JP7053231B2 - Algae, nutritional supplements, nutritional component supplementation compositions and methods for producing nutritional components - Google Patents

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Description

IPOD IPOD FERM P-22338FERM P-22338

本発明は、藻類、栄養剤、栄養成分補給用組成物及び栄養成分の製造方法に関する。 The present invention relates to algae, nutritional supplements, nutritional component supplementation compositions, and methods for producing nutritional components.

石油資源の枯渇及び温室効果ガスの削減の面から、バイオマス燃料の開発に高い関心が集まっており、現在、微細藻類から燃料油を生産する研究がなされている(例えば、特許文献1参照)。 From the viewpoint of depletion of petroleum resources and reduction of greenhouse gases, there is a great deal of interest in the development of biomass fuels, and research is currently being conducted to produce fuel oils from microalgae (see, for example, Patent Document 1).

一方で、微細藻類の多くは、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸(Docosahexaenoic acid;DHA)、エイコサペンタエン酸(Eicosapentaenoic acid;EPA)等のω3又はω6不飽和脂肪酸や、アスタキサンチン等の機能性物質を産生し、これらは様々な機能性を有する。そのため、微細藻類の健康及び機能性食品や医薬品等への利用が注目されている。
また、これまでにも、バイオ燃料用油又は機能性物質を産生する微細藻類種が報告されている(例えば、非特許文献1参照)。
On the other hand, most microalgae produce ω3 or ω6 unsaturated fatty acids such as linolenic acid, docosahexaenoic acid (DHA), and eicosapentaenoic acid (EPA), and functional substances such as astaxanthin. These have various functionalities. Therefore, attention is being paid to the use of microalgae in health and functional foods and pharmaceuticals.
In addition, microalgae species that produce biofuel oils or functional substances have been reported so far (see, for example, Non-Patent Document 1).

特開平9-009953号公報Japanese Unexamined Patent Publication No. 9-009953

Cuellar-Bermudez P. S. et al., “Extraction and purification of high-value metabolites from microalgae: essential lipids, astaxanthin and phycobiliproteins.”, Microbial Biotechnology, 8, Minireview, p190-209, 2014.Cuellar-Bermudez P. S. et al., “Extraction and purification of high-value metabolites from microalgae: essential lipids, astaxanthin and phycobiliproteins.”, Microbial Biotechnology, 8, Minireview, p190-209, 2014.

現在、産業的に実用化されている微細藻類は、数種の藻類種に限定されており、炭化水素、機能性油又は機能性物質を産生する新規微細藻種が求められている。 Currently, the microalgae that are industrially put into practical use are limited to several kinds of algae, and there is a demand for new microalgae species that produce hydrocarbons, functional oils, or functional substances.

本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、産業利用が可能な新規微細藻類、該藻類を用いた新規栄養剤、該栄養剤を含む栄養成分補給用組成物、及び前記微細藻類を用いた栄養成分の製造方法を提供する。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and is a novel microalgae that can be industrially used, a novel nutritional supplement using the algae, a nutritional component supplementing composition containing the nutritional supplement, and the microalgae. Provided is a method for producing a nutritional component using.

本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、セネデスムス・エスピー(Scenedesmus sp.)AB-1C株(FERM P-22338)が炭化水素、EPA等の機能性油、及び、アスタキサンチン等のカロテノイド類等の多種の有用物質を産生することを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of diligent research to achieve the above object, the present inventors have found that Scenedesmus sp. AB-1C strain (FERM P-22338) is a hydrocarbon, a functional oil such as EPA, and a functional oil such as EPA. They have found that they produce various useful substances such as carotenoids such as astaxanthin, and have completed the present invention.

すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
本発明の第1態様に係る藻類は、セネデスムス・エスピー(Scenedesmus sp.)AB-1C株(FERM P-22338)である。
That is, the present invention includes the following aspects.
The alga according to the first aspect of the present invention is Scenedesmus sp. AB-1C strain (FERM P-22338).

本発明の第2態様に係る栄養剤は、上記第1態様に係るセネデスムス・エスピーAB-1C株及びその抽出物を含み、前記セネデスムス・エスピーAB-1C株及びその抽出物が栄養成分としてエイコサペンタエン酸を含む。
上記第2態様に係る栄養剤において、前記セネデスムス・エスピーAB-1C株及びその抽出物が栄養成分として、さらに、アスタキサンチンを含んでもよい。
上記第2態様に係る栄養剤において、前記アスタキサンチンの含有量が、前記セネデスムス・エスピーAB-1C株の乾燥重量100gあたり300mg以上600mg以下であってもよい。
The nutritional supplement according to the second aspect of the present invention contains the Senedesmus sp. AB-1C strain and its extract according to the first aspect, and the Senedesmus sp. AB-1C strain and its extract are eicosapentaenoene as a nutritional component. Contains acid.
In the nutritional supplement according to the second aspect, the Senedesmus SP AB-1C strain and its extract may further contain astaxanthin as a nutritional component.
In the nutritional supplement according to the second aspect, the content of astaxanthin may be 300 mg or more and 600 mg or less per 100 g of the dry weight of the Senedesmus SP AB-1C strain.

本発明の第3態様に係る栄養成分補給用組成物は、上記第2態様に係る栄養剤を含む。
上記第3態様に係る栄養成分補給用組成物において、栄養成分として、アスタキサンチン以外のカロテノイド類、リノール酸及びα-リノレン酸からなる群から選択される1種類以上を更に含んでもよい。
記第3態様に係る栄養成分補給用組成物は、食品、機能性食品又は栄養補助食品であってもよい。
記第3態様に係る栄養成分補給用組成物は、飼料又はペットフードであってもよい。
上記第3態様に係る栄養成分補給用組成物は、化粧品であってもよい。
The nutritional component supplementing composition according to the third aspect of the present invention contains the nutritional supplement according to the second aspect.
In the nutritional component supplementing composition according to the third aspect, one or more selected from the group consisting of carotenoids other than astaxanthin , linoleic acid and α-linolenic acid may be further contained as the nutritional component.
The nutritional component supplement composition according to the third aspect may be a food , a functional food, or a dietary supplement .
The nutritional component supplementing composition according to the third aspect may be feed or pet food.
The nutritional component supplementing composition according to the third aspect may be a cosmetic product.

本発明の第4態様に係る栄養成分の製造方法は、上記第1態様に係るセネデスムス・エスピーAB-1C株を培養する培養工程を備える方法である。
上記第4態様に係る栄養成分の製造方法は、更に、前記培養工程の後に、前記セネデスムス・エスピーAB-1C株を破砕して細胞破砕物を得る破砕工程と、前記細胞破砕物から栄養成分を分離する分離工程と、をこの順に備えてもよい。
前記栄養成分が、エイコサペンタエン酸、カロテノイド類、リノール酸及びα-リノレン酸からなる群から選択される1種類以上であってもよい。
前記カロテノイド類がアスタキサンチンであってもよい。
The method for producing a nutritional component according to the fourth aspect of the present invention is a method comprising a culture step for culturing the Senedesmus sp. AB-1C strain according to the first aspect.
The method for producing a nutritional component according to the fourth aspect further comprises, after the culture step, a crushing step of crushing the Senedesmus SP AB-1C strain to obtain a cell crushed product, and a crushing step of obtaining the nutritional component from the cell crushed product. A separation step for separation may be provided in this order.
The nutritional component may be one or more selected from the group consisting of eicosapentaenoic acid, carotenoids, linoleic acid and α-linolenic acid.
The carotenoids may be astaxanthin.

上記態様によれば、産業利用が可能な新規微細藻類、該藻類を用いた新規栄養剤、該栄養剤を含む栄養成分補給用組成物、及び前記微細藻類を用いた栄養成分の製造方法を提供することができる。 According to the above aspect, a novel microalgae that can be industrially used, a novel nutritional supplement using the algae, a nutritional component supplementing composition containing the nutritional supplement, and a method for producing a nutritional component using the microalgae are provided. can do.

セネデスムス・エスピーAB-1C株の顕微鏡写真である。上の画像は、明視野での顕微鏡写真である。下の画像は蛍光での顕微鏡写真である。It is a micrograph of a scenedesmus SP AB-1C strain. The image above is a photomicrograph in the bright field. The image below is a fluorescence micrograph. 18Sリボソームの塩基配列に基づくセネデスムス属及びコエラストレラ属の分子系統樹を示す。既知のセネデスムス・エスピーKi4株及びJB11株を点線で囲み、AB-1C株を実線で囲んだ。The molecular phylogenetic tree of the genus Senedesmus and the genus Coellastrella based on the base sequence of 18S ribosome is shown. The known Senedesmus SP Ki4 strain and JB11 strain are surrounded by a dotted line, and the AB-1C strain is surrounded by a solid line.

≪藻類≫
本発明の一実施形態に係る藻類は、セネデスムス・エスピー(Scenedesmus sp.)AB-1C株(FERM P-22338)(以下、「AB-1C株」と称する場合がある。)である。
≪Algae≫
The algae according to one embodiment of the present invention is Scenedesmus sp. AB-1C strain (FERM P-22338) (hereinafter, may be referred to as "AB-1C strain").

セネデスムス属は、分類学上、緑藻植物門(Chlorophyta)、緑藻網(Chlorophyceae)、ヨコワミドロ目(Sphaeropleales)、イカダモ科(Scenedesmaceae)に分類される。また、セネデスムス属は、イカダモ属とも呼ばれる。イカダモ科に属する藻類は、セネデスムス属の他に、デスモデスムス属(Desmodesmus)及びアクトデスムス属(Acutodesmus)が知られている。イカダモ科に属する藻類は、自然界では、池や湖沼等に広く生育している。 The genus Sphaeropleales is taxonomically classified into the phylum Green algae (Chlorophyta), the green algae (Chlorophyceae), the order Sphaeropleales, and the scenedesmaceae. The genus Senedesmus is also called the genus Scenedesmus. As the algae belonging to the Scenedesmaceae family, in addition to the genus Senedesmus, the genus Desmodesmus and the genus Actodesmus are known. Algae belonging to the Scenedesmaceae family grow widely in ponds and lakes in nature.

AB-1C株は、セネデスムス属に属し、且つ、炭化水素、EPA等の機能性油、及び、アスタキサンチン等のカロテノイド類等の多種の有用物質を産生する。従来、セネデスムス属に属する既知の藻類において、上述のような有用物質を産出することは知られていたが、特にアスタキサンチンを高濃度で産出するものは知られていなかった。なお、セネデスムス属の中で、炭化水素、EPA等の機能性油と共に、カロテノイド類を産出するものと知られていたのは、セネデスムス・オブリック(Scenedesmus obliquu)、及び、セネデスムス・コマレッキ(Scenedesmus komarekii)のみである。そのため、AB-1C株は、炭化水素、EPA等の機能性油と共に、アスタキサンチンを高濃度で産出するという点で、他のセネデスムス属に属する藻類とは区別される。 The AB-1C strain belongs to the genus Senedesmus and produces various useful substances such as hydrocarbons, functional oils such as EPA, and carotenoids such as astaxanthin. Conventionally, it has been known that known algae belonging to the genus Scenedesmus produce useful substances as described above, but those producing astaxanthin at a particularly high concentration have not been known. Among the genus Scenedesmus, those known to produce carotenoids together with functional oils such as hydrocarbons and EPAs are Scenedesmus obliqui and Scenedesmus komarekii. Only. Therefore, the AB-1C strain is distinguished from other algae belonging to the genus Senedesmus in that it produces astaxanthin at a high concentration together with functional oils such as hydrocarbons and EPA.

AB-1C株は、日本国富山県の富山湾神通川の河口表層水より単離された単細胞緑藻である。AB-1C株は、2017年6月27日付で、受託番号NITE P-22338として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター(日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8)に寄託されている。 The AB-1C strain is a unicellular green alga isolated from the estuary surface water of the Jinzu River in Toyama Bay, Toyama Prefecture, Japan. The AB-1C strain was issued on June 27, 2017, under the accession number NITE P-22338, the National Institute of Technology and Evaluation Patent Microorganisms Depositary Center (2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan). Has been deposited in.

AB-1C株は、培養初期では、クロロフィルaを有するため、緑色を呈している。一方、細胞内にてアスタキサンチン等のカロテノイド類が産出され蓄積されるため、培養時間の増加に伴い、橙色を呈する。
細胞の形状及び大きさは、楕円球状又は球状で、大きさの異なるものが混在している。形状の違いは、細胞周期によるものであると推察され、球状のものは、分裂前の母細胞であると考えられる。
細胞の大きさとして具体的には、楕円球状のものでは、平均長径が10.9μm程度、平均短径が8.8μm程度である。また、球状のものでは、平均直径が14.6μm程度である。
The AB-1C strain has a chlorophyll a at the initial stage of culture, and therefore exhibits a green color. On the other hand, since carotenoids such as astaxanthin are produced and accumulated in the cells, they turn orange as the culture time increases.
The shape and size of the cells are elliptical spherical or spherical, and cells of different sizes are mixed. The difference in shape is presumed to be due to the cell cycle, and the spherical one is considered to be the mother cell before division.
Specifically, in the case of an elliptical spherical cell, the average major axis is about 10.9 μm and the average minor axis is about 8.8 μm. The spherical shape has an average diameter of about 14.6 μm.

