JP7000315B2 - Highly bound active HPV T cell receptor - Google Patents

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Description

本発明は、ヒトパピローマウイルス抗原に対する新規高結合活性抗原認識構築物に関する。本発明は、HPV16/18タンパク質E5、E6及びE7に選択的かつ特異的である新規なT細胞受容体(TCR)に基づく分子を提供する。本発明のTCR、及びそれに由来するHPV抗原結合断片はHPV感染の診断、治療及び予防に使用されるだけでなく、HPV感染が媒介する二次的疾患としてのHPV感染が引き起こしたがん、例えば、子宮頸がん、上咽頭がん(nasopharyngeal cancer)、頭頸部がん等の診断、治療及び予防に使用される。本発明のタンパク質をコードする核酸及びそれを発現する組換え細胞もさらに提供される。 The present invention relates to novel highly binding active antigen recognition constructs for human papillomavirus antigens. The present invention provides a novel T cell receptor (TCR) -based molecule that is selectively and specific for the HPV 16/18 proteins E5, E6 and E7. The TCR of the present invention, and HPV antigen-binding fragments derived thereto, are not only used for diagnosis, treatment and prevention of HPV infection, but also cancer caused by HPV infection as a secondary disease mediated by HPV infection, for example. , Cervical cancer, nasopharyngeal cancer, head and neck cancer, etc. Used for diagnosis, treatment and prevention. Further provided are nucleic acids encoding the proteins of the invention and recombinant cells expressing them.

TCRは、シグナル伝達の媒介に関与するCD3複合体のインバリアント(invariant)タンパク質に関連する免疫グロブリンスーパーファミリーのヘテロダイマー細胞表面タンパク質である。TCRはαβ型及びγδ型が存在し、それらは構造的には類似しているが、全く異なる解剖学的部位及び恐らく機能を有する。天然のヘテロ二量体αβTCRの細胞外部分は、2つのポリペプチドからなり、各々は膜近位定常ドメイン及び膜遠位可変ドメインを有する。各定常ドメイン及び可変ドメインは、鎖内ジスルフィド結合を含む。可変ドメインは、抗体の相補性決定領域(CDR)に類似した高度に多型性のループを含む。TCR遺伝子療法の使用は、多くの現在のハードルを克服する。これにより、患者自身のT細胞に所望の特異性を与え、短期間に十分な数のT細胞を生成し、それらの消耗を回避することが可能になる。TCRは、セントラルメモリー T細胞又は幹細胞の特徴を有するT細胞に変換され、移植(transfer)時の持続性及び機能をより確実にすることができる。TCR改変(TCR-engineered)T細胞は、化学療法又は放射線照射によってリンパ球減少症を引き起こす患者に注入され、効率的な生着を可能にするが、免疫抑制を阻害する。 The TCR is a heterodimeric cell surface protein of the immunoglobulin superfamily associated with the invariant protein of the CD3 complex involved in the mediation of signal transduction. There are αβ and γδ types of TCRs, which are structurally similar but have completely different anatomical sites and possibly functions. The extracellular portion of the native heterodimer αβTCR consists of two polypeptides, each with a membrane proximal constant domain and a membrane distal variable domain. Each constant domain and variable domain contains an intrachain disulfide bond. Variable domains contain highly polymorphic loops that resemble the complementarity determining regions (CDRs) of antibodies. The use of TCR gene therapy overcomes many current hurdles. This makes it possible to give the patient's own T cells the desired specificity, generate a sufficient number of T cells in a short period of time, and avoid their depletion. TCRs can be converted to central memory T cells or T cells with stem cell characteristics to further ensure persistence and function during transfer. TCR-engineered T cells are injected into patients who cause lymphopenia by chemotherapy or irradiation, allowing efficient engraftment but inhibiting immunosuppression.

ヒトパピローマウイルス(HPV)は、皮膚及び/又は粘膜上皮に感染する、小さな非エンベロープの二本鎖DNAウイルスである。100を超えるHPV遺伝子型が存在することが知られている。男性及び女性の肛門生殖器管に感染する、粘液分泌性であるHPVのサブセットは、最も一般的な性感染ヒト病原体である。これらの性的に伝播する粘膜親和性HPVはそれらの発がん性により、高いリスク(HPV16及びHPV18)又は低いリスク(HPV6 及び HPV11)として分類される。高リスク遺伝子型は、子宮頸がんの100%近くを含む肛門生殖器がんと因果関係があり、これは世界の女性のがんによる死亡原因の第2位の原因である。 Human papillomavirus (HPV) is a small, non-enveloped double-stranded DNA virus that infects the skin and / or mucosal epithelium. It is known that there are over 100 HPV genotypes. A subset of mucous secretory HPV that infects the anal genital tract of men and women is the most common sexually transmitted human pathogen. These sexually transmitted mucosal affinity HPVs are classified as high risk (HPV16 and HPV18) or low risk (HPV6 and HPV11) depending on their carcinogenicity. High-risk genotypes are causally associated with anal genital cancer, including nearly 100% of cervical cancers, which is the second leading cause of cancer death in women worldwide.

発がん性HPVの持続性は、子宮頸部前がん及びがんの発生に必要である。しかしながら、ウイルスの持続性及び腫瘍原性の進行を決定する因子は完全には理解されていない。ウイルス感染後の子宮頸部発がんの初期事象は、高リスクHPV型が感染ケラチノサイトにおけるウイルス遺伝子発現の転写制御を無効にする特異的変化を受けるという事実に依存する。これらの細胞制御機能の不活性化は初期ウイルス遺伝子E6及びE7の転写調節解除を可能にし、それによって細胞増殖、アポトーシスの阻害、分化の再プログラミング及び染色体不安定性を引き起こす。これらの変化は、エピソームHPVゲノムの宿主細胞の染色体への組み込みを支援することができ、及びウイルス遺伝子E6及びE7のさらなる過剰発現に貢献し、子宮頸部発がんの初期段階におけるE7がんタンパク質レベルの上昇をもたらす。 Persistence of carcinogenic HPV is required for precervical cancer and the development of cancer. However, the factors that determine the persistence and progression of tumorigenicity of the virus are not fully understood. The initial event of cervical carcinogenesis after viral infection depends on the fact that high-risk HPV types undergo specific changes that abolish the transcriptional regulation of viral gene expression in infected keratinocytes. Inactivation of these cell regulatory functions allows transcriptional deregulation of the early viral genes E6 and E7, thereby causing cell proliferation, inhibition of apoptosis, differentiation reprogramming and chromosomal instability. These changes can support the integration of the episome HPV genome into the chromosomes of host cells and contribute to further overexpression of the viral genes E6 and E7, E7 cancer protein levels in the early stages of cervical carcinogenesis. Brings a rise in.

ウイルスのがんタンパク質E6及びE7が発がんにおいて決定的に重要であることは、高リスクE7タンパク質が高リスクE6と協力して、インビトロでヒト初代ケラチノサイトを効率的に不死化できることによってさらに証明された。さらに、子宮頸がん細胞の形質転換された表現型を誘導及び維持するためには、E6及びE7発がん遺伝子の一貫した過剰発現が必要である。 The crucial importance of viral cancer proteins E6 and E7 in carcinogenesis has been further demonstrated by the ability of high-risk E7 proteins to work with high-risk E6 to efficiently immortalize primary human keratinocytes in vitro. .. In addition, consistent overexpression of the E6 and E7 carcinogenic genes is required to induce and maintain the transformed phenotype of cervical cancer cells.

従って、E6及びE7タンパク質の検出は優れた診断ツールであると思われる。様々な抗体が当技術分野で既に知られているが、それらは低感受性若しくは低特異性を示すか、又は様々なHPV型のE7タンパク質と交差反応すると記載されている。また、ポリクローナル抗体は1体の動物で限られた量しか産生することができないので、バッチ間の違いがある。E7タンパク質に対する非常に特異的かつ高感度のモノクローナル抗体を産生することの困難性は、主にE7タンパク質の低い免疫原性によるものである。 Therefore, detection of E6 and E7 proteins appears to be an excellent diagnostic tool. Various antibodies are already known in the art, but they have been described as exhibiting low sensitivity or low specificity or cross-reactive with various HPV-type E7 proteins. Also, there are differences between batches because polyclonal antibodies can only be produced in limited quantities in a single animal. The difficulty in producing highly specific and sensitive monoclonal antibodies to the E7 protein is primarily due to the low immunogenicity of the E7 protein.

従って、本発明の目的の一つは前述の困難性を克服することであり、そして、費用対効果の高い、迅速かつ信頼性の高いHPV感染の診断のための、非常に特異的でより高感度な手段、例えば、E5、E6又はE7等の初期HPVタンパク質の存在又は非存在の検出を介する手段、を提供することである。 Therefore, one of the objects of the present invention is to overcome the above-mentioned difficulties and is very specific and higher for cost-effective, rapid and reliable diagnosis of HPV infection. It is to provide a sensitive means, eg, a means through the detection of the presence or absence of an early HPV protein such as E5, E6 or E7.

最も一般的な2つの高リスクHPVに対する有効な予防ワクチンが入手可能であるが、高額であり、社会的な受容の問題、及び、HPV関連肛門生殖器がんが最も一般的に見られる特に発展途上国の女性に、このワクチンの利用可能性を制限する可能性があるワクチン接種が可能な医療制度の限界がある。それゆえ、HPV感染及び子宮頸がんのようなHPV感染に起因するがんを標的とするための直接的な治療法を明らかにする必要性が依然として存在する。従って、本発明が解決すべきもう一つの技術的課題は、HPV介在性疾患の治療及び予防における治療的アプローチに使用される、効率的かつ高結合活性T細胞受容体に基づく分子を提供することである Effective prophylactic vaccines against the two most common high-risk HPVs are available, but they are expensive, social acceptance problems, and HPV-related anal genital cancer are the most common, especially developing. There are limits to the vaccination available to women in the country that may limit the availability of this vaccine. Therefore, there remains a need to clarify direct treatments for targeting cancers resulting from HPV infections and HPV infections such as cervical cancer. Therefore, another technical challenge to be solved by the present invention is to provide an efficient and highly binding active T cell receptor-based molecule used in therapeutic approaches in the treatment and prevention of HPV-mediated diseases. Is

上記課題は配列番号9~28から選択されるアミノ酸配列と少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%又は100%の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む抗原認識構築物による第一の態様で解決される。 The above task is an amino acid sequence having at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% or 100% sequence identity with the amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 9 to 28. It is solved in the first aspect by an antigen recognition construct comprising.

配列番号9~28は、本出願の実施例(実施例1~9)の節の表に示されるTCR T1~T9 CDR3領域に対応する。本発明のHPV応答性TCRは、HPV抗原に対する最先端のTCRと比較して非常に貪欲(avid)であり驚くべき発見だった。場合によって、本発明は、最先端のTCRと比較して、より特異的であり、より敏感であり、より選択的であり、及び/又はより貪欲(avid)である。本発明の好ましい一態様において、抗原認識構築物は配列番号9~28から選択されるアミノ酸配列と少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%又は100%の配列同一性を持つ相補鎖決定領域3(CDR3)を含む。 SEQ ID NOs: 9-28 correspond to the TCR T1-T9 CDR3 regions shown in the tables in the Examples (Examples 1-9) sections of the present application. The HPV-responsive TCR of the present invention was a surprising discovery as it was highly avid compared to the state-of-the-art TCR for HPV antigens. In some cases, the invention is more specific, more sensitive, more selective, and / or more avid compared to the state-of-the-art TCR. In a preferred embodiment of the invention, the antigen recognition constructs are amino acid sequences selected from SEQ ID NOs: 9-28 and at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% or 100. Includes complementarity determining regions 3 (CDR3) with% sequence identity.

本発明の抗原認識構築物のCDR3は突然変異していてもよい。配列番号9~28のCDR3配列の変異は、3つ以下の、好ましくは2つ以下の、最も好ましくは1アミノ酸残基の置換、欠失、付加、又は挿入を好ましくは含む。 CDR3 of the antigen recognition construct of the present invention may be mutated. Mutations in the CDR3 sequences of SEQ ID NOs: 9-28 preferably include substitutions, deletions, additions, or insertions of 3 or less, preferably 2 or less, most preferably one amino acid residue.

別のさらなる若しくは代替の態様において、抗原認識構築物はHPV抗原認識構築物である。 In another further or alternative embodiment, the antigen recognition construct is an HPV antigen recognition construct.

別のさらなる若しくは代替の態様において、抗原認識構築物はCDR1及びCDR2ドメイン配列をさらに含んでいてもよい。可変ドメイン内では、CDR1及びCDR2はポリペプチド鎖の可変(V)領域に見出され、CDR3は可変(V)領域の一部と、ダイバーシティ(D)領域及びジョイニング(J)領域のすべてを含む。CDR3は最も可変であり、抗原を認識に関与する主要なCDRである。CDR1及びCDR2配列は、ヒト可変鎖対立遺伝子のCDR配列から選択され得る。 In another further or alternative embodiment, the antigen recognition construct may further comprise the CDR1 and CDR2 domain sequences. Within the variable domain, CDR1 and CDR2 are found in the variable (V) region of the polypeptide chain, and CDR3 covers part of the variable (V) region and all of the diversity (D) and joining (J) regions. include. CDR3 is the most variable and is the major CDR involved in antigen recognition. The CDR1 and CDR2 sequences can be selected from the CDR sequences of the human variable chain allele.

天然のアルファ-ベータヘテロダイマーTCRはアルファ鎖及びベータ鎖を持つ。それぞれの鎖は可変領域、ジョイニング領域及び定常領域を含み、ベータ鎖は通常、可変領域とジョイニング領域の間に短いダイバーシティ領域を含むが、このダイバーシティ領域はしばしばジョイニング領域の一部とみなされる。それぞれの可変領域はフレームワーク配列に埋め込まれている3つのCDR(相補鎖決定領域)を含み、1つがCDR3と呼ばれる高頻度可変領域である。フレームワーク領域、CDR1配列及びCDR2配列によって区別される、及び一部CDR3配列によって定義される、数種類のアルファ鎖可変(Vα)領域及び数種類のベータ鎖可変(Vβ)領域がある。Vαタイプは、IMGT命名法では固有のTRAV番号によって参照され、Vβタイプは固有のTRBV番号によって参照される。 The native alpha-beta heterodimer TCR has alpha and beta chains. Each chain contains a variable region, a joining region and a stationary region, and the beta chain usually contains a short diversity region between the variable region and the joining region, but this diversity region is often regarded as part of the joining region. Is done. Each variable region contains three CDRs (complementarity determining regions) embedded in the framework sequence, one of which is a high frequency variable region called CDR3. There are several alpha chain variable (Vα) regions and several beta chain variable (Vβ) regions, distinguished by framework regions, CDR1 and CDR2 sequences, and partially defined by CDR3 sequences. The Vα type is referred to by a unique TRAV number in IMGT nomenclature, and the Vβ type is referred to by a unique TRBV number.

従って、もう一つの又は代替の態様において、本発明の抗原認識構築物は、CDR3配列と共にそれぞれの可変鎖アリルが示される実施例の節の表で提供される組合せのCDR1、CDR2、CDR3を含む。従って、本発明の好ましい抗原認識構築物は少なくとも1つ、好ましくは全てのCDR配列、CDR1、CDR2及びCDR3を含む。 Thus, in another or alternative embodiment, the antigen recognition construct of the invention comprises the combinations CDR1, CDR2, CDR3 provided in the table of Examples section where the respective variable chain alleles are shown along with the CDR3 sequence. Therefore, preferred antigen recognition constructs of the invention include at least one, preferably all CDR sequences, CDR1, CDR2 and CDR3.

本発明の一態様において、抗原認識構築物はヒトパピローマウイルス(HPV)抗原に特異的に結合し、好ましくは、HPV抗原はHPV16 E5、HPV16 E6、 HPV16 E7、HPV18 E6及びHPV18 E7から選択されるタンパク質である。 In one embodiment of the invention, the antigen recognition construct specifically binds to the human papillomavirus (HPV) antigen, preferably the HPV antigen is a protein selected from HPV16 E5, HPV16 E6, HPV16 E7, HPV18 E6 and HPV18 E7. be.

