシータンジェリン(C.tangerina)、ハナユ(C.hanayu)、マンダリンオレンジ(C.reticulata)、サンキ(C.sunki)、コウライタチバナ(C.nippokoreana)、シラヌヒ及び清見からなる群から選ばれる少なくとも1種の柑橘類である、[1]~[4]のいずれか1項に記載の方法。
[6]前記トリテルペノイドは、リモノイドである、[1]~[5]のいずれか1項に記載の方法。
[7]前記リモノイドは、リモニン、ノミリン、ノミリン酸、デアセチルノミリン、イーチャンギン及びオバクノンからなる群から選ばれる少なくとも1種のリモノイドである、[6]に記載の方法。
[8]前記第2の沈殿物は、ノミリンの含有量に対して、リモニンの含有量が大きいトリテルペノイド含有種子抽出物である、[1]~[2]及び[5]~[7]のいずれか1項に記載の方法。
[9]前記第4の沈殿物、前記第5の沈殿物又は前記第6の沈殿物は、リモニンの含有量に対して、ノミリンの含有量が大きいトリテルペノイド含有種子抽出物である、[1]及び[3]~[7]のいずれか1項に記載の方法。
Therefore, according to one aspect of the present invention, the following methods [1] to [8] are provided.
[1] A method for producing a triterpenoid-containing seed extract, comprising the following steps (1) to (3).
(1) A step of subjecting citrus seeds to an extraction treatment using a triterpenoid-soluble solvent to obtain a seed crude extract (2) A step of subjecting the seed crude extract to a hydration treatment and a concentration treatment to obtain a seed crude extract a step of obtaining an extract (3) a step of subjecting the crude seed extract to an acid treatment and a salting treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a first precipitate [2] and further the following steps (4) and The method according to [1], including (5).
(4) subjecting the first precipitate to a drying treatment and a washing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract and a second supernatant as a second precipitate; (5) the second supernatant; is subjected to a standing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a third precipitate [3], further comprising the following steps (6) and (7).
(6) subjecting the first precipitate to a washing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract and a fourth supernatant as a fourth precipitate; (7) drying the fourth supernatant; A step of obtaining a triterpenoid-containing seed extract and a fifth supernatant as a fifth precipitate by subjecting to treatment, solvent addition treatment and standing treatment [4] further comprising the following step (8) [3] The method described in .
(8) A step of subjecting the fifth precipitate to a washing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as the sixth precipitate [5] The citrus fruits include Citrus depressa , Unshu mandarin orange ( C. unshiu ), C. tachibana, C. leiocarpa, C. tardiva , C. succosa , C. kinokuni , C. erythrosa , C. sunki ), Mediterranean mandarin ( C.deliciosa ), King ( C.nobilis ), Ponkan ( C.retuculata ), Dancy tangerine ( C.tangerina ), Hanayu ( C.hanayu ), Mandarin orange ( C.reticulata ), Sanki ( The method according to any one of [1] to [4], wherein the citrus is at least one selected from the group consisting of C. sunki, C. nippokoreana , Shiranuhi and Kiyomi.
[6] The method according to any one of [1] to [5], wherein the triterpenoid is a limonoid.
[7] The method according to [6], wherein the limonoid is at least one limonoid selected from the group consisting of limonin, nomirin, nomilic acid, deacetylnomirin, echangin and obakunon.
[8] Any of [1] to [2] and [5] to [7], wherein the second precipitate is a triterpenoid-containing seed extract having a higher limonin content than nomilin content or the method according to
[9] The fourth precipitate, the fifth precipitate, or the sixth precipitate is a triterpenoid-containing seed extract having a high nomirin content relative to the limonin content, [1] And the method according to any one of [3] to [7].
本発明の別の一態様によれば、以下の[10]~[11]に示す抽出物が提供される。
[10]原料が柑橘類の種子であり、かつ、1~90wt%のトリテルペノイドを含有する、トリテルペノイド含有種子抽出物。
[11][1]~[9]のいずれか1項に記載の方法によって得られる、1~90wt%のトリテルペノイドを含有する、トリテルペノイド含有種子抽出物。
According to another aspect of the present invention, extracts shown in [10] to [11] below are provided.
[10] A triterpenoid-containing seed extract containing 1 to 90 wt% of triterpenoids, wherein the starting material is citrus seeds.
[11] A triterpenoid-containing seed extract containing 1 to 90 wt% of triterpenoids, obtained by the method according to any one of [1] to [9].
本発明の一態様の方法によれば、複雑な設備や装置などがなくとも、柑橘類の種子から簡便な工程によって、夾雑物の量を低減して、トリテルペノイドの含有量を著しく高めた、トリテルペノイド高含有物を得ることができる。したがって、本発明の一態様の方法は、工業的規模での実施が可能であるように、簡便かつ経済的に、トリテルペノイド高含有物を製造することができる方法である。また、本発明の一態様の方法によれば、所望のとおりに、ノミリン及び/又はリモニンの含有量の大きいトリテルペノイド高含有物を製造することができる。 According to the method of one aspect of the present invention, triterpenoid-rich triterpenoid-rich triterpenoid-rich triterpenoid-rich triterpenoid-rich triterpenoid-rich triterpenoid-rich triterpenoid-rich triterpenoid seeds with reduced amount of contaminants by a simple process without complicated equipment or devices. Inclusions can be obtained. Therefore, the method of one aspect of the present invention is a method by which a triterpenoid-rich material can be produced simply and economically so that it can be implemented on an industrial scale. Moreover, according to the method of one aspect of the present invention, a triterpenoid-rich product having a high nomirin and/or limonin content can be produced as desired.
本発明の一態様のトリテルペノイド含有種子抽出物によれば、トリテルペノイド含有抽出物それ自体又はトリテルペノイド含有種子抽出物から精製して得られる精製トリテルペノイドを有効成分とした、抗腫瘍作用、解毒代謝酵素の活性作用、麻酔時の睡眠時間短縮作用、鎮痛作用、血清脂質代謝改善作用などの生理活性作用を期待した多種多様な飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などを製造することができる。 According to the triterpenoid-containing seed extract of one aspect of the present invention, the triterpenoid-containing extract itself or the purified triterpenoid obtained by purifying the triterpenoid-containing seed extract is used as an active ingredient for antitumor action and detoxification metabolic enzyme activity. It is possible to manufacture a wide variety of food and drink, pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, etc., which are expected to have physiological activities such as action, shortening of sleep time during anesthesia, analgesic action, improvement of serum lipid metabolism.
以下、本発明の一態様である方法及び抽出物の詳細について説明するが、本発明の技術的範囲は本項目の事項によってのみに限定されるものではなく、本発明はその目的を達成する限りにおいて種々の態様をとり得る。 Hereinafter, the details of the method and the extract, which are one aspect of the present invention, will be described. can take various aspects.
本発明の一態様の方法は、柑橘類の種子を、抽出処理、加水処理、酸処理及び加塩処理などに順次供することにより、トリテルペノイドを高含有する種子抽出物を製造する方法に関する。より具体的に、本発明の一態様の方法は、少なくとも以下の工程(1)~(3)を含む。
(1)柑橘類の種子を、トリテルペノイド可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、種子粗抽出液を得る工程
(2)前記種子粗抽出液を、加水処理及び濃縮処理に供することにより、種子粗抽出物を得る工程
(3)前記種子粗抽出物を、酸処理及び加塩処理に供することにより、第1の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
A method of one aspect of the present invention relates to a method for producing a seed extract containing a high amount of triterpenoids by sequentially subjecting citrus seeds to extraction treatment, hydration treatment, acid treatment, salting treatment, and the like. More specifically, the method of one aspect of the present invention includes at least the following steps (1) to (3).
(1) A step of subjecting citrus seeds to an extraction treatment using a triterpenoid-soluble solvent to obtain a seed crude extract (2) A step of subjecting the seed crude extract to a hydration treatment and a concentration treatment to obtain a seed crude extract Step of obtaining an extract (3) A step of subjecting the crude seed extract to an acid treatment and a salting treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a first precipitate.
トリテルペノイド含有種子抽出物は、柑橘類の種子を原料として、トリテルペノイドを比較的高い濃度で含有する。 The triterpenoid-containing seed extract is made from citrus seeds and contains triterpenoids at a relatively high concentration.
トリテルペノイドは、通常知られているとおりのものであれば特に限定されず、例えば、トリテルペノイドとは、5個の炭素からなるイソプレン単位が6個結合して30個の炭素原子から構成される脂溶性の化合物群ということができる。本発明の一態様の方法で得られる抽出物に含まれるトリテルペノイドとしては、ラクトン環及びフラン環の両方を有する環式化合物であるリモノイドが好ましく、リモニン、ノミリン、ノミリン酸、デアセチルノミリン、イーチャンギン及びオバクノンがより好ましく、リモニン及びノミリンがさらに好ましい。 Triterpenoids are not particularly limited as long as they are generally known. For example, triterpenoids are lipid-soluble triterpenoids composed of 30 carbon atoms composed of 6 isoprene units composed of 5 carbons. can be said to be a compound group of The triterpenoid contained in the extract obtained by the method of one embodiment of the present invention is preferably a limonoid, which is a cyclic compound having both a lactone ring and a furan ring, such as limonin, nomirin, nomilic acid, deacetylnomyrin, e-chan Gin and obacunone are more preferred, and limonin and nomirin are even more preferred.