AB-1C株は、二分裂で増殖する。AB-1C株は、微量の重金属イオン存在下で好適に増殖する。前記重金属イオンとしては、Cu2+、Zn2+、Mn2+、Co2+、Mo2+等が挙げられる。至適温度は約25℃、至適pHは8.4付近である。 The AB-1C strain grows in two divisions. The AB-1C strain preferably grows in the presence of trace amounts of heavy metal ions. Examples of the heavy metal ion include Cu 2+ , Zn 2+ , Mn 2+ , Co 2+ , Mo 2+ and the like. The optimum temperature is about 25 ° C., and the optimum pH is around 8.4.

18S リボソームDNAの塩基配列に基づく分子系統解析の結果、AB-1C株は、セネデスムス属に分類された。AB-1C株の18S リボソームDNAの塩基配列を配列番号1に示す。 As a result of molecular phylogenetic analysis based on the base sequence of 18S ribosomal DNA, the AB-1C strain was classified into the genus Senedesmus. The nucleotide sequence of 18S ribosomal DNA of AB-1C strain is shown in SEQ ID NO: 1.

AB-1C株の近縁種である藻類としては、例えば、18S リボソームDNAの塩基配列が、配列番号1と、90%以上の同一性を有する藻類が挙げられる。該藻類が有する18S リボソームDNAの塩基配列と、配列番号1に記載の塩基配列との同一性は、95%以上であることが好ましく、97%以上であることがより好ましく、98%以上であることがさらに好ましく、99%以上であることが特に好ましい。 Examples of the algae that are closely related to the AB-1C strain include algae having a base sequence of 18S ribosomal DNA having 90% or more identity with SEQ ID NO: 1. The identity of the base sequence of the 18S ribosomal DNA possessed by the algae with the base sequence set forth in SEQ ID NO: 1 is preferably 95% or more, more preferably 97% or more, and more preferably 98% or more. It is more preferable, and 99% or more is particularly preferable.

なお、塩基配列同士の同一性(相同性)は、2つの塩基配列を、対応する塩基が最も多く一致するように、挿入及び欠失に当たる部分にギャップを入れながら並置し、得られたアラインメント中のギャップを除く塩基配列全体に対する一致した塩基の割合として求められる。塩基配列同士の同一性は、当該技術分野で公知の各種相同性検索ソフトウェアを用いて求めることができる。例えば、塩基配列の同一性の値は、公知の相同性検索ソフトウェアBLASTnにより得られたアライメントを元にした計算によって得ることができる。 In addition, the identity (homosphere) between the base sequences is obtained by juxtaposing the two base sequences with a gap in the portion corresponding to the insertion and deletion so that the corresponding bases match most. It is calculated as the ratio of matching bases to the entire base sequence excluding the gap of. The identity between the base sequences can be determined by using various homology search software known in the art. For example, the identity value of the base sequence can be obtained by calculation based on the alignment obtained by the known homology search software BLASTn.

また、藻類が有する18S リボソームDNAの塩基配列は、公知の方法により得ることができる。例えば、対象とする藻類の細胞から公知の方法によりDNAを抽出し、PCR法等により18S リボソームDNAのDNA断片を増幅する。次に、増幅したDNA断片の塩基配列をDNAシーケンサーで解析することにより、対象とする藻類の18S リボソームDNAの塩基配列を得ることができる。18S リボソームDNAを増幅するためのプライマーとしては、例えば、本明細書の実施例で用いたプライマー等が挙げられる。 Further, the base sequence of 18S ribosomal DNA possessed by algae can be obtained by a known method. For example, DNA is extracted from target algae cells by a known method, and a DNA fragment of 18S ribosomal DNA is amplified by a PCR method or the like. Next, by analyzing the base sequence of the amplified DNA fragment with a DNA sequencer, the base sequence of 18S ribosomal DNA of the target algae can be obtained. Examples of the primer for amplifying 18S ribosomal DNA include the primers used in the examples of the present specification.

また、本実施形態の藻類としては、AB-1C株の変異株も好適な例として挙げられる。
本明細書において、「変異株」とは、自然発生的又は人為的に、元の藻類株のゲノム(核ゲノム、葉緑体ゲノム、ミトコンドリアゲノムを含む。以下、同じ。)に変異が生じた藻類株を意味する。ゲノムに変異を生じさせる人為的手法は、特に限定されず、紫外線照射、放射線照射、亜硝酸等による化学的処理;遺伝子導入、ゲノム編集等の遺伝子工学的手法等を例示することができる。
Further, as the algae of the present embodiment, a mutant strain of AB-1C strain is also mentioned as a suitable example.
As used herein, the term "variant strain" means that the genome of the original algae strain (including nuclear genome, chloroplast genome, mitochondrial genome, hereinafter the same) is spontaneously or artificially mutated. Means an algae strain. The artificial method for causing a mutation in the genome is not particularly limited, and examples thereof include chemical treatment with ultraviolet irradiation, irradiation, nitrite and the like; genetic engineering methods such as gene transfer and genome editing.

なお、本明細書において、「AB-1C株の変異株」とは、AB-1C株のゲノムに変異が生じた藻類株であって、AB-1C株が有する栄養成分組成と類似の栄養成分組成を有する藻類株を指す。例えば、総カロテノイド類の含有量が、AB-1C株の乾燥重量100gあたり400mg以上1000mg以下であってもよく、450mg以上900mg以下であってもよく、500mg以上800mg以下であってもよい。 In the present specification, the "variant strain of AB-1C strain" is an algae strain in which the genome of AB-1C strain is mutated, and has a nutritional component similar to that of AB-1C strain. Refers to an algae strain having a composition. For example, the total carotenoid content may be 400 mg or more and 1000 mg or less, 450 mg or more and 900 mg or less, or 500 mg or more and 800 mg or less per 100 g of the dry weight of the AB-1C strain.

また、例えば、アスタキサンチンの含有量が、AB-1C株の乾燥重量100gあたり50mg以上800mg以下であってもよく、300mg以上600mg以下であってもよく、350mg以上550mg以下であってもよい。 Further, for example, the content of astaxanthin may be 50 mg or more and 800 mg or less, 300 mg or more and 600 mg or less, or 350 mg or more and 550 mg or less per 100 g of the dry weight of the AB-1C strain.

AB-1C株の変異株としては、AB-1C株の全ゲノムに対する変異の割合が、全ゲノム中の10%以下であることが好ましく、5%以下であることがより好ましく、3%以下であることがさらに好ましく、2%以下又は1%以下であることが特に好ましい。 As the mutant strain of AB-1C strain, the ratio of mutation to the whole genome of AB-1C strain is preferably 10% or less, more preferably 5% or less, and 3% or less. It is more preferably present, and particularly preferably 2% or less or 1% or less.

本実施形態の藻類は、中温環境(15~35℃)、弱塩基性(pH7.8~8.8)条件下において、増殖可能である。そのため、地域や季節に応じて培養条件を変更することも可能であり、屋外大量培養に適している。
さらに、高塩耐性もあり、海水等の高塩条件下(500mM NaCl等)でも増殖可能である。また、光強度としては、3500~5000luxの範囲で増殖することができ、強光下でも増殖可能である。
The algae of this embodiment can grow under medium temperature environment (15 to 35 ° C.) and weakly basic (pH 7.8 to 8.8) conditions. Therefore, it is possible to change the culture conditions according to the region and season, and it is suitable for outdoor mass culture.
Furthermore, it has high salt tolerance and can grow even under high salt conditions such as seawater (500 mM NaCl, etc.). Further, the light intensity can be grown in the range of 3500 to 5000 lux, and can be grown even under strong light.

本実施形態の藻類は、燃料油となり得る炭化水素、及び、アミノ酸類、ビタミン類(特に、アスタキサンチン等のカロテノイド類)、タンパク質、脂質(特に、EPA等の機能性油)、食物繊維等の栄養成分を豊富に含有する。 The algae of the present embodiment include hydrocarbons that can be fuel oils, and nutrients such as amino acids, vitamins (particularly carotenoids such as astaxanthin), proteins, lipids (particularly functional oils such as EPA), and dietary fiber. Rich in ingredients.

特に、後述する実施例で示すように、アスタキサンチンは、従来のアスタキサンチン産生藻類として知られているモノラフィディウム・エスピー(Monoraphidium sp.) GK-12株と比較しても、高濃度に含有することが確認されている。また、従来から利用されている藻類(ヘマトコッカス)と比較しても、多種の機能性油(EPA、α-リノレン酸及びリノール酸)及びカロテノイド類(アスタキサンチン、カンタキサンチン、β-カロテン及びルテイン)を含有することが確認されている。 In particular, as shown in Examples described later, astaxanthin is contained in a high concentration even as compared with the Monorapidium sp. GK-12 strain known as a conventional astaxanthin-producing algae. It has been confirmed. In addition, various functional oils (EPA, α-linolenic acid and linoleic acid) and carotenoids (astaxanthin, canthaxanthin, β-carotene and lutein) are compared with the conventionally used algae (hematococcus). Has been confirmed to contain.

なお、本明細書において、「機能性油」とは、中性脂肪低下作用、認知機能改善効果、血中コレステロール低下作用等の機能を有する食用油を意味する。機能性油として具体的には、例えば、ドコサヘキサエン酸(Docosahexaenoic acid;DHA)、エイコサペンタエン酸(Eicosapentaenoic acid;EPA)、α-リノレン酸等のω3脂肪酸、リノール酸、アラキドン酸等のω6脂肪酸等が挙げられる。 In the present specification, the "functional oil" means an edible oil having functions such as a neutral fat lowering effect, a cognitive function improving effect, and a blood cholesterol lowering effect. Specific examples of the functional oil include ω3 fatty acids such as docosahexaenoic acid (DHA), eicosapentaenoic acid (EPA), α-linolenic acid, and ω6 fatty acids such as linolenic acid and arachidonic acid. Can be mentioned.

本実施形態の藻類は、後述の実施例に示すように、機能性油として、EPA、α-リノレン酸、リノール酸等を含有する。 The algae of this embodiment contain EPA, α-linolenic acid, linoleic acid and the like as functional oils, as shown in Examples described later.

また、本明細書において、「カロテノイド類」とは、黄、橙、赤色等を示す天然色素の一群を意味する。カロテノイド類として具体的には、例えば、α-カロテン、β-カロテン、γ-カロテン、δ-カロテン、リコペン、ε-カロテン等のカロテン類;ルテイン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、フコキサンチン、アスタキサンチン、アンテラキサンチン、ビオラキサンチン等のキサントフィル類等が挙げられる。
本実施形態の藻類は、後述の実施例に示すように、カロテノイド類として、アスタキサンチン、カンタキサンチン、β-カロテン、ルテイン等を含有する。
Further, in the present specification, "carotenoids" means a group of natural pigments showing yellow, orange, red and the like. Specific examples of carotenoids include carotenes such as α-carotene, β-carotene, γ-carotene, δ-carotene, lycopene, and ε-carotene; , Xanthophylls such as violaxanthin and the like.
The algae of this embodiment contain astaxanthin, canthaxanthin, β-carotene, lutein and the like as carotenoids, as shown in Examples described later.

本実施形態の藻類は、燃料油となり得る炭化水素を含有する。そのため、本実施形態の藻類を用いて、バイオマス燃料を製造することができる。 The algae of this embodiment contain a hydrocarbon that can be a fuel oil. Therefore, the biomass fuel can be produced by using the algae of the present embodiment.

さらに、本実施形態の藻類は、EPA等の機能性油、及び、アスタキサンチン等のカロテノイド類等の多種の栄養成分を含有する。そのため、本実施形態の藻類が、後述する栄養剤としてヒト又はヒト以外の動物に摂取された場合に、上記のような栄養成分が体内に吸収され得る。また、本実施形態の藻類から、適宜、栄養成分を含む抽出物を調製することができる。 Furthermore, the algae of the present embodiment contain various nutritional components such as functional oils such as EPA and carotenoids such as astaxanthin. Therefore, when the algae of the present embodiment are ingested by humans or non-human animals as a nutritional supplement described later, the above-mentioned nutritional components can be absorbed into the body. In addition, an extract containing a nutritional component can be appropriately prepared from the algae of the present embodiment.

本実施形態の藻類は、微細藻類培養用の培地を用いて培養することができる。培地としては、特に限定されないが、窒素源、リン源、微量元素(亜鉛、ホウ素、コバルト、銅、マンガン、モリブデン、鉄等)等を含む無機塩培地が例示される。例えば、窒素源としては、アンモニウム塩、硝酸塩、亜硝酸塩、尿素、アミン類等が挙げられる。また、リン源としては、リン酸塩等が挙げられる。 The algae of the present embodiment can be cultivated using a medium for culturing microalgae. The medium is not particularly limited, and examples thereof include an inorganic salt medium containing a nitrogen source, a phosphorus source, trace elements (zinc, boron, cobalt, copper, manganese, molybdenum, iron, etc.) and the like. For example, examples of the nitrogen source include ammonium salts, nitrates, nitrites, ureas, amines and the like. Further, examples of the phosphorus source include phosphates and the like.