本願明細書において、抗原に与えられる用語「特異性」又は「抗原特性」又は「特異的」は、抗原認識構築物が前記抗原に、好ましくはHPV抗原に、より好ましくは高結合活性で、特異的に結合可能であること、を意味する。例えば、TCRを発現するT細胞が低濃度(例えば、約10-11mol/l、10-10mol/l、10-9mol/l、10-8mol/l、10-7mol/l、10-6mol/l、 10-5mol/l)のHPV抗原(例えば、HPV16 E5、E6及びE7抗原)でパルスした標的細胞標的細胞との共培養の際に少なくとも約200 pg/ml以上(例えば、250 pg/ml以上、300 pg/ml以上、400 pg/ml以上、500 pg/ml以上、600 pg/ml以上、700 pg/ml以上、1000 pg ml以上、2,000 pg/ml以上、2,500 pg/ml 以上、5,000 pg/ml 以上)のインターフェロンγ(IFN-γ)を分泌する場合、TCRはHPV抗原に対する「抗原特異性」を有すると考えられ得る。 代替的に又は付加的に、TCRを発現するT細胞が、低濃度のHPV抗原でパルスした標的細胞との共培養の際に、IFN-γの非形質導入バックグラウンドレベルの少なくとも2倍のIFN-γを分泌する場合、TCRはHPVに対して「抗原特異性」を有すると考えられ得る。本明細書で記載されるそのような「特異性」は例えばELISAで分析可能である。 As used herein, the term "specificity" or "antigen property" or "specific" given to an antigen means that the antigen recognition construct is specific to said antigen, preferably to HPV antigen, more preferably to high binding activity. It means that it can be combined with. For example, low concentrations of T cells expressing TCR (eg, about 10 -11 mol / l, 10 -10 mol / l, 10 -9 mol / l, 10 -8 mol / l, 10 -7 mol / l, Target cells pulsed with 10 -6 mol / l, 10 -5 mol / l HPV antigens (eg, HPV16 E5, E6 and E7 antigens) At least about 200 pg / ml or more when co-cultured with target cells (eg, HPV16 E5, E6 and E7 antigens) For example, 250 pg / ml or more, 300 pg / ml or more, 400 pg / ml or more, 500 pg / ml or more, 600 pg / ml or more, 700 pg / ml or more, 1000 pg ml or more, 2,000 pg / ml or more, 2,500 When secreting interferon γ (IFN-γ) of pg / ml or more and 5,000 pg / ml or more), TCR can be considered to have “antigen specificity” for HPV antigen. Alternatively or additionally, TCR-expressing T cells are at least twice as high as the non-transfection background level of IFN-γ when co-cultured with target cells pulsed with low concentrations of HPV antigen. When secreting -γ, the TCR can be considered to have "antigen specificity" for HPV. Such "specificity" described herein can be analyzed, for example, by ELISA.

本発明の代替の又は別の態様において、抗原認識構築物はヒトパピローマウイルス(HPV)抗原に選択的に結合し、好ましくはHPV抗原はHPV16 E5、HPV16 E6、HPV16 E7、HPV18 E6及びHPV18 E7から選択されるタンパク質である。 In an alternative or alternative embodiment of the invention, the antigen recognition construct selectively binds to the human papillomavirus (HPV) antigen, preferably the HPV antigen is selected from HPV16 E5, HPV16 E6, HPV16 E7, HPV18 E6 and HPV18 E7. It is a protein.

用語「選択性」又は「選択的認識/結合」は好ましくは1つの特異的エピトープのみを選択的に認識又は結合し、好ましくは別のエピトープに対して交差反応性を示さないか又は実質的に示さない、抗体またはT細胞受容体の特性を意味すると理解される。好ましくは、「選択性」又は「選択的認識/結合」は、抗原認識構築物(例えばTCR)が好ましくは1つの特異的エピトープのみを選択的に認識又は結合し、好ましくは別のエピトープに対して交差反応性を示さないか又は実質的に示さないことを意味し、前記エピトープは、抗原認識構築物が別のエピトープ及び別のタンパク質に対して交差反応性を示さないか又は実質的に示さないように、1つのタンパク質に対して特有である。 The terms "selectivity" or "selective recognition / binding" preferably selectively recognize or bind only one specific epitope and preferably show no or substantially cross-reactivity to another epitope. Not shown, understood to mean the properties of an antibody or T cell receptor. Preferably, "selectivity" or "selective recognition / binding" is such that the antigen recognition construct (eg, TCR) selectively recognizes or binds to only one specific epitope, preferably to another epitope. Means that they do not show or substantially do not show cross-reactivity, such that the epitope does not show or substantially does not show cross-reactivity to another epitope and another protein by the antigen recognition construct. In addition, it is unique to one protein.

本発明に係る抗原認識構築物は、抗体又はその誘導体若しくはその断片、又は、T細胞受容体(TCR)又はその誘導体若しくはその断片から好ましくは選択される。本発明の抗体又はTCRの誘導体又は断片は、オリジナル分子の持つ抗原への結合/認識能力を、特に、上記説明の通りの特異性及び/又は選択性を、好ましくは保持するものである。 The antigen recognition construct according to the present invention is preferably selected from an antibody or a derivative thereof or a fragment thereof, or a T cell receptor (TCR) or a derivative thereof or a fragment thereof. The antibody or derivative or fragment of the TCR of the present invention preferably retains the binding / recognition ability of the original molecule to the antigen, particularly the specificity and / or selectivity as described above.

本発明の一態様において、本発明のTCRは主要組織適合抗原(MHC)クラスIに依存する態様でHPV抗原を認識することができる。本明細書において「MHCクラスIに依存する態様」とは、TCRがMHCクラスI分子のある状況下でHPV抗原に結合すると免疫応答を誘導することを意味する。該MHCクラスI分子は当業者に知られるいかなるMHCクラスI分子でもよく、例えば、HLA-A分子が挙げられる。本発明の好ましい態様において、 該MHCクラスI分子はHLA-A分子であり、好ましくはHLA-A2.01である。 In one aspect of the invention, the TCR of the invention is capable of recognizing HPV antigens in a manner that depends on major histocompatibility complex (MHC) class I. As used herein, the term "MHC class I dependent embodiment" means that TCR induces an immune response when it binds to the HPV antigen under certain circumstances of MHC class I molecules. The MHC class I molecule may be any MHC class I molecule known to those of skill in the art, including, for example, the HLA-A molecule. In a preferred embodiment of the invention, the MHC class I molecule is an HLA-A molecule, preferably HLA-A2.01.

以下のエピトープ(配列番号1~9)は実施例のTCRを産生するのに使用された: YIIFVYIPL (HPV 16 E563-71)、KLPQLCTEL (HPV 16 E611-19) 、TIHDIILECV (HPV 16 E629-38) 、YMLDLQPET (HPV 16 E711-19) 、YMLDLQPETT (HPV 16 E711-20) 、TLGIVCPI (HPV 16 E786-93) 、KCIDFYSRI (HPV 18 E667-75) 、FQQLFLNTL (HPV 18 E786-94)。従って、抗原認識構築物が記載される本発明の一つの態様では、抗原認識構築物が上記HPVエピトープの一つに特異的及び/又は選択的である。本願実施例の節で記載されるとおり、どのCDR3が存在するかに依存して、本発明の抗原認識構築物がそれぞれの対応するエピトープに特異的及び/又は選択的に結合することは当業者に明らかである。 The following epitopes (SEQ ID NOs: 1-9) were used to produce the TCR of the Examples: YIIFVYIPL (HPV 16 E5 63-71 ), KLPQLCTEL (HPV 16 E6 11-19 ), TIHDIILECV (HPV 16 E6 29 ). -38 ), YMLDLQPET (HPV 16 E7 11-19 ), YMLDLQPETT (HPV 16 E7 11-20 ), TLGIVCPI (HPV 16 E7 86-93 ), KCIDFYSRI (HPV 18 E6 67-75 ), FQQLFLNTL (HPV 18 E7 86 ) -94 ). Thus, in one aspect of the invention in which the antigen recognition construct is described, the antigen recognition construct is specific and / or selective for one of the HPV epitopes. It is to those of skill in the art that the antigen recognition constructs of the invention specifically and / or selectively bind to their respective corresponding epitopes, depending on which CDR3 is present, as described in the Examples section of the present application. it is obvious.

本発明は、一本鎖抗原認識構築物及び二本鎖認識構築物の両方を提供する。 The present invention provides both single-stranded antigen recognition constructs and double-stranded antigen recognition constructs.

本発明は、抗原認識構築物又はその断片若しくはその誘導体としてのTCRを特に提供する。TCRは好ましくはヒトであり、TCRはヒトTCR遺伝子座由来で生成されるものと理解され、そしてこのことから、ヒトTCR配列を含むものと理解される。さらに、本発明のTCRは、ヒト起源であり、HPV抗原を特異的に認識することを特徴とすることができる。この点における「起源」という用語は、それぞれの「元の」配列に由来するがアミノ酸の改変を含む変異した配列を指す。例えば、ヒト起源のTCRは、非ヒト種のTCR配列を含んでもよく、ヒトTCR配列に人工的に導入されたものでもよい。 The present invention specifically provides a TCR as an antigen recognition construct or a fragment thereof or a derivative thereof. The TCR is preferably human, and it is understood that the TCR is produced from the human TCR locus, and from this it is understood to contain the human TCR sequence. Furthermore, the TCRs of the present invention are of human origin and can be characterized by specifically recognizing HPV antigens. The term "origin" in this regard refers to a mutated sequence derived from each "original" sequence but containing amino acid modifications. For example, a TCR of human origin may contain a TCR sequence of a non-human species or may be artificially introduced into a human TCR sequence.

本発明の付加的又は代替的な別の態様は免疫反応を誘導する上記抗原認識構築物を提供し、好ましくは、免疫反応はインターフェロン(IFN)γレベルを増加することにより特徴付けられる。 Another additional or alternative embodiment of the invention provides the antigen recognition construct that induces an immune response, preferably characterized by increasing interferon (IFN) γ levels.

本発明のTCRは、一本鎖α分子若しくは一本鎖β分子として、又はα鎖及びβ鎖の両方、又はγ鎖及びδ鎖の両方から構成される二本鎖構築物として提供され得る。従って、本発明のTCRは配列番号9、10、12、14、16、18、21、23、25、 27から選択される1つのアミノ酸配列と少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、又は100%配列同一性を有するアルファ鎖CDR3を、及び/又は、配列番号11、13、15、17、19、20、22、24、26、28から選択されるアミノ酸配列と少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、又は100%配列同一性を有するベータ鎖CDR3を好ましくは含む。 The TCR of the present invention may be provided as a single-stranded α molecule or a single chain β molecule, or as a double chain construct composed of both α chain and β chain, or both γ chain and δ chain. Therefore, the TCR of the present invention is one amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 9, 10, 12, 14, 16, 18, 21, 23, 25, 27 and at least 50%, 60%, 70%, 80%, Alpha chain CDR3 with 90%, 95%, 98%, 99%, or 100% sequence identity and / or SEQ ID NOs: 11, 13, 15, 17, 19, 20, 22, 24, 26, 28. It preferably comprises beta chain CDR3 having at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, or 100% sequence identity with the amino acid sequence selected from.

好ましくは二重鎖TCR又はその抗原結合断片は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号9に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号11に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号10に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号11に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号12に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号13に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号14に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号15に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号16に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号17に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号18に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号19に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号18に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号20に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号21に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号22に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号23に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号24に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号25に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号26に示されるアミノ酸配列を含み;又は、第一ポリペプチド鎖において、配列番号27に示されるアミノ酸配列を含み、及び、第二ポリペプチド鎖において、配列番号28に示されるアミノ酸配列を含む。前記二重鎖TCR又はその抗原結合断片のうちのいずれか1つは本発明の好ましいTCRである。いくつかの態様において、本発明の二重鎖TCR のCDR3は変異していてもよい。上記提供される配列番号9~28のCDR3の変異は3つ以下、好ましくは2つ、最も好ましくは1つのアミノ酸残基の置換、欠失、付加、又は挿入を含む。いくつかの態様において、第一ポリペプチド鎖はTCRα鎖又はγ鎖、かつ、第二ポリペプチド鎖はTCRβ鎖又はδ鎖であってもよい。好ましくはαβ又はγδの組合せのTCRである。 Preferably, the double chain TCR or an antigen-binding fragment thereof comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9 in the first polypeptide chain and the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11 in the second polypeptide chain. ; Or, in the first polypeptide chain, the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10 is contained, and in the second polypeptide chain, the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11 is contained; or in the first polypeptide chain. Includes the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13 in the second polypeptide chain; or comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 14 in the first polypeptide chain. And, in the second polypeptide chain, the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15; or in the first polypeptide chain, the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16 and in the second polypeptide chain. Includes the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17; or contains the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 in the first polypeptide chain and contains the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 in the second polypeptide chain. ; Or, in the first polypeptide chain, the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 18 is contained, and in the second polypeptide chain, the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20 is contained; or in the first polypeptide chain. Includes the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21 and comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22 in the second polypeptide chain; or comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23 in the first polypeptide chain. And, in the second polypeptide chain, the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24; or in the first polypeptide chain, the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25, and in the second polypeptide chain. Containing the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26; or comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27 in the first polypeptide chain and comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28 in the second polypeptide chain. .. Any one of the double chain TCRs or antigen-binding fragments thereof is the preferred TCR of the present invention. In some embodiments, the CDR3 of the double chain TCR of the invention may be mutated. The mutations in CDR3 of SEQ ID NOs: 9-28 provided above include substitutions, deletions, additions, or insertions of three or less, preferably two, most preferably one amino acid residues. In some embodiments, the first polypeptide chain may be a TCRα or γ chain and the second polypeptide chain may be a TCRβ or δ chain. The TCR is preferably a combination of αβ or γδ.

TCR又はその抗原結合断片は TCRα鎖及びTCRβ鎖、又はγ鎖及びδ鎖から構成される。そのような二本鎖TCRはそれぞれの鎖内にCDR1配列、CDR2配列及びCDR3配列を含む可変領域を含む。TCRは配列番号29及び配列番号31(T1a);又は配列番号30及び配列番号31(T1b);又は配列番号32及び配列番号33(T2);又は配列番号34及び配列番号35(T3);又は配列番号36及び配列番号37(T4);又は配列番号38及び配列番号39(T5a);又は配列番号38及び配列番号40(T5b);又は配列番号41及び配列番号42(T6);又は配列番号43及び配列番号44(T7);又は配列番号45及び配列番号46(T8);又は配列番号47及び配列番号48(T9)に示される可変鎖アミノ酸配列に含まれるCDR1~3を含む。 The TCR or its antigen-binding fragment is composed of a TCRα chain and a TCRβ chain, or a γ chain and a δ chain. Such a double-stranded TCR contains a variable region containing the CDR1 sequence, the CDR2 sequence and the CDR3 sequence within each strand. The TCRs are SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 31 (T1a); or SEQ ID NO: 30 and SEQ ID NO: 31 (T1b); or SEQ ID NO: 32 and SEQ ID NO: 33 (T2); or SEQ ID NO: 34 and SEQ ID NO: 35 (T3); or SEQ ID NO: 36 and SEQ ID NO: 37 (T4); or SEQ ID NO: 38 and SEQ ID NO: 39 (T5a); or SEQ ID NO: 38 and SEQ ID NO: 40 (T5b); or SEQ ID NO: 41 and SEQ ID NO: 42 (T6); or SEQ ID NO: 43 and SEQ ID NO: 44 (T7); or SEQ ID NO: 45 and SEQ ID NO: 46 (T8); or CDR1-3 contained in the variable chain amino acid sequences set forth in SEQ ID NO: 47 and SEQ ID NO: 48 (T9).

本発明のいくつかの態様はTCR又はTCRα鎖及びTCRβ鎖から構成されるその断片に関連し、前記TCRはα鎖及びβ鎖、それぞれ配列番号29及び配列番号31(T1a);又はそれぞれ配列番号30及び配列番号31(T1b);又はそれぞれ配列番号32及び配列番号33(T2);又はそれぞれ配列番号34及び配列番号35(T3);又はそれぞれ配列番号36及び配列番号37(T4);又はそれぞれ配列番号38及び配列番号39(T5a);又はそれぞれ配列番号38及び配列番号40(T5b);又はそれぞれ配列番号41及び配列番号42(T6);又はそれぞれ配列番号43及び配列番号44(T7);又はそれぞれ配列番号45及び配列番号46(T8);又はそれぞれ配列番号47及び配列番号48(T9)に示されるα鎖及びβ鎖の可変領域配列を含む。 Some aspects of the invention relate to a TCR or fragment thereof composed of a TCRα chain and a TCRβ chain, wherein the TCR is the α chain and the β chain, SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 31 (T1a); or SEQ ID NO: respectively. 30 and SEQ ID NO: 31 (T1b); or SEQ ID NO: 32 and SEQ ID NO: 33 (T2); or SEQ ID NO: 34 and SEQ ID NO: 35 (T3), respectively; or SEQ ID NO: 36 and SEQ ID NO: 37 (T4); or respectively. SEQ ID NO: 38 and SEQ ID NO: 39 (T5a); or SEQ ID NO: 38 and SEQ ID NO: 40 (T5b), respectively; or SEQ ID NO: 41 and SEQ ID NO: 42 (T6); or SEQ ID NO: 43 and SEQ ID NO: 44 (T7), respectively; Alternatively, it comprises the variable region sequences of the α and β chains set forth in SEQ ID NO: 45 and SEQ ID NO: 46 (T8); or SEQ ID NO: 47 and SEQ ID NO: 48 (T9), respectively.