柑橘類は、種子にトリテルペノイドを含有する柑橘類植物であれば特に限定されない。柑橘類としては、例えば、キノット、ジャッファ・オレンジ、ジョッパ、ネーブルオレンジ、バレンシアオレンジ、福原オレンジ、ブラッドオレンジ、ベルガモットなどのオレンジ類;オランジェロ、グレープフルーツなどのグレープフルーツ類;カボス、清岡橙、コブミカン、三宝柑、シークヮーサー、シトロン、スダチ、ダイダイ、新姫、ブッシュカン、ゆうこう、柚柑、ユズ、ライム、レモンなどの香酸柑橘類;カクテルフルーツ、カワノナツダイダイ、黄蜜柑、ジャバラ、湘南ゴールド、スウィーティー、夏ミカン、八朔(ハッサク)、はるか、媛小春、日向夏などの雑柑類;安芸の輝き(デコポン)、伊予柑、愛媛果試第28号、清見、佐賀果試34号(デコポン)、師恩の恵、シラヌヒ(デコポン)、せとか、せとみ、大将季(デコポン)、タンカン、はるみ、肥の豊(デコポン)、マーコット、麗紅などのタンゴール類;アグリフルーツ、サマーフレッシュ、スイートスプリング、セミノール、タンジェロ、ミネオラなどのタンジェロ類;安政柑、河内晩柑、晩白柚、ブンタン(ザボン)などのブンタン類;温州ミカン、大津四号、カラマンシー、甘平、紀州ミカン、コウジ(柑橘類)、桜島ミカン、タチバナ、藤中みかん、ポンカン、マンダリンオレンジなどのミカン類;カラタチなどのカラタチ属;長葉金柑、長実金柑、寧波金柑、福州金柑、香港金柑、丸実金柑などのキンカン属などが挙げられるが、好ましくはミカン科ミカン亜科カンキツ属後生カンキツ亜属ミカン区の柑橘類及びミカン科ミカン亜科カンキツ属初生カンキツ亜族ダイダイ区の柑橘類であり、より好ましくはシークヮーサー(Citrus depressa)、ウンシュウミカン(C.unshiu)、タチバナ(C.tachibana)、コウジ(C.leiocarpa)、ギリミカン(C.tardiva)、ジミカン(C.succosa)、キシュウ(C.kinokuni)、コベニミカン(C.erythrosa)、スンキ(C.sunki)、チチュウカイマンダリン(C.deliciosa)、キング(C.nobilis)、ポンカン(C.retuculata)、ダンシータンジェリン(C.tangerina)、ハナユ(C.hanayu)、マンダリンオレンジ(C.reticulata)、サンキ(C.sunki)、コウライタチバナ(C.nippokoreana)、シラヌヒ及び清見などであり、さらに好ましくはシークヮーサーである。また、これらの柑橘類は1種又は2種以上であればよく、上記具体例として挙げた柑橘類の交配種であってもよい。 Citrus fruits are not particularly limited as long as they are citrus plants containing triterpenoids in their seeds. As citrus fruits, for example, oranges such as Quinot, Jaffa Orange, Joppa, Navel Orange, Valencia Orange, Fukuhara Orange, Blood Orange, Bergamot; Orangelo, Grapefruit such as Grapefruit; Shikuwasa, Citron, Sudachi, Daidai, Niihime, Bushkan, Yukou, Citrus Citrus, Yuzu, Lime, Lemon and other aromatic citrus fruits; Miscellaneous citrus such as Hassaku, Haruka, Hime Koharu, Hyuga Natsu; Tangors such as Shiranuhi (Dekopon), Setoka, Setomi, Daishoki (Dekopon), Tankan, Harumi, Hi-no-Yu (Decopon), Markot, Reiko; Agrifruit, Summer Fresh, Sweet Spring, Seminole, Tangelo, Tangelos such as Minneola; Buntans such as Ansei citrus, Kawachi Bankan, Banpeiyu, and Buntan (pomelo); Satsuma mikan, Otsu 4, Calamansi, Kanpei, Kishu mikan, Koji (citrus fruits), Sakurajima mikan, Tachibana , Fujinaka mandarin oranges, ponkans, mandarin oranges and other mandarin oranges; Preferred are citrus fruits of the family Rutaceae, Citrus subfamily, Citrus genus, Late Citrus subgenus, and citrus fruits of the Rutaceae, Citrus subfamily, Citrus genus, Primary Citrus subtribe, Pomegranate Citrus, more preferably Citrus depressa , Unshu mandarin orange ( C. unshiu ), C. tachibana, C. leiocarpa, C. tardiva , C. succosa , C. kinokuni , C. erythrosa , C. sunki ), Mediterranean mandarin ( C.deliciosa ), King ( C.nobilis ), Ponkan ( C.retuculata ), Dancy tangerine ( C.tangerina ), Hanayu ( C.hanayu ), Mandarin orange ( C.reticulata ), Sanki ( C. sunki ), Korai Tachibana ( C. nippokoreana ), Shiranuhi and Kiyomi, and more preferably Shikwasa. In addition, one or more of these citrus fruits may be used, and hybrids of the citrus fruits mentioned as specific examples above may be used.
柑橘類の種子は、種子のみであっても、種子にフラベド(外果皮)、アルベド(中果皮)、維管束、油胞、果心、じょうのう、果肉(砂じょう)などが付着したものであってもよいが、種子のみであることが好ましい。柑橘類から種子を得る方法は特に限定されず、例えば、公知の機械的な方法や手動による方法などが挙げられる。 Citrus seeds, even if they are only seeds, have flavedo (exocarp), albedo (mesocarp), vascular bundles, oil sacs, fruit core, funnel, pulp (sand) attached to the seed. Although it may be present, it is preferably only seeds. The method for obtaining seeds from citrus fruits is not particularly limited, and examples thereof include known mechanical methods and manual methods.
柑橘類の種子は、収穫直後のものであっても、収穫した後に乾燥処理、粉砕処理、細片化処理及びこれらを組み合わせた処理などの前処理に供したものであってもよい。本発明の一態様の方法に供するまでに時間を要する場合、柑橘類の種子の変質を防ぐために低温貯蔵などの当業者が通常用いる貯蔵手段により貯蔵することが好ましい。 The citrus seeds may be freshly harvested or may be harvested and then subjected to pretreatments such as drying, pulverization, shredding, and combinations thereof. When it takes a long time to apply the method of one aspect of the present invention, it is preferable to store the citrus seeds by a storage means commonly used by those skilled in the art, such as cold storage, in order to prevent deterioration of the citrus seeds.
柑橘類の種子の前処理としては、例えば、乾燥処理と細断化処理又は粉砕処理を組み合わせることにより、柑橘類の種子を乾燥粉末化することができる。この際、乾燥処理及び粉砕処理は同時に行ってもよく、又はいずれを先に行ってもよいが、作業の簡便性から乾燥処理を先に行った後に粉砕処理を行うことが好ましい。 As a pretreatment of citrus seeds, for example, citrus seeds can be dried and pulverized by combining a drying treatment with a shredding treatment or a pulverizing treatment. At this time, the drying treatment and the pulverizing treatment may be carried out simultaneously, or either one may be carried out first, but it is preferable to carry out the pulverizing treatment after the drying treatment in order to simplify the work.
乾燥処理は特に限定されないが、例えば、柑橘類の種子の水分含量が該種子の全体量に対して10質量%(wt%)以下、好ましくは5wt%以下となるように乾燥する処理などが挙げられる。乾燥処理は、例えば、天日で乾燥する方法、乾燥機を用いて熱風乾燥、温風乾燥、高圧蒸気乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥、流動乾燥、電磁波乾燥、凍結乾燥などの当業者に公知の任意の方法により行われ得る。加熱による乾燥は、例えば、30℃~140℃、好ましくは40℃~100℃にて加温により柑橘類の種子やトリテルペノイドが変質しない温度及び時間で行われ得る。 The drying treatment is not particularly limited, but includes, for example, drying such that the moisture content of the citrus seeds is 10% by mass (wt%) or less, preferably 5 wt% or less, relative to the total amount of the seeds. . The drying treatment is, for example, a method of drying in the sun, hot air drying using a dryer, warm air drying, high pressure steam drying, spray drying, reduced pressure drying, fluidized drying, electromagnetic wave drying, freeze drying, etc. known to those skilled in the art. It can be done by any method. Drying by heating can be carried out at, for example, 30° C. to 140° C., preferably 40° C. to 100° C., at a temperature and time at which the citrus seeds and triterpenoids are not degraded by heating.
細断化処理は特に限定されないが、例えば、柑橘類の種子を最大長が5mm以下、好ましくは3mm以下の大きさになるように細断化する処理などが挙げられる。細断化処理は、例えば、ハサミ、包丁及びカッターなどの刃物、フードプロセッサー及びスライサーなどの細断化用の機器や器具などを用いて、当業者が通常使用する任意の方法により、柑橘類の種子を粗みじん切り、みじん切り、スライスなどにする処理が挙げられる。柑橘類の種子の細断物は、その形状については特に限定されず、例えば、立方体状、直方体状、楕円状、円状、不定形状のものなどが挙げられる。 The shredding treatment is not particularly limited, but includes, for example, a treatment of shredding citrus seeds so that the maximum length is 5 mm or less, preferably 3 mm or less. Shredding is performed by any method commonly used by those skilled in the art, for example, using scissors, cutlery such as kitchen knives and cutters, and shredding equipment and instruments such as food processors and slicers. Citrus seeds can be roughly chopped, minced, or sliced. The shape of the shredded citrus seeds is not particularly limited, and examples thereof include cubic, rectangular parallelepiped, elliptical, circular and irregular shapes.
粉砕処理は特に限定されないが、例えば、ミキサー、ジューサー、クラッシャー、ミル、ブレンダー、マスコロイダー、石臼などの粉砕用の機器や器具などを用いて、当業者が通常使用する任意の方法により、柑橘類の種子を粉砕する処理が挙げられる。 The crushing treatment is not particularly limited, but for example, using mixers, juicers, crushers, mills, blenders, masscolloiders, millstones, and other crushing equipment and instruments, any method commonly used by those skilled in the art can be used to crush citrus fruits. A treatment of crushing the seeds can be mentioned.
