JP6676278B2 - Inhibitor of weight gain of biological material, and adibonectin secretagogue in blood - Google Patents
Inhibitor of weight gain of biological material, and adibonectin secretagogue in blood Download PDFInfo
- Publication number
- JP6676278B2 JP6676278B2 JP2015014860A JP2015014860A JP6676278B2 JP 6676278 B2 JP6676278 B2 JP 6676278B2 JP 2015014860 A JP2015014860 A JP 2015014860A JP 2015014860 A JP2015014860 A JP 2015014860A JP 6676278 B2 JP6676278 B2 JP 6676278B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- extract
- mangosteen
- low molecular
- molecular weight
- proanthocyanidin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
この発明は、マンゴスチン由来のポリフェノールを含有した、生体物の体重増加抑制剤、及び血中アディポネクチン分泌促進剤に関する。前記生体物はヒト及び動物を含み、生体物の体重増加抑制剤は健康食品、医療用食品、機能性食品、医薬品、化粧品、医薬部外品を含む。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to an agent for suppressing weight gain of a living body and an agent for promoting secretion of adiponectin in blood , which contain a polyphenol derived from mangosteen. The biological material includes humans and animals, and the body weight gain inhibitor of the biological material includes health foods, medical foods, functional foods, pharmaceuticals, cosmetics, and quasi-drugs.
メタボリックシンドロームとは、肥満に加えて、高血圧、高血脂、高血糖のうち二つ以上を合併した状態である。重篤なメタボリックシンドロームは、動脈硬化を誘発し、心筋梗塞や脳梗塞を招くことから、早期発見と予防が重要視されている。このメタボリックシンドロームの指標として、アディポネクチンが報告されている。アディポネクチンは、脂肪細胞から分泌されるタンパク質である。アディポネクチンの血中分泌量低下はインスリン抵抗性、インスリン応答性低下、メタボ発症の一因となり、高インスリン血症（インスリンの血中分泌量増加）を招来する。よってメタボリックシンドロームの予防又は改善のためには、アディポネクチンの分泌量低下を避けながら、或いはアディポネクチンの分泌量を増加させながら内臓脂肪減少を果たすことが必要となる。 Metabolic syndrome is a condition in which two or more of hypertension, hyperglycemia, and hyperglycemia are combined with obesity. Severe metabolic syndrome induces arteriosclerosis and leads to myocardial infarction and cerebral infarction. Therefore, early detection and prevention are regarded as important. Adiponectin has been reported as an indicator of this metabolic syndrome. Adiponectin is a protein secreted by fat cells. Decreased blood adiponectin secretion contributes to insulin resistance, decreased insulin responsiveness, and the onset of metabolism, and leads to hyperinsulinemia (increased insulin blood secretion). Therefore, in order to prevent or improve metabolic syndrome, it is necessary to reduce visceral fat while avoiding a decrease in adiponectin secretion or increasing adiponectin secretion.
ここで本発明者は、アディポネクチン産生促進剤として、桑葉抽出物、マンゴスチン果皮抽出物、α−マンゴスチン、γ−マンゴスチン、カカオ種子抽出物、カカオ外皮抽出物、高麗人参抽出物またはライチポリフェノールから選ばれる１種類、または２種以上の混合物からなるアディポネクチン産生促進剤を提案した（特許文献１参照）。 Here, the present inventor selected as the adiponectin production promoter from mulberry leaf extract, mangosteen peel extract, α-mangostin, γ-mangostin, cacao seed extract, cacao hull extract, ginseng extract or lychee polyphenol. An adiponectin production promoter consisting of one or a mixture of two or more types has been proposed (see Patent Document 1).
ほかに従来、マンゴスチンの果皮から極性溶媒を用いて抽出して得られるα−マンゴスチンおよび／またはＲがＨであるγ−マンゴスチンが、低毒性で有用な抗アレルギー作用を有するとして開示される（特許文献２参照）。 In addition, α-mangostin and / or γ-mangostin obtained by extracting R from mangosteen using a polar solvent have been disclosed as having low toxicity and useful antiallergic activity (Patent Reference 2).
またほかに従来、ライチポリフェノール含有組成物、その製造方法及び用途として、ライチ果皮もしくは乾燥ライチ果皮またはこれらの粉砕物を水もしくは極性有機溶媒またはこれらの混合物で抽出して得た粗抽出物の水可溶画分と、水不溶画分を低級アルコールまたは低級アルコールと水との混合液で処理して得られた画分とを、逆相カラムに供し、濃度３０〜５０％の含水アルコールで溶出することを特徴とするライチ果皮由来のポリフェノールを７０％以上の濃度で含有するものが開示される（特許文献３参照）。 In addition, conventionally, a lychee polyphenol-containing composition, a method for producing the same, and a method for producing lychee or dried litchi pericarp or water or a polar organic solvent or a mixture thereof to obtain a crude extract The soluble fraction and the fraction obtained by treating the water-insoluble fraction with a lower alcohol or a mixture of a lower alcohol and water are applied to a reversed-phase column, and eluted with 30-50% aqueous alcohol. A lychee-derived polyphenol at a concentration of 70% or more is disclosed (see Patent Document 3).