本発明のTCRは任意の適切な種、例えばヒト又はマウスに由来する定常領域をさらに含んでよい。本発明の一態様において、本発明のTCRはヒト定常領域をさらに含む。いくつかの好ましい態様において、本発明のTCRの定常領域は、例えばTCRの安定性を増大させる可能性のあるマウスの配列を導入することによって、わずかに変更されてもよい。 The TCRs of the invention may further comprise constant regions derived from any suitable species, such as humans or mice. In one aspect of the invention, the TCR of the invention further comprises a human constant region. In some preferred embodiments, the constant region of the TCR of the invention may be modified slightly, for example by introducing a mouse sequence that may increase the stability of the TCR.

本明細書において、抗原認識構築物、又はTCR、又は本明細書に記載される(例えば相補鎖決定領域(CDR)、可変領域、定常領域、α鎖、及び/又はβ鎖などの)TCRの任意の構成要素に言及する場合、用語「マウス」又は「ヒト」は、それぞれマウス又はヒトの再構成されていないTCR遺伝子座に由来するTCR(又はその構成要素)を意味する。 As used herein, an antigen recognition construct, or TCR, or any of the TCRs described herein (eg, such as complementarity determining regions (CDRs), variable regions, constant regions, α chains, and / or β chains). When referring to a component of, the term "mouse" or "human" means a TCR (or component thereof) derived from an unreconstructed TCR locus of mouse or human, respectively.

本発明の一態様において、キメラTCRはTCRのα鎖及びTCRのβ鎖を含むことができる。本発明のキメラTCRのα鎖及びβ鎖のそれぞれは独立して任意のアミノ酸配列を含むことができる。好ましくは、上述のとおり、α鎖はヒトのα鎖の可変領域及びマウスのα鎖の定常領域を含む。 In one aspect of the invention, the chimeric TCR can include the α chain of the TCR and the β chain of the TCR. Each of the α-chain and β-chain of the chimeric TCR of the present invention can independently contain an arbitrary amino acid sequence. Preferably, as described above, the α chain comprises a variable region of the human α chain and a constant region of the mouse α chain.

本発明のTCRの一つの態様は上記態様に係るヒト可変領域及びヒト定常領域を含む。 One aspect of the TCR of the present invention includes a human variable region and a human constant region according to the above aspect.

本発明のTCRは一本鎖TCR(scTCR)として提供されてもよい。scTCRは第一TCR鎖(例えばα鎖)の可変領域のポリペプチド及び全体(全長)第二TCR鎖(例えばβ鎖)のポリペプチド、又はその逆であってもよい、を含んでもよい。さらに、scTCRは任意で2つ以上のポリペプチドを一緒に連結する1つ以上のリンカーを含むことができる。本明細書に記載されるとおり、リンカーは、例えば、2つの一本鎖を連結するペプチドであり得る。本発明のscTCRの一例としては、例えばIL-2、IL-7又はIL-15のようなヒトサイトカインと融合されるものとしても提供される。 The TCR of the present invention may be provided as a single-stranded TCR (scTCR). The scTCR may include a polypeptide in the variable region of the first TCR chain (eg, α chain) and a polypeptide of the entire (overall) second TCR chain (eg, β chain), or vice versa. In addition, the scTCR can optionally include one or more linkers that link the two or more polypeptides together. As described herein, the linker can be, for example, a peptide that links two single strands. As an example of scTCR of the present invention, it is also provided as a fusion with a human cytokine such as IL-2, IL-7 or IL-15.

本発明に係る抗原認識構築物は、少なくとも2つのscTCR分子を含む、多量体複合体の形態で提供することもでき、前記scTCR分子はそれぞれ、少なくとも1つのビオチン部分と融合されるものであって、前記scTCR分子はビオチン-ストレプトアビジン相互作用によって相互連結され、前記多量体複合体の形成を可能にするものである。多量体TCRの生成に関する同様のアプローチも可能であり本開示に含まれる。また、本発明のscTCRを2つを超えて含む高次の多量体複合体も提供される。 The antigen recognition construct according to the present invention can also be provided in the form of a multimeric complex containing at least two scTCR molecules, each of which is fused to at least one biotin moiety. The scTCR molecules are interconnected by a biotin-streptavidin interaction, allowing the formation of the multimer complex. Similar approaches to the generation of multimer TCRs are possible and are included in the present disclosure. Also provided are higher order multimer complexes containing more than two scTCRs of the invention.

本発明の目的のため、TCRは少なくとも1つのTCRアルファ及び/又はTCRベータ可変ドメインを有する部分である。一般的に、これらはTCRアルファ可変ドメイン及びTCRβ可変ドメインの両方を含む。これらはαβヘテロダイマー又は一本鎖形態であってもよい。養子免疫療法での使用のため、αβヘテロダイマーTCRは、例えば、細胞質及び膜貫通ドメインの両方を有する全長鎖でトランスフェクションされてもよい。所望の場合、それぞれの定常ドメインの残基間に導入されたジスルフィド結合が存在していてもよい。 For the purposes of the present invention, a TCR is a portion having at least one TCR alpha and / or TCR beta variable domain. In general, these include both TCR alpha variable domains and TCR β variable domains. These may be in the αβ heterodimer or single-stranded form. For use in adoptive immunotherapy, the αβ heterodimer TCR may be transfected, for example, with a full-length chain having both a cytoplasm and a transmembrane domain. If desired, there may be disulfide bonds introduced between the residues of each constant domain.

本発明の第一の態様の一つの付加的な好ましい態様において、抗原認識構築物は上記TCRである。該TCRは好ましくは少なくとも1つのアルファ及び/又はベータTCR鎖を含み、前記TCRは配列番号22~39に示されるTCR鎖のいずれか1つに示されるアミノ酸配列、又は配列番号22~39に示されるアミノ酸配列と少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%又は100%同一性を有するアミノ酸配列を含む。 In one additional preferred embodiment of the first aspect of the invention, the antigen recognition construct is the TCR. The TCR preferably comprises at least one alpha and / or beta TCR chain, wherein said TCR is the amino acid sequence set forth in any one of the TCR chains set forth in SEQ ID NOs: 22-39, or set forth in SEQ ID NOs: 22-39. Contains an amino acid sequence having at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% or 100% identity with the amino acid sequence.

好ましい態様において、抗原認識構築物はヒトTCR又はその断片若しくはその誘導体である。ヒトTCR又はその断片若しくはその誘導体は対応するヒトTCR配列の50%超を含むTCRである。好ましくは、TCR配列のごく一部のみが人工起源であるか、又は他の種に由来する。しかしながら、例えば、定常ドメイン中のマウス配列を有するヒト由来のキメラTCRが有利であることが知られる。したがって、特に好ましいのは、それらの定常ドメインの細胞外部分にマウス配列を含む、本発明によるTCRである。 In a preferred embodiment, the antigen recognition construct is a human TCR or fragment thereof or a derivative thereof. A human TCR or fragment thereof or a derivative thereof is a TCR containing more than 50% of the corresponding human TCR sequence. Preferably, only a small portion of the TCR sequence is of artificial origin or of other species. However, for example, human-derived chimeric TCRs with mouse sequences in the constant domain are known to be advantageous. Therefore, particularly preferred is the TCR according to the invention, which comprises a mouse sequence in the extracellular portion of those constant domains.

このように、本発明の抗原認識構築物は、ヒト白血球抗原(HLA)依存的様式、好ましくはHLA-A02依存的様式でその抗原を認識することができることも好ましい態様である。本発明の文脈における用語「HLA依存的様式」は、抗原ペプチドがHLAによって提示される場合にのみ抗原認識構築物が該抗原に結合することを意味する。 As described above, it is also preferable that the antigen recognition construct of the present invention can recognize the antigen in a human leukocyte antigen (HLA) -dependent manner, preferably in an HLA-A02-dependent manner. The term "HLA-dependent mode" in the context of the present invention means that an antigen recognition construct binds to an antigen only if the antigen peptide is presented by HLA.

本発明の一態様における抗原認識構築物は、好ましくは免疫反応を誘導し、好ましくは該免疫反応はインターフェロン(IFN)γレベルを増大することによって特徴づけられる。 The antigen recognition construct in one embodiment of the invention is preferably characterized by inducing an immune response, preferably by increasing interferon (IFN) γ levels.

本願で提供されるものは、例えば、本願実施例の節で提供されるTCRのT1~T9のいずれか1つのような本開示のTCR(又はその機能的変異体)のいずれかの機能的部分を含むポリペプチドでもある。本明細書で使用される用語「ポリペプチド」は、オリゴペプチドを含み、1つ以上のペプチド結合によって連結されたアミノ酸の一本鎖をいう。本発明のポリペプチドに関し、その機能的部分は、その機能的部分が配列番号1~8に示されるHPV抗原に特異的に結合する場合、その部分であるTCR(又はその機能的変異体)の連続アミノ酸を含む任意の部分であり得る。「機能的部分」という用語は、TCR(又はその機能的変異体)に関して使用される場合、本発明のTCR(又はその機能的変異体)の任意の部分又は断片をいい、その部分又は断片はその一部(その親TCR又はその親機能的変異体)であるTCR(又はその機能的変異体)の生物学的活性を保持する。機能的部分は、例えば、HPV抗原(例えば配列番号1~8)に(例えばHLA-A2依存的様式で)特異的に結合する能力を保持するか、又は癌を検出、治療、若しくは予防する能力を保持するTCR(又はその機能的変異体)の部分を、親TCR(又はその機能的変異体)と類似する程度、同程度又はより高い程度に包含する。親TCR(又はその機能的変異体)に関し、その機能的部分は親TCR可変配列(又はその機能的変異体)の、例えば、約10%、25%、30%、50%、68%、80%、90%、95%以上を含むことができる。 What is provided herein is, for example, the functional portion of any one of the TCRs (or functional variants thereof) of the present disclosure, such as any one of T1 to T9 of the TCR provided in the Section of Examples of the present application. It is also a polypeptide containing. As used herein, the term "polypeptide" refers to a single chain of amino acids comprising an oligopeptide and linked by one or more peptide bonds. With respect to the polypeptides of the invention, the functional portion of the TCR (or functional variant thereof) that is the functional portion if it specifically binds to the HPV antigens set forth in SEQ ID NOs: 1-8. It can be any moiety that contains continuous amino acids. The term "functional portion" as used with respect to TCR (or a functional variant thereof) refers to any portion or fragment of the TCR (or functional variant thereof) of the invention, which portion or fragment. It retains the biological activity of a portion of it (its parent TCR or its parent functional variant), TCR (or its functional variant). The functional part retains, for example, the ability to specifically bind to HPV antigens (eg, SEQ ID NOs: 1-8) (eg, in an HLA-A2-dependent manner), or the ability to detect, treat, or prevent cancer. The portion of the TCR (or functional variant thereof) that retains the above is included to a degree similar to, similar to, or higher than that of the parent TCR (or functional variant thereof). With respect to the parent TCR (or its functional variant), its functional portion is, for example, about 10%, 25%, 30%, 50%, 68%, 80 of the parent TCR variable sequence (or its functional variant). Can include%, 90%, 95% or more.

機能的部分は、親TCR又はその機能的変異体のアミノ酸配列中に見出されない、付加的なアミノ酸をその部分のアミノ末端又はカルボキシ末端、又は両方の末端に含み得る。望ましくは、その付加的アミノ酸は、機能的部分の生物学的機能、例えばHPV抗原に特異的に結合すること、を妨げず、及び/又は癌等を検出、治療若しくは予防する能力を有する。より望ましくは、その付加的アミノ酸は親TCR又はその機能的変異体の生物学的活性と比較して、生物学的活性を増強する。 The functional moiety may contain additional amino acids not found in the amino acid sequence of the parent TCR or its functional variant at the amino or carboxy terminus of that moiety, or both. Desirably, the additional amino acid does not interfere with the biological function of the functional part, eg, specifically binding to the HPV antigen, and / or has the ability to detect, treat or prevent cancer or the like. More preferably, the additional amino acid enhances the biological activity as compared to the biological activity of the parent TCR or its functional variant.

ポリペプチドは、本発明のTCR又はその機能的変異体のα鎖及びβ鎖のいずれか一方又は両方の機能的部分、例えば本発明のTCR又はその機能的変異体のα鎖及び/又はβ鎖の可変領域の1つ以上のCDR1、CDR2及びCDR3を含む機能的部分、を含むことができる。本発明の一態様において、ポリペプチドは配列番号9~28のアミノ酸配列(本発明のTCRの可変領域のCDR3)又はその組合せを含む機能的部分を含むことができる。本発明の一態様において、本発明のポリペプチドは、例えば、上記CDR領域の組合せを含む本発明のTCR又はその機能的変異体の可変領域を含むことができる。これに関し、ポリペプチドは配列番号29~48(α鎖又はβ鎖の可変領域)のいずれかのアミノ酸配列を含むことができる。 Polypeptides are functional portions of either or both of the α and / or β chains of the TCR of the invention or its functional variants, eg, the α and / or β chains of the TCR of the invention or its functional variants. Can include a functional portion, including one or more CDR1, CDR2 and CDR3 of the variable region of. In one aspect of the invention, the polypeptide can comprise a functional portion comprising the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 9-28 (CDR3 of the variable region of the TCR of the invention) or a combination thereof. In one aspect of the invention, the polypeptide of the invention can include, for example, variable regions of the TCRs of the invention or functional variants thereof, including the combinations of CDR regions described above. In this regard, the polypeptide can comprise any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 29-48 (variable regions of the α or β chain).

場合によって、本願発明の抗原認識構築物は、配列番号9~48(CDR配列又は全可変領域)に示されるいずれか1つの配列を含む1つ又は2つのポリペプチド、又はその機能的断片を含んでもよく、また、他のアミノ酸配列、例えば、免疫グロブリン又はその部分をコードするアミノ酸配列をさらに含んでもよく、その場合本願発明のタンパク質は融合タンパク質であり得る。これに関し、本発明は、少なくとも1つの本発明のポリペプチドと本明細書の文脈に沿う少なくとも1つの他のポリペプチドとを含む融合タンパク質を提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の別個のポリペプチドとして存在し得るか、又は本明細書に記載される本発明のポリペプチドの1つとインフレーム(タンデム)で発現されるポリペプチドとして存在し得る。該他のポリペプチドは、免疫グロブリン、CD3、CD4、CD8、MHC分子、CD1分子(例えば、CD 1a、CD 1b、CD 1c、CD 1d等)を含むがこれらに限定されない、任意のペプチド又はタンパク質分子又はその一部をコードすることができる。 Optionally, the antigen recognition construct of the present invention may comprise one or two polypeptides comprising any one of the sequences set forth in SEQ ID NOs: 9-48 (CDR sequence or fully variable region), or functional fragments thereof. Well, it may further comprise another amino acid sequence, eg, an amino acid sequence encoding an immunoglobulin or portion thereof, in which case the protein of the invention can be a fusion protein. In this regard, the invention provides a fusion protein comprising at least one polypeptide of the invention and at least one other polypeptide in the context of the present specification. The other polypeptide may exist as a separate polypeptide of the fusion protein, or as a polypeptide expressed in frame (tandem) with one of the polypeptides of the invention described herein. .. The other polypeptide is any peptide or protein including, but not limited to, immunoglobulins, CD3, CD4, CD8, MHC molecules, CD1 molecules (eg, CD 1a, CD 1b, CD 1c, CD 1d, etc.). It can encode a molecule or part thereof.

融合タンパク質は、本発明のポリペプチドの1以上のコピー及び/又は他のポリペプチドの1以上のコピーを含むことができる。例えば、融合タンパク質は、1、2、3、4、5又はそれ以上の本発明のポリペプチド及び/又は他のポリペプチドのコピーを含み得る。融合タンパク質を作製する適切な方法は、当技術分野で公知であり、例えば、組換え方法が含まれる。本発明の一態様において、本発明のTCR(及びその機能的部分及びその機能的変異体)、ポリペプチド、及びタンパク質は、α/γ鎖及びβ/δ鎖を連結するリンカーペプチドを含む単一のタンパク質として発現され得る。これに関し、本発明のTCR(及びその機能的部分及びその機能的変異体)、ポリペプチド、及びタンパク質は、本発明のTCRの可変領域のアミノ酸配列(T1~T9)を含み、さらにリンカーペプチドを含んでもよい。リンカーペプチドは、宿主細胞中において組換えTCR(及びその機能的部分及びその機能的変異体)、ポリペプチド、及び/又はタンパク質の発現を有利に促進し得る。リンカーペプチドは、任意の適切なアミノ酸配列を含んでもよい。一本鎖TCR構築物のためのリンカー配列は、当技術分野において周知である。そのような一本鎖構築物は、1つ又は2つの定常ドメイン配列をさらに含んでもよい。宿主細胞によるリンカーペプチドを含む構築物の発現の際に、リンカーペプチドは切断され、分離されたα鎖及びβ鎖を生じてもよい。 The fusion protein can include one or more copies of the polypeptide of the invention and / or one or more copies of the other polypeptide. For example, the fusion protein may include 1, 2, 3, 4, 5 or more copies of the polypeptide of the invention and / or other polypeptides. Suitable methods for making fusion proteins are known in the art and include, for example, recombinant methods. In one aspect of the invention, the TCR (and its functional portions and functional variants thereof), polypeptides, and proteins of the invention are single comprising a linker peptide linking an α / γ chain and a β / δ chain. Can be expressed as a protein of. In this regard, the TCRs (and their functional parts and functional variants thereof), polypeptides, and proteins of the invention contain amino acid sequences (T1-T9) of the variable regions of the TCR of the invention, and further include linker peptides. It may be included. Linker peptides can advantageously promote the expression of recombinant TCRs (and their functional parts and functional variants thereof), polypeptides, and / or proteins in host cells. The linker peptide may contain any suitable amino acid sequence. Linker sequences for single-stranded TCR constructs are well known in the art. Such single-stranded constructs may further comprise one or two constant domain sequences. Upon expression of the construct containing the linker peptide by the host cell, the linker peptide may be cleaved to give rise to the separated α and β chains.

