JP6966456B2 - タウpet画像化リガンド - Google Patents
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Description
[式中、メチル置換基は、存在する場合、ピリジル環の任意の利用可能な炭素原子に結合しており、nは0または1である]の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
[式中、メチル置換基は、存在する場合、ピリジル環の任意の利用可能な炭素原子に結合しており、LGは好適な脱離基であり、[陰イオン]−は好適な陰イオン性対イオンである]の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物にも関する。
[式中、メチル置換基は、存在する場合、ピリジル環の任意の利用可能な炭素原子に結合しており、nは0または1である]の化合物と称す関連材料、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和物にも関する。
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物から選択される。
[式中、[陰イオン]−は、本明細書に定義する好適な陰イオン性対イオンである]またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。特定の実施形態では、陰イオン性対イオンは、トリフルオロアセテート(−[OC(O)CF3]−)、有機スルホネートおよびタルトレートからなる群から選択され、より特定するとトリフルオロアセテートである。
本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、所定量の指定成分を含む生成物、および所定量の指定成分の組合せから直接的または間接的に生じる任意の生成物を包含するものとする。
本発明による化合物は、一般に、それぞれが当業者に公知の一連の工程によって調製することができる。特に、化合物は、以下の合成方法に従って調製することができる。
ブッフバルトアミノ化条件下で反応させることによって調製することができる。
本発明による化合物には、組織または対象をin vitroおよびin vivoの両方で画像化するための様々な用途がある。したがって、例えば、本発明による化合物は、年齢および性別の異なる対象におけるタウ凝集体沈着物の特異的分布をマッピングするために使用することができる。さらに、アルツハイマー病を含むが、タウ凝集体沈着物に起因する他の疾患、すなわち他のタウオパチーも含む様々な疾患または障害に罹患している対象におけるタウ凝集体沈着物の特異的分布を調査することが可能になる。
I.化学的性質
本明細書で使用する場合、「aq.」という用語は水溶液を意味し、「tBuOH」はtert−ブタノールを意味し、「DCM」はジクロロメタンを意味し、「DIPE」はジイソプロピルエーテルを意味し、「DMF」はN,N−ジメチルホルムアミドを意味し、「Et2O」はジエチルエーテルを意味し、「EtOAc」は酢酸エチルを意味し、「h」は時間を意味し、「HPLC」は高速液体クロマトグラフィーを意味し、「LCMS」は液体クロマトグラフィー/質量分析法を意味し、「MeOH」はメタノールを意味し、「min」は分を意味し、「m.p.」は融点を意味し、「Pd(OAc)2」は酢酸パラジウム(II)を意味し、「prep」は分取を意味し、「rm/RM」は反応混合物を意味し、「r.t./RT」は室温を意味し、「Rt」は保持時間(単位、分)を意味し、「sat.」は飽和を意味し、「sol.」は溶液を意味し、「TBAF」はテトラブチルアンモニウムフルオリドを意味し、「TEA」はトリエチルアミンを意味し、「TFA」は状況に応じてトリフルオロ酢酸またはトリフルオロアセテートを意味し、「THF」はテトラヒドロフランを意味し、「キサントホス」は4,5−ビス(ジフェニル−ホスフィノ)−9,9−ジメチルキサンテンを意味する。
中間体1
2−ブロモ−6−フルオロ−3−ピリジンアミン(20g、96.33mmol)と、アクリル酸メチル(13.01mL、144.50mmol)と、Pd(OAc)2(2.81g、12.52mmol)と、PPh3(5.81g、22.16mmol)と、TEA(30.13mL、216.75mmol)とのTHF(143mL)中混合物を、封管中で140℃で2時間加熱した。反応生成物を室温まで冷却した。NaHCO3(飽和溶液)およびEtOAcを添加し、相を分離した。水性相をEtOAcでさらに2回抽出した。まとめた有機層をMgSO4で脱水し、濾過し、蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ;ヘプタン/EtOAc 100/0〜60/40(乾式充填))により精製した。所望の画分を回収し、溶媒を蒸発させて、中間体1(17.6g、93%)を橙色固体として得た。
中間体1(14.8g、75.44mmol)とトリ−n−ブチルホスフィン(18.84mL、75.44mmol)とのAcOH(107.87mL)中混合物を、封管中で110℃で1時間加熱した。混合物を蒸発させ、次いでDIPE(500mL)中で撹拌した。固体を濾別し、50℃で終夜真空乾燥し、中間体2(11.3g、91%)を黄色固体として得た。
POCl3(1.925mL、20.71mmol)を中間体2(5g、20.71mmol)の1,4−ジオキサン(64.32mL)懸濁液に添加し、この混合物を圧力チューブ中で110℃で1時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、飽和NaHCO3水溶液に溶かし、DCMで抽出し、MgSO4で脱水し、蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル;ヘプタン/EtOAc 100/0〜80/20(乾式充填))により精製した。所望の画分を蒸発させ、中間体3(3.36g、89%)を白色固体として得た(試料を、13mol%の中間体3aを含有するものと判定した)。
1H NMR(360MHz,CDCl3−d)δ ppm 7.35(dd,J=9.1,2.9Hz,1H)7.65(d,J=9.1Hz,1H)8.21(dd,J=8.8,0.7Hz,1H)8.36−8.45(m,1H).