工程(1)では、柑橘類の種子を、トリテルペノイド可溶性溶媒を用いた抽出処理に供することにより、種子粗抽出液を得る。 In step (1), citrus seeds are subjected to an extraction treatment using a triterpenoid-soluble solvent to obtain a crude seed extract.
トリテルペノイド可溶性溶媒は、トリテルペノイドを溶解することができる溶媒であれば特に限定されず、例えば、リモニンやノミリンに対して溶解性を示す溶媒、具体的にはエタノールや酢酸エチルなどの有機溶媒やこれらの有機溶媒と水との混合溶媒などが挙げられ、好ましくはエタノールと水との混合溶媒である含水エタノールである。トリテルペノイド可溶性溶媒として含水エタノールを用いる場合、例えば、20vol%(=20%(v/v))~100vol%エタノールとすることが好ましい。エタノール濃度が20vol%未満では抽出効率が悪い傾向にある。抽出効率に加えて、安全性及び工業化の観点からすれば、トリテルペノイド可溶性溶媒は、60vol%~80vol%エタノールがより好ましい。 The triterpenoid-soluble solvent is not particularly limited as long as it is a solvent capable of dissolving triterpenoids. A mixed solvent of an organic solvent and water can be used, and hydrous ethanol, which is a mixed solvent of ethanol and water, is preferred. When water-containing ethanol is used as the triterpenoid-soluble solvent, it is preferably 20 vol% (=20% (v/v)) to 100 vol% ethanol, for example. If the ethanol concentration is less than 20 vol %, the extraction efficiency tends to be poor. From the viewpoint of safety and industrialization as well as extraction efficiency, the triterpenoid-soluble solvent is more preferably 60 vol % to 80 vol % ethanol.
抽出処理の条件は、柑橘類の種子中のトリテルペノイドが溶媒に溶解するのに適した条件であれば特に限定されず、柑橘類の種子の状態や使用量、トリテルペノイド可溶性溶媒の種類や使用量に応じて適宜設定できる。抽出処理の条件は、例えば、柑橘類の種子とトリテルペノイド可溶性溶媒とから得られる処理溶液を適宜サンプリングすることにより、該処理溶液中のトリテルペノイドの濃度を確認することにより決定することができる。 The conditions for the extraction treatment are not particularly limited as long as they are conditions suitable for dissolving the triterpenoids in the citrus seeds in the solvent. Can be set as appropriate. Conditions for extraction treatment can be determined, for example, by appropriately sampling a treatment solution obtained from citrus seeds and a triterpenoid-soluble solvent and confirming the concentration of triterpenoids in the treatment solution.
抽出処理の具体的条件としては、柑橘類の種子に対して2質量倍~10質量倍の20vol%~100vol%エタノールを用いて、10℃~40℃、好ましくは室温付近で、数時間~数日間の条件などが挙げられるが、これに限定されない。種子粗抽出液中のトリテルペノイドの含有量は特に限定されないが、例えば、種子粗抽出液を乾燥及び濃縮処理に供した場合の種子粗抽出液の濃縮物に含まれるリモニン及び/又はノミリンの含有量が、該濃縮物の全体量に対して、それぞれ3wt%以上であり、好ましくは4wt%以上であり、より好ましくは5wt%以上である。ただし、種子粗抽出液中のトリテルペノイドは、リモニンの含有量より、ノミリンの含有量が多くなる傾向にある。リモニン及びノミリンの含有量の測定は、後述する実施例に記載の方法によって実施すればよい。 As specific conditions for the extraction treatment, using 20 vol% to 100 vol% ethanol, which is 2 to 10 times the mass of citrus seeds, at 10 ° C. to 40 ° C., preferably around room temperature, for several hours to several days. and the like, but are not limited to these conditions. Although the content of triterpenoids in the crude seed extract is not particularly limited, for example, the content of limonin and/or nomilin contained in the concentrate of the crude seed extract when the crude seed extract is subjected to drying and concentration treatment are each 3 wt % or more, preferably 4 wt % or more, more preferably 5 wt % or more, relative to the total weight of the concentrate. However, triterpenoids in the crude seed extract tend to contain more nomirin than limonin. The content of limonin and nomirin may be measured by the method described in the examples below.
種子粗抽出液は、種子に由来する残渣を含む。そこで、後段の工程(2)の処理効率の観点から、工程(1)によって得た種子粗抽出液を、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段に供して、種子の残渣を取り除いた液体成分として取得することが好ましい。 The crude seed extract contains residues derived from seeds. Therefore, from the viewpoint of treatment efficiency in the latter step (2), the crude seed extract obtained in step (1) is subjected to a commonly known solid-liquid separation means such as centrifugation and filtration to obtain seed residues. is preferably obtained as a liquid component from which the
工程(2)では、工程(1)によって得られた種子粗抽出液を、加水処理及び濃縮処理に供することにより、種子粗抽出物を得る。 In step (2), the crude seed extract obtained in step (1) is subjected to hydration treatment and concentration treatment to obtain a crude seed extract.
加水処理は、種子粗抽出液に水を加えることにより種子粗抽出液におけるトリテルペノイドが水に溶解するような条件で実施する処理であれば特に限定されず、例えば、種子粗抽出液に対して0.01倍~3倍、好ましくは0.1倍~1倍の水と種子粗抽出液とを接触させて、10℃~40℃、好ましくは室温付近で、数分間~数時間~数日間、静置又は撹拌することにより実施できる。 The hydration treatment is not particularly limited as long as it is performed under conditions such that the triterpenoids in the crude seed extract are dissolved in water by adding water to the crude seed extract. .01 to 3 times, preferably 0.1 to 1 times, of water and crude seed extract are brought into contact with each other at 10° C. to 40° C., preferably around room temperature, for several minutes to several hours to several days, It can be carried out by standing or stirring.
濃縮処理は、種子粗抽出液を通常知られる濃縮手段によって、種子粗抽出液における液体成分が揮散して減容化するような条件で実施する処理であれば特に限定されず、例えば、蒸発濃縮、減圧濃縮などの公知の濃縮手段によって、種子粗抽出液における液体成分を揮散させることにより実施できる。濃縮の程度は特に限定されないが、例えば、種子粗抽出物に含まれる液体成分の大部分が水であるようにして、1/2~1/20程度にまで減容化する程度などが挙げられる。 The concentration treatment is not particularly limited as long as the crude seed extract is subjected to a commonly known concentration method under conditions such that the liquid component in the crude seed extract volatilizes and the volume is reduced, for example, evaporative concentration. It can be carried out by volatilizing the liquid component in the crude seed extract by known concentration means such as concentration under reduced pressure. Although the degree of concentration is not particularly limited, for example, the liquid component contained in the crude seed extract is mostly water so that the volume is reduced to about 1/2 to 1/20. .
種子粗抽出液を加水処理及び濃縮処理に供することにより得られる種子粗抽出物は、エマルジョンを呈し、遠心分離によっては分離が困難なものとして得られることが好ましい。 The crude seed extract obtained by subjecting the crude seed extract to hydration treatment and concentration treatment preferably exhibits an emulsion and is difficult to separate by centrifugation.
工程(3)では、工程(2)によって得られた種子粗抽出物を、酸処理及び加塩処理に供することにより、第1の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る。 In step (3), the crude seed extract obtained in step (2) is subjected to acid treatment and salting treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a first precipitate.
酸処理は、種子粗抽出物を酸性にする条件で実施する処理であれば特に限定されず、例えば、種子粗抽出物を酸性付近、好ましくはpHを1~3付近にし得る酸を用いて実施し得る。使用する酸は、通常酸処理に用いられる酸であれば特に限定されず、例えば、塩酸、酢酸、ギ酸、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、硫酸、リン酸、柑橘類の果汁及びその抽出物などの無機酸及び有機酸などが挙げられるが、好ましくは塩酸である。酸は、水などのトリテルペノイド不溶性溶媒との混合物であってもよい。 The acid treatment is not particularly limited as long as the treatment is carried out under conditions that make the crude seed extract acidic. can. The acid to be used is not particularly limited as long as it is an acid that is usually used for acid treatment. Examples include inorganic acids and organic acids, and hydrochloric acid is preferred. The acid may be a mixture with a triterpenoid-insoluble solvent such as water.
加塩処理は、種子粗抽出物と塩とを混合する条件で実施する処理であれば特に限定されず、例えば、酸性にした種子粗抽出物に、塩を加えて軽く混ぜることにより、実施し得る。塩の添加は、一度に全量の塩を加えることによって実施してもよく、少量の塩を数回に分けて加えることによって実施してもよい。使用する塩は、通常加塩処理に用いられる塩であれば特に限定されず、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などの無機塩及び有機塩などが挙げられるが、好ましくは塩化ナトリウムである。 The salting treatment is not particularly limited as long as it is a treatment performed under conditions where the crude seed extract and salt are mixed. For example, it can be performed by adding salt to the acidified crude seed extract and lightly mixing. . The addition of salt may be carried out by adding the whole amount of salt at once, or may be carried out by adding small amounts of salt in portions. The salt to be used is not particularly limited as long as it is a salt that is commonly used for salting treatment, and examples thereof include inorganic salts such as sodium salts, potassium salts, calcium salts, and organic salts, with sodium chloride being preferred.
塩の使用量は、酸性にした種子粗抽出物からトリテルペノイドが析出する程度の量であれば特に限定されず、例えば、塩化ナトリウムを使用する場合は、種子粗抽出物に対して0.1mg/ml~10mg/mlになるような量を使用することができる。なお、塩は、1度に、又は数回に分けて使用することができる。 The amount of salt used is not particularly limited as long as it is an amount that allows triterpenoids to precipitate from the acidified crude seed extract. For example, when sodium chloride is used, it is 0.1 mg / Amounts from ml to 10 mg/ml can be used. In addition, the salt can be used once or divided into several times.