上述したように、本発明のTCRの結合機能性は、抗体の枠組みにおいて提供されてもよい。その種々の文法的形態において、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗体結合部位又はパラトープを含む分子をいうために本明細書中で使用される。そのような分子は、免疫グロブリン分子の「抗原結合断片」とも呼ばれる。本発明は本明細書で記載される抗原に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合部分をさらに提供する。抗体は、当技術分野で公知の任意のタイプの免疫グロブリンであり得る。例えば、抗体は、任意のアイソタイプ、例えば、IgA、IgD、IgE、IgG、IgM等であり得る。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。抗体は、例えばマウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒト等の哺乳動物から単離及び/又は精製された抗体等の天然抗体であり得る。あるいは、抗体は、遺伝子操作された抗体、例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体であり得る。抗体は、モノマー又はポリマー形態であり得る。 As mentioned above, the binding functionality of the TCRs of the invention may be provided within the framework of antibodies. In its various grammatical forms, the term "antibody" is used herein to refer to an immunoglobulin molecule and an immunologically active portion of the immunoglobulin molecule, i.e., a molecule containing an antibody binding site or paratope. Will be done. Such molecules are also referred to as "antigen-binding fragments" of immunoglobulin molecules. The present invention further provides an antibody that specifically binds to the antigen described herein, or an antigen binding portion thereof. The antibody can be any type of immunoglobulin known in the art. For example, the antibody can be any isotype, such as IgA, IgD, IgE, IgG, IgM and the like. The antibody can be monoclonal or polyclonal. The antibody can be a natural antibody such as an antibody isolated and / or purified from mammals such as mice, rabbits, goats, horses, chickens, hamsters, humans and the like. Alternatively, the antibody can be a genetically engineered antibody, such as a humanized antibody or a chimeric antibody. The antibody can be in monomeric or polymer form.

本発明は、本明細書に記載の抗体のいずれかの抗原結合部分も提供する。抗原結合部分は、Fab、F(ab')2、dsFv、sFv、ダイアボディ(diabodies)、及びトリアボディ(triabodies)のような、少なくとも1つの抗原結合部位を有する任意の部分であり得る。合成ペプチドを介して軽鎖抗体の可変(V)ドメインに連結された抗体重鎖の可変(V)ドメインを含む短縮型Fab断片からなる、一本鎖可変領域断片(sFv)抗体断片は、通常の組換えDNA技術手法を用いて作製することができる。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片(dsFv)は、組換えDNA技術によって作製され得る。しかしながら、本発明の抗体断片は、これらの例示的なタイプの抗体断片に限定されない。また、抗体又はその抗原結合部分は、例えば、放射性同位体、フルオロフォア(例えば、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、フィコエリトリン(PE))、酵素(例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ)、及び素粒子(例えば、金粒子)のような検出可能な標識を含むように修飾され得る。場合によっては、TCRのCDR3配列はわずかに修飾されてもよく、配列番号9~28に示されるCDR3配列と比較して、好ましくは3以下のアミノ酸残基によって、好ましくは2つのみによって、及び最も好ましくは1つのアミノ酸部位のみにおいて、修飾されてもよい。好ましくは、抗体は、本開示の実施例の節においてTCR T1~T9について示されるように、CDR3、好ましくはCDR1~CDR3領域のすべてを組み合わせて含む。 The invention also provides an antigen binding portion of any of the antibodies described herein. The antigen binding moiety can be any moiety having at least one antigen binding site, such as Fab, F (ab') 2, dsFv, sFv, diabodies, and triabodies. Single-stranded variable region fragment (sFv) antibody fragments consisting of shortened Fab fragments containing the variable (V) domain of the antibody heavy chain linked to the variable (V) domain of the light chain antibody via a synthetic peptide are usually It can be prepared using the recombinant DNA technology technique of. Similarly, disulfide-stabilized variable region fragments (dsFv) can be made by recombinant DNA technology. However, the antibody fragments of the invention are not limited to these exemplary types of antibody fragments. Antibodies or antigen-binding moieties thereof are, for example, radioisotopes, fluorophores (eg, fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE)), enzymes (eg, alkaline phosphatase, horseradish peroxidase), and elementary particles (eg, alkaline phosphatase, horseradish peroxidase). For example, it can be modified to include a detectable label such as gold particles). In some cases, the CDR3 sequence of the TCR may be slightly modified, preferably by 3 or less amino acid residues, preferably by only two, and as compared to the CDR3 sequences set forth in SEQ ID NOs: 9-28. Most preferably, it may be modified at only one amino acid site. Preferably, the antibody comprises all of the CDR3, preferably CDR1 to CDR3 regions in combination, as shown for TCR T1 to T9 in the Examples section of the present disclosure.

抗体を作製する適切な方法は、当技術分野において公知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、例えば、Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol, 5, 51 1-519 (1976)、 Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press(1988)、及びC.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 8 Ed., Garland Publishing,New York, NY (201 1))に記載される。あるいは、他の方法としては、例えばEBV-ハイブリドーマ法(Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984)、及びRoder et al, Methods Enzymol, 121, 140-67 (1986))、及びバクテリオファージベクター発現システム (例えば、Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989)を参照) が当技術分野で公知である。さらに、非ヒト動物で抗体を産生する方法が、例えば、米国特許5,545,806、5,569,825、及び5,714,352、及び米国特許出願公開番号2002/0197266Alに記載されている。 Suitable methods for making antibodies are known in the art. For example, the standard hybridoma method is, for example, Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol, 5, 51 1-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988). , And CA Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 8 Ed., Garland Publishing, New York, NY (201 1)). Alternatively, other methods include, for example, the EBV-hybridoma method (Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74 (2), 361-67 (1984), and Roder et al, Methods Enzymol, 121, 140-67 ( 1986)), and a bacteriophage vector expression system (see, eg, Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989)) are known in the art. In addition, methods of producing antibodies in non-human animals are described, for example, in US Pat. Nos. 5,545,806, 5,569,825, and 5,714,352, and US Patent Application Publication No. 2002/0197266Al.

本発明のいくつかの態様は、可溶性TCRである、TCR又はその機能的断片及びポリペプチドにも関連する。本明細書において、用語「可溶性T細胞受容体」は、ジスルフィド結合によって連結されたTCRα鎖及びβ鎖の細胞外部分を含むが、天然タンパク質の膜貫通及びサイトゾルドメインを欠いている、天然TCRの切断変異体のヘテロ二量体である。用語「可溶性T細胞受容体α鎖配列及び可溶性T細胞受容体β鎖配列」は、膜貫通及びサイトゾルドメインを欠くTCRα鎖及びβ鎖配列をいう。可溶性TCRα鎖及びβ鎖の(アミノ酸又は核酸)配列は、天然のTCR中の対応する配列と同一であってもよく、対応する天然のTCRと比較して変異型の可溶性TCRα鎖及びβ鎖配列を含んでもよい。本明細書で使用される用語「可溶性T細胞受容体」は、変異型又は非変異型の可溶性TCRα鎖及びβ鎖配列を有する可溶性TCRを包含する。変異型は、可溶性TCRα鎖及びβ鎖配列の可変領域又は定常領域に存在してもよく、これに限定されるものではないが、アミノ酸欠失、挿入、置換突然変異、並びにアミノ酸配列を変更しない核酸配列の変化を含むことができる。いずれの場合においても、本発明の可溶性TCRは、それらの親分子の結合機能を保持する。 Some aspects of the invention also relate to soluble TCRs, TCRs or functional fragments thereof and polypeptides. As used herein, the term "soluble T cell receptor" includes the extracellular portion of the TCR α and β chains linked by disulfide bonds, but lacks the transmembrane and cytosolic domains of natural proteins, the native TCR. It is a heterodimer of the cleavage variant of. The term "soluble T cell receptor α chain sequence and soluble T cell receptor β chain sequence" refers to a TCR α chain and β chain sequence lacking a transmembrane and cytosol domain. The (amino acid or nucleic acid) sequence of the soluble TCR α-chain and β-chain may be identical to the corresponding sequence in the native TCR and is a variant of the soluble TCR α-chain and β-chain sequence compared to the corresponding native TCR. May include. The term "soluble T cell receptor" as used herein includes soluble TCRs having mutant or non-mutant soluble TCR α and β chain sequences. Variants may be present in the variable or constant regions of the soluble TCR α and β chain sequences, without limitation, without amino acid deletions, insertions, substitution mutations, and without altering the amino acid sequence. It can include changes in the nucleic acid sequence. In any case, the soluble TCRs of the present invention retain the binding function of their parent molecules.

上述の課題は本発明の抗原認識構築物、又は上述したタンパク若しくはポリペプチド構築物をコードする核酸によっても解決される。核酸は、好ましくは、(a)本発明に係る抗原認識構築物をコードする鎖を有するか、(b)(a)の鎖に相補的な鎖を有するか、又は(c)(a)若しくは(b)の分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする鎖を有する。ストリンジェントな条件下は当業者に公知であり、特に、Sambrook et al, “Molecular Cloning” が参照される。また、核酸は、任意でさらなる配列、特に哺乳動物/ヒト細胞で発現するための、タンパク質に対応する核酸配列を発現するのに必要とされる配列を有する。使用される核酸は、細胞内のペプチドに対応する核酸配列の発現を可能にするのに適したベクター中に含まれ得る。しかしながら、核酸は、提示細胞(樹状細胞等の古典的な抗原提示細胞に限定されない)を、核酸自体が細胞表面上に対応するタンパク質を産生するように形質転換するために、使用することもできる。 The above-mentioned problems are also solved by the antigen recognition construct of the present invention, or the nucleic acid encoding the above-mentioned protein or polypeptide construct. The nucleic acid preferably has (a) a strand encoding the antigen recognition construct according to the invention, (b) a strand complementary to the strand of (a), or (c) (a) or ( It has a chain that hybridizes with the molecule of b) under stringent conditions. Stringent conditions are known to those of skill in the art, with particular reference to Sambrook et al, “Molecular Cloning”. The nucleic acid also optionally has additional sequences, particularly those required to express the nucleic acid sequence corresponding to the protein for expression in mammalian / human cells. The nucleic acid used may be included in a suitable vector to allow expression of the nucleic acid sequence corresponding to the peptide in the cell. However, nucleic acids can also be used to transform presenting cells (not limited to classical antigen-presenting cells such as dendritic cells) such that the nucleic acids themselves produce the corresponding proteins on the cell surface. can.

本明細書で使用する「核酸」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」及び「核酸分子」を含み、一般にDNA又はRNAのポリマーを意味する。該核酸は一本鎖又は二本鎖であり、合成され得るか、又は天然源から得られる(例えば、単離及び/又は精製され得る)。該核酸は、天然、非天然又は変化したヌクレオチドを含むことができ、修飾されていないオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間に見出されるホスホジエステルの代わりに、天然、非天然又は変化したヌクレオチド間結合、例えば、ホスホロアミド酸結合、ホスホロチオエート結合を含むことができる。 As used herein, "nucleic acid" includes "polynucleotides", "oligonucleotides" and "nucleic acid molecules" and generally means polymers of DNA or RNA. The nucleic acid is single-stranded or double-stranded and can be synthesized or obtained from a natural source (eg, isolated and / or purified). The nucleic acid can include natural, unnatural or altered nucleotides, and instead of the phosphodiesters found between the nucleotides of unmodified oligonucleotides, natural, unnatural or altered internucleotide linkages such as phosphoramide. It can include acid bonds and phosphorothioate bonds.

好ましくは、本発明の核酸は組換えである。本明細書において使用される、用語「組換え」は、(i)天然又は合成の核酸セグメントを、生細胞内で複製することができる核酸分子に結合させることによって、生きている細胞の外に構築された分子、又は(ii)上記(i)に記載のものの複製から生じる分子、をいう。本明細書の目的のために、複製はインビトロ複製又はインビボ複製であり得る。核酸は、本明細書に記載の任意のTCR、ポリペプチド、タンパク質又はその機能的部分若しくは機能的変異体をコードする、いかなる核酸配列をも含むことができる。 Preferably, the nucleic acid of the invention is recombinant. As used herein, the term "recombination" refers to (i) outside a living cell by binding a natural or synthetic nucleic acid segment to a nucleic acid molecule capable of replicating in the living cell. The constructed molecule, or (ii) a molecule resulting from the replication of the one described in (i) above. For the purposes herein, the replication can be in vitro replication or in vivo replication. Nucleic acid can include any nucleic acid sequence encoding any TCR, polypeptide, protein or functional portion or functional variant thereof described herein.

また、本発明は、上記のような本発明の核酸を含むベクターを提供する。望ましくは、ベクターは発現ベクター又は組換え発現ベクターである。本発明の文脈において、用語「組換え発現ベクター」は、適切な宿主細胞においてmRNA、タンパク質又はポリペプチドの発現を可能にする核酸構築物をいう。本願発明の組換え発現ベクターは任意の適切な組換え発現ベクターであり得、任意の適切な宿主に形質転換又はトランスフェクトするために使用され得る。適切なベクターには、例えばプラスミド及びウイルスの、増殖及び拡大のために、又は発現又はその両方のために、設計されたベクターが含まれる。動物発現ベクターの例には、pMP71、pEUK-Cl、pMAM、 pMAMneo及びpSB100Xoが含まれる。好ましくは、組換え発現ベクターは、ウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクター、又は非ウイルスベクター、例えばトランスポゾンベースのSleeping Beautyベクターのいずれかである。組換え発現ベクターは、ベクターが導入される宿主細胞のタイプ(例えば、細菌、真菌、植物又は動物)に特異的であり、本発明の核酸の発現が行われる制御配列、例えば転写および翻訳開始及び終止コドンを含む。また、本発明のベクターは、形質転換又はトランスフェクトされた宿主の選択を可能にする1つ以上のマーカー遺伝子を含み得る。組換え発現ベクターは、本発明の構築物をコードするヌクレオチド配列、又は本発明の構築物をコードするヌクレオチド配列に相補的であるか又はそれにハイブリダイズするヌクレオチド配列に作動可能に連結された天然又は規範的プロモーターを含むことができる。プロモーターの選択には、例えば、強力な、弱い、誘導性の、組織特異的な及び発生特異的なプロモーターが含まれる。 プロモーターは、非ウイルスプロモーター又はウイルスプロモーターであり得る。本発明の組換え発現ベクターは、一過性発現のために、安定した発現のために、又はその両方のために設計することができる。組換え発現ベクターは、構成的発現又は誘導発現のために作製することもできる。 The present invention also provides a vector containing the nucleic acid of the present invention as described above. Desirably, the vector is an expression vector or a recombinant expression vector. In the context of the present invention, the term "recombinant expression vector" refers to a nucleic acid construct that allows expression of an mRNA, protein or polypeptide in a suitable host cell. The recombinant expression vector of the present invention can be any suitable recombinant expression vector and can be used to transform or transfect any suitable host. Suitable vectors include, for example, vectors designed for growth and expansion of plasmids and viruses, and / or for expression. Examples of animal expression vectors include pMP71, pEUK-Cl, pMAM, pMAMneo and pSB100Xo. Preferably, the recombinant expression vector is either a viral vector, such as a retroviral vector, or a non-viral vector, such as a transposon-based Sleeping Beauty vector. Recombinant expression vectors are specific for the type of host cell into which the vector is introduced (eg, bacteria, fungi, plants or animals) and control sequences in which the nucleic acids of the invention are expressed, such as transcription and translation initiation and. Includes stop codon. The vectors of the invention may also contain one or more marker genes that allow selection of transformed or transfected hosts. The recombinant expression vector is a natural or normative sequence operably linked to a nucleotide sequence that encodes the construct of the invention, or a nucleotide sequence that is complementary to or hybridizes to the nucleotide sequence encoding the construct of the invention. It can include promoters. Promoter selection includes, for example, strong, weak, inducible, tissue-specific and development-specific promoters. The promoter can be a non-viral promoter or a viral promoter. The recombinant expression vectors of the invention can be designed for transient expression, stable expression, or both. Recombinant expression vectors can also be made for constitutive or induced expression.