手順a:3−クロロベンゾペルオキソ酸(70%、8.33g、33.81mmol)を1,5−ナフチリジン(2g、15.37mmol)のDCM(100mL)溶液に添加した。反応混合物を室温で3時間撹拌した。沈殿物が形成されたが、まだ一部の変換しか観察されなかった。追加の3−クロロベンゾペルオキソ酸(70%、4.92g、19.98mmol)を添加し、次いでメタノール(50mL)を添加するとすべての沈殿物が溶解し、撹拌を終夜継続した。再度固体が形成され、これを濾過した。濾液を半分濃縮し、さらに沈殿物が形成され、これを濾過し、以前に得られた沈殿物と一緒にまとめた。この固体はまだ3−クロロ安息香酸を含有していることがわかり、DCM/MeOH(9:1)で1日トリチュレートし、濾過し、真空乾燥して、中間体4(2.18g、88%)を黄色固体として得た。
手順a:中間体4(1g、6.17mmol)とトリメチルアミン(THF中1M、37.02mL、37.02mmol)とのDCM(50mL)撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸無水物(2.57mL、18.50mml)を0℃で添加した。混合物を室温で撹拌し、完了次第(約30分)、Et2O(50mL)を添加し、撹拌を1時間継続した。白色塩を濾過により単離し、Et2Oで洗浄し、終夜真空乾燥して、中間体5:トリメチルアミン.TFA、40:60(3.4g)を得た。
手順a:NaH(鉱油中60%分散体、0.614g、15.34mmol)を、中間体5(手順aから取得:純度40%、60%トリフルオロ酢酸トリメチルアンモニウムを含有;1.58g、2.56mmol)と4−アミノ−2−メチルピリジン(0.277g、2.56mmol)との脱水DMF(分子篩で、25.24mL)中混合物に0℃で添加した。得られた混合物を、室温までゆっくり加温しながら20分間撹拌した(赤色が現れる)。シリカゲルおよび水(5mL)を添加し、溶媒を蒸発乾固し、フラッシュカラム(24gシリカ)に充填し、DCM中10%MeOHで溶離した。生成物画分を蒸発させて、426mgの粗製物を得、これを再度フラッシュカラムクロマトグラフィーにより24gシリカで精製し、DCM中10%MeOHで溶離した。生成物画分を蒸発させて、中間体6a(トリフルオロ酢酸塩、318mg、27%、純度90%;38mg、純度96%)を黄色粘着性固体として得た。
1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ ppm 2.60(s,3H)3.71(s,9H)7.66(d,J=9.2Hz,1H)8.06(dd,J=6.2,1.8Hz,1H)8.19(s,1H)8.37(d,J=9.2Hz,1H)8.43(d,J=9.2Hz,1H)8.45(d,J=6.4Hz,1H)8.71(d,J=9.2Hz,1H)11.13(br s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO−d6)δ ppm 21.81(s,1C),38.30(s,1C),54.68(s,1C),69.84(s,1C),111.06(s,1C),112.30(s,1C),116.31(s,1C),120.28(s,1C),135.80(s,1C),137.62(s,1C),138.24(s,1C),139.64(s,1C),142.01(s,1C),144.98(s,1C),150.39(s,1C),153.17(s,1C),154.79(s,1C),155.52(s,1C),158.15(s,1C),161.13(s,1C).δppm157.99(J=33Hz)および117.44(J=301Hz)での四重線に加えて、対イオンとしてのCF3CO2 −の存在を確認した。
バッチ1:NaH(3.81g、356mmol、鉱油中60%分散体)を、手順cに従って得られた中間体5(15.0g、31.8mmol)と4−アミノ−2−メチルピリジン(3.43g、31.8mmol)とのDMF(313mL、分子篩で脱水)中混合物に0℃で添加した。得られた混合物を、室温までゆっくり加温しながら20分間撹拌した(赤色が現れる)。溶媒を蒸発乾固し、EtOAc(200mL)および水(20mL)に再度溶解した。
1H NMR(600MHz,DMSO−d6+C6D6,61℃)δ ppm 2.65(s,3H),3.71(s,9H),7.82(d,J=9.1Hz,1H),8.30(br d,J=5.1Hz,1H),8.36(d,J=9.1Hz,1H),8.40(s,1H),8.45(d,J=9.2Hz,1H),8.52(d,J=6.7Hz,1H),8.69(d,J=9.2Hz,1H),11.68(br s,1H).