酸処理及び加塩処理の条件としては、種子粗抽出物をこれらの処理に供することによりトリテルペノイドが析出する限り、その他の条件は特に限定されない。酸処理及び加塩処理は、酸処理をした後に加塩処理をしてもよく、酸処理と加塩処理とを同時的に実施してもよい。種子粗抽出物は、酸処理及び加塩処理に供した後、数秒~数分~数時間、静置することが好ましい。 Other conditions for the acid treatment and salting treatment are not particularly limited as long as triterpenoids are precipitated by subjecting the seed crude extract to these treatments. The acid treatment and the salting treatment may be performed after the acid treatment, or the acid treatment and the salting treatment may be performed simultaneously. The crude seed extract is preferably allowed to stand for several seconds to several minutes to several hours after being subjected to acid treatment and salting treatment.
種子粗抽出物を酸処理及び加塩処理に供することにより、第1の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得ることができる。第1の沈殿物を、液体成分から分離したければ、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段を利用すればよい。固液分離手段後の第1の沈殿物は、通常、水を含んだ湿潤状態にある。また、固液分離手段によって、第1の沈殿物と分離された液体成分は、本明細書では第1の上清とよぶ。第1の上清は、ノミリン及びリモニンの含有量が検出下限未満であることが好ましい。 By subjecting the crude seed extract to acid treatment and salting treatment, a triterpenoid-containing seed extract can be obtained as the first precipitate. If it is desired to separate the first precipitate from the liquid component, generally known solid-liquid separation means such as centrifugation and filtration may be used. The first precipitate after the solid-liquid separation means is usually in a wet state containing water. Also, the liquid component separated from the first precipitate by the solid-liquid separation means is herein referred to as the first supernatant. The first supernatant preferably contains nomilin and limonin below the lower limit of detection.
本発明の一態様の方法の具体的な方法である、本発明の第1の態様の方法は、工程(1)~(3)に加えて、さらに下記の工程(4)及び(5)を少なくとも含む。
(4)前記第1の沈殿物を、乾燥処理及び洗浄処理に供することにより、第2の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第2の上清を得る工程
(5)前記第2の上清を、静置処理に供することにより、第3の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
The method of the first aspect of the present invention, which is a specific method of the method of one aspect of the present invention, further includes steps (4) and (5) below in addition to steps (1) to (3). At least include.
(4) subjecting the first precipitate to a drying treatment and a washing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract and a second supernatant as a second precipitate; (5) the second supernatant; to a static treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a third precipitate
工程(4)では、工程(3)によって得られた第1の沈殿物を、乾燥処理及び洗浄処理に供することにより、第2の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第2の上清を得る。 In step (4), the first precipitate obtained in step (3) is dried and washed to obtain a triterpenoid-containing seed extract and a second supernatant as second precipitates. .
工程(4)における乾燥処理は、上記した乾燥処理によって、例えば、第1の沈殿物の水分含量が該沈殿物の全体量に対して5wt%以下、好ましくは1wt%以下となるように乾燥する。乾燥手段は特に限定されないが、凍結乾燥することが好ましい。 The drying treatment in step (4) is performed by the above-described drying treatment, for example, so that the moisture content of the first precipitate is 5 wt% or less, preferably 1 wt% or less with respect to the total amount of the precipitate. . Drying means is not particularly limited, but freeze-drying is preferred.
工程(4)における洗浄処理は、乾燥処理を経た第1の沈殿物に対して、少量のトリテルペノイド貧溶媒を用いて、該沈殿物中のトリテルペノイド以外の不純物を溶出するように実施すれば、特に限定されない。洗浄処理は、例えば、沈殿物に対して十分に少ない量のエタノール、好ましくは沈殿物 100mg~5,000mgに対して、エタノール 0.5ml~1.5mlを加え、両者を軽く混合して、次いで遠心分離などすることにより沈殿物と上清とを分離することを1回~複数回繰り返すことなどにより実施することができる。洗浄処理により最終的に得られた沈殿物が、第2の沈殿物である。また、洗浄処理により沈殿物と分離した上清は、洗浄操作を繰り返す度に回収し、これらをまとめたものが第2の上清である。 The washing treatment in step (4) is performed on the first precipitate that has undergone the drying treatment using a small amount of triterpenoid poor solvent so as to elute impurities other than triterpenoids in the precipitate, especially Not limited. For the washing treatment, for example, a sufficiently small amount of ethanol relative to the precipitate, preferably 0.5 ml to 1.5 ml of ethanol is added to 100 mg to 5,000 mg of the precipitate, the two are gently mixed, and then Separation of the precipitate and the supernatant by centrifugation or the like can be repeated once to several times. The precipitate finally obtained by the washing treatment is the second precipitate. In addition, the supernatant separated from the precipitate by the washing treatment is collected each time the washing operation is repeated, and the collected supernatant is the second supernatant.
第2の沈殿物中のトリテルペノイドの含有量は特に限定されないが、例えば、第2の沈殿物に含まれるノミリンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、20wt%以上であり、好ましくは25wt%以上であり;第2の沈殿物に含まれるリモニンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、30wt%以上であり、好ましくは35wt%以上であり;及び/又は、第2の沈殿物に含まれるノミリン及びリモニンの合計含有量が、該沈殿物の全体量に対して、50wt%以上であり、好ましくは60wt%以上であり、より好ましくは70wt%以上である。 Although the content of triterpenoids in the second precipitate is not particularly limited, for example, the content of nomirin contained in the second precipitate is preferably 20 wt% or more with respect to the total amount of the precipitate. is 25 wt% or more; the content of limonin contained in the second precipitate is 30 wt% or more, preferably 35 wt% or more, relative to the total amount of the precipitate; and/or the second The total content of nomilin and limonin contained in the precipitate of 2 is 50 wt% or more, preferably 60 wt% or more, more preferably 70 wt% or more, relative to the total weight of the precipitate.
第2の沈殿物中のトリテルペノイドは、リモニンの含有量がノミリンよりも多くなる傾向にある。ノミリンの含有比率の高い種子粗抽出液から、リモニンの含有比率の高い第2の沈殿物が得られるということは、工程(1)~(4)を含む方法はリモニンを大量に得るための優れた方法であることを示す。 The triterpenoids in the second precipitate tend to contain more limonin than nomirin. The fact that a second precipitate with a high limonin content can be obtained from a seed crude extract with a high nomilin content ratio means that the method including steps (1) to (4) is excellent for obtaining a large amount of limonin. method.
工程(5)では、工程(4)で得られた第2の上清を、静置処理に供することにより、第3の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る。 In step (5), the second supernatant obtained in step (4) is subjected to static treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a third precipitate.
静置処理は、通常知られているとおりの静置処理であれば特に限定されず、例えば、格別な手段を講じることなく、第2の上清を0℃~30℃、好ましくは室温で、数時間~数日間、十分な量の沈殿が確認されるまで放置することにより実施し得る。このようにして確認された沈殿が、第3の沈殿物である。第3の沈殿物を、液体成分から分離したければ、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段を利用すればよい。第3の沈殿物と分離した液体成分は、第3の上清である。第3の沈殿物は、所望により、洗浄処理に使用した溶媒を除去することにより、乾燥した第3の沈殿物が得られる。 The stationary treatment is not particularly limited as long as it is a commonly known stationary treatment. It can be carried out by leaving for several hours to several days until a sufficient amount of precipitation is confirmed. The precipitate thus confirmed is the third precipitate. If it is desired to separate the third precipitate from the liquid component, a generally known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration may be used. The liquid component separated from the third precipitate is the third supernatant. The third precipitate is optionally obtained by removing the solvent used in the washing treatment to obtain a dried third precipitate.
第3の沈殿物中のトリテルペノイドの含有量は特に限定されないが、例えば、第3の沈殿物に含まれるリモニンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、20wt%以上であり、好ましくは25wt%以上であり;第3の沈殿物に含まれるノミリンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、30wt%以上であり、好ましくは35wt%以上であり;及び/又は、第3の沈殿物に含まれるノミリン及びリモニンの合計含有量が、該沈殿物の全体量に対して、50wt%以上であり、好ましくは60wt%以上である。第3の上清中のトリテルペノイドの含有量は特に限定されないが、例えば、第3の上清に含まれるリモニン及びノミリンの含有量が、該上清の全体量に対して、それぞれ数wt%程度である。 The content of triterpenoids in the third precipitate is not particularly limited, but for example, the content of limonin contained in the third precipitate is preferably 20 wt% or more with respect to the total amount of the precipitate. is 25 wt% or more; the content of nomirin contained in the third precipitate is 30 wt% or more, preferably 35 wt% or more, relative to the total amount of the precipitate; and/or The total content of nomilin and limonin contained in the precipitate of 3 is 50 wt% or more, preferably 60 wt% or more, relative to the total weight of the precipitate. The content of triterpenoids in the third supernatant is not particularly limited. is.
第2の沈殿物及び第3の沈殿物の収量は特に限定されないが、例えば、第2の沈殿物の量は、柑橘類の種子の全体量に対して、0.1mg/g以上であることが好ましく、1.0mg/g以上であることがより好ましく、2.0mg/g以上であることがさらに好ましく;及び/又は、第3の沈殿物の量は、柑橘類の種子の全体量に対して、0.1mg/g以上であることが好ましく、1.0mg/g以上であることがより好ましく、1.5mg/g以上であることがさらに好ましい。 Although the yields of the second precipitate and the third precipitate are not particularly limited, for example, the amount of the second precipitate may be 0.1 mg/g or more with respect to the total amount of citrus seeds. preferably 1.0 mg/g or more, more preferably 2.0 mg/g or more; and/or the amount of the third precipitate relative to the total amount of citrus seeds , preferably 0.1 mg/g or more, more preferably 1.0 mg/g or more, and even more preferably 1.5 mg/g or more.
