JP7041923B2 - Soy allergy antigen - Google Patents
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Description
本発明は、大豆に対するアレルギーの新規抗原に関する。本発明はまた、大豆に対するアレルギーの診断キット、診断用組成物、及び診断方法に関する。本発明はまた、当該抗原を含む医薬組成物、及び当該抗原が除去又は低減された大豆又は大豆加工品に関する。本発明はさらに、対象物における大豆抗原の有無を判定するためのテスターに関する。 The present invention relates to novel antigens for allergies to soybeans. The present invention also relates to a diagnostic kit, a diagnostic composition, and a diagnostic method for allergies to soybeans. The present invention also relates to a pharmaceutical composition containing the antigen, and soybean or processed soybean product from which the antigen has been removed or reduced. The present invention further relates to a tester for determining the presence or absence of soybean antigen in an object.
アレルギー患者の血清及び組織中では、特定の抗原に特異的なＩｇＥ抗体が産生される。このＩｇＥ抗体と特定の抗原の相互作用により生じた生理学的結果によりアレルギー反応が惹起される。 IgE antibodies specific for specific antigens are produced in the sera and tissues of allergic patients. Allergic reactions are triggered by the physiological consequences of the interaction of this IgE antibody with a particular antigen.
従来のアレルギー検査薬においては、単にアレルゲン候補の食品・材料等をすりつぶして抗原試薬を作成していることが多い（特許文献１）。このように従来の抗原試薬は、必ずしもアレルギー反応を引き起こす特定の抗原タンパク質（アレルゲンコンポーネント）を単独で含有するものではなく、複数のタンパク質成分を含むものである。したがって、従来の抗原試薬においては、アレルゲンコンポーネントごとに含有量が異なっていた。このため、従来の抗原試薬中に含まれる多数のタンパク質の中で、ＩｇＥ抗体との結合について陽性反応が判定可能な閾値を超える含有量のタンパク質がアレルゲンコンポーネントであった場合にのみ、アレルギー検査における陽性反応を検出することが可能であった。逆に、食品等のアレルゲン中の含有量が少ないアレルゲンコンポーネントにＩｇＥ抗体が結びつく患者については、従来のアレルギー検査薬を用いても陽性反応が判定できず、診断効率は十分に高いとはいえない状態であった。 In conventional allergy test agents, antigen reagents are often prepared by simply grinding foods and materials that are candidates for allergens (Patent Document 1). As described above, the conventional antigen reagent does not necessarily contain a specific antigen protein (allergen component) that causes an allergic reaction alone, but contains a plurality of protein components. Therefore, in the conventional antigen reagent, the content is different for each allergen component. Therefore, among a large number of proteins contained in conventional antigen reagents, only when the allergen component is a protein having a content exceeding the threshold value at which a positive reaction can be determined for binding to an IgE antibody is used in an allergy test. It was possible to detect a positive reaction. On the contrary, for patients whose IgE antibody is bound to an allergen component having a low content in allergens such as foods, a positive reaction cannot be determined even by using a conventional allergy test drug, and the diagnostic efficiency cannot be said to be sufficiently high. It was in a state.
また、アレルギー反応の症状や重篤度は、アレルゲンコンポーネントの含有量とは必ずしも相関しない。アレルゲン候補の食品・材料中に微量に含まれるアレルゲンコンポーネントに患者のＩｇＥ抗体が反応する場合であってもアレルギー症状が現れたり、重篤度に関与したりする場合がある。 Also, the symptoms and severity of allergic reactions do not necessarily correlate with the content of allergen components. Even if the patient's IgE antibody reacts with the allergen component contained in a trace amount in the food / material of the allergen candidate, allergic symptoms may appear or it may be involved in the severity.
粗抗原を構成する一つ一つのコンポーネントに対するＩｇＥ抗体を調べることにより、診断に直結する感作と汎アレルゲン等による交差抗原性に基づく感作を区別して診断効率を上げる試みも進められている。大豆アレルゲンに関しては、現在、８つが世界保健機関／国際免疫連合（WHO/IUIS）に登録されている。 Attempts are also being made to improve diagnostic efficiency by distinguishing between sensitization directly linked to diagnosis and sensitization based on cross-antigenicity due to panallergens, etc., by investigating IgE antibodies against each component constituting the crude antigen. Eight soy allergens are currently registered with the World Health Organization / International Union of Immunological Societies (WHO / IUIS).
しかしながら、アレルギー検査の信頼度を高めるためには、アレルゲン候補の食品・材料において、アレルゲンコンポーネントを網羅的に特定する必要があるところ、上記アレルゲンコンポーネントの測定による患者検出率はまだまだ不十分である。大豆の新規アレルゲンを同定することは、診断薬の精度を高めるだけでなく、低アレルゲン食品や治療薬のターゲットとしても非常に重要である。 However, in order to increase the reliability of allergen tests, it is necessary to comprehensively identify allergen components in foods and materials that are candidates for allergens, but the patient detection rate by measuring the above allergen components is still insufficient. Identifying novel soybean allergens is very important not only to improve the accuracy of diagnostic agents, but also as a target for low-allergen foods and therapeutic agents.
一方、タンパク質の分離・精製に関しては、従来、細胞抽出物などからタンパク質や核酸を分離・精製する方法が種々に検討されてきている。塩濃度を利用した透析、遠心分離などはその一例であるといえる。 On the other hand, regarding the separation / purification of proteins, various methods for separating / purifying proteins and nucleic acids from cell extracts and the like have been conventionally studied. Dialysis using salt concentration, centrifugation, etc. can be said to be examples.
また、タンパク質や核酸の残基が有する電荷や、分子量の違いを利用した精製方法も多数検討されている。電荷を利用した精製方法としては、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーや等電点電気泳動を例示できる。分子量の違いを利用した精製方法としては遠心分離、分子量ふるいによるカラムクロマトグラフィーやＳＤＳ－ＰＡＧＥ(ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動）を例示できる。 In addition, many purification methods using the charges of protein and nucleic acid residues and the differences in molecular weight have been studied. Examples of the purification method using electric charge include column chromatography using an ion exchange resin and isoelectric focusing. Examples of purification methods utilizing the difference in molecular weight include centrifugation, column chromatography by molecular weight sieving, and SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis).
近年、少量のサンプルから多様なタンパク質を分離精製する方法として、１次元目に等電点電気泳動を行い、２次元目にＳＤＳ－ＰＡＧＥを行う２次元電気泳動法が用いられている。出願人らはこれまでに、分離能が高い２次元電気泳動法を開発してきた（特許文献２～５）。
In recent years, as a method for separating and purifying various proteins from a small amount of sample, a two-dimensional electrophoresis method in which isoelectric focusing is performed in the first dimension and SDS-PAGE is performed in the second dimension has been used. The applicants have so far developed a two-dimensional electrophoresis method having high separability (
本発明は、大豆に対するアレルギーの新規抗原を提供する。本発明はまた、大豆に対するアレルギーの診断方法及び診断キットを提供する。本発明はまた、当該抗原を含む医薬組成物、及び当該抗原が除去又は低減された大豆又は大豆加工品を提供する。本発明はさらに、対象物における大豆抗原の有無を判定するためのテスターを提供する。 The present invention provides novel antigens for allergies to soybeans. The present invention also provides a method and a diagnostic kit for diagnosing allergies to soybeans. The present invention also provides a pharmaceutical composition containing the antigen, and soybean or processed soybean product from which the antigen has been removed or reduced. The present invention further provides a tester for determining the presence or absence of soybean antigen in an object.
本発明者らは、上記課題を解決するために大豆に対するアレルギーの原因抗原特定について鋭意研究を行った。その結果、大豆アレルギーを有する患者の血清中のＩｇＥ抗体が特異的に結合する新規な抗原を特定することに成功した。当該知見に基づいて、本発明は完成された。 In order to solve the above problems, the present inventors have conducted diligent research on the identification of the causative antigen of allergy to soybean. As a result, we succeeded in identifying a novel antigen to which IgE antibody specifically binds in the serum of patients with soybean allergy. Based on this finding, the present invention has been completed.
すなわち、一態様において、本発明は以下のとおりであってよい。 That is, in one aspect, the present invention may be as follows.
［１］大豆アレルギーの診断キットであって、以下（１）～（８）のタンパク質の少なくとも一つ：
（１）（１Ａ）ボウマン－バークタイププロテイナーゼインヒビターＤ－ＩＩ（Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II）又はその変異体であって、以下の（１Ａ-ａ）～（１Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１Ａ-ａ）配列番号２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｂ）配列番号２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｃ）配列番号１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｄ）配列番号１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１Ａ-ｅ）配列番号１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１Ｂ）配列番号１７～２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２）（２Ａ）リブロースビスホスフェートカルボキシラーゼラージチェイン（Ribulose bisphosphate carboxylase large chain）又はその変異体であって、以下の（２Ａ-ａ）～（２Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２Ａ-ａ）配列番号４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ-ｂ）配列番号４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ-ｃ）配列番号３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２Ａ-ｄ）配列番号３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２Ａ-ｅ）配列番号３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２Ｂ）配列番号２１～２８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３）（３Ａ）γ－グルタミルヒドロラーゼ（Gamma-glutamyl hydrolase）又はその変異体であって、以下の（３Ａ-ａ）～（３Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３Ａ-ａ）配列番号６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ-ｂ）配列番号６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ-ｃ）配列番号５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３Ａ-ｄ）配列番号５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３Ａ-ｅ）配列番号５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３Ｂ）配列番号２９又は３０で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４）（４Ａ）グアニンヌクレオチドバインディングプロテインサブユニットベータライクプロテイン（Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein）又はその変異体であって、以下の（４Ａ-ａ）～（４Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４Ａ-ａ）配列番号８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ-ｂ）配列番号８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ-ｃ）配列番号７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４Ａ-ｄ）配列番号７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４Ａ-ｅ）配列番号７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４Ｂ）配列番号３１又は３２で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５）（５Ａ）プロテインＳＬＥ３（Protein SLE3）又はその変異体であって、以下の（５Ａ-ａ）～（５Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５Ａ-ａ）配列番号１０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５Ａ-ｂ）配列番号１０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５Ａ-ｃ）配列番号９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５Ａ-ｄ）配列番号９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５Ａ-ｅ）配列番号９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５Ｂ）配列番号３３又は３４で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６）（６Ａ）シードビオチンコンテイニングプロテインＳＢＰ６５（Seed biotin-containing protein SBP65）又はその変異体であって、以下の（６Ａ-ａ）～（６Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（６Ａ-ａ）配列番号１２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６Ａ-ｂ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６Ａ-ｃ）配列番号１１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６Ａ-ｄ）配列番号１１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（６Ａ-ｅ）配列番号１１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（６Ｂ）配列番号３５～５３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（７）（７Ａ）フェリチン－２（Ferritin-2）又はその変異体であって、以下の（７Ａ-ａ）～（７Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（７Ａ-ａ）配列番号１４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７Ａ-ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７Ａ-ｃ）配列番号１３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７Ａ-ｄ）配列番号１３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（７Ａ-ｅ）配列番号１３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（７Ｂ）配列番号５４～６１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質
（８）（８Ａ）セルディビジョンサイクルプロテイン４８ホモログ（Cell division cycle protein 48 homolog）又はその変異体であって、以下の（８Ａ-ａ）～（８Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（８Ａ-ａ）配列番号１６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８Ａ-ｂ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８Ａ-ｃ）配列番号１５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８Ａ-ｄ）配列番号１５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（８Ａ-ｅ）配列番号１５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（８Ｂ）配列番号６２～６８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
を抗原として含む、前記診断キット。[1] A diagnostic kit for soybean allergy, at least one of the following proteins (1) to (8):
(1) (1A) Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II (Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II) or a mutant thereof, which is any of the following (1A-a) to (1A-e). Protein:
(1A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 2;
(1A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2;
(1A-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 1;
(1A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 1; or (1A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 1. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (1B) SEQ ID NOs: 17-20. Proteins including;
(2) (2A) Ribulose bisphosphate carboxylase large chain or a mutant thereof, which is any of the following proteins (2A-a) to (2A-e):
(2A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 4;
(2A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4;
(2A-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 3;
(2A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 3; or (2A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 3. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or (2B) at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 21 to 28. Proteins including;
(3) (3A) Gamma-glutamyl hydrolase or a mutant thereof, which is any of the following proteins (3A-a) to (3A-e):
(3A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 6;
(3A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6;
(3A-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 5;
(3A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 5; or (3A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 5. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions; or (3B) a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or 30;
(4) (4A) Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein or a variant thereof, which is any of the following (4A-a) to (4A-e). Protein:
(4A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 8;
(4A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8;
(4A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 7;
(4A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 7; or (4A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 7. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid having a specific base sequence under stringent conditions; or (4B) a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 or 32;
(5) (5A) Protein SLE3 (Protein SLE3) or a mutant thereof, which is any of the following proteins (5A-a) to (5A-e):
(5A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 10;
(5A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10;
(5A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 9;
(5A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 9; or (5A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 9. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions; or
(5B) A protein comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33 or 34;
(6) (6A) Seed biotin-containing protein SBP65 (Seed biotin-containing protein SBP65) or a mutant thereof, which is any of the following proteins (6A-a) to (6A-e):
(6A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 12;
(6A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12;
(6A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 11;
(6A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 11; or (6A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 11. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (6B) SEQ ID NOs: 35 to 53. Proteins including;
(7) (7A) Ferritin-2 (Ferritin-2) or a mutant thereof, which is any of the following proteins (7A-a) to (7A-e):
(7A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 14;
(7A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14.
(7A-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 13.
(7A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 13; or (7A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 13. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (7B) SEQ ID NOs: 54 to 61. (8) (8A) Cell
(8A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 16;
(8A-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 16;
(8A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 15.
(8A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 15; or (8A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 15. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or (8B) at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 62 to 68. Proteins including;
The diagnostic kit comprising.
［２］大豆アレルギーの診断用組成物であって、上記［１］において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つを抗原として含む、前記診断用組成物。 [2] A diagnostic composition for soybean allergy, which comprises at least one of the proteins specified as (1) to (8) in the above [1] as an antigen.
［３］対象の大豆アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が大豆アレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、上記［１］において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法。[3] A method for providing an index for diagnosing a target soybean allergy, which comprises the following steps:
(I) The sample obtained from the subject is brought into contact with the antigen, where the sample is a solution containing an Ig antibody;
(Ii) Detect the binding of IgE antibody to the antigen in the sample obtained from the subject;
(Iii) If binding of the subject's IgE antibody to the antigen is detected, an indicator that the subject is allergic to soybean is provided;
The above method, wherein the antigen is at least one of the proteins specified as (1) to (8) in the above [1].
［４］上記［１］において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つを含む医薬組成物。 [4] A pharmaceutical composition containing at least one of the proteins specified as (1) to (8) in the above [1].
［５］大豆アレルギーを治療するための、上記［４］に記載の医薬組成物。 [5] The pharmaceutical composition according to the above [4] for treating soybean allergy.
［６］抗原が除去又は低減されていることを特徴とする大豆又は大豆加工品であって、当該抗原は上記［１］において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記大豆または大豆加工品。 [6] A soybean or a processed soybean product characterized in that the antigen is removed or reduced, and the antigen is at least one of the proteins specified as (1) to (8) in the above [1]. The soybean or processed soybean product.
［７］上記［１］において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つと結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における大豆抗原の有無を判定するためのテスター。 [7] A tester for determining the presence or absence of a soybean antigen in an object, which comprises an antibody that binds to at least one of the proteins specified as (1) to (8) in the above [1].
［８］大豆由来の抗原であって、上記［１］において（１）～（８）として特定されるタンパク質の少なくとも一つであり、そして大豆に対するアレルギーの原因となる、前記抗原。 [8] The antigen derived from soybean, which is at least one of the proteins specified as (1) to (8) in the above [1], and which causes allergies to soybean.
［９］大豆アレルギーの診断キットであって、以下（１α）～（５５α）のタンパク質の少なくとも一つ：
（１α）（１αＡ１）endoplasmin homolog isoform X2又はその変異体であって、以下の（１αＡ１－ａ）～（１αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１αＡ１－ａ）配列番号７０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ１－ｂ）配列番号７０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ１－ｃ）配列番号６９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ１－ｄ）配列番号６９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１αＡ１－ｅ）配列番号６９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＢ１）配列番号７１～８７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１αＡ２）endoplasmin homolog isoform X2又はその変異体であって、以下の（１αＡ２－ａ）～（１αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１αＡ２－ａ）配列番号８９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ２－ｂ）配列番号８９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ２－ｃ）配列番号８８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１αＡ２－ｄ）配列番号８８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１αＡ２－ｅ）配列番号８８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１αＢ２）配列番号９０～１０４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２α）（２αＡ１）heat shock cognate protein 80又はその変異体であって、以下の（２αＡ１－ａ）～（２αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２αＡ１－ａ）配列番号１０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ１－ｂ）配列番号１０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ１－ｃ）配列番号１０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ１－ｄ）配列番号１０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２αＡ１－ｅ）配列番号１０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＢ１）配列番号１０７～１２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２αＡ２）heat shock protein 90-1又はその変異体であって、以下の（２αＡ２－ａ）～（２αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２αＡ２－ａ）配列番号１２２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ２－ｂ）配列番号１２２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ２－ｃ）配列番号１２１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ２－ｄ）配列番号１２１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２αＡ２－ｅ）配列番号１２１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２αＢ２）配列番号１２３～１３７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２αＡ３）hypothetical protein GLYMA_02G302500又はその変異体であって、以下の（２αＡ３－ａ）～（２αＡ３－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２αＡ３－ａ）配列番号１３９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ３－ｂ）配列番号１３９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ３－ｃ）配列番号１３８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２αＡ３－ｄ）配列番号１３８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２αＡ３－ｅ）配列番号１３８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２αＢ３）配列番号１４０～１５３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４α）（４αＡ）embryo-specific urease isoform X1又はその変異体であって、以下の（４αＡ－ａ）～（４αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４αＡ－ａ）配列番号１５５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４αＡ－ｂ）配列番号１５５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４αＡ－ｃ）配列番号１５４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４αＡ－ｄ）配列番号１５４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４αＡ－ｅ）配列番号１５４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４αＢ）配列番号１５６および１５７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５α）（５αＡ）alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic/amyloplastic又はその変異体であって、以下の（５αＡ－ａ）～（５αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５αＡ－ａ）配列番号１５９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５αＡ－ｂ）配列番号１５９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５αＡ－ｃ）配列番号１５８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５αＡ－ｄ）配列番号１５８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５αＡ－ｅ）配列番号１５８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５αＢ）配列番号１６０および１６１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（６α）（６αＡ１）aconitate hydratase 1又はその変異体であって、以下の（６αＡ１－ａ）～（６αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（６αＡ１－ａ）配列番号１６３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６αＡ１－ｂ）配列番号１６３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６αＡ１－ｃ）配列番号１６２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６αＡ１－ｄ）配列番号１６２で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（６αＡ１－ｅ）配列番号１６２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６αＢ１）配列番号１６４～１６７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；又は
（６αＡ２）aconitate hydratase 1又はその変異体であって、以下の（６αＡ２－ａ）～（６αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（６αＡ２－ａ）配列番号１６９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６αＡ２－ｂ）配列番号１６９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６αＡ２－ｃ）配列番号１６８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（６αＡ２－ｄ）配列番号１６８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（６αＡ２－ｅ）配列番号１６８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（６αＢ２）配列番号１７０～１７２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（７α）（７αＡ）methionine synthase又はその変異体であって、以下の（７αＡ－ａ）～（７αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（７αＡ－ａ）配列番号１７４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７αＡ－ｂ）配列番号１７４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７αＡ－ｃ）配列番号１７３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（７αＡ－ｄ）配列番号１７３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（７αＡ－ｅ）配列番号１７３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（７αＢ）配列番号１７５～１８７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（８α）（８αＡ）transketolase, chloroplastic又はその変異体であって、以下の（８αＡ－ａ）～（８αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（８αＡ－ａ）配列番号１８９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８αＡ－ｂ）配列番号１８９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８αＡ－ｃ）配列番号１８８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（８αＡ－ｄ）配列番号１８８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（８αＡ－ｅ）配列番号１８８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（８αＢ）配列番号１９０～１９９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（９α）（９αＡ）lysine-tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2又はその変異体であって、以下の（９αＡ－ａ）～（９αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（９αＡ－ａ）配列番号２０１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（９αＡ－ｂ）配列番号２０１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（９αＡ－ｃ）配列番号２００において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（９αＡ－ｄ）配列番号２００で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（９αＡ－ｅ）配列番号２００で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（９αＢ）配列番号２０２で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０α）（１０αＡ１）chaperonin CPN60-2, mitochondrial又はその変異体であって、以下の（１０αＡ１－ａ）～（１０αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１０αＡ１－ａ）配列番号２０４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０αＡ１－ｂ）配列番号２０４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０αＡ１－ｃ）配列番号２０３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０αＡ１－ｄ）配列番号２０３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１０αＡ１－ｅ）配列番号２０３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０αＢ１）配列番号２０５～２１８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１０αＡ２）chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1又はその変異体であって、以下の（１０αＡ２－ａ）～（１０αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１０αＡ２－ａ）配列番号２２０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０αＡ２－ｂ）配列番号２２０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０αＡ２－ｃ）配列番号２１９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１０αＡ２－ｄ）配列番号２１９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１０αＡ２－ｅ）配列番号２１９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１０αＢ２）配列番号２２１～２３１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１１α）（１１αＡ）polyadenylate-binding protein 8 isoform X3又はその変異体であって、以下の（１１αＡ－ａ）～（１１αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１１αＡ－ａ）配列番号２３３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１αＡ－ｂ）配列番号２３３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１αＡ－ｃ）配列番号２３２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１１αＡ－ｄ）配列番号２３２で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１１αＡ－ｅ）配列番号２３２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１１αＢ）配列番号２３４～２３７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１２α）（１２αＡ）pyrophosphate-fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like又はその変異体であって、以下の（１２αＡ－ａ）～（１２αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１２αＡ－ａ）配列番号２３９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１２αＡ－ｂ）配列番号２３９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１２αＡ－ｃ）配列番号２３８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１２αＡ－ｄ）配列番号２３８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１２αＡ－ｅ）配列番号２３８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１２αＢ）配列番号２４０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３α）（１３αＡ１）protein disulfide isomerase-like protein precursor又はその変異体であって、以下の（１３αＡ１－ａ）～（１３αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１３αＡ１－ａ）配列番号２４２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３αＡ１－ｂ）配列番号２４２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３αＡ１－ｃ）配列番号２４１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３αＡ１－ｄ）配列番号２４１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１３αＡ１－ｅ）配列番号２４１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３αＢ１）配列番号２４３～２５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１３αＡ２）protein disulfide-isomerase又はその変異体であって、以下の（１３αＡ２－ａ）～（１３αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１３αＡ２－ａ）配列番号２５４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３αＡ２－ｂ）配列番号２５４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３αＡ２－ｃ）配列番号２５３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１３αＡ２－ｄ）配列番号２５３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１３αＡ２－ｅ）配列番号２５３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１３αＢ２）配列番号２５５～２７８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１４α）（１４αＡ１）V-type proton ATPase subunit B 2又はその変異体であって、以下の（１４αＡ１－ａ）～（１４αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１４αＡ１－ａ）配列番号２８０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４αＡ１－ｂ）配列番号２８０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４αＡ１－ｃ）配列番号２７９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４αＡ１－ｄ）配列番号２７９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１４αＡ１－ｅ）配列番号２７９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４αＢ１）配列番号２８１～２８４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１４αＡ２）V-type proton ATPase subunit B 2又はその変異体であって、以下の（１４αＡ２－ａ）～（１４αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１４αＡ２－ａ）配列番号２８６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４αＡ２－ｂ）配列番号２８６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４αＡ２－ｃ）配列番号２８５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１４αＡ２－ｄ）配列番号２８５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１４αＡ２－ｅ）配列番号２８５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１４αＢ２）配列番号２８７～２８９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１５，１６α）（１５，１６αＡ１）UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase又はその変異体であって、以下の（１５，１６αＡ１－ａ）～（１５，１６αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１５，１６αＡ１－ａ）配列番号２９１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１５，１６αＡ１－ｂ）配列番号２９１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１５，１６αＡ１－ｃ）配列番号２９０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１５，１６αＡ１－ｄ）配列番号２９０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１５，１６αＡ１－ｅ）配列番号２９０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１５，１６αＢ１）配列番号２９２～３０４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１５，１６αＡ２）hypothetical protein GLYMA_02G241100又はその変異体であって、以下の（１５，１６αＡ２－ａ）～（１５，１６αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１５，１６αＡ２－ａ）配列番号３０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１５，１６αＡ２－ｂ）配列番号３０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１５，１６αＡ２－ｃ）配列番号３０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１５，１６αＡ２－ｄ）配列番号３０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１５，１６αＡ２－ｅ）配列番号３０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１５，１６αＢ２）配列番号３０７～３１８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１７α）（１７αＡ１）guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2又はその変異体であって、以下の（１７αＡ１－ａ）～（１７αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１７αＡ１－ａ）配列番号３２０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１７αＡ１－ｂ）配列番号３２０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１７αＡ１－ｃ）配列番号３１９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１７αＡ１－ｄ）配列番号３１９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１７αＡ１－ｅ）配列番号３１９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１７αＢ１）配列番号３２１～３２５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１７αＡ２）rab GDP dissociation inhibitor alpha-like又はその変異体であって、以下の（１７αＡ２－ａ）～（１７αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１７αＡ２－ａ）配列番号３２７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１７αＡ２－ｂ）配列番号３２７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１７αＡ２－ｃ）配列番号３２６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１７αＡ２－ｄ）配列番号３２６で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１７αＡ２－ｅ）配列番号３２６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１７αＢ２）配列番号３２８～３３２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１８α）（１８αＡ）hypothetical protein GLYMA_10G028300又はその変異体であって、以下の（１８αＡ－ａ）～（１８αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１８αＡ－ａ）配列番号３３４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１８αＡ－ｂ）配列番号３３４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１８αＡ－ｃ）配列番号３３３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１８αＡ－ｄ）配列番号３３３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１８αＡ－ｅ）配列番号３３３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１８αＢ）配列番号３３５～３３９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（１９α）（１９αＡ）sucrose binding protein homolog S-64又はその変異体であって、以下の（１９αＡ－ａ）～（１９αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１９αＡ－ａ）配列番号３４１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１９αＡ－ｂ）配列番号３４１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１９αＡ－ｃ）配列番号３４０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１９αＡ－ｄ）配列番号３４０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１９αＡ－ｅ）配列番号３４０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１９αＢ）配列番号３４２～３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２５α）（２５αＡ１）succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial又はその変異体であって、以下の（２５αＡ１－ａ）～（２５αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２５αＡ１－ａ）配列番号３４８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２５αＡ１－ｂ）配列番号３４８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２５αＡ１－ｃ）配列番号３４７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２５αＡ１－ｄ）配列番号３４７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２５αＡ１－ｅ）配列番号３４７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２５αＢ１）配列番号３４９～３５６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２５αＡ２）succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial又はその変異体であって、以下の（２５αＡ２－ａ）～（２５αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２５αＡ２－ａ）配列番号３５８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２５αＡ２－ｂ）配列番号３５８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２５αＡ２－ｃ）配列番号３５７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２５αＡ２－ｄ）配列番号３５７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２５αＡ２－ｅ）配列番号３５７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２５αＢ２）配列番号３５９～３６５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２６α）（２６αＡ１）phosphoglycerate kinase, cytosolic又はその変異体であって、以下の（２６αＡ１－ａ）～（２６αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２６αＡ１－ａ）配列番号３６７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ１－ｂ）配列番号３６７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ１－ｃ）配列番号３６６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ１－ｄ）配列番号３６６で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２６αＡ１－ｅ）配列番号３６６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＢ１）配列番号３６８～３８２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２６αＡ２）phosphoglycerate kinase, cytosolic又はその変異体であって、以下の（２６αＡ２－ａ）～（２６αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２６αＡ２－ａ）配列番号３８４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ２－ｂ）配列番号３８４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ２－ｃ）配列番号３８３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ２－ｄ）配列番号３８３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２６αＡ２－ｅ）配列番号３８３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＢ２）配列番号３８５～３９２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２６αＡ３）phosphoglycerate kinase, cytosolic又はその変異体であって、以下の（２６αＡ３－ａ）～（２６αＡ３－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２６αＡ３－ａ）配列番号３９４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ３－ｂ）配列番号３９４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ３－ｃ）配列番号３９３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２６αＡ３－ｄ）配列番号３９３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２６αＡ３－ｅ）配列番号３９３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２６αＢ３）配列番号３９５～４０９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２７α）（２７αＡ１）alcohol dehydrogenase 1又はその変異体であって、以下の（２７αＡ１－ａ）～（２７αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２７αＡ１－ａ）配列番号４１１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ１－ｂ）配列番号４１１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ１－ｃ）配列番号４１０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ１－ｄ）配列番号４１０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２７αＡ１－ｅ）配列番号４１０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＢ１）配列番号４１２～４１６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２７αＡ２）alcohol dehydrogenase 1又はその変異体であって、以下の（２７αＡ２－ａ）～（２７αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２７αＡ２－ａ）配列番号４１８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ２－ｂ）配列番号４１８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ２－ｃ）配列番号４１７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ２－ｄ）配列番号４１７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２７αＡ２－ｅ）配列番号４１７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＢ２）配列番号４１９および４２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２７αＡ３）alcohol dehydrogenase 1-like又はその変異体であって、以下の（２７αＡ３－ａ）～（２７αＡ３－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２７αＡ３－ａ）配列番号４２２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ３－ｂ）配列番号４２２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ３－ｃ）配列番号４２１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２７αＡ３－ｄ）配列番号４２１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２７αＡ３－ｅ）配列番号４２１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２７αＢ３）配列番号４２３～４２７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２８α）（２８αＡ）35 kDa seed maturation protein isoform X1又はその変異体であって、以下の（２８αＡ－ａ）～（２８αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２８αＡ－ａ）配列番号４２９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２８αＡ－ｂ）配列番号４２９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２８αＡ－ｃ）配列番号４２８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２８αＡ－ｄ）配列番号４２８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２８αＡ－ｅ）配列番号４２８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２８αＢ）配列番号４３０～４３３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２９－３３α）（２９－３３αＡ１）glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1又はその変異体であって、以下の（２９－３３αＡ１－ａ）～（２９－３３αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２９－３３αＡ１－ａ）配列番号４３５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ１－ｂ）配列番号４３５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ１－ｃ）配列番号４３４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ１－ｄ）配列番号４３４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２９－３３αＡ１－ｅ）配列番号４３４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＢ１）配列番号４３６～４３９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２９－３３αＡ２）glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, cytosolic又はその変異体であって、以下の（２９－３３αＡ２－ａ）～（２９－３３αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２９－３３αＡ２－ａ）配列番号４４１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ２－ｂ）配列番号４４１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ２－ｃ）配列番号４４０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ２－ｄ）配列番号４４０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２９－３３αＡ２－ｅ）配列番号４４０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＢ２）配列番号４４２～４４５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（２９－３３αＡ３）uncharacterized protein LOC100782924又はその変異体であって、以下の（２９－３３αＡ３－ａ）～（２９－３３αＡ３－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（２９－３３αＡ３－ａ）配列番号４４７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ３－ｂ）配列番号４４７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ３－ｃ）配列番号４４６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（２９－３３αＡ３－ｄ）配列番号４４６で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（２９－３３αＡ３－ｅ）配列番号４４６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（２９－３３αＢ３）配列番号４４８～４５１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３４α）（３４αＡ１）bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like又はその変異体であって、以下の（３４αＡ１－ａ）～（３４αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３４αＡ１－ａ）配列番号４５３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＡ１－ｂ）配列番号４５３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＡ１－ｃ）配列番号４５２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＡ１－ｄ）配列番号４５２で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３４αＡ１－ｅ）配列番号４５２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＢ１）配列番号４５４で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＡ２）uncharacterized protein LOC100803483又はその変異体であって、以下の（３４αＡ２－ａ）～（３４αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３４αＡ２－ａ）配列番号４５６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＡ２－ｂ）配列番号４５６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＡ２－ｃ）配列番号４５５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３４αＡ２－ｄ）配列番号４５５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３４αＡ２－ｅ）配列番号４５５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３４αＢ２）配列番号４５７および４５８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３５α）（３５αＡ１）elongation factor 1-alpha又はその変異体であって、以下の（３５αＡ１－ａ）～（３５αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３５αＡ１－ａ）配列番号４６０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ１－ｂ）配列番号４６０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ１－ｃ）配列番号４５９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ１－ｄ）配列番号４５９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３５αＡ１－ｅ）配列番号４５９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＢ１）配列番号４６１～４６６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３５αＡ２）elongation factor 1-alpha又はその変異体であって、以下の（３５αＡ２－ａ）～（３５αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３５αＡ２－ａ）配列番号４６８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ２－ｂ）配列番号４６８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ２－ｃ）配列番号４６７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ２－ｄ）配列番号４６７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３５αＡ２－ｅ）配列番号４６７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＢ２）配列番号４６９～４７１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３５αＡ３）elongation factor-1A isoform X1又はその変異体であって、以下の（３５αＡ３－ａ）～（３５αＡ３－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３５αＡ３－ａ）配列番号４７３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ３－ｂ）配列番号４７３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ３－ｃ）配列番号４７２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３５αＡ３－ｄ）配列番号４７２で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３５αＡ３－ｅ）配列番号４７２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３５αＢ３）配列番号４７４～４７７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３６，３７α）（３６，３７αＡ１）seed maturation protein PM34又はその変異体であって、以下の（３６，３７αＡ１－ａ）～（３６，３７αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３６，３７αＡ１－ａ）配列番号４７９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ１－ｂ）配列番号４７９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ１－ｃ）配列番号４７８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ１－ｄ）配列番号４７８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３６，３７αＡ１－ｅ）配列番号４７８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＢ１）配列番号４８０～４８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３６，３７αＡ２）uncharacterized protein LOC100809384又はその変異体であって、以下の（３６，３７αＡ２－ａ）～（３６，３７αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３６，３７αＡ２－ａ）配列番号４８５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ２－ｂ）配列番号４８５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ２－ｃ）配列番号４８４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ２－ｄ）配列番号４８４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３６，３７αＡ２－ｅ）配列番号４８４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＢ２）配列番号４８６および４８７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３６，３７αＡ３）hypothetical protein GLYMA_10G155300又はその変異体であって、以下の（３６，３７αＡ３－ａ）～（３６，３７αＡ３－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３６，３７αＡ３－ａ）配列番号４８９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ３－ｂ）配列番号４８９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ３－ｃ）配列番号４８８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３６，３７αＡ３－ｄ）配列番号４８８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３６，３７αＡ３－ｅ）配列番号４８８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３６，３７αＢ３）配列番号４９０～４９３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３８α）（３８αＡ）seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1又はその変異体であって、以下の（３８αＡ－ａ）～（３８αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３８αＡ－ａ）配列番号４９５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３８αＡ－ｂ）配列番号４９５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３８αＡ－ｃ）配列番号４９４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３８αＡ－ｄ）配列番号４９４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３８αＡ－ｅ）配列番号４９４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３８αＢ）配列番号４９６～５１３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（３９α）（３９αＡ）ATP synthase subunit O, mitochondrial-like又はその変異体であって、以下の（３９αＡ－ａ）～（３９αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（３９αＡ－ａ）配列番号５１５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３９αＡ－ｂ）配列番号５１５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３９αＡ－ｃ）配列番号５１４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（３９αＡ－ｄ）配列番号５１４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（３９αＡ－ｅ）配列番号５１４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（３９αＢ）配列番号５１６で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４０，５６α）（４０，５６αＡ）P24 oleosin isoform A又はその変異体であって、以下の（４０，５６αＡ－ａ）～（４０，５６αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４０，５６αＡ－ａ）配列番号５１８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４０，５６αＡ－ｂ）配列番号５１８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４０，５６αＡ－ｃ）配列番号５１７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４０，５６αＡ－ｄ）配列番号５１７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４０，５６αＡ－ｅ）配列番号５１７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４０，５６αＢ）配列番号５１９および５２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４１α）（４１αＡ）uncharacterized protein At3g49720-like isoform X2又はその変異体であって、以下の（４１αＡ－ａ）～（４１αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４１αＡ－ａ）配列番号５２２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４１αＡ－ｂ）配列番号５２２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４１αＡ－ｃ）配列番号５２１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４１αＡ－ｄ）配列番号５２１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４１αＡ－ｅ）配列番号５２１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４１αＢ）配列番号５２３で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３α）（４２，４３αＡ１）superoxide dismutase [Mn], mitochondrial又はその変異体であって、以下の（４２，４３αＡ１－ａ）～（４２，４３αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４２，４３αＡ１－ａ）配列番号５２５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３αＡ１－ｂ）配列番号５２５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３αＡ１－ｃ）配列番号５２４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３αＡ１－ｄ）配列番号５２４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４２，４３αＡ１－ｅ）配列番号５２４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３αＢ１）配列番号５２６～５３１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４２，４３αＡ２）hypothetical protein GLYMA_04G221300又はその変異体であって、以下の（４２，４３αＡ２－ａ）～（４２，４３αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４２，４３αＡ２－ａ）配列番号５３３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３αＡ２－ｂ）配列番号５３３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３αＡ２－ｃ）配列番号５３２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４２，４３αＡ２－ｄ）配列番号５３２で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４２，４３αＡ２－ｅ）配列番号５３２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４２，４３αＢ２）配列番号５３４～５３９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４５α）（４５αＡ１）uncharacterized protein LOC100499771又はその変異体であって、以下の（４５αＡ１－ａ）～（４５αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４５αＡ１－ａ）配列番号５４１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４５αＡ１－ｂ）配列番号５４１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４５αＡ１－ｃ）配列番号５４０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４５αＡ１－ｄ）配列番号５４０で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４５αＡ１－ｅ）配列番号５４０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４５αＢ１）配列番号５４２～５４５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４５αＡ２）hypothetical protein GLYMA_09G192800又はその変異体であって、以下の（４５αＡ２－ａ）～（４５αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４５αＡ２－ａ）配列番号５４７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４５αＡ２－ｂ）配列番号５４７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４５αＡ２－ｃ）配列番号５４６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４５αＡ２－ｄ）配列番号５４６で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４５αＡ２－ｅ）配列番号５４６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４５αＢ２）配列番号５４８～５５１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４６α）（４６αＡ）seed maturation protein PM22又はその変異体であって、以下の（４６αＡ－ａ）～（４６αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４６αＡ－ａ）配列番号５５３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４６αＡ－ｂ）配列番号５５３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４６αＡ－ｃ）配列番号５５２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４６αＡ－ｄ）配列番号５５２で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４６αＡ－ｅ）配列番号５５２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４６αＢ）配列番号５５４で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７α）（４７αＡ１）eukaryotic translation initiation factor 5A-2又はその変異体であって、以下の（４７αＡ１－ａ）～（４７αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４７αＡ１－ａ）配列番号５５６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７αＡ１－ｂ）配列番号５５６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７αＡ１－ｃ）配列番号５５５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７αＡ１－ｄ）配列番号５５５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４７αＡ１－ｅ）配列番号５５５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７αＢ１）配列番号５５７および５５８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４７αＡ２）uncharacterized protein LOC100305510又はその変異体であって、以下の（４７αＡ２－ａ）～（４７αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４７αＡ２－ａ）配列番号５６０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７αＡ２－ｂ）配列番号５６０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７αＡ２－ｃ）配列番号５５９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４７αＡ２－ｄ）配列番号５５９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４７αＡ２－ｅ）配列番号５５９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４７αＢ２）配列番号５６１～５６３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（４８α）（４８αＡ）uncharacterized protein LOC100306570又はその変異体であって、以下の（４８αＡ－ａ）～（４８αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（４８αＡ－ａ）配列番号５６５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４８αＡ－ｂ）配列番号５６５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４８αＡ－ｃ）配列番号５６４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（４８αＡ－ｄ）配列番号５６４で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（４８αＡ－ｅ）配列番号５６４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（４８αＢ）配列番号５６６～５７０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５０α）（５０αＡ）uncharacterized protein LOC100813859又はその変異体であって、以下の（５０αＡ－ａ）～（５０αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５０αＡ－ａ）配列番号５７２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５０αＡ－ｂ）配列番号５７２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５０αＡ－ｃ）配列番号５７１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５０αＡ－ｄ）配列番号５７１で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５０αＡ－ｅ）配列番号５７１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５０αＢ）配列番号５７３～５７６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５１α）（５１αＡ）14-3-3-like protein又はその変異体であって、以下の（５１αＡ－ａ）～（５１αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５１αＡ－ａ）配列番号５７８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５１αＡ－ｂ）配列番号５７８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５１αＡ－ｃ）配列番号５７７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５１αＡ－ｄ）配列番号５７７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５１αＡ－ｅ）配列番号５７７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５１αＢ）配列番号５７９～５８２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５２α）（５２αＡ）probable fructokinase-4又はその変異体であって、以下の（５２αＡ－ａ）～（５２αＡ－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５２αＡ－ａ）配列番号５８４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５２αＡ－ｂ）配列番号５８４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５２αＡ－ｃ）配列番号５８３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５２αＡ－ｄ）配列番号５８３で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５２αＡ－ｅ）配列番号５８３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５２αＢ）配列番号５８５～５８８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５３α）（５３αＡ１）triosephosphate isomerase isoform X1又はその変異体であって、以下の（５３αＡ１－ａ）～（５３αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５３αＡ１－ａ）配列番号５９０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＡ１－ｂ）配列番号５９０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＡ１－ｃ）配列番号５８９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＡ１－ｄ）配列番号５８９で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５３αＡ１－ｅ）配列番号５８９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＢ１）配列番号５９１～５９７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５３αＡ２）triosephosphate isomerase, cytosolic又はその変異体であって、以下の（５３αＡ２－ａ）～（５３αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５３αＡ２－ａ）配列番号５９９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＡ２－ｂ）配列番号５９９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＡ２－ｃ）配列番号５９８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＡ２－ｄ）配列番号５９８で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５３αＡ２－ｅ）配列番号５９８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５３αＢ２）配列番号６００～６０４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５４α）（５４αＡ１）superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1又はその変異体であって、以下の（５４αＡ１－ａ）～（５４αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５４αＡ１－ａ）配列番号６０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５４αＡ１－ｂ）配列番号６０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５３αＡ１－ｃ）配列番号６０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５４αＡ１－ｄ）配列番号６０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５４αＡ１－ｅ）配列番号６０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５４αＢ１）配列番号６０７～６１１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５４αＡ２）iron-superoxide dismutase又はその変異体であって、以下の（５４αＡ２－ａ）～（５４αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５４αＡ２－ａ）配列番号６１３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５４αＡ２－ｂ）配列番号６１３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５４αＡ２－ｃ）配列番号６１２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５４αＡ２－ｄ）配列番号６１２で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５４αＡ２－ｅ）配列番号６１２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５４αＢ２）配列番号６１４～６１６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；又は
（５５α）（５５αＡ１）51 kDa seed maturation protein precursor又はその変異体であって、以下の（５５αＡ１－ａ）～（５５αＡ１－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５５αＡ１－ａ）配列番号６１８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５５αＡ１－ｂ）配列番号６１８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５５αＡ１－ｃ）配列番号６１７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５５αＡ１－ｄ）配列番号６１７で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５５αＡ１－ｅ）配列番号６１７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５５αＢ１）配列番号６１９～６３５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
（５５αＡ２）Lea protein precursor又はその変異体であって、以下の（５５αＡ２－ａ）～（５５αＡ２－ｅ）のいずれかのタンパク質：
（５５αＡ２－ａ）配列番号６３７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５５αＡ２－ｂ）配列番号６３７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５５αＡ２－ｃ）配列番号６３６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（５５αＡ２－ｄ）配列番号６３６で示される塩基配列と同一性が７０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（５５αＡ２－ｅ）配列番号６３６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（５５αＢ２）配列番号６３８～６４９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質；
を抗原として含む、前記診断キット。[9] A diagnostic kit for soybean allergy, at least one of the following proteins (1α) to (55α):
(1α) (1αA1) endoplasmin homolog isoform X2 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (1αA1-a) to (1αA1-e):
(1αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 70;
(1αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 70;
(1αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 69;
(1αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 69; or (1αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 69. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(1αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 71-87;
(1αA2) endoplasmin homolog isoform X2 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (1αA2-a) to (1αA2-e):
(1αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 89;
(1αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 89;
(1αA2-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 88;
(1αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 88; or (1αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 88. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (1αB2) SEQ ID NOs: 90 to 104. Proteins including;
(2α) (2αA1) heat shock cognate protein 80 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (2αA1-a) to (2αA1-e):
(2αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 106;
(2αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 106;
(2αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 105;
(2αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 105; or (2αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 105. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(2αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 107-120;
(2αA2) heat shock protein 90-1 or a variant thereof, which is any of the following proteins (2αA2-a) to (2αA2-e):
(2αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 122;
(2αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 122;
(2αA2-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 121;
(2αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 121; or (2αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 121. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (2αB2) SEQ ID NOs: 123 to 137. Proteins including;
(2αA3) hypothetical protein GLYMA_02G302500 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (2αA3-a) to (2αA3-e):
(2αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 139;
(2αA3-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 139;
(2αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 138;
(2αA3-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 138; or (2αA3-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 138. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (2αB3) SEQ ID NOs: 140 to 153. Proteins including;
(4α) (4αA) Embryo-specific urease isoform X1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (4αA-a) to (4αA-e):
(4αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 155;
(4αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 155;
(4αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 154;
(4αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 154; or (4αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 154. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (4αB) SEQ ID NOs: 156 and 157. Proteins including;
(5α) (5αA) alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic / amyloplastic or a mutant thereof, and any of the following proteins (5αA-a) to (5αA-e):
(5αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 159;
(5αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 159;
(5αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 158;
(5αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 158; or (5αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 158. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (5αB) SEQ ID NOs: 160 and 161. Proteins including;
(6α) (6αA1) aconitate hydratase 1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (6αA1-a) to (6αA1-e):
(6αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 163;
(6αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163;
(6αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 162;
(6αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 162; or (6αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 162. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(6αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 164 to 167; or (6αA2) aconitate hydratase 1 or a variant thereof, which are the following (6αA2-a) to (6αA2). -E) Any protein:
(6αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 169;
(6αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 169;
(6αA2-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 168;
(6αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 168; or (6αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 168. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (6αB2) SEQ ID NOs: 170 to 172. Proteins including;
(7α) (7αA) methionine synthase or a mutant thereof, which is any of the following proteins (7αA-a) to (7αA-e):
(7αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 174;
(7αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 174;
(7αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 173;
(7αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 173; or (7αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 173. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (7αB) SEQ ID NOs: 175 to 187. Proteins including;
(8α) (8αA) transketolase, chloroplastic or a mutant thereof, and any of the following proteins (8αA-a) to (8αA-e):
(8αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 189;
(8αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 189;
(8αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 188;
(8αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 188; or (8αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 188. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (8αB) SEQ ID NOs: 190 to 199. Proteins including;