上記培地として具体的には、例えば、SGI培地(参考文献1:SAGER R, GRANICK S. “Nutritional studies with Chlamydomonas reinhardi.”, Ann N Y Acad Sci., vol. 56, No. 5, p.831-838, 1953.)、TAP培地(参考文献2:Gorman, D. S. and Levine, R. P., “Cytochrome f and plastocyanin: their sequence in the photosynthetic electron transport chain of Chlamydomonas reinhardi.”, Proc Natl Acad Sci U S A, Vol. 54, No. 6, p1665-1669, 1965.)等が挙げられる。 Specifically, as the above-mentioned medium, for example, SGI medium (Reference 1: SAGER R, GRANICK S. “Nutritional studies with Chlamydomonas reinhardi.”, Ann NY Acad Sci., Vol. 56, No. 5, p.831- 838, 1953.), TAP Medium (Reference 2: Gorman, D.S. and Levine, R.P., “Cytochrome f and plastocyanin: their sequence in the photosynthetic electron transport chain of Chlamydomonas reinhardi.”, Proc Natl Acad Sci USA, Vol. 54 , No. 6, p1665-1669, 1965.).

本実施形態の藻類は、上記のとおり、比較的幅広い培養条件で増殖させることができる。pH条件としては、pH7.8~10.0を例示することができ、pH8.0~8.6が好ましい。 As described above, the algae of the present embodiment can be grown under a relatively wide range of culture conditions. As the pH condition, pH 7.8 to 10.0 can be exemplified, and pH 8.0 to 8.6 is preferable.

温度条件としては、15~35℃を例示することができ、20~30℃が好ましい。 As the temperature condition, 15 to 35 ° C. can be exemplified, and 20 to 30 ° C. is preferable.

光強度としては、3500~5000luxを例示することができ、4000~4500luxが好ましい。屋外で培養する場合には、太陽光下で培養すればよい。室内で培養する場合には、連続光で培養してもよく、明暗周期(12L:12D等)を設けてもよい。 As the light intensity, 3500 to 5000 lux can be exemplified, and 4000 to 4500 lux is preferable. When culturing outdoors, it may be cultivated in sunlight. When culturing indoors, culturing may be performed with continuous light, or a light-dark cycle (12L: 12D, etc.) may be provided.

本実施形態の藻類は、上記のように、栄養成分を豊富に含み、屋外大量培養に適しているため、後述する栄養剤として産業利用することができる。また、本実施形態の藻類から栄養成分を抽出することができ、そのままヒト又はヒト以外の動物に摂取された場合でも、栄養成分が体内に吸収され得る。 As described above, the algae of the present embodiment contain abundant nutritional components and are suitable for outdoor mass culture, and therefore can be industrially used as a nutritional supplement described later. In addition, the nutritional component can be extracted from the algae of the present embodiment, and the nutritional component can be absorbed into the body even when ingested as it is by a human or a non-human animal.

≪栄養剤≫
本発明の一実施形態に係る栄養剤は、上記実施形態のセネデスムス・エスピーAB-1C株又はその抽出物を含む。
≪Nutrition ≫
The nutritional supplement according to one embodiment of the present invention includes the Senedesmus sp. AB-1C strain of the above-mentioned embodiment or an extract thereof.

本実施形態の栄養剤が含む藻類は、上記実施形態の藻類である。すなわち、AB-1C株及びその変異株(以下、「本藻類」という。)である。本実施形態の栄養剤に含まれる本藻類の好ましい例としては、上記で例示したものと同様である。
本藻類は、適切な培地を用いて培養して増殖させ、遠心分離やろ過等の公知の方法により回収し、適宜、洗浄、乾燥等を行って、本実施形態の栄養剤に用いることができる。
The algae contained in the nutritional supplement of the present embodiment are the algae of the above-mentioned embodiment. That is, the AB-1C strain and its mutant strain (hereinafter referred to as "this algae"). Preferred examples of the algae contained in the nutritional supplement of the present embodiment are the same as those exemplified above.
The algae can be used as the nutritional supplement of the present embodiment by culturing and growing them in an appropriate medium, recovering them by a known method such as centrifugation or filtration, and appropriately washing and drying them. ..

また、本実施形態の栄養剤は、本藻類に替えて、又は本藻類と共に、本藻類の抽出物を含んでいてもよい。
本明細書において、「本藻類の抽出物」とは、本藻類の細胞に対して、物理的処理又は化学的処理を行って、細胞内の成分を抽出したものをいう。例えば、本藻類の抽出物は、物理的処理又は化学的処理によって、本藻類の細胞を破砕した細胞破砕物であってもよい。また、本藻類の抽出物は、前記細胞破砕物を濃縮したものであってもよく、前記細胞破砕物から固形分を除去したものであってもよく、前記細胞破砕物から一部の成分を分離したものであってもよい。
In addition, the nutritional supplement of the present embodiment may contain an extract of the algae in place of the algae or together with the algae.
As used herein, the term "extract of the algae" refers to the cells of the algae that have been physically or chemically treated to extract the intracellular components. For example, the extract of the algae may be a cell crushed product obtained by disrupting the cells of the algae by physical treatment or chemical treatment. Further, the extract of the algae may be one in which the cell crushed product is concentrated, or the product in which the solid content is removed from the cell crushed product, and some components are added from the cell crushed product. It may be separated.

細胞に対する物理的処理又は化学的処理の方法は、特に限定されず、細胞の破砕に一般的に用いられる方法を用いることができる。物理的処理としては、例えば、ガラスビーズ、乳鉢、超音波処理、フレンチプレス、ホモジナイザー等による細胞破砕が挙げられる。化学的処理としては、例えば、中和処理、低張処理、凍結融解処理等が挙げられる。
細胞破砕物を濃縮する場合、濃縮方法は特に限定されず、一般的に用いられる濃縮方法を用いればよい。細胞破砕物の濃縮方法としては、例えば、乾燥、凍結乾燥、減圧乾燥等が挙げられる。
また、細胞破砕物から固形分を除去する場合、固形分の除去方法は特に限定されず、固形分の除去等に一般的に用いられる方法を用いることができる。固形分の除去方法としては、例えば、ろ過、遠心分離等が挙げられる。
細胞破砕物から一部の成分を分離する場合、分離方法は特に限定されず、生化学物質の分離及び精製等に一般的に用いられる方法を用いることができる。分離方法としては、例えば、塩析、透析、溶媒抽出、吸着、各種クロマトグラフィー(ガスクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー等)等が挙げられる。これらの方法は、単独で用いてもよく、2以上の処理を組み合わせて用いてもよい。ただし、単一の成分に精製されたものは、「本藻類の抽出物」からは除かれる。本藻類の抽出物は、好ましくは、本藻類の細胞成分を2種以上、より好ましくは4種以上、さらに好ましくは6種以上含む。
The method of physical treatment or chemical treatment of cells is not particularly limited, and methods generally used for cell disruption can be used. Examples of the physical treatment include cell disruption using glass beads, a mortar, ultrasonic treatment, a French press, a homogenizer, and the like. Examples of the chemical treatment include a neutralization treatment, a hypotonic treatment, a freeze-thaw treatment, and the like.
When concentrating the cell disrupted product, the concentration method is not particularly limited, and a generally used concentration method may be used. Examples of the method for concentrating the cell disrupted product include drying, freeze-drying, vacuum-drying and the like.
Further, when the solid content is removed from the cell crushed product, the method for removing the solid content is not particularly limited, and a method generally used for removing the solid content or the like can be used. Examples of the method for removing the solid content include filtration, centrifugation and the like.
When separating a part of the components from the cell disrupted product, the separation method is not particularly limited, and a method generally used for separation and purification of biochemical substances can be used. Examples of the separation method include salting out, dialysis, solvent extraction, adsorption, various types of chromatography (gas chromatography, thin layer chromatography, ion exchange chromatography, high performance liquid chromatography, adsorption chromatography, etc.) and the like. These methods may be used alone or in combination of two or more treatments. However, those purified into a single component are excluded from the "extract of this algae". The extract of this alga preferably contains 2 or more types of cellular components of this alga, more preferably 4 or more types, and further preferably 6 or more types.

上記のとおり、本藻類は、機能性油、カロテノイド類等の栄養成分を多く含むため、本藻類の抽出物も同様に、機能性油、カロテノイド類等の栄養成分を多く含む。そのため、本実施形態の栄養剤として用いることができる。 As described above, since the algae contain a large amount of nutritional components such as functional oils and carotenoids, the extract of the algae also contains a large amount of nutritional components such as functional oils and carotenoids. Therefore, it can be used as a nutritional supplement of the present embodiment.

本実施形態の栄養剤は、本藻類又はその抽出物に加えて、適宜、他の成分を含んでいてもよい。他の成分としては、特に限定されないが、薬学的に許容される担体等が挙げられる。
なお、「薬学的に許容される担体」とは、本藻類が含む栄養成分の機能を阻害せず、且つ、その投与対象に対して実質的な毒性を示さない担体を意味する。
また、「実質的な毒性を示さない」とは、その成分が通常使用される投与量において、投与対象に対して毒性を示さないことを意味する。
薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、乳化剤、安定剤、希釈剤、油性基剤、増粘剤、酸化防止剤、還元剤、酸化剤、キレート剤、溶媒等が挙げられる。薬学的に許容される担体は、1種を単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。
The nutritional supplement of the present embodiment may contain other components as appropriate in addition to the algae or an extract thereof. Examples of other components include, but are not limited to, pharmaceutically acceptable carriers and the like.
The "pharmaceutically acceptable carrier" means a carrier that does not inhibit the function of the nutritional component contained in the algae and does not show substantial toxicity to the administration target thereof.
Further, "does not show substantial toxicity" means that the component does not show toxicity to the administration subject at the dose normally used.
The pharmaceutically acceptable carrier is not particularly limited, and is, for example, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, an emulsifier, a stabilizer, a diluent, an oily base, a thickener, and an antioxidant. , Reducing agents, oxidizing agents, chelating agents, solvents and the like. As the pharmaceutically acceptable carrier, one type may be used alone, or two or more types may be used in combination.

本実施形態の栄養剤における本藻類又はその抽出物の含有量は、特に限定されず、例えば、1~100質量%の範囲で適宜選択可能である。本実施形態の栄養剤における本藻類又はその抽出物の含有量としては、50~100質量%が好ましく、60~99質量%がより好ましく、70~99質量%がさらに好ましい。
本藻類又はその抽出物は、適宜他の成分と混合し、定法に従って、乾燥粉末、顆粒剤、錠剤、ゼリー剤、液剤、カプセル剤等の形態とすることができる。
The content of the algae or its extract in the nutritional supplement of the present embodiment is not particularly limited, and can be appropriately selected in the range of, for example, 1 to 100% by mass. The content of the algae or its extract in the nutritional supplement of the present embodiment is preferably 50 to 100% by mass, more preferably 60 to 99% by mass, still more preferably 70 to 99% by mass.
The algae or its extract can be appropriately mixed with other components to form dry powder, granules, tablets, jellies, liquids, capsules and the like according to a conventional method.

本実施形態の栄養剤は、機能性油やカロテノイド類等の栄養成分を多く含むため、栄養剤としてヒトやヒト以外の動物に使用することができる。本実施形態の栄養剤により供給される栄養成分としては、アミノ酸類、ビタミン類(特に、カロテノイド類)、タンパク質、脂質(特に、機能性油)、食物繊維等が例示される。中でも、本実施形態の栄養剤は、機能性油(EPA、α-リノレン酸、リノール酸等)、カロテノイド類(アスタキサンチン、カンタキサンチン、β-カロテン、ルテイン等)を補給するために、好適に用いることができる。
本実施形態の栄養剤は、特に、EPA、アスタキサンチンを補給するために、好適に用いることができる。
Since the nutritional supplement of the present embodiment contains a large amount of nutritional components such as functional oils and carotenoids, it can be used as a nutritional supplement for humans and animals other than humans. Examples of the nutritional component supplied by the nutritional supplement of the present embodiment include amino acids, vitamins (particularly carotenoids), proteins, lipids (particularly functional oils), dietary fiber and the like. Above all, the nutritional supplement of the present embodiment is suitably used for supplementing functional oils (EPA, α-linolenic acid, linoleic acid, etc.) and carotenoids (astaxanthin, canthaxanthin, β-carotene, lutein, etc.). be able to.
The nutritional supplement of the present embodiment can be suitably used, in particular, for supplementing EPA and astaxanthin.

また、本実施形態の栄養剤は、後述する栄養成分補給用組成物に配合して用いてもよい。本実施形態の栄養剤を配合することにより、機能性油、カロテノイド類等の栄養成分を豊富に含む組成物を調製することができる。 Moreover, the nutritional supplement of this embodiment may be blended and used in the composition for supplementing nutritional components described later. By blending the nutritional supplement of the present embodiment, a composition rich in nutritional components such as functional oils and carotenoids can be prepared.

≪栄養成分補給用組成物≫
本発明の一実施形態に係る栄養成分補給用組成物は、上記実施形態の栄養剤を含む。
≪Nutrition ingredient supplement composition≫
The nutritional component supplementing composition according to one embodiment of the present invention contains the nutritional supplement of the above embodiment.

本明細書において、「栄養成分補給用組成物」とは、ヒト又はヒト以外の動物が栄養成分を体内に取り入れるために用いられる組成物をいう。栄養成分の体内への取り込みは、経口的なものであってもよく、非経口的なものであってもよい。 As used herein, the term "nutrition component supplementing composition" refers to a composition used by a human or a non-human animal to take in a nutritional component into the body. The uptake of nutritional components into the body may be oral or parenteral.