しかし上記はいずれも、マンゴスチンエキス又はライチポリフェノール単体の組成物である。低分子プロアントシアニジン及びマンゴスチンエキスを組み合わせた場合、マンゴスチンエキスの配合量又は配合比率によってはアディポネクチン促進効果を有さないか、あるいは逆に高容量／高配合比率のマンゴスチンエキスの投与によって、アディポネクチン分泌が低下することがある。これは、低分子プロアントシアニジンをマンゴスチンエキスと組み合わせて配合する場合に生じる、マンゴスチンエキスの細胞障害性によるためと予想されている。このような細胞障害の傾向が現れると、内臓脂肪増加の抑制効果と血中アディポネクチン分泌低下の抑制効果とを得られず、内臓脂肪抑制剤として機能しない可能性がある。 However, all of the above are compositions of a single substance of mangosteen extract or lychee polyphenol. When a low molecular weight proanthocyanidin and a mangosteen extract are combined, adiponectin secretion may not be achieved depending on the blending amount or blending ratio of the mangosteen extract, or conversely, administration of a high volume / high blending ratio of a mangosteen extract may cause adiponectin secretion. May drop. This is expected to be due to the cytotoxicity of the mangosteen extract that occurs when a low molecular weight proanthocyanidin is combined with the mangosteen extract. If such a tendency of cytotoxicity appears, the effect of suppressing increase in visceral fat and the effect of suppressing decrease in blood adiponectin secretion may not be obtained, and may not function as a visceral fat inhibitor.
そこでこの発明は、低分子プロアントシアニジン及びマンゴスチンエキスからなる２種の特定成分を所定の配合割合で含有することにより、内臓脂肪増加の抑制効果と血中アディポネクチン分泌低下の抑制効果とを有する組成物、さらに言えば、内臓脂肪減少効果と血中アディポネクチン分泌促進効果とを有する組成物を提供することを課題とする。 Accordingly, the present invention provides a composition having an effect of suppressing an increase in visceral fat and an effect of suppressing a decrease in blood adiponectin secretion by containing two specific components consisting of a low molecular weight proanthocyanidin and a mangosteen extract in a predetermined mixing ratio. It is another object of the present invention to provide a composition having a visceral fat reducing effect and a blood adiponectin secretion promoting effect.
前記課題は、以下に記載の本発明により解決することができる：
［１］少なくとも、低分子プロアントシアニジン、及びマンゴスチンエキスの２種の成分をそれぞれ所定の有意な配合量で含有する固形組成物からなり、低分子プロアントシアニジンの配合量が、マンゴスチン抽出物に対する有意な配合量比（すなわち０を超えて配合の意義を有する程度の配合量比）をもってマンゴスチン抽出物よりｊも多く配合される、生体物の体重増加抑制剤。
［２］低分子プロアントシアニジンの固形成分配合量が、マンゴスチンエキスの固形成分配合量の１．２倍以上５．０倍の範囲内、好ましくは２．０倍〜４．５倍の範囲内にある、［１］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［３］低分子プロアントシアニジンが、ライチから抽出されたポリフェノールである、［１］〜［２］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［４］ライチから抽出されたポリフェノールが、低分子オリゴマーたるオリゴノール（商標）からなる、［３］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［５］マンゴスチンエキスが、非極性溶媒で脱脂されたマンゴスチン果皮由来の乾燥エキスであって、αマンゴスチン、γマンゴスチンの両方を含むポリフェノールを含有する、［１］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［６］さらにカルシウム成分を含有する、［１］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［７］低分子プロアントシアニジンの脱脂粉末と、マンゴスチンエキスの脱脂粉末とを、固形成分配合比率が１．１超５．０未満となるように配合し粒状に圧縮成形した、［２］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［８］低分子プロアントシアニジンの、マンゴスチンエキスに対する固形成分配合比率が（４.０〜４.５）：１の範囲内である、［２］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［９］マンゴスチンエキスの固形成分配合量の、固形組成物全体重量に対する全体配合比率が８０％を超えない、［１］〜［８］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［１０］１回当たりの口腔摂取量が、低分子プロアントシアニジン２００ｍｇ以上であって、マンゴスチンエキス１００ｍｇ以下である、［１］〜［９］記載の生体物の体重増加抑制剤。
［１１］生体物への口腔摂取によって血液に含まれるアディポネクチンの分泌を促進する、［１］〜［１０］記載の機能性食品。
The problem can be solved by the present invention described below:
[1] A solid composition containing at least two components of a low molecular weight proanthocyanidin and a mangosteen extract in a predetermined significant amount, respectively, wherein the amount of the low molecular weight proanthocyanidin is significant relative to the mangosteen extract. An agent for suppressing weight gain of a biological substance, wherein the amount of j is greater than that of the mangosteen extract in a compounding ratio (that is, a compounding ratio exceeding 0 and having a meaning of compounding).