1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ ppm 2.71(s,3H)3.71(s,9H)7.71(d,J=9.2Hz,1H)8.19(br d,J=5.1Hz,1H)8.45−8.52(m,3H)8.55(d,J=7.0Hz,1H)8.81(dd,J=9.2,0.7Hz,1H)11.56(s,1H).
手順a:2−メチル−4−ピリジンアミン(1.66g、15.34mmol)のtBuOH(61.61mL)溶液に、中間体3(1.66g、15.34mmol)、キサントホス(177.47mg、0.31mmol)、Pd(OAc)2(68.86mg、0.31mmol)およびCs2CO3(13.99g、42.94mmol)を添加した。この混合物に窒素を5分間バブリングし、次いでバイアルを密封し、140℃で18時間加熱した。次いで、混合物を室温まで冷却し、水およびEtOAcで希釈し、固体の大部分が溶解するまで撹拌した。二相混合物をガラスフィルターで濾過し、これをEtOAcおよび水ですすいだ。次に、有機層を分離し、水性層をEtOAcで抽出した(3×)。まとめた有機層を塩水で洗浄し、次いでMgSO4で脱水し、濾過し、蒸発させた。
1H NMR(400MHz,DMSO−d6)δ ppm 2.45(s,3H)7.39(d,J=9.2Hz,1H)7.48(dd,J=8.9,2.8Hz,1H)7.72−7.85(m,2H)8.10(d,J=9.0Hz,1H)8.28(d,J=5.7Hz,1H)8.39(t,J=8.0Hz,1H)9.97(s,1H).
3−メチルピリジン−4−アミン(118.5mg、1.1mmol)のtBuOH(4.4mL)溶液に、中間体3(200mg、1.1mmol)、キサントホス(12.68mg、0.02mmol)、Pd(OAc)2(4.9mg、0.02mmol)および第三リン酸カリウム(651.0mg、3.1mmol)を添加した。この混合物に窒素を5分間バブリングし、次いでバイアルを密封し、140℃で18時間加熱した。混合物を水およびEtOAcで希釈し、固体の大部分が溶解するまで撹拌した。二相混合物をガラスフィルターで濾過し、これをEtOAcおよび水ですすいだ。次に、有機層を分離し、水性層をEtOAcで抽出した(3×)。まとめた有機層を塩水で洗浄し、次いで脱水し(MgSO4)、濾過し、蒸発させた。精製を、分取HPLC(固定相:RP XBridge Prep C18 OBD−10μm、30×150mm、移動相:0.25%NH4HCO3水溶液、MeOH)により行い、生成物画分を蒸発させて固体を得、これをメタノールに再度溶解し、再度蒸発させて化合物[19F]−2(37mg(13%)を得た。
1H NMR(360MHz,DMSO−d6)δ ppm 2.32(s,3H)7.46(dd,J=9.0,2.7Hz,1H)7.69(d,J=9.1Hz,1H)8.12(d,J=9.1Hz,1H)8.27−8.34(m,3H)8.53(d,J=5.9Hz,1H)8.85(s,1H).