本発明は、本発明に係る抗原認識構築物を含む宿主細胞にも関する。具体的には、本発明の宿主細胞は、上記の核酸又はベクターを含む。宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、菌類、若しくは藻類であってもよく、又は原核細胞、例えば細菌又は原生動物であってもよい。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞であってもよく、すなわち生物、例えばヒトから直接単離されてもよい。宿主細胞は、付着細胞又は懸濁細胞、すなわち懸濁液中で増殖する細胞であり得る。組換えTCR、ポリペプチド、又はタンパク質を産生するためには、宿主細胞は好ましくは哺乳動物細胞である。最も好ましくは、宿主細胞はヒト細胞である。宿主細胞は、任意の細胞タイプであってよく、任意のタイプの組織由来であってよく、任意の発生段階であってよいが、好ましくは、末梢血白血球(PBL)又は末梢血単核細胞(PBMC)である。より好ましくは、宿主細胞はT細胞である。T細胞は例えば培養されたT細胞のような任意のT細胞であってよく、例えば初代T細胞、又は培養されたT細胞系、例えばJurkat, SupTl等、に由来するT細胞、又は哺乳動物、好ましくは、ヒト患者由来のT細胞又はT細胞前駆細胞から得られたT細胞であってよい。哺乳動物から得る場合、T細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは体液を含むがこれらに限定されない多数の供給源から得ることができる。T細胞は濃縮されても精製されてもよい。好ましくは、T細胞はヒトT細胞である。より好ましくは、該T細胞はヒトから単離されたT細胞である。該T細胞は任意のタイプのT細胞であってよく、該T細胞はいかなる発生段階のものであってもよく、これらに限定されるものではないが、CD4陽性及び/又はCD8陽性、CD4陽性ヘルパーT細胞、例えば、Th1及びTh2細胞、CD8陽性T細胞(例えば、細胞障害性T細胞)、腫瘍浸潤細胞(TILs)、記憶T細胞、ナイーブT細胞等を含む。好ましくは、該T細胞はCD8陽性T細胞又はCD4陽性T細胞である。 The present invention also relates to a host cell containing the antigen recognition construct according to the present invention. Specifically, the host cell of the present invention contains the above nucleic acid or vector. Host cells may be eukaryotic cells, such as plants, animals, fungi, or algae, or prokaryotic cells, such as bacteria or protozoa. The host cell may be a cultured cell or a primary cell, i.e., it may be isolated directly from an organism, such as a human. The host cell can be an attached cell or a suspended cell, i.e., a cell that proliferates in a suspension. For producing recombinant TCRs, polypeptides, or proteins, host cells are preferably mammalian cells. Most preferably, the host cell is a human cell. The host cell may be of any cell type, of any type of tissue, and at any stage of development, but is preferably peripheral blood leukocytes (PBL) or peripheral blood mononuclear cells (preferably). PBMC). More preferably, the host cell is a T cell. The T cell may be any T cell, such as a cultured T cell, such as a primary T cell, or a T cell derived from a cultured T cell lineage, such as Jurkat, SupTl, or a mammal. Preferably, it may be T cells derived from a human patient or T cells obtained from T cell progenitor cells. When obtained from mammals, T cells can be obtained from a number of sources including, but not limited to, blood, bone marrow, lymph nodes, thymus, or other tissues or body fluids. T cells may be concentrated or purified. Preferably, the T cells are human T cells. More preferably, the T cell is a T cell isolated from human. The T cells may be of any type of T cells and may be of any developmental stage, including but not limited to CD4 positive and / or CD8 positive, CD4 positive. Includes helper T cells such as Th1 and Th2 cells, CD8 positive T cells (eg, cytotoxic T cells), tumor infiltrating cells (TILs), memory T cells, naive T cells and the like. Preferably, the T cell is a CD8 positive T cell or a CD4 positive T cell.

好ましくは、本発明の宿主細胞はリンパ球であり、好ましくは、Tリンパ球であり、例えば、CD4又はCD8陽性T細胞である。また、宿主細胞は好ましくはMAGE-A1発現腫瘍細胞に特異的な腫瘍反応性T細胞である。 Preferably, the host cell of the invention is a lymphocyte, preferably a T lymphocyte, eg, a CD4 or CD8 positive T cell. The host cell is preferably a tumor-reactive T cell specific for MAGE-A1-expressing tumor cells.

本発明の一つのさらなる態様は、医薬用途に使用するための、本明細書中に開示される抗原認識構築物、核酸、ベクター、及び/又は宿主細胞に関する。一つの好ましい医薬用途に使用する態様は、感染性疾患、好ましくはHPV感染、又は増殖性疾患、例えば悪性若しくは良性腫瘍疾患、の診断、予防及び/又は治療を含む。腫瘍疾患は例えばHPV関連がんである。 One further aspect of the invention relates to the antigen recognition constructs, nucleic acids, vectors, and / or host cells disclosed herein for use in pharmaceutical applications. Aspects for use in one preferred pharmaceutical use include the diagnosis, prevention and / or treatment of infectious diseases, preferably HPV infections, or proliferative diseases such as malignant or benign tumor diseases. Tumor diseases are, for example, HPV-related cancers.

本発明の構築物、タンパク質、TCR抗体、ポリペプチド及び核酸は、特に免疫療法、好ましくは養子T細胞療法に使用するためのものである。本発明の化合物の投与は、例えば、本発明のT細胞の該患者への注入を含むことができる。好ましくは、このようなT細胞は、本発明の核酸又は抗原認識構築物でインビトロで形質導入された患者の自己T細胞である。 The constructs, proteins, TCR antibodies, polypeptides and nucleic acids of the invention are specifically intended for use in immunotherapy, preferably adoptive T cell therapy. Administration of the compounds of the invention can include, for example, infusion of the T cells of the invention into the patient. Preferably, such T cells are patient autologous T cells transduced in vitro with the nucleic acid or antigen recognition constructs of the invention.

本発明の目的は、HPV特異的な抗原認識構築物(ARC)を発現する細胞系の製造のための方法であって、
HPV特異的な抗原認識構築物(ARC)を発現する細胞系の製造のためのインビトロ方法であって、
a.適切な宿主細胞を提供する工程、
b.ARCをコードする遺伝子構築物を提供する工程であって、該ARCは配列番号9~28から選択されるいずれか1つのアミノ酸配列と少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、又は100%配列同一性を有するアミノ酸配列を持つCDR3を含むものである、
c.前記適切な宿主細胞に前記遺伝子構築物を導入する工程、
d.前記適切な宿主細胞で前記遺伝子構築物を発現させる工程、
を含む、方法によっても解決する。
An object of the present invention is a method for producing a cell line expressing an HPV-specific antigen recognition construct (ARC).
An in vitro method for the production of cell lines expressing HPV-specific antigen recognition constructs (ARC).
a. The process of providing suitable host cells,
b. A step of providing a gene construct encoding ARC, wherein the ARC is at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95 with any one amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 9-28. %, 98%, 99%, or 100% contains CDR3 with an amino acid sequence having sequence identity.
c. The step of introducing the gene construct into the appropriate host cell,
d. The step of expressing the gene construct in the appropriate host cell,
It can also be solved by methods, including.

好ましい一つの実施態様において上記方法は、前記ARCの細胞表面提示を含む工程をさらに含んでもよい。 In one preferred embodiment, the method may further comprise a step comprising the cell surface presentation of the ARC.

当然本発明の態様の文脈において前記ARCは、上述の本発明の態様によるARCであることも好ましい。この点において、前記ARCが哺乳動物起源、好ましくはヒト起源のものであることが、さらに又は代替的に好ましい。 Of course, in the context of the aspect of the present invention, it is also preferable that the ARC is an ARC according to the above-mentioned aspect of the present invention. In this respect, it is further or alternatively preferred that the ARC is of mammalian, preferably human origin.

本発明の方法での使用に好ましい好適な宿主細胞は、哺乳動物、特にヒトT細胞のようなヒト細胞である。本発明での使用のためのT細胞は、本明細書の上述のとおり詳細に記載されている。 Preferred host cells for use in the methods of the invention are mammals, especially human cells such as human T cells. T cells for use in the present invention are described in detail as described above herein.

本発明の方法に従って製造されたARCは、一つの実施態様においてTCRである。例えば、追加の(機能的な)ドメインを有するTCR又は代替ドメイン、例えば、膜アンカーとしての外膜貫通ドメインを備えるTCR、を備えるTCRも含まれる。本発明に従って産生されるTCRは、例えばアルファ/ベータTCR、ガンマ/デルタTCR又は一本鎖TCR(scTCR)である。本発明に含まれるTCR形態は、一般に、当技術分野で公知の任意のTCR、具体的には上記のものである。 The ARC produced according to the method of the invention is a TCR in one embodiment. For example, a TCR with an additional (functional) domain or an alternative domain, eg, a TCR with a transmembrane domain as a membrane anchor, is also included. The TCR produced according to the present invention is, for example, alpha / beta TCR, gamma / delta TCR or single chain TCR (scTCR). The TCR form included in the present invention is generally any TCR known in the art, specifically the ones described above.

望ましくは、本発明に係る方法で使用するためのトランスフェクション系は、レトロウイルスベクター系である。このような系は、当業者に周知である。 Desirably, the transfection system for use in the method according to the invention is a retroviral vector system. Such systems are well known to those of skill in the art.

また、本発明に含まれるのは、一つの実施態様において、ARCを細胞から精製する追加の方法工程、及び任意で、T細胞における翻訳されたARC断片の再構成である。 Also included in the invention is, in one embodiment, an additional method step of purifying ARC from cells and optionally the reconstruction of translated ARC fragments in T cells.

本発明の別の態様において、T細胞は、腫瘍細胞に特異的であり、上述のとおり高い結合活性を有する、T細胞受容体(TCR)の産生方法によって得られる又は得ることが可能である。そのようなT細胞は、本発明の方法で使用される宿主細胞、例えばヒト又は非ヒトT細胞、好ましくはヒトTCRに依存する。 In another aspect of the invention, T cells can be obtained or obtained by a method of producing a T cell receptor (TCR), which is specific for tumor cells and has high binding activity as described above. Such T cells depend on the host cells used in the methods of the invention, such as human or non-human T cells, preferably human TCR.

本発明のTCR、ポリペプチド、タンパク質(その機能的変異体を含む)、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞(その集団を含む)及び抗体(その抗原結合部分を含む)は、単離及び/又は精製され得る。本願明細書において使用される用語「単離」とは、自然の環境から取り除かれたことを意味する。本願明細書において使用される用語「精製」とは、純度が上がったことを意味し、ここで「純度」とは相対的な用語であり、必ずしも絶対的な純度として解釈されるべきではない。例えば、純度は、少なくとも約50%、60%、70%、80%、90%、95%以上であり得、又は100%であり得る。 The TCRs, polypeptides, proteins (including their functional variants), nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells (including their populations) and antibodies (including their antigen binding moieties) of the invention are isolated and / Or it can be purified. As used herein, the term "isolation" means removed from the natural environment. As used herein, the term "purification" means increased purity, where "purity" is a relative term and should not necessarily be construed as absolute purity. For example, the purity can be at least about 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% or higher, or 100%.

本発明の抗原認識構築物、TCR、ポリペプチド、タンパク質(その機能的変異体を含む)、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞(その集団を含む)及び抗体(それらの抗原結合部分を含む) (以下、まとめて「本発明のTCR材料」という。)は、医薬組成物等の組成物に製剤化することができる。これに関して、本発明は、TCR、ポリペプチド、タンパク質、機能的部分、機能的変異体、核酸、発現ベクター、宿主細胞(その集団を含む)、及び抗体(その抗原結合部分を含む)及び薬学的に許容される担体のいずれかを含む医薬組成物を提供する。本発明のTCR材料のいずれかを含有する本発明の医薬組成物は、複数の本発明のTCR材料、例えば、ポリペプチド及び核酸、又は2つ以上の異なるTCR(その機能的部分及びその機能的変異体を含む)を含むことができる。あるいは、医薬組成物は、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキセート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなどの化学療法剤などの別の薬学的に活性な薬剤又は薬物と組み合わせた本発明のTCR材料を含むことができ、好ましくは、担体は薬学的に許容される担体である。医薬組成物に関して、担体は、考慮されている特定の本発明のTCR材料のために従来使用されているもののいずれかであり得る。このような薬学的に許容される担体は、当業者に周知であり、公に容易に入手可能である。薬学的に許容される担体は、使用条件下で有害な副作用又は毒性を有さないものであることが好ましい。 Antigen recognition constructs of the invention, TCRs, polypeptides, proteins (including their functional variants), nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells (including their populations) and antibodies (including their antigen binding moieties) (including their antigen binding moieties). Hereinafter, the "TCR material of the present invention") can be formulated into a composition such as a pharmaceutical composition. In this regard, the invention relates to TCRs, polypeptides, proteins, functional moieties, functional variants, nucleic acids, expression vectors, host cells (including populations thereof), and antibodies (including antigen binding moieties thereof) and pharmaceuticals. Provided is a pharmaceutical composition comprising any of the acceptable carriers. A pharmaceutical composition of the invention containing any of the TCR materials of the invention may be a plurality of TCR materials of the invention, such as polypeptides and nucleic acids, or two or more different TCRs (functional portions thereof and functional portions thereof). (Including variants) can be included. Alternatively, the pharmaceutical composition may be another chemotherapeutic agent such as, for example, asparaginase, busulfan, carboplatin, cisplatin, daunorubicin, doxorubicin, fluorouracil, gemcitabine, hydroxyurea, methotrexate, paclitaxel, rituximab, vinblastine, vincristine and the like. Drugs or TCR materials of the invention in combination with drugs can be included, preferably the carrier is a pharmaceutically acceptable carrier. For pharmaceutical compositions, the carrier can be any of those conventionally used for the particular TCR material of the invention considered. Such pharmaceutically acceptable carriers are well known to those of skill in the art and are readily available to the public. The pharmaceutically acceptable carrier preferably has no adverse side effects or toxicity under conditions of use.

したがって、本明細書に記載の本発明の製品のいずれか、具体的には任意のタンパク質、核酸又は宿主細胞を含む医薬組成物もまた提供される。好ましい実施態様において、医薬組成物は免疫療法のためのものである。 Accordingly, pharmaceutical compositions comprising any of the products of the invention described herein, specifically any protein, nucleic acid or host cell, are also provided. In a preferred embodiment, the pharmaceutical composition is for immunotherapy.

好ましくは、本発明のTCR材料は、注射によって、例えば、静脈内に投与される。本発明のTCR材料が本発明のTCR(又はその機能的変異体)を発現する宿主細胞である場合、注射用の細胞のための薬学的に許容される担体は、任意の等張性担体、例えば、通常の生理食塩水(約0.90%w/vのNaCl水溶液、約300 mOsm/LのNaCl水溶液、又は約9.0gのNaCl /リットル水)、NORMOSOL R 電解液(Abbott,Chicago, IL)、PLASMA-LYTE A (Baxter, Deerfield, IL)、水中約5%デキストロース、リンゲル乳酸塩を含んでもよい。一つの実施態様において、薬学的に許容される担体は、ヒト血清アルブミンが補充される。 Preferably, the TCR material of the invention is administered by injection, eg, intravenously. If the TCR material of the invention is a host cell expressing the TCR of the invention (or a functional variant thereof), the pharmaceutically acceptable carrier for cells for injection is any isotonic carrier, For example, normal saline (about 0.90% w / v NaCl aqueous solution, about 300 mOsm / L NaCl aqueous solution, or about 9.0 g NaCl / liter water), NORMOSOL R electrolyte (Abbott, Chicago, IL), PLASMA-LYTE A (Baxter, Deerfield, IL), about 5% dextrose in water, Ringer's emulsion may be included. In one embodiment, the pharmaceutically acceptable carrier is supplemented with human serum albumin.

本発明の目的のため、投与される本発明のTCR材料の量又は用量(例えば、本発明のTCR材料が1以上の細胞の場合、細胞の数)は、合理的な時間内で、効果、例えば対象又は動物治療効果、若しくは予防応答効果が十分となるべきである。例えば、本発明のTCR材料の用量は、投与の約2時間以上、例えば12~24時間以上の期間で、がん抗原に結合するのに十分であるか、又はがんを検出、治療又は予防するのに十分でなければならない。特定の実施態様において、期間はさらに長くなり得る。用量は、特定の本発明のTCR材料の有効性及び動物(例えば、ヒト)の状態、及び治療される動物(例えば、ヒト)の体重によって決定される。 For the purposes of the invention, the amount or dose of the TCR material of the invention administered (eg, if the TCR material of the invention is one or more cells, the number of cells) will be effective within a reasonable time. For example, the therapeutic effect on the subject or animal, or the preventive response effect should be sufficient. For example, the dose of the TCR material of the present invention is sufficient to bind to a cancer antigen for a period of about 2 hours or more, for example 12 to 24 hours or more, of administration, or detection, treatment or prevention of cancer. Must be enough to do. In certain embodiments, the period can be even longer. The dose is determined by the effectiveness of the particular TCR material of the invention and the condition of the animal (eg, human), and the weight of the animal (eg, human) being treated.