本実施形態の栄養成分補給用組成物が含む栄養成分としては、アミノ酸類、ビタミン類(特に、アスタキサンチン等のカロテノイド類)、タンパク質、脂質(特に、EPA、α-リノレン酸、リノール酸等の機能性油)及び食物繊維等が挙げられる。これらの成分は、上述の栄養剤が多く含む栄養成分である。これらの中でも、本実施形態の栄養成分補給用組成物は、機能性油、カロテノイド類を多く含む点に特徴がある。
特に、機能性油の中では、EPAを多く含む点に特徴があり、カロテノイド類の中では、アスタキサンチンを多く含む点に特徴がある。
例えば、EPAは、中性脂肪低下作用を有することが知られている。また、アスタキサンチンは、抗酸化作用を有することが知られている。
したがって、本実施形態の栄養成分補給用組成物を摂取することにより、上記のような栄養成分が有する体調改善効果等を得ることができる。
The nutritional components included in the nutritional component supplementing composition of the present embodiment include functions of amino acids, vitamins (particularly carotenoids such as astaxanthin), proteins, lipids (particularly EPA, α-linolenic acid, linoleic acid and the like). (Sexual oil) and dietary fiber. These components are nutritional components contained in a large amount of the above-mentioned nutritional supplements. Among these, the nutritional component supplementing composition of the present embodiment is characterized in that it contains a large amount of functional oils and carotenoids.
In particular, functional oils are characterized by containing a large amount of EPA, and carotenoids are characterized by containing a large amount of astaxanthin.
For example, EPA is known to have a triglyceride lowering effect. In addition, astaxanthin is known to have an antioxidant effect.
Therefore, by ingesting the nutritional component supplementing composition of the present embodiment, the physical condition improving effect and the like possessed by the nutritional component as described above can be obtained.

本実施形態の栄養成分補給用組成物は、ヒト又はヒト以外の動物が栄養成分を体内に取り入れるために用いられるものであれば、特に限定されない。本実施形態の栄養成分補給用組成物としては、例えば、食品、飼料、ペットフード、化粧品等が挙げられる。 The nutritional component supplementing composition of the present embodiment is not particularly limited as long as it is used by a human or a non-human animal to take in the nutritional component into the body. Examples of the nutritional component supplementing composition of the present embodiment include foods, feeds, pet foods, cosmetics and the like.

<食品>
本実施形態の栄養成分補給用組成物は、食品であってもよい。
本実施形態の栄養成分補給用組成物が食品である場合、上述の栄養剤は、食品添加剤として、食品に添加されてもよい。上述の栄養剤を食品に添加することにより、上述の栄養剤が含む栄養成分が強化された食品を調製することができる。そのため、本発明の一実施形態に係る食品添加剤は、本藻類又はその抽出物を含む。
本実施形態の食品は、上述の栄養剤を食品原料に添加し、適宜他の食品添加物を添加して、食品の種類に応じた既知の方法に従って、製造することができる。
<Food>
The nutritional component supplement composition of the present embodiment may be a food.
When the nutritional component supplementing composition of the present embodiment is a food product, the above-mentioned nutritional supplement may be added to the food product as a food additive. By adding the above-mentioned nutritional supplement to a food, it is possible to prepare a food product in which the nutritional component contained in the above-mentioned nutritional supplement is fortified. Therefore, the food additive according to the embodiment of the present invention includes the algae or an extract thereof.
The food of the present embodiment can be produced according to a known method according to the type of food by adding the above-mentioned nutritional supplement to the food raw material and adding other food additives as appropriate.

本実施形態の食品において、食品の種類は特に限定されない。食品としては、例えば、そば、うどん、はるさめ、中華麺、即席麺、カップ麺等の各種の麺類;パン、小麦粉、米粉、ホットケーキ、マッシュポテト等の炭水化物類;青汁、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、野菜飲料、乳酸飲料、乳飲料、スポーツ飲料、茶、コーヒー等の飲料;豆腐、おから、納豆などの豆製品;カレールー、シチュールー、インスタントスープ等の各種スープ類;アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓類;飴、クッキー、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、その他の焼き菓子等の菓子類;かまぼこ、はんぺん、ハム、ソーセージなどの水産又は畜産加工食品;加工乳、発酵乳、バター、チーズ、ヨーグルト等の乳製品;サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品;ソース、ドレッシング、味噌、醤油、たれ等の調味料;各種レトルト食品、ふりかけ、漬物等のその他加工食品等を挙げることができるが、これらに限定されない。 In the food of the present embodiment, the type of food is not particularly limited. Foods include, for example, various noodles such as buckwheat, udon, harusame, Chinese noodles, instant noodles, cup noodles; carbohydrates such as bread, wheat flour, rice flour, hot cakes, mashed potatoes; green juice, soft drinks, carbonated drinks, etc. Beverages such as nutritional drinks, fruit drinks, vegetable drinks, lactic acid drinks, milk drinks, sports drinks, tea and coffee; bean products such as tofu, okara and natto; various soups such as curry roux, stew roux and instant soup; ice cream Cold confectionery such as cream, ice sherbet, shaved ice; confectionery such as candy, cookies, candy, gum, chocolate, tablet confectionery, snack confectionery, biscuits, jelly, jam, cream, and other baked confectionery; Fisheries or processed livestock foods such as; processed milk, fermented milk, butter, cheese, yogurt and other dairy products; salad oil, tempura oil, margarine, mayonnaise, shortening, whipped cream, dressing and other fats and oils and fat processed foods; sauces, dressings , Miso, soy sauce, sauce and other seasonings; various retort foods, sprinkles, other processed foods such as pickles, etc. can be mentioned, but are not limited thereto.

上記のような食品において、上述の栄養剤の含有量は特に限定されず、食品の種類に応じて適宜含有量を設定すればよい。例えば、食品の風味等を考慮し、食品における上述の栄養剤の含有量は、本藻類又はその抽出物の含有量として、0.01~30質量%を例示することができる。食品の風味等の観点からは、0.05~20質量%が好ましく、0.1~15質量%がより好ましく、0.1~10質量%がさらに好ましく、0.1~5質量%が特に好ましい。 In the above-mentioned foods, the content of the above-mentioned nutritional supplement is not particularly limited, and the content may be appropriately set according to the type of food. For example, in consideration of the flavor of the food, the content of the above-mentioned nutritional supplement in the food may be 0.01 to 30% by mass as the content of the algae or its extract. From the viewpoint of food flavor and the like, 0.05 to 20% by mass is preferable, 0.1 to 15% by mass is more preferable, 0.1 to 10% by mass is further preferable, and 0.1 to 5% by mass is particularly preferable. preferable.

あるいは、本実施形態の栄養成分補給用組成物は、機能性食品又は栄養補助食品であってもよい。機能性食品又は栄養補助食品は、上述のような一般的な食品の形態であってもよく、乾燥粉末、顆粒剤、錠剤、ゼリー剤、ドリンク剤等の形態であってもよい。この場合、上述の栄養剤と、適宜他の成分とを混合して、定法に従って、乾燥粉末、顆粒剤、錠剤、ゼリー剤、ドリンク剤等の形態とすることができる。
他の成分としては、特に限定されず、例えば、薬学的に許容される担体等が例示される。薬学的に許容される担体としては、上記の≪栄養剤≫で挙げたものと同様のものが挙げられる。また、風味等を改善するために、甘味剤、矯味剤、各種調味料、香料、油脂類、その他の食品添加物等を他の成分として用いてもよい。他の成分は、1種を単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。
Alternatively, the nutritional supplement composition of the present embodiment may be a functional food or a dietary supplement. The functional food or dietary supplement may be in the form of a general food as described above, or may be in the form of a dry powder, granules, tablets, jellies, drinks and the like. In this case, the above-mentioned nutritional supplement and other components may be mixed as appropriate to form a dry powder, granules, tablets, jelly preparation, drink preparation or the like according to a conventional method.
The other components are not particularly limited, and examples thereof include pharmaceutically acceptable carriers. Examples of the pharmaceutically acceptable carrier include the same carriers as those mentioned in the above-mentioned << nutritional supplement >>. Further, in order to improve the flavor and the like, sweeteners, flavoring agents, various seasonings, flavors, oils and fats, other food additives and the like may be used as other ingredients. As for the other components, one type may be used alone, or two or more types may be used in combination.

上記のような機能性食品又は栄養補助食品において、上述の栄養剤の含有量は特に限定されず、機能性食品又は栄養補助食品の種類に応じて適宜含有量を設定すればよい。例えば、機能性食品又は栄養補助食品が乾燥粉末、顆粒剤、錠剤等の形態である場合、当該機能性食品又は栄養補助食品における上述の栄養剤の含有量は、本藻類又はその抽出物の含有量として、0.1~99質量%が例示される。風味及び栄養成分の効率的補給の観点からは、1~90質量%が好ましく、10~85質量%がより好ましく、20~85質量%がさらに好ましく、25~85質量%が特に好ましい。また、機能性食品又は栄養補助食品がゼリー剤、ドリンク剤等の形態である場合、該機能性食品又は栄養補助食品における上述の栄養剤の含有量は、本藻類又はその抽出物の含有量として、0.05~80質量%が例示される。風味及び栄養成分の効率的補給の観点からは、1~75質量%が好ましく、10~70質量%がより好ましく、15~70質量%がさらに好ましく、20~70質量%が特に好ましい。 In the above-mentioned functional foods or dietary supplements, the content of the above-mentioned nutritional supplements is not particularly limited, and the content may be appropriately set according to the type of the functional food or the dietary supplement. For example, when the functional food or dietary supplement is in the form of dry powder, granules, tablets, etc., the content of the above-mentioned nutritional supplement in the functional food or dietary supplement is the content of the algae or its extract. The amount is exemplified by 0.1 to 99% by mass. From the viewpoint of efficient supplementation of flavor and nutritional components, 1 to 90% by mass is preferable, 10 to 85% by mass is more preferable, 20 to 85% by mass is further preferable, and 25 to 85% by mass is particularly preferable. When the functional food or dietary supplement is in the form of a jelly or drink, the content of the above-mentioned nutritional supplement in the functional food or dietary supplement is the content of the algae or its extract. , 0.05-80% by mass is exemplified. From the viewpoint of efficient supplementation of flavor and nutritional components, 1 to 75% by mass is preferable, 10 to 70% by mass is more preferable, 15 to 70% by mass is further preferable, and 20 to 70% by mass is particularly preferable.

本実施形態の食品は、本藻類が含有する上述のような栄養成分を効率的に補給するために、摂取することができる。 The food of the present embodiment can be ingested in order to efficiently replenish the above-mentioned nutritional components contained in the algae.

<飼料、ペットフード>
本実施形態の栄養成分補給用組成物は、飼料又はペットフードであってもよい。
本実施形態の栄養成分補給用組成物が飼料又はペットフードである場合、上述の栄養剤は、飼料添加剤又はペットフード添加剤として、飼料又はペットフードに添加されてもよい。上述の栄養剤を飼料又はペットフードに添加することにより、上述の栄養剤が含む栄養成分が強化された飼料又はペットフードを調製することができる。そのため、本発明の一実施形態に係る飼料添加剤又はペットフード添加剤は、本藻類又はその抽出物を含む。
<Feed, pet food>
The nutritional component supplementing composition of the present embodiment may be feed or pet food.
When the nutritional component supplementing composition of the present embodiment is a feed or pet food, the above-mentioned nutritional supplement may be added to the feed or pet food as a feed additive or pet food additive. By adding the above-mentioned nutritional supplement to the feed or pet food, a feed or pet food enriched with the nutritional components contained in the above-mentioned nutritional supplement can be prepared. Therefore, the feed additive or pet food additive according to the embodiment of the present invention includes the algae or an extract thereof.

本実施形態の飼料又はペットフードは、上述の栄養剤を飼料原料又はペットフード原料に添加し、適宜他の飼料添加物又はペットフード添加物を添加して、飼料原料又はペットフードの種類に応じた既知の方法に従って、製造することができる。 In the feed or pet food of the present embodiment, the above-mentioned nutritional supplement is added to the feed raw material or pet food raw material, and other feed additives or pet food additives are appropriately added, depending on the type of feed raw material or pet food. It can be manufactured according to a known method.

本実施形態の飼料又はペットフードが与えられる動物の種類は特に限定されない。例えば、家畜類(牛、豚、鶏、馬、ヒツジ、ヤギ等)、魚類、貝類、愛玩動物(イヌ、ネコ、ハムスター、ウサギ、インコ、熱帯魚、爬虫類、両生類、昆虫等)等が挙げられるが、これらに限定されない。 The type of animal to which the feed or pet food of this embodiment is given is not particularly limited. Examples thereof include livestock (cattle, pigs, chickens, horses, sheep, goats, etc.), fish, shellfish, pet animals (dogs, cats, hamsters, rabbits, parakeets, tropical fish, reptiles, amphibians, insects, etc.). , Not limited to these.

本実施形態の飼料又はペットフードにおいて、上述の栄養剤の含有量は特に限定されず、飼料又はペットフードの種類に応じて適宜含有量を設定すればよい。例えば、飼料又はペットフードにおける上述の栄養剤の含有量は、本藻類又はその抽出物の含有量として、0.01~90質量%が例示され、0.1~80質量%が好ましく、1~70質量%がさらに好ましく、1~60質量%が特に好ましい。 In the feed or pet food of the present embodiment, the content of the above-mentioned nutritional supplement is not particularly limited, and the content may be appropriately set according to the type of feed or pet food. For example, the content of the above-mentioned nutritional supplement in feed or pet food is preferably 0.01 to 90% by mass, preferably 0.1 to 80% by mass, as the content of the algae or its extract. 70% by mass is more preferable, and 1 to 60% by mass is particularly preferable.