(9α) (9αA) lysine-tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2 or a mutant thereof, and any of the following proteins (9αA-a) to (9αA-e):
(9αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 201;
(9αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 201;
(9αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 200;
(9αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 200; or (9αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 200. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions; or (9αB) a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 202;
(10α) (10αA1) chaperonin CPN60-2, mitochondrial or a mutant thereof, and any of the following proteins (10αA1-a) to (10αA1-e):
(10αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 204;
(10αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 204;
(10αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 203;
(10αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 203; or (10αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 203. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(10αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 205-218;
(10αA2) chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1 or a mutant thereof, and any of the following proteins (10αA2-a) to (10αA2-e):
(10αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 220;
(10αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 220;
(10αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 219;
(10αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 219; or (10αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 219. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (10αB2) SEQ ID NOs: 221-231. Proteins including;
(11α) (11αA) polyadenylate-binding
(11αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 233;
(11αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 233;
(11αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 232;
(11αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 232; or (11αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 232. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (11αB) SEQ ID NOs: 234 to 237. Proteins including;
(12α) (12αA) pyrophosphate-fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like or a mutant thereof, which is any of the following proteins (12αA-a) to (12αA-e):
(12αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 239;
(12αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 239;
(12αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 238;
(12αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 238; or (12αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 238. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions; or (12αB) a protein containing the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 240;
(13α) (13αA1) protein disulfide isomerase-like protein precursor or a variant thereof, which is any of the following proteins (13αA1-a) to (13αA1-e):
(13αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 242;
(13αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 242;
(13αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 241;
(13αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 241; or (13αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 241. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(13αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 243 to 252;
(13αA2) protein disulfide-isomerase or a variant thereof, which is any of the following proteins (13αA2-a) to (13αA2-e):
(13αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 254;
(13αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 254;
(13αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 253;
(13αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 253; or (13αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 253. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (13αB2) SEQ ID NOs: 255 to 278. Proteins including;
(14α) (14αA1) V-type proton
(14αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 280;
(14αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 280;
(14αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 279;
(14αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 279; or (14αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 279. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(14αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 281 to 284;
(14αA2) V-type proton
(14αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 286;
(14αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 286;
(14αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 285;
(14αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 285; or (14αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 285. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (14αB2) SEQ ID NOs: 287 to 289. Proteins including;
(15,16α) (15,16αA1) UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase or a mutant thereof, which is any of the following proteins (15,16αA1-a) to (15,16αA1-e):
(15,16αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 291;
(15,16αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 291;
(15,16αA1-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 290;
(15,16αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 290; or (15,16αA1-e) base shown by SEQ ID NO: 290. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence;
(15,16αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 292 to 304;
(15,16αA2) hypothetical protein GLYMA_02G241100 or a variant thereof, which is any of the following proteins (15,16αA2-a) to (15,16αA2-e):
(15,16αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 306;
(15,16αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 306;
(15,16αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 305;
(15,16αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 305; or (15,16αA2-e) base shown by SEQ ID NO: 305. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence and a nucleic acid hybridizing under stringent conditions; or (15, 16αB2) selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 307 to 318. A protein containing at least one of the amino acid sequences;
(17α) (17αA1) guanosine nucleotide
(17αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 320;
(17αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 320;
(17αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 319;
(17αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 319; or (17αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 319. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(17αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 321 to 325;
(17αA2) rab GDP dissociation inhibitor alpha-like or a mutant thereof, and any of the following proteins (17αA2-a) to (17αA2-e):
(17αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 327;
(17αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 327;
(17αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 326;
(17αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 326; or (17αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 326. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (17αB2) SEQ ID NOs: 328 to 332. Proteins including;
(18α) (18αA) hypothetical protein GLYMA_10G028300 or a variant thereof, which is any of the following proteins (18αA-a) to (18αA-e):
(18αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 334;
(18αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 334;
(18αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 333;
(18αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 333; or (18αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 333. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (18αB) SEQ ID NOs: 335 to 339. Proteins including;
(19α) (19αA) sucrose binding protein homolog S-64 or a variant thereof, which is any of the following proteins (19αA-a) to (19αA-e):
(19αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 341;
(19αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 341;
(19αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 340;
(19αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 340; or (19αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 340. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (19αB) SEQ ID NOs: 342 to 346. Proteins including;
(25α) (25αA1) succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial or a mutant thereof, which is any of the following proteins (25αA1-a) to (25αA1-e):
(25αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 348;
(25αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 348;
(25αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 347;
(25αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 347; or (25αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 347. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(25αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 349 to 356;
(25αA2) succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial or a mutant thereof, and any of the following proteins (25αA2-a) to (25αA2-e):
(25αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 358;
(25αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 358;
(25αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 357;
(25αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 357; or (25αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 357. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (25αB2) SEQ ID NOs: 359 to 365. Proteins including;
(26α) (26αA1) Phosphoglycerate kinase, cytosolic or a mutant thereof, which is any of the following proteins (26αA1-a) to (26αA1-e):
(26αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 367;
(26αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 367;
(26αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 366;
(26αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 366; or (26αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 366. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(26αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 368-382;
(26αA2) Phosphoglycerate kinase, cytosolic or a mutant thereof, which is any of the following proteins (26αA2-a) to (26αA2-e):
(26αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 384;
(26αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 384;
(26αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 383;
(26αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 383; or (26αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 383. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(26αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 385-392;
(26αA3) Phosphoglycerate kinase, cytosolic or a mutant thereof, which is any of the following proteins (26αA3-a) to (26αA3-e):
(26αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 394;
(26αA3-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 394;
(26αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 393;
(26αA3-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 393; or (26αA3-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 393. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (26αB3) SEQ ID NOs: 395 to 409. Proteins including;
(27α) (27αA1) alcohol dehydrogenase 1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (27αA1-a) to (27αA1-e):
(27αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 411;
(27αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 411;
(27αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 410;
(27αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 410; or (27αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 410. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(27αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 412 to 416;
(27αA2) Alcohol dehydrogenase 1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (27αA2-a) to (27αA2-e):
(27αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 418;
(27αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 418;
(27αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 417;
(27αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 417; or (27αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 417. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(27αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 419 and 420;
(27αA3) alcohol dehydrogenase 1-like or a mutant thereof, which is any of the following proteins (27αA3-a) to (27αA3-e):
(27αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 422;
(27αA3-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 422;
(27αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 421;
(27αA3-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 421; or (27αA3-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 421. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (27αB3) SEQ ID NOs: 423 to 427. Proteins including;
(28α) (28αA) 35 kDa seed maturation protein isoform X1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (28αA-a) to (28αA-e):
(28αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 429;
(28αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 429;
(28αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 428;
(28αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 428; or (28αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 428. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (28αB) SEQ ID NOs: 430 to 433. Proteins including;
(29-33α) (29-33αA1) Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (29-33αA1-a) to (29-33αA1-e):
(29-33αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 435;
(29-33αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 435;
(29-33αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 434;
(29-33αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 434; or (29-33αA1-e) base shown by SEQ ID NO: 434. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence;
(29-33αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 436 to 439;
(29-33αA2) Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, cytosolic or a mutant thereof, and any of the following proteins (29-33αA2-a) to (29-33αA2-e):
(29-33αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 441;
(29-33αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 441;
(29-33αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 440;
(29-33αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 440; or (29-33αA2-e) base shown by SEQ ID NO: 440. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence;
(29-33αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 442-445;
(29-33αA3) uncharacterized protein LOC100782924 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (29-33αA3-a) to (29-33αA3-e):
(29-33αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 447;
(29-33αA3-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 447;
(29-33αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 446;
(29-33αA3-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 446; or (29-33αA3-e) base shown by SEQ ID NO: 446. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence and a nucleic acid hybridizing under stringent conditions; or selected from the group consisting of (29-33αB3) SEQ ID NOs: 448-451. A protein containing at least one of the amino acid sequences;
(34α) (34αA1) bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like or a mutant thereof, which is any of the following proteins (34αA1-a) to (34αA1-e):
(34αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 453;
(34αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 453;
(34αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 452;
(34αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 452; or (34αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 452. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(34αB1) Protein containing the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 454;
(34αA2) uncharacterized protein LOC100803483 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (34αA2-a) to (34αA2-e):
(34αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 456;
(34αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 456;
(34αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 455;
(34αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 455; or (34αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 455. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (34αB2) SEQ ID NOs: 457 and 458. Proteins including;
(35α) (35αA1) elongation factor 1-alpha or a mutant thereof, and any of the following proteins (35αA1-a) to (35αA1-e):
(35αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 460;
(35αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 460;
(35αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 459;
(35αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 459; or (35αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 459. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(35αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 461 to 466;
(35αA2) Elongation factor 1-alpha or a mutant thereof, which is any of the following proteins (35αA2-a) to (35αA2-e):
(35αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 468;
(35αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 468;
(35αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 467;
(35αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 467; or (35αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 467. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(35αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 469-471;
(35αA3) elongation factor-1A isoform X1 or a mutant thereof, and any of the following proteins (35αA3-a) to (35αA3-e):
(35αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 473;
(35αA3-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 473;
(35αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 472;
(35αA3-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 472; or (35αA3-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 472. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (35αB3) SEQ ID NOs: 474 to 477. Proteins including;
(36,37α) (36,37αA1) seed maturation protein PM34 or a variant thereof, which is any of the following proteins (36,37αA1-a) to (36,37αA1-e):
(36,37αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 479;
(36,37αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 479;
(36,37αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 478;
(36,37αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 478; or (36,37αA1-e) base shown by SEQ ID NO: 478. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence;
(36,37αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 480-483;
(36,37αA2) uncharacterized protein LOC100809384 or a variant thereof and any of the following proteins (36,37αA2-a) to (36,37αA2-e):
(36,37αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 485;
(36,37αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 485;
(36,37αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 484;
(36,37αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence represented by SEQ ID NO: 484; or (36,37αA2-e) base represented by SEQ ID NO: 484. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence;
(36,37αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 486 and 487;
(36,37αA3) hypothetical protein GLYMA_10G155300 or a variant thereof, which is any of the following proteins (36,37αA3-a) to (36,37αA3-e):
(36,37αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 489;
(36,37αA3-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 489;
(36,37αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 488;
(36,37αA3-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 488; or (36,37αA3-e) base shown by SEQ ID NO: 488. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence and a nucleic acid hybridizing under stringent conditions; or selected from the group consisting of (36,37αB3) SEQ ID NOs: 490-493. A protein containing at least one of the amino acid sequences;
(38α) (38αA) seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (38αA-a) to (38αA-e):
(38αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 495;
(38αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 495;
(38αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 494;
(38αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 494; or complementary to the base sequence shown by (38αA-e) SEQ ID NO: 494. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (38αB) SEQ ID NOs: 496 to 513. Proteins including;
(39α) (39αA) ATP synthase subunit O, mitochondrial-like or a mutant thereof, and any of the following proteins (39αA-a) to (39αA-e):
(39αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 515;
(39αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 515;
(39αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 514;
(39αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 514; or (39αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 514. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions; or (39αB) a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 516;
(40,56α) (40,56αA) P24 oleosin isoform A or a mutant thereof and any of the following proteins (40,56αA-a) to (40,56αA-e):
(40,56αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 518;
(40,56αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 518;
(40,56αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 517;
(40,56αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 517; or (40,56αA-e) base shown by SEQ ID NO: 517. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence and a nucleic acid hybridizing under stringent conditions; or (40,56αB) selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 519 and 520. A protein containing at least one of the amino acid sequences;
(41α) (41αA) uncharacterized protein At3g49720-like isoform X2 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (41αA-a) to (41αA-e):
(41αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 522;
(41αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 522;
(41αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 521;
(41αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 521; or (41αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 521. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions; or (41αB) a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 523;
(42,43α) (42,43αA1) superoxide dismutase [Mn], mitochondrial or a variant thereof, and any of the following proteins (42,43αA1-a) to (42,43αA1-e):
(42,43αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 525;
(42,43αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 525;
(42,43αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 524;
(42,43αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 524; or (42,43αA1-e) base shown by SEQ ID NO: 524. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence;
(42,43αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 526-531;
(42,43αA2) hypothetical protein GLYMA_04G221300 or a variant thereof, which is any of the following proteins (42,43αA2-a) to (42,43αA2-e):
(42,43αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 533;
(42,43αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 533;
(42,43αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 532;
(42,43αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 532; or (42,43αA2-e) base shown by SEQ ID NO: 532. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the sequence and a nucleic acid hybridizing under stringent conditions; or (42,43αB2) selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 534 to 539. A protein containing at least one of the amino acid sequences;
(45α) (45αA1) uncharacterized protein LOC100499771 or a variant thereof and any of the following proteins (45αA1-a) to (45αA1-e):
(45αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 541;
(45αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 541;
(45αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 540;
(45αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 540; or (45αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 540. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(45αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 542 to 545;
(45αA2) hypothetical protein GLYMA_09G192800 or a variant thereof, which is any of the following proteins (45αA2-a) to (45αA2-e):
(45αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 547;
(45αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 547;
(45αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 546;
(45αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 546; or (45αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 546. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (45αB2) SEQ ID NOs: 548 to 551. Proteins including;
(46α) (46αA) seed maturation protein PM22 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (46αA-a) to (46αA-e):
(46αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 553;
(46αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 553;
(46αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 552;
(46αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 552; or (46αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 552. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions; or (46αB) a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 554;
(47α) (47αA1) eukaryotic translation initiation factor 5A-2 or a variant thereof, which is any of the following proteins (47αA1-a) to (47αA1-e):
(47αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 556;
(47αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 556;
(47αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 555;
(47αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 555; or (47αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 555. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(47αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 557 and 558;
(47αA2) uncharacterized protein LOC100305510 or a variant thereof, and any of the following proteins (47αA2-a) to (47αA2-e):
(47αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 560;
(47αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 560;
(47αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 559;
(47αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 559; or (47αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 559. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (47αB2) SEQ ID NOs: 561 to 563. Proteins including;
(48α) (48αA) uncharacterized protein LOC100306570 or a mutant thereof and any of the following proteins (48αA-a) to (48αA-e):
(48αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 565;
(48αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 565;
(48αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 564;
(48αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 564; or (48αA-e) complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 564. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (48αB) SEQ ID NOs: 566 to 570. Proteins including;
(50α) (50αA) uncharacterized protein LOC100813859 or a variant thereof and any of the following proteins (50αA-a) to (50αA-e):
(50αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 572;
(50αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 572;
(50αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 571;
(50αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 571; or (50αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 571. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (50αB) SEQ ID NOs: 573 to 576. Proteins including;
(51α) (51αA) 14-3-3-like protein or a variant thereof, which is any of the following proteins (51αA-a) to (51αA-e):
(51αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 578;
(51αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 578;
(51αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 577;
(51αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 577; or (51αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 577. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (51αB) SEQ ID NOs: 579 to 582. Proteins including;
(52α) (52αA) probable fructokinase-4 or a mutant thereof, and any of the following proteins (52αA-a) to (52αA-e):
(52αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 584;
(52αA-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 584;
(52αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 583;
(52αA-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 583; or (52αA-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 583. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (52αB) SEQ ID NOs: 585 to 588. Proteins including;
(53α) (53αA1) Triosephosphate isomerase isoform X1 or a mutant thereof, which is any of the following proteins (53αA1-a) to (53αA1-e):
(53αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 590;
(53αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 590;
(53αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 589;
(53αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 589; or (53αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 589. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(53αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 591-597;
(53αA2) Triosephosphate isomerase, cytosolic or a mutant thereof, which is any of the following proteins (53αA2-a) to (53αA2-e):
(53αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 599;
(53αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 599;
(53αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 598;
(53αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 598; or (53αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 598. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (53αB2) SEQ ID NOs: 600 to 604. Proteins including;
(54α) (54αA1) superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1 or a variant thereof, and any of the following proteins (54αA1-a) to (54αA1-e):
(54αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 606;
(54αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 606;
(53αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 605;
(54αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 605; or (54αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 605. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(54αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 607 to 611;
(54αA2) iron-superoxide dismutase or a variant thereof, which is any of the following proteins (54αA2-a) to (54αA2-e):
(54αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 613;
(54αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 613;
(54αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 612;
(54αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 612; or (54αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 612. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (54αB2) SEQ ID NOs: 614 to 616. (55α) (55αA1) 51 kDa seed maturation protein precursor or a variant thereof, and any of the following proteins (55αA1-a) to (55αA1-e):
(55αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 618;
(55αA1-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 618;
(55αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 617;
(55αA1-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 617; or (55αA1-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 617. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence under stringent conditions;
(55αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 619 to 635;
(55αA2) Lea protein precursor or a variant thereof, which is any of the following proteins (55αA2-a) to (55αA2-e):
(55αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 637;
(55αA2-b) A protein containing an amino acid sequence having 70% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 637;
(55αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 636;
(55αA2-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 70% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 636; or (55αA2-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 636. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid that hybridizes with a nucleic acid consisting of a specific base sequence; or at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of (55αB2) SEQ ID NOs: 638 to 649. Proteins including;
The diagnostic kit comprising.
［１０］大豆アレルギーの診断用組成物であって、上記［９］において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、を抗原として含む、前記診断用組成物。 [10] The diagnostic composition for soybean allergy, which comprises at least one of the proteins specified as (1α) to (55α) in the above [9] as an antigen.
［１１］対象の大豆アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が大豆アレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、上記［９］において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、である、前記方法。[11] A method for providing an index for diagnosing a target soybean allergy, wherein the following steps:
(I) The sample obtained from the subject is brought into contact with the antigen, where the sample is a solution containing an Ig antibody;
(Ii) Detect the binding of IgE antibody to the antigen in the sample obtained from the subject;
(Iii) If binding of a subject's IgE antibody to the antigen is detected, an indicator that the subject is allergic to soybean is provided;
The above-mentioned method, wherein the antigen is at least one of the proteins specified as (1α) to (55α) in the above [9].
［１２］上記［９］において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つを含む医薬組成物。 [12] A pharmaceutical composition containing at least one of the proteins specified as (1α) to (55α) in the above [9].
［１３］大豆アレルギーを治療するための上記［１２］に記載の医薬組成物。 [13] The pharmaceutical composition according to the above [12] for treating soybean allergy.
［１４］抗原が除去又は低減されていることを特徴とする大豆又は大豆加工品であって、当該抗原は上記［９］において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、である、前記大豆または大豆加工品。 [14] A soybean or a processed soybean product characterized by removal or reduction of an antigen, wherein the antigen is at least one of the proteins specified as (1α) to (55α) in the above [9]. The soybean or processed soybean product.
［１５］上記［９］において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つ、と結合する抗体を含むことを特徴とする、対象物における大豆抗原の有無を判定するためのテスター。 [15] A tester for determining the presence or absence of a soybean antigen in an object, which comprises an antibody that binds to at least one of the proteins specified as (1α) to (55α) in the above [9]. ..
［１６］大豆由来の抗原であって、上記［９］において（１α）～（５５α）として特定されるタンパク質の少なくとも一つであり、そして大豆に対するアレルギーの原因となる、前記抗原。 [16] The antigen derived from soybean, which is at least one of the proteins specified as (1α) to (55α) in [9] above, and which causes allergies to soybean.
本発明により、大豆に対するアレルギーの新規抗原を提供することができる。本発明において大豆アレルギーを引き起こす新規な抗原（アレルゲンコンポーネント）が同定されたことから、大豆に対するアレルギーの高感度な診断方法及び診断キット、当該抗原を含む医薬組成物、ならびに当該抗原が除去又は低減された大豆又は大豆加工品を提供することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, a novel antigen for allergy to soybean can be provided. Since a novel antigen (allergen component) that causes soybean allergy has been identified in the present invention, a highly sensitive diagnostic method and kit for allergy to soybean, a pharmaceutical composition containing the antigen, and the antigen are removed or reduced. Soybeans or processed soybeans can be provided.
以下に本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 The present invention will be specifically described below, but the present invention is not limited thereto.
本明細書で特段に定義されない限り、本発明に関連して用いられる科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。 Unless otherwise defined herein, scientific and technical terms used in the context of the present invention shall have meaning generally understood by one of ordinary skill in the art.
本明細書においてアミノ酸配列を示す場合は、当業者に周知のアミノ酸の一文字表記により、左端がアミノ末端、右端がカルボキシ末端の順で表記するものとする。 When the amino acid sequence is shown in the present specification, the amino acid sequence is described in the order of the amino terminal at the left end and the carboxy terminal at the right end according to the one-letter notation of amino acids well known to those skilled in the art.
本明細書においてアレルギーとは、ある抗原に感作されている生体に、再びその抗原が入った場合に起こる、生体に不都合な過敏反応を示す状態をいう。食物におけるアレルギー疾患の多くにおいて、血液および組織で抗原に特異的なＩｇＥ抗体が産生される。ＩｇＥ抗体は、肥満細胞または好塩基球と結合する。当該ＩｇＥ抗体に特異的な抗原が再びアレルギー疾患患者の体内に入ると、当該抗原は肥満細胞または好塩基球と結合したＩｇＥ抗体と組み合わさり、そして当該ＩｇＥ抗体が細胞表面で架橋し、ＩｇＥ抗体－抗原相互作用の生理学的効果を生ずる。これらの生理学的効果として、ヒスタミン、セロトニン、ヘパリン、好酸球遊走因子または各種ロイコトリエン等の放出が挙げられる。これらの放出物質は、ＩｇＥ抗体と特定の抗原の組み合わせにより起こるアレルギー反応を惹起する。特定の抗原によるアレルギー反応は、上記の経路を通じて現れる。 As used herein, the term "allergy" refers to a condition in which a living body sensitized to a certain antigen exhibits a hypersensitivity reaction that is unfavorable to the living body, which occurs when the antigen is re-entered. In many allergic diseases in food, antigen-specific IgE antibodies are produced in blood and tissues. IgE antibodies bind to mast cells or basophils. When an antigen specific for the IgE antibody reenters the body of a patient with an allergic disease, the antigen is combined with an IgE antibody bound to mast cells or basinocytes, and the IgE antibody is cross-linked on the cell surface to form an IgE antibody. -Produces the physiological effects of antigen interaction. These physiological effects include the release of histamine, serotonin, heparin, eosinophil migration factors or various leukotrienes. These released substances provoke allergic reactions caused by the combination of IgE antibody and a specific antigen. Allergic reactions due to specific antigens manifest through the above pathways.
本明細書において大豆に対するアレルギーとは、大豆に含まれるタンパク質等を抗原として生じるアレルギー反応を有する状態をいう。大豆に対するアレルギーは、大豆に含まれる抗原と接触した場合、あるいは当該抗原を摂取した場合に、アレルギー反応を生じ得る。一般的に食物を摂取した場合に生じるアレルギー反応を特に食物アレルギーという。大豆に対するアレルギーは食物アレルギーであってもよい。 As used herein, the term "allergic to soybean" refers to a state in which an allergic reaction occurs using a protein or the like contained in soybean as an antigen. Allergies to soybeans can cause an allergic reaction when in contact with or ingested an antigen contained in soybeans. In general, allergic reactions that occur when food is ingested are called food allergies. Allergies to soybeans may be food allergies.
本明細書において抗原とは、アレルギー反応を惹起させる物質であり、アレルゲンコンポーネントとも称される。抗原は好ましくはタンパク質である。 As used herein, an antigen is a substance that induces an allergic reaction and is also referred to as an allergen component. The antigen is preferably a protein.
本明細書において、タンパク質は、天然のアミノ酸がペプチド結合により連結された構造を有する分子である。タンパク質に含まれるアミノ酸の数は特に限定されないが、２～５０個程度のアミノ酸がペプチド結合により連結されたタンパク質を、ペプチドと呼ぶことがある。また、アミノ酸に関して光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示す。本明細書で用いるタンパク質またはペプチドのアミノ酸配列の表記法は、標準的用法及び当業界で慣用されている表記法に基づき、アミノ酸の一文字表記で表され、左方向はアミノ末端方向であり、そして右方向はカルボキシ末端方向である。 As used herein, a protein is a molecule having a structure in which natural amino acids are linked by peptide bonds. The number of amino acids contained in the protein is not particularly limited, but a protein in which about 2 to 50 amino acids are linked by a peptide bond may be called a peptide. When an optical isomer may be present with respect to an amino acid, the L-form is indicated unless otherwise specified. The notation of the amino acid sequence of a protein or peptide as used herein is expressed in one letter notation of amino acids based on standard usage and notation commonly used in the art, with the left direction being the amino-terminal direction, and The right direction is the carboxy-terminal direction.
抗原の特定
大豆に含まれるタンパク質について、上記の手法を利用して大豆に対するアレルギーの原因となる抗原の特定を行った。具体的には、大豆タンパク質を下記の条件で２次元電気泳動に供した。 Identification of antigens For proteins contained in soybeans, the antigens that cause allergies to soybeans were identified using the above method. Specifically, soybean protein was subjected to two-dimensional electrophoresis under the following conditions.
１次元目の電気泳動は、等電点電気泳動用ゲルとして、ゲル長が５～１０ｃｍの範囲内であって、ゲルのｐＨ範囲が３～１０であり、泳動方向に対するゲルのｐＨ勾配が、ゲルの全長を１とし、ｐＨ５までのゲル長をａ、ｐＨ５～７のゲル長をｂ、ｐＨ７以上のゲル長をｃとした場合において、ａが０．１５～０．３の範囲内、ｂが０．４～０．７の範囲内、ｃが０．１５～０．３の範囲内であるゲルを用いて、具体的には、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社（以下、ＧＥ社と省略する）製のＩＰＧゲルImmobiline Drystrip (pH3-10NL)を用いて等電点泳動を行った。電気泳動機器は、ＧＥ社製のIPGphorを用いた。電気泳動機器の電流値の上限をゲル１本当たり７５μＡに設定し、電圧プログラムを、（１）３００Ｖ定電圧で７５０Ｖｈｒまで定電圧工程を行い（当該工程終了前の泳動３０分間の電流変化幅が５μＡであった）、（２）３００Ｖｈｒかけて１０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（３）更に４５００Ｖｈｒかけて５０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（４）その後５０００Ｖ定電圧で総Ｖｈｒが１２０００になるまで、１次元目の等電点電気泳動を行った。
In the first-dimensional electrophoresis, the gel for isoelectric point electrophoresis has a gel length in the range of 5 to 10 cm, a gel pH range of 3 to 10, and a gel pH gradient with respect to the migration direction. When the total length of the gel is 1, the gel length up to
２次元目の電気泳動は、泳動方向基端部のゲル濃度が３～６％に設定され、泳動方向先端側の部分のゲル濃度が泳動方向基端部のゲル濃度よりも高く設定されたポリアクリルアミドゲルを用いて、具体的にはlife technologies社製のNuPAGE 4-12% Bris-Tris Gels IPG well mini 1mmを用いてSDS-PAGEを行った。電気泳動機器は、life technologies社製のXCell SureLock Mini-Cellを用いた。泳動緩衝液として５０ｍＭ ＭＯＰＳ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ塩基、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、１ｍＭＥＤＴＡを用い、２００Ｖ定電圧で約４５分間泳動を行った。 In the second-dimensional electrophoresis, the gel concentration at the proximal end of the migration direction is set to 3 to 6%, and the gel concentration at the distal end of the electrophoresis direction is set higher than the gel concentration at the proximal end in the migration direction. SDS-PAGE was performed using acrylamide gel, specifically NuPAGE 4-12% Bris-Tris Gels IPG well mini 1 mm manufactured by life technologies. As the electrophoresis device, XCell SureLock Mini-Cell manufactured by life technologies was used. Using 50 mM MOPS, 50 mM Tris base, 0.1% (w / v) SDS, and 1 mM EDTA as the migration buffer, migration was performed at a constant voltage of 200 V for about 45 minutes.
その結果、大豆のタンパク質について上記の条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、以下のスポットが、大豆に対するアレルギー患者のＩｇＥ抗体に特異的に結合することを明らかにした。
スポット１：分子量１～３０ｋＤａ、ｐＩ３．０～７．０
スポット２：分子量３０～７５ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．５
スポット３：分子量２０～５０ｋＤａ、ｐＩ７．０～１２．０
スポット４：分子量２０～５０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット５：分子量２～３０ｋＤａ、ｐＩ４．０～９．０
スポット６：分子量５０～１００ｋＤａ、ｐＩ５．０～１０．０
スポット７：分子量５～３７ｋＤａ、ｐＩ３．０～７．０
スポット８：分子量７５～２００ｋＤａ、ｐＩ４．０～６．０
スポット１α：分子量７０～１２０ｋＤａ、ｐＩ２．５～６．５
スポット２α：分子量５０～１２０ｋＤａ、ｐＩ２．５～６．５
スポット４α：分子量７０～１２０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット５α：分子量７０～１７０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット６α：分子量７０～１２０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット７α：分子量５０～１２０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット８α：分子量５０～１２０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット９α：分子量５０～１２０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット１０α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット１１α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット１２α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット１３α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット１４α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ２．５～６．５
スポット１５α、１６α：分子量２０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット１７α：分子量２０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット１８α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット１９α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット２５α：分子量２０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット２６α：分子量２０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット２７α：分子量２０～９０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット２８α：分子量１０～７０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット２９α、３０α、３１α、３２α、３３α：分子量１０～７０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット３４α：分子量１０～７０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５
スポット３５α：分子量２０～９０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５
スポット３６α、３７α：分子量１０～７０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット３８α：分子量７０～１７０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５
スポット３９α：分子量５～６０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５
スポット４０α、５６α：分子量５～６０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５
スポット４１α：分子量５～６０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５
スポット４２α、４３α：分子量５～６０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５
スポット４５α：分子量２～５０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット４６α：分子量２～５０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット４７α：分子量５～５０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット４８α：分子量２～５０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット５０α：分子量２～５０ｋＤａ、ｐＩ２．５～６．５
スポット５１α：分子量５～６０ｋＤａ、ｐＩ２．５～６．５
スポット５２α：分子量１０～７０ｋＤａ、ｐＩ３．５～７．５
スポット５３α：分子量５～６０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット５４α：分子量５～６０ｋＤａ、ｐＩ３．５～８．５
スポット５５α：分子量３０～９０ｋＤａ、ｐＩ５．５～１０．５As a result, it was clarified that the following spots specifically bind to the IgE antibody of a patient allergic to soybean in the gel when the soybean protein was subjected to two-dimensional electrophoresis under the above conditions.
Spot 1: Molecular weight 1 to 30 kDa, pI 3.0 to 7.0
Spot 2: Molecular weight 30-75 kDa, pI 4.0-8.5
Spot 3: Molecular weight 20-50 kDa, pI 7.0-12.0
Spot 4: Molecular weight 20-50 kDa, pI 6.0-10.0
Spot 5:
Spot 6: Molecular weight 50-100 kDa, pI 5.0-10.0
Spot 7:
Spot 8: Molecular weight 75-200 kDa, pI 4.0-6.0
Spot 1α: Molecular weight 70-120 kDa, pI2.5-6.5
Spot 2α: Molecular weight 50-120 kDa, pI2.5-6.5
Spot 4α: Molecular weight 70-120 kDa, pI3.5-7.5
Spot 5α: Molecular weight 70-170 kDa, pI3.5-7.5
Spot 6α: Molecular weight 70-120 kDa, pI3.5-7.5
Spot 7α: Molecular weight 50-120 kDa, pI3.5-7.5
Spot 8α: Molecular weight 50-120 kDa, pI3.5-8.5
Spot 9α: Molecular weight 50-120 kDa, pI3.5-8.5
Spot 10α: Molecular weight 30-90 kDa, pI3.5-7.5
Spot 11α: Molecular weight 30-90 kDa, pI3.5-8.5
Spot 12α: Molecular weight 30-90 kDa, pI3.5-8.5
Spot 13α: Molecular weight 30-90 kDa, pI3.5-7.5
Spot 14α: Molecular weight 30-90 kDa, pI2.5-6.5
Spots 15α, 16α: Molecular weight 20-90 kDa, pI3.5-7.5
Spot 17α: Molecular weight 20-90 kDa, pI3.5-7.5
Spot 18α: Molecular weight 30-90 kDa, pI3.5-8.5
Spot 19α: Molecular weight 30-90 kDa, pI3.5-8.5
Spot 25α: Molecular weight 20-90 kDa, pI3.5-7.5
Spot 26α: Molecular weight 20-90 kDa, pI3.5-7.5
Spot 27α: Molecular weight 20-90 kDa, pI3.5-7.5
Spot 28α: Molecular weight 10-70 kDa, pI3.5-7.5
Spots 29α, 30α, 31α, 32α, 33α: Molecular weight 10-70 kDa, pI3.5-8.5
Spot 34α: Molecular weight 10-70 kDa, pI 5.5-10.5
Spot 35α: Molecular weight 20-90 kDa, pI 5.5-10.5
Spots 36α, 37α: molecular weight 10-70 kDa, pI3.5-8.5
Spot 38α: Molecular weight 70-170 kDa, pI 5.5-10.5
Spot 39α: molecular weight 5-60 kDa, pI 5.5-10.5
Spots 40α, 56α: Molecular weight 5-60 kDa, pI 5.5-10.5
Spot 41α: Molecular weight 5-60 kDa, pI 5.5-10.5
Spots 42α, 43α: Molecular weight 5-60 kDa, pI 5.5-10.5
Spot 45α: Molecular weight 2-50 kDa, pI3.5-7.5
Spot 46α: Molecular weight 2-50 kDa, pI3.5-7.5
Spot 47α: Molecular weight 5-50 kDa, pI3.5-7.5
Spot 48α: Molecular weight 2-50 kDa, pI3.5-8.5
Spot 50α:
Spot 51α: Molecular weight 5-60 kDa, pI2.5-6.5
Spot 52α: Molecular weight 10-70 kDa, pI3.5-7.5
Spot 53α: Molecular weight 5-60 kDa, pI3.5-8.5
Spot 54α: Molecular weight 5-60 kDa, pI3.5-8.5
Spot 55α: Molecular weight 30-90 kDa, pI 5.5-10.5
抗原
（１）スポット１の抗原
スポット１について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
DQSSSYDDDEYSK（配列番号１７）
KSDQSSSYDDDEYSK（配列番号１８）
SDQSSSYDDDEYSK（配列番号１９）
SYDDDEYSK（配列番号２０） Antigen (1) Antigen of spot 1
As a result of sequence identification of Spot 1 by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
DQSSSYDDDEYSK (SEQ ID NO: 17)
KSDQSSSYDDDEYSK (SEQ ID NO: 18)
SDQSSSYDDDEYSK (SEQ ID NO: 19)
SYDDDEYSK (SEQ ID NO: 20)
また、スポット１について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、ボウマン－バークタイププロテイナーゼインヒビターＤ－ＩＩ（Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II）（アミノ酸配列：配列番号２、それをコードする塩基配列：配列番号１）であることが同定された。 Further, for Spot 1, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of Uniprot and analyzed, Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II (amino acid). It was identified that the sequence: SEQ ID NO: 2, and the base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 1).
したがって、本願においてスポット１の抗原は、以下（１Ａ-ａ）～（１Ａ-ｅ）および（１Ｂ）のいずれかであってよい。
（１Ａ-ａ）配列番号２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ-ｂ）配列番号２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ-ｃ）配列番号１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ-ｄ）配列番号１で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ａ-ｅ）配列番号１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１Ｂ）配列番号１７～２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。さらに好ましくは、配列番号１７～１９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１７～２０のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 1 may be any of the following (1A-a) to (1A-e) and (1B).
(1A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 2.
(1A-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(1A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 1.
(1A-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 1 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(1A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(1B) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 17 to 20, preferably a protein containing at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. More preferably, a protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 17 to 19, preferably a protein containing at least 2 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 17 to 20 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１Ａ-ａ）～（１Ａ-ｅ）および（１Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (1A-a) to (1A-e) and (1B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（１Ａ-ａ）～（１Ａ-ｅ）および（１Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１ｋＤａ～３０ｋＤａ、好ましくは分子量２ｋＤａ～２５ｋＤａ、より好ましくは分子量５～２０ｋＤａ付近、および等電点３．０～７．０、好ましくは４．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (1A-a) to (1A-e) and (1B) have a molecular weight of 1 kDa to 30 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 2 kDa to 25 kDa, more preferably around 5 to 20 kDa, and an isoelectric point of 3.0 to 7.0, preferably 4.0 to 6.0.
好ましくは、スポット１の抗原であるタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を有するタンパク質（Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 1 has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 (Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II), or causes allergies to soybeans.
（２）スポット２の抗原
スポット２について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
ALRALRLEDLRIPTAYIK（配列番号２１）
ALRLSGGDHVHAGTVVGK（配列番号２２）
LEGEREITLGFVDLLRDDFVEK（配列番号２３）
LRLEDLRIPTAYIK（配列番号２４）
LTYYTPDYETK（配列番号２５）
TDGLTSLDRYK（配列番号２６）
TFQGPPHGIQVERD（配列番号２７）
TFQGPPHGIQVERDK（配列番号２８）(2)
As a result of sequence identification of
ALRALRLEDLRIPTAYIK (SEQ ID NO: 21)
ALRLSGGDHVHAGTVVGK (SEQ ID NO: 22)
LEGEREITLGFVDLLRDDFVEK (SEQ ID NO: 23)
LRLEDLRIPTAYIK (SEQ ID NO: 24)
LTYYTPDYETK (SEQ ID NO: 25)
TDGLTSLDRYK (SEQ ID NO: 26)
TFQGPPHGIQVERD (SEQ ID NO: 27)
TFQGPPHGIQVERDK (SEQ ID NO: 28)
また、スポット２について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、リブロースビスホスフェートカルボキシラーゼラージチェイン（Ribulose bisphosphate carboxylase large chain）（アミノ酸配列：配列番号４、それをコードする塩基配列：配列番号３）であることが同定された。
Further, for
したがって、本願においてスポット２の抗原は、以下（２Ａ-ａ）～（２Ａ-ｅ）および（２Ｂ）のいずれかであってよい。
（２Ａ-ａ）配列番号４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ-ｂ）配列番号４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ-ｃ）配列番号３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ-ｄ）配列番号３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ａ-ｅ）配列番号３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２Ｂ）配列番号２１～２８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２１～２８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of
(2A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 4.
(2A-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(2A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 3.
(2A-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 3 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(2A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid having a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 3 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(2B) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 21 to 28, preferably containing at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, or all the sequences of the amino acid sequence. protein. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 21 to 28 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（２Ａ-ａ）～（２Ａ-ｅ）および（２Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (2A-a) to (2A-e) and (2B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（２Ａ-ａ）～（２Ａ-ｅ）および（２Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０ｋＤａ～７５ｋＤａ、好ましくは分子量３７ｋＤａ～７０ｋＤａ、より好ましくは分子量４０～６０ｋＤａ付近、および等電点４．０～８．５、好ましくは５．５～７．５のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (2A-a) to (2A-e) and (2B) have a molecular weight of 30 kDa to 75 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 37 kDa to 70 kDa, more preferably around 40 to 60 kDa, and an isoelectric point of 4.0 to 8.5, preferably 5.5 to 7.5.
好ましくは、スポット２の抗原であるタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列を有するタンパク質（Ribulose bisphosphate carboxylase large chain）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of
（３）スポット３の抗原
スポット３について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
APHTEDAIRVTQSTANFFISEARK（配列番号２９）
FVESGGARVIPLIYNESPENLNK（配列番号３０）(3)
As a result of sequence identification of
APHTEDAIRVTQSTANFFISEARK (SEQ ID NO: 29)
FVESGGARVIPLIYNESPENLNK (SEQ ID NO: 30)
また、スポット３について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、γ－グルタミルヒドロラーゼ（Gamma-glutamyl hydrolase）（アミノ酸配列：配列番号６、それをコードする塩基配列：配列番号５）であることが同定された。
Further, for
したがって、本願においてスポット３の抗原は、以下（３Ａ-ａ）～（３Ａ-ｅ）および（３Ｂ）のいずれかであってよい。
（３Ａ-ａ）配列番号６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ａ-ｂ）配列番号６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ａ-ｃ）配列番号５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質、又はその糖鎖修飾体。
（３Ａ-ｄ）配列番号５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ａ-ｅ）配列番号５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３Ｂ）配列番号２９又は３０で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、好ましくは配列番号２９及び３０で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２９及び／又は３０で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of
(3A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 6.
(3A-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(3A-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 5, or a modified sugar chain thereof.
(3A-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 5 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(3A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 5 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(3B) A protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or 30, preferably a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 29 and 30. Here, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 and / or 30 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（３Ａ-ａ）～（３Ａ-ｅ）および（３Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (3A-a) to (3A-e) and (3B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（３Ａ-ａ）～（３Ａ-ｅ）および（３Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０ｋＤａ～５０ｋＤａ、好ましくは分子量２５ｋＤａ～４０ｋＤａ、より好ましくは分子量２５～３７ｋＤａ付近、および等電点７．０～１２．０、好ましくは８．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (3A-a) to (3A-e) and (3B) have a molecular weight of 20 kDa to 50 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 25 kDa to 40 kDa, more preferably in the vicinity of a molecular weight of 25 to 37 kDa, and an isoelectric point of 7.0 to 12.0, preferably 8.0 to 10.0.
好ましくは、スポット３の抗原であるタンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を有するタンパク質（Gamma-glutamyl hydrolase）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of
（４）スポット４の抗原
スポット４について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
IWDLESK（配列番号３１）
SIVEDLK（配列番号３２）(4)
As a result of sequence identification of
IWDLESK (SEQ ID NO: 31)
SIVEDLK (SEQ ID NO: 32)
また、スポット４について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、グアニンヌクレオチドバインディングプロテインサブユニットベータライクプロテイン（Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein）（アミノ酸配列：配列番号８、それをコードする塩基配列：配列番号７）であることが同定された。
Further, regarding the
したがって、本願においてスポット４の抗原は、以下（４Ａ-ａ）～（４Ａ-ｅ）および（４Ｂ）のいずれかであってよい。
（４Ａ-ａ）配列番号８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ-ｂ）配列番号８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ-ｃ）配列番号７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ-ｄ）配列番号７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ａ-ｅ）配列番号７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４Ｂ）配列番号３１又は３２で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、好ましくは配列番号３１及び３２で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３１及び／又は３２で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of
(4A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 8.
(4A-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(4A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 7.
(4A-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 7 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(4A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 7 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(4B) A protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 or 32, preferably a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 31 and 32. Here, the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 31 and / or 32 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４Ａ-ａ）～（４Ａ-ｅ）および（４Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (4A-a) to (4A-e) and (4B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（４Ａ-ａ）～（４Ａ-ｅ）および（４Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０ｋＤａ～５０ｋＤａ、好ましくは分子量２５ｋＤａ～４０ｋＤａ、より好ましくは分子量２５～３７ｋＤａ付近、および等電点６．０～１０．０、好ましくは７．０～９．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (4A-a) to (4A-e) and (4B) have a molecular weight of 20 kDa to 50 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 25 kDa to 40 kDa, more preferably in the vicinity of a molecular weight of 25 to 37 kDa, and an isoelectric point of 6.0 to 10.0, preferably 7.0 to 9.0.
好ましくは、スポット４の抗原であるタンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を有するタンパク質（Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of
（５）スポット５の抗原
スポット５について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
QELDERARQGETVVPGGTGGK（配列番号３３）
SGEERAQEEAIDIDESK（配列番号３４）(5)
As a result of sequence identification of
QELDERARQGETVVPGGTGGK (SEQ ID NO: 33)
SGEERAQEEAIDIDESK (SEQ ID NO: 34)
また、スポット５について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、プロテインＳＬＥ３（Protein SLE3）（アミノ酸配列：配列番号１０、それをコードする塩基配列：配列番号９）であることが同定された。
Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of Uniprot for the
したがって、本願においてスポット５の抗原は、以下（５Ａ-ａ）～（５Ａ-ｅ）および（５Ｂ）のいずれかであってよい。
（５Ａ-ａ）配列番号１０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ-ｂ）配列番号１０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ-ｃ）配列番号９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ-ｄ）配列番号９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ａ-ｅ）配列番号９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５Ｂ）配列番号３３又は３４で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、好ましくは配列番号３３及び３４で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３３及び／又は３４で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of
(5A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 10.
(5A-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 10 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(5A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 9.
(5A-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 9 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(5A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 9 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(5B) A protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 or 34, preferably a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 33 and 34. Here, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 and / or 34 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５Ａ-ａ）～（５Ａ-ｅ）および（５Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (5A-a) to (5A-e) and (5B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（５Ａ-ａ）～（５Ａ-ｅ）および（５Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２ｋＤａ～３０ｋＤａ、好ましくは分子量３ｋＤａ～２５ｋＤａ、より好ましくは分子量５～２０ｋＤａ付近、および等電点４．０～９．０、好ましくは５．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (5A-a) to (5A-e) and (5B) have a molecular weight of 2 kDa to 30 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 3 kDa to 25 kDa, more preferably around 5 to 20 kDa, and an isoelectric point of 4.0 to 9.0, preferably 5.0 to 7.0.