本発明の医薬組成物、TCR(その機能的変異体を含む)、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞集団は、がん、HPV感染、又はHPV陽性前悪性を治療又は予防する方法において使用することができると考えられる。特定の理論に拘束されるものではないが、本発明のTCR(及びその機能的変異体)は、本発明のHPV抗原を発現する標的細胞に対する免疫応答を媒介することができる細胞によって発現される場合、TCR(又は関連する本発明のポリペプチド若しくはタンパク質及びその機能的変異体)がHPV抗原に特異的に結合すると考えられる。この点に関し、本発明は、哺乳動物の状態を治療又は予防する方法であって、本明細書に記載のいずれかの医薬組成物、TCR(及びその機能的変異体)、ポリペプチド、又はタンパク質、本明細書に記載のTCR(及びその機能的変異体)、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードする核酸配列を含むいずれかの核酸若しくは組換え発現ベクター、又は、本明細書に記載のTCR(及びその機能的変異体)、ポリペプチド、またはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含むいずれかの宿主細胞若しくは細胞集団を、哺乳動物におけるがん、HPV感染、又はHPV陽性前悪性状態を治療又は予防するのに有効な量で、哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。 The pharmaceutical compositions of the invention, TCRs (including functional variants thereof), polypeptides, proteins, nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells, or cell populations can be cancerous, HPV-infected, or HPV-positive premalignant. It is believed that it can be used in therapeutic or prophylactic methods. Without being bound by any particular theory, the TCRs (and functional variants thereof) of the invention are expressed by cells capable of mediating an immune response against target cells expressing the HPV antigen of the invention. If so, it is believed that the TCR (or related polypeptide or protein of the invention and functional variants thereof) specifically binds to the HPV antigen. In this regard, the invention is a method of treating or preventing a mammalian condition, wherein any of the pharmaceutical compositions, TCRs (and functional variants thereof), polypeptides, or proteins described herein. , Any nucleic acid or recombinant expression vector comprising a nucleic acid sequence encoding any of the TCRs (and functional variants thereof), polypeptides, proteins described herein, or the TCRs described herein. Any host cell or cell population containing (and its functional variants), a polypeptide, or a recombinant vector encoding a protein, in a mammalian cancer, HPV infection, or HPV-positive premalignant state. Provided are methods comprising administering to a mammal in an amount effective to treat or prevent.

本発明に有用な薬学的に許容される担体又は希釈剤の例としては、例えばSPGA、炭水化物(例えば、ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、グルコース、デキストラン)などの安定剤、例えばアルブミン又はカゼインなどのタンパク質、ウシ血清又はスキムミルクなどのタンパク質含有剤、及びバッファー(例えばリン酸バッファー)を含む。 Examples of pharmaceutically acceptable carriers or diluents useful in the present invention include stabilizers such as SPGA, carbohydrates (eg, sorbitol, mannitol, starch, sucrose, glucose, dextran), such as albumin or casein. Contains proteins, protein-containing agents such as bovine serum or sucrose, and buffers (eg, phosphate buffers).

本明細書で使用される用語「治療」及び「予防」並びにそれに由来する言葉は、必ずしも100%又は完全な治療又は予防を意味するものではない。むしろ、当業者が潜在的な利益又は治療効果を有すると認識する様々な程度の治療又は予防が存在する。この点に関し、本発明の方法は、任意のレベルの任意の量の哺乳動物の状態の治療又は予防を提供することができる。さらに、本発明の方法によって提供される治療又は予防は、治療又は予防される状態(例えば、がん)の1つ以上の状態又は症状の治療又は予防を含み得る。例えば、治療又は予防は、腫瘍の退行を促進することを含むことができる。また、本明細書の目的のために、「予防」は、状態の発症の遅延、又はその症状若しくは状態の遅延を包含し得る。 As used herein, the terms "treatment" and "prevention" and the terms derived from them do not necessarily mean 100% or complete treatment or prevention. Rather, there are varying degrees of treatment or prevention that one of ordinary skill in the art will recognize as having potential benefits or therapeutic effects. In this regard, the methods of the invention can provide treatment or prevention of any level of any amount of mammalian condition. Moreover, the treatment or prevention provided by the methods of the invention may include the treatment or prevention of one or more conditions or symptoms of the condition being treated or prevented (eg, cancer). For example, treatment or prevention can include promoting tumor regression. Also, for the purposes of this specification, "prevention" may include delaying the onset of the condition, or delaying its symptoms or condition.

また、哺乳動物における状態の存在を検出する方法も提供される。当該方法は、(i)本明細書に記載される本発明のTCR(及びその機能的変異体)、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、抗体又はその抗原結合部分、又は医薬組成物のいずれかで哺乳動物由来の1つ以上の細胞を含む試料を接触させることにより、複合体を形成させ、そしてその複合体を検出することであって、該複合体の検出は哺乳動物における状態の存在の指標であり、該状態はがん、HPV16感染、又はHPV陽性前悪性状態である、を含む。 Also provided are methods of detecting the presence of a condition in a mammal. The methods are as follows: (i) TCRs (and functional variants thereof) of the invention described herein, polypeptides, proteins, nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells, cell populations, antibodies or antigen binding thereof. By contacting a sample containing one or more cells of mammalian origin with either a moiety or a pharmaceutical composition to form a complex and to detect the complex of the complex. Detection is an indicator of the presence of a condition in a mammal, the condition including cancer, HPV16 infection, or HPV-positive pre-malignant condition.

哺乳動物における状態を検出する本発明の方法に関して、細胞試料は、全細胞、その溶解物、又は全細胞溶解物の一部、例えば、核又は細胞質画分、全タンパク質画分、又は核酸画分を含む試料であり得る。 For the method of the invention to detect a condition in a mammal, the cell sample is a whole cell, its lysate, or a portion of the whole cell lysate, eg, a nuclear or cytoplasmic fraction, a total protein fraction, or a nucleic acid fraction. Can be a sample containing.

本発明検出方法の目的のため、接触は、哺乳動物に関してインビトロ又はインビボで起こり得る。 For the purposes of the detection methods of the invention, contact can occur in vitro or in vivo with respect to mammals.

また、複合体の検出は、当技術分野で公知の任意の数の方法によって行うことができる。例えば、本明細書に記載される本発明のTCR(及びその機能的変異体)、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分は、検出可能な標識、例えば、放射性同位体、フルオロフォア(例えば、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)、フィコエリトリン(PE))、酵素(例えば、アルカリホスファターゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ)、及び素粒子(例えば、金粒子)で標識され得る。 In addition, the complex can be detected by any number of methods known in the art. For example, the TCRs (and functional variants thereof), polypeptides, proteins, nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells, cell populations, or antibodies or antigen-binding portions thereof of the invention described herein are detected. With possible labels, such as radioactive isotopes, fluorophores (eg, fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE)), enzymes (eg, alkaline phosphatase, horseradish peroxidase), and elementary particles (eg, gold particles). Can be labeled.

本発明の方法の目的のため、宿主細胞又は細胞の集団が投与される場合、該細胞は、哺乳動物に対して同種又は自家である細胞であり得る。 For the purposes of the methods of the invention, when a host cell or population of cells is administered, the cells can be allogeneic or autologous to the mammal.

上述した本発明のTCR材料の医薬用途に関し、治療及び/又は予防されるがんは、急性リンパ球性がん、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨癌、脳癌、乳癌、肛門癌、肛門管又は肛門直腸癌、眼の癌、肝内胆管の癌、関節の癌、頸部の癌、胆嚢、又は胸膜の癌、鼻の癌、鼻腔又は中耳の癌、口腔の癌、膣の癌、外陰部の癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性癌、結腸癌、食道癌 癌、子宮頸癌、消化管カルチノイド腫瘍、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎臓癌、喉頭癌、肝臓癌、肺癌、悪性中皮腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、中咽頭癌、卵巣癌、陰茎癌、膵臓癌、腹膜、網及び腸間膜癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎臓癌、皮膚癌、小腸癌、 軟部組織がん、胃がん、精巣がん、 甲状腺がん、子宮がん、尿管がん、及び膀胱がんのいずれかを含む任意のがんでよい。好ましいがんは、子宮頚部、口腔咽頭、肛門、肛門管、肛門直腸、膣、外陰部又は陰茎のがんである。特に好ましいがんは、HPV陽性がん、例えば、HPV16又はHPV18陽性がんである。HPV16/18感染に最も一般的に関連する癌は子宮頚部、口腔咽頭、肛門、肛門管、肛門直腸、膣、外陰部及び陰茎のがんを含むが、本発明の方法は他の解剖学的領域で生じるがんを含む任意のHPV陽性がんの治療に使用されてもよい。 With respect to the pharmaceutical use of the TCR material of the present invention described above, the cancers to be treated and / or prevented are acute lymphocytic cancer, acute myeloid leukemia, follicular rhombic myoma, bone cancer, brain cancer and breast cancer. , Anal cancer, anal duct or anal rectal cancer, eye cancer, intrahepatic bile duct cancer, joint cancer, cervical cancer, bile sac, or thoracic cancer, nasal cancer, nasal cavity or middle ear cancer, oral Cancer, vaginal cancer, genital cancer, chronic lymphocytic leukemia, chronic myeloid cancer, colon cancer, esophageal cancer cancer, cervical cancer, gastrointestinal carcinoid tumor, glioma, hodgkin lymphoma, hypopharyngeal cancer, kidney Cancer, laryngeal cancer, liver cancer, lung cancer, malignant mesotheloma, melanoma, multiple myeloma, nasopharyngeal cancer, non-hodgkin lymphoma, mesopharyngeal cancer, ovarian cancer, penis cancer, pancreatic cancer, peritoneum, reticulum and mesentery Cancer, pharyngeal cancer, prostate cancer, rectal cancer, kidney cancer, skin cancer, small bowel cancer, soft tissue cancer, stomach cancer, testis cancer, thyroid cancer, uterine cancer, urinary tract cancer, and bladder cancer Any cancer, including cancer. Preferred cancers are cervical, oropharyngeal, anal, anal canal, anal rectum, vagina, vulva or penile cancer. Particularly preferred cancers are HPV-positive cancers, such as HPV16 or HPV18-positive cancers. Cancers most commonly associated with HPV 16/18 infection include cancers of the cervix, oropharyngeal, anal, anal canal, anal rectum, vagina, vulva and penis, but the methods of the invention are other anatomical. It may be used to treat any HPV-positive cancer, including cancers that occur in the area.

概して、本発明は本発明により開示される抗原認識構築物、核酸、ベクター及び/又は宿主細胞の投与を含む、腫瘍又は腫瘍疾患に罹患している対象を治療するための方法を提供する。好ましくは、対象はそのような治療を必要とする対象である。好ましい態様において、哺乳動物の対象は、好ましくはヒト患者であり、HPV陽性である腫瘍又は腫瘍疾患に罹患している。 In general, the invention provides methods for treating a subject suffering from a tumor or tumor disease, comprising administration of the antigen recognition constructs, nucleic acids, vectors and / or host cells disclosed by the invention. Preferably, the subject is a subject in need of such treatment. In a preferred embodiment, the mammalian subject is preferably a human patient and suffers from an HPV-positive tumor or tumor disease.

添付の図面および配列を参照して、以下の実施例で本発明をさらに説明するが、これに限定されるものではない。本発明の目的のために、本明細書中で引用される全ての参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。 The invention will be further described in the following examples with reference to the accompanying drawings and sequences, but is not limited thereto. For the purposes of the present invention, all references cited herein are incorporated by reference in their entirety.

図1は、ABabDIIマウスにおけるHLA-A *02.01制限HPV16 E6エピトープTIHDIILECVに対する特異的CD8 + T細胞応答の例を示す。ABabDIIマウスを腹腔内に(i.p.)E6/7発現アデノウイルスで免疫し、続いて皮下に(s.c.) 50μgのE6ペプチドをIFA中に乳化させた50μgのCpG ODN1826と共に、又はペプチド/CpG/IFA混合物を単独で投与した。免疫動物の末梢血におけるHPV特異的CD8 + T細胞の存在を、各ブーストの7日後に細胞内IFNγ染色によって評価した。ホルボールミリステートアセテート(PMA)及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(+ctrl)として使用した。FIG. 1 shows an example of a specific CD8 + T cell response to HLA-A * 02.01 restricted HPV16 E6 epitope TIHDIILECV in ABabDII mice. ABabDII mice were intraperitoneally immunized with (ip) E6 / 7 expressed adenovirus followed by subcutaneous (sc) 50 μg of E6 peptide emulsified in IFA with 50 μg of CpG ODN1826 or peptide / CpG / IFA mixture. Was administered alone. The presence of HPV-specific CD8 + T cells in the peripheral blood of immune animals was assessed by intracellular IFNγ staining 7 days after each boost. Stimulation with holball millistate acetate (PMA) and ionomycin was used as a positive control (+ ctrl). 図2は、ABabDIIマウスにおけるHLA-A201制限HPV16 E7エピトープTLGIVCPIに対する特異的CD8+ T細胞応答の例を示す。ABabDIIマウスを50μgのE7ペプチドと共にIFA中で乳化した50μgのCpG ODN1826と共に尾基部の皮下(s.c.)に免疫した。免疫動物の末梢血におけるHPV特異的CD8+ T細胞の存在を、各ブーストの7日後に細胞内IFNγ染色によって評価した。ホルボールミリステートアセテート(PMA)及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(+ctrl)として使用した。FIG. 2 shows an example of a specific CD8 + T cell response to the HLA-A201 restricted HPV16 E7 epitope TLGIVCPI in ABabDII mice. ABabDII mice were immunized subcutaneously (s.c.) at the base of the tail with 50 μg of CpG ODN1826 emulsified in IFA with 50 μg of E7 peptide. The presence of HPV-specific CD8 + T cells in the peripheral blood of immune animals was assessed by intracellular IFNγ staining 7 days after each boost. Stimulation with holball millistate acetate (PMA) and ionomycin was used as a positive control (+ ctrl). 図3は、HLA-A*02.01制限HPV16 E5、E6及びE7エピトープに対する特異的CD8+ T細胞のFACSort戦略(IFNγ捕獲アッセイ)を示す。応答マウス由来の脾臓細胞でCD4+ T細胞を枯渇させ、10-8モルのそれぞれのペプチドで10日間再刺激した。5'RACE PCRのために、HPV特異的CD8+ T細胞を、IFNγ捕獲アッセイを用いてRNA精製バッファーに直接選別した。FIG. 3 shows a FACSort strategy (IFNγ capture assay) for specific CD8 + T cells against HLA-A * 02.01 restricted HPV16 E5, E6 and E7 epitopes. CD4 + T cells were depleted in spleen cells from response mice and restimulated with 10-8 moles of each peptide for 10 days. For 5'RACE PCR, HPV-specific CD8 + T cells were sorted directly into RNA purification buffer using the IFNγ capture assay. 図4は、新たに調製したヒトPBLのHPV16 E6及びE7 TCR形質導入を示す。1×106の新たに単離又は凍結したhPBMCを、200U/mlの組換えヒトインターロイキン2の存在下で抗CD3及び抗CD28被覆プレートで刺激した。上清と硫酸プロタミンを含むレトロウイルスの添加、それに続くスピノキュレーション(1回目の形質導入)又はレトロネクチン(Takara)で被覆されたプレート上へのウイルスのプレローディング及びスピノキュレーション(2回目の形質導入)によって、48時間及び72時間後に形質導入を行った。形質導入効率を、抗CD8及び抗マウス定常TCRβmAbで染色することによって評価した。FIG. 4 shows the HPV16 E6 and E7 TCR transduction of freshly prepared human PBL. 1 × 10 6 freshly isolated or frozen hPBMCs were stimulated with anti-CD3 and anti-CD28 coated plates in the presence of 200 U / ml recombinant human interleukin 2. Addition of retrovirus containing supernatant and protamine sulfate, followed by spinocuration (first transduction) or preloading and spinoculation of virus onto a plate coated with retronectin (Takara) (second transduction). Transduction was performed 48 hours and 72 hours later. Transduction efficiency was assessed by staining with anti-CD8 and anti-mouse constant TCRβmAb. 図5は、TCRが形質導入されたヒトPBMCのHPV16 E6/E7ペプチド特異的IFN-γの放出を示す;5859TCRは 配列番号34及び35に対応する;5843B14TCRは配列番号36及び37に対応する;14800TCRは配列番号43及び44に対応する。IFNγ産生は、1×104個のTCR形質導入T細胞と1×104個のペプチド負荷T2細胞との16時間共培養の後、酵素結合免疫吸着測定法によって測定した。ホルボールミリステートアセテート(PMA)及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(max)として用いた。ut:非形質導入PBMC。FIG. 5 shows the release of HPV16 E6 / E7 peptide-specific IFN-γ in human PBMC transduced with TCR; 5859TCR corresponds to SEQ ID NOs: 34 and 35; 5843B14TCR corresponds to SEQ ID NOs: 36 and 37; The 14800 TCR corresponds to SEQ ID NOs: 43 and 44. IFNγ production was measured by enzyme-bound immunoadsorption assay after 16-hour co-culture of 1 × 10 4 TCR transduced T cells and 1 × 10 4 peptide-loaded T2 cells. Stimulation with holball millistate acetate (PMA) and ionomycin was used as a positive control (max). ut: Non-transduced PBMC. 図6は、滴定されたE6特異的ペプチド及びCASKI細胞系における、TCR形質導入されたヒトPBMCのHPV16 E6 IFN-γ放出を示す。左パネルは配列番号14/15(T3)のTCRを示し、右パネルは 配列番号16/17(T4)のTCRを示す。IFNγ産生は、1x104個のTCR形質導入T細胞と1x104個のペプチド負荷T2細胞又は1x104個のCASKI細胞系の16時間共培養の後、酵素結合免疫吸着測定法によって測定した。ホルボールミリステートアセテート(PMA)及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(P+I)として用いた。HLA形質導入された子宮頸癌細胞系SiHa細胞系及び頭頸部癌細胞系SCC-090及びSCC-152についても、CASKI細胞の認識に匹敵するIFNγ放出が見られた(データは示さず)。FIG. 6 shows the HPV16 E6 IFN-γ release of TCR transduced human PBMCs in titrated E6-specific peptides and CASKI cell lines. The left panel shows the TCR of SEQ ID NO: 14/15 (T3) and the right panel shows the TCR of SEQ ID NO: 16/17 (T4). IFNγ production was measured by enzyme-bound immunoadsorption assay after 16-hour co-culture of 1x10 4 TCR transduced T cells with 1x10 4 peptide-loaded T2 cells or 1x10 4 CASKI cell lines. Stimulation with holball millistate acetate (PMA) and ionomycin was used as a positive control (P + I). HLA-transduced cervical cancer cell line SiHa cell line and head and neck cancer cell line SCC-090 and SCC-152 also showed IFNγ release comparable to the recognition of CASKI cells (data not shown). 図7は、新たに調製したヒトPBLのHPV16 E5形質導入及びTCRを形質導入したヒトPBMCのHPV16 E5ペプチド特異的IFN-γ放出を示す。TCRは配列番号12/13(T2)のTCRが使用された。1×106の新たに単離又は凍結したhPBMCを、200U/mlの組換えヒトインターロイキン2の存在下の抗CD3及び抗CD28被覆プレートで刺激した。上清と硫酸プロタミンを含むレトロウイルスの添加、それに続くスピノキュレーション(1回目の形質導入)又はレトロネクチン(Takara)被覆プレートへのウイルスのプレローディング及びスピノキュレーション(2回目の形質導入)によって、48及び72時間後に形質導入を行った。形質導入効率は抗CD8及び抗マウス定常TCRβmAbで染色することによって評価した。IFNγ産生は、1x104個のTCR形質導入T細胞と1x104個のペプチド負荷T2細胞との16時間共培養の後、酵素結合免疫吸着測定法によって測定した。ホルボールミリステートアセテート(PMA)及びイオノマイシンによる刺激を陽性対照(P+I)として用いた。FIG. 7 shows the HPV16 E5 transduction of freshly prepared human PBL and the HPV16 E5 peptide-specific IFN-γ release of human PBMC transduced with TCR. As the TCR, the TCR of SEQ ID NO: 12/13 (T2) was used. 1 × 10 6 freshly isolated or frozen hPBMCs were stimulated with anti-CD3 and anti-CD28 coated plates in the presence of 200 U / ml recombinant human interleukin 2. By addition of retrovirus containing supernatant and protamine sulfate, followed by spinoculation (first transduction) or preloading and spinoculation of virus on retronectin (Takara) coated plates (second transduction). Transduction was performed after 48 and 72 hours. Transduction efficiency was assessed by staining with anti-CD8 and anti-mouse constant TCRβmAb. IFNγ production was measured by enzyme-bound immunoadsorption assay after 16 hours of co-culture of 1x10 4 TCR transduced T cells and 1x10 4 peptide-loaded T2 cells. Stimulation with holball millistate acetate (PMA) and ionomycin was used as a positive control (P + I).