本実施形態の飼料又はペットフードは、本藻類が含有する上述のような栄養成分を、当該動物に効率的に補給させるために用いることができる。 The feed or pet food of the present embodiment can be used to efficiently supply the animal with the above-mentioned nutritional components contained in the algae.

<化粧品>
本実施形態の栄養成分補給用組成物は、化粧品であってもよい。
本実施形態の栄養成分補給用組成物が化粧品である場合、上述の栄養剤は、化粧品添加剤として、化粧品に添加されてもよい。上述の栄養剤を化粧品に添加することにより、上述の栄養剤が含む栄養成分を含む化粧品を調製することができる。そのため、本発明の一実施形態に係る化粧品添加剤は、本藻類又はその抽出物を含む。
<Cosmetics>
The nutritional component supplementing composition of the present embodiment may be a cosmetic product.
When the nutritional component supplementing composition of the present embodiment is a cosmetic product, the above-mentioned nutritional supplement may be added to the cosmetic product as a cosmetic additive. By adding the above-mentioned nutritional supplement to the cosmetic product, it is possible to prepare a cosmetic product containing the nutritional component contained in the above-mentioned nutritional supplement. Therefore, the cosmetic additive according to the embodiment of the present invention includes the algae or an extract thereof.

本実施形態の化粧品は、上述の栄養剤と、適宜他の成分とを混合して、化粧品の種類に応じた既知の方法に従って、製造することができる。
他の成分としては、特に限定されず、例えば、薬学的に許容される担体等が例示される。薬学的に許容される担体としては、上記「≪栄養剤≫」で挙げたものと同様のものが挙げられる。また、化粧品添加物として公知の材料を他の成分として用いてもよい。他の成分は、1種を単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。
The cosmetic product of the present embodiment can be produced by mixing the above-mentioned nutritional supplement with other components as appropriate and according to a known method according to the type of cosmetic product.
The other components are not particularly limited, and examples thereof include pharmaceutically acceptable carriers. Examples of the pharmaceutically acceptable carrier include the same carriers as those mentioned in the above-mentioned "<< nutritional supplement >>". Further, a material known as a cosmetic additive may be used as another ingredient. As for the other components, one type may be used alone, or two or more types may be used in combination.

本実施形態の化粧品において、化粧品の種類は特に限定されない化粧品としては、例えば、化粧水、乳液、ローション、クリーム、ジェル、サンスクリーン剤、パック、マスク、美容液等の基礎化粧品;ファンデーション類、化粧下地、口紅類、リップグロス、頬紅類等のメーキャップ化粧品;洗顔剤、ボディーシャンプー、クレンジング剤等の洗浄料;シャンプー、リンス、ヘアコンディショナー、トリートメント、整髪剤等の毛髪用化粧品;ボディーパウダー、ボディーローション等のボディ用化粧品等が挙げられるが、これらに限定されない。 In the cosmetics of the present embodiment, the types of cosmetics are not particularly limited, and examples thereof include basic cosmetics such as cosmetics, milky lotions, lotions, creams, gels, sunscreens, packs, masks, and beauty liquids; foundations, makeups, etc. Makeup cosmetics such as foundations, lipsticks, lip glosses, cheeks; cleaning agents such as face wash, body shampoo, cleansing agent; hair cosmetics such as shampoo, rinse, hair conditioner, treatment, hair conditioner; body powder, body lotion Examples include, but are not limited to, cosmetics for the body.

本実施形態の化粧品において、上述の栄養剤の含有量は特に限定されず、化粧品の種類に応じて適宜含有量を設定すればよい。例えば、化粧品の使用感等を考慮し、化粧品における上述の栄養剤の含有量は、本藻類又はその抽出物の含有量として、0.01~30質量%を例示することができる。化粧品の使用感等の観点からは、0.1~20質量%が好ましく、0.1~15質量%がより好ましく、0.1~10質量%がさらに好ましく、0.1~5質量%が特に好ましい。 In the cosmetics of the present embodiment, the content of the above-mentioned nutritional supplement is not particularly limited, and the content may be appropriately set according to the type of cosmetics. For example, in consideration of the feeling of use of cosmetics, the content of the above-mentioned nutritional supplement in cosmetics may be 0.01 to 30% by mass as the content of the algae or its extract. From the viewpoint of the usability of cosmetics, 0.1 to 20% by mass is preferable, 0.1 to 15% by mass is more preferable, 0.1 to 10% by mass is further preferable, and 0.1 to 5% by mass is preferable. Especially preferable.

本実施形態の化粧品は、本藻類が含有する上述のような栄養成分を皮膚や毛髪に補給するために、皮膚や毛髪に塗布して用いることができる。 The cosmetic product of the present embodiment can be applied to the skin or hair in order to supply the above-mentioned nutritional components contained in the algae to the skin or hair.

≪栄養成分の製造方法≫
本発明の一実施形態に係る栄養成分の製造方法は、上記実施形態のセネデスムス・エスピーAB-1C株を培養する培養工程を備える方法である。
以下、本実施形態の製造方法の工程について説明する。
≪Manufacturing method of nutritional components≫
The method for producing a nutritional component according to an embodiment of the present invention is a method comprising a culture step of culturing the Senedesmus SP AB-1C strain of the above-described embodiment.
Hereinafter, the process of the manufacturing method of the present embodiment will be described.

<培養工程>
培養工程は、本藻類を培養する工程である。
<Culture process>
The culturing step is a step of culturing the algae.

本工程で用いる本藻類の好適な例としては、上述の「≪藻類≫」で記載したものと同様のものが挙げられる。
また、培養工程は、上述の「≪藻類≫」に記載の方法で行うことができる。
Preferable examples of the algae used in this step include the same as those described in the above-mentioned "<< Algae >>".
In addition, the culture step can be performed by the method described in the above-mentioned "<< Algae >>".

本実施形態の製造方法は、更に、前記培養工程の後に、前記セネデスムス・エスピーAB-1C株を破砕して細胞破砕物を得る破砕工程と、前記細胞破砕物から栄養成分を分離する分離工程と、をこの順に備えてもよい。 The production method of the present embodiment further comprises, after the culture step, a crushing step of crushing the Senedesmus SP AB-1C strain to obtain a cell crushed product, and a separation step of separating a nutritional component from the cell crushed product. , May be provided in this order.

<破砕工程>
破砕工程は、本藻類の細胞を破砕して細胞破砕物を得る工程である。
<Crushing process>
The crushing step is a step of crushing the cells of this algae to obtain a cell crushed product.

本藻類の細胞の破砕方法は、特に限定されず、公知の方法を用いることができる。細胞の破砕方法としては、例えば、ガラスビーズ、乳鉢、超音波処理、フレンチプレス、ホモジナイザー等の物理的処理;中和処理、低張処理、凍結融解処理等の化学的処理等が挙げられる。これらの処理は、単独で行ってもよく、2種以上の処理を組み合わせて行ってもよい。 The method for disrupting the cells of this alga is not particularly limited, and a known method can be used. Examples of the cell crushing method include physical treatments such as glass beads, mortars, ultrasonic treatments, French presses, homogenizers; and chemical treatments such as neutralization treatments, hypotonic treatments, and freeze-thaw treatments. These treatments may be performed alone or in combination of two or more types of treatments.

中和処理の方法としては、pH7~10程度の中和液に、本藻類の細胞を浸漬する方法が挙げられる。本藻類は、酸性域のpHに適応しているため、中性~塩基性の中和液に浸漬することにより、細胞が破壊される。中和液の組成は、特に限定されないが、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液などの緩衝液等を用いることができる。中和液への細胞の浸漬時間は、細胞が破壊される程度の時間とすればよく、例えば、10~30分程度が例示される。 Examples of the neutralization treatment method include a method of immersing the cells of this algae in a neutralizing solution having a pH of about 7 to 10. Since the algae are adapted to the pH in the acidic range, the cells are destroyed by immersing them in a neutral to basic neutralizing solution. The composition of the neutralizing solution is not particularly limited, but for example, a buffer solution such as a phosphate buffer solution or a Tris buffer solution can be used. The time for immersing the cells in the neutralizing solution may be such that the cells are destroyed, and for example, about 10 to 30 minutes is exemplified.

低張処理の方法としては、水などの低張液に、本藻類の細胞を浸漬する方法が挙げられる。本藻類は、細胞壁の強度が弱い又は薄いため、低張液に浸漬することにより、細胞が破裂する。低張液の組成は、特に限定されず、本藻類の細胞が破裂する程度の低張な液体であればよい。低張液としては、例えば、水、低濃度の緩衝液等を挙げることができる。低張液への細胞の浸漬時間は、細胞が破裂する程度の時間とすればよく、例えば、1~30分程度が例示される。 Examples of the hypotonic treatment method include a method of immersing the cells of this alga in a hypotonic solution such as water. Since the cell wall of this alga is weak or thin, the cells burst when immersed in a hypotonic solution. The composition of the hypotonic liquid is not particularly limited, and may be any hypotonic liquid to the extent that the cells of this alga burst. Examples of the hypotonic solution include water, a low-concentration buffer solution, and the like. The time for immersing the cells in the hypotonic solution may be such that the cells rupture, and for example, about 1 to 30 minutes is exemplified.

凍結融解処理の方法としては、本藻類の細胞に対して、凍結と融解のサイクルを1回以上行う方法が挙げられる。凍結と融解のサイクル回数は、特に限定されず、本藻類の細胞が破砕される程度の回数であればよい。凍結と融解のサイクル回数は、例えば、1~5回程度が例示される。凍結及び融解の各時間は、特に限定されず、例えば、各々10~30分程度が例示される。 Examples of the method of freeze-thaw treatment include a method in which the cells of this alga are subjected to a freeze-thaw cycle at least once. The number of freeze-thaw cycles is not particularly limited, and may be any number as long as the cells of this alga are crushed. The number of freezing and thawing cycles is exemplified by, for example, about 1 to 5 times. Each time of freezing and thawing is not particularly limited, and for example, about 10 to 30 minutes each is exemplified.

上記のような方法で、本藻類の細胞を破砕することにより、本藻類の細胞破砕物を得ることができる。 By crushing the cells of this alga by the method as described above, a cell crushed product of this alga can be obtained.

<分離工程>
分離工程は、本藻類の細胞破砕物から栄養成分を分離する工程である。
<Separation process>
The separation step is a step of separating nutritional components from the cell disrupted product of this algae.

本工程において、分離対象となる栄養成分は、本藻類が有する栄養成分であれば特に限定されない。上述の「≪栄養剤≫」において記載したように、本藻類は、アミノ酸類、ビタミン類(特に、カロテノイド類)、タンパク質、脂質(特に、機能性油)、食物繊維等の栄養成分を多く含む。そのため、本工程において分離対象となる栄養成分としては、機能性油及びカロテノイド類からなる群より選択される少なくとも1種が挙げられる。 In this step, the nutritional component to be separated is not particularly limited as long as it is the nutritional component of the algae. As described in the above-mentioned "<< nutritional supplement >>", this alga contains a large amount of nutritional components such as amino acids, vitamins (particularly carotenoids), proteins, lipids (particularly functional oils), and dietary fiber. .. Therefore, examples of the nutritional components to be separated in this step include at least one selected from the group consisting of functional oils and carotenoids.

前記栄養成分の中でも、機能性油としては、EPA、α-リノレン酸及びリノール酸からなる群より選択される少なくとも1種が挙げられる。好ましくは、機能性油としては、EPAが挙げられる。
また、カロテノイド類としては、アスタキサンチン、カンタキサンチン、β-カロテン及びルテインからなる群より選択される少なくとも1種が挙げられる。好ましくは、カロテノイド類としては、アスタキサンチンが挙げられる。
Among the nutritional components, examples of the functional oil include at least one selected from the group consisting of EPA, α-linolenic acid and linoleic acid. Preferably, the functional oil includes EPA.
In addition, examples of carotenoids include at least one selected from the group consisting of astaxanthin, canthaxanthin, β-carotene and lutein. Preferably, astaxanthin is mentioned as a carotenoid.

本工程において分離される栄養成分は、1種であってもよく、2種以上であってもよい。また、機能性油(EPA、α-リノレン酸、リノール酸等)、カロテノイド類(アスタキサンチン、カンタキサンチン、β-カロテン、ルテイン等)等の種類ごとに分離してもよい。 The nutritional components separated in this step may be one kind or two or more kinds. Further, it may be separated according to the type of functional oil (EPA, α-linolenic acid, linoleic acid, etc.), carotenoids (astaxanthin, canthaxanthin, β-carotene, lutein, etc.).