好ましくは、スポット５の抗原であるタンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するタンパク質（Protein SLE3）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of
（６）スポット６の抗原
スポット６について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AAAHVVEGAAGYAGHK（配列番号３５）
AKDYTLQAAEK（配列番号３６）
ARETHELGAHFESLADK（配列番号３７）
ATAVGWAAAHFSAEK（配列番号３８）
DTPQGSIEALQAGERVK（配列番号３９）
DYTLQAAEK（配列番号４０）
EEAQRELEAK（配列番号４１）
EGTGSIVFTAIGETVSSAGEK（配列番号４２）
ERGRESGGQVVAEK（配列番号４３）
GLAASAGETAK（配列番号４４）
GQQGYAVTK（配列番号４５）
KPSQPQEAEERPSEGIGETVRQYAQK（配列番号４６）
PAEIVQER（配列番号４７）
PQGSIEALQAGERVK（配列番号４８）
QAASETLNTTTQTAQEK（配列番号４９）
SAGGTTASYVGEK（配列番号５０）
SLTSIGEK（配列番号５１）
TPQGSIEALQAGERVK（配列番号５２）
VTDHAAANVVGNK（配列番号５３）(6) Antigen of
As a result of sequence identification of
AAAHVVEGAAGYAGHK (SEQ ID NO: 35)
AKDYTLQAAEK (SEQ ID NO: 36)
ARETHELGAHFESLADK (SEQ ID NO: 37)
ATAVGWAAAHFSAEK (SEQ ID NO: 38)
DTPQGSIEALQAGERVK (SEQ ID NO: 39)
DYTLQAAEK (SEQ ID NO: 40)
EEAQRELEAK (SEQ ID NO: 41)
EGTGSIVFTAIGETVSSAGEK (SEQ ID NO: 42)
ERGRESGGQVVAEK (SEQ ID NO: 43)
GLAASAGETAK (SEQ ID NO: 44)
GQQGYAVTK (SEQ ID NO: 45)
KPSQPQEAEERPSEGIGETVRQYAQK (SEQ ID NO: 46)
PAEIVQER (SEQ ID NO: 47)
PQGSIEALQAGERVK (SEQ ID NO: 48)
QAASETLNTTTQTAQEK (SEQ ID NO: 49)
SAGGTTASYVGEK (SEQ ID NO: 50)
SLTSIGEK (SEQ ID NO: 51)
TPQGSIEALQAGERVK (SEQ ID NO: 52)
VTDHAAANVVGNK (SEQ ID NO: 53)
また、スポット６について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、シードビオチンコンテイニングプロテインＳＢＰ６５（Seed biotin-containing protein SBP65）（アミノ酸配列：配列番号１２、それをコードする塩基配列：配列番号１１）であることが同定された。
Further, regarding the
したがって、本願においてスポット６の抗原は、以下（６Ａ-ａ）～（６Ａ-ｅ）および（６Ｂ）のいずれかであってよい。
（６Ａ-ａ）配列番号１２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ-ｂ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ-ｃ）配列番号１１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ-ｄ）配列番号１１で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ａ-ｅ）配列番号１１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６Ｂ）配列番号３５～５３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、またはすべての配列を含むタンパク質。より好ましくは、配列番号３５～３９、４１～４４、４６、４８～５０、５２及び５３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３５～５３のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of
(6A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 12.
(6A-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(6A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 11.
(6A-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 11 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(6A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid having a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 11 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(6B) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 35 to 53, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein comprising 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, or all sequences. More preferably, a protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 35-39, 41-44, 46, 48-50, 52 and 53, preferably at least a few of the amino acid sequences. A protein comprising 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 35 to 53 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（６Ａ-ａ）～（６Ａ-ｅ）および（６Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (6A-a) to (6A-e) and (6B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（６Ａ-ａ）～（６Ａ-ｅ）および（６Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０ｋＤａ～１００ｋＤａ、好ましくは分子量５５ｋＤａ～９０ｋＤａ、より好ましくは分子量６０～７５ｋＤａ付近、および等電点５．０～１０．０、好ましくは６．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (6A-a) to (6A-e) and (6B) have a molecular weight of 50 kDa to 100 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 55 kDa to 90 kDa, more preferably around 60 to 75 kDa, and an isoelectric point of 5.0 to 10.0, preferably 6.0 to 8.0.
好ましくは、スポット６の抗原であるタンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するタンパク質（Seed biotin-containing protein SBP65）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of
（７）スポット７の抗原
スポット７について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AASNAPAPLAGVIFEPFQELKK（配列番号５４）
ASNAPAPLAGVIFEPFQELKK（配列番号５５）
FFKESSEEEREHAEQLIK（配列番号５６）
GHGVWHFDQK（配列番号５７）
IAEYVAQLRLVGK（配列番号５８）
KIAEYVAQLRLVGK（配列番号５９）
LLHDEDHV（配列番号６０）
SNAPAPLAGVIFEPFQELKK（配列番号６１）(7)
As a result of sequence identification of
AASNAPAPLAGVIFEPFQELKK (SEQ ID NO: 54)
ASNAPAPLAGVIFEPFQELKK (SEQ ID NO: 55)
FFKESSEEEREHAEQLIK (SEQ ID NO: 56)
GHGVWHFDQK (SEQ ID NO: 57)
IAEYVAQLRLVGK (SEQ ID NO: 58)
KIAEYVAQLRLVGK (SEQ ID NO: 59)
LLHDEDHV (SEQ ID NO: 60)
SNAPAPLAGVIFEPFQELKK (SEQ ID NO: 61)
また、スポット７について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、フェリチン－２（Ferritin-2）（アミノ酸配列：配列番号１４、それをコードする塩基配列：配列番号１３）であることが同定された。
Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of Uniprot for analysis of the
したがって、本願においてスポット７の抗原は、以下（７Ａ-ａ）～（７Ａ-ｅ）および（７Ｂ）のいずれかであってよい。
（７Ａ-ａ）配列番号１４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ-ｂ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ-ｃ）配列番号１３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ-ｄ）配列番号１３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ａ-ｅ）配列番号１３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７Ｂ）配列番号５４～６１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、またはすべての配列を含むタンパク質。より好ましくは、配列番号５４～５９及び６１から成る群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５４～６１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of
(7A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 14.
(7A-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 14 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(7A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 13.
(7A-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 13 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(7A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 13 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(7B) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 54 to 61, preferably containing at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, or all the sequences of the amino acid sequence. protein. More preferably, a protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 54-59 and 61, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6 or all sequences of the amino acid sequence. Protein included. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 54 to 61 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（７Ａ-ａ）～（７Ａ-ｅ）および（７Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (7A-a) to (7A-e) and (7B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（７Ａ-ａ）～（７Ａ-ｅ）および（７Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５ｋＤａ～３７ｋＤａ、好ましくは分子量１０ｋＤａ～３０ｋＤａ、より好ましくは分子量１５～２５ｋＤａ付近、および等電点３．０～７．０、好ましくは４．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (7A-a) to (7A-e) and (7B) have a molecular weight of 5 kDa to 37 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 10 kDa to 30 kDa, more preferably around 15 to 25 kDa, and an isoelectric point of 3.0 to 7.0, preferably 4.0 to 6.0.
好ましくは、スポット７の抗原であるタンパク質は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するタンパク質（Ferritin-2）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of
（８）スポット８の抗原
スポット８について質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AGESESNLRK（配列番号６２）
GESEANVREIFDK（配列番号６３）
GILLYGPPGSGK（配列番号６４）
LAGESESNLRK（配列番号６５）
LSDDVDLERIAK（配列番号６６）
RELQETVQYPVEHPEK（配列番号６７）
TVFIIGATNRPDIID（配列番号６８）(8) Antigen of
As a result of sequence identification of
AGESESNLRK (SEQ ID NO: 62)
GESEANVREIFDK (SEQ ID NO: 63)
GILLYGPPGSGK (SEQ ID NO: 64)
LAGESESNLRK (SEQ ID NO: 65)
LSDDVDLERIAK (SEQ ID NO: 66)
RELQETVQYPVEHPEK (SEQ ID NO: 67)
TVFIIGATNRPDIID (SEQ ID NO: 68)
また、スポット８について、質量分析装置から得られた質量データをＵｎｉｐｒｏｔのタンパク質データと照合して解析したところ、セルディビジョンサイクルプロテイン４８ホモログ（Cell division cycle protein 48 homolog）（アミノ酸配列：配列番号１６、それをコードする塩基配列：配列番号１５）であることが同定された。
Further, for
したがって、本願においてスポット８の抗原は、以下（８Ａ-ａ）～（８Ａ-ｅ）および（８Ｂ）のいずれかであってよい。
（８Ａ-ａ）配列番号１６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ-ｂ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ-ｃ）配列番号１５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ-ｄ）配列番号１５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ａ-ｅ）配列番号１５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８Ｂ）配列番号６２～６８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号６２～６８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of
(8A-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 16.
(8A-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 16 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(8A-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 15.
(8A-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 15 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(8A-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 15 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(8B) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 62 to 68, preferably a protein containing at least 2, 3, 4, 5, 6 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 62 to 68 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（８Ａ-ａ）～（８Ａ-ｅ）および（８Ｂ）のタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The amino acid residues of the proteins (8A-a) to (8A-e) and (8B) are modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are the proteins that are present.
上記（８Ａ-ａ）～（８Ａ-ｅ）および（８Ｂ）のタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量７５ｋＤａ～２００ｋＤａ、好ましくは分子量１００ｋＤａ～１７０ｋＤａ、より好ましくは分子量１００～１５０ｋＤａ付近、および等電点３．０～７．０、好ましくは４．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The proteins (8A-a) to (8A-e) and (8B) have a molecular weight of 75 kDa to 200 kDa in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may preferably appear as a spot having a molecular weight of 100 kDa to 170 kDa, more preferably around 100 to 150 kDa, and an isoelectric point of 3.0 to 7.0, preferably 4.0 to 6.0.
好ましくは、スポット８の抗原であるタンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するタンパク質（Cell division cycle protein 48 homolog）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of
（１α）スポット１αの抗原
スポット１αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
APQDLYESYYNANK（配列番号７１）
AVLFVPPK（配列番号７２）
DFASRIYDSVK（配列番号７３）
DIFLRELISNASDALDK（配列番号７４）
DIFYITGTSK（配列番号７５）
DNVDDVK（配列番号７６）
EDSKPETDAVNDDNDVK（配列番号７７）
EEAGEYLEESK（配列番号７８）
EQLENSPFLERLK（配列番号７９）
EVLGEGDNTK（配列番号８０）
EVTEEEYTK（配列番号８１）
FYHSLAK（配列番号８２）
IGAVPHGLSTDSDVVK（配列番号８３）
LGIIEDATNRNRLAK（配列番号８４）
NPEDEGVK（配列番号８５）
SGTSAFVEK（配列番号８６）
TSLDISPEATVEEEDDTEVEAESDAK（配列番号８７）
APQDLYESYYNANK（配列番号９０）
AVLFVPPK（配列番号９１）
DFASRIYDSVK（配列番号９２）
DIFLRELISNASDALDK（配列番号９３）
DIFYITGTSK（配列番号９４）
DNVDDVK（配列番号９５）
DVLGEGDNTK（配列番号９６）
EEAGEYLQESK（配列番号９７）
EQLENSPFLERLK（配列番号９８）
EVTEEEYTK（配列番号９９）
FYHSLAK（配列番号１００）
IGAVPHGLSTDSDVVK（配列番号１０１）
LGIIEDATNRNRLAK（配列番号１０２）
NPEDEGVK（配列番号１０３）
SGTSAFVEK（配列番号１０４）(1α) Antigen of spot 1α
As a result of sequence identification of spot 1α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
APQDLYESYYNANK (SEQ ID NO: 71)
AVLFVPPK (SEQ ID NO: 72)
DFASRIYDSVK (SEQ ID NO: 73)
DIFLRELISNASDALDK (SEQ ID NO: 74)
DIFYITGTSK (SEQ ID NO: 75)
DN VDDVK (SEQ ID NO: 76)
EDSKPETDAVNDDNDVK (SEQ ID NO: 77)
EEAGEYLEESK (SEQ ID NO: 78)
EQLENSPFLERLK (SEQ ID NO: 79)
EVLGEGDNTK (SEQ ID NO: 80)
EVTEEEYTK (SEQ ID NO: 81)
FYHSLAK (SEQ ID NO: 82)
IGAVPHGLSTDSDVVK (SEQ ID NO: 83)
LGIIEDATNRNRLAK (SEQ ID NO: 84)
NPEDEGVK (SEQ ID NO: 85)
SGTSAFVEK (SEQ ID NO: 86)
TSLDISPEATVEEEDDTEVEAESDAK (SEQ ID NO: 87)
APQDLYESYYNANK (SEQ ID NO: 90)
AVLFVPPK (SEQ ID NO: 91)
DFASRIYDSVK (SEQ ID NO: 92)
DIFLRELISNASDALDK (SEQ ID NO: 93)
DIFYITGTSK (SEQ ID NO: 94)
DN VDDVK (SEQ ID NO: 95)
DVLGEGDNTK (SEQ ID NO: 96)
EEAGEYLQESK (SEQ ID NO: 97)
EQLENSPFLERLK (SEQ ID NO: 98)
EVTEEEYTK (SEQ ID NO: 99)
FYHSLAK (SEQ ID NO: 100)
IGAVPHGLSTDSDVVK (SEQ ID NO: 101)
LGIIEDATNRNRLAK (SEQ ID NO: 102)
NPEDEGVK (SEQ ID NO: 103)
SGTSAFVEK (SEQ ID NO: 104)
また、スポット１αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号７１～８７のいずれかを含むタンパク質としてエンドプラスミンホモログアイソフォームＸ２（endoplasmin homolog isoform X2）（アミノ酸配列：配列番号７０、それをコードする塩基配列：配列番号６９）、配列番号９０～１０４のいずれかを含むタンパク質としてエンドプラスミンホモログアイソフォームＸ２（endoplasmin homolog isoform X2）（アミノ酸配列：配列番号８９、それをコードする塩基配列：配列番号８８）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 1α, the endoplasmin homolog isoform X2 (endoplasmin homolog isoform) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 71 to 87. X2) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 70, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 69), and endoplasmin homolog isoform X2 (endoplasmin homolog isoform X2) as a protein containing any of SEQ ID NOs: 90 to 104 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 89 and the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 88) were identified.
したがって、本願においてスポット１αの抗原は、以下（１αＡ１－ａ）～（１αＡ１－ｅ）、（１αＢ１）、（１αＡ２－ａ）～（１αＡ２－ｅ）、および（１αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１αＡ１－ａ）配列番号７０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ１－ｂ）配列番号７０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ１－ｃ）配列番号６９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ１－ｄ）配列番号６９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ１－ｅ）配列番号６９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＢ１）配列番号７１～８７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号７１～８７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（１αＡ２－ａ）配列番号８９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ２－ｂ）配列番号８９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ２－ｃ）配列番号８８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ２－ｄ）配列番号８８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＡ２－ｅ）配列番号８８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１αＢ２）配列番号９０～１０４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号７１～８７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 1α is selected from the group consisting of the following (1αA1-a) to (1αA1-e), (1αB1), (1αA2-a) to (1αA2-e), and (1αB2). It may be any of the proteins.
(1αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 70.
(1αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 70 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(1αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 69.
(1αA1-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 69 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(1αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 69 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(1αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 71 to 87, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein comprising 11, 12, 13, 14, 15, 16, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 71 to 87 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(1αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 89.
(1αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 89 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(1αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 88.
(1αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 88 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(1αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 88 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(1αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 90 to 104, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, 13, 14, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 71 to 87 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１αＡ１－ａ）～（１αＡ１－ｅ）、（１αＢ１）、（１αＡ２－ａ）～（１αＡ２－ｅ）、および（１αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of the above (1αA1-a) to (1αA1-e), (1αB1), (1αA2-a) to (1αA2-e), and (1αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（１αＡ１－ａ）～（１αＡ１－ｅ）、（１αＢ１）、（１αＡ２－ａ）～（１αＡ２－ｅ）、および（１αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量７０～１２０ｋＤａ、好ましくは分子量８０～１１０ｋＤａ付近、および等電点２．５～６．５、好ましくは３．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (1αA1-a) to (1αA1-e), (1αB1), (1αA2-a) to (1αA2-e), and (1αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 70 to 120 kDa, preferably around 80 to 110 kDa, and the isoelectric point is 2.5 to 6.5, preferably 3.0 to 6. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット１αの抗原であるタンパク質は、配列番号７０または８９のアミノ酸配列を有するタンパク質（endoplasmin homolog isoform X2）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 1α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70 or 89 (endoplasmin homolog isoform X2), or causes allergies to soybean.
（２α）スポット２αの抗原
スポット２αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
ADLVNNLGTIARSGTK（配列番号１０７）
AVENSPFLEK（配列番号１０８）
EDQLEYLEERRLK（配列番号１０９）
EEYAAFYK（配列番号１１０）
EGQNDIYYITGESK（配列番号１１１）
EIFLRELISNASDALDK（配列番号１１２）
FYEAFSK（配列番号１１３）
HFSVEGQLEFK（配列番号１１４）
IRFESLTDK（配列番号１１５）
LAELLRYHSTK（配列番号１１６）
LDESEDEK（配列番号１１７）
LGIHEDSQNK（配列番号１１８）
RAPFDLFDTRK（配列番号１１９）
VEDVDEDK（配列番号１２０）
ADLVNNLGTIARSGTK（配列番号１２３）
AVENSPFLEK（配列番号１２４）
EDQLEYLEERRLK（配列番号１２５）
EEYSAFYK（配列番号１２６）
EGQSDIYYITGESK（配列番号１２７）
EIFLRELISNASDALDK（配列番号１２８）
FYEAFSK（配列番号１２９）
HFSVEGQLEFK（配列番号１３０）
IAELLRYHSTK（配列番号１３１）
IRFESLTDK（配列番号１３２）
LDESEDEK（配列番号１３３）
LGIHEDSQNK（配列番号１３４）
RAPFDLFDTRK（配列番号１３５）
SGDELTSLK（配列番号１３６）
VEDVDEEK（配列番号１３７）
ADLVNNLGTIARSGTK（配列番号１４０）
AVENSPFLEK（配列番号１４１）
EDQLEYLEERRLK（配列番号１４２）
EEYAAFYK（配列番号１４３）
EGQNDIYYITGESK（配列番号１４４）
EIFLRELISNASDALDK（配列番号１４５）
FYEAFSK（配列番号１４６）
HFSVEGQLEFK（配列番号１４７）
IRFESLTDK（配列番号１４８）
LAELLRYHSTK（配列番号１４９）
LDESEDEK（配列番号１５０）
LGIHEDSQNK（配列番号１５１）
RAPFDLFDTK（配列番号１５２）
VEDVDEDK（配列番号１５３）(2α) Spot 2α antigen
As a result of sequence identification of spot 2α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
ADLVNNLGTIARSGTK (SEQ ID NO: 107)
AVENSPFLEK (SEQ ID NO: 108)
EDQLEYLEERRLK (SEQ ID NO: 109)
EEYAAFYK (SEQ ID NO: 110)
EGQNDIYYITGESK (SEQ ID NO: 111)
EIFLRELISNASDALDK (SEQ ID NO: 112)
FYEAFSK (SEQ ID NO: 113)
HFSVEGQLEFK (SEQ ID NO: 114)
IRFESLTDK (SEQ ID NO: 115)
LAELLRYHSTK (SEQ ID NO: 116)
LDESEDEK (SEQ ID NO: 117)
LGIHEDSQNK (SEQ ID NO: 118)
RAPFDLFDTRK (SEQ ID NO: 119)
VEDVDEDK (SEQ ID NO: 120)
ADLVNNLGTIARSGTK (SEQ ID NO: 123)
AVENSPFLEK (SEQ ID NO: 124)
EDQLEYLEERRLK (SEQ ID NO: 125)
EEYSAFYK (SEQ ID NO: 126)
EGQSDIYYITGESK (SEQ ID NO: 127)
EIFLRELISNASDALDK (SEQ ID NO: 128)
FYEAFSK (SEQ ID NO: 129)
HFSVEGQLEFK (SEQ ID NO: 130)
IAELLRYHSTK (SEQ ID NO: 131)
IRFESLTDK (SEQ ID NO: 132)
LDESEDEK (SEQ ID NO: 133)
LGIHEDSQNK (SEQ ID NO: 134)
RAPFDLFDTRK (SEQ ID NO: 135)
SGDELTSLK (SEQ ID NO: 136)
VEDVDEEK (SEQ ID NO: 137)
ADLVNNLGTIARSGTK (SEQ ID NO: 140)
AVENSPFLEK (SEQ ID NO: 141)
EDQLEYLEERRLK (SEQ ID NO: 142)
EEYAAFYK (SEQ ID NO: 143)
EGQNDIYYITGESK (SEQ ID NO: 144)
EIFLRELISNASDALDK (SEQ ID NO: 145)
FYEAFSK (SEQ ID NO: 146)
HFSVEGQLEFK (SEQ ID NO: 147)
IRFESLTDK (SEQ ID NO: 148)
LAELLRYHSTK (SEQ ID NO: 149)
LDESEDEK (SEQ ID NO: 150)
LGIHEDSQNK (SEQ ID NO: 151)
RAPFDLFDTK (SEQ ID NO: 152)
VEDVDEDK (SEQ ID NO: 153)
また、スポット２αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号１０７～１２０のいずれかを含むタンパク質としてヒートショックコグネートプロテイン８０（heat shock cognate protein 80）（アミノ酸配列：配列番号１０６、それをコードする塩基配列：配列番号１０５）、配列番号１２３～１３７のいずれかを含むタンパク質としてヒートショックプロテイン９０－１（heat shock protein 90-1）（アミノ酸配列：配列番号１２２、それをコードする塩基配列：配列番号１２１）、配列番号１４０～１５３のいずれかを含むタンパク質としてハイポセティカルプロテインGLYMA_02G302500（hypothetical protein GLYMA_02G302500）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 2α, the heat shock cognate protein 80 (heat shock cognate) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 107 to 120. protein 80) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 106, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 105), as a protein containing any of SEQ ID NOs: 123 to 137, heat shock protein 90-1 (heat shock protein 90-1) ( The hypothetical protein GLYMA_02G302500 (hypothetical protein GLYMA_02G302500) was identified as a protein containing any of the amino acid sequence: SEQ ID NO: 122, the base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 121), and SEQ ID NOs: 140 to 153.
したがって、本願においてスポット１αの抗原は、以下（２αＡ１－ａ）～（２αＡ１－ｅ）、（２αＢ１）、（２αＡ２－ａ）～（２αＡ２－ｅ）、（２αＢ２）、（２αＡ３－ａ）～（２αＡ３－ｅ）、および（２αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（２αＡ１－ａ）配列番号１０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ１－ｂ）配列番号１０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ１－ｃ）配列番号１０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ１－ｄ）配列番号１０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ１－ｅ）配列番号１０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＢ１）配列番号１０７～１２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１０７～１２０のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２αＡ２－ａ）配列番号１２２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ２－ｂ）配列番号１２２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ２－ｃ）配列番号１２１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ２－ｄ）配列番号１２１で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ２－ｅ）配列番号１２１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＢ２）配列番号１２３～１３７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１２３～１３７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２αＡ３－ａ）配列番号１３９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ３－ｂ）配列番号１３９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ３－ｃ）配列番号１３８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ３－ｄ）配列番号１３８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＡ３－ｅ）配列番号１３８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２αＢ３）配列番号１４０～１５３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１４０～１５３のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of spot 1α are as follows (2αA1-a) to (2αA1-e), (2αB1), (2αA2-a) to (2αA2-e), (2αB2), (2αA3-a) to ( It may be any of the proteins selected from the group consisting of 2αA3-e) and (2αB3).
(2αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 106.
(2αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 106 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(2αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 105.
(2αA1-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 105 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(2αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 105 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(2αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 107 to 120, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, 13, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 107 to 120 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(2αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 122.
(2αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 122 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(2αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 121.
(2αA2-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 121 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(2αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 121 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(2αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 123 to 137, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, 13, 14, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 123 to 137 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(2αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 139.
(2αA3-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 139 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(2αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 138.
(2αA3-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 138 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(2αA3-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 138 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(2αB3) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 140 to 153, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, 13, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 140 to 153 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（２αＡ１－ａ）～（２αＡ１－ｅ）、（２αＢ１）、（２αＡ２－ａ）～（２αＡ２－ｅ）、（２αＢ２）、（２αＡ３－ａ）～（２αＡ３－ｅ）、および（２αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 From the above (2αA1-a) to (2αA1-e), (2αB1), (2αA2-a) to (2αA2-e), (2αB2), (2αA3-a) to (2αA3-e), and (2αB3). The proteins selected from the group also include proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, or the like.
上記（２αＡ１－ａ）～（２αＡ１－ｅ）、（２αＢ１）、（２αＡ２－ａ）～（２αＡ２－ｅ）、（２αＢ２）、（２αＡ３－ａ）～（２αＡ３－ｅ）、および（２αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０～１２０ｋＤａ、好ましくは分子量６０～１１０ｋＤａ付近、および等電点２．５～６．５、好ましくは３．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 From the above (2αA1-a) to (2αA1-e), (2αB1), (2αA2-a) to (2αA2-e), (2αB2), (2αA3-a) to (2αA3-e), and (2αB3). The protein selected from the above group has a molecular weight of 50 to 120 kDa, preferably around 60 to 110 kDa, and isoelectric in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". It may be a protein that appears as a spot with points 2.5 to 6.5, preferably 3.0 to 6.0.
好ましくは、スポット２αの抗原であるタンパク質は、配列番号１０６のアミノ酸配列を有するタンパク質（heat shock cognate protein 80）、配列番号１２２のアミノ酸配列を有するタンパク質（heat shock protein 90-1）もしくは配列番号１３９のアミノ酸を有するタンパク質（hypothetical protein GLYMA_02G302500）、と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 2α is a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106 (heat shock cognate protein 80), a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122 (heat shock protein 90-1), or SEQ ID NO: 139. Has the same activity as the amino acid-containing protein (hypothetical protein GLYMA_02G302500), or causes allergies to soybeans.
（４α）スポット４αの抗原
スポット４αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AGGALSIAFVSK（配列番号１５６）
DGLIVSIGK（配列番号１５７）(4α) Antigen of spot 4α
As a result of sequence identification of spot 4α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AGGALSIAFVSK (SEQ ID NO: 156)
DGLIVSIGK (SEQ ID NO: 157)
また、スポット４αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号１５６、１５７のいずれかを含むタンパク質としてエンブリオ－スペシフィックウレアーゼアイソフォームＸ１（embryo-specific urease isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号１５５、それをコードする塩基配列：配列番号１５４）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass spectrometer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 4α, the embryo-specific urease isoform X1 (embryo-) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 156 and 157. specific urease isoform X1) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 155, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 154) was identified.
したがって、本願においてスポット４αの抗原は、以下（４αＡ－ａ）～（４αＡ－ｅ）、および（４αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４αＡ－ａ）配列番号１５５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４αＡ－ｂ）配列番号１５５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４αＡ－ｃ）配列番号１５４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４αＡ－ｄ）配列番号１５４で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４αＡ－ｅ）配列番号１５４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４αＢ）配列番号１５６および１５７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の両方を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１５６、１５７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 4α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (4αA-a) to (4αA-e) and (4αB).
(4αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 155.
(4αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 155 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(4αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 154.
(4αA-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 154 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(4αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 154 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(4αB) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 156 and 157, preferably a protein containing both of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 156 and 157 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４αＡ－ａ）～（４αＡ－ｅ）、および（４αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (4αA-a) to (4αA-e) and (4αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（４αＡ－ａ）～（４αＡ－ｅ）、および（４αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量７０～１２０ｋＤａ、好ましくは分子量８０～１１０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (4αA-a) to (4αA-e) and (4αB) above is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 70 to 120 kDa, preferably around 80 to 110 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット４αの抗原であるタンパク質は、配列番号１５５のアミノ酸配列を有するタンパク質（embryo-specific urease isoform X1）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 4α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 155 (embryo-specific urease isoform X1), or causes allergies to soybean.
（５α）スポット５αの抗原
スポット５αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AFATYVQAK（配列番号１６０）
QQEATTSLSSFTPDASSIASSIK（配列番号１６１）(5α) Antigen of spot 5α
As a result of sequence identification of spot 5α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AFATYVQAK (SEQ ID NO: 160)
QQEATTSLSSFTPDASSIASSIK (SEQ ID NO: 161)
また、スポット５αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号１６０、１６１のいずれかを含むタンパク質としてα－１，４グルカンホスホリラーゼＬアイソザイム、クロロプラスティック／アミロプラスティック（alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic/amyloplastic）（アミノ酸配列：配列番号１５９、それをコードする塩基配列：配列番号１５８）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 5α, the α-1,4 glucan phosphorylase L isozyme was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 160 and 161. A chloroplastic / amyloplastic (alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic / amyloplastic) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 159, nucleotide sequence encoding the same: SEQ ID NO: 158) was identified.
したがって、本願においてスポット５αの抗原は、以下（５αＡ－ａ）～（５αＡ－ｅ）、および（５αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（５αＡ－ａ）配列番号１５９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５αＡ－ｂ）配列番号１５９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５αＡ－ｃ）配列番号１５８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５αＡ－ｄ）配列番号１５８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５αＡ－ｅ）配列番号１５８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５αＢ）配列番号１６０および１６１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の両方を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１６０、１６１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 5α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (5αA-a) to (5αA-e) and (5αB).
(5αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 159.
(5αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 159 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(5αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 158.
(5αA-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 158 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(5αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 158 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(5αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 160 and 161, preferably a protein comprising both of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 160 and 161 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５αＡ－ａ）～（５αＡ－ｅ）、および（５αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (5αA-a) to (5αA-e) and (5αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（５αＡ－ａ）～（５αＡ－ｅ）、および（５αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量７０～１７０ｋＤａ、好ましくは分子量８０～１６０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (5αA-a) to (5αA-e) and (5αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 70 to 170 kDa, preferably around 80 to 160 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット５αの抗原であるタンパク質は、配列番号１５９のアミノ酸配列を有するタンパク質（alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic/amyloplastic）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 5α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 159 (alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic / amyloplastic), or causes allergies to soybeans. It becomes.
（６α）スポット６αの抗原
スポット６αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
FLNGEVGPK（配列番号１６４）
LSVFDAAEK（配列番号１６５）
LSVFDVAEK（配列番号１６６）
TSLAPGSGVVTK（配列番号１６７）
FLNGEVGPK（配列番号１７０）
LSVFDVAEK（配列番号１７１）
TSLAPGSGVVTK（配列番号１７２）(6α) Antigen of spot 6α
As a result of sequence identification of spot 6α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
FLNGEVGPK (SEQ ID NO: 164)
LSVFDAAEK (SEQ ID NO: 165)
LSVFDVAEK (SEQ ID NO: 166)
TSLAPGSGVVTK (SEQ ID NO: 167)
FLNGEVGPK (SEQ ID NO: 170)
LSVFDVAEK (SEQ ID NO: 171)
TSLAPGSGVVTK (SEQ ID NO: 172)
また、スポット６αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号１６４～１６７のいずれかを含むタンパク質としてアコニテートヒドラターゼ１（aconitate hydratase 1）（アミノ酸配列：配列番号１６３、それをコードする塩基配列：配列番号１６２）、配列番号１７０～１７２のいずれかを含むタンパク質としてアコニテートヒドラターゼ１（アミノ酸配列：配列番号１６９、それをコードする塩基配列：配列番号１６８）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 6α, the aconitate hydratase 1 was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 164 to 167. (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 163, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 162), coincidet hydratase 1 as a protein containing any of SEQ ID NOs: 170 to 172 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 169, base encoding the same). Sequence: SEQ ID NO: 168) was identified.
したがって、本願においてスポット６αの抗原は、以下（６αＡ１－ａ）～（６αＡ１－ｅ）、（６αＢ１）、（６αＡ２－ａ）～（６αＡ２－ｅ）、および（６αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（６αＡ１－ａ）配列番号１６３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ１－ｂ）配列番号１６３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ１－ｃ）配列番号１６２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ１－ｄ）配列番号１６２で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ１－ｅ）配列番号１６２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＢ１）配列番号１６４～１６７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１６４～１６７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（６αＡ２－ａ）配列番号１６９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ２－ｂ）配列番号１６９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ２－ｃ）配列番号１６８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ２－ｄ）配列番号１６８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＡ２－ｅ）配列番号１６８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（６αＢ２）配列番号１７０～１７２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１７０～１７２のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 6α is selected from the group consisting of (6αA1-a) to (6αA1-e), (6αB1), (6αA2-a) to (6αA2-e), and (6αB2) below. It may be any of the proteins.
(6αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 163.
(6αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 163 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(6αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 162.
(6αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 162 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(6αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 162 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(6αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 164 to 167, preferably a protein containing at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 164 to 167 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(6αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 169.
(6αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 169 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(6αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 168.
(6αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 168 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(6αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 168 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(6αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 170 to 172, preferably a protein containing at least 2 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 170 to 172 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（６αＡ１－ａ）～（６αＡ１－ｅ）、（６αＢ１）、（６αＡ２－ａ）～（６αＡ２－ｅ）、および（６αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (6αA1-a) to (6αA1-e), (6αB1), (6αA2-a) to (6αA2-e), and (6αB2) described above includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（６αＡ１－ａ）～（６αＡ１－ｅ）、（６αＢ１）、（６αＡ２－ａ）～（６αＡ２－ｅ）、および（６αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量７０～１２０ｋＤａ、好ましくは分子量８０～１１０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (6αA1-a) to (6αA1-e), (6αB1), (6αA2-a) to (6αA2-e), and (6αB2) of the above-mentioned "identification of antigen" In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 70 to 120 kDa, preferably around 80 to 110 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット６αの抗原であるタンパク質は、配列番号１６３または１６９のアミノ酸配列を有するタンパク質（aconitate hydratase 1）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 6α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 163 or 169 (aconitate hydratase 1), or causes allergies to soybean.
（７α）スポット７αの抗原
スポット７αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AGITVIQIDEAALREGLPLRK（配列番号１７５）
ALGVDTVPVLVGPVTYLLLSKPAK（配列番号１７６）
DEAFFSGNAAALASRK（配列番号１７７）
DEVEDLEK（配列番号１７８）
ISEEEYVK（配列番号１７９）
IVEVNALAK（配列番号１８０）
LIRNELAK（配列番号１８１）
LLSVFREGVK（配列番号１８２）
LVVSTSSSLLHTAVDLVNETK（配列番号１８３）
SFSLLSLLPK（配列番号１８４）
SSPRVTNEAVQK（配列番号１８５）
TLTSLNGVTAYGFDLVRGTNTLDLIK（配列番号１８６）
YGAGIGPGVYDIHSPRIPPTEEIADRINK（配列番号１８７）(7α) Antigen of spot 7α
As a result of sequence identification of spot 7α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AGITVIQIDEAALREGLPLRK (SEQ ID NO: 175)
ALGVDTVPVLVGPVTYLLLSKPAK (SEQ ID NO: 176)
DEAFFSGNAAALASRK (SEQ ID NO: 177)
DEVEDLEK (SEQ ID NO: 178)
ISEEEYVK (SEQ ID NO: 179)
IVEVNALAK (SEQ ID NO: 180)
LIRNELAK (SEQ ID NO: 181)
LLSVFREGVK (SEQ ID NO: 182)
LVVSTSSSLLHTAVDLVNETK (SEQ ID NO: 183)
SFSLLSLLPK (SEQ ID NO: 184)
SSPRVTNEAVQK (SEQ ID NO: 185)
TLTSLNGVTAYGFDLVRGTNTLDLIK (SEQ ID NO: 186)
YGAGIGPGVYDIHSPRIPPTEEIADRINK (SEQ ID NO: 187)
また、スポット７αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号１７５～１８７のいずれかを含むタンパク質としてメチオニンシンターゼ（methionine synthase）（アミノ酸配列：配列番号１７４、それをコードする塩基配列：配列番号１７３）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI for analysis of the spot 7α, methionine synthase (amino acid sequence: amino acid sequence:) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 175 to 187. SEQ ID NO: 174, the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 173), was identified.
したがって、本願においてスポット７αの抗原は、以下（７αＡ－ａ）～（７αＡ－ｅ）、および（７αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（７αＡ－ａ）配列番号１７４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７αＡ－ｂ）配列番号１７４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７αＡ－ｃ）配列番号１７３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７αＡ－ｄ）配列番号１７３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７αＡ－ｅ）配列番号１７３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（７αＢ）配列番号１７５～１８７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１７５～１８７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 7α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (7αA-a) to (7αA-e) and (7αB).
(7αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 174.
(7αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 174 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(7αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 173.
(7αA-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 173 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(7αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 173 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(7αB) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 175 to 187, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 175 to 187 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（７αＡ－ａ）～（７αＡ－ｅ）、および（７αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (7αA-a) to (7αA-e) and (7αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（７αＡ－ａ）～（７αＡ－ｅ）、および（７αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０～１２０ｋＤａ、好ましくは分子量６０～１１０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (7αA-a) to (7αA-e) and (7αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 50 to 120 kDa, preferably around 60 to 110 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット７αの抗原であるタンパク質は、配列番号１７４のアミノ酸配列を有するタンパク質（methionine synthase）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 7α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 174 (methionine synthase) or causes allergies to soybeans.
（８α）スポット８αの抗原
スポット８αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AIGIDRFGASAPAGRIYK（配列番号１９０）
ALPTYTPESPADATRNLSQTNLNALAK（配列番号１９１）
ANSYSVHGSALGAK（配列番号１９２）
ATADAALVEK（配列番号１９３）
DKPTLIK（配列番号１９４）
GGYTISDNSTGNKPDVILIGTGSELEIAAK（配列番号１９５）
LPQLPGTSIEGVEK（配列番号１９６）
NGNNGYDDIRAAIK（配列番号１９７）
SVNTIRFLAIDAVEK（配列番号１９８）
VTTTIGYGSPNK（配列番号１９９）(8α) Antigen of spot 8α
As a result of sequence identification of spot 8α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AIGIDRFGASAPAGRIYK (SEQ ID NO: 190)
ALPTYTPESPADATRNLSQTNLNALAK (SEQ ID NO: 191)
ANSYSVHGSALGAK (SEQ ID NO: 192)
ATADAALVEK (SEQ ID NO: 193)
DKPTLIK (SEQ ID NO: 194)
GGYTISDNSTGNKPDVILIGTGSELEIAAK (SEQ ID NO: 195)
LPQLPGTSIEGVEK (SEQ ID NO: 196)
NGNNGYDDIRAAIK (SEQ ID NO: 197)
SVNTIRFLAIDAVEK (SEQ ID NO: 198)
VTTTIGYGSPNK (SEQ ID NO: 199)
また、スポット８αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号１９０～１９９のいずれかを含むタンパク質としてトランスケトラーゼ、クロロプラスティック（transketolase, chloroplastic）（アミノ酸配列：配列番号１８９、それをコードする塩基配列：配列番号１８８）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 8α, transketolase and chloroplastic (transketolase, chloroplastic) were analyzed as proteins containing any of SEQ ID NOs: 190 to 199. ) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 189, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 188).
したがって、本願においてスポット８αの抗原は、以下（８αＡ－ａ）～（８αＡ－ｅ）、および（８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（８αＡ－ａ）配列番号１８９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８αＡ－ｂ）配列番号１８９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８αＡ－ｃ）配列番号１８８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８αＡ－ｄ）配列番号１８８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８αＡ－ｅ）配列番号１８８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（８αＢ）配列番号１９０～１９９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号１９０～１９９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 8α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (8αA-a) to (8αA-e) and (8αB).
(8αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 189.
(8αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 189 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(8αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 188.
(8αA-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 188 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(8αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 188 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(8αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 190-199, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or all of the amino acid sequences. A protein containing the sequence of. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 190 to 199 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（８αＡ－ａ）～（８αＡ－ｅ）、および（８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (8αA-a) to (8αA-e) and (8αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（８αＡ－ａ）～（８αＡ－ｅ）、および（８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０～１２０ｋＤａ、好ましくは分子量６０～１１０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (8αA-a) to (8αA-e) and (8αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 50 to 120 kDa, preferably around 60 to 110 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット８αの抗原であるタンパク質は、配列番号１８９のアミノ酸配列を有するタンパク質（transketolase, chloroplastic）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 8α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 (transketolase, chloroplastic), or causes allergies to soybean.
（９α）スポット９αの抗原
スポット９αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
DLSSEEANQYLK（配列番号２０２）(9α) Antigen of spot 9α
As a result of sequence identification of spot 9α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
DLSSEEANQYLK (SEQ ID NO: 202)
また、スポット９αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号２０２を含むタンパク質としてリジン－ｔＲＮＡリガーゼ、サイトプラスミック－ライク アイソフォームＸ２（lysine-tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2）（アミノ酸配列：配列番号２０１、それをコードする塩基配列：配列番号２００）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 9α, lysine-tRNA ligase and cytoplasmic-like isoform X2 (lysine) were analyzed as proteins containing SEQ ID NO: 202. -tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 201, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 200) was identified.
したがって、本願においてスポット９αの抗原は、以下（９αＡ－ａ）～（９αＡ－ｅ）、および（９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（９αＡ－ａ）配列番号２０１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９αＡ－ｂ）配列番号２０１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９αＡ－ｃ）配列番号２００において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９αＡ－ｄ）配列番号２００で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９αＡ－ｅ）配列番号２００で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（９αＢ）配列番号２０２で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２０２で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 9α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (9αA-a) to (9αA-e) and (9αB).
(9αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 201.
(9αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 201 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(9αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 200.
(9αA-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 200 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(9αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 200 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(9αB) A protein comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 202. Here, the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 202 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（９αＡ－ａ）～（９αＡ－ｅ）、および（９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (9αA-a) to (9αA-e) and (9αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（９αＡ－ａ）～（９αＡ－ｅ）、および（９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５０～１２０ｋＤａ、好ましくは分子量６０～１１０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (9αA-a) to (9αA-e) and (9αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 50 to 120 kDa, preferably around 60 to 110 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット９αの抗原であるタンパク質は、配列番号２０１のアミノ酸配列を有するタンパク質（lysine-tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 9α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 201 (lysine-tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2), or causes allergies to soybeans.
（１０α）スポット１０αの抗原
スポット１０αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AAVEEGIVPGGGVALLYASSELDK（配列番号２０５）
DRVTDALNATK（配列番号２０６）
EGVITISDGK（配列番号２０７）
GRNVVIEQSFGAPK（配列番号２０８）
GVEELADAVK（配列番号２０９）
IGGASEAEVGEK（配列番号２１０）
IGVQIIQNALK（配列番号２１１）
ISSINAIVK（配列番号２１２）
LLEQNDPDLGYDAAK（配列番号２１３）
LQTANFDQK（配列番号２１４）
LSGGVAVLK（配列番号２１５）
NIGASLVK（配列番号２１６）
TGIIDPLK（配列番号２１７）
TPVHTIASNAGVEGAVVVGK（配列番号２１８）
AGIIDPLK（配列番号２２１）
DRVTDALNATK（配列番号２２２）
EGVITISDGK（配列番号２２３）
GRNVVIEQSFGAPK（配列番号２２４）
GVEELADAVK（配列番号２２５）
IGGASEAEVGEK（配列番号２２６）
IGVQIIQNALK（配列番号２２７）
ISSINAIVK（配列番号２２８）
LLEQENHDLGYDAAK（配列番号２２９）
LQTANFDQK（配列番号２３０）
LSGGVAVLK（配列番号２３１）(10α) Antigen of spot 10α
As a result of sequence identification of spot 10α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AAVEEGIVPGGGVALLYASSELDK (SEQ ID NO: 205)
DRVTDALNATK (SEQ ID NO: 206)
EGVITISDGK (SEQ ID NO: 207)
GRNVVIEQSFGAPK (SEQ ID NO: 208)
GVEELADAVK (SEQ ID NO: 209)
IGGASEAEVGEK (SEQ ID NO: 210)
IGVQIIQNALK (SEQ ID NO: 211)
ISSINAIVK (SEQ ID NO: 212)
LLEQNDPDLGYDAAK (SEQ ID NO: 213)
LQTANFDQK (SEQ ID NO: 214)
LSGGVAVLK (SEQ ID NO: 215)
NIGASLVK (SEQ ID NO: 216)
TGIIDPLK (SEQ ID NO: 217)
TPVHTIASNAGVEGAVVVGK (SEQ ID NO: 218)
AGIIDPLK (SEQ ID NO: 221)
DRVTDALNATK (SEQ ID NO: 222)
EGVITISDGK (SEQ ID NO: 223)
GRNVVIEQSFGAPK (SEQ ID NO: 224)
GVEELADAVK (SEQ ID NO: 225)
IGGASEAEVGEK (SEQ ID NO: 226)
IGVQIIQNALK (SEQ ID NO: 227)
ISSINAIVK (SEQ ID NO: 228)
LLEQENHDLGYDAAK (SEQ ID NO: 229)
LQTANFDQK (SEQ ID NO: 230)
LSGGVAVLK (SEQ ID NO: 231)
また、スポット１０αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号２０５～２１８のいずれかを含むタンパク質としてシャペロニンCPN60-2，ミトコンドリアル（chaperonin CPN60-2, mitochondrial）（アミノ酸配列：配列番号２０４、それをコードする塩基配列：配列番号２０３）、配列番号２２１～２３１のいずれかを含むタンパク質としてシャペロニンCPN60-2，ミトコンドリアル－ライク アイソフォームＸ１（chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号２２０、それをコードする塩基配列：配列番号２１９）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 10α, chaperonin CPN60-2 and chaperonin CPN60 were used as proteins containing any of SEQ ID NOs: 205 to 218. -2, mitochondrial) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 204, Nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 203), Chaperonin CPN60-2 as a protein containing any of SEQ ID NOs: 221-231, Mitochondrial-like isoform X1 ( chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 220, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 219) was identified.
したがって、本願においてスポット１０αの抗原は、以下（１０αＡ１－ａ）～（１０αＡ１－ｅ）、（１０αＢ１）、（１０αＡ２－ａ）～（１０αＡ２－ｅ）、および（１０αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１０αＡ１－ａ）配列番号２０４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ１－ｂ）配列番号２０４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ１－ｃ）配列番号２０３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ１－ｄ）配列番号２０３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ１－ｅ）配列番号２０３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＢ１）配列番号２０５～２１８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２０５～２１８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（１０αＡ２－ａ）配列番号２２０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ２－ｂ）配列番号２２０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ２－ｃ）配列番号２１９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ２－ｄ）配列番号２１９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＡ２－ｅ）配列番号２１９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１０αＢ２）配列番号２２１～２３１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２２１～２３１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 10α is selected from the group consisting of the following (10αA1-a) to (10αA1-e), (10αB1), (10αA2-a) to (10αA2-e), and (10αB2). It may be any of the proteins.
(10αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 204.
(10αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 204 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(10αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 203.
(10αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 203 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(10αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 203 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(10αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 205 to 218, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, 13, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 205 to 218 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(10αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 220.
(10αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 220 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(10αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 219.