配列番号1~8:本発明のTCRが結合するHPV16及び18エピトープを示す。
配列番号9~28: 本発明のTCRのα鎖及びβ鎖CDR3配列を示す。
配列番号29~48:本発明のTCRのα鎖及びβ鎖の全長可変配列を示す。
SEQ ID NOs: 1-8: HPV16 and 18 epitopes to which the TCRs of the invention bind.
SEQ ID NOs: 9-28: The α-chain and β-chain CDR3 sequences of the TCR of the present invention are shown.
SEQ ID NOs: 29-48: The full-length variable sequences of the α-chain and β-chain of the TCR of the present invention are shown.

動物の免疫化に使用されるHPVエピトープ: HPV epitopes used for immunization of animals:

Figure 0007000315000001
ABabDIIマウスにおけるCTL反応性を有するペプチドエピトープ
Figure 0007000315000001
Peptide epitope with CTL reactivity in ABabDII mice

(実施例1)HPV16-E5エピトープYIIFVYIPLを認識するT細胞受容体T1 (Example 1) T cell receptor T1 that recognizes HPV16-E5 epitope YIIFVYIPL

Figure 0007000315000002
CDR1配列を太字で示す
CDR2配列を二重下線で示す
CDR3配列を一重下線で示す
Figure 0007000315000002
CDR1 array shown in bold
CDR2 array is double underlined
CDR3 array is single underlined

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV13-1*01-CAASSYNQGGKLIF-TRAJ23*01 (配列番号29)

Figure 0007000315000003
TRAV13-1 * 01-CAASSYNQGGKLIF-TRAJ23 * 01 (SEQ ID NO: 29)
Figure 0007000315000003

TRAV26-2*01-CILRDVNAGGTSYGKLTF-TRAJ52*01(配列番号30)

Figure 0007000315000004
TRAV26-2 * 01-CILRDVNAGGTSYGKLTF-TRAJ52 * 01 (SEQ ID NO: 30)
Figure 0007000315000004

TRBV12-3*01-CASSLLSSYNEQFF-TRBD2*01-TRBJ2-3*01(配列番号31)

Figure 0007000315000005
TRBV12-3 * 01-CASSLLSSYNEQFF-TRBD2 * 01-TRBJ2-3 * 01 (SEQ ID NO: 31)
Figure 0007000315000005

(実施例2)HPV 16-E5エピトープYIIFVYIPLを認識するT細胞受容体T2 (Example 2) T cell receptor T2 that recognizes HPV 16-E5 epitope YIIFVYIPL

Figure 0007000315000006
Figure 0007000315000006

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV12-2*02-CAVNVDFNKFYF-TRAJ21*01(配列番号32)

Figure 0007000315000007
TRAV12-2 * 02-CAVNVDFNKFYF-TRAJ21 * 01 (SEQ ID NO: 32)
Figure 0007000315000007

TRBV4-1*01-CASSQDWNNEQFF-TRBD1*01-TRBJ2-1*01配列番号33

Figure 0007000315000008
TRBV4-1 * 01-CASSQDWNNEQFF-TRBD1 * 01-TRBJ2-1 * 01 SEQ ID NO: 33
Figure 0007000315000008

(実施例3)HPV 16-E6エピトープTIHDIILECVを認識するT細胞受容体T3 (Example 3) HPV 16-E6 epitope TI HDIILE CV-recognizing T cell receptor T3

Figure 0007000315000009
Figure 0007000315000009

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV20*02-CAVQANRGSTLGRLYF-TRAJ18*01配列番号34

Figure 0007000315000010
TRAV20 * 02-CAVQANRGSTLGRLYF-TRAJ18 * 01 SEQ ID NO: 34
Figure 0007000315000010

TRBV28*01-CASSLWGRLAKNIQYF-TRBD1*01-TRBJ2-4*01配列番号35

Figure 0007000315000011
TRBV28 * 01-CASSLWGRLAKNIQYF-TRBD1 * 01-TRBJ2-4 * 01 SEQ ID NO: 35
Figure 0007000315000011

(実施例4)HPV 16-E6エピトープTIHDIILECVを認識するT細胞受容体T4 (Example 4) T cell receptor T4 that recognizes HPV 16-E6 epitope TIHDIILECV

Figure 0007000315000012
Figure 0007000315000012

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV21*02-CAVRETSGSRLTF-TRAJ58*01配列番号36

Figure 0007000315000013
TRAV21 * 02-CAVRETSGSRLTF-TRAJ58 * 01 SEQ ID NO: 36
Figure 0007000315000013

TRBV28*01-CASSFWGRSTDTQYF-TRBD1*01-TRBJ2-3*01 配列番号37

Figure 0007000315000014
TRBV28 * 01-CASSFWGRSTDTQYF-TRBD1 * 01-TRBJ2-3 * 01 SEQ ID NO: 37
Figure 0007000315000014

(実施例5)HPV 16-E6エピトープTIHDIILECVを認識するT細胞受容体T5 (Example 5) HPV 16-E6 epitope TI HDIILE CV-recognizing T cell receptor T5

Figure 0007000315000015
Figure 0007000315000015

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV17*01-CATVSTDSWGKKLQF-TRAJ24*02 配列番号38

Figure 0007000315000016
TRAV17 * 01-CATVSTDSWGKKLQF-TRAJ24 * 02 SEQ ID NO: 38
Figure 0007000315000016

TRBV10‐3*02-CAISDSNGINIQYF-TRBD2*02-TRBJ2-4*01 配列番号39

Figure 0007000315000017
TRBV10-3 * 02-CAISDSNGINIQYF-TRBD2 * 02-TRBJ2-4 * 01 SEQ ID NO: 39
Figure 0007000315000017

TRBV28*01-CASSLWGRAGKDTQYF-TRBD2*02-TRBJ2-3*01配列番号40

Figure 0007000315000018
TRBV28 * 01-CASSLWGRAGKDTQYF-TRBD2 * 02-TRBJ2-3 * 01 SEQ ID NO: 40
Figure 0007000315000018

(実施例6)HPV 16-E6エピトープKLPQLCTELを認識するT細胞受容体T6 (Example 6) HPV 16-E6 epitope T cell receptor T6 that recognizes KLPQLCTEL

Figure 0007000315000019
Figure 0007000315000019

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV8-6*01-CAVSLNSGNTPLVF-TRAJ29*01配列番号41

Figure 0007000315000020
TRAV8-6 * 01-CAVSLNSGNTPLVF-TRAJ29 * 01 SEQ ID NO: 41
Figure 0007000315000020

TRBV20-1*01-CSARDLAGNTGELFF-TRBD2*01-TRBJ2-2*01配列番号42

Figure 0007000315000021
TRBV20-1 * 01-CSARDLAGNTGELFF-TRBD2 * 01-TRBJ2-2 * 01 SEQ ID NO: 42
Figure 0007000315000021

(実施例7)HPV 16-E7エピトープTLGIVCPIを認識するT細胞受容体T7 (Example 7) T cell receptor T7 that recognizes the HPV 16-E7 epitope TLGIV PPI

Figure 0007000315000022
Figure 0007000315000022

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV30*01-CGTGTDSWGKLQF-TRAJ24*02配列番号43

Figure 0007000315000023
TRAV30 * 01-CGTGTDSWGKLQF-TRAJ24 * 02 SEQ ID NO: 43
Figure 0007000315000023

TRBV12‐4*01-CASSPGLAGGEQFF-TRBD2*02-TRBJ2-1*01 配列番号44

Figure 0007000315000024
TRBV12-4 * 01-CASSPGLAGGEQFF-TRBD2 * 02-TRBJ2-1 * 01 SEQ ID NO: 44
Figure 0007000315000024

(実施例8)HPV 16-E7エピトープTLGIVCPIを認識するT細胞受容体T8 (Example 8) T cell receptor T8 that recognizes the HPV 16-E7 epitope TLGIVCPI

Figure 0007000315000025
Figure 0007000315000025

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV22*01-CAVEPNSGNTPLVF-TRAJ29*01配列番号45

Figure 0007000315000026
TRAV22 * 01-CAVEPNSGNTPLVF-TRAJ29 * 01 SEQ ID NO: 45
Figure 0007000315000026

TRBV7-2*02or 03-CASSLIISYNEQFF-TRBJ2-1*01 配列番号46

Figure 0007000315000027
TRBV7-2 * 02 or 03-CASSLIISYNEQFF-TRBJ2-1 * 01 SEQ ID NO: 46
Figure 0007000315000027

(実施例9)HPV 16-E7エピトープTLGIVCPIを認識するT細胞受容体T9 (Example 9) T cell receptor T9 that recognizes the HPV 16-E7 epitope TLGIV PPI

Figure 0007000315000028
Figure 0007000315000028

完全長可変鎖配列(CDR3配列を下線で示す) Full length variable chain sequence (CDR3 sequence is underlined)

TRAV38-2/DV-8*01-CAYRSAPYSGAGSYQLTF-TRAJ28*01配列番号47

Figure 0007000315000029
TRAV38-2 / DV-8 * 01-CAYRSAPYSGAGSYQLTF-TRAJ28 * 01 SEQ ID NO: 47
Figure 0007000315000029

TRBV4-2*01-CASSQAPGLAGAEQYF-TRBD2*02-TRBJ2-7*01配列番号48

Figure 0007000315000030
TRBV4-2 * 01-CASSQAPGLAGAEQYF-TRBD2 * 02-TRBJ2-7 * 01 SEQ ID NO: 48
Figure 0007000315000030

(実施例10)TCR T2、T3及びT4形質導入細胞系によるインターフェロンγ放出 (Example 10) Interferon gamma release by TCR T2, T3 and T4 transduced cell lines

図6及び図7は、TCR T3及びT4(図6)及びT2(図7)で形質導入されたT細胞系を示す。結果は図面及び図面の説明に示される。 6 and 7 show T cell lines transduced with TCR T3 and T4 (FIG. 6) and T2 (FIG. 7). Results are shown in the drawings and description of the drawings.

peptide: ペプチド
FACsorted population for TCR-specific 5'RACE PCR: TCR特異的5'RACE PCR用FACSortされた集団
Donor: ドナー
peptide: peptide
FACsorted population for TCR-specific 5'RACE PCR: FACsorted population for TCR-specific 5'RACE PCR
Donor: Donor

Claims (14)