4−アミノピリジン(114.43mg、1.22mmol)のtBuOH(4.40mL)溶液に、中間体3(200mg、1.10mmol)、キサントホス(12.68mg、0.022mmol)、Pd(OAc)2(4.92mg、0.022mmol)およびCs2CO3(1g、3.07mmol)を添加し、この混合物を140℃で24時間加熱した。混合物を減圧下で濃縮し、水に懸濁させ、DCMおよびEtOAcで抽出し、MgSO4で脱水し、濾過し、溶媒を蒸発させた。次いでこれをカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、40g)により、DCM/MeOH中NH3(1:0〜95:5)の勾配を使用して精製して黄色固体を得、これをDIPEおよび水でトリチュレートし、濾過し、真空乾燥して化合物[19F]−3(46mg、17%)を得た。
1H NMR(360MHz,DMSO−d6)δ ppm 7.40(d,J=8.9Hz,1H)7.49(dd,J=9.0,2.7Hz,1H)7.94(d,J=6.2Hz,2H)8.12(d,J=9.1Hz,1H)8.36−8.45(m,3H)10.10(s,1H).
材料および方法
概要
化学薬品および試薬はすべて販売元から購入し、さらに精製せずに使用した。[18F]T807(別名AV−1451、CAS[1415379−56−4]、7−(6−フルオロピリジン−3−イル)−5H−ピリド[4,3−b]インドール)を、以前に報告された手順(Declercq,L.et al.Mol Imaging 2016,14,1−15)に従って放射標識した。高速液体クロマトグラフィー(HPLC)分析を、UV検出器セットに接続したLaChrom Elite HPLCシステム(Hitachi,Darmstadt,Germany)にて、254nmで行った。放射標識化合物の分析については、HPLC溶出液を、UV検出器を通過させた後に、単一チャネル分析器に接続した3インチNaI(Tl)シンチレーション検出器(GABIボックス;Raytest,Straubenhardt,Germany)ヘと導いた。GINA Star(Raytest)データ取得システムを使用して、データを取得し、分析した。生体内分布(データは示さず)および放射性代謝産物の試験の、試料中の放射能の定量化を、試料交換器中に据えた、多チャネル分析器に連結した3インチNaI(Tl)ウェル型結晶を備えた自動γ計数管(Wallac 2480 Wizard 3q,Wallac,Turku,Finland)を使用して行った。値はバックグラウンド放射、物理的減衰および計数管不感時間について補正される。定量的データは平均±標準偏差(SD)として表す。平均値は、独立両側スチューデントのt−検定を使用して比較する。値はP≦0.05を統計的に有意とみなした。10μm厚のヒトAD死後脳薄片(BraakのステージV−VI)を内製した(KU Leuven,Neurology Department,Leuven,Belgium、地元の倫理委員会からの許可後)。動物は、温度調節され(約22℃)、湿度制御された施設の中の個別に換気されたケージに収容し、12時間−12時間明暗周期とし、餌および水を自由に摂れるようにした。動物実験はすべて、大学(KU Leuven)動物倫理委員会の許可を得てから、ベルギーの、動物のケアおよび使用についての実施規定に従って行った。
フルオリド−18([18F]F−)を、Cyclone18/9サイクロトロン(Ion Beam Applications,Louvain−la−Neuve,Belgium)中で、2mLの97%濃縮18O−H2O(Rotem HYOX18,Rotem Industries,Beer Sheva,Israel)を18−MeVプロトンで照射することによる18O(p,n)18F核反応によって生成した。照射後、[18F]F−を、SepPak Light Accellプラス第四級メチルアンモニウム(QMA)陰イオン交換カートリッジ(CO3 2−型、Waters,Milford,Massachusetts,U.S.A.)に捕捉し、Kryptofix 2.2.2(K−222、27.86mg)とK2CO3(2.5mg)とのCH3CN/H2O(0.75mL;95:5v/v)中混合物で溶離した。ヘリウム流で100℃にて溶媒を蒸発させてから、無水CH3CN(1mL)を添加し、[18F]F−を同じ条件下でさらに乾燥した。
LCMS一般手順
高速液体クロマトグラフィー(HPLC)測定は、各方法に明記したLCポンプ、ダイオードアレイ(DAD)検出器またはUV検出器およびカラムを使用して行った。必要に応じて、追加の検出器を含めた(下の方法の表を参照)。
値はピーク値または融解範囲のいずれかであり、この分析方法に通常付随する実験上の不確実性を伴って得られる。
ヒトAD脳からの凝集タウおよびアミロイド斑の単離