(10αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 219 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(10αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 219 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(10αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 221 to 231, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. Or a protein containing all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 221 to 231 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１０αＡ１－ａ）～（１０αＡ１－ｅ）、（１０αＢ１）、（１０αＡ２－ａ）～（１０αＡ２－ｅ）、および（１０αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of the above (10αA1-a) to (10αA1-e), (10αB1), (10αA2-a) to (10αA2-e), and (10αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（１０αＡ１－ａ）～（１０αＡ１－ｅ）、（１０αＢ１）、（１０αＡ２－ａ）～（１０αＡ２－ｅ）、および（１０αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (10αA1-a) to (10αA1-e), (10αB1), (10αA2-a) to (10αA2-e), and (10αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット１０αの抗原であるタンパク質は、配列番号２０４のアミノ酸配列を有するタンパク質（haperonin CPN60-2, mitochondrial）もしくは配列番号２２０のアミノ酸配列を有するタンパク質（chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 10α is a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 204 (haperonin CPN60-2, mitochondrial) or a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 220 (chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1). ) Has the same activity or causes allergies to soybeans.
（１１α）スポット１１αの抗原
スポット１１αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AIDVLNFTPLNGK（配列番号２３４）
FNNVFVK（配列番号２３５）
GFGFVNFANVDDAAK（配列番号２３６）
SGAANVFIK（配列番号２３７）(11α) Antigen of spot 11α
As a result of sequence identification of spot 11α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AIDVLNFTPLNGK (SEQ ID NO: 234)
FNNVFVK (SEQ ID NO: 235)
GFGFVNFAN VDDAAK (SEQ ID NO: 236)
SGAANVFIK (SEQ ID NO: 237)
また、スポット１１αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号２３４～２３７のいずれかを含むタンパク質としてポリアデニレート－バインディングプロテイン８ アイソフォームＸ３（polyadenylate-binding protein 8 isoform X3）（アミノ酸配列：配列番号２３３、それをコードする塩基配列：配列番号２３２）、が同定された。
Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 11α, the polyadenylate-binding
したがって、本願においてスポット１１αの抗原は、以下（１１αＡ－ａ）～（１１αＡ－ｅ）、および（１１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１１αＡ－ａ）配列番号２３３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１αＡ－ｂ）配列番号２３３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１αＡ－ｃ）配列番号２３２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１αＡ－ｄ）配列番号２３２で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１αＡ－ｅ）配列番号２３２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１１αＢ）配列番号２３４～２３７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２３４～２３７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 11α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (11αA-a) to (11αA-e) and (11αB).
(11αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 233.
(11αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 233 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(11αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 232.
(11αA-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 232 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(11αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 232 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(11αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 234 to 237, preferably a protein comprising at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 234 to 237 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１１αＡ－ａ）～（１１αＡ－ｅ）、および（１１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (11αA-a) to (11αA-e) and (11αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（１１αＡ－ａ）～（１１αＡ－ｅ）、および（１１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (11αA-a) to (11αA-e) and (11αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット１１αの抗原であるタンパク質は、配列番号２３３のアミノ酸配列を有するタンパク質（polyadenylate-binding protein 8 isoform X3）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。
Preferably, the protein that is the antigen of spot 11α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 233 (polyadenylate-binding
（１２α）スポット１２αの抗原
スポット１２αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
VVGVPVTLNGDLK（配列番号２４０）(12α) Antigen of spot 12α
As a result of sequence identification of spot 12α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
VVGVPVTLNGDLK (SEQ ID NO: 240)
また、スポット１２αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号２４０を含むタンパク質としてピロホスフェート－フルクトース６－ホスフェート１－ホスホロトランスフェラーゼサブユニットアルファ－ライク（pyrophosphate--fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like）（アミノ酸配列：配列番号２３９、それをコードする塩基配列：配列番号２３８）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI for analysis of the spot 12α, the protein containing SEQ ID NO: 240 was found to be pyrofphosphate-fructose 6-phosphate 1-phosphorotransferase subunit alpha. -Like (pyrophosphate--fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 239, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 238) was identified.
したがって、本願においてスポット１２αの抗原は、以下（１２αＡ－ａ）～（１２αＡ－ｅ）、および（１２αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１２αＡ－ａ）配列番号２３９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２αＡ－ｂ）配列番号２３９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２αＡ－ｃ）配列番号２３８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２αＡ－ｄ）配列番号２３８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２αＡ－ｅ）配列番号２３８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１２αＢ）配列番号２４０で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２４０で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 12α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (12αA-a) to (12αA-e) and (12αB).
(12αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 239.
(12αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 239 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(12αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 238.
(12αA-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 238 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(12αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 238 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(12αB) A protein comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 240. Here, the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 240 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１２αＡ－ａ）～（１２αＡ－ｅ）、および（１２αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (12αA-a) to (12αA-e) and (12αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（１２αＡ－ａ）～（１２αＡ－ｅ）、および（１２αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (12αA-a) to (12αA-e) and (12αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット１２αの抗原であるタンパク質は、配列番号２３９のアミノ酸配列を有するタンパク質（pyrophosphate--fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 12α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 239 (pyrophosphate--fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like), or is allergic to soybean. It causes.
（１３α）スポット１３αの抗原
スポット１３αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AASILSSHDPPVVLAK（配列番号２４３）
DGNVAPFVK（配列番号２４４）
DLASQYDVRGYPTIK（配列番号２４５）
EDIIEFIEK（配列番号２４６）
EEQVPLIIIQHNDGK（配列番号２４７）
EFVLTLDHSNFHDTVSK（配列番号２４８）
FFKPNLEADHIPTWLK（配列番号２４９）
FFNSPNAK（配列番号２５０）
FSGEEFDNFSALAEK（配列番号２５１）
FVEESSTPVVTVFNNDPSNHPFVAK（配列番号２５２）
AASILSSHDPPIVLAK（配列番号２５５）
DGHVAPFVK（配列番号２５６）
DLASQYDVK（配列番号２５７）
EDIIEFIEK（配列番号２５８）
EEQVPLIIIQHNDGK（配列番号２５９）
EFVLTLDHSNFHDTVSK（配列番号２６０）
FFKPNLEADHIPTWLK（配列番号２６１）
FFNSPNAK（配列番号２６２）
FSGEEFDNFSALAEK（配列番号２６３）
FVEESSTPVVTVFNNEPSNHPFVVK（配列番号２６４）
GFPTINILRNGGK（配列番号２６５）
GPREADGIVDYLK（配列番号２６６）
LAPEYEK（配列番号２６７）
LDATANDIPSETFDVQGYPTVYFRSASGK（配列番号２６８）
LRSDYDFGHTLNAK（配列番号２６９）
LSQYDGGRTK（配列番号２７０）
QLAPILDEVAISYQNEADVVIAK（配列番号２７１）
QQGVSFLVGDVESSQGAFQYFGLK（配列番号２７２）
QSGPASTEIK（配列番号２７３）
SADEATAFIGENK（配列番号２７４）
SEPIPETNDEPVK（配列番号２７５）
VAIVGVFPK（配列番号２７６）
VVVGASLEDIVFK（配列番号２７７）
YREAAEQYK（配列番号２７８）(13α) Antigen of spot 13α
As a result of sequence identification of spot 13α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AASILSSHDPPVVLAK (SEQ ID NO: 243)
DGNVAPFVK (SEQ ID NO: 244)
DLASQYDVRGYPTIK (SEQ ID NO: 245)
EDIIEFIEK (SEQ ID NO: 246)
EEQVPLIIIQHNDGK (SEQ ID NO: 247)
EFVLTLDHSNFHDTVSK (SEQ ID NO: 248)
FFKPNLEADHIPTWLK (SEQ ID NO: 249)
FFNSPNAK (SEQ ID NO: 250)
FSGEEFDNFSALAEK (SEQ ID NO: 251)
FVEESSTPVVTVFNNDPSNHPFVAK (SEQ ID NO: 252)
AASILSSHDPPIVLAK (SEQ ID NO: 255)
DGHVAPFVK (SEQ ID NO: 256)
DLASQYDVK (SEQ ID NO: 257)
EDIIEFIEK (SEQ ID NO: 258)
EEQVPLIIIQHNDGK (SEQ ID NO: 259)
EFVLTLDHSNFHDTVSK (SEQ ID NO: 260)
FFKPNLEADHIPTWLK (SEQ ID NO: 261)
FFNSPNAK (SEQ ID NO: 262)
FSGEEFDNFSALAEK (SEQ ID NO: 263)
FVEESSTPVVTVFNNEPSNHPFVVK (SEQ ID NO: 264)
GFPTINILRNGGK (SEQ ID NO: 265)
GPREADGIVDYLK (SEQ ID NO: 266)
LAPEYEK (SEQ ID NO: 267)
LDATANDIPSETFDVQGYPTVYFRSASGK (SEQ ID NO: 268)
LRSDYDFGHTLNAK (SEQ ID NO: 269)
LSQYDGGRTK (SEQ ID NO: 270)
QLAPILDEVAISYQNEADVVIAK (SEQ ID NO: 271)
QQGVSFLVGDVESSQGAFQYFGLK (SEQ ID NO: 272)
QSGPASTEIK (SEQ ID NO: 273)
SADEATAFIGENK (SEQ ID NO: 274)
SEPIPETNDEPVK (SEQ ID NO: 275)
VAIVGVFPK (SEQ ID NO: 276)
VVVGASLEDIVFK (SEQ ID NO: 277)
YREAAEQYK (SEQ ID NO: 278)
また、スポット１３αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号２４３～２５２のいずれかを含むタンパク質としてプロテインジスルフィドイソメラーゼ－ライクプロテインプレカーサー（protein disulfide isomerase-like protein precursor）（アミノ酸配列：配列番号２４２、それをコードする塩基配列：配列番号２４１）、配列番号２５５～２７８のいずれかを含むタンパク質としてプロテインジスルフィド－イソメラーゼ（protein disulfide-isomerase）（アミノ酸配列：配列番号２５４、それをコードする塩基配列：配列番号２５３）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 13α, the protein disulfide isomerase-like protein precursor (protein disulfide) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 243 to 252. An isomerase-like protein precursor) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 242, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 241), as a protein containing any of SEQ ID NOs: 255 to 278, protein disulfide-isomerase (amino acid). The sequence: SEQ ID NO: 254 and the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 253) were identified.
したがって、本願においてスポット１３αの抗原は、以下（１３αＡ１－ａ）～（１３αＡ１－ｅ）、（１３αＢ１）、（１３αＡ２－ａ）～（１３αＡ２－ｅ）、および（１３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１３αＡ１－ａ）配列番号２４２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ１－ｂ）配列番号２４２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ１－ｃ）配列番号２４１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ１－ｄ）配列番号２４１で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ１－ｅ）配列番号２４１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＢ１）配列番号２４３～２５２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２０５～２１８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（１３αＡ２－ａ）配列番号２５４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ２－ｂ）配列番号２５４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ２－ｃ）配列番号２５３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ２－ｄ）配列番号２５３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＡ２－ｅ）配列番号２５３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１３αＢ２）配列番号２５５～２７８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２２１～２３１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 13α is selected from the group consisting of (13αA1-a) to (13αA1-e), (13αB1), (13αA2-a) to (13αA2-e), and (13αB2) below. It may be any of the proteins.
(13αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 242.
(13αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 242 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(13αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 241.
(13αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 241 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(13αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 241 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(13αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 243 to 252, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or all of the amino acid sequences. A protein containing the sequence of. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 205 to 218 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(13αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 254.
(13αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 254 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(13αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 253.
(13αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 253 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(13αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 253 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(13αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 255 to 278, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein comprising 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 221 to 231 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１３αＡ１－ａ）～（１３αＡ１－ｅ）、（１３αＢ１）、（１３αＡ２－ａ）～（１３αＡ２－ｅ）、および（１３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of the above (13αA1-a) to (13αA1-e), (13αB1), (13αA2-a) to (13αA2-e), and (13αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（１３αＡ１－ａ）～（１３αＡ１－ｅ）、（１３αＢ１）、（１３αＡ２－ａ）～（１３αＡ２－ｅ）、および（１３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (13αA1-a) to (13αA1-e), (13αB1), (13αA2-a) to (13αA2-e), and (13αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット１３αの抗原であるタンパク質は、配列番号２４２のアミノ酸配列を有するタンパク質（protein disulfide isomerase-like protein precursor）もしくは配列番号２５４のアミノ酸配列を有するタンパク質（protein disulfide-isomerase）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 13α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 242 (protein disulfide isomerase-like protein precursor) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 254 (protein disulfide-isomerase). Or cause allergies to soybeans.
（１４α）スポット１４αの抗原
スポット１４αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
DHSDVSNQLYANYAIGK（配列番号２８１）
FQEIVNIRLGDGTTRRGQVLEVDGEK（配列番号２８２）
FTTVQFTGEVLK（配列番号２８３）
TLDQFYSRDASN（配列番号２８４）
FQEIVNIRLGDGTTRRGQVLEVDGEK（配列番号２８７）
FTTVQFTGEVLK（配列番号２８８）
TLDQFYSRDAGN（配列番号２８９）(14α) Antigen of spot 14α
As a result of sequence identification of spot 14α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
DHSDVSNQLYANYAIGK (SEQ ID NO: 281)
FQEIVNIRLGDGTTRRGQVLEVDGEK (SEQ ID NO: 282)
FTTVQFTGEVLK (SEQ ID NO: 283)
TLDQFYSRDASN (SEQ ID NO: 284)
FQEIVNIRLGDGTTRRGQVLEVDGEK (SEQ ID NO: 287)
FTTVQFTGEVLK (SEQ ID NO: 288)
TLDQFYSRDAGN (SEQ ID NO: 289)
また、スポット１４αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号２８１～２８４のいずれかを含むタンパク質としてＶ－タイプ プロトンATPaseサブユニットＢ２（V-type proton ATPase subunit B 2）（アミノ酸配列：配列番号２８０、それをコードする塩基配列：配列番号２７９）、配列番号２８７～２８９のいずれかを含むタンパク質としてＶ－タイプ プロトンATPaseサブユニットＢ２（アミノ酸配列：配列番号２８６、それをコードする塩基配列：配列番号２８５）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 14α, the V-type proton ATPase subunit B2 (V) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 281 to 284. -Type proton ATPase subunit B 2) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 280, Nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 279), V-type proton ATPase subunit B2 (amino acid amino acid) as a protein containing any of SEQ ID NOs: 287 to 289. The sequence: SEQ ID NO: 286 and the nucleotide sequence encoding the same: SEQ ID NO: 285) were identified.
したがって、本願においてスポット１４αの抗原は、以下（１４αＡ１－ａ）～（１４αＡ１－ｅ）、（１４αＢ１）、（１４αＡ２－ａ）～（１４αＡ２－ｅ）、および（１４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１４αＡ１－ａ）配列番号２８０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ１－ｂ）配列番号２８０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ１－ｃ）配列番号２７９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ１－ｄ）配列番号２７９示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ１－ｅ）配列番号２７９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＢ１）配列番号２８１～２８４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２８１～２８４のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（１４αＡ２－ａ）配列番号２８６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ２－ｂ）配列番号２８６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ２－ｃ）配列番号２８５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ２－ｄ）配列番号２８５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＡ２－ｅ）配列番号２８５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１４αＢ２）配列番号２８７～２８９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２８７～２８９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 14α is selected from the group consisting of (14αA1-a) to (14αA1-e), (14αB1), (14αA2-a) to (14αA2-e), and (14αB2) below. It may be any of the proteins.
(14αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 280.
(14αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 280 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(14αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 279.
(14αA1-d) SEQ ID NO: 279 Identity with the indicated base sequence is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(14αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 279 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(14αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 281 to 284, preferably a protein containing at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 281 to 284 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(14αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 286.
(14αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 286 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(14αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 285.
(14αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 285 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(14αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 285 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(14αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 287 to 289, preferably a protein containing at least 2 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 287 to 289 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１４αＡ１－ａ）～（１４αＡ１－ｅ）、（１４αＢ１）、（１４αＡ２－ａ）～（１４αＡ２－ｅ）、および（１４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (14αA1-a) to (14αA1-e), (14αB1), (14αA2-a) to (14αA2-e), and (14αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（１４αＡ１－ａ）～（１４αＡ１－ｅ）、（１４αＢ１）、（１４αＡ２－ａ）～（１４αＡ２－ｅ）、および（１４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点２．５～６．５、好ましくは３．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (14αA1-a) to (14αA1-e), (14αB1), (14αA2-a) to (14αA2-e), and (14αB2) is the above-mentioned "antigen identification". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and the isoelectric point is 2.5 to 6.5, preferably 3.0 to 6. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット１４αの抗原であるタンパク質は、配列番号２８０または２８６のアミノ酸配列を有するタンパク質（V-type proton ATPase subunit B 2）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 14α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 280 or 286 (V-type proton ATPase subunit B 2) or causes allergies to soybeans.
（１５α、１６α）スポット１５α、１６αの抗原
スポット１５α、１６αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AIGINVPRSRFLPVK（配列番号２９２）
ARENPENPSIELGPEFK（配列番号２９３）
ATSDLLLVQSDLYTLEDGFVIRNK（配列番号２９４）
EINGPEDL（配列番号２９５）
EYVFVANSDNLGAIVDLK（配列番号２９６）
ILNHLIQNK（配列番号２９７）
IQTPTDEVVVPYDTLAPTPEGSSEVK（配列番号２９８）
LDALLSQGK（配列番号２９９）
RLVEADALK（配列番号３００）
SAVAGLNEISENEK（配列番号３０１）
SIPSIVELDSLK（配列番号３０２）
VLQLETAAGAAIRFFDK（配列番号３０３）
VSNFLGRFK（配列番号３０４）
AIGINVPRSRFLPVK（配列番号３０７）
ATSDLLLVQSDLYTLEDGFVIRNK（配列番号３０８）
EYVFVANSDNLGAIVDLK（配列番号３０９）
ILNHLIQNK（配列番号３１０）
IQTPTDEVVVPYDTLAPTPDGSSDVK（配列番号３１１）
LDALLSQGK（配列番号３１２）
LEVPDGAVISDK（配列番号３１３）
RLVEADALK（配列番号３１４）
SAVAGLNEISESEK（配列番号３１５）
SIPSIVELDSLK（配列番号３１６）
VLQLETAAGAAIRFFDK（配列番号３１７）
VSNFLGRFK（配列番号３１８）(15α, 16α) Antigens of spots 15α, 16α
As a result of sequence identification of spots 15α and 16α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AIGINVPRSRFLPVK (SEQ ID NO: 292)
ARENPENPSIELGPEFK (SEQ ID NO: 293)
ATSDLLLVQSDLYTLEDGFVIRNK (SEQ ID NO: 294)
EINGPEDL (SEQ ID NO: 295)
EYVFVANSDNLGAIVDLK (SEQ ID NO: 296)
ILNHLIQNK (SEQ ID NO: 297)
IQTPTDEVVVPYDTLAPTPEGSSEVK (SEQ ID NO: 298)
LDALLSQGK (SEQ ID NO: 299)
RLVEADALK (SEQ ID NO: 300)
SAVAGLNEISENEK (SEQ ID NO: 301)
SIPSIVELDSLK (SEQ ID NO: 302)
VLQLETAAGAAIRFFDK (SEQ ID NO: 303)
VSNFLGRFK (SEQ ID NO: 304)
AIGINVPRSRFLPVK (SEQ ID NO: 307)
ATSDLLLVQSDLYTLEDGFVIRNK (SEQ ID NO: 308)
EYVFVANSDNLGAIVDLK (SEQ ID NO: 309)
ILNHLIQNK (SEQ ID NO: 310)
IQTPTDEVVVPYDTLAPTPDGSSDVK (SEQ ID NO: 311)
LDALLSQGK (SEQ ID NO: 312)
LEVPDGAVISDK (SEQ ID NO: 313)
RLVEADALK (SEQ ID NO: 314)
SAVAGLNEISESEK (SEQ ID NO: 315)
SIPSIVELDSLK (SEQ ID NO: 316)
VLQLETAAGAAIRFFDK (SEQ ID NO: 317)
VSNFLGRFK (SEQ ID NO: 318)
また、スポット１５α、１６αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号２９２～３０４のいずれかを含むタンパク質としてＵＴＰ－グルコース－１－ホスフェートウリジリルトランスフェラーゼ（UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase）（アミノ酸配列：配列番号２９１、それをコードする塩基配列：配列番号２９０）、配列番号３０７～３１８のいずれかを含むタンパク質としてハイポセティカルプロテインGLYMA_02G241100（hypothetical protein GLYMA_02G241100）（アミノ酸配列：配列番号３０６、それをコードする塩基配列：配列番号３０５）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spots 15α and 16α, UTP-glucose-1-phosphate uri was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 292 to 304. Hypothetical protein GLYMA_02G241100 as a protein containing any of UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase (amino acid sequence: SEQ ID NO: 291 and the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 290) and SEQ ID NOs: 307 to 318. (Hypothetical protein GLYMA_02G241100) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 306, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 305) was identified.
したがって、本願においてスポット１５α、１６αの抗原は、以下（１５，１６αＡ１－ａ）～（１５，１６αＡ１－ｅ）、（１５，１６αＢ１）、（１５，１６αＡ２－ａ）～（１５，１６αＡ２－ｅ）、および（１５，１６αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１５，１６αＡ１－ａ）配列番号２９１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＡ１－ｂ）配列番号２９１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＡ１－ｃ）配列番号２９０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＡ１－ｄ）配列番号２９０示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＡ１－ｅ）配列番号２９０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＢ１）配列番号２９２～３０４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号２９２～３０４のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（１５，１６αＡ２－ａ）配列番号３０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＡ２－ｂ）配列番号３０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５．１６αＡ２－ｃ）配列番号３０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＡ２－ｄ）配列番号３０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＡ２－ｅ）配列番号３０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１５，１６αＢ２）配列番号３０７～３１８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３０７～３１８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of spots 15α and 16α are as follows (15,16αA1-a) to (15,16αA1-e), (15,16αB1), (15,16αA2-a) to (15,16αA2-e). , And any of the proteins selected from the group consisting of (15,16αB2).
(15,16αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 291.
(15,16αA1-b) The identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 291 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(15,16αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 290.
(15,16αA1-d) SEQ ID NO: 290 Identity with the indicated base sequence is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98%. As described above, a protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(15,16αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 290 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(15,16αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 292 to 304, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, of the amino acid sequence. A protein containing 10, 11, 12, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 292 to 304 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(15,16αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 306.
(15,16αA2-b) The identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 306 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(15.16αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 305.
(15,16αA2-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 305 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(15,16αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 305 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(15,16αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 307 to 318, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, of the amino acid sequence. A protein containing 10, 11, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 307 to 318 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１５，１６αＡ１－ａ）～（１５，１６αＡ１－ｅ）、（１５，１６αＢ１）、（１５，１６αＡ２－ａ）～（１５，１６αＡ２－ｅ）、および（１５，１６αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 Select from the group consisting of (15,16αA1-a) to (15,16αA1-e), (15,16αB1), (15,16αA2-a) to (15,16αA2-e), and (15,16αB2). The resulting protein also includes a protein in which the amino acid residue of the protein is modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（１５，１６αＡ１－ａ）～（１５，１６αＡ１－ｅ）、（１５，１６αＢ１）、（１５，１６αＡ２－ａ）～（１５，１６αＡ２－ｅ）、および（１５，１６αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量３０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 Select from the group consisting of (15,16αA1-a) to (15,16αA1-e), (15,16αB1), (15,16αA2-a) to (15,16αA2-e), and (15,16αB2). The protein to be obtained has a molecular weight of 20 to 90 kDa, preferably around 30 to 80 kDa, and an isoelectric point of 3.5 in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". It may be a protein that appears as a spot of ~ 7.5, preferably 4.0-7.0.
好ましくは、スポット１５α、１６αの抗原であるタンパク質は、配列番号２９１のアミノ酸配列を有するタンパク質（UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase）もしくは配列番号３０６のアミノ酸配列を有するタンパク質（hypothetical protein GLYMA_02G241100）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spots 15α and 16α is equivalent to the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 291 (UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 306 (hypothetical protein GLYMA_02G241100). Has activity or causes allergies to soybeans.
（１７α）スポット１７αの抗原
スポット１７αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AVDGSFVFNK（配列番号３２１）
FFIYVQNYNESDPK（配列番号３２２）
VEFDEEGK（配列番号３２３）
VIDLSVDLSAASAAEE（配列番号３２４）
VVGVTSEGETAK（配列番号３２５）
AVDGSYVFNK（配列番号３２８）
FFIYVQNYNESDPK（配列番号３２９）
VEFDEEGK（配列番号３３０）
VIDLSVDLSAASAAEE（配列番号３３１）
VVGVTSEGETAK（配列番号３３２）(17α) Antigen of spot 17α
As a result of sequence identification of spot 17α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AVDGSFVFNK (SEQ ID NO: 321)
FFIYVQNYNESDPK (SEQ ID NO: 322)
VEFDEEGK (SEQ ID NO: 323)
VIDLSVDLSAASAAEE (SEQ ID NO: 324)
VVGVTSEGETAK (SEQ ID NO: 325)
AVDGSYVFNK (SEQ ID NO: 328)
FFIYVQNYNESDPK (SEQ ID NO: 329)
VEFDEEGK (SEQ ID NO: 330)
VIDLSVDLSAASAAEE (SEQ ID NO: 331)
VVGVTSEGETAK (SEQ ID NO: 332)
また、スポット１７αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号３２１～３２５のいずれかを含むタンパク質としてグアノシンヌクレオチドジホスフェートディソシエーションインヒビター２（guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2）（アミノ酸配列：配列番号３２０、それをコードする塩基配列：配列番号３１９）、配列番号３２８～３３２のいずれかを含むタンパク質としてｒａｂ ＧＤＰディソシエーションインヒビターアルファ－ライク（rab GDP dissociation inhibitor alpha-like）（アミノ酸配列：配列番号３２７、それをコードする塩基配列：配列番号３２６）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 17α, the guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2 () was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 321 to 325. guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 320, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 319), as a protein containing any of SEQ ID NOs: 328 to 332, rab GDP dissociation inhibitor alpha-like (rab) GDP dissociation inhibitor alpha-like) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 327, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 326) was identified.
したがって、本願においてスポット１７αの抗原は、以下（１７αＡ１－ａ）～（１７αＡ１－ｅ）、（１７αＢ１）、（１７αＡ２－ａ）～（１７αＡ２－ｅ）、および（１７αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１７αＡ１－ａ）配列番号３２０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ１－ｂ）配列番号３２０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ１－ｃ）配列番号３１９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ１－ｄ）配列番号３１９示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ１－ｅ）配列番号３１９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＢ１）配列番号３２１～３２５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３２１～３２５のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（１７αＡ２－ａ）配列番号３２７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ２－ｂ）配列番号３２７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ２－ｃ）配列番号３２６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ２－ｄ）配列番号３２６で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＡ２－ｅ）配列番号３２６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１７αＢ２）配列番号３２８～３３２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３２８～３３２のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 17α is selected from the group consisting of the following (17αA1-a) to (17αA1-e), (17αB1), (17αA2-a) to (17αA2-e), and (17αB2). It may be any of the proteins.
(17αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 320.
(17αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 320 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(17αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 319.
(17αA1-d) SEQ ID NO: 319 Identity with the indicated base sequence is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(17αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 319 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(17αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 321 to 325, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 321 to 325 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(17αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 327.
(17αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 327 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(17αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 326.
(17αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 326 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(17αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 326 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(17αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 328 to 332, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 328 to 332 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１７αＡ１－ａ）～（１７αＡ１－ｅ）、（１７αＢ１）、（１７αＡ２－ａ）～（１７αＡ２－ｅ）、および（１７αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (17αA1-a) to (17αA1-e), (17αB1), (17αA2-a) to (17αA2-e), and (17αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（１７αＡ１－ａ）～（１７αＡ１－ｅ）、（１７αＢ１）、（１７αＡ２－ａ）～（１７αＡ２－ｅ）、および（１７αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量３０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (17αA1-a) to (17αA1-e), (17αB1), (17αA2-a) to (17αA2-e), and (17αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 20 to 90 kDa, preferably around 30 to 80 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット１７αの抗原であるタンパク質は、配列番号３２０のアミノ酸配列を有するタンパク質（guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2）もしくは配列番号３２７のアミノ酸配列を有するタンパク質（rab GDP dissociation inhibitor alpha-like）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 17α is equivalent to the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 320 (guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 327 (rab GDP dissociation inhibitor alpha-like). Has activity or causes allergies to soybeans.
（１８α）スポット１８αの抗原
スポット１８αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
DFETRVETEGGRIRVLK（配列番号３３５）
DNIVSSLDNVAK（配列番号３３６）
GRAVLGLVSESETEK（配列番号３３７）
LFDQQNEGSIFAISREQVRALAPTK（配列番号３３８）
RPTISNGYGRLTEVGPDDDEK（配列番号３３９）(18α) Antigen of spot 18α
As a result of sequence identification of spot 18α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
DFETRVETEGGRIRVLK (SEQ ID NO: 335)
DNIVSSLDNVAK (SEQ ID NO: 336)
GRAVLGLVSESETEK (SEQ ID NO: 337)
LFDQQNEGSIFAISREQVRALAPTK (SEQ ID NO: 338)
RPTISNGYGRLTEVGPDDDEK (SEQ ID NO: 339)
また、スポット１８αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号３３５～３３９のいずれかを含むタンパク質としてハイポセティカルプロテインGLYMA_10G028300（hypothetical protein GLYMA_10G028300）（アミノ酸配列：配列番号３３４、それをコードする塩基配列：配列番号３３３）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 18α, the hypothetical protein GLYMA_10G028300 (hypothetical protein GLYMA_10G028300) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 335 to 339. (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 334, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 333).
したがって、本願においてスポット１８αの抗原は、以下（１８αＡ－ａ）～（１８αＡ－ｅ）、および（１８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１８αＡ－ａ）配列番号３３４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１８αＡ－ｂ）配列番号３３４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１８αＡ－ｃ）配列番号３３３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１８αＡ－ｄ）配列番号３３３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１８αＡ－ｅ）配列番号３３３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１８αＢ）配列番号３３５～３３９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３３５～３３９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 18α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (18αA-a) to (18αA-e) and (18αB).
(18αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 334.
(18αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 334 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(18αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 333.
(18αA-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 333 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(18αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 333 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(18αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 335 to 339, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 335 to 339 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１８αＡ－ａ）～（１８αＡ－ｅ）、および（１８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (18αA-a) to (18αA-e) and (18αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（１８αＡ－ａ）～（１８αＡ－ｅ）、および（１８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (18αA-a) to (18αA-e) and (18αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット１８αの抗原であるタンパク質は、配列番号３３４のアミノ酸配列を有するタンパク質（hypothetical protein GLYMA_10G028300）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 18α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 334 (hypothetical protein GLYMA_10G028300) or causes allergies to soybeans.
（１９α）スポット１９αの抗原
スポット１９αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AQFNIFSK（配列番号３４２）
DFSTRVETEGGSIRVLK（配列番号３４３）
DNIVSSLDNVAK（配列番号３４４）
GRAVLGLVRESETEK（配列番号３４５）
RPTFSNGYGRLTEVGPDDEK（配列番号３４６）(19α) Antigen of spot 19α
As a result of sequence identification of spot 19α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AQFNIFSK (SEQ ID NO: 342)
DFSTRVETEGGSIRVLK (SEQ ID NO: 343)
DNIVSSLDNVAK (SEQ ID NO: 344)
GRAVLGLVRESETEK (SEQ ID NO: 345)
RPTFSNGYGRLTEVGPDDEK (SEQ ID NO: 346)
また、スポット１９αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号３４２～３４６のいずれかを含むタンパク質としてスクロースバインディングプロテインホモログＳ－６４（sucrose binding protein homolog S-64）（アミノ酸配列：配列番号３４１、それをコードする塩基配列：配列番号３４０）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 19α, the scrose binding protein homolog S-64 (sucrose binding) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 342 to 346. protein homolog S-64) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 341, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 340) was identified.
したがって、本願においてスポット１９αの抗原は、以下（１９αＡ－ａ）～（１９αＡ－ｅ）、および（１９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（１９αＡ－ａ）配列番号３４１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１９αＡ－ｂ）配列番号３４１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１９αＡ－ｃ）配列番号３４０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１９αＡ－ｄ）配列番号３４０で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１９αＡ－ｅ）配列番号３４０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（１９αＢ）配列番号３４２～３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３４２～３４６のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 19α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (19αA-a) to (19αA-e) and (19αB).
(19αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 341.
(19αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 341 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(19αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 340.
(19αA-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 340 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(19αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 340 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(19αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 342 to 346, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 342 to 346 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（１９αＡ－ａ）～（１９αＡ－ｅ）、および（１９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (19αA-a) to (19αA-e) and (19αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（１９αＡ－ａ）～（１９αＡ－ｅ）、および（１９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (19αA-a) to (19αA-e) and (19αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット１９αの抗原であるタンパク質は、配列番号３４１のアミノ酸配列を有するタンパク質（sucrose binding protein homolog S-64）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 19α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 341 (sucrose binding protein homolog S-64), or causes allergies to soybeans.
（２５α）スポット２５αの抗原
スポット２５αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
DLFPNENELVVK（配列番号３４９）
EIFSLRDTTQEDPREVTAAK（配列番号３５０）
LHGGTPANFLDVGGNASENQVVEAFK（配列番号３５１）
LNFDDNAAYRQK（配列番号３５２）
SQILAGGRGLGTFK（配列番号３５３）
TDQVEDIAGK（配列番号３５４）
VPVVVRLEGTNVDQGK（配列番号３５５）
VVDGLALK（配列番号３５６）
DLFPNENELVVK（配列番号３５９）
EIFALRDTTQEDPREVTAAK（配列番号３６０）
LHGGTPANFLDVGGNASEGQVVEAFK（配列番号３６１）
LNFDDNAAYRQK（配列番号３６２）
SQILAGGRGLGTFK（配列番号３６３）
TDQVEDIAGK（配列番号３６４）
VVDGLALK（配列番号３６５）(25α) Spot 25α antigen
As a result of sequence identification of spot 25α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
DLFPNENELVVK (SEQ ID NO: 349)
EIFSLRDTTQEDPREVTAAK (SEQ ID NO: 350)
LHGGTPANFLDVGGNASENQVVEAFK (SEQ ID NO: 351)
LNFDDNAAYRQK (SEQ ID NO: 352)
SQILAGGRGLGTFK (SEQ ID NO: 353)
TDQVEDIAGK (SEQ ID NO: 354)
VPVVVRLEGTNVDQGK (SEQ ID NO: 355)
VVDGLALK (SEQ ID NO: 356)
DLFPNENELVVK (SEQ ID NO: 359)
EIFALRDTTQEDPREVTAAK (SEQ ID NO: 360)
LHGGTPANFLDVGGNASEGQVVEAFK (SEQ ID NO: 361)
LNFDDNAAYRQK (SEQ ID NO: 362)
SQILAGGRGLGTFK (SEQ ID NO: 363)
TDQVEDIAGK (SEQ ID NO: 364)
VVDGLALK (SEQ ID NO: 365)
また、スポット２５αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号３４９～３５６のいずれかを含むタンパク質としてスクシニル－ＣｏＡリガーゼ［ＡＤＰ－フォーミング］サブユニットベータ，ミトコンドリアル（succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial）（アミノ酸配列：配列番号３４８、それをコードする塩基配列：配列番号３４７）、配列番号３５９～３６５のいずれかを含むタンパク質としてスクシニル－ＣｏＡリガーゼ［ＡＤＰ－フォーミング］サブユニットベータ，ミトコンドリアル（アミノ酸配列：配列番号３５８、それをコードする塩基配列：配列番号３５７）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 25α, the succinyl-CoA ligase [ADP-forming] sub was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 349 to 356. Includes any of unit beta, mitochondrial (succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 348, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 347), SEQ ID NOs: 359-365. As a protein, succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta and mitochondrial (amino acid sequence: SEQ ID NO: 358, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 357) were identified.
したがって、本願においてスポット２５αの抗原は、以下（２５αＡ１－ａ）～（２５αＡ１－ｅ）、（２５αＢ１）、（２５αＡ２－ａ）～（２５αＡ２－ｅ）、および（２５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（２５αＡ１－ａ）配列番号３４８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ１－ｂ）配列番号３４８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ１－ｃ）配列番号３４７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ１－ｄ）配列番号３４７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ１－ｅ）配列番号３４７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＢ１）配列番号３４９～３５６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３４９～３５６のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２５αＡ２－ａ）配列番号３５８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ２－ｂ）配列番号３５８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ２－ｃ）配列番号３５７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ２－ｄ）配列番号３５７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＡ２－ｅ）配列番号３５７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２５αＢ２）配列番号３５９～３６５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３５９～３６５のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 25α is selected from the group consisting of the following (25αA1-a) to (25αA1-e), (25αB1), (25αA2-a) to (25αA2-e), and (25αB2). It may be any of the proteins.
(25αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 348.
(25αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 348 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(25αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 347.
(25αA1-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 347 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(25αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 347 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(25αB1) Contains at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 349 to 356, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, or all sequences of the amino acid sequence. protein. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 349 to 356 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(25αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 358.
(25αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 358 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(25αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 357.
(25αA2-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 357 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(25αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 357 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(25αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 359 to 365, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, 5, 6 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 359 to 365 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（２５αＡ１－ａ）～（２５αＡ１－ｅ）、（２５αＢ１）、（２５αＡ２－ａ）～（２５αＡ２－ｅ）、および（２５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (25αA1-a) to (25αA1-e), (25αB1), (25αA2-a) to (25αA2-e), and (25αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（２５αＡ１－ａ）～（２５αＡ１－ｅ）、（２５αＢ１）、（２５αＡ２－ａ）～（２５αＡ２－ｅ）、および（２５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量３０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (25αA1-a) to (25αA1-e), (25αB1), (25αA2-a) to (25αA2-e), and (25αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 20 to 90 kDa, preferably around 30 to 80 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット２５αの抗原であるタンパク質は、配列番号３４８または３５８のアミノ酸配列を有するタンパク質（succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 25α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 348 or 358 (succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial), or is allergic to soybeans. Causes.
（２６α）スポット２６αの抗原
スポット２６αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AQGYSVGSSLVEEDK（配列番号３６８）
ELDYLVGAVSNPK（配列番号３６９）
FAADANSK（配列番号３７０）
FATGTEAIAK（配列番号３７１）
GVSLLLPTDVVIADK（配列番号３７２）
GVTTIIGGGDSVAAVEK（配列番号３７３）
IGVIESLLEK（配列番号３７４）
LASLADLYVNDAFGTAHRAHASTEGVAK（配列番号３７５）
LSLATTLLEK（配列番号３７６）
LVTQLPEGGVLLLENVRFYK（配列番号３７７）
NDPEFAK（配列番号３７８）
QLPGVLALDDA（配列番号３７９）
RPFAAIVGGSK（配列番号３８０）
VILSSHLGRPK（配列番号３８１）
YLTGYGAK（配列番号３８２）
ELDYLVGAVSNPK（配列番号３８５）
ELPGVLALDEAVPVAV（配列番号３８６）
FAVGTEAIAK（配列番号３８７）
GVSLLLPSDVVIADK（配列番号３８８）
GVTTIIGGGDSVAAVEK（配列番号３８９）
IGVIESLLEK（配列番号３９０）
RPFAAIVGGSK（配列番号３９１）
VILSSHLGRPK（配列番号３９２）
AQGYSVGSSLVEEDK（配列番号３９５）
ELDYLVGAVSNPK（配列番号３９６）
FAADANSK（配列番号３９７）
FATGTEAIAK（配列番号３９８）
GVSLLLPTDVVIADK（配列番号３９９）
GVTTIIGGGDSVAAVEK（配列番号４００）
IGVIESLLEK（配列番号４０１）
LASLADLYVNDAFGTAHRAHASTEGVAK（配列番号４０２）
LSLATTLLEK（配列番号４０３）
LVAQLPEGGVLLLENVRFYK（配列番号４０４）
NDPEFAK（配列番号４０５）
QLPGVLALDDA（配列番号４０６）
RPFAAIVGGSK（配列番号４０７）
TFGEALDK（配列番号４０８）
VILSSHLGRPK（配列番号４０９）(26α) Antigen of spot 26α
As a result of sequence identification of spot 26α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AQGYSVGSSLVEEDK (SEQ ID NO: 368)
ELDYLVGAVSNPK (SEQ ID NO: 369)
FAADANSK (SEQ ID NO: 370)
FATGTEAIAK (SEQ ID NO: 371)
GVSLLLPTDVVIADK (SEQ ID NO: 372)
GVTTIIGGGDSVAAVEK (SEQ ID NO: 373)
IGVIESLLEK (SEQ ID NO: 374)
LASLADLYVNDAFGTAHRAHASTEGVAK (SEQ ID NO: 375)
LSLATTLLEK (SEQ ID NO: 376)
LVTQLPEGGVLLLENVRFYK (SEQ ID NO: 377)
NDPEFAK (SEQ ID NO: 378)
QLPGVLALDDA (SEQ ID NO: 379)
RPFAAIVGGSK (SEQ ID NO: 380)
VILSSHLGRPK (SEQ ID NO: 381)
YLTGYGAK (SEQ ID NO: 382)
ELDYLVGAVSNPK (SEQ ID NO: 385)
ELPGVLALDEAVPVAV (SEQ ID NO: 386)
FAVGTEAIAK (SEQ ID NO: 387)
GVSLLLPSDVVIADK (SEQ ID NO: 388)
GVTTIIGGGDSVAAVEK (SEQ ID NO: 389)
IGVIESLLEK (SEQ ID NO: 390)
RPFAAIVGGSK (SEQ ID NO: 391)
VILSSHLGRPK (SEQ ID NO: 392)
AQGYSVGSSLVEEDK (SEQ ID NO: 395)
ELDYLVGAVSNPK (SEQ ID NO: 396)
FAADANSK (SEQ ID NO: 397)
FATGTEAIAK (SEQ ID NO: 398)
GVSLLLPTDVVIADK (SEQ ID NO: 399)
GVTTIIGGGDSVAAVEK (SEQ ID NO: 400)
IGVIESLLEK (SEQ ID NO: 401)
LASLADLYVNDAFGTAHRAHASTEGVAK (SEQ ID NO: 402)
LSLATTLLEK (SEQ ID NO: 403)
LVAQLPEGGVLLLENVRFYK (SEQ ID NO: 404)
NDPEFAK (SEQ ID NO: 405)
QLPGVLALDDA (SEQ ID NO: 406)
RPFAAIVGGSK (SEQ ID NO: 407)
TFGEALDK (SEQ ID NO: 408)
VILSSHLGRPK (SEQ ID NO: 409)
また、スポット２６αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号３６８～３８２のいずれかを含むタンパク質としてホスホグリセレートキナーゼ、サイトゾリック（phosphoglycerate kinase, cytosolic）（アミノ酸配列：配列番号３６７、それをコードする塩基配列：配列番号３６６）、配列番号３８５～３９２のいずれかを含むタンパク質としてホスホグリセレートキナーゼ、サイトゾリック（アミノ酸配列：配列番号３８４、それをコードする塩基配列：配列番号３８３）、配列番号３９５～４０９のいずれかを含むタンパク質としてホスホグリセレートキナーゼ、サイトゾリック（アミノ酸配列：配列番号３９４、それをコードする塩基配列：配列番号３９３）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI for analysis of the spot 26α, phosphoglycerate kinase and cytozolic (phosphoglycerate) were used as proteins containing any of SEQ ID NOs: 368 to 382. kinase, cytosolic) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 367, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 366), phosphoglycerate kinase, cytozolic (amino acid sequence: SEQ ID NO:) as a protein containing any of SEQ ID NOs: 385 to 392. 384, the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 383), phosphoglycerate kinase as a protein containing any of SEQ ID NOs: 395 to 409, cytozolic (amino acid sequence: SEQ ID NO: 394, base sequence encoding it: sequence No. 393), was identified.
したがって、本願においてスポット２６αの抗原は、以下（２６αＡ１－ａ）～（２６αＡ１－ｅ）、（２６αＢ１）、（２６αＡ２－ａ）～（２６αＡ２－ｅ）、（２６αＢ２）、（２６αＡ３－ａ）～（２６αＡ３－ｅ）、および（２６αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（２６αＡ１－ａ）配列番号３６７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ１－ｂ）配列番号３６７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ１－ｃ）配列番号３６６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ１－ｄ）配列番号３６６で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ１－ｅ）配列番号３６６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＢ１）配列番号３６８～３８２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３６８～３８２のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２６αＡ２－ａ）配列番号３８４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ２－ｂ）配列番号３８４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ２－ｃ）配列番号３８３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ２－ｄ）配列番号３８３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ２－ｅ）配列番号３８３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＢ２）配列番号３８５～３９２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３８５～３９２のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２６αＡ３－ａ）配列番号３９４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ３－ｂ）配列番号３９４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ３－ｃ）配列番号３９３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ３－ｄ）配列番号３９３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＡ３－ｅ）配列番号３９３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２６αＢ３）配列番号３９５～４０９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号３９５～４０９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of the spot 26α are as follows (26αA1-a) to (26αA1-e), (26αB1), (26αA2-a) to (26αA2-e), (26αB2), (26αA3-a) to ( It may be any of the proteins selected from the group consisting of 26αA3-e) and (26αB3).
(26αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 367.
(26αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 367 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(26αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 366.
(26αA1-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 366 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(26αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 366 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(26αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 368 to 382, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, 13, 14, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 368 to 382 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(26αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 384.
(26αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 384 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(26αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 383.
(26αA2-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 383 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(26αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 383 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(26αB2) Contains at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 385 to 392, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, or all sequences of the amino acid sequence. protein. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 385 to 392 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(26αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 394.
(26αA3-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 394 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(26αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 393.
(26αA3-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 393 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(26αA3-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 393 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(26αB3) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 395 to 409, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11, 12, 13, 14, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 395 to 409 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（２６αＡ１－ａ）～（２６αＡ１－ｅ）、（２６αＢ１）、（２６αＡ２－ａ）～（２６αＡ２－ｅ）、（２６αＢ２）、（２６αＡ３－ａ）～（２６αＡ３－ｅ）、および（２６αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 From the above (26αA1-a) to (26αA1-e), (26αB1), (26αA2-a) to (26αA2-e), (26αB2), (26αA3-a) to (26αA3-e), and (26αB3). The proteins selected from the group also include proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, or the like.