[2] The solid component content of the low molecular weight proanthocyanidin is in the range of 1.2 times or more and 5.0 times the solid component content of the mangosteen extract, preferably in the range of 2.0 times to 4.5 times. An agent for suppressing weight gain of a biological substance according to [1].
[3] The body weight increase inhibitor according to [1] or [2], wherein the low molecular weight proanthocyanidin is a polyphenol extracted from litchi.
[4] The agent for suppressing weight gain of a biological matter according to [3], wherein the polyphenol extracted from litchi comprises Oligonol (trademark) which is a low molecular oligomer.
[5] The body weight increase inhibitor according to [1], wherein the mangosteen extract is a dried extract derived from mangosteen peel defatted with a non-polar solvent and contains a polyphenol containing both α-mangostin and γ-mangostin. .
[6] The agent for suppressing weight gain of a biological material according to [1], further comprising a calcium component.
[7] The defatted powder of low molecular weight proanthocyanidin and the defatted powder of mangosteen extract are blended so that the solid component blending ratio is more than 1.1 and less than 5.0, and compression molded into granules, [2]. An agent for suppressing body weight gain.
[8] The body weight increase inhibitor according to [2], wherein the compound ratio of the low molecular weight proanthocyanidin to the mangosteen extract is in the range of (4.0 to 4.5): 1.
[9] The body weight increase inhibitor according to any one of [1] to [8], wherein the total blending ratio of the solid component of the mangosteen extract to the total weight of the solid composition does not exceed 80%.
[10] The body weight increase inhibitor according to any one of [1] to [9], wherein the oral intake per dose is 200 mg or more of low molecular weight proanthocyanidins and 100 mg or less of mangosteen extract.
[11] The functional food according to [1] to [10], which promotes secretion of adiponectin contained in blood by oral ingestion into a living body.
上記技術的手段により、低分子プロアントシアニジンの固形成分配合量が、マンゴスチンエキスの固形成分配合量よりも有意に多いことで、低分子プロアントシアニジンによる内臓脂肪抑制作用が阻害されずに効果を発揮しつつ、かつ、両者それぞれのアディポネクチン分泌促進作用が阻害し合うことなく全体としてアディポネクチン分泌促進が認められるものとなった。すなわち低分子プロアントシアニジンとマンゴスチンエキスとをプラスマイナス１０％以下の配合量比をもって同量程度配合した場合には、図１，２，３や図５に示すようなアディポネクチン分泌量促進が阻害され、場合によっては却ってアディポネクチン低下の傾向がみられるところ、本発明のように低分子プロアントシアニジンの固形成分配合量をマンゴスチンエキスの固形成分配合量よりも１０％超の配合量比をもって増加させることで、アディポネクチン分泌阻害の傾向がなくなり、逆に全体として、図９左端群に示すような、内臓脂肪減少とアディポネクチン分泌促進の両方がみられるものとなった。
なお、マンゴスチン抽出物の有意な配合量とは、すなわち０を超えてマンゴスチンエキス配合の意義を有する程度の正数値の配合量を意味し、例えばマンゴスチン抽出物の配合量が粒状の組成物全体重量比１０％以上であることを意味する。また低分子プロアントシアニジンとマンゴスチン抽出物の有意な配合量比とは、すなわち１．０（１００％）を超えてマンゴスチンエキス配合の意義を有する程度の正の配合量比を意味し、例えばマンゴスチン抽出物の配合量が粒状の組成物全体重量比１．１（１１０％）以上であることを意味する。
両者の固形成分配合量差は具体的には、後述の図９に示す実験の右端の群のように、低分子プロアントシアニジンとマンゴスチンエキスの固形成分配合量比が１．１倍を超えた値となるように、低分子プロアントシアニジンがマンゴスチンエキスよりも多く配合されることが好ましい。さらに言えば、低分子プロアントシアニジンのマンゴスチンエキスに対する固形成分配合量比が、後述の図９に示す実験の右端の群を除く配合比１．２倍以上５．０倍の範囲内にあることが好ましく、さらに好ましくは、後述の図９に示す実験の左端及び真中の群の２群を包含する２．０倍〜４．５倍の範囲内にあることが好ましい。前記各成分が配合工程による誤差を超えて明確に区別された配合量の差をもって配合され、かつマンゴスチンエキスの固形成分の配合によるアディポネクチン分泌促進作用が認められる程度までマンゴスチンエキスが配合されることで、両成分の組み合わせによる阻害傾向が発生することなく、生体物の体重増加抑制剤として確実な効果を得ることができる。
By the above technical means, the solid component content of the low-molecular proanthocyanidin is significantly greater than the solid component content of the mangosteen extract, and the visceral fat-suppressing action of the low-molecular proanthocyanidin exerts its effect without being inhibited. However, the promotion of adiponectin secretion was observed as a whole without inhibiting the adiponectin secretion promoting actions of both. That is, when the low molecular weight proanthocyanidin and the mangosteen extract are mixed in the same amount at a mixing ratio of ± 10% or less, promotion of adiponectin secretion as shown in FIGS. 1, 2, 3 and 5 is inhibited, In some cases, a tendency to lower adiponectin is seen, but as in the present invention, by increasing the solid component content of the low molecular weight proanthocyanidin with a content ratio of more than 10% than the solid component content of the mangosteen extract, There was no tendency to inhibit adiponectin secretion, and conversely, as a whole, both visceral fat reduction and adiponectin secretion promotion were observed as shown in the leftmost group in FIG.