第2の沈殿物及び第3の沈殿物におけるリモニン及びノミリンの回収率は特に限定されないが、例えば、リモニンの回収率は、種子粗抽出液の濃縮物に含まれるリモニンの含有量に基づいて、40wt%以上であることが好ましく、50wt%以上であることがより好ましく、60wt%以上であることがさらに好ましく;及び/又は、ノミリンの回収率は、種子粗抽出液の濃縮物に含まれるノミリンの含有量に基づいて、30wt%以上であることが好ましく、40wt%以上であることがより好ましく、50wt%以上であることがさらに好ましい。 The recovery rates of limonin and nomirin in the second precipitate and the third precipitate are not particularly limited. It is preferably 40 wt% or more, more preferably 50 wt% or more, and even more preferably 60 wt% or more; is preferably 30 wt% or more, more preferably 40 wt% or more, and even more preferably 50 wt% or more, based on the content of
本発明の一態様の方法の具体的な方法である、本発明の第2の態様の方法は、工程(1)~(3)に加えて、さらに下記の工程(6)及び(7)を少なくとも含む。
(6)前記第1の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第4の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第4の上清を得る工程
(7)前記第4の上清を、乾燥処理、溶媒添加処理及び静置処理に供することにより、第5の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
The method of the second aspect of the present invention, which is a specific method of the method of one aspect of the present invention, further includes steps (6) and (7) below in addition to steps (1) to (3). At least include.
(6) subjecting the first precipitate to a washing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract and a fourth supernatant as a fourth precipitate; (7) drying the fourth supernatant; obtaining a triterpenoid-containing seed extract as a fifth precipitate by subjecting it to treatment, solvent addition treatment and standing treatment;
本発明の一態様の方法の具体的な方法である、本発明の第3の態様の方法は、工程(1)~(3)及び(6)~(7)に加えて、さらに下記の工程(8)を少なくとも含む。
(8)前記第5の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第6の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
The method of the third aspect of the present invention, which is a specific method of the method of one aspect of the present invention, further includes the following steps in addition to steps (1) to (3) and (6) to (7) (8) is included at least.
(8) a step of obtaining a triterpenoid-containing seed extract as a sixth precipitate by subjecting the fifth precipitate to a washing treatment;
工程(6)では、工程(3)によって得られた第1の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第4の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第4の上清を得る。 In step (6), the first precipitate obtained in step (3) is washed to obtain a triterpenoid-containing seed extract and a fourth supernatant as a fourth precipitate.
工程(6)における洗浄処理は、湿潤状態にある第1の沈殿物に対して、少量のトリテルペノイド貧溶媒を用いて、該沈殿物中のトリテルペノイド以外の不純物を溶出するように実施すれば、特に限定されない。洗浄処理は、例えば、沈殿物に対して十分に少ない量のエタノール、好ましくは沈殿物 100mg~5,000mgに対して、エタノール 0.5ml~1.5mlを加え、両者を軽く混合して、次いで遠心分離などすることにより沈殿物と上清とを分離することを1回~複数回繰り返すことなどにより実施することができる。洗浄処理により最終的に得られた沈殿物が、第4の沈殿物である。また、洗浄処理により沈殿物と分離した上清は、洗浄操作を繰り返す度に回収し、これらをまとめたものが第4の上清である。 Especially if the washing treatment in step (6) is performed on the wet first precipitate using a small amount of triterpenoid poor solvent so as to elute impurities other than triterpenoids in the precipitate. Not limited. For the washing treatment, for example, a sufficiently small amount of ethanol relative to the precipitate, preferably 0.5 ml to 1.5 ml of ethanol is added to 100 mg to 5,000 mg of the precipitate, the two are gently mixed, and then Separation of the precipitate and the supernatant by centrifugation or the like can be repeated once to several times. The precipitate finally obtained by the washing treatment is the fourth precipitate. In addition, the supernatant separated from the precipitate by the washing treatment is collected each time the washing operation is repeated, and the collected supernatant is the fourth supernatant.
第4の沈殿物中のトリテルペノイドの含有量は特に限定されないが、例えば、第4の沈殿物に含まれるノミリンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、30wt%以上であり、好ましくは35wt%以上であり、より好ましくは40wt%以上であり;第4の沈殿物に含まれるリモニンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、25wt%以上であり、好ましくは30wt%以上であり、より好ましくは35wt%以上であり;及び/又は、第4の沈殿物に含まれるノミリン及びリモニンの合計含有量が、該沈殿物の全体量に対して、60wt%以上であり、好ましくは70wt%以上であり、より好ましくは80wt%以上である。 The content of triterpenoids in the fourth precipitate is not particularly limited, but for example, the content of nomirin contained in the fourth precipitate is preferably 30 wt% or more with respect to the total amount of the precipitate. is 35 wt% or more, more preferably 40 wt% or more; the content of limonin contained in the fourth precipitate is 25 wt% or more, preferably 30 wt%, relative to the total amount of the precipitate or more, more preferably 35 wt% or more; and/or the total content of nomirin and limonin contained in the fourth precipitate is 60 wt% or more with respect to the total amount of the precipitate, It is preferably 70 wt % or more, more preferably 80 wt % or more.
第4の沈殿物中のトリテルペノイドは、ノミリンの含有量がリモニンよりも多くなる傾向にある。したがって、工程(1)~(3)及び(6)を含む方法はノミリンを大量に得るための優れた方法であることを示す。 The triterpenoids in the fourth precipitate tend to contain more nomirin than limonin. Therefore, the method comprising steps (1)-(3) and (6) is an excellent method for obtaining large amounts of nomirin.
工程(7)では、工程(6)で得られた第4の上清を、乾燥処理、溶媒添加処理及び静置処理に供することにより、第5の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る。 In step (7), the fourth supernatant obtained in step (6) is subjected to drying treatment, solvent addition treatment and standing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a fifth precipitate.
工程(7)における乾燥処理は、第4の上清が液体であることから、液体が蒸散するような乾燥処理であることが好ましく、凍結乾燥処理がより好ましい。 Since the fourth supernatant is a liquid, the drying treatment in step (7) is preferably a drying treatment that evaporates the liquid, and more preferably a freeze-drying treatment.
溶媒添加処理は、第4の上清の乾燥物に対して、少量のトリテルペノイド貧溶媒を用いて、該乾燥物中のトリテルペノイド以外の不純物を溶出するように実施すれば特に限定されない。溶媒添加処理は、例えば、第4の上清の乾燥物に対して十分に少ない量のエタノール、好ましくは該乾燥物 100mg~1,000mgに対して、エタノール 10ml~20mlを加え、両者を混合することにより実施できる。
The solvent addition treatment is not particularly limited as long as it is carried out on the dried product of the fourth supernatant using a small amount of triterpenoid poor solvent so as to elute impurities other than triterpenoids in the dried product. Solvent addition treatment, for example, a sufficiently small amount of ethanol relative to the dry matter of the fourth supernatant, preferably 100 mg to 1,000 mg of the dry matter, add
工程(7)における静置処理は、工程(5)における静置処理と同様に実施すれば特に限定されず、例えば、格別な手段を講じることなく、溶媒添加処理に供した第4の上清の乾燥物を、0℃~30℃、好ましくは室温で、数時間~数日間、十分な量の沈殿が確認されるまで放置することにより実施し得る。このようにして確認された沈殿が、第5の沈殿物である。第5の沈殿物を、液体成分から分離したければ、遠心分離やろ過などの通常知られている固液分離手段を利用すればよい。第5の沈殿物と分離した液体成分は、第5の上清である。 The stationary treatment in step (7) is not particularly limited as long as it is performed in the same manner as the stationary treatment in step (5). For example, the fourth supernatant that has been subjected to solvent addition treatment without taking special measures can be dried at 0° C. to 30° C., preferably at room temperature, for several hours to several days until a sufficient amount of precipitation is confirmed. The precipitate thus confirmed is the fifth precipitate. If it is desired to separate the fifth precipitate from the liquid component, a generally known solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration may be used. The liquid component separated from the fifth precipitate is the fifth supernatant.
工程(8)では、工程(7)によって得られた第5の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第6の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る。 In step (8), the fifth precipitate obtained in step (7) is subjected to a washing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a sixth precipitate.
工程(8)における洗浄処理は、工程(6)における洗浄処理と同様に実施すれば、特に限定されない。すなわち、洗浄処理は、例えば、沈殿物に対して十分に少ない量のエタノール、好ましくは沈殿物 100mg~5,000mgに対して、エタノール 0.5ml~1.5mlを加え、両者を軽く混合して、次いで遠心分離などすることにより沈殿物と上清とを分離することを1回~複数回繰り返すことなどにより実施することができる。洗浄処理により最終的に得られた沈殿物が、第6の沈殿物である。また、洗浄処理により沈殿物と分離した上清は、洗浄操作を繰り返す度に回収し、これらをまとめたものが第6の上清である。 The cleaning treatment in step (8) is not particularly limited as long as it is performed in the same manner as the cleaning treatment in step (6). That is, the washing treatment is performed, for example, by adding a sufficiently small amount of ethanol to the precipitate, preferably 0.5 ml to 1.5 ml of ethanol to 100 mg to 5,000 mg of the precipitate, and lightly mixing the two. Then, separation of the precipitate and the supernatant by centrifugation or the like can be repeated one to several times. The precipitate finally obtained by the washing treatment is the sixth precipitate. In addition, the supernatant separated from the precipitate by the washing treatment is collected each time the washing operation is repeated, and the collected supernatant is the sixth supernatant.