上記（２６αＡ１－ａ）～（２６αＡ１－ｅ）、（２６αＢ１）、（２６αＡ２－ａ）～（２６αＡ２－ｅ）、（２６αＢ２）、（２６αＡ３－ａ）～（２６αＡ３－ｅ）、および（２６αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量３０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 From the above (26αA1-a) to (26αA1-e), (26αB1), (26αA2-a) to (26αA2-e), (26αB2), (26αA3-a) to (26αA3-e), and (26αB3). The protein selected from the above group has a molecular weight of 20 to 90 kDa, preferably around 30 to 80 kDa, and isoelectric in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". It may be a protein that appears as a spot at points 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット２５αの抗原であるタンパク質は、配列番号３６７、３８４または３９４のアミノ酸配列を有するタンパク質（phosphoglycerate kinase, cytosolic）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 25α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 367, 384 or 394 (phosphoglycerate kinase, cytosolic) or causes allergies to soybeans.
（２７α）スポット２７αの抗原
スポット２７αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
FGVNEFVNPK（配列番号４１２）
FITHTVPFSEINK（配列番号４１３）
GTFYGNYKPRTDLPSVVEK（配列番号４１４）
THPVNFLNERTLK（配列番号４１５）
VNPAAPLDK（配列番号４１６）
GTFYGHYRPRTDIPGVVEK（配列番号４１９）
INPNAPLDK（配列番号４２０）
FGVNEFVNPK（配列番号４２３）
FITHTVPFSEINK（配列番号４２４）
GTFYGNYKPRTDLPSVVEK（配列番号４２５）
INPAAPLDK（配列番号４２６）
TAPINFLNERTLK（配列番号４２７）(27α) Antigen of spot 27α
As a result of sequence identification of spot 27α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
FGVNEFVNPK (SEQ ID NO: 412)
FITHTVPFSEINK (SEQ ID NO: 413)
GTFYGNYKPRTDLPSVVEK (SEQ ID NO: 414)
THPVNFLNERTLK (SEQ ID NO: 415)
VNPAAPLDK (SEQ ID NO: 416)
GTFYGHYRPRTDIPGVVEK (SEQ ID NO: 419)
INPNAPLDK (SEQ ID NO: 420)
FGVNEFVNPK (SEQ ID NO: 423)
FITHTVPFSEINK (SEQ ID NO: 424)
GTFYGNYKPRTDLPSVVEK (SEQ ID NO: 425)
INPAAPLDK (SEQ ID NO: 426)
TAPINFLNERTLK (SEQ ID NO: 427)
また、スポット２７αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号４１２～４１６のいずれかを含むタンパク質としてアルコールデヒドロゲナーゼ１（alcohol dehydrogenase 1）（アミノ酸配列：配列番号４１１、それをコードする塩基配列：配列番号４１０）、配列番号４１９、４２０のいずれかを含むタンパク質としてアルコールデヒドロゲナーゼ１（アミノ酸配列：配列番号４１８、それをコードする塩基配列：配列番号４１７）、配列番号４２３～４２７のいずれかを含むタンパク質としてアルコールデヒドロゲナーゼ１－ライク（alcohol dehydrogenase 1-like）（アミノ酸配列：配列番号４２２、それをコードする塩基配列：配列番号４２１）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 27α, alcohol dehydrogenase 1 (amino acid) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 412 to 416. Sequence: SEQ ID NO: 411, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 410), alcohol dehydrogenase 1 as a protein containing any of SEQ ID NOs: 419 and 420 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 418, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 417), alcohol dehydrogenase 1-like (amino acid sequence: SEQ ID NO: 422, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 421) was identified as a protein containing any of SEQ ID NOs: 423 to 427. rice field.
したがって、本願においてスポット２７αの抗原は、以下（２７αＡ１－ａ）～（２７αＡ１－ｅ）、（２７αＢ１）、（２７αＡ２－ａ）～（２７αＡ２－ｅ）、（２７αＢ２）、（２７αＡ３－ａ）～（２７αＡ３－ｅ）、および（２７αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（２７αＡ１－ａ）配列番号４１１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ１－ｂ）配列番号４１１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ１－ｃ）配列番号４１０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ１－ｄ）配列番号４１０で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ１－ｅ）配列番号４１０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＢ１）配列番号４１２～４１６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４１２～４１６のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２７αＡ２－ａ）配列番号４１８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ２－ｂ）配列番号４１８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ２－ｃ）配列番号４１７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ２－ｄ）配列番号４１７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ２－ｅ）配列番号４１７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＢ２）配列番号４１９および４２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の両方を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４１９、４２０のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２７αＡ３－ａ）配列番号４２２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ３－ｂ）配列番号４２２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ３－ｃ）配列番号４２１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ３－ｄ）配列番号４２１で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＡ３－ｅ）配列番号４２１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２７αＢ３）配列番号４２３～４２７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４２３～４２７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of the spot 27α are as follows (27αA1-a) to (27αA1-e), (27αB1), (27αA2-a) to (27αA2-e), (27αB2), (27αA3-a) to ( It may be any of the proteins selected from the group consisting of 27αA3-e) and (27αB3).
(27αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 411.
(27αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 411 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(27αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 410.
(27αA1-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 410 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(27αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence represented by SEQ ID NO: 410 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(27αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 412 to 416, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 412 to 416 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(27αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 418.
(27αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 418 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(27αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 417.
(27αA2-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 417 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(27αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 417 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(27αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 419 and 420, preferably a protein comprising both of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 419 and 420 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(27αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 422.
(27αA3-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 422 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(27αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 421.
(27αA3-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 421 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(27αA3-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 421 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(27αB3) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 423 to 427, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 423 to 427 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（２７αＡ１－ａ）～（２７αＡ１－ｅ）、（２７αＢ１）、（２７αＡ２－ａ）～（２７αＡ２－ｅ）、（２７αＢ２）、（２７αＡ３－ａ）～（２７αＡ３－ｅ）、および（２７αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 From the above (27αA1-a) to (27αA1-e), (27αB1), (27αA2-a) to (27αA2-e), (27αB2), (27αA3-a) to (27αA3-e), and (27αB3). The proteins selected from the group also include proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, or the like.
上記（２７αＡ１－ａ）～（２７αＡ１－ｅ）、（２７αＢ１）、（２７αＡ２－ａ）～（２７αＡ２－ｅ）、（２７αＢ２）、（２７αＡ３－ａ）～（２７αＡ３－ｅ）、および（２７αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量３０～８０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 From the above (27αA1-a) to (27αA1-e), (27αB1), (27αA2-a) to (27αA2-e), (27αB2), (27αA3-a) to (27αA3-e), and (27αB3). The protein selected from the above group has a molecular weight of 20 to 90 kDa, preferably around 30 to 80 kDa, and isoelectric in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". It may be a protein that appears as a spot at points 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット２７αの抗原であるタンパク質は、配列番号４１１または４１８のアミノ酸配列を有するタンパク質（alcohol dehydrogenase 1）もしくは配列番号４２２のアミノ酸配列を有するタンパク質（alcohol dehydrogenase 1-like）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 27α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 411 or 418 (alcohol dehydrogenase 1) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 422 (alcohol dehydrogenase 1-like). Have or cause allergies to soybeans.
（２８α）スポット２８αの抗原
スポット２８αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AGEYTDYAAQK（配列番号４３０）
DIGDINRTNERDEGYDLHDEANFK（配列番号４３１）
DLEDANRLRDNTFNTWK（配列番号４３２）
EAVVGKPHHEEVYAK（配列番号４３３）(28α) Antigen of spot 28α
As a result of sequence identification of spot 28α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AGEYTDYAAQK (SEQ ID NO: 430)
DIGDINRTNERDEGYDLHDEANFK (SEQ ID NO: 431)
DLEDANRLRDNTFNTWK (SEQ ID NO: 432)
EAVVGKPHHEEVYAK (SEQ ID NO: 433)
また、スポット２８αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号４３０～４３３のいずれかを含むタンパク質として３５ｋＤａシードミューテーションプロテインアイソフォームＸ１（35 kDa seed maturation protein isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号４２９、それをコードする塩基配列：配列番号４２８）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 28α, 35 kDa seed mutation protein isoform X1 (35) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 430 to 433. kDa seed maturation protein isoform X1) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 429, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 428).
したがって、本願においてスポット２８αの抗原は、以下（２８αＡ－ａ）～（２８αＡ－ｅ）、および（２８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（２８αＡ－ａ）配列番号４２９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２８αＡ－ｂ）配列番号４２９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２８αＡ－ｃ）配列番号４２８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２８αＡ－ｄ）配列番号４２８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２８αＡ－ｅ）配列番号４２８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２８αＢ）配列番号４３０～４３３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４３０～４３３のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 28α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (28αA-a) to (28αA-e) and (28αB).
(28αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 429.
(28αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 429 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(28αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 428.
(28αA-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 428 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(28αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 428 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(28αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 430 to 433, preferably a protein comprising at least a few or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 430 to 433 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（２８αＡ－ａ）～（２８αＡ－ｅ）、および（２８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (28αA-a) to (28αA-e) and (28αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（２８αＡ－ａ）～（２８αＡ－ｅ）、および（２８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１０～７０ｋＤａ、好ましくは分子量２０～６０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (28αA-a) to (28αA-e) and (28αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 10 to 70 kDa, preferably around 20 to 60 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット２８αの抗原であるタンパク質は、配列番号４２２のアミノ酸配列を有するタンパク質（35 kDa seed maturation protein isoform X1）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 28α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 422 (35 kDa seed maturation protein isoform X1) or causes allergies to soybeans.
（２９α、３０α、３１α、３２α、３３α）スポット２９α～３３αの抗原
スポット２９α～３３αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
EASYDEIK（配列番号４３６）
GILGYTEDDVVSTDFIGDSRSSIFDAK（配列番号４３７）
VIISAPSK（配列番号４３８）
VLPALNGK（配列番号４３９）
EASYDEIK（配列番号４４２）
GILGYTEDDVVSTDFVGDSRSSIFDAK（配列番号４４３）
VIISAPSK（配列番号４４４）
VLPALNGK（配列番号４４５）
AGISLNDNFVK（配列番号４４８）
GILGYTEDDVVSTDFVGDNRSSIFDAK（配列番号４４９）
VLPALNGK（配列番号４５０）
VVISAPSK（配列番号４５１）(29α, 30α, 31α, 32α, 33α) Antigens of spots 29α to 33α
As a result of sequence identification of spots 29α to 33α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
EASYDEIK (SEQ ID NO: 436)
GILGYTEDDVVSTDFIGDSRSSIFDAK (SEQ ID NO: 437)
VIISAPSK (SEQ ID NO: 438)
VLPALNGK (SEQ ID NO: 439)
EASYDEIK (SEQ ID NO: 442)
GILGYTEDDVVSTDFVGDSRSSIFDAK (SEQ ID NO: 443)
VIISAPSK (SEQ ID NO: 444)
VLPALNGK (SEQ ID NO: 445)
AGISLNDNFVK (SEQ ID NO: 448)
GILGYTEDDVVSTDFVGDNRSSIFDAK (SEQ ID NO: 449)
VLPALNGK (SEQ ID NO: 450)
VVISAPSK (SEQ ID NO: 451)
また、スポット２７α～３３αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号４３６～４３９のいずれかを含むタンパク質としてグリセルアルデヒド－３－ホスフェートデヒドロゲナーゼアイソフォームＸ１（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号４３５、それをコードする塩基配列：配列番号４３４）、配列番号４４２～４４５のいずれかを含むタンパク質としてグリセルアルデヒド－３－ホスフェートデヒドロゲナーゼ，サイトゾリック（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, cytosolic）（アミノ酸配列：配列番号４４１、それをコードする塩基配列：配列番号４４０）、配列番号４４８～４５１のいずれかを含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインLOC100782924（uncharacterized protein LOC100782924）（アミノ酸配列：配列番号４４７、それをコードする塩基配列：配列番号４４６）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI for analysis of spots 27α to 33α, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 436 to 439. Glyceraldehyde-3 as a protein containing any of SEQ ID NOs: 442 to 445, isoform X1 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 435, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 434). -Anne as a protein containing any of phosphate dehydrogenase, cytozolic (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, cytosolic) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 441, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 440), SEQ ID NO: 448-451. A characterized protein LOC100782924 (uncharacterized protein LOC100782924) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 447, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 446) was identified.
したがって、本願においてスポット２９α～３３αの抗原は、以下（２９－３３αＡ１－ａ）～（２９－３３αＡ１－ｅ）、（２９－３３αＢ１）、（２９－３３αＡ２－ａ）～（２９－３３αＡ２－ｅ）、（２９－３３αＢ２）、（２９－３３αＡ３－ａ）～（２９－３３αＡ３－ｅ）、および（２９－３３αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（２９－３３αＡ１－ａ）配列番号４３５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ１－ｂ）配列番号４３５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ１－ｃ）配列番号４３４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ１－ｄ）配列番号４３４で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ１－ｅ）配列番号４３４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＢ１）配列番号４３６～４３９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４３６～４３９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２９－３３αＡ２－ａ）配列番号４４１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ２－ｂ）配列番号４４１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ２－ｃ）配列番号４４０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ２－ｄ）配列番号４４０で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ２－ｅ）配列番号４４０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＢ２）配列番号４４２～４４５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４４２～４４５のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（２９－３３αＡ３－ａ）配列番号４４７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ３－ｂ）配列番号４４７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ３－ｃ）配列番号４４６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ３－ｄ）配列番号４４６で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＡ３－ｅ）配列番号４４６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（２９－３３αＢ３）配列番号４４８～４５１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４４８～４５１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of spots 29α to 33α are as follows (29-33αA1-a) to (29-33αA1-e), (29-33αB1), (29-33αA2-a) to (29-33αA2-e). , (29-33αB2), (29-33αA3-a) to (29-33αA3-e), and (29-33αB3) may be any of the proteins selected from the group.
(29-33αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 435.
(29-33αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 435 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(29-33αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 434.
(29-33αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 434 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(29-33αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid having a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 434 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(29-33αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 436 to 439, preferably a protein containing at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 436 to 439 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(29-33αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 441.
(29-33αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 441 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(29-33αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 440.
(29-33αA2-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 440 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(29-33αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 440 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(29-33αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 442 to 445, preferably a protein comprising at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 442 to 445 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(29-33αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 447.
(29-33αA3-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 447 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(29-33αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 446.
(29-33αA3-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 446 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(29-33αA3-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 446 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(29-33αB3) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 448 to 451, preferably a protein containing at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 448 to 451 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（２９－３３αＡ１－ａ）～（２９－３３αＡ１－ｅ）、（２９－３３αＢ１）、（２９－３３αＡ２－ａ）～（２９－３３αＡ２－ｅ）、（２９－３３αＢ２）、（２９－３３αＡ３－ａ）～（２９－３３αＡ３－ｅ）、および（２９－３３αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The above (29-33αA1-a) to (29-33αA1-e), (29-33αB1), (29-33αA2-a) to (29-33αA2-e), (29-33αB2), (29-33αA3-). The protein selected from the group consisting of a) to (29-33αA3-e) and (29-33αB3) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（２９－３３αＡ１－ａ）～（２９－３３αＡ１－ｅ）、（２９－３３αＢ１）、（２９－３３αＡ２－ａ）～（２９－３３αＡ２－ｅ）、（２９－３３αＢ２）、（２９－３３αＡ３－ａ）～（２９－３３αＡ３－ｅ）、および（２９－３３αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１０～７０ｋＤａ、好ましくは分子量２０～６０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The above (29-33αA1-a) to (29-33αA1-e), (29-33αB1), (29-33αA2-a) to (29-33αA2-e), (29-33αB2), (29-33αA3-). The protein selected from the group consisting of a) to (29-33αA3-e) and (29-33αB3) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 10 to 70 kDa, preferably around 20 to 60 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット２９α～３３αの抗原であるタンパク質は、配列番号４３５のアミノ酸配列を有するタンパク質（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1）、配列番号４４１のアミノ酸配列を有するタンパク質（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, cytosolic）もしくは配列番号４４７のアミノ酸配列を有するタンパク質（uncharacterized protein LOC100782924）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spots 29α to 33α is a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 435 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1) and a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 441 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase). , Cytosolic) or a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 447 (uncharacterized protein LOC100782924), or causes allergies to soybeans.
（３４α）スポット３４αの抗原
スポット３４αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
LFLEEIARDIQK（配列番号４５４）
LFLEEIARDIQK（配列番号４５７）
TTFDAVIHFAGLK（配列番号４５８）(34α) Antigen of spot 34α
As a result of sequence identification of spot 34α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
LFLEEIARDIQK (SEQ ID NO: 454)
LFLEEIARDIQK (SEQ ID NO: 457)
TTFDAVIHFAGLK (SEQ ID NO: 458)
また、スポット３４αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号４５４を含むタンパク質としてバイファンクショナルＵＤＰ－グルコース４－エピメラーゼ アンド ＵＤＰ－キシロース４－エピメラーゼ１－ライク（bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like）（アミノ酸配列：配列番号４５３、それをコードする塩基配列：配列番号４５２）、配列番号４５７、４５８のいずれかを含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインLOC100803483（uncharacterized protein LOC100803483）（アミノ酸配列：配列番号４５６、それをコードする塩基配列：配列番号４５５）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 34α, bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4- as a protein containing SEQ ID NO: 454. Epimerase 1-like (bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 453, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 452), SEQ ID NO: 457, 458 An uncharacterized protein LOC100803483 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 456, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 455) was identified as a protein containing the protein.
したがって、本願においてスポット３４αの抗原は、以下（３４αＡ１－ａ）～（３４αＡ１－ｅ）、（３４αＢ１）、（３４αＡ２－ａ）～（３４αＡ２－ｅ）、および（３４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（３４αＡ１－ａ）配列番号４５３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ１－ｂ）配列番号４５３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ１－ｃ）配列番号４５２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ１－ｄ）配列番号４５２で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ１－ｅ）配列番号４５２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＢ１）配列番号４５４で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４６４で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（３４αＡ２－ａ）配列番号４５６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ２－ｂ）配列番号４５６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ２－ｃ）配列番号４５５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ２－ｄ）配列番号４５５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＡ２－ｅ）配列番号４５５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３４αＢ２）配列番号４５７および４５８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の両方を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４５７、４５８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 34α is selected from the group consisting of the following (34αA1-a) to (34αA1-e), (34αB1), (34αA2-a) to (34αA2-e), and (34αB2). It may be any of the proteins.
(34αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 453.
(34αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 453 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(34αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 452.
(34αA1-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 452 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(34αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 452 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(34αB1) A protein comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 454. Here, the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 464 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(34αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 456.
(34αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 456 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(34αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 455.
(34αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 455 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(34αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 455 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(34αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 457 and 458, preferably a protein comprising both of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 457 and 458 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（３４αＡ１－ａ）～（３４αＡ１－ｅ）、（３４αＢ１）、（３４αＡ２－ａ）～（３４αＡ２－ｅ）、および（３４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (34αA1-a) to (34αA1-e), (34αB1), (34αA2-a) to (34αA2-e), and (34αB2) is phosphorylated or sugar chain modified. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（３４αＡ１－ａ）～（３４αＡ１－ｅ）、（３４αＢ１）、（３４αＡ２－ａ）～（３４αＡ２－ｅ）、および（３４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１０～７０ｋＤａ、好ましくは分子量２０～６０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (34αA1-a) to (34αA1-e), (34αB1), (34αA2-a) to (34αA2-e), and (34αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 10 to 70 kDa, preferably around 20 to 60 kDa, and the isoelectric point is 5.5 to 10.5, preferably 6.0 to 10. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット３４αの抗原であるタンパク質は、配列番号４５３のアミノ酸配列を有するタンパク質（bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like）もしくは配列番号４５６のアミノ酸配列を有するタンパク質（uncharacterized protein LOC100803483）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 34α is a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 453 (bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like) or a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 456. It has the same activity as (uncharacterized protein LOC100803483) or causes allergy to soybeans.
（３５α）スポット３５αの抗原
スポット３５αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
ARYDEIVK（配列番号４６１）
DGQTREHALLAFTLGVK（配列番号４６２）
EVSSYLK（配列番号４６３）
FSEILTK（配列番号４６４）
STTTGHLIYK（配列番号４６５）
THINIVVIGHVDSGK（配列番号４６６）
DGQTREHALLAFTLGVK（配列番号４６９）
EVSSYLK（配列番号４７０）
STTTGHLIYK（配列番号４７１）
ARYDEIVK（配列番号４７４）
DGQTREHALLSFTLGVK（配列番号４７５）
EVSSYLK（配列番号４７６）
STTTGHLIYK（配列番号４７７）(35α) Antigen of spot 35α
As a result of sequence identification of spot 35α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
ARYDEIVK (SEQ ID NO: 461)
DGQTREHALLAFTLGVK (SEQ ID NO: 462)
EVSSYLK (SEQ ID NO: 463)
FSEILTK (SEQ ID NO: 464)
STTTGHLIYK (SEQ ID NO: 465)
THINIVVIGHVDSGK (SEQ ID NO: 466)
DGQTREHALLAFTLGVK (SEQ ID NO: 469)
EVSSYLK (SEQ ID NO: 470)
STTTGHLIYK (SEQ ID NO: 471)
ARYDEIVK (SEQ ID NO: 474)
DGQTREHALLSFTLGVK (SEQ ID NO: 475)
EVSSYLK (SEQ ID NO: 476)
STTTGHLIYK (SEQ ID NO: 477)
また、スポット３５αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号４６１～４６６のいずれかを含むタンパク質としてエロンゲーションファクター１－アルファ（elongation factor 1-alpha）（アミノ酸配列：配列番号４６０、それをコードする塩基配列：配列番号４５９）、配列番号４６９～４７１のいずれかを含むタンパク質としてエロンゲーションファクター１－アルファ（アミノ酸配列：配列番号４６８、それをコードする塩基配列：配列番号４６７）、配列番号４７４～４７７のいずれかを含むタンパク質としてエロンゲーションファクター－１Ａ アイソフォームＸ１（elongation factor-1A isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号４７３、それをコードする塩基配列：配列番号４７２）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 35α, the elongation factor 1-alpha (elongation factor 1) was found as a protein containing any of SEQ ID NOs: 461 to 466. -alpha) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 460, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 459), Elongation Factor 1-alpha as a protein containing any of SEQ ID NOs: 469 to 471 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 468, it. Nucleotide sequence: SEQ ID NO: 467), as a protein containing any of SEQ ID NOs: 474 to 477, elongation factor-1A isoform X1 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 473, encoding it. Nucleotide sequence: SEQ ID NO: 472), was identified.
したがって、本願においてスポット３５αの抗原は、以下（３５αＡ１－ａ）～（３５αＡ１－ｅ）、（３５αＢ１）、（３５αＡ２－ａ）～（３５αＡ２－ｅ）、（３５αＢ２）、（３５αＡ３－ａ）～（３５αＡ３－ｅ）、および（３５αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（３５αＡ１－ａ）配列番号４６０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ１－ｂ）配列番号４６０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ１－ｃ）配列番号４５９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ１－ｄ）配列番号４５９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ１－ｅ）配列番号４５９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＢ１）配列番号４６１～４６６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４１２～４１６のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（３５αＡ２－ａ）配列番号４６８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ２－ｂ）配列番号４６８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ２－ｃ）配列番号４６７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ２－ｄ）配列番号４６７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ２－ｅ）配列番号４６７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＢ２）配列番号４６９～４７１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４６９～４７１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（３５αＡ３－ａ）配列番号４７３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ３－ｂ）配列番号４７３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ３－ｃ）配列番号４７２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ３－ｄ）配列番号４７２で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＡ３－ｅ）配列番号４７２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３５αＢ３）配列番号４７４～４７７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４７４～４７７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of the spot 35α are as follows (35αA1-a) to (35αA1-e), (35αB1), (35αA2-a) to (35αA2-e), (35αB2), (35αA3-a) to ( It may be any of the proteins selected from the group consisting of 35αA3-e) and (35αB3).
(35αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 460.
(35αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 460 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(35αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 459.
(35αA1-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 459 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(35αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 459 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(35αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 461 to 466, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, 5 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 412 to 416 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(35αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 468.
(35αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 468 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(35αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 467.
(35αA2-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 467 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(35αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 467 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(35αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 469 to 471, preferably a protein containing at least 2 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 469 to 471 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(35αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 473.
(35αA3-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 473 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(35αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 472.
(35αA3-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 472 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(35αA3-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 472 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(35αB3) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 474 to 477, preferably a protein comprising at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 474 to 477 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（３５αＡ１－ａ）～（３５αＡ１－ｅ）、（３５αＢ１）、（３５αＡ２－ａ）～（３５αＡ２－ｅ）、（３５αＢ２）、（３５αＡ３－ａ）～（３５αＡ３－ｅ）、および（３５αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 From the above (35αA1-a) to (35αA1-e), (35αB1), (35αA2-a) to (35αA2-e), (35αB2), (35αA3-a) to (35αA3-e), and (35αB3). The proteins selected from the group also include proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, or the like.
上記（３５αＡ１－ａ）～（３５αＡ１－ｅ）、（３５αＢ１）、（３５αＡ２－ａ）～（３５αＡ２－ｅ）、（３５αＢ２）、（３５αＡ３－ａ）～（３５αＡ３－ｅ）、および（３５αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量３０～８０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 From the above (35αA1-a) to (35αA1-e), (35αB1), (35αA2-a) to (35αA2-e), (35αB2), (35αA3-a) to (35αA3-e), and (35αB3). The protein selected from the above group has a molecular weight of 20 to 90 kDa, preferably around 30 to 80 kDa, and isoelectric in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". It may be a protein that appears as a spot at points 5.5 to 10.5, preferably 6.0 to 10.0.
好ましくは、スポット３５αの抗原であるタンパク質は、配列番号４６０または４６８のアミノ酸配列を有するタンパク質（elongation factor 1-alpha）もしくは配列番号４７３のアミノ酸配列を有するタンパク質（elongation factor-1A isoform X1）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 35α is equivalent to the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 460 or 468 (elongation factor 1-alpha) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 473 (elongation factor-1A isoform X1). Has activity or causes allergies to soybeans.
（３６α、３７α）スポット３６α、３７αの抗原
スポット３６α、３７αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
EGSSIINTTSVNAYK（配列番号４８０）
FPPQQQQTQPGK（配列番号４８１）
GAIVAYTRGLALQLVSK（配列番号４８２）
LLDYTSTK（配列番号４８３）
EGATVAFTYVK（配列番号４８６）
QVIDLVVK（配列番号４８７）
EGSSIINTTSVNAYK（配列番号４９０）
FPPQQQQTQPGK（配列番号４９１）
GAIVAYTRGLALQLVSK（配列番号４９２）
LLDYTSTK（配列番号４９３）(36α, 37α) Antigens of spots 36α, 37α
As a result of sequence identification of spots 36α and 37α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
EGSSIINTTSVNAYK (SEQ ID NO: 480)
FPPQQQQTQPGK (SEQ ID NO: 481)
GAIVAYTRGLALQLVSK (SEQ ID NO: 482)
LLDYTSTK (SEQ ID NO: 483)
EGATVAFTYVK (SEQ ID NO: 486)
QVIDLVVK (SEQ ID NO: 487)
EGSSIINTTSVNAYK (SEQ ID NO: 490)
FPPQQQQTQPGK (SEQ ID NO: 491)
GAIVAYTRGLALQLVSK (SEQ ID NO: 492)
LLDYTSTK (SEQ ID NO: 493)
また、スポット３６α、３７αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号４８０～４８３のいずれかを含むタンパク質としてシードマチュレーションプロテインＰＭ３４（seed maturation protein PM34）（アミノ酸配列：配列番号４７９、それをコードする塩基配列：配列番号４７８）、配列番号４８６、４８７のいずれかを含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインLOC100809384（uncharacterized protein LOC100809384）（アミノ酸配列：配列番号４８５、それをコードする塩基配列：配列番号４８４）、配列番号４４９０～４９３のいずれかを含むタンパク質としてハイポセティカルプロテインGLYMA_10G155300（hypothetical protein GLYMA_10G155300）（アミノ酸配列：配列番号４８９、それをコードする塩基配列：配列番号４８８）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spots 36α and 37α, the seed maturation protein PM34 (seed maturation) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 480 to 483. protein PM34) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 479, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 478), uncharacterized protein LOC100809384 (uncharacterized protein LOC100809384) as a protein containing any of SEQ ID NOs: 486 and 487 (amino acid sequence: Hypothetical protein GLYMA_10G155300 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 489, encoding it) as a protein containing any of SEQ ID NO: 485, the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 484), and SEQ ID NOs: 4490-493. Base sequence: SEQ ID NO: 488), was identified.
したがって、本願においてスポット３６α、３７αの抗原は、以下（３６，３７αＡ１－ａ）～（３６，３７αＡ１－ｅ）、（３６，３７αＢ１）、（３６，３７αＡ２－ａ）～（３６，３７αＡ２－ｅ）、（３６，３７αＢ２）、（３６，３７αＡ３－ａ）～（３６，３７αＡ３－ｅ）、および（３６，３７αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（３６，３７αＡ１－ａ）配列番号４７９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ１－ｂ）配列番号４７９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ１－ｃ）配列番号４７８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ１－ｄ）配列番号４７８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ１－ｅ）配列番号４７８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＢ１）配列番号４８０～４８３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４８０～４８３のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（３６，３７αＡ２－ａ）配列番号４８５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ２－ｂ）配列番号４８５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ２－ｃ）配列番号４８４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ２－ｄ）配列番号４８４で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ２－ｅ）配列番号４８４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＢ２）配列番号４８６および４８７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の両方を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４８６、４８７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（３６，３７αＡ３－ａ）配列番号４８９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ３－ｂ）配列番号４８９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ３－ｃ）配列番号４８８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ３－ｄ）配列番号４８８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＡ３－ｅ）配列番号４８８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３６，３７αＢ３）配列番号４９０～４９３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４９０～４９３のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of spots 36α and 37α are as follows (36,37αA1-a) to (36,37αA1-e), (36,37αB1), (36,37αA2-a) to (36,37αA2-e). , (36,37αB2), (36,37αA3-a) to (36,37αA3-e), and (36,37αB3) may be any of the proteins selected from the group.
(36,37αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 479.
(36,37αA1-b) The identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 479 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(36,37αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 478.
(36,37αA1-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 478 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(36,37αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 478 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(36,37αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 480 to 483, preferably a protein containing at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 480 to 483 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(36,37αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 485.
(36,37αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 485 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(36,37αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 484.
(36,37αA2-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 484 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(36,37αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 484 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(36,37αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 486 and 487, preferably a protein containing both of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 486 and 487 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(36,37αA3-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 489.
(36,37αA3-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 489 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(36,37αA3-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 488.
(36,37αA3-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 488 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(36,37αA3-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 488 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(36,37αB3) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 490 to 493, preferably a protein containing at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 490 to 493 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（３６，３７αＡ１－ａ）～（３６，３７αＡ１－ｅ）、（３６，３７αＢ１）、（３６，３７αＡ２－ａ）～（３６，３７αＡ２－ｅ）、（３６，３７αＢ２）、（３６，３７αＡ３－ａ）～（３６，３７αＡ３－ｅ）、および（３６，３７αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The above (36,37αA1-a) to (36,37αA1-e), (36,37αB1), (36,37αA2-a) to (36,37αA2-e), (36,37αB2), (36,37αA3-). The protein selected from the group consisting of a) to (36,37αA3-e) and (36,37αB3) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination, etc. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（３６，３７αＡ１－ａ）～（３６，３７αＡ１－ｅ）、（３６，３７αＢ１）、（３６，３７αＡ２－ａ）～（３６，３７αＡ２－ｅ）、（３６，３７αＢ２）、（３６，３７αＡ３－ａ）～（３６，３７αＡ３－ｅ）、および（３６，３７αＢ３）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量１０～７０ｋＤａ、好ましくは分子量２０～６０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The above (36,37αA1-a) to (36,37αA1-e), (36,37αB1), (36,37αA2-a) to (36,37αA2-e), (36,37αB2), (36,37αA3-). The protein selected from the group consisting of a) to (36,37αA3-e) and (36,37αB3) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". The protein may appear as a spot having a molecular weight of 10 to 70 kDa, preferably around 20 to 60 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット３６α、３７αの抗原であるタンパク質は、配列番号４７９のアミノ酸配列を有するタンパク質（seed maturation protein PM34）、配列番号４８５のアミノ酸配列を有するタンパク質（uncharacterized protein LOC100809384）もしくは配列番号４８９のアミノ酸配列を有するタンパク質（hypothetical protein GLYMA_10G155300）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spots 36α and 37α is a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 479 (seed maturation protein PM34), a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 485 (uncharacterized protein LOC100809384), or an amino acid of SEQ ID NO: 489. It has the same activity as the protein having a sequence (hypothetical protein GLYMA_10G155300), or causes allergy to soybeans.
（３８α）スポット３８αの抗原
スポット３８αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AAGSTTAQYVGEK（配列番号４９６）
ALATGWSAAHYSTEITVEGTK（配列番号４９７）
AQVAGSTTVQYAGEK（配列番号４９８）
DTIGRVDNITTPLAK（配列番号４９９）
DTIGSVDHITTPLAEK（配列番号５００）
ERELASDRARSGNIVK（配列番号５０１）
ERYERANQATSEAAK（配列番号５０２）
GGGEEQGRRREEIGEENK（配列番号５０３）
GLAAAAAGENAK（配列番号５０４）
GRVVIESEK（配列番号５０５）
GVAEYAGQK（配列番号５０６）
LGSAAHTLVK（配列番号５０７）
QSSLEEIFK（配列番号５０８）
QSSLEEISK（配列番号５０９）
REQKPLGSIIGESFQGVQEK（配列番号５１０）
TGNETQDIGQK（配列番号５１１）
VIVAGEGEK（配列番号５１２）
VQQHQGEGGGGVLNAIGETIAEIAETTK（配列番号５１３）(38α) Antigen of spot 38α
As a result of sequence identification of spot 38α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AAGSTTAQYVGEK (SEQ ID NO: 496)
ALATGWSAAHYSTEITVEGTK (SEQ ID NO: 497)
AQVAGSTTVQYAGEK (SEQ ID NO: 498)
DTIGRVDNITTPLAK (SEQ ID NO: 499)
DTIGSVDHITTPLAEK (SEQ ID NO: 500)
ERELASDRARSGNIVK (SEQ ID NO: 501)
ERYERANQATSEAAK (SEQ ID NO: 502)
GGGEEQGRRREEIGEENK (SEQ ID NO: 503)
GLAAAAAGENAK (SEQ ID NO: 504)
GRVVIESEK (SEQ ID NO: 505)
GVAEYAGQK (SEQ ID NO: 506)
LGSAAHTLVK (SEQ ID NO: 507)
QSSLEEIFK (SEQ ID NO: 508)
QSSLEEISK (SEQ ID NO: 509)
REQKPLGSIIGESFQGVQEK (SEQ ID NO: 510)
TGNETQDIGQK (SEQ ID NO: 511)
VIVAGEGEK (SEQ ID NO: 512)
VQQHQGEGGGGVLNAIGETIAEIAETTK (SEQ ID NO: 513)
また、スポット３８αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号４９６～５１３のいずれかを含むタンパク質としてシードビオチン－コンテイニングプロテインＳＢＰ６５－ライク アイソフォームＸ１（seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号４９５、それをコードする塩基配列：配列番号４９４）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass spectrometer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 38α, the seed biotin-contining protein SBP65-like iso was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 494 to 513. Form X1 (seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 495, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 494) was identified.
したがって、本願においてスポット３８αの抗原は、以下（３８αＡ－ａ）～（３８αＡ－ｅ）、および（３８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（３８αＡ－ａ）配列番号４９５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３８αＡ－ｂ）配列番号４９５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３８αＡ－ｃ）配列番号４９４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３８αＡ－ｄ）配列番号４９４で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３８αＡ－ｅ）配列番号４９４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３８αＢ）配列番号４９６～５１３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号４９６～５１３のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 38α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (38αA-a) to (38αA-e) and (38αB).
(38αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 495.
(38αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 495 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(38αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 494.
(38αA-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 494 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(38αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 494 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(38αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 496 to 513, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein comprising 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 496 to 513 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（３８αＡ－ａ）～（３８αＡ－ｅ）、および（３８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (38αA-a) to (38αA-e) and (38αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（３８αＡ－ａ）～（３８αＡ－ｅ）、および（３８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量７０～１７０ｋＤａ、好ましくは分子量８０～１６０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (38αA-a) to (38αA-e) and (38αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 70 to 170 kDa, preferably around 80 to 160 kDa, and an isoelectric point of 5.5 to 10.5, preferably 6.0 to 10.0.
好ましくは、スポット３８αの抗原であるタンパク質は、配列番号４９５のアミノ酸配列を有するタンパク質（seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 38α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 495 (seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1), or causes allergies to soybeans.
（３９α）スポット３９αの抗原
スポット３９αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
ETLQEIIGSGAK（配列番号５１６）(39α) Antigen of spot 39α
As a result of sequence identification of spot 39α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
ETLQEIIGSGAK (SEQ ID NO: 516)
また、スポット３９αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５１６を含むタンパク質としてＡＴＰシンターゼサブユニットＯ，ミトコンドリアル－ライク（ATP synthase subunit O, mitochondrial-like）（アミノ酸配列：配列番号５１５、それをコードする塩基配列：配列番号５１４）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 39α, the ATP synthase subunit O and the mitochondrial-like (ATP synthase subunit O) were analyzed as proteins containing SEQ ID NO: 516. , Mitochondrial-like) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 515, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 514).
したがって、本願においてスポット３９αの抗原は、以下（３９αＡ－ａ）～（３９αＡ－ｅ）、および（３９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（３９αＡ－ａ）配列番号５１５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３９αＡ－ｂ）配列番号５１５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３９αＡ－ｃ）配列番号５１４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３９αＡ－ｄ）配列番号５１４で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３９αＡ－ｅ）配列番号５１４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（３９αＢ）配列番号５１６で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５１６で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 39α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (39αA-a) to (39αA-e) and (39αB).
(39αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 515.
(39αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 515 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(39αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 514.
(39αA-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 514 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(39αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 514 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(39αB) A protein comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 516. Here, the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 516 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（３９αＡ－ａ）～（３９αＡ－ｅ）、および（３９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (39αA-a) to (39αA-e) and (39αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（３９αＡ－ａ）～（３９αＡ－ｅ）、および（３９αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (39αA-a) to (39αA-e) and (39αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and an isoelectric point of 5.5 to 10.5, preferably 6.0 to 10.0.
好ましくは、スポット３９αの抗原であるタンパク質は、配列番号５１５のアミノ酸配列を有するタンパク質（ATP synthase subunit O, mitochondrial-like）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 39α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 515 (ATP synthase subunit O, mitochondrial-like), or causes allergies to soybeans.
（４０α、５６α）スポット４０α、５６αの抗原
スポット４０α、５６αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
EVGQDIQSK（配列番号５１９）
RTTVTATTATA（配列番号５２０）(40α, 56α) Antigens of spots 40α, 56α
As a result of sequence identification of spots 40α and 56α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
EVGQDIQSK (SEQ ID NO: 519)
RTTVTATTATA (SEQ ID NO: 520)
また、スポット４０α、５６αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５１９、５２０のいずれかを含むタンパク質としてＰ２４オレオシン アイソフォームＡ（P24 oleosin isoform A）（アミノ酸配列：配列番号５１８、それをコードする塩基配列：配列番号５１７）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass spectrometer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spots 40α and 56α, P24 oleosin isoform A (P24 oleosin) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 519 and 520. isoform A) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 518, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 517) was identified.
したがって、本願においてスポット４０α、５６αの抗原は、以下（４０，５６αＡ－ａ）～（４０，５６αＡ－ｅ）、および（４０，５６αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４０，５６αＡ－ａ）配列番号５１８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４０，５６αＡ－ｂ）配列番号５１８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４０，５６αＡ－ｃ）配列番号５１７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４０，５６αＡ－ｄ）配列番号５１７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４０，５６αＡ－ｅ）配列番号５１７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４０，５６αＢ）配列番号５１９および５２０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の両方を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５１９、５２０のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spots 40α and 56α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (40,56αA-a) to (40,56αA-e) and (40,56αB). ..
(40,56αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 518.
(40,56αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 518 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(40,56αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 517.
(40,56αA-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 517 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(40,56αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 517 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(40,56αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 519 and 520, preferably a protein comprising both of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 519 and 520 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４０，５６αＡ－ａ）～（４０，５６αＡ－ｅ）、および（４０，５６αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 Proteins selected from the group consisting of (40,56αA-a) to (40,56αA-e) and (40,56αB) include phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, and deamination. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified, for example.
上記（４０，５６αＡ－ａ）～（４０，５６αＡ－ｅ）、および（４０，５６αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (40,56αA-a) to (40,56αA-e) and (40,56αB) is subjected to two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item “Identification of antigen”. A protein that appears as a spot having a molecular weight of 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and an isoelectric point of 5.5 to 10.5, preferably 6.0 to 10.0. May be good.
好ましくは、スポット４０α、５６αの抗原であるタンパク質は、配列番号５１８のアミノ酸配列を有するタンパク質（P24 oleosin isoform A）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spots 40α and 56α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 518 (P24 oleosin isoform A) or causes allergy to soybean.
（４１α）スポット４１αの抗原
スポット４１αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
NAYGGSMK（配列番号５２３）(41α) Antigen of spot 41α
As a result of sequence identification of spot 41α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
NAYGGSMK (SEQ ID NO: 523)
また、スポット４１αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５２３を含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインAt3g49720－ライク アイソフォームＸ２（uncharacterized protein At3g49720-like isoform X2）（アミノ酸配列：配列番号５２２、それをコードする塩基配列：配列番号５２１）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 41α, the uncharacterized protein At3g49720-like isoform X2 (uncharacterized protein At3g49720) was analyzed as a protein containing SEQ ID NO: 523. -like isoform X2) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 522, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 521), was identified.
したがって、本願においてスポット４１αの抗原は、以下（４１αＡ－ａ）～（４１αＡ－ｅ）、および（４１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４１αＡ－ａ）配列番号５２２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４１αＡ－ｂ）配列番号５２２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４１αＡ－ｃ）配列番号５２１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４１αＡ－ｄ）配列番号５２１示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４１αＡ－ｅ）配列番号５２１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４１αＢ）配列番号５２３で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５２３で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 41α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (41αA-a) to (41αA-e) and (41αB).
(41αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 522.
(41αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 522 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(41αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 521.
(41αA-d) SEQ ID NO: 521 Identity with the indicated base sequence is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(41αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 521 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(41αB) A protein comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 523. Here, the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 523 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４１αＡ－ａ）～（４１αＡ－ｅ）、および（４１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (41αA-a) to (41αA-e) and (41αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（４１αＡ－ａ）～（４１αＡ－ｅ）、および（４１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (41αA-a) to (41αA-e) and (41αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and an isoelectric point of 5.5 to 10.5, preferably 6.0 to 10.0.
好ましくは、スポット４１αの抗原であるタンパク質は、配列番号５１５のアミノ酸配列を有するタンパク質（ATP synthase subunit O, mitochondrial-like）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 41α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 515 (ATP synthase subunit O, mitochondrial-like), or causes allergies to soybeans.
（４２α、４３α）スポット４２α、４３αの抗原
スポット４２α、４３αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
ALEQLQDAIAK（配列番号５２６）
HHQTYITNYNK（配列番号５２７）
NLAPVREGGGEPPK（配列番号５２８）
NVRPDYLK（配列番号５２９）
RLVVETTANQDPLVTK（配列番号５３０）
YASEVYEK（配列番号５３１）
ALEQLQDAVAK（配列番号５３４）
HHQTYITNFNK（配列番号５３５）
NLAPVREGGGEPPK（配列番号５３６）
NVRPDYLK（配列番号５３７）
RLVVETTANQDPLVTK（配列番号５３８）
YASEVYEK（配列番号５３９）(42α, 43α) Antigens of spots 42α, 43α
As a result of sequence identification of spots 42α and 43α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
ALEQLQDAIAK (SEQ ID NO: 526)
HHQTYITNYNK (SEQ ID NO: 527)
NLAPVREGGGEPPK (SEQ ID NO: 528)
NVRPDYLK (SEQ ID NO: 529)
RLVVETTANQDPLVTK (SEQ ID NO: 530)
YASEVYEK (SEQ ID NO: 531)
ALEQLQDAVAK (SEQ ID NO: 534)
HHQTYITNFNK (SEQ ID NO: 535)
NLAPVREGGGEPPK (SEQ ID NO: 536)
NVRPDYLK (SEQ ID NO: 537)
RLVVETTANQDPLVTK (SEQ ID NO: 538)
YASEVYEK (SEQ ID NO: 539)
また、スポット４２α、４３αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５２６～５３１のいずれかを含むタンパク質としてスーパーオキシドディスムターゼ［Ｍｎ］，ミトコンドリアル（superoxide dismutase [Mn], mitochondrial）（アミノ酸配列：配列番号５２５、それをコードする塩基配列：配列番号５２４）、配列番号５３４～５３９のいずれかを含むタンパク質としてハイポセティカルプロテインGLYMA_04G221300（hypothetical protein GLYMA_04G221300）（アミノ酸配列：配列番号５３３、それをコードする塩基配列：配列番号５３２）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spots 42α and 43α, the superoxide dismutase [Mn] and mitochondria were classified as proteins containing any of SEQ ID NOs: 526 to 531. (Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 525, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 524), hypothetical protein as a protein containing any of SEQ ID NOs: 534 to 539 (hypothetical protein) GLYMA_04G221300) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 533, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 532) was identified.
したがって、本願においてスポット４２α、４３αの抗原は、以下（４２，４３αＡ１－ａ）～（４２，４３αＡ１－ｅ）、（４２，４３αＢ１）、（４２，４３αＡ２－ａ）～（４２，４３αＡ２－ｅ）、および（４２，４３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４２，４３αＡ１－ａ）配列番号５２５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ１－ｂ）配列番号５２５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ１－ｃ）配列番号５２４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ１－ｄ）配列番号５２４で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ１－ｅ）配列番号５２４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＢ１）配列番号５２６～５３１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５２６～５３１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（４２，４３αＡ２－ａ）配列番号５３３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ２－ｂ）配列番号５３３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ２－ｃ）配列番号５３２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ２－ｄ）配列番号５３２で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＡ２－ｅ）配列番号５３２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４２，４３αＢ２）配列番号５３４～５３９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５３４～５３９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigens of spots 42α and 43α are as follows (42,43αA1-a) to (42,43αA1-e), (42,43αB1), (42,43αA2-a) to (42,43αA2-e). , And any of the proteins selected from the group consisting of (42,43αB2).