濃縮した凝集タウ画分を、GreenbergおよびDaviesが記述したプロトコル(Greenberg SG,Davies P.A preparation of Alzheimer paired helical filaments that display distinct tau proteins by polyacrylamide gel electrophoresis.Proc.Natl.Acad.Sci.1990;87:5827−5831)をわずかに変更したバージョンに従い、ヒトAD脳組織(タウ原線維の量が多い後頭皮質)を使用して調製した。手短に言えば、凍結したヒトAD脳試料(約10g)を、10体積の冷均質化緩衝液(10mMトリス、800mM NaCl、1mM EGTA、10%スクロース、pH7.4、PhosSTOPホスファターゼおよびcOmplete EDT不含プロテアーゼ阻害剤(Roche,Vilvoorde,Belgium)を含有)を使用して、氷上で均質化した。27000×gにて4℃で20分間遠心分離した後、上清を回収し、1%(w/v)N−ラウロイルサルコシンおよび1%(v/v)2−メルカプトエタノールを添加した。N−ラウロイルサルコシン/2−メルカプトエタノールの上清を、オービタルシェイカーで振盪しながら37℃で2時間インキュベートした。続いて、108000×gにて室温で1.5時間超遠心分離して、凝集タウを濃縮してペレットにした。上清を除去し、ペレットを少量のTBS(50mMトリス、150mM NaCl、pH7.4)で慎重に2回すすいだ。最後に、凝集タウのペレットをTBSに入れて元通りにし、再懸濁させて試料の均質性を確認した。少量に等分して−80℃で保管した。
競合放射性リガンド結合アッセイにより、用量反応濃度範囲の試験化合物の存在下で、放射標識した参照リガンドの結合を測定する。
ヒトAD脳の塊(BraakのステージV−VI)を瞬間凍結し、クライオスタットでスライスし(20μm厚)、免疫組織化学検査に使用するまで−80℃で保管した。切片を乾燥し、ホルマリン中に固定し、過酸化水素(DAKO、S2023)で5分間、およびブロッキング試薬(PBS1x+0.05%Triton X−100)で1時間インキュベートした。抗アミロイドまたは抗タウ抗体[(4G8,Covance,SIG−38220)、バックグラウンド低減成分(DAKO、S3022)を含む1/500希釈の抗体希釈液、または(AT8(Bierna et al.,EMBO J.1992,11(4):1593−7)、内製、1mg/ml原液濃度)、バックグラウンド低減成分(DAKO、S3022)を含む0.2μg/mLの抗体希釈液]、を切片に1時間適用した。大規模な洗浄の後に、スライドをHRPコンジュゲート抗マウス二次抗体(Envision、DAKO、K4000)でインキュベートし、次いで発色DAB標識した(DAKO、K3468)。ヘマトキシリンで対比染色してから、切片を脱水し、有機封入剤(Vectamount,Vector labs,H−5000)で封入した。図1aは、AT8 IHCで検出したAD脳におけるタウの病状を示し、図1bは、DAKO IHCで検出したAD脳におけるβ−アミロイドの病状を示す。高拡大画像は、赤い挿入の部位から取っている。
AD患者(BraakのステージV−VI)の風乾凍結した20μm厚の薄片を[18F]化合物番号1(切片当たり7.4kBq/500μL)で60分間インキュベートし、次いで、他で記載されているように、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)とエタノールとの混合物で洗浄した(Xia CF,Arteaga J,Chen G,et al.[(18)F]T807,a novel tau positron emission tomography imaging agent for Alzheimer’s disease.Alzheimers Dement.2013,1−11,doi:10.1016/j.jalz.2012.11.008)。結合の特異性を査定するために、1μMの標準T808または[18F]化合物番号1の存在下で、薄片をトレーサーでインキュベートした。薄片を乾燥してから蛍光ストレージスクリーン(超分解能スクリーン、Perkin Elmer)に曝露した。スクリーンをCyclone Plusシステム(Perkin Elmer,Waltham,Massachusetts,U.S.A.)で読み出し、Optiquantソフトウェアを使用して分析した。結果を平方mm当たりのデジタル光単位(DLU/mm2)として表す。隣接するAD薄片を抗タウ抗体(AT8)および抗Aβ抗体(AG8)で免疫染色して、[18F]化合物番号1の結合と関連付けた。図2は、オートラジオグラフィーにおけるAD脳切片への[18F]化合物番号1の結合を示す(左)。結合パターンは隣接するスライドにてAT8 IHCで検出されたタウの病状(図1を参照)に十分に一致している。神経原線維変化(NFT)へのトレーサー結合の特異性を査定するために、標準の化合物番号1およびT808での遮蔽試験を行った。1μMの非放射性化合物番号1で自己遮蔽した結果は99%阻害となった(図2、中央)。[18F]化合物番号1の結合は、1μMのT808の存在下では98%低減した(図2、右)。遮蔽のパーセンテージは(1mol/L遮蔽剤の存在下でのDLU/mm2)/(DLU/mm2トレーサーのみ)として計算した。