第6の沈殿物中のトリテルペノイドの含有量は特に限定されないが、例えば、第6の沈殿物に含まれるリモニンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、10wt%以下であり、好ましくは5wt%以下であり;及び/又は、第6の沈殿物に含まれるノミリンの含有量が、該沈殿物の全体量に対して、50wt%以上であり、好ましくは60wt%以上であり、より好ましくは70wt%以上である。第6の上清中のトリテルペノイドの含有量は特に限定されないが、例えば、第6の上清に含まれるリモニン及びノミリンの含有量が、該上清の全体量に対して、それぞれ数wt%程度である。 Although the content of triterpenoids in the sixth precipitate is not particularly limited, for example, the content of limonin contained in the sixth precipitate is preferably 10 wt% or less with respect to the total amount of the precipitate. is 5 wt% or less; and/or the content of nomirin contained in the sixth precipitate is 50 wt% or more, preferably 60 wt% or more, relative to the total amount of the precipitate, and more Preferably, it is 70 wt% or more. The content of triterpenoids in the sixth supernatant is not particularly limited. is.
第6の沈殿物中のトリテルペノイドは、ノミリンの含有量がリモニンよりも多くなる傾向にあり、実質的にノミリンのみを含有するものとすることができる。したがって、工程(1)~(3)及び(6)~(8)を含む方法は、ノミリンを大量に得るための優れた方法であることを示す。 The triterpenoids in the sixth precipitate tend to contain more nomirin than limonin, and may contain substantially only nomirin. Therefore, the method comprising steps (1)-(3) and (6)-(8) is shown to be an excellent method for obtaining large amounts of nomirin.
第4の沈殿物及び第6の沈殿物の収量は特に限定されないが、例えば、第4の沈殿物の量は、柑橘類の種子の全体量に対して、0.1mg/g以上であることが好ましく、1.0mg/g以上であることがより好ましく、2.0mg/g以上であることがさらに好ましく;及び/又は、第6の沈殿物の量は、柑橘類の種子の全体量に対して、0.1mg/g以上であることが好ましく、0.5mg/g以上であることがより好ましい。 The yields of the fourth precipitate and the sixth precipitate are not particularly limited, but for example, the amount of the fourth precipitate may be 0.1 mg/g or more with respect to the total amount of citrus seeds. preferably 1.0 mg/g or more, more preferably 2.0 mg/g or more; and/or the amount of the sixth precipitate relative to the total amount of citrus seeds , preferably 0.1 mg/g or more, more preferably 0.5 mg/g or more.
第4の沈殿物及び第6の沈殿物におけるリモニン及びノミリンの回収率は特に限定されないが、例えば、リモニンの回収率は、種子粗抽出液の濃縮物に含まれるリモニンの含有量に基づいて、10wt%以上であることが好ましく、20wt%以上であることがより好ましく、30wt%以上であることがさらに好ましく;及び/又は、ノミリンの回収率は、種子粗抽出液の濃縮物に含まれるノミリンの含有量に基づいて、30wt%以上であることが好ましく、40wt%以上であることがより好ましく、50wt%以上であることがさらに好ましい。 The recovery rates of limonin and nomirin in the fourth precipitate and the sixth precipitate are not particularly limited. It is preferably 10 wt% or more, more preferably 20 wt% or more, and even more preferably 30 wt% or more; is preferably 30 wt% or more, more preferably 40 wt% or more, and even more preferably 50 wt% or more, based on the content of
本発明の一態様の方法により、第1の沈殿物、第2の沈殿物、第3の沈殿物、第4の沈殿物、第5の沈殿物及び/又は第6の沈殿物として、リモニンやノミリンといったトリテルペノイドを高濃度で含有するトリテルペノイド含有種子抽出物が得られる。 According to the method of one aspect of the present invention, limonin or A triterpenoid-containing seed extract containing a high concentration of triterpenoids such as nomilin is obtained.
トリテルペノイド含有種子抽出物は、例えば、経口用組成物又は外用組成物の原料として使用する場合には、水などで洗浄することが好ましい。トリテルペノイド含有種子抽出物は、さらなる精製工程に供してもよい。例えば、採取及び水洗浄したトリテルペノイド含有種子抽出物とトリテルペノイド可溶性溶媒(良溶媒)とを混合したものを固液分離し、次いでトリテルペノイド不溶性溶媒(貧溶媒)を用いて結晶化することによって、不純物が低減されたトリテルペノイド含有種子抽出物を得ることができる。 The triterpenoid-containing seed extract is preferably washed with water or the like, for example, when used as a raw material for an oral composition or a composition for external use. The triterpenoid-containing seed extract may be subjected to further purification steps. For example, a mixture of a triterpenoid-containing seed extract collected and washed with water and a triterpenoid-soluble solvent (good solvent) is subjected to solid-liquid separation, and then crystallized using a triterpenoid-insoluble solvent (poor solvent) to remove impurities. A reduced triterpenoid-containing seed extract can be obtained.
本発明の一態様の方法は、本発明の課題を解決し得る限り、上記した工程の前段若しくは後段又は工程途中に、種々の工程や操作を加入することができる。 In the method of one embodiment of the present invention, various steps and operations can be added before or after the above-described steps, or during the steps, as long as the problems of the present invention can be solved.
以下に、本発明の一態様の方法の具体的態様として、図1及び図2を参照して、柑橘類の種子を原料として、トリテルペノイドを高濃度で含有するトリテルペノイド含有種子抽出物を製造する方法を説明するが、本発明の製造方法は以下のものに限定されない。 Hereinafter, as a specific embodiment of the method of one aspect of the present invention, a method for producing a triterpenoid-containing seed extract containing a high concentration of triterpenoids using citrus seeds as a raw material will be described with reference to FIGS. As explained, the manufacturing method of the present invention is not limited to the following.
乾燥し、かつ、ハサミやミキサーで細断又は粉砕した柑橘類の種子1を、種子に対して5倍容の10vol%~80vol%エタノールに加えて、10℃~30℃で、2日間~4日間で実施する抽出処理10に供することにより、種子粗抽出液50を得る。次いで、種子粗抽出液50を、種子粗抽出液に対して0.5倍容の水を用いた後に濃縮する加水・濃縮処理11に供し、エタノールが揮散し0.2倍容にまで減容して、エマルジョンの種子粗抽出物51を得る。
種子粗抽出物51に、無機酸を加えてpHを1~3に調整した後、種子粗抽出物に対して0.1倍~0.2倍の無機塩を加えて、数秒間~数分間~数時間静置する酸・加塩・静置処理12を実施した後、遠心分離することにより、湿潤状態の第1の沈殿物52及び第1の上清53を得る。
After adjusting the pH to 1 to 3 by adding an inorganic acid to the
図1に示すとおりに、本発明の第1の態様の方法では、第1の沈殿物52を、該沈殿物から水分を除去するように乾燥し、次いで得られた乾燥物にエタノールを加えて軽く振り混ぜて遠心分離をすることを複数回繰り返して洗浄する乾燥・洗浄処理20に供する。洗浄後に第2の沈殿物60を得て、洗浄ごとの上清を回収することにより第2の上清61を得る。第2の沈殿物60は、ノミリンの含有量に対して、リモニンの含有量が大きいトリテルペノイド含有種子抽出物であることが好ましい。
As shown in FIG. 1, in the method of the first aspect of the present invention, a first precipitate 52 is dried to remove water from the precipitate, and then ethanol is added to the resulting dry matter. It is subjected to a drying/
第2の上清61を、数分間~数時間~数日間静置する静置処理21に供する。静置処理後に遠心分離することにより、第3の沈殿物62及び第3の上清63を得る。
The
図2に示すとおり、第1の沈殿物52を、湿潤状態のまま、エタノールを加えて軽く振り混ぜて遠心分離をすることを複数回繰り返して洗浄する洗浄処理30に供する。洗浄後に第4の沈殿物70を得て、洗浄ごとの上清を回収することにより第4の上清71を得る。第4の沈殿物70は、リモニンの含有量に対して、ノミリンの含有量が大きいトリテルペノイド含有種子抽出物であることが好ましい。
As shown in FIG. 2, the first precipitate 52 is subjected to a
第4の上清71を、水分を除去するように乾燥して、次いで得られた乾燥物に少量のトリテルペノイド不溶性溶媒(貧溶媒)を添加して混合し、次いで数分間~数時間~数日間静置する乾燥・溶媒添加・静置処理31に供する。該処理31後の溶液を遠心分離することにより第5の沈殿物72及び第5の上清73を得る。第5の沈殿物72をエタノールを用いた洗浄及び遠心分離を複数回繰り返すことによる洗浄処理32に供して、第6の沈殿物74及び第6の上清75を得る。第6の沈殿物は、リモニンの含有量に対して、ノミリンの含有量が非常に大きいトリテルペノイド含有種子抽出物であることが好ましく、実質的にリモニンを含有しないトリテルペノイド含有種子抽出物であることがより好ましい。
The
本発明の一態様の方法で製造されるトリテルペノイド含有種子抽出物は、別の態様として、本発明に包含され得る。すなわち、本発明のトリテルペノイド含有種子抽出物は、柑橘類の種子由来であり、かつ、従来技術に比してトリテルペノイドを高濃度で含有する組成物であれば特に限定されないが、例えば、経口用組成物又は外用組成物の原料として適用することによる製品製造の際のコストの点から、該抽出物の乾燥質量あたりのトリテルペノイドの含有量は、例えば、下限として、1wt%以上であり、好ましくは40wt%以上であり、より好ましくは50wt%以上であり、さらに好ましくは60wt%以上であり、なおさらに好ましくは70wt%以上であり;上限として、100wt%以下であり、好ましくは90wt%以下である。本発明の一態様のトリテルペノイド含有種子抽出物は、本発明の一態様の方法によって得られるものである。 A triterpenoid-containing seed extract produced by the method of one aspect of the present invention can be included in the present invention as another aspect. That is, the triterpenoid-containing seed extract of the present invention is not particularly limited as long as it is derived from citrus seeds and contains triterpenoids at a higher concentration than in the prior art. Alternatively, from the viewpoint of the cost in manufacturing products by applying it as a raw material of a composition for external use, the content of triterpenoids per dry mass of the extract is, for example, as a lower limit, 1 wt% or more, preferably 40 wt%. The upper limit is 100 wt% or less, preferably 90 wt% or less. The triterpenoid-containing seed extract of one aspect of the invention is obtained by the method of one aspect of the invention.