(42,43αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 525.
(42,43αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 525 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(42,43αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 524.
(42,43αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 524 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(42,43αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid having a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 524 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(42,43αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 526 to 531, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, 5, or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 526 to 531 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(42,43αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 533.
(42,43αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 533 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence of% or more and 99% or more.
(42,43αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 532.
(42,43αA2-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 532 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98. A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence of% or more and 99% or more.
(42,43αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 532 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(42,43αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 534 to 539, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, 5, or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 534 to 539 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４２，４３αＡ１－ａ）～（４２，４３αＡ１－ｅ）、（４２，４３αＢ１）、（４２，４３αＡ２－ａ）～（４２，４３αＡ２－ｅ）、および（４２，４３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 Select from the group consisting of (42,43αA1-a) to (42,43αA1-e), (42,43αB1), (42,43αA2-a) to (42,43αA2-e), and (42,43αB2). The resulting protein also includes a protein in which the amino acid residue of the protein is modified by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（４２，４３αＡ１－ａ）～（４２，４３αＡ１－ｅ）、（４２，４３αＢ１）、（４２，４３αＡ２－ａ）～（４２，４３αＡ２－ｅ）、および（４２，４３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 Select from the group consisting of (42,43αA1-a) to (42,43αA1-e), (42,43αB1), (42,43αA2-a) to (42,43αA2-e), and (42,43αB2). The protein to be obtained has a molecular weight of 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and an isoelectric point of 5.5 in a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". It may be a protein that appears as a spot of ~ 10.5, preferably 6.0 ~ 10.0.
好ましくは、スポット４２α、４３αの抗原であるタンパク質は、配列番号５２５のアミノ酸配列を有するタンパク質（superoxide dismutase [Mn], mitochondrial）もしくは配列番号５３３のアミノ酸配列を有するタンパク質（hypothetical protein GLYMA_04G221300）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spots 42α and 43α is equivalent to the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 525 (superoxide dismutase [Mn], mitochondrial) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 533 (hypothetical protein GLYMA_04G221300). It is active or causes allergies to soybeans.
（４５α）スポット４５αの抗原
スポット４５αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
HVPGFIERAEELK（配列番号５４２）
RFALLVEDLK（配列番号５４３）
VANVESGGEFTISSAEEIIK（配列番号５４４）
YTNALGLELDLTDK（配列番号５４５）
HVPGFIERAEELK（配列番号５４８）
RFALLVEDLK（配列番号５４９）
VANVESGGEFTISSAEEIIK（配列番号５５０）
YTNALGLELDLTDK（配列番号５５１）(45α) Antigen of spot 45α
As a result of sequence identification of spot 45α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
HVPGFIERAEELK (SEQ ID NO: 542)
RFALLVEDLK (SEQ ID NO: 543)
VANVESGGEFTISSAEEIIK (SEQ ID NO: 544)
YTNALGLELDLTDK (SEQ ID NO: 545)
HVPGFIERAEELK (SEQ ID NO: 548)
RFALLVEDLK (SEQ ID NO: 549)
VANVESGGEFTISSAEEIIK (SEQ ID NO: 550)
YTNALGLELDLTDK (SEQ ID NO: 551)
また、スポット４５αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５４２～５４５のいずれかを含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインLOC100499771（uncharacterized protein LOC100499771）（アミノ酸配列：配列番号５４１、それをコードする塩基配列：配列番号５４０）、配列番号５４８～５５１のいずれかを含むタンパク質としてハイポセティカルプロテインGLYMA_09G192800（hypothetical protein GLYMA_09G192800）（アミノ酸配列：配列番号５４７、それをコードする塩基配列：配列番号５４６）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the NCBI protein data for analysis of the spot 45α, the uncharacterized protein LOC100499771 (uncharacterized protein LOC100499771) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 542 to 545. (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 541, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 540), hypothetical protein GLYMA_09G192800 as a protein containing any of SEQ ID NOs: 548 to 551 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 547). , The base sequence encoding it: SEQ ID NO: 546) was identified.
したがって、本願においてスポット４５αの抗原は、以下（４５αＡ１－ａ）～（４５αＡ１－ｅ）、（４５αＢ１）、（４５αＡ２－ａ）～（４５αＡ２－ｅ）、および（４５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４５αＡ１－ａ）配列番号５４１において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ１－ｂ）配列番号５４１で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ１－ｃ）配列番号５４０において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ１－ｄ）配列番号５４０で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ１－ｅ）配列番号５４０で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＢ１）配列番号５４２～５４５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５４２～５４５のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（４５αＡ２－ａ）配列番号５４７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ２－ｂ）配列番号５４７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ２－ｃ）配列番号５４６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ２－ｄ）配列番号５４６で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＡ２－ｅ）配列番号５４６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４５αＢ２）配列番号５４８～５５１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５４８～５５１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 45α is selected from the group consisting of the following (45αA1-a) to (45αA1-e), (45αB1), (45αA2-a) to (45αA2-e), and (45αB2). It may be any of the proteins.
(45αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 541.
(45αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 541 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(45αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 540.
(45αA1-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 540 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(45αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 540 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(45αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 542 to 545, preferably a protein comprising at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 542 to 545 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(45αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 547.
(45αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 547 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(45αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 546.
(45αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 546 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(45αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 546 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(45αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 548 to 551, preferably a protein comprising at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 548 to 551 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４５αＡ１－ａ）～（４５αＡ１－ｅ）、（４５αＢ１）、（４５αＡ２－ａ）～（４５αＡ２－ｅ）、および（４５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (45αA1-a) to (45αA1-e), (45αB1), (45αA2-a) to (45αA2-e), and (45αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（４５αＡ１－ａ）～（４５αＡ１－ｅ）、（４５αＢ１）、（４５αＡ２－ａ）～（４５αＡ２－ｅ）、および（４５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２～５０ｋＤａ、好ましくは分子量５～４０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (45αA1-a) to (45αA1-e), (45αB1), (45αA2-a) to (45αA2-e), and (45αB2) is the above-mentioned "antigen identification". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 2 to 50 kDa, preferably around 5 to 40 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット４５αの抗原であるタンパク質は、配列番号５４１のアミノ酸配列を有するタンパク質（uncharacterized protein LOC100499771）もしくは配列番号５４７のアミノ酸配列を有するタンパク質（hypothetical protein GLYMA_09G192800）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 45α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 541 (uncharacterized protein LOC100499771) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 547 (hypothetical protein GLYMA_09G192800), or Causes allergies to soybeans.
（４６α）スポット４６αの抗原
スポット４６αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
DNVEYLAK（配列番号５５４）(46α) Antigen of spot 46α
As a result of sequence identification of spot 46α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
DNVEYLAK (SEQ ID NO: 554)
また、スポット４６αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５５４を含むタンパク質としてシードマチュレーションプロテインＰＭ２２（seed maturation protein PM22）（アミノ酸配列：配列番号５５３、それをコードする塩基配列：配列番号５５２）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the NCBI protein data for analysis of the spot 46α, the seed maturation protein PM22 (seed maturation protein PM22) (amino acid sequence: amino acid sequence: SEQ ID NO: 553 and the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 552) were identified.
したがって、本願においてスポット４６αの抗原は、以下（４６αＡ－ａ）～（４６αＡ－ｅ）、および（４６αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４６αＡ－ａ）配列番号５５３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４６αＡ－ｂ）配列番号５５３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４６αＡ－ｃ）配列番号５５２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４６αＡ－ｄ）配列番号５５２示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４６αＡ－ｅ）配列番号５５２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４６αＢ）配列番号５５４で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５５４で示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 46α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (46αA-a) to (46αA-e) and (46αB).
(46αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 553.
(46αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 553 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(46αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 552.
(46αA-d) SEQ ID NO: 552 The identity with the indicated base sequence is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(46αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 552 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(46αB) A protein comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 554. Here, the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 554 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４６αＡ－ａ）～（４６αＡ－ｅ）、および（４６αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (46αA-a) to (46αA-e) and (46αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（４６αＡ－ａ）～（４６αＡ－ｅ）、および（４６αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２～５０ｋＤａ、好ましくは分子量５～４０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (46αA-a) to (46αA-e) and (46αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 2 to 50 kDa, preferably around 5 to 40 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット４６αの抗原であるタンパク質は、配列番号５５３のアミノ酸配列を有するタンパク質（seed maturation protein PM22）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 46α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 553 (seed maturation protein PM22), or causes allergies to soybean.
（４７α）スポット４７αの抗原
スポット４７αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
LPTDESLLTQIK（配列番号５５７）
NGYIVIK（配列番号５５８）
NGYIVIK（配列番号５６１）
TYPQQAGTIRK（配列番号５６２）
VVEVSTSK（配列番号５６３）(47α) Antigen of spot 47α
As a result of sequence identification of spot 47α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
LPTDESLLTQIK (SEQ ID NO: 557)
NGYIVIK (SEQ ID NO: 558)
NGYIVIK (SEQ ID NO: 561)
TYPQQAGTIRK (SEQ ID NO: 562)
VVEVSTSK (SEQ ID NO: 563)
また、スポット４７αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５５７、５５８のいずれかを含むタンパク質としてユーカリオティックトランスレーションイニシエーションファクター５Ａ－２（eukaryotic translation initiation factor 5A-2）（アミノ酸配列：配列番号５５６、それをコードする塩基配列：配列番号５５５）、配列番号５６１～５６３のいずれかを含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインLOC100305510（uncharacterized protein LOC100305510）（アミノ酸配列：配列番号５６０、それをコードする塩基配列：配列番号５５９）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 47α, the eucaliotic translation initiation factor 5A-2 was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 557 and 558. (Eukaryotic translation initiation factor 5A-2) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 556, Nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 555), Uncharacterized protein as a protein containing any of SEQ ID NOs: 561 to 563 (uncharacterized protein) LOC100305510) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 560, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 559) was identified.
したがって、本願においてスポット４７αの抗原は、以下（４７αＡ１－ａ）～（４７αＡ１－ｅ）、（４７αＢ１）、（４７αＡ２－ａ）～（４７αＡ２－ｅ）、および（４７αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４７αＡ１－ａ）配列番号５５６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ１－ｂ）配列番号５５６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ１－ｃ）配列番号５５５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ１－ｄ）配列番号５５５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ１－ｅ）配列番号５５５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＢ１）配列番号５５７および５５８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の両方を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５５７、５５８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（４７αＡ２－ａ）配列番号５６０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ２－ｂ）配列番号５６０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ２－ｃ）配列番号５５９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ２－ｄ）配列番号５５９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＡ２－ｅ）配列番号５５９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４７αＢ２）配列番号５６１～５６３からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５４８～５５１のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 47α is selected from the group consisting of the following (47αA1-a) to (47αA1-e), (47αB1), (47αA2-a) to (47αA2-e), and (47αB2). It may be any of the proteins.
(47αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 556.
(47αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 556 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(47αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 555.
(47αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 555 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(47αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 555 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(47αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 557 and 558, preferably a protein comprising both of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 557 and 558 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(47αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 560.
(47αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 560 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(47αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 559.
(47αA2-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 559 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(47αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 559 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(47αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 561 to 563, preferably a protein containing at least 2 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 548 to 551 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４７αＡ１－ａ）～（４７αＡ１－ｅ）、（４７αＢ１）、（４７αＡ２－ａ）～（４７αＡ２－ｅ）、および（４７αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (47αA1-a) to (47αA1-e), (47αB1), (47αA2-a) to (47αA2-e), and (47αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（４７αＡ１－ａ）～（４７αＡ１－ｅ）、（４７αＢ１）、（４７αＡ２－ａ）～（４７αＡ２－ｅ）、および（４７αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２～５０ｋＤａ、好ましくは分子量５～４０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (47αA1-a) to (47αA1-e), (47αB1), (47αA2-a) to (47αA2-e), and (47αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 2 to 50 kDa, preferably around 5 to 40 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット４７αの抗原であるタンパク質は、配列番号５５６のアミノ酸配列を有するタンパク質（eukaryotic translation initiation factor 5A-2）もしくは配列番号５６０のアミノ酸配列を有するタンパク質（uncharacterized protein LOC100305510）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 47α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 556 (eukaryotic translation initiation factor 5A-2) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 560 (uncharacterized protein LOC100305510). Have or cause allergies to soybeans.
（４８α）スポット４８αの抗原
スポット４８αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AEFPIFDK（配列番号５６６）
DARGNNVNLADYK（配列番号５６７）
DGNVVDRYAPTTSPLSIEK（配列番号５６８）
GGLFGDSIK（配列番号５６９）
VDVNGDNAAPLYK（配列番号５７０）(48α) Spot 48α antigen
As a result of sequence identification of spot 48α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AEFPIFDK (SEQ ID NO: 566)
DARGNNVNLADYK (SEQ ID NO: 567)
DGNVVDRYAPTTSPLSIEK (SEQ ID NO: 568)
GGLFGDSIK (SEQ ID NO: 569)
VDVNGDNAAPLYK (SEQ ID NO: 570)
また、スポット４８αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５６６～５７０のいずれかを含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインLOC100306570（uncharacterized protein LOC100306570）（アミノ酸配列：配列番号５６５、それをコードする塩基配列：配列番号５６４）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the NCBI protein data for analysis of the spot 48α, the uncharacterized protein LOC100306570 (uncharacterized protein LOC100306570) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 566 to 570. ) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 565, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 564).
したがって、本願においてスポット４８αの抗原は、以下（４８αＡ－ａ）～（４８αＡ－ｅ）、および（４８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（４８αＡ－ａ）配列番号５６５において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４８αＡ－ｂ）配列番号５６５で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４８αＡ－ｃ）配列番号５６４において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４８αＡ－ｄ）配列番号５６４で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４８αＡ－ｅ）配列番号５６４で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（４８αＢ）配列番号５６６～５７０からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５６６～５７０のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 48α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (48αA-a) to (48αA-e) and (48αB).
(48αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 565.
(48αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 565 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(48αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 564.
(48αA-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 564 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(48αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 564 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(48αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 566 to 570, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 566 to 570 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（４８αＡ－ａ）～（４８αＡ－ｅ）、および（４８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (48αA-a) to (48αA-e) and (48αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（４８αＡ－ａ）～（４８αＡ－ｅ）、および（４８αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２～５０ｋＤａ、好ましくは分子量５～４０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (48αA-a) to (48αA-e) and (48αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 2 to 50 kDa, preferably around 5 to 40 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8.0.
好ましくは、スポット４８αの抗原であるタンパク質は、配列番号５６５のアミノ酸配列を有するタンパク質（uncharacterized protein LOC100306570）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 48α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 565 (uncharacterized protein LOC100306570) or causes allergies to soybeans.
（５０α）スポット５０αの抗原
スポット５０αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AADYLHNYQGDNTTAPSQPAESK（配列番号５７３）
LVAEAAQSALK（配列番号５７４）
QGIGQYVDK（配列番号５７５）
VADAAGDLLDAAGK（配列番号５７６）(50α) Antigen of spot 50α
As a result of sequence identification of spot 50α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AADYLHNYQGDNTTAPSQPAESK (SEQ ID NO: 573)
LVAEAAQSALK (SEQ ID NO: 574)
QGIGQYVDK (SEQ ID NO: 575)
VADAAGDLLDAAGK (SEQ ID NO: 576)
また、スポット５０αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５７３～５７６のいずれかを含むタンパク質としてアンキャラクタライズドプロテインLOC100813859（uncharacterized protein LOC100813859）（アミノ酸配列：配列番号５７２、それをコードする塩基配列：配列番号５７１）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the NCBI protein data for analysis of the spot 50α, the uncharacterized protein LOC100813859 (uncharacterized protein LOC100813859) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 573 to 576. ) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 572, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 571).
したがって、本願においてスポット５０αの抗原は、以下（５０αＡ－ａ）～（５０αＡ－ｅ）、および（５０αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（５０αＡ－ａ）配列番号５７２において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５０αＡ－ｂ）配列番号５７２で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５０αＡ－ｃ）配列番号５７１において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５０αＡ－ｄ）配列番号５７１で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５０αＡ－ｅ）配列番号５７１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５０αＢ）配列番号５７３～５７６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５７３～５７６のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of spot 50α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (50αA-a) to (50αA-e) and (50αB).
(50αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 572.
(50αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 572 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(50αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 571.
(50αA-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 571 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(50αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 571 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(50αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 573 to 576, preferably a protein comprising at least a few or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NOs: 573 to 576 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５０αＡ－ａ）～（５０αＡ－ｅ）、および（５０αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (50αA-a) to (50αA-e) and (50αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（５０αＡ－ａ）～（５０αＡ－ｅ）、および（５０αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量２～５０ｋＤａ、好ましくは分子量５～４０ｋＤａ付近、および等電点２．５～６．５、好ましくは３．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (50αA-a) to (50αA-e) and (50αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item “Identification of antigen”. In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 2 to 50 kDa, preferably around 5 to 40 kDa, and an isoelectric point of 2.5 to 6.5, preferably 3.0 to 6.0.
好ましくは、スポット５０αの抗原であるタンパク質は、配列番号５７２のアミノ酸配列を有するタンパク質（uncharacterized protein LOC100813859）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 50α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 572 (uncharacterized protein LOC100813859) or causes allergies to soybeans.
（５１α）スポット５１αの抗原
スポット５１αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
EAAESTLSAYK（配列番号５７９）
LLDSRLIPSASSGDSK（配列番号５８０）
QAFDEAIAELDTLGEESYK（配列番号５８１）
VSAAADNEELTVEERNLLSVAYK（配列番号５８２）(51α) Antigen of spot 51α
As a result of sequence identification of spot 51α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
EAAESTLSAYK (SEQ ID NO: 579)
LLDSRLIPSASSGDSK (SEQ ID NO: 580)
QAFDEAIAELDTLGEESYK (SEQ ID NO: 581)
VSAAADNEELTVEERNLLSVAYK (SEQ ID NO: 582)
また、スポット５１αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５７９～５８２のいずれかを含むタンパク質として１４－３－３－ライクプロテイン（14-3-3-like protein）（アミノ酸配列：配列番号５７８、それをコードする塩基配列：配列番号５７７）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 51α, 14-3-3-like protein (14) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 579 to 582. -3-3-like protein) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 578, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 577).
したがって、本願においてスポット５１αの抗原は、以下（５１αＡ－ａ）～（５１αＡ－ｅ）、および（５１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（５１αＡ－ａ）配列番号５７８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５１αＡ－ｂ）配列番号５７８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５１αＡ－ｃ）配列番号５７７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５１αＡ－ｄ）配列番号５７７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５１αＡ－ｅ）配列番号５７７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５１αＢ）配列番号５７９～５８２からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５７９～５８２のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 51α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (51αA-a) to (51αA-e) and (51αB).
(51αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 578.
(51αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 578 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(51αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 577.
(51αA-d) The identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 577 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(51αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 577 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(51αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 579 to 582, preferably a protein comprising at least 2, 3 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 579 to 582 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５１αＡ－ａ）～（５１αＡ－ｅ）、および（５１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (51αA-a) to (51αA-e) and (51αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（５１αＡ－ａ）～（５１αＡ－ｅ）、および（５１αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点２．５～６．５、好ましくは３．０～６．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (51αA-a) to (51αA-e) and (51αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and an isoelectric point of 2.5 to 6.5, preferably 3.0 to 6.0.
好ましくは、スポット５１αの抗原であるタンパク質は、配列番号５７８のアミノ酸配列を有するタンパク質（14-3-3-like protein）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 51α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 578 (14-3-3-like protein), or causes allergies to soybean.
（５２α）スポット５２αの抗原
スポット５２αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
APGGAPANVAIAVSRLGGK（配列番号５８５）
GSVDAFHVNTVDTTGAGDSFVGALLAK（配列番号５８６）
IVDDQSILEDEPRLREVLK（配列番号５８７）
VSDAELEFLTGSDK（配列番号５８８）(52α) Antigen of spot 52α
As a result of sequence identification of spot 52α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
APGGAPANVAIAVSRLGGK (SEQ ID NO: 585)
GSVDAFHVNTVDTTGAGDSFVGALLAK (SEQ ID NO: 586)
I VDDQSILEDEPRLREVLK (SEQ ID NO: 587)
VSDAELEFLTGSDK (SEQ ID NO: 588)
また、スポット５２αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５８５～５８８のいずれかを含むタンパク質としてプロバブルフルクトキナーゼ－４（probable fructokinase-4）（アミノ酸配列：配列番号５８４、それをコードする塩基配列：配列番号５８３）、が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 52α, probable fructokinase-4 (probable fructokinase) was used as a protein containing any of SEQ ID NOs: 585 to 588. -4) (Amino acid sequence: SEQ ID NO: 584, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 583).
したがって、本願においてスポット５２αの抗原は、以下（５２αＡ－ａ）～（５２αＡ－ｅ）、および（５２αＢ）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（５２αＡ－ａ）配列番号５８４において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５２αＡ－ｂ）配列番号５８４で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５２αＡ－ｃ）配列番号５８３において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５２αＡ－ｄ）配列番号５８３で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５２αＡ－ｅ）配列番号５８３で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５２αＢ）配列番号５８５～５８８からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５８５～５８８のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 52α may be any of the proteins selected from the group consisting of the following (52αA-a) to (52αA-e) and (52αB).
(52αA-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 584.
(52αA-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 584 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(52αA-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 583.
(52αA-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 583 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(52αA-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 583 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(52αB) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 585 to 588, preferably a protein comprising at least a few or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 585 to 588 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５２αＡ－ａ）～（５２αＡ－ｅ）、および（５２αＢ）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (52αA-a) to (52αA-e) and (52αB) includes amino acids of the protein by phosphorylation, sugar chain modification, aminoacylation, ring opening, deamination and the like. Also included are proteins whose residues have been modified.
上記（５２αＡ－ａ）～（５２αＡ－ｅ）、および（５２αＢ）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点３．５～７．５、好ましくは４．０～７．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (52αA-a) to (52αA-e) and (52αB) is a gel obtained by performing two-dimensional electrophoresis under the conditions described in the above item "Specification of antigen". In, the protein may appear as a spot having a molecular weight of 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and an isoelectric point of 3.5 to 7.5, preferably 4.0 to 7.0.
好ましくは、スポット５２αの抗原であるタンパク質は、配列番号５８４のアミノ酸配列を有するタンパク質（probable fructokinase-4）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 52α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 584 (probable fructokinase-4) or causes allergies to soybean.
（５３α）スポット５３αの抗原
スポット５３αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
AEFVDIINAATVK（配列番号５９１）
ELAAQPDVDGFLVGGASLK（配列番号５９２）
FFVGGNWK（配列番号５９３）
IVTTLNEAK（配列番号５９４）
VATPAQAQEVHADLRK（配列番号５９５）
VAYALQQGLK（配列番号５９６）
VPGEDVVEVVVSPPFVFLPFVK（配列番号５９７）
ELAAQPDVDGFLVGGASLKPEFVDIINAATVK（配列番号６００）
FFVGGNWK（配列番号６０１）
IVTTLNEAK（配列番号６０２）
VATPAQAQEVHADLRK（配列番号６０３）
VAYALQQGLK（配列番号６０４）(53α) Antigen of spot 53α
As a result of sequence identification of spot 53α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
AEFVDIINAATVK (SEQ ID NO: 591)
ELAAQPDVDGFLVGGASLK (SEQ ID NO: 592)
FFVGGNWK (SEQ ID NO: 593)
IVTTLNEAK (SEQ ID NO: 594)
VATPAQAQEVHADLRK (SEQ ID NO: 595)
VAYALQQGLK (SEQ ID NO: 596)
VPGEDVVEVVVSPPFVFLPFVK (SEQ ID NO: 597)
ELAAQPDVDGFLVGGASLKPEFVDIINAATVK (SEQ ID NO: 600)
FFVGGNWK (SEQ ID NO: 601)
IVTTLNEAK (SEQ ID NO: 602)
VATPAQAQEVHADLRK (SEQ ID NO: 603)
VAYALQQGLK (SEQ ID NO: 604)
また、スポット５３αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号５９１～５９７のいずれかを含むタンパク質としてトリオースホスフェートイソメラーゼ アイソフォームＸ１（triosephosphate isomerase isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号５９０、それをコードする塩基配列：配列番号５８９）、配列番号６００～６０４のいずれかを含むタンパク質としてトリオースホスフェートイソメラーゼ，サイトゾリック（triosephosphate isomerase, cytosolic）（アミノ酸配列：配列番号５９９、それをコードする塩基配列：配列番号５９８）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 53α, triosephosphate isomerase X1 (triosephosphate isomerase) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 591 to 597. isoform X1) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 590, base sequence encoding the same: SEQ ID NO: 589), triosephosphate isomerase, cytosolic (triosephosphate isomerase, cytosolic) as a protein containing any of SEQ ID NOs: 600 to 604 (triosephosphate isomerase, cytosolic) ( The amino acid sequence: SEQ ID NO: 599 and the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 598) were identified.
したがって、本願においてスポット５３αの抗原は、以下（５３αＡ１－ａ）～（５３αＡ１－ｅ）、（５３αＢ１）、（５３αＡ２－ａ）～（５３αＡ２－ｅ）、および（５３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（５３αＡ１－ａ）配列番号５９０において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ１－ｂ）配列番号５９０で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ１－ｃ）配列番号５８９において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ１－ｄ）配列番号５８９で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ１－ｅ）配列番号５８９で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＢ１）配列番号５９１～５９７からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５９１～５９７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（５３αＡ２－ａ）配列番号５９９において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ２－ｂ）配列番号５９９で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ２－ｃ）配列番号５９８において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ２－ｄ）配列番号５９８で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＡ２－ｅ）配列番号５９８で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５３αＢ２）配列番号６００～６０４からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号６００～６０４のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 53α is selected from the group consisting of the following (53αA1-a) to (53αA1-e), (53αB1), (53αA2-a) to (53αA2-e), and (53αB2). It may be any of the proteins.
(53αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 590.
(53αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 590 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(53αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 589.
(53αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 589 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(53αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 589 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(53αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 591 to 597, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, 5, 6 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 591 to 597 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(53αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 599.
(53αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 599 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(53αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 598.
(53αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 598 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(53αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 598 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(53αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 600 to 604, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 600 to 604 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５３αＡ１－ａ）～（５３αＡ１－ｅ）、（５３αＢ１）、（５３αＡ２－ａ）～（５３αＡ２－ｅ）、および（５３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of the above (53αA1-a) to (53αA1-e), (53αB1), (53αA2-a) to (53αA2-e), and (53αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（５３αＡ１－ａ）～（５３αＡ１－ｅ）、（５３αＢ１）、（５３αＡ２－ａ）～（５３αＡ２－ｅ）、および（５３αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (53αA1-a) to (53αA1-e), (53αB1), (53αA2-a) to (53αA2-e), and (53αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット５３αの抗原であるタンパク質は、配列番号５９０のアミノ酸配列を有するタンパク質（triosephosphate isomerase isoform X1）もしくは配列番号５９９のアミノ酸配列を有するタンパク質（triosephosphate isomerase, cytosolic）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 53α has the same activity as the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 590 (triosephosphate isomerase isoform X1) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 599 (triosephosphate isomerase, cytosolic). Or, it causes allergies to soybeans.
（５４α）スポット５４αの抗原
スポット５４αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
FDGENVANPPSPDEDNK（配列番号６０７）
LVSWDAVSSRLEQAK（配列番号６０８）
QVVGTELDGK（配列番号６０９）
SLEEIIVTSYNK（配列番号６１０）
TYVENLK（配列番号６１１）
QIVGTELDGK（配列番号６１４）
SLEEIIVTSYNK（配列番号６１５）
TYVENLK（配列番号６１６）(54α) Antigen of spot 54α
As a result of sequence identification of spot 54α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
FDGENVANPPSPDEDNK (SEQ ID NO: 607)
LVSWDAVSSRLEQAK (SEQ ID NO: 608)
QVVGTELDGK (SEQ ID NO: 609)
SLEEIIVTSYNK (SEQ ID NO: 610)
TYVENLK (SEQ ID NO: 611)
QIVGTELDGK (SEQ ID NO: 614)
SLEEIIVTSYNK (SEQ ID NO: 615)
TYVENLK (SEQ ID NO: 616)
また、スポット５４αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号６０７～６１１のいずれかを含むタンパク質としてスーパーオキシドディスムターゼ［Ｆｅ］，クロロプラスティック アイソフォームＸ１（superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1）（アミノ酸配列：配列番号６０６、それをコードする塩基配列：配列番号６０５）、配列番号６１４～６１６のいずれかを含むタンパク質としてアイアン－スーパーオキシドディスムターゼ（iron-superoxide dismutase）（アミノ酸配列：配列番号６１３、それをコードする塩基配列：配列番号６１２）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 54α, superoxide dismutase [Fe] and chloroplastic iso were used as proteins containing any of SEQ ID NOs: 607 to 611. Iron-superoxide dismutase as a protein containing any of Form X1 (superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 606, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 605), SEQ ID NOs: 614 to 616. (Iron-superoxide dismutase) (amino acid sequence: SEQ ID NO: 613, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 612) was identified.
したがって、本願においてスポット５４αの抗原は、以下（５４αＡ１－ａ）～（５４αＡ１－ｅ）、（５４αＢ１）、（５４αＡ２－ａ）～（５４αＡ２－ｅ）、および（５４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（５４αＡ１－ａ）配列番号６０６において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ１－ｂ）配列番号６０６で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ１－ｃ）配列番号６０５において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ１－ｄ）配列番号６０５で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ１－ｅ）配列番号６０５で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＢ１）配列番号６０７～６１１からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号５９１～５９７のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（５４αＡ２－ａ）配列番号６１３において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ２－ｂ）配列番号６１３で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ２－ｃ）配列番号６１２において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ２－ｄ）配列番号６１２で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＡ２－ｅ）配列番号６１２で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５４αＢ２）配列番号６１４～６１６からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号６１４～６１６のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 54α is selected from the group consisting of the following (54αA1-a) to (54αA1-e), (54αB1), (54αA2-a) to (54αA2-e), and (54αB2). It may be any of the proteins.
(54αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 606.
(54αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 606 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(54αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 605.
(54αA1-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 605 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(54αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 605 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(54αB1) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 607 to 611, preferably a protein comprising at least 2, 3, 4, or all the sequences of the amino acid sequence. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 591 to 597 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(54αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 613.
(54αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 613 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(54αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 612.
(54αA2-d) Identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 612 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(54αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 612 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(54αB2) A protein comprising at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 614 to 616, preferably a protein comprising at least 2 or all of the amino acid sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 614 to 616 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５４αＡ１－ａ）～（５４αＡ１－ｅ）、（５４αＢ１）、（５４αＡ２－ａ）～（５４αＡ２－ｅ）、および（５４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (54αA1-a) to (54αA1-e), (54αB1), (54αA2-a) to (54αA2-e), and (54αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（５４αＡ１－ａ）～（５４αＡ１－ｅ）、（５４αＢ１）、（５４αＡ２－ａ）～（５４αＡ２－ｅ）、および（５４αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量５～６０ｋＤａ、好ましくは分子量１０～５０ｋＤａ付近、および等電点３．５～８．５、好ましくは４．０～８．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (54αA1-a) to (54αA1-e), (54αB1), (54αA2-a) to (54αA2-e), and (54αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 5 to 60 kDa, preferably around 10 to 50 kDa, and the isoelectric point is 3.5 to 8.5, preferably 4.0 to 8. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット５４αの抗原であるタンパク質は、配列番号６０６のアミノ酸配列を有するタンパク質（superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1）もしくは配列番号６１３のアミノ酸配列を有するタンパク質（iron-superoxide dismutase）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of spot 54α is equivalent to the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 606 (superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 613 (iron-superoxide dismutase). Has activity or causes allergies to soybeans.
（５５α）スポット５５αの抗原
スポット５５αについて質量分析による配列同定を行った結果、以下のアミノ酸配列が検出された。
DYAGDAAQNVK（配列番号６１９）
DYASDAAQK（配列番号６２０）
DYASDATDAAK（配列番号６２１）
DYASDAVQK（配列番号６２２）
DYASDTAQRTK（配列番号６２３）
DYASDTAQTSK（配列番号６２４）
DYASEASDVAQNTK（配列番号６２５）
DYATDAAQK（配列番号６２６）
DYVGDAAQRSK（配列番号６２７）
EASDYASETAK（配列番号６２８）
EYAGDVALNAK（配列番号６２９）
EYVGDAAQK（配列番号６３０）
GAAEYASDAAQRTK（配列番号６３１）
GYVGDAAQK（配列番号６３２）
LQDIASEAGQYSAEK（配列番号６３３）
LSEGLGFK（配列番号６３４）
VSDYATDTAQK（配列番号６３５）
DYAGDAVQNIK（配列番号６３８）
DYASDAAQRTK（配列番号６３９）
DYASDATDAAK（配列番号６４０）
DYASDTAQRTK（配列番号６４１）
DYVGDAAQK（配列番号６４２）
EASDYASETAQK（配列番号６４３）
EASEYASDAAQRTK（配列番号６４４）
EYAGDVAQNAK（配列番号６４５）
GYVGDAAQK（配列番号６４６）
LQDIASEAGQYSTEK（配列番号６４７）
LTEGLGFK（配列番号６４８）
VSDYAGDAAQK（配列番号６４９）(55α) Antigen of spot 55α
As a result of sequence identification of spot 55α by mass spectrometry, the following amino acid sequences were detected.
DYAGDAAQNVK (SEQ ID NO: 619)
DYASDAAQK (SEQ ID NO: 620)
DYASDATDAAK (SEQ ID NO: 621)
DYASDAVQK (SEQ ID NO: 622)
DYASDTAQRTK (SEQ ID NO: 623)
DYASDTAQTSK (SEQ ID NO: 624)
DYASEASDVAQNTK (SEQ ID NO: 625)
DYATDAAQK (SEQ ID NO: 626)
DYVGDAAQRSK (SEQ ID NO: 627)
EASDYASETAK (SEQ ID NO: 628)
EYAGDVALNAK (SEQ ID NO: 629)
EYVGDAAQK (SEQ ID NO: 630)
GAAEYASDAAQRTK (SEQ ID NO: 631)
GYVGDAAQK (SEQ ID NO: 632)
LQDIASEAGQYSAEK (SEQ ID NO: 633)
LSEGLGFK (SEQ ID NO: 634)
VSDYATDTAQK (SEQ ID NO: 635)
DYAGDAVQNIK (SEQ ID NO: 638)
DYASDAAQRTK (SEQ ID NO: 639)
DYASDATDAAK (SEQ ID NO: 640)
DYASDTAQRTK (SEQ ID NO: 641)
DYVGDAAQK (SEQ ID NO: 642)
EASDYASETAQK (SEQ ID NO: 643)
EASEYASDAAQRTK (SEQ ID NO: 644)
EYAGDVAQNAK (SEQ ID NO: 645)
GYVGDAAQK (SEQ ID NO: 646)
LQDIASEAGQYSTEK (SEQ ID NO: 647)
LTEGLGFK (SEQ ID NO: 648)
VSDYAGDAAQK (SEQ ID NO: 649)
また、スポット５５αについて、質量分析装置から得られた質量データをＮＣＢＩのタンパク質データと照合して解析したところ、配列番号６１９～６３５のいずれかを含むタンパク質として５１ｋＤａシードマチュレーションプロテインプレカーサー（51 kDa seed maturation protein precursor）（アミノ酸配列：配列番号６１８、それをコードする塩基配列：配列番号６１７）、配列番号６３８～６４９のいずれかを含むタンパク質としてＬｅａプロテインプレカーサー（Lea protein precursor）（アミノ酸配列：配列番号６３７、それをコードする塩基配列：配列番号６３６）が同定された。 Further, when the mass data obtained from the mass analyzer was collated with the protein data of NCBI and analyzed for the spot 55α, 51 kDa seed mutation protein precursor (51 kDa seed) was analyzed as a protein containing any of SEQ ID NOs: 619 to 635. Lea protein precursor (Lea protein precursor) as a protein containing any of maturation protein precursor (amino acid sequence: SEQ ID NO: 618, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 617) and SEQ ID NOs: 638 to 649 (amino acid sequence: SEQ ID NO: 637, the base sequence encoding it: SEQ ID NO: 636) was identified.
したがって、本願においてスポット５５αの抗原は、以下（５５αＡ１－ａ）～（５５αＡ１－ｅ）、（５５αＢ１）、（５５αＡ２－ａ）～（５５αＡ２－ｅ）、および（５５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質のいずれかであってよい。
（５５αＡ１－ａ）配列番号６１８において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ１－ｂ）配列番号６１８で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ１－ｃ）配列番号６１７において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ１－ｄ）配列番号６１７で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ１－ｅ）配列番号６１７で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＢ１）配列番号６１９～６３５からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号６１９～６３５のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。
（５５αＡ２－ａ）配列番号６３７において１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ２－ｂ）配列番号６３７で示されるアミノ酸配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ２－ｃ）配列番号６３６において１又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ２－ｄ）配列番号６３６で示される塩基配列と同一性が７０％以上、好ましくは７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＡ２－ｅ）配列番号６３６で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質。
（５５αＢ２）配列番号６３８～６４９からなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも一つを含むタンパク質、好ましくは当該アミノ酸配列の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、またはすべての配列を含むタンパク質。ここにおいて、配列番号６３８～６４９のいずれかで示されるアミノ酸配列は、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されていてもよい。Therefore, in the present application, the antigen of the spot 55α is selected from the group consisting of the following (55αA1-a) to (55αA1-e), (55αB1), (55αA2-a) to (55αA2-e), and (55αB2). It may be any of the proteins.
(55αA1-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 618.
(55αA1-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 618 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(55αA1-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 617.
(55αA1-d) The identity with the base sequence shown in SEQ ID NO: 617 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(55αA1-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 617 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(55αB1) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 619 to 635, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein comprising 11, 12, 13, 14, 15, 16, or all sequences. Here, the amino acid sequence shown by any of SEQ ID NOs: 619 to 635 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
(55αA2-a) A protein comprising an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 637.
(55αA2-b) Identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 637 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing 99% or more of the amino acid sequence.
(55αA2-c) A protein comprising an amino acid sequence encoded by a base sequence in which one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 636.
(55αA2-d) Identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 636 is 70% or more, preferably 75% or more, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more. , A protein containing an amino acid sequence encoded by 99% or more of the base sequence.
(55αA2-e) A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a base sequence complementary to the base sequence shown in SEQ ID NO: 636 and a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions.
(55αB2) A protein containing at least one of the amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 638 to 649, preferably at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, of the amino acid sequence. A protein containing 11 or all sequences. Here, the amino acid sequence represented by any of SEQ ID NOs: 638 to 649 may be deleted, substituted, inserted or added with one or several amino acids.
上記（５５αＡ１－ａ）～（５５αＡ１－ｅ）、（５５αＢ１）、（５５αＡ２－ａ）～（５５αＡ２－ｅ）、および（５５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質には、リン酸化や糖鎖修飾、アミノアシル化、開環、脱アミノ化などにより当該タンパク質のアミノ酸残基が修飾を受けているタンパク質もまた、含まれる。 The protein selected from the group consisting of (55αA1-a) to (55αA1-e), (55αB1), (55αA2-a) to (55αA2-e), and (55αB2) includes phosphorylation and sugar chain modification. Also included are proteins in which the amino acid residues of the protein have been modified by aminoacylation, ring opening, deamination and the like.
上記（５５αＡ１－ａ）～（５５αＡ１－ｅ）、（５５αＢ１）、（５５αＡ２－ａ）～（５５αＡ２－ｅ）、および（５５αＢ２）からなる群より選択されるタンパク質は、上記「抗原の特定」の項目に記載した条件で２次元電気泳動を行った際のゲルにおいて、分子量３０～９０ｋＤａ、好ましくは分子量４０～８０ｋＤａ付近、および等電点５．５～１０．５、好ましくは６．０～１０．０のスポットとして現れるタンパク質であってもよい。 The protein selected from the group consisting of (55αA1-a) to (55αA1-e), (55αB1), (55αA2-a) to (55αA2-e), and (55αB2) is the above-mentioned "identification of antigen". In the gel when two-dimensional electrophoresis was performed under the conditions described in the item, the molecular weight is 30 to 90 kDa, preferably around 40 to 80 kDa, and the isoelectric point is 5.5 to 10.5, preferably 6.0 to 10. It may be a protein that appears as a spot of 0.0.
好ましくは、スポット５５αの抗原であるタンパク質は、配列番号６１８のアミノ酸配列を有するタンパク質（51 kDa seed maturation protein precursor）もしくは配列番号６３７のアミノ酸配列を有するタンパク質（Lea protein precursor）と同等の活性を有する、又は、大豆に対するアレルギーの原因となる。 Preferably, the protein that is the antigen of Spot 55α has activity equivalent to that of the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 618 (51 kDa seed maturation protein precursor) or the protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 637 (Lea protein precursor). Or, it causes allergies to soybeans.
本明細書において、アミノ酸配列について「１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加された」という場合は、対象となるアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸（例えば、アミノ酸配列の全長に対して３０％、好ましくは２５％、２０％、１５％、１０％、５％、３％、２％または１％のアミノ酸）が欠失しているか、他のアミノ酸に置換されているか、他のアミノ酸が挿入されているか、および／または他のアミノ酸が付加されているアミノ酸配列をいう。 In the present specification, when "one or several amino acids are deleted, substituted, inserted or added" with respect to an amino acid sequence, one or several amino acids (for example, an amino acid sequence) are used in the target amino acid sequence. 30%, preferably 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 3%, 2% or 1% amino acids) is deleted or replaced with other amino acids. Or, an amino acid sequence in which another amino acid is inserted and / or another amino acid is added.
上記のうち、置換は、好ましくは保存的置換である。保存的置換とは、特定のアミノ酸残基を類似の物理化学的特徴を有する残基で置き換えることであるが、もとの配列の構造に関する特徴を実質的に変化させなければいかなる置換であってもよく、例えば、置換アミノ酸が、もとの配列に存在するらせんを破壊したり、もとの配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊したりしなければいかなる置換であってもよい。以下に、アミノ酸残基の保存的置換について置換可能な残基ごとに分類して例示するが、置換可能なアミノ酸残基は以下に記載されているものに限定されるものではない。
Ａ群：ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン
Ｂ群：アスパラギン酸、グルタミン酸
Ｃ群：アスパラギン、グルタミン
Ｄ群：リジン、アルギニン、
Ｅ群：セリン、スレオニン
Ｆ群：フェニルアラニン、チロシンOf the above, the substitution is preferably a conservative substitution. Conservative substitution is the replacement of a particular amino acid residue with a residue having similar physicochemical characteristics, but any substitution that does not substantially alter the structural characteristics of the original sequence. It may be any substitution, for example, as long as the substituted amino acid does not disrupt the spiral present in the original sequence or the other type of secondary structure that characterizes the original sequence. The following are examples of conservative substitutions of amino acid residues classified by substitutable residues, but the substitutable amino acid residues are not limited to those described below.
Group A: leucine, isoleucine, valine, alanine, methionine Group B: aspartic acid, glutamic acid Group C: aspartic acid, glutamine Group D: lysine, arginine,
Group E: serine, threonine Group F: phenylalanine, tyrosine
非保存的置換の場合は、上記種類のうち、ある１つのメンバーと他の種類のメンバーとを交換することができる。例えば、不用意な糖鎖修飾を排除するために上記のＢ、Ｄ、Ｅ群のアミノ酸をそれ以外の群のアミノ酸に置換してもよい。または、３次構造でタンパク質中に折りたたまれることを防ぐためにシステインを欠失させるか、他のアミノ酸に置換してもよい。あるいは、親水性／疎水性のバランスが保たれるように、または合成を容易にするために親水度を上げるように、アミノ酸に関する疎水性／親水性の指標であるアミノ酸のハイドロパシー指数（J. Kyte 及びR. Doolittle, J. Mol. Biol., Vol.157, p.105-132, 1982）を考慮して、アミノ酸を置換してもよい。 In the case of non-conservative substitution, one member of the above types can be exchanged for another type of member. For example, the amino acids of the above B, D, and E groups may be replaced with amino acids of other groups in order to eliminate inadvertent sugar chain modification. Alternatively, the cysteine may be deleted or replaced with another amino acid to prevent folding into the protein in a tertiary structure. Alternatively, the Hydrophobicity Index of Amino Acids (J. Amino acids may be substituted in consideration of Kyte and R. Doolittle, J. Mol. Biol., Vol.157, p.105-132, 1982).
本明細書において、２つのアミノ酸配列の同一性％は、視覚的検査及び数学的計算によって決定することができる。また、コンピュータープログラムを用いて同一性％を決定することもできる。そのようなコンピュータープログラムとしては、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ（Altschulら、 J. Mol. Biol., 215:403-410(1990)）、及びＣｌｕｓｔａｌＷ等があげられる。特に、ＢＬＡＳＴプログラムによる同一性検索の各種条件（パラメーター）は、Altschulら(Nucl. Acids. Res., 25, p.3389-3402, 1997)に記載されたもので、米国バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）やDNA Data Bank of Japan（ＤＤＢＪ）のウェブサイトから公的に入手することができる（ＢＬＡＳＴマニュアル、Altschulら NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894；Altschulら）。また、遺伝情報処理ソフトウエアGENETYX Ver.7（ゼネティックス）、DINASIS Pro（日立ソフト）、Vector NTI（Infomax）等のプログラムを用いて決定することもできる。 As used herein, the% identity of the two amino acid sequences can be determined by visual inspection and mathematical calculation. It is also possible to determine the% identity using a computer program. Such computer programs include, for example, BLAST, FASTA (Altschul et al., J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990)), Clustal W and the like. In particular, the various conditions (parameters) for identity search by the BLAST program were described by Altschul et al. (Nucl. Acids. Res., 25, p.3389-3402, 1997) and were described by the National Center for Biotechnology Information (NCBI). ) And the DNA Data Bank of Japan (DDBJ) website (BLAST Manual, Altschul et al. NCB / NLM / NIH Bethesda, MD 20894; Altschul et al.). It can also be determined using programs such as genetic information processing software GENETYX Ver.7 (Genetics), DINASIS Pro (Hitachi software), and Vector NTI (Infomax).
