JP6792857B2 - 肝細胞系譜細胞を取得するための方法および物質 - Google Patents
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Description
2.該トランスフェクションされた細胞を肝細胞系譜細胞に分化させることをさらに含む、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
3.該培養することが、該トランスフェクションされた細胞の肝細胞系譜細胞への分化を来たす、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
4.該4つの遺伝子が、該細胞を肝細胞系譜細胞へ分化させることに相乗的に作用する、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
5.該トランスフェクションされた細胞から肝細胞系譜細胞を取得することを更に含む、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
6.該肝細胞系譜細胞が不死の肝細胞系譜細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
7.該肝細胞系譜細胞が、肝細胞に特徴的な細胞表面マーカーの少なくとも1つを発現している、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
8.該肝細胞系譜細胞が、α−フェトプロテイン、アルブミン、または両方を発現している、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
9.該トランスフェクションされた細胞が、肝細胞分化、肝細胞増殖、または両方のために処方された培地中で培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
10.該トランスフェクションされた細胞が、ウイリアムズE培地、リプロFF(多能性を維持するフィーダー不含培地)培地中で培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
11.ウイリアムズE培地が、炭酸水素ナトリウム、L−グルタミン、フェノールレッド、および4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)緩衝液の1または2以上を含有する、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
12.ウイリアムズE培地が、炭酸水素ナトリウム、L−グルタミン、フェノールレッド、および4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)緩衝液の1または2以上を含まない該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
13.ウイリアムズE培地が、ウシ胎仔血清(FBS)を追加される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
14.該トランスフェクションされた細胞が、増殖環境内でウイリアムズE培地中で培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
15.該トランスフェクションされた細胞が、増殖環境内で培養した後にウイリアムズE培地中で培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
16.該トランスフェクションされた細胞が、約4日間から約12日間培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
17.該トランスフェクションされた細胞が、少なくとも7日間培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
18.該細胞が哺乳動物細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
19.該細胞がヒト細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
20.該細胞が幹細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
21.該細胞が多能性幹細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
22.該細胞が人工多能性幹(iPS)細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
23.該細胞が、201B7 iPS細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
24.該細胞が胚性幹細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
25.該細胞が体細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
26.該細胞が線維芽細胞である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
27.該トランスフェクションがインビトロで行われる、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
28.該培養することがインビトロで行われる、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
29.該増殖環境がインビトロの増殖環境である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
30.該増殖環境が、液体培地、固体支持体、または両方を含む、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
31.該細胞が、該複数の発現ベクターで同時にトランスフェクションされる、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
32.該細胞が、該複数の発現ベクターで順次トランスフェクションされる、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
33.該細胞が、該複数の発現ベクターの少なくとも2つで同時にトランスフェクションされる、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
34.複数の発現ベクターの2つまたはそれ以上の導入の間に少なくとも30分間の間隔がある、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
35.該複数の遺伝子の少なくとも1つが構成的に活性化されている、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
36.該複数の遺伝子の少なくとも1つが誘発可能である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
37.少なくとも1つの誘導可能な遺伝子が、好適な培地中での増殖により誘導可能である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
38.培地がウイリアムズE培地である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
39.トランスフェクションが、少なくとも1つの転写因子または遺伝子について一過性である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
40.トランスフェクションが、少なくとも1つの転写因子または遺伝子について安定的である、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
41.該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法によって取得された肝細胞系譜細胞。
42.複数の工程;
(a)4つの発現ベクターを人工多能性幹(iPS)細胞に導入する工程、ここで該複数の発現ベクターはCCAAT/エンハンサー結合タンパク質α(CEBPA)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、CCAAT/エンハンサー結合タンパク質β(CEBPB)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、フォークヘッドボックスA1(FOXA1)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、およびフォークヘッドボックスA3(FOXA3)をコードする遺伝子を含む発現ベクターであり、並びに
(b)工程(a)で取得された該細胞を増殖環境内で培養する工程、
を含む、肝細胞系譜細胞の製造方法。
43.工程(a)で取得された該細胞が、ウイリアムズE培地中で培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