ウィスターラット
動的120分マイクロPETスキャンを、Focus(商標)220マイクロPETスキャナー(Concorde Microsystems,Konxville,TN,USA)で、3匹の雌ウィスターラットを全手順の間ガス麻酔下に置いて(O2中2.5%イソフルラン、流速1L/分)同時に行った。動物の頭部をマイクロPETスキャナーの視野の中央に置いた。スキャンをリストモードで取得し、取得データに24の時間枠(4×15秒、4×60秒、5×180秒、8×300秒、3×600秒)でフーリエリビニングをした。データに3D最大事後確率(3D−MAP)再構成を施し、アフィン変換を使用して、Paxinosの座標におけるラット脳[18F]FDGテンプレートに手作業で位置合わせをし、事前定義した関心体積(VOI)分析を可能にした。全脳の時間放射能曲線(TAC)を、VOIを使用して、PMODソフトウェア(v3.2、PMOD Technologies Ltd.,Zuerich,Switzerland)で生成した。脳内の放射能濃度を、トレーサー注射後の時間の関数としての標準取込値(SUV、(脳内放射能Bq/mL)/(全注入量(Bq)/体重g)で計算)として表した。スキャンを、50MBqの[18F]化合物番号1または[18F]T807のIV注射直後に開始した(n=3/トレーサー)。前処置試験および置換試験のために、非放射性参照化合物である化合物番号1またはT807を、5%DMSOと、5%Tween80と、40%(2−ヒドロキシプロピル)−β−シクロデキストリン(CD)との混合物に溶解し(以下のように調製:化合物をDMSOに溶解し、次いで40%CD水溶液で希釈し、次いで5%Tween80水溶液を添加し(沈殿を防止するため)、次いで最終DMSO濃度が5%になるまで40%CD水溶液でさらに希釈した)、注射前に0.22μm膜フィルター(Millex−GV,Millipore)で濾過した。前処置(n=1)は、放射性トレーサー注射の60分前に、10mg/kgの化合物番号1またはT807を皮下(SC)注射することによって行った。置換(n=1)は、放射性トレーサー注射の30分後に、1mg/kgの化合物番号1またはT807をIV注射することによって行った。μPET画像を、未処置のラットにおいて取得したベースラインスキャン(n=1)と比較した。
アカゲザル(実験1)
[18F]化合物番号1または[18F]T807を使用した動的120分マイクロPETスキャンを、Focus(商標)220マイクロPETスキャナー(Concorde Microsystems,Knoxville,TN,USA)にて、筋肉内(IM)注射によりケタミン(Ketalar(登録商標))およびキシラジン(Rompun(登録商標))で鎮静状態にした雌アカゲザル(9歳アカゲザル(macaca mulatta)、5.3kg)および雄アカゲザル(6歳アカゲザル(macaca mulatta)、7.6kg)にそれぞれ行った。スキャン中、サルに、追加用量のケタミン/キシラジンをIV注射により反復投与した。血液中O2飽和、呼吸頻度および心拍数を、全実験中モニターした。動物の頭部をマイクロPETスキャナーの視野の中央に置いた。スキャンをリストモードで取得し、取得データに24の時間枠(4×15秒、4×60秒、5×180秒、8×300秒、3×600秒)でフーリエリビニングをした。データを、3D最大事後確率(3D−MAP)反復再構成法を使用して再構成した。全脳、脳梁、小脳および嗅内皮質のTACを、VOIを使用して、PMODソフトウェアで生成した。脳内の放射能濃度を、トレーサー注射後の時間の関数としてのSUVとして表す(図5aおよび5b)。スキャンを、185MBqの[18F]T807の[18F]化合物番号1を右肢の伏在静脈にIV注射した直後に開始した。[18F]化合物番号1および[18F]T807の120分ベースラインスキャンの結果を図5aおよび5bにそれぞれ示す。再度、[18F]化合物番号1のベースラインスキャンのTACは、初期脳取込みが高く、ウォッシュアウトが速い(SUV値約1.8)ことを示し、白質結合の増加は記録されなかった(図5a)。脳内の[18F]T807のベースラインスキャンのTACは、初期脳取込みがもっと遅く(SUV値約1.3)、ウォッシュアウトがもっと遅いことを示す(図5b)。頭蓋側部でのTACは、両化合物について、時間の関数としての増加はしなかった。したがって、[18F]化合物番号1の頭蓋付近での高取込みの集中は、アクリル製ヘッドポストをサルの頭蓋に固定したことで生じた瘢痕または炎症組織に[18F]化合物番号1が貯留したためである可能性が高い。