本明細書において、塩基配列について「１もしくは数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加された」という場合は、対象となる塩基配列において、１個もしくは数個のヌクレオチド（例えば、塩基配列の全長に対して３０％、好ましくは２５％、２０％、１５％、１０％、５％、３％、２％または１％のアミノ酸）が欠失しているか、他のヌクレオチドに置換されているか、他のヌクレオチドが挿入されているか、および／または他のヌクレオチドが付加されている塩基配列をいう。上記ヌクレオチドの欠失、置換、挿入もしくは付加により、アミノ酸をコードする配列にフレームシフトを生じないことが好ましい。 In the present specification, when "one or several nucleotides are deleted, substituted, inserted or added" to a base sequence, one or several nucleotides (for example, a base sequence) are used in the target base sequence. 30%, preferably 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 3%, 2% or 1% amino acid) is deleted or replaced with another nucleotide based on the total length of the nucleotide. , Other nucleotides are inserted, and / or other nucleotides are added to the base sequence. It is preferable that the deletion, substitution, insertion or addition of the above nucleotide does not cause a frame shift in the sequence encoding the amino acid.
本明細書において、２つの塩基配列の同一性％は、視覚的検査及び数学的計算によって決定することができる。また、コンピュータープログラムを用いて同一性％を決定することもできる。そのような配列比較コンピュータープログラムとしては、例えば、米国国立医学ライブラリーのウェブサイト：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bls.htmlから利用できるBLASTNプログラム(Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10)：バージョン2.2.7、又はWU-BLAST2.0アルゴリズム等があげられる。WU-BLAST2.0についての標準的なデフォルトパラメーターの設定は、以下のインターネットサイト：http://blast.wustl.eduに記載されているものを用いることができる。 In the present specification, the% identity of two base sequences can be determined by visual inspection and mathematical calculation. It is also possible to determine the% identity using a computer program. Such sequence comparison computer programs include, for example, the BLASTN program (Altschul et) available from the National Library of Medicine website: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bls.html. al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10): Version 2.2.7, WU-BLAST 2.0 algorithm, etc. The standard default parameter settings for WU-BLAST 2.0 can be those listed on the following internet site: http://blast.wustl.edu.
本明細書における「ストリンジェントな条件下」とは、中程度又は高度にストリンジェントな条件においてハイブリダイズすることを意味する。具体的には、中程度にストリンジェントな条件としては、例えば、ＤＮＡの長さに基づき、一般の技術を有する当業者によって、容易に決定することが可能である。基本的な条件は、Sambrookら，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，第３版，第６－７章，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001に示されている。好ましくは、中程度にストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーション条件として、１×ＳＳＣ～６×ＳＳＣ、４２℃～５５℃の条件、より好ましくは、１×ＳＳＣ～３×ＳＳＣ、４５℃～５０℃の条件、最も好ましくは、２×ＳＳＣ、５０℃の条件があげられる。ハイブリダイゼーション溶液中に、例えば、約５０％のホルムアミドを含む場合には、上記温度よりも５ないし１５℃低い温度を採用する。洗浄条件としては、０．５×ＳＳＣ～６×ＳＳＣ、４０℃～６０℃があげられる。ハイブリダイゼーション及び洗浄時には、一般に、０．０５％～０．２％、好ましくは約０．１％ＳＤＳを加えてもよい。高度にストリンジェントな条件もまた、例えばＤＮＡの長さに基づき、当業者によって、容易に決定することが可能である。一般に、高度にストリンジェント（ハイストリンジェント）な条件としては、中程度にストリンジェントな条件よりも高い温度及び／又は低い塩濃度でのハイブリダイゼーション及び／又は洗浄を含む。例えば、ハイブリダイゼーション条件として、０．１×ＳＳＣ～２×ＳＳＣ、５５℃～６５℃の条件、より好ましくは、０．１×ＳＳＣ～１×ＳＳＣ、６０℃～６５℃の条件、最も好ましくは、０．２×ＳＳＣ、６３℃の条件があげられる。洗浄条件として、０．２×ＳＳＣ～２×ＳＳＣ、５０℃～６８℃、より好ましくは、０．２×ＳＳＣ、６０～６５℃が挙げられる。
As used herein, "stringent conditions" means hybridizing under moderate or highly stringent conditions. Specifically, the moderately stringent conditions can be easily determined by those skilled in the art, for example, based on the length of the DNA. The basic conditions are shown in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Edition, Chapters 6-7, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001. Preferably, moderately stringent conditions are 1 × SSC to 6 × SSC, 42 ° C. to 55 ° C., more preferably 1 × SSC to 3 × SSC, 45 ° C. to 50 ° C. as hybridization conditions. The conditions of, most preferably 2 × SSC, 50 ° C. are mentioned. When the hybridization solution contains, for example, about 50% formamide, a
抗原は、大豆から当業者に周知のタンパク質精製方法を組み合わせて分離・精製することによって得てもよい。または、抗原は、当業者に周知の遺伝子組換え技術により抗原を組換えタンパク質として発現させ、そして当業者に周知のタンパク質精製方法により分離・精製することによって得てもよい。 The antigen may be obtained from soybean by separating and purifying it in combination with a protein purification method well known to those skilled in the art. Alternatively, the antigen may be obtained by expressing the antigen as a recombinant protein by a gene recombination technique well known to those skilled in the art, and separating and purifying it by a protein purification method well known to those skilled in the art.
タンパク質の精製方法としては、例えば、塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、SDS-PAGEなど分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーやヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーなどの荷電を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。 Protein purification methods include, for example, methods that utilize solubility such as salting out and solvent precipitation, methods that utilize differences in molecular weight such as dialysis, ultrafiltration, gel filtration, and SDS-PAGE, ion exchange chromatography, and hydroxylation. A method using charge such as apatite chromatography, a method using specific affinity such as affinity chromatography, a method using difference in hydrophobicity such as reverse phase high-speed liquid chromatography, isoelectric focusing, etc. A method of utilizing the difference in the electric points can be mentioned.
遺伝子組換え技術によるタンパク質の調製は、抗原をコードする核酸を含む発現ベクターを調製し、当該発現ベクターを適切な宿主細胞中に遺伝子導入または形質転換により導入し、当該宿主細胞を組換えタンパク質の発現に適する条件下で培養し、そして当該宿主細胞中で発現された組換えタンパク質を回収することにより行う。 For protein preparation by gene recombination technology, an expression vector containing a nucleic acid encoding an antigen is prepared, the expression vector is introduced into an appropriate host cell by gene transfer or transformation, and the host cell is introduced into the recombinant protein. This is done by culturing under conditions suitable for expression and recovering the recombinant protein expressed in the host cell.
「ベクター」は、それに連結させた核酸を宿主細胞内に導入するために用いることが可能な核酸であり、「発現ベクター」はベクターにより導入された核酸がコードするタンパク質の発現を導くことが可能なベクターである。ベクターには、プラスミドベクター、ウイルスベクター等が含まれる。当業者は、使用する宿主細胞の種類に応じて、組換えタンパク質の発現に適切な発現ベクターを選択することができる。 A "vector" is a nucleic acid that can be used to introduce a nucleic acid linked thereto into a host cell, and an "expression vector" can induce expression of a protein encoded by the nucleic acid introduced by the vector. Vector. Vectors include plasmid vectors, viral vectors and the like. One of ordinary skill in the art can select an expression vector suitable for the expression of the recombinant protein, depending on the type of host cell used.
「宿主細胞」は、ベクターにより遺伝子導入または形質転換を受ける細胞である。宿主細胞は、使用するベクターに応じて当業者が適切に選択することができる。宿主細胞は、例えば、大腸菌（E. coli）などの原核生物由来であることが可能である。大腸菌のような原核細胞を宿主として使用する場合、本発明の抗原は、原核細胞内での組換えタンパク質の発現を容易にするためにＮ末端メチオニン残基を含むようにしてもよい。このＮ末端メチオニンは、発現後に組換えタンパク質から切り離すこともできる。あるいは、酵母などの単細胞真核生物、植物細胞、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞または昆虫細胞）などの、真核生物由来の細胞やカイコであることが可能である。 A "host cell" is a cell that undergoes gene transfer or transformation by a vector. Host cells can be appropriately selected by those skilled in the art depending on the vector used. The host cell can be derived from a prokaryote such as E. coli. When using a prokaryotic cell such as Escherichia coli as a host, the antigen of the present invention may contain an N-terminal methionine residue to facilitate expression of the recombinant protein in the prokaryotic cell. This N-terminal methionine can also be cleaved from the recombinant protein after expression. Alternatively, it is a cell or silkworm derived from a eukaryotic organism such as a single cell eukaryotic organism such as yeast, a plant cell, an animal cell (for example, a human cell, a monkey cell, a hamster cell, a rat cell, a mouse cell or an insect cell). Is possible.
発現ベクターの宿主細胞への遺伝子導入または形質転換は、当業者に公知の手法により適宜行うことができる。また、当業者は、宿主細胞の種類に応じて組換えタンパク質の発現に適する条件を適宜選択し、宿主細胞を培養することにより組換えタンパク質を発現させることができる。そして、組換えタンパク質を発現した宿主細胞をホモジナイズし、得られたホモジネートから上述したタンパク質の精製方法を適宜組み合わせて行うことにより、組換えタンパク質として発現された抗原を分離・精製することができる。 Gene transfer or transformation of the expression vector into a host cell can be appropriately carried out by a method known to those skilled in the art. Further, those skilled in the art can express the recombinant protein by appropriately selecting the conditions suitable for the expression of the recombinant protein according to the type of the host cell and culturing the host cell. Then, by homogenizing the host cell expressing the recombinant protein and appropriately combining the above-mentioned purification methods for the protein from the obtained homogenate, the antigen expressed as the recombinant protein can be separated and purified.
診断キット・診断方法
本発明は、対象の大豆アレルギーを診断するための指標を提供する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が大豆アレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。 Diagnostic Kit / Diagnostic Method The present invention is a method for providing an index for diagnosing a target soybean allergy, and the following steps:
(I) The sample obtained from the subject is brought into contact with the antigen, where the sample is a solution containing an Ig antibody;
(Ii) Detect the binding of IgE antibody to the antigen in the sample obtained from the subject;
(Iii) If binding of a subject's IgE antibody to the antigen is detected, an indicator that the subject is allergic to soybean is provided;
The above method is provided, wherein the antigen is at least one of the proteins specified as the antigens (1) to (8) and (1α) to (55α).
対象から得られた試料とは、対象から採取されたＩｇ抗体、より好ましくはＩｇＥ抗体、が含まれる溶液である。そのような溶液には、例えば、血液、唾液、痰、鼻水、尿、汗、涙が含まれる。対象から得られた試料は、抗原に接触させる前に、試料中のＩｇ抗体濃度を高めるための前処理が施されていてもよい。試料の前処理としては、例えば血液から血清を得ることが含まれてもよい。特に好ましい態様において、上記工程（ｉ）は、対象から得られた血清中のＩｇＥ抗体と抗原を接触させることにより行われる。 The sample obtained from the subject is a solution containing an Ig antibody, more preferably an IgE antibody, collected from the subject. Such solutions include, for example, blood, saliva, sputum, runny nose, urine, sweat, tears. The sample obtained from the subject may be pretreated to increase the Ig antibody concentration in the sample prior to contact with the antigen. Pretreatment of the sample may include, for example, obtaining serum from blood. In a particularly preferred embodiment, the step (i) is performed by contacting the IgE antibody in the serum obtained from the subject with the antigen.
対象から得られた試料と抗原との接触およびその結合の検出は、既知の方法により行うことが可能である。そのような方法には、例えば、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorvent Assay）、サンドイッチ免疫測定法、イムノブロット、免疫沈降法による検出を用いることができる。これらはいずれも、抗原に対象のＩｇＥ抗体を接触させて結合させ、抗原に特異的に結合したＩｇＥ抗体に対して酵素標識した二次抗体を作用させ、酵素の基質（通常は、発色あるいは発光試薬）を加えて酵素反応の生成物を検出することにより、抗原と対象のＩｇＥ抗体の結合を検出する手法である。もしくは、蛍光標識した二次抗体を検出する方法である。さらには、表面プラズモン共鳴を用いて、抗原抗体結合を屈折角として検出する方法としてもよい。 The contact between the sample obtained from the subject and the antigen and the detection of the binding thereof can be performed by a known method. For such a method, for example, detection by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorvent Assay), sandwich immunoassay, immunoblot, immunoprecipitation method can be used. In each of these, the target IgE antibody is brought into contact with the antigen and bound to the antigen, and the enzyme-labeled secondary antibody is allowed to act on the IgE antibody specifically bound to the antigen to cause the substrate of the enzyme (usually color development or luminescence). This is a method for detecting the binding between an antigen and a target IgE antibody by detecting the product of an enzymatic reaction by adding a reagent). Alternatively, it is a method for detecting a fluorescently labeled secondary antibody. Further, a method of detecting antigen-antibody binding as a refraction angle by using surface plasmon resonance may be used.
抗原は、単離された抗原が担体に固定されている状態であってもよい。この場合は上記工程（ｉ）および（ｉｉ）においてＥＬＩＳＡやサンドイッチ免疫測定法が利用でき、また、上記工程（ｉ）では、対象から得られた試料を抗原を固定した面に接触させることにより行う。単離された抗原は、大豆から当業者に周知のタンパク質精製方法を組み合わせて分離・精製することによって、または遺伝子組換え技術により調製することによって得てもよい。 The antigen may be in a state in which the isolated antigen is immobilized on a carrier. In this case, ELISA or sandwich immunoassay can be used in the above steps (i) and (ii), and in the above step (i), the sample obtained from the subject is brought into contact with the surface on which the antigen is immobilized. .. The isolated antigen may be obtained from soybean by separating and purifying it in combination with a protein purification method well known to those skilled in the art, or by preparing it by a gene recombination technique.
また、抗原は２次元電気泳動により分離した状態からイムノブロットによる検出を行ってもよい。２次元電気泳動は、１次元目に等電点電気泳動、２次元目にＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動）を行うことで、タンパク質試料を分離する手法である。この場合、２次元電気泳動の条件は、本願発明の抗原が分離できる条件であれば特に限定されない。例えば、上記「抗原の特定」の項目において記載した２次元電気泳動の条件を利用できる。あるいは、上述の特許文献１～４の記載を参考にして電気泳動の条件を定めることもでき、例えば、以下：
（Ａ）１次元目の等電点電気泳動ゲルとして、ゲル長が５～１０ｃｍの範囲内であって、ゲルのｐＨ範囲が３～１０であり、泳動方向に対するゲルのｐＨ勾配が、ｐＨ５までのゲル長をａ、ｐＨ５～７のゲル長をｂ、ｐＨ７以上のゲル長をｃとした場合において、「ａ＜ｂ］及び「ｂ＞ｃ」の関係を満たす；
（Ｂ）（Ａ）の場合であって、ゲルの全長を１とした場合、ａが０．１５～０．３の範囲内、ｂが０．４～０．７の範囲内、ｃが０．１５～０．３の範囲内である；
（Ｃ）１次元目の等電点電気泳動において、検体を含むゲル１本につき１００Ｖ～６００Ｖの範囲内の値の定電圧の印加による定電圧工程を行い、泳動３０分あたりの泳動変化幅が５μＡの範囲内となった後に前記定電圧から電圧を上昇させる電圧上昇行程を始める；
（Ｄ）（Ｃ）の場合に、電圧上昇工程の最終電圧を３０００Ｖ～６０００Ｖの範囲内とする；
（Ｅ）１次元目の等電点電気泳動ゲルの長手方向のゲル長が５～１０ｃｍであって、２次元目電気泳動ゲルの泳動方向基端部のゲル濃度を３～６％とする；および
（Ｆ）（Ｅ）の場合に、２次元目電気泳動ゲルの泳動方向先端側の部分のゲル濃度が、泳動方向基端部のゲル濃度よりも高く設定する；
からなる群より選択される少なくとも一つを満たす条件で２次元電気泳動を行うことができる。Further, the antigen may be detected by immunoblot from the state separated by two-dimensional electrophoresis. Two-dimensional electrophoresis is a method for separating protein samples by performing isoelectric focusing in the first dimension and SDS-PAGE (SDS-polyacrylamide gel electrophoresis) in the second dimension. In this case, the conditions for two-dimensional electrophoresis are not particularly limited as long as the antigens of the present invention can be separated. For example, the conditions of two-dimensional electrophoresis described in the above item "Specification of antigen" can be used. Alternatively, the conditions for electrophoresis can be determined with reference to the above description of Patent Documents 1 to 4, for example, the following:
(A) As a first-dimensional isoelectric focusing gel, the gel length is in the range of 5 to 10 cm, the pH range of the gel is 3 to 10, and the pH gradient of the gel with respect to the migration direction is up to
(B) In the case of (A), when the total length of the gel is 1, a is in the range of 0.15 to 0.3, b is in the range of 0.4 to 0.7, and c is 0. It is in the range of .15 to 0.3;
(C) In the first-dimensional isoelectric focusing, a constant voltage step is performed by applying a constant voltage with a value in the range of 100 V to 600 V per gel containing a sample, and the migration change width per 30 minutes of electrophoresis is measured. After falling within the range of 5 μA, the voltage rising process for raising the voltage from the constant voltage is started;
(D) In the case of (C), the final voltage of the voltage rising process is set in the range of 3000V to 6000V;
(E) The gel length in the longitudinal direction of the first-dimensional isoelectric point electrophoresis gel is 5 to 10 cm, and the gel concentration at the base end of the second-dimensional electrophoresis gel in the migration direction is 3 to 6%; And (F) and (E), the gel concentration of the tip side of the second-dimensional electrophoresis gel in the migration direction is set higher than the gel concentration of the base end of the migration direction;
Two-dimensional electrophoresis can be performed under conditions that satisfy at least one selected from the group consisting of.
上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原は、大豆に対するアレルギーの患者のＩｇＥ抗体と特異的に結合する抗原である。したがって、対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が大豆に対するアレルギーであることの指標が提供される。 The antigens (1) to (8) and (1α) to (55α) are antigens that specifically bind to IgE antibodies of patients allergic to soybean. Therefore, if a binding between a subject's IgE antibody and the antigen is detected, an indicator that the subject is allergic to soybean is provided.
本発明はまた、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを含む大豆に対するアレルギーの診断キットを提供する。本発明の診断キットは、上記の大豆に対するアレルギーを診断するための指標を提供する方法、または下記の診断方法に用いてもよい。本発明の診断キットは、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを含むほか、酵素標識された抗ＩｇＥ抗体および当該酵素の基質となる発色基質または発光基質を含んでいてもよい。また、蛍光標識された抗ＩｇＥ抗体を用いてもよい。本発明の診断キットにおいて、抗原は担体に固定化された状態で提供されてもよい。本発明の診断キットはまた、診断のための手順についての説明書や当該説明を含むパッケージと共に提供されてもよい。 The present invention also provides a diagnostic kit for allergies to soybean containing at least one of the above-mentioned (1) to (8) and (1α) to (55α) antigens. The diagnostic kit of the present invention may be used in the method for providing an index for diagnosing the above-mentioned allergy to soybean, or in the following diagnostic method. The diagnostic kit of the present invention contains at least one of the above-mentioned (1) to (8) and (1α) to (55α) antigens, as well as an enzyme-labeled anti-IgE antibody and a color-developing substrate that serves as a substrate for the enzyme. It may contain a luminescent substrate. In addition, a fluorescently labeled anti-IgE antibody may be used. In the diagnostic kit of the present invention, the antigen may be provided in a state of being immobilized on a carrier. The diagnostic kit of the present invention may also be provided with instructions for diagnostic procedures and a package containing such instructions.
本発明はまた、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを含む大豆に対するアレルギーの診断用組成物を提供する。本発明の診断用組成物は、下記の診断方法に用いることができる。本発明の診断用組成物は、必要に応じて本発明の抗原とともに一般的に用いられる、薬学的に許容される担体や添加剤を含んでいてもよい。 The present invention also provides a composition for diagnosing allergies to soybean containing at least one of the above-mentioned (1) to (8) and (1α) to (55α) antigens. The diagnostic composition of the present invention can be used in the following diagnostic methods. The diagnostic composition of the present invention may optionally contain a pharmaceutically acceptable carrier or additive commonly used with the antigen of the present invention.
一態様において、本発明は、対象の大豆に対するアレルギーを診断する方法であって、以下の工程：
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が大豆に対するアレルギーであると判断する；
ことを含み、ここで当該抗原は上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原として特定されるタンパク質の少なくとも一つである、前記方法を提供する。ここにおいて（ｉ）および（ｉｉ）の各工程は、大豆に対するアレルギーを診断するための指標を提供する方法の各工程について説明したとおりに行われる。In one embodiment, the present invention is a method for diagnosing an allergy to a subject soybean, and the following steps:
(I) Contact the sample obtained from the subject with the antigen;
(Ii) Detect the binding of IgE antibody to the antigen in the sample obtained from the subject;
(Iii) If the binding of the IgE antibody of the subject to the antigen is detected, it is determined that the subject is allergic to soybean;
Provided above, wherein the antigen is at least one of the proteins specified as the antigens (1) to (8) and (1α) to (55α). Here, each step (i) and (ii) is performed as described for each step of the method for providing an index for diagnosing an allergy to soybean.
別の態様において、本発明は、対象の大豆に対するアレルギーを診断する方法であって、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを対象に投与することを含む、前記方法を提供する。当該方法は、皮膚に抗原を適用することを特徴とする皮膚テストの形式で行ってもよい。皮膚テストには、皮膚上に診断用組成物を適用した後に、出血しない程度に微少な傷をつけることで皮膚に抗原を浸透させて皮膚反応を観察するプリックテスト、診断用組成物を適用した上に皮膚を少し引っ掻いて反応を観察するスクラッチテスト、クリームや軟膏などの形態の診断用組成物を皮膚に適用して反応を観察するパッチテスト、抗原を皮内に投与して反応を観察する皮内テスト、などの形態が含まれる。抗原を適用した部分の皮膚に腫れなどの皮膚反応が生じた場合、その対象は大豆に対するアレルギーを有すると診断する。ここで、皮膚に適用する抗原の量は、例えば、１回あたり１００μｇ以下の用量であってよい。 In another embodiment, the present invention is a method for diagnosing an allergy to a subject soybean, wherein at least one of the above-mentioned (1) to (8) and (1α) to (55α) antigens is administered to the subject. The above-mentioned method is provided. The method may be performed in the form of a skin test characterized by applying the antigen to the skin. For the skin test, after applying the diagnostic composition on the skin, a prick test and a diagnostic composition were applied to observe the skin reaction by infiltrating the skin with the antigen by making slight scratches to the extent that it does not bleed. Scratch test to observe the reaction by scratching the skin a little on top, patch test to observe the reaction by applying a diagnostic composition in the form of cream or ointment to the skin, administration of the antigen intradermally and observing the reaction Intradermal tests, etc. are included. If a skin reaction such as swelling occurs on the skin where the antigen is applied, the subject is diagnosed as having an allergy to soybeans. Here, the amount of the antigen applied to the skin may be, for example, a dose of 100 μg or less at one time.
また別の態様において、本発明は大豆に対するアレルギーの診断に使用するための上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを提供する。 In yet another embodiment, the present invention provides at least one of the above (1)-(8), (1α)-(55α) antigens for use in diagnosing allergies to soybeans.
さらなる別の態様において、本発明は大豆に対するアレルギーの診断薬の製造のための上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つの使用を提供する。 In yet another embodiment, the invention provides the use of at least one of the above (1)-(8), (1α)-(55α) antigens for the manufacture of a diagnostic agent for allergies to soybeans.
医薬組成物・治療方法
本発明は、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを含む医薬組成物を提供する。一態様において、上記の医薬組成物は、大豆に対するアレルギーを治療または診断するために用いられる。 Pharmaceutical Composition / Therapeutic Method The present invention provides a pharmaceutical composition containing at least one of the above-mentioned (1) to (8) and (1α) to (55α) antigens. In one aspect, the pharmaceutical composition described above is used to treat or diagnose allergies to soybeans.
本発明はまた、大豆に対するアレルギーの治療を必要とする患者に対して、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを投与することを含む、大豆に対するアレルギーを治療する方法を提供する。 The present invention also comprises administering to a patient in need of treatment for allergies to soybean, at least one of the antigens (1)-(8), (1α)-(55α) above, for soybean. Provide a method of treating allergies.
別の態様において、本発明は大豆に対するアレルギーの治療に使用するための上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つを提供する。さらに別の態様において本発明は、大豆に対するアレルギーの治療薬の製造のための上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つの使用を提供する。 In another aspect, the invention provides at least one of the above (1)-(8), (1α)-(55α) antigens for use in the treatment of allergies to soybeans. In yet another aspect, the invention provides the use of at least one of the above (1)-(8), (1α)-(55α) antigens for the manufacture of therapeutic agents for allergies to soybeans.
アレルギーの治療においては、患者に抗原を投与することで免疫寛容へと誘導することを目標とした、減感作療法がしばしば行われている。上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つは、大豆に対するアレルギーに対する減感作療法や負荷試験のための有効成分として用いることができる。ここで、減感作療法や負荷試験に用いる抗原タンパク質としては、発現精製したタンパク質であってもよく、例えば花粉米のように、米等の食品において発現させたものであってもよい。 In the treatment of allergies, desensitization therapy is often performed with the goal of inducing immune tolerance by administering antigens to patients. At least one of the above-mentioned (1) to (8) and (1α) to (55α) antigens can be used as an active ingredient for desensitization therapy for allergies to soybeans and stress tests. Here, the antigen protein used for desensitization therapy or stress test may be an expressed and purified protein, or may be expressed in a food such as rice, such as pollen rice.
本発明の医薬組成物は、通常の投与経路により投与することができる。通常の投与経路には例えば、経口、舌下、経皮、皮内、皮下、血液内、鼻腔内、筋肉内、腹腔内の投与が含まれる。 The pharmaceutical composition of the present invention can be administered by a usual route of administration. Common routes of administration include, for example, oral, sublingual, transdermal, intradermal, subcutaneous, intrablood, intranasal, intramuscular, and intraperitoneal administration.
本発明の医薬組成物は、必要に応じて本発明の抗原と共に、一般的に用いられる薬学的に許容されるアジュバント、賦形剤、または各種の添加剤（例えば安定剤、溶解補助剤、乳濁化剤、緩衝剤、保存剤、着色剤等）を常法により添加した医薬組成物として用いることができる。医薬組成物の剤型は、投与経路に応じて当業者が適宜選択することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ、舌下錠、注射剤、鼻腔内噴霧剤、パップ剤、液剤、クリーム剤、ローション剤、等の形態であってよい。本発明の医薬組成物の投与量、投与回数および／または投与期間は、投与経路、症状、年齢や体重などの患者の特性等に応じて医師が適宜選択することができる。例えば、成人の場合、１回あたり１００μｇ以下の用量で投与してもよい。投与間隔は、例えば、毎日、毎週１回、月に２回、又は３ヶ月に１回程度であってよい。投与期間は例えば、数週間から数年であってよい。投与期間内において、投与量を段階的に増加させる投与方法であってもよい。 The pharmaceutical compositions of the invention, optionally with the antigens of the invention, are commonly used pharmaceutically acceptable adjuvants, excipients, or various additives (eg, stabilizers, solubilizers, milk). It can be used as a pharmaceutical composition to which a turbidizer, a buffer, a preservative, a colorant, etc.) are added by a conventional method. The dosage form of the pharmaceutical composition can be appropriately selected by those skilled in the art according to the route of administration. For example, it may be in the form of tablets, capsules, troches, sublingual tablets, injections, intranasal sprays, poultices, liquids, creams, lotions and the like. The dose, frequency and / or administration period of the pharmaceutical composition of the present invention can be appropriately selected by a doctor according to the characteristics of the patient such as the route of administration, symptoms, age and body weight. For example, in the case of an adult, it may be administered at a dose of 100 μg or less at a time. The administration interval may be, for example, daily, once a week, twice a month, or once every three months. The dosing period may be, for example, weeks to years. An administration method may be used in which the dose is gradually increased within the administration period.
テスター
本発明は、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つに対する抗体を含むテスターをを提供する。 Tester The present invention provides a tester containing an antibody against at least one of the above-mentioned (1) to (8) and (1α) to (55α) antigens.
当該抗体は、常法により作製することができる。例えば、ウサギなどの哺乳動物を上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原で免疫することにより作製してもよい。当該抗体は、Ｉｇ抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’）であってもよい。The antibody can be produced by a conventional method. For example, it may be produced by immunizing a mammal such as a rabbit with the antigens (1) to (8) and (1α) to (55α) described above. The antibody may be an Ig antibody, a polyclonal antibody, a monoclonal antibody, or an antigen-binding fragment thereof (for example, Fab, F (ab') 2 , Fab').
また、上記のテスターにおいて、当該抗体は担体に結合した形で提供されていてもよい。担体は、抗体と抗原の結合の検出に利用可能な担体であれば特に限定されない。当業者に公知の任意の担体が利用できる。 Further, in the above tester, the antibody may be provided in a form bound to a carrier. The carrier is not particularly limited as long as it is a carrier that can be used for detecting the binding between the antibody and the antigen. Any carrier known to those of skill in the art can be used.
一態様において、上記のテスターは、食品中または食品製造ライン中などの対象物中の抗原含有の有無を調べるために用いられる。上記テスターは、製造業者による製造ラインおよび出荷前製品の品質検査用として用いてもよく、喫食者自身による対象食品の抗原含有の有無のチェック用として用いてもよい。 In one embodiment, the tester described above is used to determine the presence or absence of antigen content in an object, such as in food or in a food production line. The tester may be used by the manufacturer for quality inspection of the production line and pre-shipment products, or may be used by the eater himself / herself for checking the presence or absence of antigen in the target food.
抗原含有の有無を調べる方法としては、例えば、作製したＩｇ抗体を含むテスターを食品等から得られた試料に接触させて、例えばＥＬＩＳＡ法等を用いて当該Ｉｇ抗体と試料中の抗原との結合を検出し、当該Ｉｇ抗体と抗原との結合が検出された場合に、対象食品等に当該抗原が残留していると判断する方法等が挙げられる。 As a method for checking the presence or absence of an antigen, for example, a tester containing the prepared Ig antibody is brought into contact with a sample obtained from food or the like, and the Ig antibody is bound to the antigen in the sample by using, for example, an ELISA method. , And when the binding between the Ig antibody and the antigen is detected, a method of determining that the antigen remains in the target food or the like can be mentioned.
アレルゲン除去食品等
本発明は、上記（１）～（８）、（１α）～（５５α）の抗原の少なくとも一つが除去又は低減されていることを特徴とする大豆または大豆加工品を提供する。 Allergen-free foods, etc. The present invention provides soybeans or processed soybean products, wherein at least one of the antigens (1) to (8) and (1α) to (55α) is removed or reduced.
大豆または大豆加工品において本発明の抗原を除去又は低減する方法は限定されない。抗原の除去又は低減は、本発明の抗原が除去又は低減される限り、いかなる方法によって行われてもよい。 The method for removing or reducing the antigen of the present invention in soybean or processed soybean is not limited. The removal or reduction of the antigen may be carried out by any method as long as the antigen of the present invention is removed or reduced.
例えば、本発明の抗原が除去又は低減された大豆は、遺伝子ノックアウト技術を用いて、本発明の抗原の発現がノックアウトされた大豆を調製してもよい。 For example, for soybeans from which the antigen of the present invention has been removed or reduced, soybeans in which the expression of the antigen of the present invention has been knocked out may be prepared using a gene knockout technique.
本発明の抗原が除去又は低減された大豆加工品は、本発明の抗原が除去又は低減された大豆を原料とした加工品であってもよい。通常の大豆を原料とする場合は、大豆加工品の調製前または調製後に本発明の抗原を除去又は低減する処理を行う。通常の大豆を原料とした大豆加工品において本発明の抗原を除去又は低減する方法として、高圧処理および中性塩溶液による溶出や、高温スチーム等の、食品中のタンパク質成分を除去する方法が挙げられる。 The processed soybean product from which the antigen of the present invention has been removed or reduced may be a processed product made from soybean from which the antigen of the present invention has been removed or reduced. When ordinary soybean is used as a raw material, a treatment for removing or reducing the antigen of the present invention is performed before or after the preparation of the processed soybean product. As a method for removing or reducing the antigen of the present invention in a processed soybean product made from ordinary soybeans, there are methods for removing protein components in foods such as high-pressure treatment, elution with a neutral salt solution, and high-temperature steam. Be done.
以下に本発明の実施例を説明する。本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって限定されない。 Examples of the present invention will be described below. The technical scope of the invention is not limited by these examples.
実施例１：タンパク質パターンの確認
下記の二次元電気泳動方法を使用して、大豆に含まれるタンパク質を調べた。 Example 1: Confirmation of protein pattern The protein contained in soybean was examined using the following two-dimensional electrophoresis method.
タンパク質の抽出
市販の乾燥大豆（数個）を粉末状にし、その粉末５０ｍｇに水５００μｌを加え、２５℃で１０分間、ボルテックスを使用して振とう抽出した。この振とう抽出の後、タンパク質抽出液を回収した。 Extraction of protein Commercially available dried soybeans (several pieces) were powdered, 500 μl of water was added to 50 mg of the powder, and the mixture was shake-extracted at 25 ° C. for 10 minutes using a vortex. After this shaking extraction, the protein extract was recovered.
その後、2D-CleanUPキット（ＧＥ社製）を使用して２回の沈殿操作を行った。第１回目の沈殿操作は、回収した上記蛋白質抽出液にＴＣＡ（トリクロロ酢酸）を加えて沈殿を行い、当該操作で生じた沈殿（ＴＣＡ沈殿）を回収した。第２回目の沈殿操作は、回収した前記ＴＣＡ沈殿にアセトンを加えて沈殿を行い、当該操作で得られた沈殿（検体）を回収した。 After that, two precipitation operations were performed using a 2D-Clean UP kit (manufactured by GE). In the first precipitation operation, TCA (trichloroacetic acid) was added to the recovered protein extract for precipitation, and the precipitate (TCA precipitate) produced by the operation was recovered. In the second precipitation operation, acetone was added to the collected TCA precipitate to perform precipitation, and the precipitate (sample) obtained by the operation was recovered.
検体溶液の調製
得られた検体の一部（タンパク質重量として５０μｇ）を、１次元目等電点電気泳動用ゲルの膨潤用緩衝液であるDeStreak Rehydration Solution（ＧＥ社製）１５０μｌに溶解し、１次元目等電点電気泳動用の検体溶液（膨潤用検体溶液）とした。DeStreak Rehydration Solutionの組成は以下の通りである。
７Ｍ チオ尿素
２Ｍ 尿素
４％（ｗ／ｖ） ＣＨＡＰＳ：
３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホナート
０．５％（ｖ／ｖ） ＩＰＧバッファー；ＧＥ社製
適量のＢＰＢ（ブロモフェノールブルー） Preparation of sample solution A part of the obtained sample (50 μg as protein weight) was dissolved in 150 μl of DeStreak Rehydration Solution (manufactured by GE), which is a buffer solution for swelling of the first-dimensional isoelectric focusing gel. A sample solution for dimensional isoelectric focusing (sample solution for swelling) was used. The composition of the DeStreak Rehydration Solution is as follows.
7M
3-[(3-Coramidepropyl) Dimethylammonio] Propane Sulfonate 0.5% (v / v) IPG Buffer; GE's Appropriate Amount of BPB (Bromophenol Blue)
１次元目等電点電気泳動用ゲルへの検体の浸透
１次元目等電点電気泳動用ゲル（ＧＥ社製：ＩＰＧゲルImmobiline Drystrip (pH3-10NL)）を前記した１次元目等電点電気泳動用の検体溶液（膨張用検体溶液）１４０μｌに浸漬し、一晩室温にて浸透させた。 Permeation of the specimen into the 1st dimension isoelectric focusing gel The 1st dimension isoelectric focusing gel (GE: IPG gel Immobiline Drystrip (pH3-10NL)) described above was used for the 1st dimension isoelectric focusing gel. The sample solution for electrophoresis (expansion sample solution) was immersed in 140 μl and permeated overnight at room temperature.
本実施例においては、電気泳動機器としてＧＥ社製のIPGphorを使用した。 In this example, IPGphor manufactured by GE was used as the electrophoresis device.
泳動トレーにシリコンオイルを満たした。検体を浸透させたゲルの両端に水で湿らせた濾紙を設け、ゲルをシリコンオイルに覆われるよう、泳動トレーにセットし、ゲルとの間に当該濾紙を挟んだ状態で電極をセットした。 The migration tray was filled with silicone oil. A filter paper moistened with water was provided at both ends of the gel in which the sample was infiltrated, the gel was set on an electrophoresis tray so as to be covered with silicone oil, and an electrode was set with the filter paper sandwiched between the gel and the gel.
等電点電気泳動機器の電流値の上限をゲル１本当たり７５μＡに設定し、電圧プログラムを、（１）３００Ｖ定電圧で７５０Ｖｈｒまで定電圧工程を行い（当該工程終了前の泳動３０分間の電流変化幅が５μＡであった）、（２）３００Ｖｈｒかけて１０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（３）更に４５００Ｖｈｒかけて５０００Ｖまで徐々に電圧を上昇させ、（４）その後５０００Ｖ定電圧で総Ｖｈｒが１２０００になるまで、１次元目の等電点電気泳動を行った。 The upper limit of the current value of the isoelectric point electrophoresis device is set to 75 μA per gel, and the voltage program is performed in (1) a constant voltage process up to 750 Vhr at a constant voltage of 300 V (current for 30 minutes of electrophoresis before the end of the process). The change width was 5 μA), (2) the voltage was gradually increased to 1000 V over 300 Vhr, (3) the voltage was gradually increased to 5000 V over 4500 Vhr, and (4) then the total Vhr at a constant voltage of 5000 V. The first dimension isoelectric point electrophoresis was performed until the value reached 12000.
等電点電気泳動ゲルのＳＤＳ平衡化
上記の１次元目の等電点電気泳動を行った後、等電点電気泳動機器からゲルを取り外し、還元剤を含む平衡化緩衝液に当該ゲルを浸漬して、１５分・室温にて振とうした。上記還元剤を含む平衡化緩衝液の組成は以下の通りである。
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）
６Ｍ 尿素
３０％（ｖ／ｖ） グリセロール
２％（ｗ／ｖ） ＳＤＳ
１％（ｗ／ｖ） ＤＴＴ SDS equilibration of isoelectric focusing gel After performing the above first-dimensional isoelectric focusing, remove the gel from the isoelectric focusing device and immerse the gel in an equilibrium buffer containing a reducing agent. Then, it was shaken at room temperature for 15 minutes. The composition of the equilibration buffer solution containing the reducing agent is as follows.
100 mM Tris-HCl (pH 8.0)
6M Urea 30% (v / v) Glycerol 2% (w / v) SDS
1% (w / v) DTT
次に、上記還元剤を含む平衡化緩衝液を除き、ゲルをアルキル化剤を含む平衡化緩衝液に浸漬して、１５分・室温にて振とうし、ＳＤＳ平衡化したゲルを得た。上記アルキル化剤を含む平衡化緩衝液の組成は以下の通りである。
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）
６Ｍ 尿素
３０％（ｖ／ｖ） グリセロール
２％（ｗ／ｖ） ＳＤＳ
２．５％（ｗ／ｖ） ヨードアセトアミドNext, the equilibration buffer containing the reducing agent was removed, and the gel was immersed in an equilibration buffer containing an alkylating agent and shaken at room temperature for 15 minutes to obtain an SDS equilibrated gel. The composition of the equilibration buffer solution containing the above alkylating agent is as follows.
100 mM Tris-HCl (pH 8.0)
6M Urea 30% (v / v) Glycerol 2% (w / v) SDS
2.5% (w / v) iodoacetamide
２次元目のＳＤＳ－ＰＡＧＥ
本実施例においては、電気泳動機器としてlife technologies社製のXCell SureLock Mini-Cellを使用した。２次元目泳動用ゲルはlife technologies社製NuPAGE 4-12% Bis-Tris Gelsを使用した。また、以下の組成の泳動用緩衝液を調製し、使用した。
５０ｍＭ ＭＯＰＳ
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ塩基
０．１％（ｗ／ｖ） ＳＤＳ
１ｍＭ ＥＤＴＡ 2D SDS-PAGE
In this example, XCell SureLock Mini-Cell manufactured by life technologies was used as the electrophoresis device. NuPAGE 4-12% Bis-Tris Gels manufactured by life technologies was used as the gel for 2D electrophoresis. In addition, a running buffer solution having the following composition was prepared and used.
50 mM MOPS
50 mM Tris base 0.1% (w / v) SDS
1 mM EDTA
また、本実施例においては泳動用緩衝液に０．５％（ｗ／ｖ）のアガロースＳ（ニッポンジーン社製）と適量のＢＰＢ（ブロモフェノールブルー）を溶解させた接着用アガロース溶液を使用した。 Further, in this example, an adhesive agarose solution in which 0.5% (w / v) of agarose S (manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.) and an appropriate amount of BPB (bromophenol blue) were dissolved in a running buffer solution was used.
ＳＤＳ－ＰＡＧＥのウェル中を十分に上記泳動用緩衝液で洗浄した後、当該洗浄に用いた緩衝液を取り除いた。次に、ウェルの中に充分に溶解させた接着用アガロース溶液を添加した。次に、ＳＤＳ平衡化したゲルをアガロース中に浸漬させ、ピンセットでＳＤＳ平衡化したゲルと２次元目泳動用ゲルを密着させた。当該両ゲルが密着した状態でアガロースが充分に固まったのを確認し、２００Ｖ定電圧で約４５分間泳動を行った。 The wells of SDS-PAGE were thoroughly washed with the above-mentioned running buffer, and then the buffer used for the washing was removed. Next, a fully dissolved adhesive agarose solution was added into the wells. Next, the SDS equilibrated gel was immersed in agarose, and the SDS equilibrated gel and the gel for two-dimensional electrophoresis were brought into close contact with each other with tweezers. It was confirmed that the agarose was sufficiently solidified with the two gels in close contact with each other, and migration was performed at a constant voltage of 200 V for about 45 minutes.
ゲルの蛍光染色
SYPRO Ruby（life technologies社製）を用いてゲルの蛍光染色を行った。 Fluorescent staining of gel
The gel was fluorescently stained using SYPRO Ruby (manufactured by life technologies).
まず、使用する密閉容器を事前に９８％（ｖ／ｖ）のエタノールで十分に洗浄した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ機器から泳動後の２次元目泳動用ゲルを取り外して、洗浄した密閉容器におき、５０％（ｖ／ｖ）メタノール及び７％（ｖ／ｖ）酢酸含有水溶液に３０分間浸漬する処理を２回行った。その後、当該水溶液を水に置換し、１０分間浸漬した。次に、２次元目泳動用ゲルを４０ｍｌのSYPRO Rubyに浸漬し、室温で一晩振とうした。次に、SYPRO Rubyを除き、２次元目泳動用ゲルを水で洗浄した後、１０％（ｖ／ｖ）メタノール及び７％（ｖ／ｖ）酢酸含有水溶液で３０分間振とうした。更に当該水溶液を水に置換し、３０分以上振とうした。 First, the closed container to be used was thoroughly washed with 98% (v / v) ethanol in advance. A treatment in which the gel for 2D migration after migration is removed from the SDS-PAGE device, placed in a washed airtight container, and immersed in an aqueous solution containing 50% (v / v) methanol and 7% (v / v) acetic acid for 30 minutes. Was performed twice. Then, the aqueous solution was replaced with water and immersed for 10 minutes. Next, the gel for 2D electrophoresis was immersed in 40 ml of SYPRO Ruby and shaken overnight at room temperature. Next, except for SYPRO Ruby, the gel for 2D electrophoresis was washed with water and then shaken with an aqueous solution containing 10% (v / v) methanol and 7% (v / v) acetic acid for 30 minutes. Further, the aqueous solution was replaced with water and shaken for 30 minutes or more.
解析
上記一連の処理を施した２次元目泳動用ゲルをTyphoon9400（ＧＥ社製）を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。２次元電気泳動の結果を図１に示す。図の左側には、分子量マーカーのバンドが見られ、バンドの位置が特定の分子量（ＫＤａ）を示す。 Analysis The gel for two-dimensional electrophoresis subjected to the above series of treatments was subjected to scanning of a fluorescent image using Typhoon 9400 (manufactured by GE). The results of two-dimensional electrophoresis are shown in FIG. On the left side of the figure, a band of molecular weight markers can be seen, and the position of the band indicates a specific molecular weight (KDa).
実施例２：イムノブロットでの抗原確認（１）
イムノブロットでの抗原確認は、実施例１に記載した手順を「２次元目のＳＤＳ－ＰＡＧＥ」まで行った後、以下の「メンブレンへの転写」「イムノブロット」「解析」の操作を行うことにより行った。 Example 2: Antigen confirmation by immunoblot (1)
For antigen confirmation by immunoblot, the procedure described in Example 1 is performed up to "second-dimensional SDS-PAGE", and then the following operations of "transfer to membrane", "immunoblot", and "analysis" are performed. Was done by.
メンブレンへの転写
メンブレンへの転写は、以下の転写装置及び転写用緩衝液を用いて行った。
転写装置：XCell SureLock Mini-Cell およびXCell IIブロットモジュール（life technologies社製）
転写用緩衝液： NuPAGEトランスファーバッファー（×２０）（life technologies社製）をmilliQ水で20倍希釈して使用した。 Transfer to Membrane Transfer to the membrane was performed using the following transfer device and transfer buffer.
Transfer device: XCell SureLock Mini-Cell and XCell II Blot Module (manufactured by life technologies)
Transfer buffer: NuPAGE transfer buffer (x20) (manufactured by life technologies) was diluted 20-fold with milliQ water before use.
具体的には以下の手順に従って二次元電気泳動ゲル中のタンパク質をメンブレン（ＰＶＤＦ膜）へ転写した。
（１）ＰＶＤＦ膜を、１００％メタノールに浸漬し、次にmilliQ水に浸漬し、その後、転写用緩衝液に移して、ＰＶＤＦ膜の親水化処理を行った。
（２）スポンジ、ろ紙、２次元目のＳＤＳ－ＰＡＧＥが終わったゲル、親水化処理済みＰＶＤＦ膜、ろ紙、スポンジの順でセットし、転写装置中、３０Ｖ定電圧で１時間通電した。Specifically, the protein in the two-dimensional electrophoresis gel was transferred to a membrane (PVDF membrane) according to the following procedure.
(1) The PVDF membrane was immersed in 100% methanol, then immersed in milliQ water, and then transferred to a transfer buffer solution to hydrophilize the PVDF membrane.
(2) The sponge, the filter paper, the gel after the second-dimensional SDS-PAGE, the hydrophilized PVDF film, the filter paper, and the sponge were set in this order, and energized in the transfer device at a constant voltage of 30 V for 1 hour.