44.工程(a)および(b)で取得された該細胞が、ウイリアムズE培地中で培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
45.工程(a)で取得された該細胞が、少なくとも7日間培養される、該任意の先行するまたは後述する実施形態/特徴/態様の方法。
47.該トランスフェクションされた細胞が、肝細胞分化、肝細胞増殖、または両方のために処方された培地中で培養される、上記46.載の方法。
48.該トランスフェクションされた細胞が、ウイリアムズE培地またはリプロFF培地中で培養される、上記46.の方法。
49.該トランスフェクションされた細胞が、増殖環境内でウイリアムズE培地中で培養される、上記46.の方法。
50.該トランスフェクションされた細胞が、増殖環境内で培養した後にリプロFF培地中で培養される、上記46.の方法。
51.該トランスフェクションされた細胞が、約4日間から約12日間培養される、上記46.〜50.のいずれかの方法。
52.該トランスフェクションされた細胞が、少なくとも7日間培養される、上記46.〜50.のいずれかの方法。
53.該多能性幹細胞がiPS細胞である、上記46.〜52.のいずれかの方法。
54.該多能性幹細胞が哺乳動物細胞である、上記46.〜53.のいずれかの方法。
55.該多能性幹細胞がヒト細胞である、上記46.〜53.のいずれかの方法。
56.該トランスフェクションがインビトロで行われる、上記46.〜55.のいずれかの方法。
57.該培養することがインビトロで行われる、上記46.〜56.のいずれかの方法。
58.該増殖環境がインビトロの増殖環境である、上記46.〜57.のいずれかの方法。
59.該増殖環境が、液体培地、固体支持体、または両方を含む、上記46.〜58.のいずれかの方法。
60.該細胞が、該複数の発現ベクターで同時にトランスフェクションされる、上記46.〜59.のいずれかの方法。
61.該細胞が、該複数の発現ベクターで順次トランスフェクションされる、上記46.〜59.のいずれかの方法。
62.以下の工程;
(a)4つの発現ベクターを人工多能性幹(iPS)細胞にインビトロで導入する工程、ここで該複数の発現ベクターはCCAAT/エンハンサー結合タンパク質α(CEBPA)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、CCAAT/エンハンサー結合タンパク質β(CEBPB)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、フォークヘッドボックスA1(FOXA1)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、およびフォークヘッドボックスA3(FOXA3)をコードする遺伝子を含む発現ベクターであり、並びに
(b)工程(a)で取得された該細胞をウイリアムズE培地中で少なくとも7日間培養する工程、
を含む、肝細胞系譜細胞(Hepatocyte lineage cells)の製造方法。
63.上記46.〜59.のいずれかの方法によって取得された肝細胞系譜細胞。
64.前記肝細胞系譜細胞がα−フェトプロテイン、アルブミン、またはその両方を発現する細胞である、上記63.の細胞。
65.CEBPAをコードする第1の遺伝子を含む第1の発現ベクター、CEBPBをコードする第2の遺伝子を含む第2の発現ベクター、FOXA1をコードする第3の遺伝子を含む第3の発現ベクター、およびFOXA3をコードする第4の遺伝子を含む第4の発現ベクターを含む試薬を含む、細胞系譜細胞の製造用試薬。
66.CEBPAをコードする第1の遺伝子を含む第1の発現ベクターを含む試薬、CEBPBをコードする第2の遺伝子を含む第2の発現ベクターを含む試薬、FOXA1をコードする第3の遺伝子を含む第3の発現ベクターを含む試薬、およびFOXA3をコードする第4の遺伝子を含む第4の発現ベクターを含む試薬が、それぞれ別個の容器に格納された態様で含まれる、肝細胞系譜細胞の製造用試薬キット。
Claims (16)
- CCAAT/エンハンサー結合タンパク質α(CEBPA)をコードする第1の遺伝子を含む第1の発現ベクター、CCAAT/エンハンサー結合タンパク質β(CEBPB)をコードする第2の遺伝子を含む第2の発現ベクター、フォークヘッドボックスA1(FOXA1)をコードする第3の遺伝子を含む第3の発現ベクター、およびフォークヘッドボックスA3(FOXA3)をコードする第4の遺伝子を含む第4の発現ベクターで多能性幹細胞をトランスフェクションし、かつ、得られた該トランスフェクションされた細胞をウイリアムズE培地またはリプロFF培地中で培養することを含む、肝細胞系譜細胞(Hepatocyte lineage cells)の製造方法。
- 該トランスフェクションされた細胞が、肝細胞分化、肝細胞増殖、または両方のために処方された培地中で培養される、請求項1に記載の方法。
- 該トランスフェクションされた細胞が、約4日間から約12日間培養される、請求項1または2に記載の方法。
- 該トランスフェクションされた細胞が、少なくとも7日間培養される、請求項1または2に記載の方法。
- 該多能性幹細胞が人工多能性幹(iPS)細胞である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 該多能性幹細胞が哺乳動物細胞である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 該多能性幹細胞がヒト細胞である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 該トランスフェクションがインビトロで行われる、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 該培養することがインビトロで行われる、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 該細胞が、該複数の発現ベクターで同時にトランスフェクションされる、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 該細胞が、該複数の発現ベクターで順次トランスフェクションされる、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 以下の工程;
(a)4つの発現ベクターを人工多能性幹(iPS)細胞にインビトロで導入する工程、ここで該複数の発現ベクターはCCAAT/エンハンサー結合タンパク質α(CEBPA)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、CCAAT/エンハンサー結合タンパク質β(CEBPB)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、フォークヘッドボックスA1(FOXA1)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、およびフォークヘッドボックスA3(FOXA3)をコードする遺伝子を含む発現ベクターであり、並びに
(b)工程(a)で取得された該細胞をウイリアムズE培地中で少なくとも7日間培養する工程、
を含む、肝細胞系譜細胞(Hepatocyte lineage cells)の製造方法。 - 請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法によって取得された肝細胞系譜細胞であって、CCAAT/エンハンサー結合タンパク質α(CEBPA)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、CCAAT/エンハンサー結合タンパク質β(CEBPB)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、フォークヘッドボックスA1(FOXA1)をコードする遺伝子を含む発現ベクター、フォークヘッドボックスA3(FOXA3)をコードする遺伝子を含む発現ベクターを含む、細胞。
- 前記肝細胞系譜細胞がα−フェトプロテイン、アルブミン、またはその両方を発現する細胞である、請求項13に記載の細胞。
- CEBPAをコードする第1の遺伝子を含む第1の発現ベクター、CEBPBをコードする第2の遺伝子を含む第2の発現ベクター、FOXA1をコードする第3の遺伝子を含む第3の発現ベクター、およびFOXA3をコードする第4の遺伝子を含む第4の発現ベクターを含む試薬を含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法に使用される肝細胞系譜細胞の製造用試薬。
- CEBPAをコードする第1の遺伝子を含む第1の発現ベクターを含む試薬、CEBPBをコードする第2の遺伝子を含む第2の発現ベクターを含む試薬、FOXA1をコードする第3の遺伝子を含む第3の発現ベクターを含む試薬、およびFOXA3をコードする第4の遺伝子を含む第4の発現ベクターを含む試薬が、それぞれ別個の容器に格納された態様で含まれる、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法に使用される肝細胞系譜細胞の製造用試薬キット。
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