The significant amount of the mangosteen extract means a positive amount of the mangosteen extract that is more than 0, meaning that the amount of the mangosteen extract is significant. For example, the amount of the mangosteen extract is the total weight of the granular composition. It means that the ratio is 10% or more. Further, the significant blending ratio of the low molecular weight proanthocyanidin and the mangosteen extract means a positive blending ratio that is more than 1.0 (100%) and has a significance of blending the mangosteen extract. It means that the compounding amount of the product is 1.1 (110%) or more by weight of the whole granular composition.
Specifically, the difference between the solid component blend amounts of the two is, as shown in the rightmost group of the experiment shown in FIG. 9 described below, a value in which the solid component blend ratio of the low molecular weight proanthocyanidin and the mangosteen extract exceeds 1.1 times. It is preferable that the low molecular weight proanthocyanidin is blended more than the mangosteen extract so that More specifically, the compounding ratio of the low molecular weight proanthocyanidins to the mangosteen extract may be in the range of 1.2 times or more and 5.0 times the compounding ratio excluding the group at the right end of the experiment shown in FIG. 9 described below. More preferably, it is preferably in the range of 2.0 to 4.5 times including two groups of the left end and the middle group in the experiment shown in FIG. 9 described later. By mixing the mangosteen extract to the extent that the adiponectin secretion promoting action by the combination of the solid components of the mangosteen extract is recognized, and the respective components are compounded with a difference in the compounding amount clearly exceeding the error due to the compounding process. In addition, it is possible to obtain a certain effect as an agent for suppressing weight gain of a living body without causing a tendency of inhibition due to a combination of both components.
本発明によれば、低分子プロアントシアニジン及びマンゴスチンエキスからなる２種の特定成分を所定の配合割合で含有することにより、内臓脂肪増加の抑制効果と血中アディポネクチン分泌低下の抑制効果とを有する組成物、さらに言えば、内臓脂肪減少効果と血中アディポネクチン分泌促進効果とを有する組成物を提供することができる。 According to the present invention, a composition having an effect of suppressing an increase in visceral fat and an effect of suppressing a decrease in blood adiponectin secretion by containing two specific components consisting of a low molecular weight proanthocyanidin and a mangosteen extract at a predetermined mixing ratio. A composition having a visceral fat reducing effect and a blood adiponectin secretion promoting effect.
以下、この発明の実施の形態を説明する。本発明は例えば、低分子プロアントシアニジンとマンゴスチン抽出物とをそれぞれ固形剤として粉末化し、低分子プロアントシアニジンよりもマンゴスチン抽出物の方が有意に少なくなるように配合して固形化された粒条製剤からなる。
マンゴスチン抽出物としては、例えば、マンゴスチン果実の生または乾燥品の果皮から抽出したマンゴスチンエキスを破砕または粉末化して得られる、マンゴスチンエキスの固形剤を用いるのが好適である。また、前記果皮からの抽出の前にマンゴスチン果皮を非極性溶媒で脱脂したものを使用することが、安定した破砕又は粉末化状態のマンゴスチンエキス固形剤を得ることができるため好ましい。
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described. The present invention, for example, powdered low-molecular proanthocyanidin and mangosteen extract as a solid agent, respectively, solidified granule formulation blended so that the mangosteen extract is significantly less than low-molecular proanthocyanidin Consists of
As the mangosteen extract, for example, it is preferable to use a solid preparation of a mangosteen extract obtained by crushing or pulverizing a mangosteen extract extracted from raw or dried pericarp of a mangosteen fruit. In addition, it is preferable to use mangosteen pericarp defatted with a non-polar solvent before extraction from the pericarp, since a stable crushed or powdered mangosteen extract solid can be obtained.
本発明は生体物の体重増加抑制剤及び体重抑制効果を有する機能性食品に関する発明であり、このうち機能性食品は、投与形態を限定した、生体物の体重増加抑制剤の一態様として捉えることができる。以下、本発明を、本発明の一態様である、投与形態の限定のない生体物の体重増加抑制剤として主に説明する。 The present invention relates to a body weight increase inhibitor for a biological material and a functional food having a body weight suppressing effect, in which the functional food is regarded as an embodiment of a weight gain inhibitor for a biological material with a limited administration form. Can be. Hereinafter, the present invention will be mainly described as an embodiment of the present invention, which is an agent for suppressing weight gain of a living body without any limitation on the administration form.