ヒトパピローマウイルス(HPV)抗原に特異的に結合する抗原認識構築物であって、該抗原認識構築物が
I. a.配列番号29に含まれる、相補鎖決定領域(CDR)1 (DSASNY)、CDR2 (IRSNVGE) 及びCDR3(CAASSYNQGGKLIF)配列、及び
b. 配列番号31に含まれる、CDR1 (SGHNS)、CDR2 (FNNNVP) 及びCDR3 (CASSLLSSYNEQFF)配列、又は
II. a.配列番号30に含まれる、CDR1 (TISGTDY)、CDR2 (GLTSN)及びCDR3 (CILRDVNAGGTSYG KLTF)配列、及び
b. 配列番号31に含まれる、CDR1 (SGHNS)、CDR2 (FNNNVP)及びCDR3 (CASSLLSSYNEQFF)配列、又は
III. a.配列番号32に含まれる、CDR1 (DRGSQS)、CDR2 (IYSNGD)及びCDR3 (CAVNVDFNKFYF)配列、及び
b. 配列番号33に含まれる、CDR1 (MGHRA)、CDR2 (YSYEKL)及びCDR3 (CASSQDWNNEQFF)配列、又は
IV. a.配列番号34に含まれる、CDR1 (VSGLRG)、CDR2 (LYSAGEE)及びCDR3 (CAVQANRGSTLGRLYF)配列、及び
b. 配列番号35に含まれる、CDR1 (MDHEN)、CDR2 (SYDVKM)及びCDR3 (CASSLWGRLAKNIQYF)配列、又は
V. a.配列番号36に含まれる、CDR1 (DSAIYN)、CDR2 (IQSSQRE)及びCDR3 (CAVRETSGSRLTF)配列、及び
b. 配列番号37に含まれる、CDR1 (MDHEN)、CDR2 (SYDVKM)及びCDR3 (CASSFWGRSTDTQYF)配列、又は
VI. a.配列番号38に含まれる、CDR1 (TSINN)、CDR2 (IRSNERE)及びCDR3 (CATVSTDSWGKLQF)配列、及び
b. 配列番号39に含まれる、CDR1 (ENHRY)、CDR2 (SYGVKD)及びCDR3 (CAISDSNGINIQYF)配列、又は
VII. a.配列番号38に含まれる、CDR1 (TSINN)、CDR2 (IRSNERE)及びCDR3 (CATVSTDSWGKLQF)配列、及び
b. 配列番号40に含まれる、CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM)及びCDR3(CASSFWGRSTDTQYF) 配列、又は
VIII. a.配列番号41に含まれる、CDR1 (SSVSVY)、CDR2 (YLSGSTLV)及びCDR3 (CAVSLNSGNTPLVF)配列、及び
b. 配列番号42に含まれる、CDR1 (DFQATT)、CDR2 (SNEGSKA)及びCDR3 (CSARDLAGNTGELFF)配列、又は
IX. a.配列番号43に含まれる、CDR1 (KALYS)、CDR2 (LLKGGEQ)及びCDR3 (CGTGTDSWGKLQF)配列、及び
b. 配列番号44に含まれる、CDR1 (SGHDY)、CDR2 (FNNNVP)及びCDR3 (CASSPGLAGGEQFF)配列、又は
X. a.配列番号45に含まれる、CDR1 (DSVNN)、CDR2 (IPSGT)及びCDR3 (CAVEPNSGNTPLVF)配列、及び
b. 配列番号46に含まれる、CDR1 (SGHTA)、CDR2 (FQGNS)及びCDR3 (CASSLIISYNEQFF)配列、又は
XI. a.配列番号47に含まれる、CDR1 (TSESDYY)、CDR2 (QEAYKQQ)及びCDR3 (CAYRSAPYSGAGSYQLTF)配列、及び
b. 配列番号48に含まれる、CDR1 (LGHNA)、CDR2 (YNFKEQ)及びCDR3 (CASSQAPGLAGAEQYF)配列、
を含む、抗原認識構築物。
An antigen recognition construct that specifically binds to a human papillomavirus (HPV) antigen, said antigen recognition construct .
I.a. Complementarity determining regions (CDR) 1 (DSASNY), CDR2 (IRSNVGE) and CDR3 (CAASSYNQGGKLIF) sequences contained in SEQ ID NO: 29, and
b. CDR1 (SGHNS), CDR2 (FNNNVP) and CDR3 (CASSLLSSYNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 31, or
II. a. CDR1 (TISGTDY), CDR2 (GLTSN) and CDR3 (CILRDVNAGGTSYG KLTF) sequences contained in SEQ ID NO: 30 and
b. CDR1 (SGHNS), CDR2 (FNNNVP) and CDR3 (CASSLLSSYNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 31, or
III. a. CDR1 (DRGSQS), CDR2 (IYSNGD) and CDR3 (CAVNVDFNKFYF) sequences contained in SEQ ID NO: 32, and
b. CDR1 (MGHRA), CDR2 (YSYEKL) and CDR3 (CASSQDWNNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 33, or
IV. a. CDR1 (VSGLRG), CDR2 (LYSAGEE) and CDR3 (CAVQANRGSTLGRLYF) sequences contained in SEQ ID NO: 34, and
b. CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM) and CDR3 (CASSLWGRLAKNIQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 35, or
V. a. CDR1 (DSAIYN), CDR2 (IQSSQRE) and CDR3 (CAVRETSGSRLTF) sequences contained in SEQ ID NO: 36, and
b. CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM) and CDR3 (CASSFWGRSTDTQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 37, or
VI. a. CDR1 (TSINN), CDR2 (IRSNERE) and CDR3 (CATVSTDSWGKLQF) sequences contained in SEQ ID NO: 38, and
b. CDR1 (ENHRY), CDR2 (SYGVKD) and CDR3 (CAISDSNGINIQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 39, or
VII. a. CDR1 (TSINN), CDR2 (IRSNERE) and CDR3 (CATVSTDSWGKLQF) sequences contained in SEQ ID NO: 38, and
b. CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM) and CDR3 (CASSFWGRSTDTQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 40, or
VIII. a. CDR1 (SSVSVY), CDR2 (YLSGSTLV) and CDR3 (CAVSLNSGNTPLVF) sequences contained in SEQ ID NO: 41, and
b. CDR1 (DFQATT), CDR2 (SNEGSKA) and CDR3 (CSARDLAGNTGELFF) sequences contained in SEQ ID NO: 42, or
IX. a. CDR1 (KALYS), CDR2 (LLKGGEQ) and CDR3 (CGTGTDSWGKLQF) sequences contained in SEQ ID NO: 43, and
b. CDR1 (SGHDY), CDR2 (FNNNVP) and CDR3 (CASSPGLAGGEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 44, or
X.a. CDR1 (DSVNN), CDR2 (IPSGT) and CDR3 (CAVEPNSGNTPLVF) sequences contained in SEQ ID NO: 45, and
b. CDR1 (SGHTA), CDR2 (FQGNS) and CDR3 (CASSLIISYNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 46, or
XI. a. CDR1 (TSESDYY), CDR2 (QEAYKQQ) and CDR3 (CAYRSAPYSGAGSYQLTF) sequences contained in SEQ ID NO: 47, and
b. CDR1 (LGHNA), CDR2 (YNFKEQ) and CDR3 (CASSQAPGLAGAEQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 48,
Antigen recognition constructs, including.
抗原認識構築物が、抗体しくはその断片、又は、T細胞受容体(TCR)しくはその断片である、請求項1に記載の抗原認識構築物。 The antigen recognition construct according to claim 1, wherein the antigen recognition construct is an antibody or a fragment thereof, or a T cell receptor (TCR) or a fragment thereof. 抗原認識構築物がTCR又はTCRα鎖及びTCRβ鎖から構成される該TCRの断片であり、該TCRが、配列番号29と31、又は配列番号30と31、又は配列番号32と33、又は配列番号34と35、又は配列番号36と37、又は配列番号38と39、又は配列番号38と40、又は配列番号41と42、又は配列番号43と44、又は配列番号45と46、又は配列番号47と48に示される可変配列を含む、請求項1又は2に記載の抗原認識構築物。 The antigen recognition construct is a TCR or a fragment of the TCR composed of a TCRα chain and a TCRβ chain, wherein the TCR is SEQ ID NO: 29 and 31, or SEQ ID NOs: 30 and 31, or SEQ ID NOs: 32 and 33, or SEQ ID NO: 34. And 35, or SEQ ID NOs: 36 and 37, or SEQ ID NOs: 38 and 39, or SEQ ID NOs: 38 and 40, or SEQ ID NOs: 41 and 42, or SEQ ID NOs: 43 and 44, or SEQ ID NOs: 45 and 46, or SEQ ID NOs: 47. The antigen recognition construct according to claim 1 or 2, comprising the variable sequence shown in 48. 請求項1~3のいずれか1項に記載の抗原認識構築物をコードする核酸。 A nucleic acid encoding the antigen recognition construct according to any one of claims 1 to 3. 請求項4に記載の核酸を含むベクター。 A vector containing the nucleic acid according to claim 4. 請求項1~3のいずれか1項に記載の抗原認識構築物、又は請求項4に記載の核酸、又は請求項5に記載のベクターを含む宿主細胞。 A host cell comprising the antigen recognition construct according to any one of claims 1 to 3, the nucleic acid according to claim 4, or the vector according to claim 5. 宿主細胞が、CD4若しくはCD8陽性T細胞、Tリンパ球、又はリンパ球である、請求項6に記載の宿主細胞。 The host cell according to claim 6, wherein the host cell is a CD4 or CD8 positive T cell, T lymphocyte, or lymphocyte. 医薬に使用するための、請求項1~3のいずれか1項に記載の抗原認識構築物、又は請求項4に記載の核酸、又は請求項5に記載のベクター、又は請求項6又は7に記載の宿主細胞。 The antigen recognition construct according to any one of claims 1 to 3, the nucleic acid according to claim 4, the vector according to claim 5, or the vector according to claim 6 or 7. Host cell. 悪性又は良性の腫瘍疾患を含む、増殖疾患又は感染性疾患の、診断、予防、及び/又は治療に使用するための、請求項8に記載の抗原認識構築物、又は核酸、又はベクター、又は宿主細胞。 The antigen recognition construct, nucleic acid, or vector, or host cell of claim 8, for use in the diagnosis, prevention, and / or treatment of proliferative or infectious diseases, including malignant or benign tumor diseases. .. 医薬への使用が、養子T細胞療法を含む免疫療法である、請求項8又は9に記載の抗原認識構築物、又は核酸、又はベクター、又は宿主細胞。 The antigen recognition construct, or nucleic acid, or vector, or host cell according to claim 8 or 9, wherein the pharmaceutical use is an immunotherapy comprising adoptive T cell therapy. HPV特異的な抗原認識構築物(ARC)を発現する細胞系の製造のためのインビトロ方法であって、
a.適切な宿主細胞を提供する工程、
b.ARCをコードする遺伝子構築物を提供する工程であって、
該ARCは
I. a.配列番号29に含まれる、相補鎖決定領域(CDR)1 (DSASNY)、CDR2 (IRSNVGE) 及びCDR3(CAASSYNQGGKLIF)配列、及び
b. 配列番号31に含まれる、CDR1 (SGHNS)、CDR2 (FNNNVP) 及びCDR3 (CASSLLSSYNEQFF)配列、又は
II. a.配列番号30に含まれる、CDR1 (TISGTDY)、CDR2 (GLTSN)及びCDR3 (CILRDVNAGGTSYG KLTF)配列、及び
b. 配列番号31に含まれる、CDR1 (SGHNS)、CDR2 (FNNNVP)及びCDR3 (CASSLLSSYNEQFF)配列、又は
III. a.配列番号32に含まれる、CDR1 (DRGSQS)、CDR2 (IYSNGD)及びCDR3 (CAVNVDFNKFYF)配列、及び
b. 配列番号33に含まれる、CDR1 (MGHRA)、CDR2 (YSYEKL)及びCDR3 (CASSQDWNNEQFF)配列、又は
IV. a. 配列番号34に含まれる、CDR1 (VSGLRG)、CDR2 (LYSAGEE)及びCDR3 (CAVQANRGSTLGRLYF)配列、及び
b. 配列番号35に含まれる、CDR1 (MDHEN)、CDR2 (SYDVKM)及びCDR3 (CASSLWGRLAKNIQYF)配列、又は
V. a. 配列番号36に含まれる、CDR1 (DSAIYN)、CDR2 (IQSSQRE)及びCDR3 (CAVRETSGSRLTF)配列、及び
b. 配列番号37に含まれる、CDR1 (MDHEN)、CDR2 (SYDVKM)及びCDR3 (CASSFWGRSTDTQYF)配列、又は
VI. a. 配列番号38に含まれる、CDR1 (TSINN)、CDR2 (IRSNERE)及びCDR3 (CATVSTDSWGKLQF)配列、及び
b. 配列番号39に含まれる、CDR1 (ENHRY)、CDR2 (SYGVKD)及びCDR3 (CAISDSNGINIQYF)配列、又は
VII. a. 配列番号38に含まれる、CDR1 (TSINN)、CDR2 (IRSNERE)及びCDR3 (CATVSTDSWGKLQF)配列、及び
b. 配列番号40に含まれる、CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM)及びCDR3(CASSFWGRSTDTQYF) 配列、又は
VIII. a. 配列番号41に含まれる、CDR1 (SSVSVY)、CDR2 (YLSGSTLV)及びCDR3 (CAVSLNSGNTPLVF)配列、及び
b. 配列番号42に含まれる、CDR1 (DFQATT)、CDR2 (SNEGSKA)及びCDR3 (CSARDLAGNTGELFF)配列、又は
IX. a. 配列番号43に含まれる、CDR1 (KALYS)、CDR2 (LLKGGEQ)及びCDR3 (CGTGTDSWGKLQF)配列、及び
b. 配列番号44に含まれる、CDR1 (SGHDY)、CDR2 (FNNNVP)及びCDR3 (CASSPGLAGGEQFF)配列、又は
X. a. 配列番号45に含まれる、CDR1 (DSVNN)、CDR2 (IPSGT)及びCDR3 (CAVEPNSGNTPLVF)配列、及び
b. 配列番号46に含まれる、CDR1 (SGHTA)、CDR2 (FQGNS)及びCDR3 (CASSLIISYNEQFF)配列、又は
XI. a. 配列番号47に含まれる、CDR1 (TSESDYY)、CDR2 (QEAYKQQ)及びCDR3 (CAYRSAPYSGAGSYQLTF)配列、及び
b. 配列番号48に含まれる、CDR1 (LGHNA)、CDR2 (YNFKEQ)及びCDR3 (CASSQAPGLAGAEQYF)配列、
を含むものである、
c.前記適切な宿主細胞に前記遺伝子構築物を導入する工程、
d.前記適切な宿主細胞で前記遺伝子構築物を発現させる工程、
を含む、方法。
An in vitro method for the production of cell lines expressing HPV-specific antigen recognition constructs (ARC).
a. The process of providing suitable host cells,
b. The process of providing a genetic construct that encodes ARC,
The ARC
I.a. Complementarity determining regions (CDR) 1 (DSASNY), CDR2 (IRSNVGE) and CDR3 (CAASSYNQGGKLIF) sequences contained in SEQ ID NO: 29, and
b. CDR1 (SGHNS), CDR2 (FNNNVP) and CDR3 (CASSLLSSYNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 31, or
II. a. CDR1 (TISGTDY), CDR2 (GLTSN) and CDR3 (CILRDVNAGGTSYG KLTF) sequences contained in SEQ ID NO: 30 and
b. CDR1 (SGHNS), CDR2 (FNNNVP) and CDR3 (CASSLLSSYNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 31, or
III. a. CDR1 (DRGSQS), CDR2 (IYSNGD) and CDR3 (CAVNVDFNKFYF) sequences contained in SEQ ID NO: 32, and
b. CDR1 (MGHRA), CDR2 (YSYEKL) and CDR3 (CASSQDWNNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 33, or
IV. a. CDR1 (VSGLRG), CDR2 (LYSAGEE) and CDR3 (CAVQANRGSTLGRLYF) sequences contained in SEQ ID NO: 34, and
b. CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM) and CDR3 (CASSLWGRLAKNIQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 35, or
V. a. CDR1 (DSAIYN), CDR2 (IQSSQRE) and CDR3 (CAVRETSGSRLTF) sequences contained in SEQ ID NO: 36, and
b. CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM) and CDR3 (CASSFWGRSTDTQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 37, or
VI. a. CDR1 (TSINN), CDR2 (IRSNERE) and CDR3 (CATVSTDSWGKLQF) sequences contained in SEQ ID NO: 38, and
b. CDR1 (ENHRY), CDR2 (SYGVKD) and CDR3 (CAISDSNGINIQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 39, or
VII. a. CDR1 (TSINN), CDR2 (IRSNERE) and CDR3 (CATVSTDSWGKLQF) sequences contained in SEQ ID NO: 38, and
b. CDR1 (MDHEN), CDR2 (SYDVKM) and CDR3 (CASSFWGRSTDTQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 40, or
VIII. a. CDR1 (SSVSVY), CDR2 (YLSGSTLV) and CDR3 (CAVSLNSGNTPLVF) sequences contained in SEQ ID NO: 41, and
b. CDR1 (DFQATT), CDR2 (SNEGSKA) and CDR3 (CSARDLAGNTGELFF) sequences contained in SEQ ID NO: 42, or
IX. a. CDR1 (KALYS), CDR2 (LLKGGEQ) and CDR3 (CGTGTDSWGKLQF) sequences contained in SEQ ID NO: 43, and
b. CDR1 (SGHDY), CDR2 (FNNNVP) and CDR3 (CASSPGLAGGEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 44, or
X.a. CDR1 (DSVNN), CDR2 (IPSGT) and CDR3 (CAVEPNSGNTPLVF) sequences contained in SEQ ID NO: 45, and
b. CDR1 (SGHTA), CDR2 (FQGNS) and CDR3 (CASSLIISYNEQFF) sequences contained in SEQ ID NO: 46, or
XI. a. CDR1 (TSESDYY), CDR2 (QEAYKQQ) and CDR3 (CAYRSAPYSGAGSYQLTF) sequences contained in SEQ ID NO: 47, and
b. CDR1 (LGHNA), CDR2 (YNFKEQ) and CDR3 (CASSQAPGLAGAEQYF) sequences contained in SEQ ID NO: 48,
Is included,
c. The step of introducing the gene construct into the appropriate host cell,
d. The step of expressing the gene construct in the appropriate host cell,
Including, how.
前記ARCが請求項1~3のいずれか1項に記載の抗原認識構築物である、請求項11に記載の方法。 The method according to claim 11, wherein the ARC is the antigen recognition construct according to any one of claims 1 to 3. 前記宿主細胞がヒトを含む哺乳類のT細胞である、請求項11又は12に記載の方法。 The method according to claim 11 or 12, wherein the host cell is a mammalian T cell including a human. 細胞からARCの精製、及び、任意でT細胞で翻訳されたARC断片の再構築をさらに含む、請求項11~13のいずれか1項に記載の方法。 The method of any one of claims 11-13, further comprising purification of ARC from cells and optionally reconstruction of ARC fragments translated with T cells.
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