[18F]化合物番号1または[18F]T807を使用した動的120分μPETスキャンを、Focus220μPETスキャナーにて、筋肉内(IM)注射によりケタミン(Ketalar(登録商標))およびキシラジン(Rompun(登録商標))で鎮静状態にした雄アカゲザル(6歳アカゲザル(Macaca mulatta)、7.6kg)に行った。スキャン中、サルに、追加用量のケタミン/キシラジンをIV注射により反復投与した。血液中O2飽和、呼吸頻度および心拍頻度を、全実験中モニターした。動物の頭部をμPETスキャナーの視野の中央に置いた。スキャンをリストモードで取得し、24の時間枠(4×15秒、4×60秒、5×180秒、8×300秒、3×600秒)でフーリエリビニングをした。データを、3D最大事後確率(3D−MAP)反復再構成法を使用して再構成した。全脳のTACを、VOIを使用して、PMODソフトウェアで生成した。脳内の放射能濃度を、トレーサー注射後の時間の関数としてのSUVとして表す。スキャンを、185MBqの[18F]化合物番号1または[18F]T807を右肢の伏在静脈にi.v.注射した直後に開始した。[18F]化合物番号1および[18F]T807の120分ベースラインスキャンの結果を図7aおよび7bにそれぞれ示す。脳内の[18F]化合物番号1のベースラインスキャンのTACは、初期脳取込みが速く高く、ウォッシュアウトが速い(SUV値約1.9、ピークまでの時間:1分)ことを示し、白質結合が低いことが記録された。脳内の[18F]T807のベースラインスキャンのTACは、初期脳取込み(SUV値約1.3、取込みピークまでの時間:15分)およびウォッシュアウトがもっと遅いことを示す(図8)。頭蓋のTACは、両化合物について、SUVシグナルが時間の関数としての増加はしなかったことを示す。実験1で観察された[18F]化合物番号1の頭蓋付近での高取込みの集中は、実験2では、同程度まで観察されなかった。[18F]化合物番号1および[18F]T807の頭蓋のTACにより、シグナルが経時で減少しているため、頭蓋付近での集中的な取込みの増加は[18F]フルオリドに関連する骨取込みによるものではあり得ないことが示された。
Claims (13)
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
- 前記組成物が滅菌溶液である、請求項4に記載の医薬組成物。
- タウ凝集体を結合させ、画像化するのに使用するための、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物または請求項4もしくは5に記載の医薬組成物。
- 対象の脳内のタウ凝集体の画像診断に使用するための、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物または請求項4もしくは5に記載の医薬組成物。
- タウオパチーに罹患している、または罹患している疑いのある患者のタウ凝集体を結合させ、画像化するのに使用するための、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物または請求項4もしくは5に記載の医薬組成物。
- (a)式(P−1)[式中、メチル置換基は、存在する場合、ピリジル環の任意の利用可能な炭素原子に結合しており、nは0または1であり、[陰イオン]−は、トリフルオロアセテート;C 1〜4 アルキルスルホネート;フェニルがC 1〜4 アルキル、ハロまたはニトロ基で任意選択により置換されていてもよいフェニルスルホネート;およびタルトレートから選択される、陰イオン性対イオンである]の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、加熱下、反応を進行させて完了させることを可能にするのに十分な時間、N,N−ジメチルホルムアミドである溶媒中で、フッ化物源18F−と反応させるステップ、または(b)式(I−A)[式中、メチル置換基は、存在する場合、ピリジル環の任意の利用可能な炭素原子に結合しており、nは0または1であり、LGは、トリメチルアンモニウム、クロロ、ブロモ、ニトロおよび4−メチルベンゼンスルホネートから選択される、脱離基である]の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、加熱下、反応を進行させて完了させることを可能にするのに十分な時間、N,N−ジメチルホルムアミドである溶媒中で、フッ化物源18F−と反応させるステップを含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の化合物の調製方法。
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