本明細書において「アディポネクチンの分泌促進性」とは、血液中に含まれるアディポネクチン量を促進する活性を意味する。但し促進の程度を限定されるものではない。アディポネクチンは、脂肪細胞から分泌されるタンパク質である。アディポネクチンの分泌量低下はインスリン抵抗性、インスリン応答性低下、メタボリックシンドローム発症の一因となり、高インスリン血症（インスリンの血中分泌量増加）を招来する。また、アディポネクチンとインスリンの含有量は、血液中の含有量との間で相関性があることが明らかとなっている。よって、血液中に含まれるアディポネクチンの分泌促進によって、メタボリックシンドロームの予防が可能となる。 As used herein, the term "promoting adiponectin secretion" means an activity of promoting the amount of adiponectin contained in blood. However, the degree of promotion is not limited. Adiponectin is a protein secreted by fat cells. Reduced secretion of adiponectin contributes to insulin resistance, decreased insulin responsiveness, and the onset of metabolic syndrome, leading to hyperinsulinemia (increased insulin secretion in blood). Further, it has been clarified that the content of adiponectin and insulin has a correlation with the content in blood. Therefore, by promoting secretion of adiponectin contained in the blood, metabolic syndrome can be prevented.
本発明の生体物の体重増加抑制剤は、有効成分として、低分子プロアントシアニジン、及びマンゴスチンエキスの２種の成分（以下、本発明における特定成分と称することがある）を、少なくとも同量を除く有意な配合量差をもって、マンゴスチンエキスを低分子プロアントシアニジンよりも有意に少なく含有することを特徴とする。また、本発明の生体物の体重増加抑制剤は、前記の特定成分に加えて、所望により、中鎖脂肪酸、中鎖脂肪酸エステル、シトラールから選ばれる１種以上の成分を更に含有することができる。 The biological body weight gain inhibitor of the present invention excludes at least the same amount of two components of a low molecular weight proanthocyanidin and a mangosteen extract (hereinafter, may be referred to as specific components in the present invention) as active ingredients. It is characterized by containing mangosteen extract significantly less than low molecular weight proanthocyanidins with a significant difference in the amount of compounding. In addition, the body weight increase inhibitor of the biological material of the present invention can further contain one or more components selected from medium-chain fatty acids, medium-chain fatty acid esters, and citral, if desired, in addition to the specific components described above. .
本発明に用いる低分子プロアントシアニジンは、低分子のモノマー、ダイマー、トリマーのプロアントシアニジンを主成分とするものであればよく、株式会社アミノアップ化学（北海道札幌市）から市販されている、果実であるライチに含まれるポリフェノールの一種である高分子プロアントシアニジンを化学的に低分子化したものであるオリゴノール（登録商標）が好ましい。また、低分子プロアントシアニジンにはこの他にもピクノジェノール（登録商標、ホーファー・リサーチ・リミテッド）、フラバンジェノール（登録商標、株式会社東洋新薬）等があり、これらを用いることもできる。 The low molecular weight proanthocyanidin used in the present invention may be a low molecular weight monomer, dimer or trimer proanthocyanidin as a main component, and is commercially available from Amino Up Chemical Co., Ltd. (Sapporo, Hokkaido). Oligonol (registered trademark), which is obtained by chemically reducing the molecular weight of high molecular weight proanthocyanidin, which is a kind of polyphenol contained in a certain litchi, is preferable. Other low molecular weight proanthocyanidins include Pycnogenol (registered trademark, Hofer Research Limited), Flavangenol (registered trademark, Toyo Shinyaku Co., Ltd.) and the like, and these can also be used.
本発明の生体物の体重増加抑制剤は例えば、低分子プロアントシアニジン、及びマンゴスチンエキスをそれぞれ、１回の投与あたり１２５μｇ／ｍＬ以上、１００μｇ／ｍＬ以下となる量で含有することができる。 The body weight increase inhibitor of the living body of the present invention can contain, for example, low molecular weight proanthocyanidin and mangosteen extract in an amount of 125 μg / mL or more and 100 μg / mL or less per single administration.
より具体的には、本発明の生体物の体重増加抑制剤は、１回の投与量（以下、投与単位と称する）当たり、マンゴスチンエキス（例えば、Ｌ−マンゴスチンエキス）を、例えば０．２ｍｇ以上、好ましくは０．４ｍｇ以上、より好ましくは０．８ｍｇ以上、更に好ましくは１．６ｍｇ以上、更に好ましくは４．０ｍｇ以上、特に好ましくは８．０ｍｇ以上、含有することができる。 More specifically, the body weight increase inhibitor of the living body of the present invention contains a mangosteen extract (for example, L-mangosteen extract) in an amount of 0.2 mg or more per one dose (hereinafter, referred to as a dosage unit). , Preferably 0.4 mg or more, more preferably 0.8 mg or more, still more preferably 1.6 mg or more, even more preferably 4.0 mg or more, and particularly preferably 8.0 mg or more.