本発明のトリテルペノイド含有種子抽出物の用途は特に限定されず、例えば、トリテルペノイドが有する抗腫瘍作用、解毒代謝酵素の活性作用、麻酔時の睡眠時間短縮作用、鎮痛作用、血清脂質代謝改善作用といった生理活性を期待して、飲食品や医薬品といった経口用組成物、化粧品といった外用組成物などの各組成物の原料又は該組成物そのものとして利用され得る。本発明のトリテルペノイド含有種子抽出物におけるトリテルペノイドの含有量は、後述する実施例に記載の方法によって測定され得る。 The use of the triterpenoid-containing seed extract of the present invention is not particularly limited. Expecting activity, it can be used as a raw material for each composition such as oral compositions such as food and drink and pharmaceuticals, and external compositions such as cosmetics, or as the composition itself. The triterpenoid content in the triterpenoid-containing seed extract of the present invention can be measured by the method described in Examples below.
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。 The present invention will be described in more detail below with reference to Examples, but the present invention is not limited to these Examples, and the present invention can take various aspects as long as the problems of the present invention can be solved. .
[例1.ノミリン及びリモニンの測定方法]
ノミリン及びリモニンの含有量(mg)は、カラムとしてCOSMOSIL 5C18-AR-2カラム及び移動相としてMeOH:H2O=20:80~100:0を用いて、流速1ml/min、測定波長215.0nmに設定して、リモニンを約16分、ノミリンを約17分のリテンション・タイムを有するピークとして検量線法により測定した。
[Example 1. Method for measuring nomirin and limonin]
The contents (mg) of nomilin and limonin were measured using a COSMOSIL 5C18-AR-2 column as a column and MeOH:H 2 O=20:80 to 100:0 as a mobile phase at a flow rate of 1 ml/min and a measurement wavelength of 215. Set at 0 nm, limonin was determined by a calibration curve method as a peak with a retention time of approximately 16 minutes and nomirin approximately 17 minutes.
[例2.ノミリン及びリモニンを高含有するシークヮーサー種子抽出物の製造方法(1)]
乾燥させたシークヮーサーの種子 10.0gを、ハサミで大まかに細断した。細断した種子を、80vol%エタノール 50mLに加えて、室温で3日間抽出処理に供することにより、シークヮーサー種子粗抽出液を得た。シークヮーサー種子粗抽出液を乾燥及び濃縮処理に供することにより、シークヮーサー種子粗抽出液の濃縮物 583.8mgを得た。該濃縮物のノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ34.9mg(6.0wt%)及び34.5mg(5.9wt%)であった。
[Example 2. Method for producing shikuwasa seed extract containing high nomilin and limonin (1)]
10.0 g of dried shikuwasa seeds were roughly chopped with scissors. The chopped seeds were added to 50 mL of 80 vol% ethanol and subjected to extraction treatment at room temperature for 3 days to obtain a Shikuwasa seed crude extract. By drying and concentrating the Shikuwasa seed crude extract, 583.8 mg of a concentrate of Shikuwasa seed crude extract was obtained. The nomilin and limonin contents of the concentrate were determined to be 34.9 mg (6.0 wt %) and 34.5 mg (5.9 wt %) respectively.
シークヮーサー種子粗抽出液 50mlを、20mlの水を加えた上で濃縮処理に供し、エタノールが揮散したところで濃縮処理を終了して、種子粗抽出物を得た。得られた種子粗抽出物は、エマルジョンであり、遠心分離によっては層分離しないものであった。 20 ml of water was added to 50 ml of the Shikuwasa seed crude extract, and then subjected to a concentration treatment. When the ethanol was volatilized, the concentration treatment was terminated to obtain a seed crude extract. The resulting crude seed extract was an emulsion and did not undergo layer separation by centrifugation.
得られた種子粗抽出物 15mlに、塩酸を加えてpHを1~3に調整した後、NaCl 50mg~100mgを加えて、軽く振り混ぜて、粗抽出物混合物を得た。得られた粗抽出物混合物を、5分間静置した後、遠心分離することにより、第1の上清及び第1の沈殿物を得た。このうち、第1の上清についてノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、両物質ともに検出下限未満であった。 Hydrochloric acid was added to 15 ml of the obtained crude seed extract to adjust the pH to 1 to 3, and then 50 to 100 mg of NaCl was added and lightly shaken to obtain a crude extract mixture. The resulting crude extract mixture was allowed to stand for 5 minutes and then centrifuged to obtain a first supernatant and a first precipitate. When the contents of nomirin and limonin were measured for the first supernatant, both substances were below the detection limit.
第1の沈殿物を凍結乾燥処理に供して、水分を除去した凍結乾燥物を得た。得られた凍結乾燥物165mgを、エタノール 1mlで2回洗浄した。すなわち、凍結乾燥物にエタノールを加えた後、軽く振り混ぜて遠心分離をすることにより、沈殿物と上清とを得た。この沈殿物について同様の操作をさらに1度繰り返して、第2の沈殿物 36.6mgを得て、さらに上清を回収することにより第2の上清を得た。第2の沈殿物のノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ11.1mg(30.2wt%)及び16.0mg(43.8wt%)であった。すなわち、ノミリン及びリモニンといったトリテルペノイドが74%以上含有するシークヮーサー種子抽出物を得ることができた。 The first precipitate was subjected to a freeze-drying process to obtain a dry freeze-dried product. 165 mg of the resulting lyophilisate was washed twice with 1 ml of ethanol. That is, after ethanol was added to the freeze-dried product, the mixture was gently shaken and centrifuged to obtain a precipitate and a supernatant. The same operation was repeated once for this precipitate to obtain a second precipitate of 36.6 mg, and the second supernatant was obtained by collecting the supernatant. The nomilin and limonin contents of the second precipitate were determined to be 11.1 mg (30.2 wt%) and 16.0 mg (43.8 wt%) respectively. That is, it was possible to obtain a Shikuwasa seed extract containing 74% or more of triterpenoids such as nomilin and limonin.
第2の上清を、一日静置した後、遠心分離することにより、第3の沈殿物 22.3mg及び第3の上清 106.0mgを得た。第3の沈殿物のノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ8.6mg(38.7wt%)及び5.8mg(26.1wt%)であった。また、第3の上清のノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ3.7mg(3.5wt%)及び2.3mg(2.2wt%)であった。 The second supernatant was allowed to stand for one day and then centrifuged to obtain a third precipitate of 22.3 mg and a third supernatant of 106.0 mg. The content of nomirin and limonin in the third precipitate was determined to be 8.6 mg (38.7 wt%) and 5.8 mg (26.1 wt%) respectively. In addition, the content of nomilin and limonin in the third supernatant was measured and found to be 3.7 mg (3.5 wt%) and 2.3 mg (2.2 wt%), respectively.
以上の結果より、第2の沈殿物及び第3の沈殿物として、ノミリン及びリモニンをそれぞれ19.7mg及び21.8mgを得た。シークヮーサー種子粗抽出液のノミリン及びリモニンの含有量はそれぞれ33.1mg及び32.5mgであったことから、これを基準とすれば、第2の沈殿物及び第3の沈殿物におけるノミリン及びリモニンの回収率は、それぞれ60%及び67%であった。 From the above results, 19.7 mg and 21.8 mg of nomirin and limonin were obtained as the second and third precipitates, respectively. Since the contents of nomilin and limonin in the Shikuwasa seed crude extract were 33.1 mg and 32.5 mg, respectively, based on this, the amounts of nomilin and limonin in the second and third precipitates were Recoveries were 60% and 67%, respectively.
また、シークヮーサー種子粗抽出液の含有量はリモニンの方が少ないことを鑑みれば、第2の沈殿物のリモニンの含有量がノミリンよりも多いということは驚くべき結果であった。したがって、本方法は、リモニンを大量に得るための優れた方法であることがわかった。 In addition, considering that the content of limonin in the Shikuwasa seed crude extract was less, it was a surprising result that the content of limonin in the second precipitate was higher than that in nomirin. Therefore, this method was found to be an excellent method for obtaining large amounts of limonin.
[例3.ノミリン及びリモニンを高含有するシークヮーサー種子抽出物の製造方法(2)]
乾燥させたシークヮーサーの種子 300.0gを、ミキサーで粗く砕いた。砕いた種子を、80vol%エタノール 1Lに加えて、室温で3日間抽出処理に供することにより、シークヮーサー種子粗抽出液を得た。シークヮーサー種子粗抽出液を乾燥及び濃縮処理に供することにより、シークヮーサー種子粗抽出液の濃縮物を得て、ノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ約1,200mg及び1,000mgであった。
[Example 3. Method for producing Shikuwasa seed extract containing high nomilin and limonin (2)]
300.0 g of dried shikuwasa seeds were coarsely crushed with a mixer. The crushed seeds were added to 1 L of 80 vol% ethanol and subjected to an extraction treatment at room temperature for 3 days to obtain a Shikuwasa seed crude extract. By subjecting the Shikuwasa seed crude extract to drying and concentration treatments, a concentrate of Shikuwasa seed crude extract was obtained, and the contents of nomirin and limonin were measured and found to be about 1,200 mg and 1,000 mg, respectively. .