イムノブロット
メンブレンのイムノブロットを、１次抗体として大豆に対するアレルギーを有する患者の血清または健康被験者の血清を用いて行った。 Immunoblot of the immunoblot membrane was performed using the serum of a patient having an allergy to soybean or the serum of a healthy subject as a primary antibody.
メンブレンのイムノブロットは、以下の手順に従って行った。
（１）転写したメンブレンを５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液（非イオン界面活性剤Tween （登録商標）20を０．３％含むＰＢＳバッファー）中、室温で１時間振とうした。
（２）１次抗体として、３％血清／５％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液中、室温で１時間静置した。
（３）ＰＢＳＴ溶液で洗浄した（５分×３回）。
（４）２次抗体として抗ヒトＩｇＥ－ＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）を３％スキムミルク／ＰＢＳＴ溶液で２５００倍に希釈した溶液中、室温で１時間静置した。
（５）ＰＢＳＴ溶液で洗浄した（５分×３回）。
（６）Pierce Western Blotting Substrate Plus（Thermo社製）で、５分間静置した。
Membrane immunoblots were performed according to the following procedure.
(1) The transferred membrane was shaken in 5% skim milk / PBST solution (PBS buffer containing 0.3% of nonionic surfactant Tween® 20) at room temperature for 1 hour.
(2) As a primary antibody, the mixture was allowed to stand at room temperature for 1 hour in a 3% serum / 5% skim milk / PBST solution.
(3) Washed with PBST solution (5 minutes x 3 times).
(4) As a secondary antibody, anti-human IgE-HRP (horseradish peroxidase) was diluted 2500-fold with a 3% skim milk / PBST solution and allowed to stand at room temperature for 1 hour.
(5) Washed with PBST solution (5 minutes x 3 times).
(6) The mixture was allowed to stand for 5 minutes with Pierce Western Blotting Substrate Plus (manufactured by Thermo).
解析
上記一連の処理を施したメンブレンをTyphoon9400（ＧＥ社製）を使用した蛍光イメージのスキャンに供した。 Analysis The membrane subjected to the above series of treatments was subjected to scanning of a fluorescent image using Typhoon 9400 (manufactured by GE).
大豆アレルギー患者の血清を用いたイムノブロットを、対照である健康被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。大豆アレルギーの患者１、患者２、患者３及び患者４の血清を用いたイムノブロットについて、健康被験者の血清を用いた場合（図２）とは異なり、かつ公知の大豆アレルゲンタンパク質とは異なる８つのスポットが検出された（図３Ａ～Ｄ）。
Immunoblots using serum from patients with soybean allergies were compared to immunoblots using serum from healthy subjects as controls. Eight immunoblots using the sera of patients 1,
上記８つのスポットの分子量および等電点はそれぞれ以下の通りである。
スポット１：分子量５～２０ｋＤａ、ｐＩ４．０～６．０
スポット２：分子量４０～６０ｋＤａ、ｐＩ５．５～７．５
スポット３：分子量２５～３７ｋＤａ、ｐＩ８．０～１０．０
スポット４：分子量２５～３７ｋＤａ、ｐＩ７．０～９．０
スポット５：分子量５～２０ｋＤａ、ｐＩ５．０～７．０
スポット６：分子量６０～７５ｋＤａ、ｐＩ６．０～８．０
スポット７：分子量１５～２５ｋＤａ、ｐＩ４．０～６．０
スポット８：分子量１００～１５０ｋＤａ、ｐＩ４．０～６．０The molecular weights and isoelectric points of the above eight spots are as follows.
Spot 1:
Spot 2: Molecular weight 40-60 kDa, pI 5.5-7.5
Spot 3: Molecular weight 25-37 kDa, pI8.0-10.0
Spot 4: Molecular weight 25-37 kDa, pI 7.0-9.0
Spot 5:
Spot 6: Molecular weight 60-75 kDa, pI 6.0-8.0
Spot 7: Molecular weight 15-25 kDa, pI 4.0-6.0
Spot 8: Molecular weight 100-150 kDa, pI 4.0-6.0
実施例３：質量分析および抗原の同定（１）
上記の８つのスポットを生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を行った。 Example 3: Mass spectrometry and identification of antigen (1)
The amino acid sequences of the antigens producing the above eight spots were identified by mass spectrometry.
具体的には、以下の手順でタンパク質の抽出および質量分析を行った。
（１）大豆について、実施例１及び２の手順に従ってタンパク質抽出、２次元電気泳動及びメンブレン転写を行い、０．００８％Direct blue／４０％エタノール・１０％酢酸で振とうにより染色した。
（２）その後、４０％エタノール・１０％酢酸で５分間の処理を３回行って脱色し、水で５分間洗浄後、風乾した。
（３）目的のスポットをきれいなカッター刃で切り取り、遠心チューブに入れた。５０μＬのメタノールでメンブレン親水処理後、１００μＬの水で２回洗浄後遠心除去し、２０μＬの２０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３・５０％アセトニトリルを加えた。
（４）１ｐｍｏｌ／μＬリシルエンドペプチダーゼ（ＷＡＫＯ）１μＬを加え、３７℃で６０分間静置した後、溶液を新しい遠心チューブに回収した。２０μＬの２０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３・７０％アセトニトリルをメンブレンに加え、室温にて１０分間浸し、さらに回収した。０．１％ギ酸、４％アセトニトリル１０μＬで溶解し、チューブに移した。
（５）回収した溶液を減圧乾燥した後、Ａ液（０．１％ギ酸、４％アセトニトリル溶液）１５μｌで溶解し、質量分析（ESI-TOF5600, AB Sciex社製）を行った。
（６）質量分析計から得られた質量データに基づくタンパク質の同定は、ＮＣＢＩをサーチすることで行った。Specifically, protein extraction and mass spectrometry were performed according to the following procedure.
(1) Soybeans were subjected to protein extraction, two-dimensional electrophoresis and membrane transfer according to the procedures of Examples 1 and 2, and stained with 0.008% Direct blue / 40% ethanol and 10% acetic acid by shaking.
(2) After that, it was treated with 40% ethanol and 10% acetic acid three times for 5 minutes to decolorize, washed with water for 5 minutes, and then air-dried.
(3) The target spot was cut out with a clean cutter blade and placed in a centrifugal tube. After membrane hydrophilic treatment with 50 μL of methanol, the cells were washed twice with 100 μL of water and then centrifuged, and 20 μL of 20 mM NH 4 HCO 3.50 % acetonitrile was added.
(4) 1 μL of 1 pmol / μL lysyl endopeptidase (WAKO) was added, and the mixture was allowed to stand at 37 ° C. for 60 minutes, and then the solution was collected in a new centrifuge tube. 20 μL of 20 mM NH 4 HCO 3.70% acetonitrile was added to the membrane, soaked at room temperature for 10 minutes, and further recovered. It was dissolved in 10 μL of 0.1% formic acid and 4% acetonitrile and transferred to a tube.
(5) The recovered solution was dried under reduced pressure, dissolved in 15 μl of solution A (0.1% formic acid, 4% acetonitrile solution), and subjected to mass spectrometry (ESI-TOF5600, manufactured by AB Sciex).
(6) Protein identification based on mass data obtained from a mass spectrometer was performed by searching NCBI.
結果
各スポットについて、質量分析を行ったところ、以下のアミノ酸配列が検出された。
スポット１：配列番号１７～２０で示されるアミノ酸配列
スポット２：配列番号２１～２８で示されるアミノ酸配列
スポット３：配列番号２９、３０で示されるアミノ酸配列
スポット４：配列番号３１、３２で示されるアミノ酸配列
スポット５：配列番号３３、３４で示されるアミノ酸配列
スポット６：配列番号３５～５３で示されるアミノ酸配列
スポット７：配列番号５４～６１で示されるアミノ酸配列
スポット８：配列番号６２～６８で示されるアミノ酸配列As a result , mass spectrometry was performed on each spot, and the following amino acid sequences were detected.
Spot 1: Amino acid sequence shown by SEQ ID NOs: 17 to 20 Spot 2: Amino acid sequence shown by SEQ ID NOs: 21 to 28 Spot 3: Amino acid sequence shown by SEQ ID NOs: 29 and 30 Spot 4: Amino acid sequence shown by SEQ ID NOs: 31 and 32 Amino acid sequence spot 5: Amino acid sequence spots represented by SEQ ID NOs: 33 and 34: Amino acid sequence spots represented by SEQ ID NOs: 35 to 53: Amino acid sequence spots represented by SEQ ID NOs: 54 to 61: Amino acid sequence spots 8: SEQ ID NOs: 62 to 68. Amino acid sequence shown
さらに、各スポットについて、質量分析計から得られた質量データをＮＣＢＩで解析したところ、それぞれのスポットは以下のタンパク質であることが同定された。
スポット１：Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II（UniProtアクセッション番号P01064、アミノ酸配列：配列番号２、それをコードする塩基配列：配列番号１）
スポット２：Ribulose bisphosphate carboxylase large chain（UniProtアクセッション番号P27066、アミノ酸配列：配列番号４、それをコードする塩基配列：配列番号３）
スポット３：Gamma-glutamyl hydrolase（UniProtアクセッション番号P93164、アミノ酸配列：配列番号６、それをコードする塩基配列：配列番号５）
スポット４：Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein（UniProtアクセッション番号Q39836、アミノ酸配列：配列番号８、それをコードする塩基配列：配列番号７）
スポット５：Protein SLE3（UniProtアクセッション番号C6T0L2、アミノ酸配列：配列番号１０、それをコードする塩基配列：配列番号９）
スポット６：Seed biotin-containing protein SBP65（UniProtアクセッション番号Q39846、アミノ酸配列：配列番号１２、それをコードする塩基配列：配列番号１１）
スポット７：Ferritin-2（UniProtアクセッション番号Q94IC4、アミノ酸配列：配列番号１４、それをコードする塩基配列：配列番号１３）
スポット８：Cell division cycle protein 48 homolog（UniProtアクセッション番号P54774、アミノ酸配列：配列番号１６、それをコードする塩基配列：配列番号１５）Furthermore, when the mass data obtained from the mass spectrometer was analyzed by NCBI for each spot, it was identified that each spot was the following protein.
Spot 1: Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II (UniProt accession number P01064, amino acid sequence: SEQ ID NO: 2, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 1)
Spot 2: Ribulose bisphosphate carboxylase large chain (UniProt accession number P27066, amino acid sequence: SEQ ID NO: 4, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 3)
Spot 3: Gamma-glutamyl hydrolase (UniProt accession number P93164, amino acid sequence: SEQ ID NO: 6, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 5)
Spot 4: Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein (UniProt accession number Q39836, amino acid sequence: SEQ ID NO: 8, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 7)
Spot 5: Protein SLE3 (UniProt accession number C6T0L2, amino acid sequence: SEQ ID NO: 10, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 9)
Spot 6: Seed biotin-containing protein SBP65 (UniProt accession number Q39846, amino acid sequence: SEQ ID NO: 12, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 11)
Spot 7: Ferritin-2 (UniProt accession number Q94IC4, amino acid sequence: SEQ ID NO: 14, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 13)
Spot 8: Cell
実施例４：イムノブロットでの抗原確認（２）
実施例２と同様に、大豆アレルギーのの血清を用いたイムノブロットを、対照である健康被験者の血清を用いたイムノブロットと比較した。大豆アレルギーの患者１α、患者２α、患者３α、患者４α、患者５α、患者６α、患者７α、患者８α及び患者９αの血清を用いたイムノブロットについて、健康被験者の血清を用いた場合（図４）とは異なり、かつ公知の大豆アレルゲンタンパク質とは異なる５６のスポットが検出された（図５Ａ～Ｉ）。 Example 4: Antigen confirmation by immunoblot (2)
Similar to Example 2, an immunoblot using serum of soybean allergy was compared with an immunoblot using serum of a healthy subject as a control. For immunoblotting using the serum of patients 1α, patient 2α, patient 3α, patient 4α, patient 5α, patient 6α, patient 7α, patient 8α and patient 9α with soybean allergy, the serum of a healthy subject was used (Fig. 4). 56 spots different from the known soybean allergen protein were detected (FIGS. 5A-I).
上記５６のスポットの分子量および等電点はそれぞれ以下の通りである。
スポット１α：分子量８０～１１０ｋＤａ、ｐＩ３．０～６．０
スポット２α：分子量６０～１１０ｋＤａ、ｐＩ３．０～６．０
スポット３α：分子量１００～１５０ｋＤａ、ｐＩ４．０～６．０
スポット４α：分子量８０～１１０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット５α：分子量８０～１６０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット６α：分子量８０～１１０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット７α：分子量６０～１１０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット８α：分子量６０～１１０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット９α：分子量６０～１１０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット１０α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット１１α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット１２α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット１３α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット１４α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ３．０～６．０
スポット１５α、１６α：分子量３０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット１７α：分子量３０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット１８α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット１９α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット２０α：分子量６０～７５ｋＤａ、ｐＩ６．０～８．０
スポット２１α：分子量４０～６０ｋＤａ、ｐＩ５．０～８．０
スポット２２α：分子量２５～３７ｋＤａ、ｐＩ８．０～１０．０
スポット２３α：分子量２５～３７ｋＤａ、ｐＩ７．０～９．０
スポット２４α：分子量５～２０ｋＤａ、ｐＩ５．０～７．０
スポット２５α：分子量３０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット２６α：分子量３０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット２７α：分子量３０～８０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット２８α：分子量２０～６０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット２９α、３０α、３１α、３２α、３３α：分子量２０～６０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット３４α：分子量２０～６０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット３５α：分子量３０～８０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット３６α、３７α：分子量２０～６０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット３８α：分子量８０～１６０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット３９α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット４０α、５６α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット４１α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット４２α、４３α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０
スポット４４α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット４５α：分子量５～４０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット４６α：分子量５～４０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット４７α：分子量５～４０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット４８α：分子量５～４０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット４９α：分子量５～２０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット５０α：分子量５～４０ｋＤａ、ｐＩ３．０～６．０
スポット５１α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ３．０～６．０
スポット５２α：分子量２０～６０ｋＤａ、ｐＩ４．０～７．０
スポット５３α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット５４α：分子量１０～５０ｋＤａ、ｐＩ４．０～８．０
スポット５５α：分子量４０～８０ｋＤａ、ｐＩ６．０～１０．０The molecular weights and isoelectric points of the 56 spots are as follows.
Spot 1α: Molecular weight 80-110 kDa, pI3.0-6.0
Spot 2α: Molecular weight 60-110 kDa, pI3.0-6.0
Spot 3α: Molecular weight 100-150 kDa, pI 4.0-6.0
Spot 4α: Molecular weight 80-110 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 5α: Molecular weight 80-160 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 6α: Molecular weight 80-110 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 7α: Molecular weight 60-110 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 8α: Molecular weight 60-110 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 9α: Molecular weight 60-110 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 10α: Molecular weight 40-80 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 11α: Molecular weight 40-80 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 12α: Molecular weight 40-80 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 13α: Molecular weight 40-80 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 14α: Molecular weight 40-80 kDa, pI3.0-6.0
Spots 15α, 16α: Molecular weight 30-80 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 17α: Molecular weight 30-80 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 18α: Molecular weight 40-80 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 19α: Molecular weight 40-80 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 20α: Molecular weight 60-75 kDa, pI 6.0-8.0
Spot 21α: Molecular weight 40-60 kDa, pI 5.0-8.0
Spot 22α: Molecular weight 25-37 kDa, pI8.0-10.0
Spot 23α: Molecular weight 25-37 kDa, pI 7.0-9.0
Spot 24α:
Spot 25α: Molecular weight 30-80 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 26α: Molecular weight 30-80 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 27α: Molecular weight 30-80 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 28α: Molecular weight 20-60 kDa, pI 4.0-7.0
Spots 29α, 30α, 31α, 32α, 33α: Molecular weight 20-60 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 34α: Molecular weight 20-60 kDa, pI 6.0-10.0
Spot 35α: Molecular weight 30-80 kDa, pI 6.0-10.0
Spots 36α, 37α: Molecular weight 20-60 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 38α: Molecular weight 80-160 kDa, pI 6.0-10.0
Spot 39α: Molecular weight 10-50 kDa, pI 6.0-10.0
Spots 40α, 56α:
Spot 41α:
Spots 42α, 43α:
Spot 44α: Molecular weight 10-50 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 45α: Molecular weight 5-40 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 46α: Molecular weight 5-40 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 47α: Molecular weight 5-40 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 48α: Molecular weight 5-40 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 49α:
Spot 50α: Molecular weight 5-40 kDa, pI3.0-6.0
Spot 51α: Molecular weight 10-50 kDa, pI3.0-6.0
Spot 52α: Molecular weight 20-60 kDa, pI 4.0-7.0
Spot 53α: Molecular weight 10-50 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 54α: Molecular weight 10-50 kDa, pI 4.0-8.0
Spot 55α: Molecular weight 40-80 kDa, pI 6.0-10.0
実施例５：質量分析および抗原の同定（２）
実施例３と同様に、上記の５６のスポットを生じる抗原について、質量分析によるアミノ酸配列の同定を行った。 Example 5: Mass spectrometry and identification of antigen (2)
Similar to Example 3, the amino acid sequences of the antigens producing the above 56 spots were identified by mass spectrometry.
各スポットについて、質量分析を行ったところ、以下のアミノ酸配列が検出された。さらに、各スポットについて、質量分析計から得られた質量データをＮＣＢＩで解析したところ、それぞれのスポットは以下のタンパク質であることが同定された。 When mass spectrometry was performed on each spot, the following amino acid sequences were detected. Furthermore, when the mass data obtained from the mass spectrometer was analyzed by NCBI for each spot, it was identified that each spot was the following protein.
スポット１α：
配列番号７１～８７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、endoplasmin homolog isoform X2 (NCBIアクセッション番号XP_006596543.1、アミノ酸配列：配列番号７０、それをコードする塩基配列：配列番号６９）であった。Spot 1α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 71-87 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was endoplasmin homolog isoform X2 (NCBI accession number XP_006596543.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 70, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 69).
配列番号９０～１０４で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、endoplasmin homolog isoform X2 (NCBIアクセッション番号XP_006601356.1、アミノ酸配列：配列番号８９、それをコードする塩基配列：配列番号８８）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 90-104 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was endoplasmin homolog isoform X2 (NCBI accession number XP_006601356.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 89, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 88).
スポット２α：
配列番号１０７～１２０で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、heat shock cognate protein 80（NCBIアクセッション番号XP_003544594.1、アミノ酸配列：配列番号１０６、それをコードする塩基配列：配列番号１０５）であった。Spot 2α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 107-120 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was heat shock cognate protein 80 (NCBI accession number XP_003544594.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 106, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 105).
配列番号１２３～１３７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、heat shock protein 90-1（NCBIアクセッション番号NP_001236612.1、アミノ酸配列：配列番号１２２、それをコードする塩基配列：配列番号１２１）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 123-137 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was heat shock protein 90-1 (NCBI accession number NP_001236612.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 122, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 121).
配列番号１４０～１５３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、hypothetical protein GLYMA_02G302500（NCBIアクセッション番号KRH73936.1、アミノ酸配列：配列番号１３９、それをコードする塩基配列：配列番号１３８）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 140-153 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was hypothetical protein GLYMA_02G302500 (NCBI accession number KRH73936.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 139, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 138).
スポット３α：
実施例３のスポット８と同じく、配列番号６２～６８で示されるアミノ酸配列が質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Cell division cycle protein 48 homolog（UniProtアクセッション番号P54774、アミノ酸配列：配列番号１６、それをコードする塩基配列：配列番号１５）であった。Spot 3α:
Similar to Spot 8 of Example 3, the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 62 to 68 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was Cell
スポット４α：
配列番号１５６、１５７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、embryo-specific urease isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_014630847.1、アミノ酸配列：配列番号１５５、それをコードする塩基配列：配列番号１５４）であった。Spot 4α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 156, 157 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was embryo-specific urease isoform X1 (NCBI accession number XP_014630847.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 155, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 154).
スポット５α：
配列番号１６０、１６１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic/amyloplastic（NCBIアクセッション番号XP_006603904.1、アミノ酸配列：配列番号１５９、それをコードする塩基配列：配列番号１５８）であった。Spot 5α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 160 and 161 were detected by mass spectrometry. The proteins identified from this mass data are alpha-1,4 glucan phosphorylase L isozyme, chloroplastic / amyloplastic (NCBI accession number XP_006603904.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 159, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 158). Met.
スポット６α：
配列番号１６４～１６７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、aconitate hydratase 1（NCBIアクセッション番号XP_003537655.1、アミノ酸配列：配列番号１６３、それをコードする塩基配列：配列番号１６２）であった。Spot 6α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 164 to 167 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was aconitate hydratase 1 (NCBI accession number XP_003537655.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 163, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 162).
配列番号１７０～１７２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、aconitate hydratase 1（NCBIアクセッション番号XP_003517155.1、アミノ酸配列：配列番号１６９、それをコードする塩基配列：配列番号１６８）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 170-172 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was aconitate hydratase 1 (NCBI accession number XP_003517155.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 169, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 168).
スポット７α：
配列番号１７５～１８７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、methionine synthase（NCBIアクセッション番号NP_001235794.1、アミノ酸配列：配列番号１７４、それをコードする塩基配列：配列番号１７３）であった。Spot 7α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 175 to 187 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was methionine synthase (NCBI accession number NP_001235794.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 174, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 173).
スポット８α：
配列番号１９０～１９９で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、transketolase, chloroplastic（NCBIアクセッション番号XP_003521870.1、アミノ酸配列：配列番号１８９、それをコードする塩基配列：配列番号１８８）であった。Spot 8α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 190-199 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was transketolase, chloroplastic (NCBI accession number XP_003521870.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 189, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 188).
スポット９α：
配列番号２０２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、lysine--tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2（NCBIアクセッション番号XP_014625509.1、アミノ酸配列：配列番号２０１、それをコードする塩基配列：配列番号２００）であった。Spot 9α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 202 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was lysine--tRNA ligase, cytoplasmic-like isoform X2 (NCBI accession number XP_014625509.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 201, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 200). rice field.
スポット１０α：
配列番号２０５～２１８で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、chaperonin CPN60-2, mitochondrial（NCBIアクセッション番号XP_003556325.1、アミノ酸配列：配列番号２０４、それをコードする塩基配列：配列番号２０３）であった。Spot 10α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 205-218 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was chaperonin CPN60-2, mitochondrial (NCBI accession number XP_003556325.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 204, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 203).
配列番号２２１～２３１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_003535967.1、アミノ酸配列：配列番号２２０、それをコードする塩基配列：配列番号２１９）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 221-231 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was chaperonin CPN60-2, mitochondrial-like isoform X1 (NCBI accession number XP_003535967.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 220, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 219). ..
スポット１１α：
配列番号２３４～２３７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、polyadenylate-binding protein 8 isoform X3（NCBIアクセッション番号XP_006578034.1、アミノ酸配列：配列番号２３３、それをコードする塩基配列：配列番号２３２）であった。Spot 11α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 234 to 237 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was polyadenylate-binding
スポット１２α：
配列番号２４０で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、pyrophosphate--fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like（NCBIアクセッション番号XP_003555655.1、アミノ酸配列：配列番号２３９、それをコードする塩基配列：配列番号２３８）であった。Spot 12α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 240 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data is pyrophosphate--fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase subunit alpha-like (NCBI accession number XP_003555655.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 239, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 238). )Met.
スポット１３α：
配列番号２４３～２５２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、protein disulfide isomerase-like protein precursor（NCBIアクセッション番号NP_001238009.1、アミノ酸配列：配列番号２４２、それをコードする塩基配列：配列番号２４１）であった。Spot 13α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 243 to 252 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was protein disulfide isomerase-like protein precursor (NCBI accession number NP_001238009.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 242, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 241).
配列番号２５５～２７８で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、protein disulfide-isomerase（NCBIアクセッション番号XP_006581588.1、アミノ酸配列：配列番号２５４、それをコードする塩基配列：配列番号２５３）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 255-278 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was protein disulfide-isomerase (NCBI accession number XP_006581588.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 254, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 253).
スポット１４α：
配列番号２８１～２８４で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、V-type proton ATPase subunit B 2（NCBIアクセッション番号XP_003552473.1、アミノ酸配列：配列番号２８０、それをコードする塩基配列：配列番号２７９）であった。Spot 14α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 281-284 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was V-type proton ATPase subunit B 2 (NCBI accession number XP_003552473.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 280, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 279).
配列番号２８７～２８９で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、V-type proton ATPase subunit B 2（NCBIアクセッション番号XP_006605857.1、アミノ酸配列：配列番号２８６、それをコードする塩基配列：配列番号２７５）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 287-289 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was V-type proton ATPase subunit B 2 (NCBI accession number XP_006605857.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 286, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 275).
スポット１５α、１６α：
配列番号２９２～３０４で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase（NCBIアクセッション番号XP_003544964.1、アミノ酸配列：配列番号２９１、それをコードする塩基配列：配列番号２９０）であった。Spots 15α, 16α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 292-304 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase (NCBI accession number XP_003544964.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 291 and nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 290).
配列番号３０７～３１８で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、hypothetical protein GLYMA_02G241100（NCBIアクセッション番号KRH72929.1、アミノ酸配列：配列番号３０６、それをコードする塩基配列：配列番号３０５）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 307-318 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was hypothetical protein GLYMA_02G241100 (NCBI accession number KRH72929.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 306, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 305).
スポット１７α：
配列番号３２１～３２５で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2（NCBIアクセッション番号XP_003531293.1、アミノ酸配列：配列番号３２０、それをコードする塩基配列：配列番号３１９）であった。Spot 17α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 321 to 325 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was guanosine nucleotide diphosphate dissociation inhibitor 2 (NCBI accession number XP_003531293.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 320, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 319).
配列番号３２８～３３２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、rab GDP dissociation inhibitor alpha-like（NCBIアクセッション番号NP_001276273.1、アミノ酸配列：配列番号３２７、それをコードする塩基配列：配列番号３２６）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 328-332 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was rab GDP dissociation inhibitor alpha-like (NCBI accession number NP_001276273.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 327, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 326).
スポット１８α：
配列番号３３５～３３９で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、hypothetical protein GLYMA_10G028300（NCBIアクセッション番号KRH32039.1、アミノ酸配列：配列番号３３４、それをコードする塩基配列：配列番号３３３）であった。Spot 18α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 335-339 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was hypothetical protein GLYMA_10G028300 (NCBI accession number KRH32039.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 334, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 333).
スポット１９α：
配列番号３４２～３４６で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、sucrose binding protein homolog S-64（NCBIアクセッション番号AAF05723.1、アミノ酸配列：配列番号３４１、それをコードする塩基配列：配列番号３４０）であった。Spot 19α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 342 to 346 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was sucrose binding protein homolog S-64 (NCBI accession number AAF05723.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 341, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 340).
スポット２０α：
実施例３のスポット６と同じく、配列番号３５～５３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Seed biotin-containing protein SBP65（UniProtアクセッション番号Q39846、アミノ酸配列：配列番号１２、それをコードする塩基配列：配列番号１１）であった。Spot 20α:
Similar to
スポット２１α：
実施例３のスポット２と同じく、配列番号２１～２８で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Ribulose bisphosphate carboxylase large chain（UniProtアクセッション番号P27066、アミノ酸配列：配列番号４、それをコードする塩基配列：配列番号３）であった。Spot 21α:
Similar to
スポット２２α：
実施例３のスポット３と同じく、配列番号２９、３０で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Gamma-glutamyl hydrolase（UniProtアクセッション番号P93164、アミノ酸配列：配列番号６、それをコードする塩基配列：配列番号５）であった。Spot 22α:
Similar to
スポット２３α：
実施例３のスポット４と同じく、配列番号３１、３２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein（UniProtアクセッション番号Q39836、アミノ酸配列：配列番号８、それをコードする塩基配列：配列番号７）であった。Spot 23α:
Similar to Spot 4 of Example 3, the amino acid sequences shown by SEQ ID NOs: 31 and 32 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein (UniProt accession number Q39836, amino acid sequence: SEQ ID NO: 8, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 7).
スポット２４α：
実施例３のスポット５と同じく、配列番号３３、３４で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Protein SLE3（UniProtアクセッション番号C6T0L2、アミノ酸配列：配列番号１０、それをコードする塩基配列：配列番号９）であった。Spot 24α:
Similar to
スポット２５α：
配列番号３４９～３５６で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial（NCBIアクセッション番号XP_003537078.1、アミノ酸配列：配列番号３４８、それをコードする塩基配列：配列番号３４７）であった。Spot 25α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 349-356 were detected by mass spectrometry. The proteins identified from this mass data are succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial (NCBI accession number XP_003537078.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 348, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 347). Met.
配列番号３５９～３６５で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial（NCBIアクセッション番号XP_003542431.1、アミノ酸配列：配列番号３５８、それをコードする塩基配列：配列番号３５７）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 359-365 were detected by mass spectrometry. The proteins identified from this mass data are succinyl-CoA ligase [ADP-forming] subunit beta, mitochondrial (NCBI accession number XP_003542431.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 358, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 357). Met.
スポット２６α：
配列番号３６８～３８２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、phosphoglycerate kinase, cytosolic（NCBIアクセッション番号XP_003546821.1、アミノ酸配列：配列番号３６７、それをコードする塩基配列：配列番号３６６）であった。Spot 26α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 368-382 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was phosphoglycerate kinase, cytosolic (NCBI accession number XP_003546821.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 367, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 366).
配列番号３８５～３９２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、phosphoglycerate kinase, cytosolic（NCBIアクセッション番号XP_003531482.1、アミノ酸配列：配列番号３８４、それをコードする塩基配列：配列番号３８３）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 385-392 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was phosphoglycerate kinase, cytosolic (NCBI accession number XP_003531482.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 384, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 383).
配列番号３９５～４０９で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、phosphoglycerate kinase, cytosolic（NCBIアクセッション番号XP_003531483.1、アミノ酸配列：配列番号３９４、それをコードする塩基配列：配列番号３９３）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 395-409 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was phosphoglycerate kinase, cytosolic (NCBI accession number XP_003531483.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 394, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 393).
スポット２７α：
配列番号４１２～４１６で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、alcohol dehydrogenase 1（NCBIアクセッション番号XP_003526673.1、アミノ酸配列：配列番号４１１、それをコードする塩基配列：配列番号４１０）であった。Spot 27α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 412 to 416 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was alcohol dehydrogenase 1 (NCBI accession number XP_003526673.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 411, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 410).
配列番号４１９、４２０で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、alcohol dehydrogenase 1（NCBIアクセッション番号XP_003545664.3、アミノ酸配列：配列番号４１８、それをコードする塩基配列：配列番号４１７）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 419 and 420 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was alcohol dehydrogenase 1 (NCBI accession number XP_003545664.3, amino acid sequence: SEQ ID NO: 418, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 417).
配列番号４２３～４２７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、alcohol dehydrogenase 1-like（NCBIアクセッション番号XP_003544738.1、アミノ酸配列：配列番号４２２、それをコードする塩基配列：配列番号４２１）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 423-427 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was alcohol dehydrogenase 1-like (NCBI accession number XP_003544738.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 422, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 421).
スポット２８α：
配列番号４３０～４３３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、35 kDa seed maturation protein isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_006576267.1、アミノ酸配列：配列番号４２９、それをコードする塩基配列：配列番号４２８）であった。Spot 28α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 430-433 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was 35 kDa seed maturation protein isoform X1 (NCBI accession number XP_006576267.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 429, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 428).
スポット２９α、３０α、３１α、３２α、３３α：
配列番号４３６～４３９で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_014631598.1、アミノ酸配列：配列番号４３５、それをコードする塩基配列：配列番号４３４）であった。Spots 29α, 30α, 31α, 32α, 33α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 436-439 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase isoform X1 (NCBI accession number XP_014631598.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 435, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 434).
配列番号４４２～４４５で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, cytosolic（NCBIアクセッション番号XP_006578692.1、アミノ酸配列：配列番号４４１、それをコードする塩基配列：配列番号４４０）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 442-445 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, cytosolic (NCBI accession number XP_006578692.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 441, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 440).
配列番号４４８～４５１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein LOC100782924（NCBIアクセッション番号NP_001240046.1、アミノ酸配列：配列番号４４７、それをコードする塩基配列：配列番号４４６）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 448-451 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein LOC100782924 (NCBI accession number NP_001240046.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 447, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 446).
スポット３４α：
配列番号４５４で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like（NCBIアクセッション番号XP_003532591.1、アミノ酸配列：配列番号４５３、それをコードする塩基配列：配列番号４５２）であった。Spot 34α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 454 was detected by mass spectrometry. The proteins identified from this mass data are bifunctional UDP-glucose 4-epimerase and UDP-xylose 4-epimerase 1-like (NCBI accession number XP_003532591.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 453, base sequence encoding it: It was SEQ ID NO: 452).
配列番号４５７、４５８で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein LOC100803483（NCBIアクセッション番号NP_001241075.1、アミノ酸配列：配列番号４５６、それをコードする塩基配列：配列番号４５５）であった。 The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 457 and 458 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein LOC100803483 (NCBI accession number NP_001241075.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 456, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 455).
スポット３５α：
配列番号４６１～４６６で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、elongation factor 1-alpha（NCBIアクセッション番号XP_003553292.1、アミノ酸配列：配列番号４６０、それをコードする塩基配列：配列番号４５９）であった。Spot 35α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 461 to 466 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was elongation factor 1-alpha (NCBI accession number XP_003553292.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 460, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 459).
配列番号４６９～４７１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、elongation factor 1-alpha（NCBIアクセッション番号XP_003547695.1、アミノ酸配列：配列番号４６８、それをコードする塩基配列：配列番号４６７）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 469-471 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was elongation factor 1-alpha (NCBI accession number XP_003547695.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 468, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 467).
配列番号４７４～４７７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、elongation factor-1A isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_006600131.1、アミノ酸配列：配列番号４７３、それをコードする塩基配列：配列番号４７２）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 474-477 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was elongation factor-1A isoform X1 (NCBI accession number XP_006600131.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 473, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 472).
スポット３６α、３７α：
配列番号４８０～４８３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、seed maturation protein PM34（NCBIアクセッション番号NP_001238285.1、アミノ酸配列：配列番号４７９、それをコードする塩基配列：配列番号４７８）であった。Spots 36α, 37α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 480-483 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was seed maturation protein PM34 (NCBI accession number NP_001238285.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 479, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 478).
配列番号４８６、４８７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein LOC100809384（NCBIアクセッション番号NP_001241158.1、アミノ酸配列：配列番号４８５、それをコードする塩基配列：配列番号４８４）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 486 and 487 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein LOC100809384 (NCBI accession number NP_001241158.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 485, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 484).
配列番号４９０～４９３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、hypothetical protein GLYMA_10G155300（NCBIアクセッション番号KRH33956.1、アミノ酸配列：配列番号４８９、それをコードする塩基配列：配列番号４８８）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 490-493 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was hypothetical protein GLYMA_10G155300 (NCBI accession number KRH33956.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 489, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 488).
スポット３８α：
配列番号４９６～５１３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_003526237.1、アミノ酸配列：配列番号４９５、それをコードする塩基配列：配列番号４９４）であった。Spot 38α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 496-513 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was seed biotin-containing protein SBP65-like isoform X1 (NCBI accession number XP_003526237.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 495, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 494). ..
スポット３９α：
配列番号５１６で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、ATP synthase subunit O, mitochondrial-like（NCBIアクセッション番号XP_003546884.1、アミノ酸配列：配列番号５１５、それをコードする塩基配列：配列番号５１４）であった。Spot 39α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 516 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was ATP synthase subunit O, mitochondrial-like (NCBI accession number XP_003546884.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 515, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 514).
スポット４０α、５６α：
配列番号５１９、５２０で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、P24 oleosin isoform A（NCBIアクセッション番号XP_003553822.1、アミノ酸配列：配列番号５１８、それをコードする塩基配列：配列番号５１７）であった。Spots 40α, 56α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 519 and 520 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was P24 oleosin isoform A (NCBI accession number XP_003553822.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 518, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 517).
スポット４１α：
配列番号５２３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein At3g49720-like isoform X2（NCBIアクセッション番号XP_006600908.1、アミノ酸配列：配列番号５２２、それをコードする塩基配列：配列番号５２１）であった。Spot 41α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 523 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein At3g49720-like isoform X2 (NCBI accession number XP_006600908.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 522, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 521).
スポット４２α、４３α：
配列番号５２６～５３１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、superoxide dismutase [Mn], mitochondrial（NCBIアクセッション番号XP_003526813.1、アミノ酸配列：配列番号５２５、それをコードする塩基配列：配列番号５２４）であった。Spots 42α, 43α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 526-531 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was superoxide dismutase [Mn], mitochondrial (NCBI accession number XP_003526813.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 525, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 524).
配列番号５３４～５３９で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、hypothetical protein GLYMA_04G221300（NCBIアクセッション番号KRH64185.1、アミノ酸配列：配列番号５３３、それをコードする塩基配列：配列番号５３２）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 534-539 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was hypothetical protein GLYMA_04G221300 (NCBI accession number KRH64185.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 533, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 532).
スポット４４α：
実施例３のスポット７と同じく、配列番号５４～６１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Ferritin-2（UniProtアクセッション番号Q94IC4、アミノ酸配列：配列番号１４、それをコードする塩基配列：配列番号１３）であった。Spot 44α:
Similar to
スポット４５α：
配列番号５４２～５４５で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein LOC100499771（NCBIアクセッション番号NP_001235797.1、アミノ酸配列：配列番号５４１、それをコードする塩基配列：配列番号５４０）であった。Spot 45α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 542-545 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein LOC100499771 (NCBI accession number NP_001235797.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 541, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 540).
配列番号５４８～５５１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、hypothetical protein GLYMA_09G192800（NCBIアクセッション番号KRH39322.1、アミノ酸配列：配列番号５４７、それをコードする塩基配列：配列番号５４６）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 548-551 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was hypothetical protein GLYMA_09G192800 (NCBI accession number KRH39322.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 547, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 546).
スポット４６α：
配列番号５５４で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、seed maturation protein PM22（NCBIアクセッション番号NP_001237935.1、アミノ酸配列：配列番号５５３、それをコードする塩基配列：配列番号５５２）であった。Spot 46α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 554 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was seed maturation protein PM22 (NCBI accession number NP_001237935.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 553, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 552).
スポット４７α：
配列番号５５７、５５８で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、eukaryotic translation initiation factor 5A-2（NCBIアクセッション番号XP_003549690.1、アミノ酸配列：配列番号５５６、それをコードする塩基配列：配列番号５５５）であった。Spot 47α:
The amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 557, 558 was detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was eukaryotic translation initiation factor 5A-2 (NCBI accession number XP_003549690.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 556, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 555).
配列番号５６１～５６３で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein LOC100305510（NCBIアクセッション番号NP_001236395.1、アミノ酸配列：配列番号５６０、それをコードする塩基配列：配列番号５５９）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 561-563 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein LOC100305510 (NCBI accession number NP_001236395.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 560, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 559).
スポット４８α：
配列番号５６６～５７０で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein LOC100306570（NCBIアクセッション番号NP_001236895.1、アミノ酸配列：配列番号５６５、それをコードする塩基配列：配列番号５６４）であった。Spot 48α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 566-570 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein LOC100306570 (NCBI accession number NP_001236895.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 565, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 564).
スポット４９α：
実施例３のスポット１と同じく、配列番号１７～２０で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II（UniProtアクセッション番号P01064、アミノ酸配列：配列番号２、それをコードする塩基配列：配列番号１）であった。Spot 49α:
Similar to Spot 1 in Example 3, the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 17-20 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II (UniProt accession number P01064, amino acid sequence: SEQ ID NO: 2, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 1).
スポット５０α：
配列番号５７３～５７６で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、uncharacterized protein LOC100813859（NCBIアクセッション番号NP_001239816.1、アミノ酸配列：配列番号５７２、それをコードする塩基配列：配列番号５７１）であった。Spot 50α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 573 to 576 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was uncharacterized protein LOC100813859 (NCBI accession number NP_001239816.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 572, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 571).
スポット５１α：
配列番号５７９～５８２で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、14-3-3-like protein（NCBIアクセッション番号XP_003526571.1、アミノ酸配列：配列番号５７８、それをコードする塩基配列：配列番号５７７）であった。Spot 51α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 579-582 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was 14-3-3-like protein (NCBI accession number XP_003526571.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 578, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 577).
スポット５２α：
配列番号５８５～５８８で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、probable fructokinase-4（NCBIアクセッション番号XP_003543564.1、アミノ酸配列：配列番号５８４、それをコードする塩基配列：配列番号５８３）であった。Spot 52α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 585 to 588 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was probable fructokinase-4 (NCBI accession number XP_003543564.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 584, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 583).
スポット５３α：
配列番号５９１～５９７で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、triosephosphate isomerase isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_006593480.2、アミノ酸配列：配列番号５９０、それをコードする塩基配列：配列番号５８９）であった。Spot 53α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 591-597 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was triosephosphate isomerase isoform X1 (NCBI accession number XP_006593480.2, amino acid sequence: SEQ ID NO: 590, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 589).
配列番号６００～６０４で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、triosephosphate isomerase, cytosolic（NCBIアクセッション番号XP_003547334.1、アミノ酸配列：配列番号５９９、それをコードする塩基配列：配列番号５９８）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 600-604 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was triosephosphate isomerase, cytosolic (NCBI accession number XP_003547334.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 599, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 598).
スポット５４α：
配列番号６０７～６１１で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1（NCBIアクセッション番号XP_014627751.1、アミノ酸配列：配列番号６０６、それをコードする塩基配列：配列番号６０５）であった。Spot 54α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 607 to 611 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was superoxide dismutase [Fe], chloroplastic isoform X1 (NCBI accession number XP_014627751.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 606, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 605).
配列番号６１４～６１６で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、iron-superoxide dismutase（NCBIアクセッション番号NP_001237901.1、アミノ酸配列：配列番号６１３、それをコードする塩基配列：配列番号６１２）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 614-616 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was iron-superoxide dismutase (NCBI accession number NP_001237901.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 613, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 612).
スポット５５α：
配列番号６１９～６３５で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、51 kDa seed maturation protein precursor（NCBIアクセッション番号NP_001238138.1、アミノ酸配列：配列番号６１８、それをコードする塩基配列：配列番号６１７）であった。Spot 55α:
The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 619-635 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was 51 kDa seed maturation protein precursor (NCBI accession number NP_001238138.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 618, nucleotide sequence encoding it: SEQ ID NO: 617).
配列番号６３８～６４９で示されるアミノ酸配列が、質量分析で検出された。この質量データから同定されたタンパク質は、Lea protein precursor（NCBIアクセッション番号NP_001238201.1、アミノ酸配列：配列番号６３７、それをコードする塩基配列：配列番号６３６）であった。 The amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 638-649 were detected by mass spectrometry. The protein identified from this mass data was Lea protein precursor (NCBI accession number NP_001238201.1, amino acid sequence: SEQ ID NO: 637, base sequence encoding it: SEQ ID NO: 636).
本発明により、大豆に対するアレルギーの新規抗原、大豆に対するアレルギーの診断方法および診断キット、当該抗原を含む医薬組成物、ならびに当該抗原が除去又は低減された大豆または大豆加工品を提供することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a novel antigen for allergy to soybean, a method and a diagnostic kit for diagnosing allergy to soybean, a pharmaceutical composition containing the antigen, and a soybean or processed soybean product from which the antigen has been removed or reduced.
Claims (5)
（１）（１Ａ）ボウマン－バークタイププロテイナーゼインヒビターＤ－ＩＩ（Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II）又はその変異体であって、以下の（１Ａ-ａ）～（１Ａ-ｅ）のいずれかのタンパク質：
（１Ａ-ａ）配列番号２において１－８個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｂ）配列番号２で示されるアミノ酸配列と同一性が９０％以上のアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｃ）配列番号１において１－２４個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入又は付加された塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；
（１Ａ-ｄ）配列番号１で示される塩基配列と同一性が９０％以上の塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；もしくは
（１Ａ-ｅ）配列番号１で示される塩基配列に対し相補的な塩基配列からなる核酸と、０．１×ＳＳＣ～１×ＳＳＣ、６０℃～６５℃の条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列を含むタンパク質；又は
（１Ｂ）配列番号１７～２０のアミノ酸配列を全て含むタンパク質；
を抗原として含む、前記診断キット。 A diagnostic kit for soybean allergies, the following protein (1):
(1) (1A) Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II (Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II) or a mutant thereof, which is any of the following (1A-a) to (1A-e). Protein:
(1A-a) A protein containing an amino acid sequence in which 1-8 amino acids have been deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 2;
(1A-b) A protein containing an amino acid sequence having 90% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2;
(1A-c) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence in which 1 to 24 nucleotides are deleted, substituted, inserted or added in SEQ ID NO: 1;
(1A-d) A protein containing an amino acid sequence encoded by a base sequence having 90% or more identity with the base sequence shown by SEQ ID NO: 1; or (1A-e) complementary to the base sequence shown by SEQ ID NO: 1. A protein containing an amino acid sequence encoded by a nucleic acid consisting of a specific base sequence and a nucleic acid that hybridizes under the conditions of 0.1 × SSC to 1 × SSC and 60 ° C. to 65 ° C.; or (1B) SEQ ID NO: 17 to A protein containing all 20 amino acid sequences;
The diagnostic kit comprising.
（ｉ）対象から得られた試料を抗原に接触させる、ここで当該試料はＩｇ抗体が含まれる溶液である；
（ｉｉ）対象から得られた試料中のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合を検出する；
（ｉｉｉ）対象のＩｇＥ抗体と当該抗原との結合が検出された場合、対象が大豆アレルギーであることの指標が提供される；
を含み、ここで当該抗原は、請求項１において（１）として特定されるタンパク質である、前記方法。 A method of providing an index for diagnosing a subject's soybean allergy, the following steps:
(I) The sample obtained from the subject is brought into contact with the antigen, where the sample is a solution containing an Ig antibody;
(Ii) Detect the binding of IgE antibody to the antigen in the sample obtained from the subject;
(Iii) If binding of a subject's IgE antibody to the antigen is detected, an indicator that the subject is allergic to soybean is provided;
The above method, wherein the antigen is the protein specified as (1) in claim 1.
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