細胞破砕物からの栄養成分の分離方法は、特に限定されず、栄養成分の種類に応じて適切な方法を選択すればよい。栄養成分の分離方法には、生化学物質の分離・精製等に一般的に用いられる方法を適宜組み合わせて用いることができる。分離方法としては、例えば、遠心分離、洗浄、塩析、透析、再結晶、再沈殿、溶媒抽出、吸着、濃縮、ろ過、ゲルろ過、限外ろ過、各種クロマトグラフィー(ガスクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等)等が挙げられるが、これらに限定されない。 The method for separating the nutritional component from the cell disruption is not particularly limited, and an appropriate method may be selected according to the type of the nutritional component. As a method for separating nutritional components, a method generally used for separation / purification of biochemical substances can be appropriately combined and used. Separation methods include, for example, centrifugation, washing, salting, dialysis, recrystallization, reprecipitation, solvent extraction, adsorption, concentration, filtration, gel filtration, ultrafiltration, and various types of chromatography (gas chromatography, thin layer chromatography). (Graphic, ion exchange chromatography, high-speed liquid chromatography, adsorption chromatography, affinity chromatography, etc.) and the like), but are not limited thereto.

<任意工程>
本実施形態の製造方法は、培養工程、破砕工程及び分離工程に加えて、他の工程を含んでいてもよい。他の工程としては、例えば、本藻類を培養液から回収する工程(回収工程)、本藻類の細胞を洗浄する工程(洗浄工程)等が挙げられる。これらの工程は、上述の培養工程の後であって、破砕工程の前に行うことができる。
<Arbitrary process>
The production method of the present embodiment may include other steps in addition to the culture step, the crushing step and the separation step. Examples of other steps include a step of recovering the algae from the culture solution (recovery step), a step of washing the cells of the algae (washing step), and the like. These steps can be performed after the culture step described above and before the crushing step.

回収工程は、ろ過や遠心分離等の公知の方法により行うことができる。また、洗浄工程は、pH0.1~5.0の洗浄液(緩衝液等)に細胞を懸濁し、次いでろ過や遠心分離等の方法で洗浄液から細胞を回収することにより行うことができる。 The recovery step can be performed by a known method such as filtration or centrifugation. The washing step can be performed by suspending the cells in a washing solution (buffer solution or the like) having a pH of 0.1 to 5.0, and then recovering the cells from the washing solution by a method such as filtration or centrifugation.

本実施形態の製造方法により、製造された栄養成分は、栄養剤、食品、飼料、ペットフード、化粧品、医薬品、試薬類等の各種用途に用いることができる。 The nutritional components produced by the production method of the present embodiment can be used for various uses such as nutritional supplements, foods, feeds, pet foods, cosmetics, pharmaceuticals, and reagents.

以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples, but the present invention is not limited to the following Examples.

[実施例1]
1.新規微細藻類の単離
日本国富山県の富山湾神通川において河口表層水を採水した。次に、河口表層水を0.45μmのポリカーボネートメンブレンフィルターで減圧濾過し、フィルター上に微細藻類を含む微生物を捕獲した。次に、そのフィルターごと、KWSW培地、SGI培地(Sager & Granick Medium I)、IMK培地及びドナリエラ用培地が入った培養液に入れ、白色蛍光灯下でエアレーションしながら培養した。なお、KWSW培地の組成を以下の表1に、SGI培地の組成を以下の表2に、IMK培地の組成を以下の表3に、ドナリエラ用培地の組成を以下の表4に示す。
[Example 1]
1. 1. Isolation of new microalgae The estuary surface water was sampled at the Jinzu River in Toyama Bay, Toyama Prefecture, Japan. Next, the estuary surface water was filtered under reduced pressure with a 0.45 μm polycarbonate membrane filter, and microorganisms containing microalgae were captured on the filter. Next, the whole filter was placed in a culture medium containing KWSW medium, SGI medium (Sager & Granic Medium I), IMK medium and Dunaliella medium, and cultured under a white fluorescent lamp while aerating. The composition of the KWSW medium is shown in Table 1 below, the composition of the SGI medium is shown in Table 2 below, the composition of the IMK medium is shown in Table 3 below, and the composition of the medium for Dunaliella is shown in Table 4 below.

その結果、微細藻類が増殖し、緑色又は褐色に濁った培養液の一部を、上記各培地で作製した1.5%(w/v)寒天培地上に塗布し、白色蛍光灯下で培養した。寒天培地上に塗布された微細藻類が増殖し、形成された個々のコロニーを単離することで微細藻類の選別及び単離(単一種化)を行った。これにより、AB-1C株が単離された。 As a result, microalgae proliferated, and a part of the culture solution that became turbid in green or brown was applied on the 1.5% (w / v) agar medium prepared in each of the above media and cultured under a white fluorescent lamp. bottom. The microalgaes applied on the agar medium grew, and the individual colonies formed were isolated to select and isolate the microalgaes (single species). As a result, the AB-1C strain was isolated.

Figure 0007053231000001
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Figure 0007053231000002
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Figure 0007053231000003
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Figure 0007053231000004
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Figure 0007053231000005
Figure 0007053231000005

次に、AB-1C株の顕微鏡(オリンパス社製、BX51N-33-PH)の観察を(倍率:540倍)を行った。AB-1C株の顕微鏡写真を図1に示す。上の画像は、明視野での顕微鏡写真である。下の画像は蛍光での顕微鏡写真である。 Next, observation of the AB-1C strain under a microscope (manufactured by Olympus Corporation, BX51N-33-PH) was performed (magnification: 540 times). A micrograph of the AB-1C strain is shown in FIG. The image above is a photomicrograph in the bright field. The image below is a fluorescence micrograph.

図1から、AB-1C株の細胞の形態は楕円球状又は球状で、大きさの異なるものが混在していることが確認された。 From FIG. 1, it was confirmed that the morphology of the cells of the AB-1C strain was elliptical spherical or spherical, and that cells of different sizes were mixed.

2.18S リボソームDNA配列に基づく系統解析
AB-1C株の細胞から抽出したDNAを鋳型として、18S リボソームDNAをPCRで増幅し、配列解析を行った。AB-1C株の18S リボソームDNAの塩基配列を配列番号1に示す。
なお、18S リボソームDNAの増幅に使用したプライマーの配列は以下のとおりである。
フォワードプライマー:5’ -TACCTGGTTGATCCTGCCAG-3’(配列番号2)
リバースプライマー:5’ -CCTTCCGCAGGTTCACCTAC-3’ (配列番号3)
2. Phylogenetic analysis based on 18S ribosomal DNA sequence Using DNA extracted from cells of AB-1C strain as a template, 18S ribosomal DNA was amplified by PCR and sequence analysis was performed. The base sequence of 18S ribosome DNA of AB-1C strain is shown in SEQ ID NO: 1.
The sequence of the primer used for the amplification of 18S ribosomal DNA is as follows.
Forward primer: 5'-TACCTGGTTGATCCTGCCAG-3' (SEQ ID NO: 2)
Reverse primer: 5'-CCTTCCGCAGGTTCACCTAC-3'(SEQ ID NO: 3)

AB-1C株の18S リボソームDNAの塩基配列に基づき、最尤法による分子系統解析を行った。具体的には、データベースから得た近縁種の配列のアライメントをMEGA5.05 software(http://www.megasoftware.net/)を用いて行い、近隣接合法により分子系統樹を作成した。18S リボソームDNAの塩基配列に基づく分子系統樹を図2に示す。なお、分子系統樹内の内部枝の統計的な支持値は、ブートストラップ法 (1000回反復) によって求めた。
図2から、AB-1C株の18S リボソームDNAは、下記表6に示す既知の藻類種と近縁種であることが判明した。
Based on the base sequence of 18S ribosomal DNA of AB-1C strain, molecular phylogenetic analysis by maximum likelihood method was performed. Specifically, the sequences of closely related species obtained from the database were aligned using MEGA5.05 software (http://www.megasoftware.net/), and a molecular phylogenetic tree was prepared by the neighborhood joining method. The molecular phylogenetic tree based on the base sequence of 18S ribosomal DNA is shown in FIG. The statistical support value of the internal branch in the molecular phylogenetic tree was obtained by the bootstrap method (repeated 1000 times).
From FIG. 2, it was found that the 18S ribosomal DNA of the AB-1C strain is closely related to the known algae species shown in Table 6 below.

Figure 0007053231000006
Figure 0007053231000006

上記分子系統解析の結果より、AB-1C株は、セネデスムス属に属すると判定された。 From the results of the above molecular phylogenetic analysis, it was determined that the AB-1C strain belongs to the genus Scenedesmus.

3.AB-1C株の成分分析
(1)AB-1C株の培養
AB-1C株を、SGI培地を用いて、通気培養した。培養温度は25℃とし、白色蛍光灯(4000~4500ルクス)下で、エアレーションしながら、4~7日間振盪培養した。培養したAB-1C株を遠心分離にて回収し、凍結乾燥させた。
3. 3. Component analysis of AB-1C strain (1) Culture of AB-1C strain AB-1C strain was aerated and cultured using SGI medium. The culture temperature was 25 ° C., and the cells were shake-cultured for 4 to 7 days under a white fluorescent lamp (4000 to 4500 lux) while aerating. The cultured AB-1C strain was collected by centrifugation and lyophilized.

(2)有用物質の分離及び分析
(2-1)カロテノイド類の分離及び分析
カロテノイド類の含有量については、一般財団法人日本食品分析センターに依頼し、分析を行った。なお、具体的な分析方法については、以下に示すとおりである。
(2) Separation and analysis of useful substances (2-1) Separation and analysis of carotenoids The content of carotenoids was analyzed by requesting the Japan Food Research Laboratories. The specific analysis method is as shown below.

・アスタキサンチンの分離及び分析
凍結乾燥させたAB-1C株0.1~0.2gを秤量した。次に、秤量したAB-1C株を用いて、以下の流れに従って、エステル型アスタキサンチンを酵素で分解後、分離及び精製を行い、高速流体クロマトグラフィーに使用する試料とした。また、高速液体クロマトグラフィーの分析条件を以下に示す。
Separation and analysis of astaxanthin 0.1-0.2 g of freeze-dried AB-1C strain was weighed. Next, using the weighed AB-1C strain, the ester-type astaxanthin was enzymatically decomposed according to the following flow, and then separated and purified to prepare a sample to be used for high performance fluid chromatography. The analysis conditions for high performance liquid chromatography are shown below.

(アスタキサンチンの分離及び精製工程)
試料採取(0.2g、乳鉢内)
↓+海砂(適量)
↓+水(1mL)
↓クロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
磨砕抽出(数回に分けて、磨砕抽出。さらに、11Gガラスフィルターで吸引濾過)
↓抽出液をクロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
↓で100mLに定容
溶媒留去
↓+アセトン(定容液10mLを50mL容遠沈管に分取)
↓+0.05Mのトリス緩衝液(pH7.0)(6mL)
↓+コレステロールエステラーゼ(1800μL)(60units/mL)
酵素反応(37℃、120分間)
↓+石油エーテル(10mL)
転溶

遠心分離(1500rpm、5分間)
↓上層を100mL容ナスフラスコに回収
上記酵素反応から上記遠心分離をさらに2回繰り返す

溶媒留去
↓+移動相(所定量添加)
高速液体クロマトグラフィー
(Astaxanthin separation and purification process)
Sampling (0.2 g, in a mortar)
↓ + sea sand (appropriate amount)
↓ + water (1 mL)
↓ Mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
Grinding extraction (grinding and extracting in several batches. Furthermore, suction filtration with an 11G glass filter)
↓ Extract is a mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
Distill the constant volume solvent to 100 mL with ↓ ↓ + Acetone (separate 10 mL of constant volume solution into a 50 mL centrifuge tube)
↓ + 0.05M Tris buffer (pH 7.0) (6 mL)
↓ + Cholesterol esterase (1800 μL) (60 units / mL)
Enzyme reaction (37 ° C, 120 minutes)
↓ + Petroleum ether (10mL)
Dissolution ↓
Centrifugation (1500 rpm, 5 minutes)
↓ Collect the upper layer in a 100 mL eggplant flask. Repeat the above centrifugation twice more from the above enzymatic reaction. ↓
Solvent distillation ↓ + mobile phase (addition of predetermined amount)
High performance liquid chromatography

(高速液体クロマトグラフィーの分析条件)
高速液体クロマトグラフ:LC-20AT、株式会社島津製作所製
検出器:紫外可視吸光光度計、SPD-20A、株式会社島津製作所製
カラム:Luna3μ Silica Φ4.6mm×150mm、phenomenex社製
カラム温度:30℃
移動相:ヘキサン及びアセトンの混合溶液(ヘキサン:アセトン=82:18)
流量:1.2mL/min
測定波長:470nm
注入量:40μL
(Analysis conditions for high performance liquid chromatography)
High Performance Liquid Chromatograph: LC-20AT, Shimadzu Corporation Detector: Ultraviolet Visible Absorptiometer, SPD-20A, Shimadzu Corporation Column: Luna 3μ Sirica Φ4.6mm × 150mm, Phenomenex Column Temperature: 30 ℃
Mobile phase: Mixed solution of hexane and acetone (hexane: acetone = 82:18)
Flow rate: 1.2 mL / min
Measurement wavelength: 470 nm
Injection volume: 40 μL

・カンタキサンチンの分離及び分析
凍結乾燥させたAB-1C株1gを秤量した。次に、秤量したAB-1C株を用いて、以下の流れに従って、分離及び精製を行い、高速流体クロマトグラフィーに使用する試料とした。また、高速液体クロマトグラフィーの分析条件を以下に示す。
Separation and analysis of canthaxanthin 1 g of lyophilized AB-1C strain was weighed. Next, the weighed AB-1C strain was separated and purified according to the following flow to prepare a sample to be used for high performance fluid chromatography. The analysis conditions for high performance liquid chromatography are shown below.