本発明の生体物の体重増加抑制剤は、投与単位当たり、中鎖脂肪酸（例えば、デカン酸）又は中鎖脂肪酸エステルを、例えば０．００８ｍｇ以上、好ましくは０．０１６ｍｇ以上、より好ましくは０．０３２ｍｇ以上、更に好ましくは０．０６４ｍｇ以上、更に好ましくは０．１６ｍｇ以上、特に好ましくは０．３２ｍｇ以上、含有することができる。
本発明の生体物の体重増加抑制剤は、投与単位当たり、シトラールを、例えば０．１４ｍｇ、好ましくは０．２８ｍｇ以上、より好ましくは０．５６ｍｇ以上、更に好ましくは１．１２ｍｇ以上、更に好ましくは２．８ｍｇ以上、特に好ましくは５．６ｍｇ以上、含有することができる。
The body weight increase inhibitor of the living matter of the present invention contains medium chain fatty acid (for example, decanoic acid) or medium chain fatty acid ester in a dose of, for example, 0.008 mg or more, preferably 0.016 mg or more, more preferably 0.1 mg or more. 032 mg or more, more preferably 0.064 mg or more, further preferably 0.16 mg or more, particularly preferably 0.32 mg or more.
The weight gain inhibitor of the living matter of the present invention contains citral, for example, 0.14 mg, preferably 0.28 mg or more, more preferably 0.56 mg or more, still more preferably 1.12 mg or more, further preferably, per administration unit. 2.8 mg or more, particularly preferably 5.6 mg or more, can be contained.
これらの各成分における含有量の上限は、例えば、風味の阻害や過度の刺激などの悪影響、共存する他成分の含有量、費用対効果などにより適宜決定されるが、例えば、これらの有効成分の総重量として、本発明の生体物の体重増加抑制剤の重量に対して、或る態様として９９％以下、別の態様として９０％以下、更に別の態様として８０％以下、更に別の態様として５０％以下であることができる。 The upper limit of the content of each of these components is appropriately determined, for example, by adverse effects such as inhibition of flavor and excessive irritation, the content of other coexisting components, cost effectiveness, and the like. As a total weight, based on the weight of the body weight increase inhibitor of the biological material of the present invention, 99% or less in one embodiment, 90% or less in another embodiment, 80% or less in still another embodiment, and still another embodiment It can be up to 50%.
本発明の生体物の体重増加抑制剤の投与形態は、通常、口腔から摂取することにより体内に吸収されて内臓脂肪抑制効果及びアディポネクチン分泌促進効果を発揮する。投与形態の具体例として、通常の医薬品（例えば、含嗽剤、液剤、軟膏、洗浄剤）として投与する形態のほか、例えば、機能性食品、化粧品、口腔衛生用品などの形態を挙げることができる。本発明の生体物の体重増加抑制剤は、機能性食品形態で用いることが好ましく、口腔から摂取する錠剤として成形することが特に好ましい。 The dosage form of the body weight increase inhibitor of the living matter of the present invention is usually absorbed into the body by ingestion from the oral cavity and exhibits a visceral fat suppressing effect and an adiponectin secretion promoting effect. Specific examples of the administration form include a form for administration as a usual pharmaceutical (eg, mouthwash, liquid, ointment, detergent), and, for example, a form of functional food, cosmetics, oral hygiene article and the like. The body weight increase inhibitor of the living matter of the present invention is preferably used in the form of a functional food, and is particularly preferably formed into a tablet to be taken through the oral cavity.
（生体物の体重増加抑制剤の製造方法）
本発明の生体物の体重増加抑制剤の製造方法の一例を以下に示す。この製造方法は、口腔内に滞留して口腔溶解性を有する錠剤型の機能性食品の製造方法としてそのまま適用される。
本発明の生体物の体重増加抑制剤の製造方法は、以下の各工程を含む。
（１）グリセリン又はプロピレングリコールから選ばれる１種以上の水溶性溶媒０．１〜０．５重量％に、少なくとも、水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールとして、低分子プロアントシアニジン０．２〜１．０重量％を溶解させて溶解溶液（ポリフェノール溶液）を製造する工程（溶解工程）
（２）砂糖を含まない基剤生地に、少なくとも、マンゴスチンエキス０.１〜０.５重量％を練り込んで混練生地を調製する工程（調製工程）
（３）前記溶解溶液を、前記混練生地に混合し、脱水とともに圧縮成形する工程（混合・成形工程）。
(Method for producing weight gain inhibitor for biological matter)
One example of the method for producing the body weight gain inhibitor of the present invention is shown below. This production method is applied as it is as a method for producing a tablet-type functional food that stays in the oral cavity and has oral solubility.