シークヮーサー種子粗抽出液 1Lを、300mlの水を加えた上で濃縮処理に供し、エタノールが揮散したところで濃縮処理を終了して、種子粗抽出物 150mlを得た。得られた種子粗抽出物は、エマルジョンであり、遠心分離によっては層分離しないものであった。 300 ml of water was added to 1 L of the Shikuwasa seed crude extract, and then subjected to a concentration treatment. When the ethanol was volatilized, the concentration treatment was terminated to obtain 150 ml of a seed crude extract. The resulting crude seed extract was an emulsion and did not undergo layer separation by centrifugation.
得られた種子粗抽出物 50ml×3回(計150ml)に、塩酸を加えてpHを1~3に調整した後、1回あたりNaCl 150mgを3回に分けて加え、軽く振り混ぜて、粗抽出物混合物を得た。得られた粗抽出物混合物を、5分間静置した後、遠心分離することにより、第1の上清及び第1の沈殿物を得た。このうち、上清についてノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、両物質ともに検出下限未満であった。
Hydrochloric acid was added to 50 ml of the obtained
第1の沈殿物 3.3gを、エタノール 1mlで3回洗浄した。すなわち、第1の沈殿物にエタノールを加えた後、軽く振り混ぜて遠心分離をすることにより、沈殿物と上清とを得た。この沈殿物についてさらに同様の操作を2度繰り返して、第4の沈殿物 901.4mgを得て、さらに上清を回収することにより第4の上清を得た。このとき、ノミリンを溶解し、リモニンを沈殿させるために、第1の沈殿物は乾燥させずに含水状態のものを用いた。第4の沈殿物のノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ394.5mg(43.8wt%)及び336.5mg(37.3wt%)であった。すなわち、ノミリン及びリモニンといったトリテルペノイドが81%以上含有するシークヮーサー種子抽出物を得ることができた。 3.3 g of the first precipitate was washed three times with 1 ml of ethanol. That is, after ethanol was added to the first precipitate, the mixture was gently shaken and centrifuged to obtain a precipitate and a supernatant. For this precipitate, the same operation was repeated twice to obtain 901.4 mg of the fourth precipitate, and the supernatant was collected to obtain the fourth supernatant. At this time, in order to dissolve nomilin and precipitate limonin, the first precipitate was used in a water-containing state without being dried. The content of nomirin and limonin in the fourth precipitate was determined to be 394.5 mg (43.8 wt%) and 336.5 mg (37.3 wt%) respectively. That is, it was possible to obtain a Shikuwasa seed extract containing 81% or more of triterpenoids such as nomilin and limonin.
第4の上清を凍結乾燥処理に供して水分を除いた。得られた凍結乾燥物 2.4gとエタノール 15mlとの混合溶液を、3日間静置した後、遠心分離することにより第5の沈殿物及び第5の上清を得た。第5の沈殿物をエタノールを用いた洗浄及び遠心分離を3回繰り返すことにより、第6の沈殿物 339.8mg及び第6の上清 2,100mgを得た。第6の沈殿物のノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ257.0mg(75.6wt%)及び0mg(0wt%)であった。また、第6の上清のノミリン及びリモニンの含有量を測定したところ、それぞれ45.5mg(2.2wt%)及び6.1mg(0.3wt%)であった。 The fourth supernatant was lyophilized to remove water. A mixed solution of 2.4 g of the obtained freeze-dried product and 15 ml of ethanol was allowed to stand for 3 days, and then centrifuged to obtain a fifth precipitate and a fifth supernatant. By repeating washing of the fifth precipitate with ethanol and centrifugation three times, 339.8 mg of the sixth precipitate and 2,100 mg of the sixth supernatant were obtained. The content of nomirin and limonin in the sixth precipitate was determined to be 257.0 mg (75.6 wt%) and 0 mg (0 wt%) respectively. Also, the contents of nomilin and limonin in the sixth supernatant were measured to be 45.5 mg (2.2 wt %) and 6.1 mg (0.3 wt %), respectively.
以上の結果より、第4の沈殿物及び第6の沈殿物として、ノミリン及びリモニンをそれぞれ651.5mg及び336.5mgを得た。シークヮーサー種子粗抽出液のノミリン及びリモニンの含有量はそれぞれ1,200mg及び1,000mgであったことから、これを基準とすれば、第4の沈殿物及び第6の沈殿物におけるノミリン及びリモニンの回収率は、それぞれ54%及び34%であった。 From the above results, 651.5 mg and 336.5 mg of nomirin and limonin were obtained as the fourth and sixth precipitates, respectively. Since the contents of nomilin and limonin in the Shikuwasa seed crude extract were 1,200 mg and 1,000 mg, respectively, based on this, the amounts of nomilin and limonin in the fourth and sixth precipitates were Recoveries were 54% and 34%, respectively.
本方法では、ノミリンの含有量が大きい第4の沈殿物及び第6の沈殿物を得ることができた。特に、第6の沈殿物がノミリンを含有し、リモニンをほとんど含有しないものであるということは非常に驚くべき結果であった。したがって、本方法は、ノミリンを大量に得るための優れた方法であることがわかった。 In this method, it was possible to obtain a fourth precipitate and a sixth precipitate with a high nomirin content. In particular, it was a very surprising result that the sixth precipitate contained nomirin and little limonin. Therefore, this method was found to be an excellent method for obtaining a large amount of nomirin.
本発明は、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などの分野で有用であり、特に抗腫瘍用組成物、解毒代謝酵素の活性用組成物、麻酔時の睡眠時間短縮用組成物、鎮痛用組成物、血清脂質代謝改善用組成物又はこれらの組成物の原料を製造できる点で有用である。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention is useful in the fields of food and beverages, pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, etc., and particularly antitumor compositions, compositions for activating detoxification metabolic enzymes, compositions for shortening sleep time during anesthesia, and analgesics. It is useful in that it can be used to manufacture a composition for use in food, a composition for improving serum lipid metabolism, or a raw material for these compositions.
1 柑橘類の種子
2 リモニン高含有種子抽出物
3 ノミリン高含有種子抽出物
10 抽出処理
11 加水処理及び濃縮処理
12 酸処理、加塩処理及び静置処理
20 乾燥処理及び洗浄処理
21 静置処理
30 洗浄処理
31 乾燥処理、溶媒添加処理及び静置処理
32 洗浄処理
50 種子粗抽出液
51 種子粗抽出物
52 第1の沈殿物
53 第1の上清
60 第2の沈殿物
61 第2の上清
62 第3の沈殿物
63 第3の上清
70 第4の沈殿物
71 第4の上清
72 第5の沈殿物
73 第5の上清
74 第6の沈殿物
75 第6の上清
1
Claims (7)
(1)柑橘類の種子を、60vol%~80vol%エタノールを用いた抽出処理に供することにより、種子粗抽出液を得る工程
(2)前記種子粗抽出液を、加水処理及び濃縮処理に供することにより、種子粗抽出物を得る工程
(3)前記種子粗抽出物を、酸処理及び加塩処理に供することにより、第1の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
(4)前記第1の沈殿物を、乾燥処理及び洗浄処理に供することにより、第2の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第2の上清を得る工程
(5)前記第2の上清を、静置処理に供することにより、第3の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程 A method for producing a triterpenoid-containing seed extract, comprising the following steps (1) to ( 5 ) , wherein the triterpenoids are nomilin and limonin .
(1) A step of subjecting citrus seeds to an extraction treatment using 60 vol% to 80 vol% ethanol to obtain a seed crude extract (2) A step of subjecting the seed crude extract to a hydration treatment and a concentration treatment a step of obtaining a crude seed extract (3) a step of subjecting the crude seed extract to acid treatment and salting treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a first precipitate;
(4) subjecting the first precipitate to drying treatment and washing treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract and a second supernatant as a second precipitate;
(5) a step of obtaining a triterpenoid-containing seed extract as a third precipitate by subjecting the second supernatant to a standing treatment;
(1)柑橘類の種子を、60vol%~80vol%エタノールを用いた抽出処理に供することにより、種子粗抽出液を得る工程
(2)前記種子粗抽出液を、加水処理及び濃縮処理に供することにより、種子粗抽出物を得る工程
(3)前記種子粗抽出物を、酸処理及び加塩処理に供することにより、第1の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程
(6)前記第1の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第4の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物及び第4の上清を得る工程
(7)前記第4の上清を、乾燥処理、エタノールを用いた溶媒添加処理及び静置処理に供することにより、第5の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程 A method for producing a triterpenoid-containing seed extract, comprising the following steps (1)-(3) and (6)-(7), wherein the triterpenoids are nomirin and limonin.
(1) A step of obtaining a seed crude extract by subjecting citrus seeds to extraction treatment using 60 vol% to 80 vol% ethanol
(2) a step of obtaining a crude seed extract by subjecting the crude seed extract to a hydration treatment and a concentration treatment;
(3) subjecting the crude seed extract to acid treatment and salting treatment to obtain a triterpenoid-containing seed extract as a first precipitate; (6) subjecting the first precipitate to a washing treatment; obtaining a triterpenoid-containing seed extract and a fourth supernatant as a fourth precipitate (7) subjecting the fourth supernatant to drying treatment, solvent addition treatment using ethanol, and standing treatment; obtaining a triterpenoid-containing seed extract as a fifth precipitate by
(8)前記第5の沈殿物を、洗浄処理に供することにより、第6の沈殿物としてトリテルペノイド含有種子抽出物を得る工程 3. The method of claim 2 , further comprising step (8) of:
(8) a step of obtaining a triterpenoid-containing seed extract as a sixth precipitate by subjecting the fifth precipitate to a washing treatment;
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