(カンタキサンチンの分離及び精製工程)
試料採取(1g、乳鉢内)
↓+海砂(適量)
↓+水(1mL)
↓クロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
磨砕抽出(数回に分けて、磨砕抽出。さらに、11Gガラスフィルターで吸引濾過)
↓抽出液をクロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
↓で100mLに定容
↓100mL容ナスフラスコに60mL分取
溶媒留去
↓+HAET混合溶液(30mL)
↓(ヘキサン、アセトン、エタノール及びトルエンの混合溶液)
↓(ヘキサン:アセトン:エタノール:トルエン=10:7:6:7)
↓+水(1mL)
↓40w/v%水酸化カリウム-メタノール溶液(4mL)
けん化(56℃水浴中30分間)
↓300mL容褐色分液漏斗へ移す
↓+HAET混合溶液(30mL)
↓+3w/v%無水硫酸ナトリウム溶液(40mL)
↓+HAET混合溶液(30mL)
抽出
↓水(50mL)で数回洗浄
上層回収

溶媒留去
↓+2-プロパノール(所定量添加)
高速液体クロマトグラフィー
(Canthaxanthin separation and purification process)
Sampling (1g, in a mortar)
↓ + sea sand (appropriate amount)
↓ + water (1 mL)
↓ Mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
Grinding extraction (grinding and extracting in several batches. Furthermore, suction filtration with an 11G glass filter)
↓ Extract is a mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
↓ Constant volume to 100 mL ↓ Volume 60 mL in a 100 mL eggplant flask Distill off the solvent ↓ + HAET mixed solution (30 mL)
↓ (Mixed solution of hexane, acetone, ethanol and toluene)
↓ (Hexane: Acetone: Ethanol: Toluene = 10: 7: 6: 7)
↓ + water (1 mL)
↓ 40w / v% potassium hydroxide-methanol solution (4mL)
Saponification (30 minutes in a 56 ° C water bath)
↓ Transfer to a 300 mL brown separatory funnel ↓ + HAET mixed solution (30 mL)
↓ + 3w / v% anhydrous sodium sulfate solution (40mL)
↓ + HAET mixed solution (30 mL)
Extraction ↓ Wash several times with water (50 mL) and collect upper layer ↓
Solvent distillation ↓ + 2-propanol (added in a predetermined amount)
High performance liquid chromatography

(高速液体クロマトグラフィーの分析条件)
高速液体クロマトグラフ:LC-20AT、株式会社島津製作所製
検出器:紫外可視吸光光度計、SPD-20A、株式会社島津製作所製
カラム:Cadenza CL-C18 Φ4.6mm×250mm、インタクト株式会社製
カラム温度:40℃
移動相:メタノール及び水の混合溶液(メタノール:水=96:4)
流量:1.0mL/min
測定波長:470nm
注入量:20μL
(Analysis conditions for high performance liquid chromatography)
High Performance Liquid Chromatograph: LC-20AT, Shimadzu Corporation Detector: Ultraviolet Visible Absorptiometer, SPD-20A, Shimadzu Corporation Column: Cadenza CL-C18 Φ4.6mm × 250mm, Intact Co., Ltd. Column Temperature : 40 ° C
Mobile phase: Mixed solution of methanol and water (methanol: water = 96: 4)
Flow rate: 1.0 mL / min
Measurement wavelength: 470 nm
Injection volume: 20 μL

・ルテインの分離及び分析
凍結乾燥させたAB-1C株0.1~0.2gを秤量した。次に、秤量したAB-1C株を用いて、以下の流れに従ってエステル型ルテインをケン化処理後、分離及び精製を行い、高速流体クロマトグラフィーに使用する試料とした。また、高速液体クロマトグラフィーの分析条件を以下に示す。
Separation and analysis of lutein 0.1-0.2 g of freeze-dried AB-1C strain was weighed. Next, using the weighed AB-1C strain, the ester-type lutein was saponified according to the following flow, and then separated and purified to obtain a sample to be used for high performance fluid chromatography. The analysis conditions for high performance liquid chromatography are shown below.

(ルテインの分離及び精製工程)
試料採取(0.1~0.2g、乳鉢内)
↓+海砂(適量)
↓+水(1mL)
↓クロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
磨砕抽出(数回に分けて、磨砕抽出。さらに、11Gガラスフィルターで吸引濾過)
↓抽出液をクロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
↓で100mLに定容
↓100mL容ナスフラスコに2mL分取
溶媒留去
↓+HAET混合溶液(30mL)
↓+水(1mL)
↓40w/v%水酸化カリウム-メタノール溶液(4mL)
けん化(56℃水浴中30分間)
↓300mL容褐色分液漏斗へ移す
↓+HAET混合溶液(30mL)
↓+3w/v%無水硫酸ナトリウム溶液(40mL)
↓+HAET混合溶液(30mL)
抽出
↓水(50mL)で数回洗浄
上層回収

溶媒留去
↓+ヘキサン及びアセトンの混合溶液(所定量添加)(ヘキサン:アセトン=81:19)
高速液体クロマトグラフィー
(Lutein separation and purification process)
Sampling (0.1-0.2 g, in a mortar)
↓ + sea sand (appropriate amount)
↓ + water (1 mL)
↓ Mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
Grinding extraction (grinding and extracting in several batches. Furthermore, suction filtration with an 11G glass filter)
↓ Extract is a mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
↓ Constant volume to 100 mL ↓ Volume 2 mL in a 100 mL eggplant flask Distill off the solvent ↓ + HAET mixed solution (30 mL)
↓ + water (1 mL)
↓ 40w / v% potassium hydroxide-methanol solution (4mL)
Saponification (30 minutes in a 56 ° C water bath)
↓ Transfer to a 300 mL brown separatory funnel ↓ + HAET mixed solution (30 mL)
↓ + 3w / v% anhydrous sodium sulfate solution (40mL)
↓ + HAET mixed solution (30 mL)
Extraction ↓ Wash several times with water (50 mL) and collect upper layer ↓
Solvent distilling ↓ + mixed solution of hexane and acetone (added in a predetermined amount) (hexane: acetone = 81: 19)
High performance liquid chromatography

(高速液体クロマトグラフィーの分析条件)
高速液体クロマトグラフ:LC-10ATVP、株式会社島津製作所製
検出器:紫外可視吸光光度計、SPD-20A、株式会社島津製作所製
カラム:Luna3μ Silica Φ4.6mm×150mm、phenomenex社製
カラム温度:30℃
移動相:ヘキサン及びアセトンの混合溶液(ヘキサン:アセトン=82:18)
流量:1.2mL/min
測定波長:450nm
注入量:30μL
(Analysis conditions for high performance liquid chromatography)
High Performance Liquid Chromatograph: LC-10AT VP , Shimadzu Corporation Detector: Ultraviolet Visible Absorptiometer, SPD-20A, Shimadzu Corporation Column: Luna 3μ Silica Φ4.6mm × 150mm, Phenomenex Column Temperature: 30 ℃
Mobile phase: Mixed solution of hexane and acetone (hexane: acetone = 82:18)
Flow rate: 1.2 mL / min
Measurement wavelength: 450 nm
Injection volume: 30 μL

・β-カロテンの分離及び分析
凍結乾燥させたAB-1C株0.1~0.2gを秤量した。次に、秤量したAB-1C株を用いて、以下の流れに従って分離及び精製を行い、高速流体クロマトグラフィーに使用する試料とした。また、高速液体クロマトグラフィーの分析条件を以下に示す。
Separation and analysis of β-carotene Weighed 0.1-0.2 g of freeze-dried AB-1C strain. Next, the weighed AB-1C strain was separated and purified according to the following flow to prepare a sample to be used for high performance fluid chromatography. The analysis conditions for high performance liquid chromatography are shown below.

(β-カロテンの分離及び精製工程)
試料採取(0.1~0.2g、乳鉢内)
↓+海砂(適量)
↓+水(1mL)
↓クロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
磨砕抽出(数回に分けて、磨砕抽出。さらに、11Gガラスフィルターで吸引濾過)
↓抽出液をクロロホルム及びメタノールの混合溶液(クロロホルム:メタノール=2:1)
↓で100mLに定容
↓100mL容ナスフラスコに2mL分取
溶媒留去
↓+HAET混合溶液(30mL)
↓+水(1mL)
↓40w/v%水酸化カリウム-メタノール溶液(4mL)
けん化(56℃水浴中30分間)
↓300mL容褐色分液漏斗へ移す
↓+HAET混合溶液(30mL)
↓+3w/v%無水硫酸ナトリウム溶液(40mL)
↓+HAET混合溶液(30mL)
抽出
↓水(50mL)で数回洗浄
上層回収

溶媒留去
↓+ヘキサン及びアセトンの混合溶液(所定量添加)(ヘキサン:アセトン=81:19)
↓50mL容ナスフラスコに2mL分取
溶媒留去
↓+エタノール(所定量添加)
高速液体クロマトグラフィー
(Β-carotene separation and purification process)
Sampling (0.1-0.2 g, in a mortar)
↓ + sea sand (appropriate amount)
↓ + water (1 mL)
↓ Mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
Grinding extraction (grinding and extracting in several batches. Furthermore, suction filtration with an 11G glass filter)
↓ Extract is a mixed solution of chloroform and methanol (chloroform: methanol = 2: 1)
↓ Constant volume to 100 mL ↓ Volume 2 mL in a 100 mL eggplant flask Distill off the solvent ↓ + HAET mixed solution (30 mL)
↓ + water (1 mL)
↓ 40w / v% potassium hydroxide-methanol solution (4mL)
Saponification (30 minutes in a 56 ° C water bath)
↓ Transfer to a 300 mL brown separatory funnel ↓ + HAET mixed solution (30 mL)
↓ + 3w / v% anhydrous sodium sulfate solution (40mL)
↓ + HAET mixed solution (30 mL)
Extraction ↓ Wash several times with water (50 mL) and collect upper layer ↓
Solvent distilling ↓ + mixed solution of hexane and acetone (added in a predetermined amount) (hexane: acetone = 81: 19)
↓ Distill 2 mL of solvent in a 50 mL eggplant flask ↓ + Ethanol (add a predetermined amount)
High performance liquid chromatography

(高速液体クロマトグラフィーの分析条件)
高速液体クロマトグラフ:LC-20AD、株式会社島津製作所製
検出器:紫外可視吸光光度計、SPD-20AV、株式会社島津製作所製
カラム:Inertsil ODS-4.5μm Φ4.6mm×250mm、ジーエルサイエンス株式会社製
カラム温度:40℃
移動相:アセトニトリル、メタノール、テトラヒドロフラン及び酢酸の混合溶液
(アセトニトリル:メタノール:テトラヒドロフラン:酢酸=55:40:5:0.1)(0.05g/L dl-α-トコフェロール含有)
流量:1.5mL/min
測定波長:455nm
注入量:20μL
(Analysis conditions for high performance liquid chromatography)
High Performance Liquid Chromatograph: LC-20AD, Shimadzu Corporation Detector: Ultraviolet Visible Absorptiometer, SPD-20AV, Shimadzu Corporation Column: Inertsil ODS-4.5 μm Φ4.6 mm × 250 mm, GL Sciences Co., Ltd. Column temperature: 40 ° C
Mobile phase: A mixed solution of acetonitrile, methanol, tetrahydrofuran and acetic acid (acetonitrile: methanol: tetrahydrofuran: acetic acid = 55: 40: 5: 0.1) (containing 0.05 g / L dl-α-tocopherol)
Flow rate: 1.5 mL / min
Measurement wavelength: 455 nm
Injection volume: 20 μL

・総カロテノイド類の分析
総カロテノイド類の含有量は、吸光光度法により測定した。含有されていることが確認されたカロテノイド類のうち、最も含量が高い成分であるアスタキサンチンの測定条件で定量を行った。アスタキサンチンの吸光係数E1% 1cm=2200(波長478nm、アセトン)より算出した。
-Analysis of total carotenoids The content of total carotenoids was measured by absorptiometry. Among the carotenoids confirmed to be contained, astaxanthin, which is the component with the highest content, was quantified under the measurement conditions. It was calculated from the absorption coefficient of astaxanthin E 1% 1 cm = 2200 (wavelength 478 nm, acetone).

測定結果としては、AB-1C株の乾燥重量100g中の総カロテノイド類の含有量が666mgであり、アスタキサンチンの含有量が415mgであり、カンタキサンチンの含有量が66.9mgであり、β-カロテンの含有量が42.3mgであり、ルテインの含有量が34.4mgであった。この結果を以下の表7にも示す。なお、対照として、ヘマトコッカス及びMonoraphidium sp.GK-12株の乾燥重量100g中のアスタキサンチンの含有量を示す。 As a result of the measurement, the total carotenoid content in 100 g of the dry weight of the AB-1C strain was 666 mg, the astaxanthin content was 415 mg, the canthaxanthin content was 66.9 mg, and β-carotene. The content of was 42.3 mg and the content of lutein was 34.4 mg. The results are also shown in Table 7 below. As a control, hematococcus and Monoradium sp. The content of astaxanthin in 100 g of the dry weight of the GK-12 strain is shown.