The method for producing a biological body weight gain inhibitor of the present invention includes the following steps.
(1) One or more water-soluble solvents selected from glycerin or propylene glycol in low concentration of 0.1 to 0.5% by weight, at least as low-molecular-weight proanthocyanidins 0.2 to 1.0 as polyphenols soluble in water-soluble solvents. Step of dissolving wt% to produce a dissolving solution (polyphenol solution) (dissolving step)
(2) Process of kneading dough by kneading at least 0.1 to 0.5% by weight of mangosteen extract into a base dough containing no sugar (preparation process)
(3) A step of mixing the dissolving solution with the kneaded dough and performing compression molding together with dehydration (mixing / molding step).
（溶解工程）
まず、グリセリン又はプロピレングリコールから選ばれる１種以上の水溶性溶媒０．１〜０．５重量％に、少なくとも、水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールとして、低分子プロアントシアニジン０．２〜１．０重量％を溶解させて溶解溶液を製造する（溶解工程）。
(Dissolution process)
First, low-molecular-weight proanthocyanidin 0.2 to 1.0% by weight as at least one polyphenol soluble in a water-soluble solvent in 0.1 to 0.5% by weight of at least one water-soluble solvent selected from glycerin or propylene glycol. % To prepare a dissolution solution (dissolution step).
（水溶性溶媒）
本発明で用いる水溶性溶媒とは、食品投与物のグリセリン、プロピレングリコールおよびそれらの混合物が挙げられる。グリセリンとプロピレングリコールとは、物理化学的特性が類似している水溶性溶媒である。前記水溶性溶媒は、ノンシュガーキャンディの製造段階において、前記水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールを溶解させる溶媒として用いる。また、本発明では、水溶性溶媒には最大で水を１０％含有してもよい。通常、グリセリンあるいはプロピレングリコール、あるいはそれらの混合物はそのまま使用するが、前記水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールの溶解性を向上させるために１０％を上限として水を投与してもよい。ただし、１０％を超える水を投与すると、最終的な混練生地中の水分値の上昇につながるために、キャンディの長期保存性などの品質に悪影響を及ぼすため好ましくない。風味のバランスや作業適性からプロピレングリコールを一定割合使用してもよいし、プロピレングリコールのみの使用でもよい。特にプロピレングリコールはグリセリンと比較すると粘度が低いために、作業適性や溶解速度を速めるためには有効である。ただし、水溶性溶媒としては、グリセリンは比較的安価に入手でき、風味も良好である点で、グリセリンが好ましい。
(Water-soluble solvent)
The water-soluble solvent used in the present invention includes glycerin, propylene glycol and mixtures thereof for food administration. Glycerin and propylene glycol are water-soluble solvents with similar physicochemical properties. The water-soluble solvent is used as a solvent for dissolving the polyphenol soluble in the water-soluble solvent at the stage of producing non-sugar candy. In the present invention, the water-soluble solvent may contain up to 10% of water. Normally, glycerin, propylene glycol, or a mixture thereof is used as it is, but water may be administered up to 10% in order to improve the solubility of the polyphenol soluble in the water-soluble solvent. However, if water is added in an amount exceeding 10%, the water content in the final kneaded dough will be increased, which adversely affects the quality of the candy, such as long-term storage stability, and is not preferable. Propylene glycol may be used at a fixed ratio or only propylene glycol may be used from the viewpoint of flavor balance and workability. In particular, propylene glycol has a lower viscosity than glycerin, and is therefore effective in increasing workability and dissolution rate. However, glycerin is preferred as the water-soluble solvent, since glycerin can be obtained relatively inexpensively and has a good flavor.
本発明で用いる水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールとは、グリセリン、プロピレングリコールまたはこれらの混合物のいずれかの水溶性溶媒に対して可溶性であるポリフェノールをいう。
例えば、前記水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールは、その固形状物をポリフェノールの２０倍重量の前記水溶性溶媒に混合すると、３７℃、４８時間後に目視で判定した場合に、完全に溶解していたり、微細な固形がポリフェノール中に点在した状態や混濁した状態であったりするが、いずれも前記水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールに含まれる。
これに対して、前記水溶性溶媒に難溶性のポリフェノールは、その固形状物をポリフェノールの２０倍重量の水溶性溶媒に混合すると、３７℃、４８時間後に目視で判定した場合に、混合前と変わらず固形状のままで変化がほとんどない状態である。
The polyphenol soluble in a water-soluble solvent used in the present invention refers to a polyphenol soluble in a water-soluble solvent of glycerin, propylene glycol or a mixture thereof.