(2-2)脂肪酸の分離及び分析
凍結乾燥させたAB-1C株1~30mgを秤量した。次に、AB-1C株をキャップ付きの耐圧試験管に入れた。そこへ、BF-Methanol溶液を0.4mL入れ、100℃で40分間反応させることにより、AB-1C株の細胞中に含まれる中性脂肪酸を、脂肪酸メチル(バイオディーゼルフューエル成分)へ変換した。反応終了後冷却し、反応液中へペンタンを入れることにより、生成した脂肪酸メチルをペンタン層へ移した。一定時間放置後、ペンタン層を回収した。このペンタン抽出を数回繰り返した。その後、得られたペンタン抽出液を揮発させ、脂肪酸メチルを残渣とした回収した。この残渣をヘキサンに溶解させ、脂肪酸分析の試料とした。
(2-2) Separation and analysis of fatty acids 1 to 30 mg of freeze-dried AB-1C strain was weighed. Next, the AB-1C strain was placed in a pressure resistant test tube with a cap. By adding 0.4 mL of BF 3 -Methanol solution and reacting at 100 ° C. for 40 minutes, the neutral fatty acid contained in the cells of the AB-1C strain was converted to fatty acid methyl (biodiesel fuel component). .. After completion of the reaction, the mixture was cooled and the pentane was put into the reaction solution to transfer the produced fatty acid methyl to the pentane layer. After leaving for a certain period of time, the pentane layer was collected. This pentane extraction was repeated several times. Then, the obtained pentane extract was volatilized and recovered with the fatty acid methyl as a residue. This residue was dissolved in hexane to prepare a sample for fatty acid analysis.

次に、試料中の脂肪酸の含有量をキャピラリーガスクロマトグラフィー(GC、GC-2010、島津製作所製)にて測定した。キャピラリーガスクロマトグラフィーの分析条件を以下に示す。 Next, the fatty acid content in the sample was measured by capillary gas chromatography (GC, GC-2010, manufactured by Shimadzu Corporation). The analysis conditions for capillary gas chromatography are shown below.

(キャピラリーガスクロマトグラフィーの分析条件)
カラム:InertCAP WAX(GLサイエンス製、30m、内径0.25mm)
ガス:ヘリウムガス(He、70kPa)
検出:FID
(Analysis conditions for capillary gas chromatography)
Column: InertCAP WAX (manufactured by GL Science, 30m, inner diameter 0.25mm)
Gas: Helium gas (He, 70 kPa)
Detection: FID

測定結果としては、AB-1C株の乾燥重量100g中のEPAの含有量は、400mgであった。
また、AB-1C株の乾燥重量中のオレイン酸の含有量は17.8質量%、パルミチン酸の含有量は5.1質量%、リノール酸の含有量は4.6質量%、α-リノレン酸の含有量は4.5質量%、ステアリン酸の含有量は1.8質量%であった。
また、脂肪酸中のオレイン酸の含有量は44.6質量%、パルミチン酸の含有量は12.8質量%、リノール酸の含有量は11.5質量%、α-リノレン酸の含有量は11.4質量%、ステアリン酸の含有量は4.6質量%、γ-リノレン酸の含有量は0.2質量%、EPAの含有量は0.9質量%であった。
上記の結果のうち一部を以下の表7にも示す。なお、対照として、Monoraphidium sp.GK-12株の乾燥重量100g中のEPAの含有量を示す。
As a result of the measurement, the content of EPA in 100 g of the dry weight of the AB-1C strain was 400 mg.
In addition, the content of oleic acid in the dry weight of AB-1C strain was 17.8% by mass, the content of palmitic acid was 5.1% by mass, the content of linoleic acid was 4.6% by mass, and α-linolenic acid. The acid content was 4.5% by mass and the stearic acid content was 1.8% by mass.
The content of oleic acid in the fatty acid is 44.6% by mass, the content of palmitic acid is 12.8% by mass, the content of linoleic acid is 11.5% by mass, and the content of α-linolenic acid is 11. The content of 0.4% by mass, the content of stearic acid was 4.6% by mass, the content of γ-linolenic acid was 0.2% by mass, and the content of EPA was 0.9% by mass.
Some of the above results are also shown in Table 7 below. As a control, Monorapidium sp. The content of EPA in 100 g of the dry weight of the GK-12 strain is shown.

(2-3)炭化水素の分離及び分析
凍結乾燥させたAB-1C株1~30mgを秤量した。次に、AB-1C株をビーズ入りアシストチューブに入れた。そこへ、0.1M水酸化カリウムのメタノール液0.1Mを入れた後、キャップ付きの試験管に入れた。次に、80℃で90分間反応させることにより、ケン化させた。反応終了後冷却し、反応液中へ水1.0mLを加えて撹拌し、さらに、ヘキサン2mLを入れて撹拌した。次に、静置し、ヘキサン層をキャップ付きの試験管に回収した。次に、キャップを開けたまま乾燥器内でヘキサンを気化させた。次に、トリメチルシリル(TMS)化剤を50μL加え、キャップをした後60℃で30~60分間放置した。次に、水0.5mL加え混合した後、ヘキサン0.5mL加えた。次に、ヘキサン層を1.5mLバイアルに移し、ヘキサンを気化させた。そこへ、正確にヘキサン1mLを加え、炭化水素分析の試料とした。
(2-3) Separation and analysis of hydrocarbons 1 to 30 mg of freeze-dried AB-1C strain was weighed. Next, the AB-1C strain was placed in an assist tube containing beads. After putting 0.1M of a methanol solution of 0.1M potassium hydroxide into it, it was put into a test tube with a cap. Next, it was saponified by reacting at 80 ° C. for 90 minutes. After completion of the reaction, the mixture was cooled, 1.0 mL of water was added to the reaction solution and stirred, and 2 mL of hexane was added and stirred. Next, it was allowed to stand and the hexane layer was collected in a test tube with a cap. Next, the hexane was vaporized in the dryer with the cap open. Next, 50 μL of a trimethylsilyl (TMS) agent was added, capped, and then left at 60 ° C. for 30 to 60 minutes. Next, 0.5 mL of water was added and mixed, and then 0.5 mL of hexane was added. The hexane layer was then transferred to a 1.5 mL vial to vaporize the hexane. Accurately 1 mL of hexane was added thereto to prepare a sample for hydrocarbon analysis.

次に、試料中の炭化水素の含有量をキャピラリーガスクロマトグラフィー(GC、GC-2010、島津製作所製)にて測定した。キャピラリーガスクロマトグラフィーの分析条件を以下に示す。 Next, the content of hydrocarbons in the sample was measured by capillary gas chromatography (GC, GC-2010, manufactured by Shimadzu Corporation). The analysis conditions for capillary gas chromatography are shown below.

(キャピラリーガスクロマトグラフィーの分析条件)
カラム:DB-1ms(SEG、内径0.25mm)
ガス:ヘリウムガス(He、70kPa)
検出:FID
(Analysis conditions for capillary gas chromatography)
Column: DB-1ms (SEG, inner diameter 0.25mm)
Gas: Helium gas (He, 70 kPa)
Detection: FID

測定結果としては、油成分中の炭化水素の含有量は66.8質量%であった。 As a result of the measurement, the content of hydrocarbon in the oil component was 66.8% by mass.

Figure 0007053231000007
Figure 0007053231000007

以上のことから、セネデスムス・エスピーAB-1C株から、燃料油となり得る炭化水素、リノール酸、α-リノレン酸、EPA等の機能性油、及び、アスタキサンチン等のカロテノイド類等の多数の有用物質が得られることが確かめられた。 From the above, from the Senedesmus SP AB-1C strain, a large number of useful substances such as hydrocarbons that can be fuel oils, functional oils such as linoleic acid, α-linolenic acid, and EPA, and carotenoids such as astaxanthin are available. It was confirmed that it could be obtained.

セネデスムス・エスピーAB-1C株によれば、バイオ燃料、機能性油又は機能性物質等の有用物質が得られる。さらに、前記得られた有用物質は、機能性食品若しくは栄養補助食品等の食品、愛玩動物用のペットフード若しくは家畜や養殖魚介類の飼料、又は、化粧品等に利用可能である。 According to the Senedesmus SP AB-1C strain, useful substances such as biofuels, functional oils or functional substances can be obtained. Further, the obtained useful substance can be used for foods such as functional foods or nutritional supplements, pet foods for pet animals, feeds for livestock and farmed fish and shellfish, cosmetics and the like.

Claims (13)

セネデスムス・エスピー(Scenedesmus sp.)AB-1C株(FERM P-22338)。 Scenedesmus sp. AB-1C strain (FERM P-22338). 請求項1に記載のセネデスムス・エスピーAB-1C株及びその抽出物を含み、
前記セネデスムス・エスピーAB-1C株及びその抽出物が栄養成分としてエイコサペンタエン酸を含む、栄養剤。
The Senedesmus SP AB-1C strain according to claim 1 and an extract thereof are contained.
A nutritional supplement containing the scenedesmus SP AB-1C strain and its extract containing eicosapentaenoic acid as a nutritional component.
前記セネデスムス・エスピーAB-1C株及びその抽出物が栄養成分として、さらに、アスタキサンチンを含む、請求項2に記載の栄養剤。 The nutritional supplement according to claim 2, wherein the Senedesmus SP AB-1C strain and an extract thereof contain astaxanthin as a nutritional component. 前記アスタキサンチンの含有量が、前記セネデスムス・エスピーAB-1C株の乾燥重量100gあたり300mg以上600mg以下である、請求項3に記載の栄養剤。 The nutritional supplement according to claim 3, wherein the content of astaxanthin is 300 mg or more and 600 mg or less per 100 g of the dry weight of the Senedesmus SP AB-1C strain. 請求項2~4のいずれか一項に記載の栄養剤を含む栄養成分補給用組成物。 A nutritional component supplementing composition comprising the nutritional supplement according to any one of claims 2 to 4. 栄養成分として、アスタキサンチン以外のカロテノイド類、リノール酸及びα-リノレン酸からなる群から選択される1種類以上を更に含む、請求項5に記載の栄養成分補給用組成物。 The nutritional component supplement composition according to claim 5, further comprising at least one selected from the group consisting of carotenoids other than astaxanthin, linoleic acid and α-linolenic acid as the nutritional component. 食品、機能性食品又は栄養補助食品である請求項5又は6に記載の栄養成分補給用組成物。 The nutritional component supplement composition according to claim 5 or 6, which is a food, a functional food, or a dietary supplement. 飼料又はペットフードである請求項5又は6に記載の栄養成分補給用組成物。 The nutritional component supplement composition according to claim 5 or 6, which is a feed or pet food. 化粧品である請求項5又は6に記載の栄養成分補給用組成物。 The nutritional component supplement composition according to claim 5 or 6, which is a cosmetic product. 請求項1に記載のセネデスムス・エスピーAB-1C株を培養する培養工程を備える栄養成分の製造方法。 A method for producing a nutritional component, comprising a culture step for culturing the Senedesmus sp. AB-1C strain according to claim 1. 更に、前記培養工程の後に、
前記セネデスムス・エスピーAB-1C株を破砕して細胞破砕物を得る破砕工程と、
前記細胞破砕物から栄養成分を分離する分離工程と、
をこの順に備える請求項10に記載の栄養成分の製造方法。
Further, after the culture step,
A crushing step of crushing the Senedesmus SP AB-1C strain to obtain a cell crushed product, and
The separation step of separating the nutrient component from the cell crushed product, and
10. The method for producing a nutritional component according to claim 10.
前記栄養成分が、エイコサペンタエン酸、カロテノイド類、リノール酸及びα-リノレン酸からなる群から選択される1種類以上である請求項10又は11に記載の栄養成分の製造方法。 The method for producing a nutritional component according to claim 10 or 11, wherein the nutritional component is one or more selected from the group consisting of eicosapentaenoic acid, carotenoids, linoleic acid and α-linolenic acid. 前記カロテノイド類がアスタキサンチンである請求項12に記載の栄養成分の製造方法。 The method for producing a nutritional component according to claim 12, wherein the carotenoids are astaxanthin.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008529546A (en) 2005-02-18 2008-08-07 ウニベルシダード デ アルメリア Novel microalgal species and their use for animal or human consumption and to obtain carotenoids
JP2015510763A (en) 2012-03-16 2015-04-13 フェルメンタル Production of docosahexaenoic acid and / or eicosapentaenoic acid in mixed nutrition mode by Scenedesmus
WO2015142999A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 U.S. Nutraceuticals, Llc D/B/A Valensa International Composition and method to improve blood lipid profiles and reduce low density lipoprotein (ldl) per-oxidation in humans using algae based oils and astaxanthin

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008529546A (en) 2005-02-18 2008-08-07 ウニベルシダード デ アルメリア Novel microalgal species and their use for animal or human consumption and to obtain carotenoids
JP2015510763A (en) 2012-03-16 2015-04-13 フェルメンタル Production of docosahexaenoic acid and / or eicosapentaenoic acid in mixed nutrition mode by Scenedesmus
WO2015142999A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 U.S. Nutraceuticals, Llc D/B/A Valensa International Composition and method to improve blood lipid profiles and reduce low density lipoprotein (ldl) per-oxidation in humans using algae based oils and astaxanthin

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Amritpreet Kaur Minhas, et al.,The isolation and identification of new microalgal strains producing oil and carotenoid simultaneously with biofuel potential,Bioresource Technology,2016年03月23日,Vol.211,p.556-565
Elevated production of carotenoids by a new isolate of Scenedesmus sp.,Algal Research,2015年06月06日,Vol.11,p.22-27

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