For example, when the polyphenol soluble in the water-soluble solvent is mixed with the water-soluble solvent 20 times the weight of the polyphenol, the polyphenol is completely dissolved at 37 ° C. when visually judged after 48 hours. Although fine solids are scattered or turbid in polyphenols, they are all included in polyphenols soluble in the water-soluble solvent.
On the other hand, the polyphenol that is hardly soluble in the water-soluble solvent, when the solid matter is mixed with a 20-fold weight of the water-soluble solvent of the polyphenol, at 37 ° C., when visually judged after 48 hours, the mixture before and after mixing It is in a state where it remains solid and hardly changes.
グリセリン、プロピレングリコール及びこれらの混合物のいずれにも可溶性であるポリフェノールとしては、例えば、ライチ由来ポリフェノールが挙げられる。
ライチ由来ポリフェノールとしては、例えば、オリゴノール（登録商標）が挙げられる。オリゴノールとは、株式会社アミノアップ化学が、開発、生産、販売しているライチ由来の低分子ポリフェノールである。
Examples of polyphenols that are soluble in glycerin, propylene glycol, and mixtures thereof include litchi-derived polyphenols.
The lychee-derived polyphenols include, for example, Oligonor (registered trademark). Oligonol is a low molecular weight polyphenol derived from lychee developed, produced and sold by Amino Up Chemical Co., Ltd.
また、本発明で使用する前記水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールには、レスベラトロールのように、グリセリンに対して難溶性であるが、プロピレングリコールに対して溶解性のポリフェノールも含まれる。特に本発明では、低分子プロアントシアニジンを使用するものとしている。なお、ポリフェノールとしてレスベラトロールを用いる場合、水溶性溶媒としてプロピレングリコールを使用することが必要である。
本発明においては、前記のように水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールとして低分子プロアントシアニジンを予め前記水溶性溶媒に溶解させておくことで、ポリフェノールを粉末状で混合していないため、混練生地中でダマにならず、得られるキャンディを口に入れた場合のざらつきも抑えることができる。また、グリセリンを溶媒として用いていることでポリフェノールの含有量を高くすることができ、しかもポリフェノールの苦味や渋味を抑えることができる。
前記水溶性溶媒に可溶性のポリフェノールとして低分子プロアントシアニジンを前記水溶性溶媒に溶解させる場合、前記低分子プロアントシアニジン重量の等倍重量以下の前記水溶性溶媒に溶解させればよい。前記水溶性溶媒に可溶性のある低分子プロアントシアニジンの溶解度は、最終的に概ね溶解される程度、すなわちポリフェノール固形分のうち、７０重量％以上が溶解される程度であればよい。
The polyphenol soluble in the water-soluble solvent used in the present invention includes a polyphenol that is hardly soluble in glycerin but soluble in propylene glycol, such as resveratrol. In particular, in the present invention, a low molecular weight proanthocyanidin is used. When resveratrol is used as the polyphenol, it is necessary to use propylene glycol as the water-soluble solvent.
In the present invention, by dissolving the low molecular weight proanthocyanidin in advance in the water-soluble solvent as a polyphenol soluble in the water-soluble solvent as described above, because the polyphenol is not mixed in a powder form, in the kneaded dough It is possible to suppress the roughness when the obtained candy is put into the mouth without becoming limp. Further, by using glycerin as a solvent, the content of polyphenol can be increased, and the bitterness and astringency of polyphenol can be suppressed.
When low-molecular-weight proanthocyanidins are dissolved in the water-soluble solvent as polyphenols soluble in the water-soluble solvent, the low-molecular-weight proanthocyanidins may be dissolved in the water-soluble solvent having a weight equal to or less than the weight of the low-molecular-weight proanthocyanidins. The solubility of the low molecular weight proanthocyanidin soluble in the water-soluble solvent may be such that it is substantially dissolved in the end, that is, 70% by weight or more of the solid content of polyphenol.
前記低分子プロアントシアニジンは、前記水溶性溶媒と混合し、攪拌等により前記の溶解度となるまで溶解させて溶解溶液（ポリフェノール溶液）を得る。この溶解の際は、低分子プロアントシアニジンの熱変性をなるべく避けるために６０℃以下で加温してもよいし、あるいは数十時間以上かけて溶解してもよい。撹拌せずに静置しても低分子プロアントシアニジンが前記水溶性溶媒に溶解すればよい。また、ｐＨを調整して溶解を促進させる観点から、酸や塩基を投与・混合してもよい。ただし、この場合は、低分子プロアントシアニジンが変性したり分解したりしていないことを、高速液体クロマトグラフィーなどの分析装置で確認することが望ましい。 The low-molecular-weight proanthocyanidin is mixed with the water-soluble solvent, and dissolved by stirring or the like until the solubility is reached, to obtain a dissolved solution (polyphenol solution). In this dissolution, the low-molecular-weight proanthocyanidin may be heated at 60 ° C. or lower to minimize thermal denaturation, or may be dissolved over several tens of hours. The low molecular weight proanthocyanidin may be dissolved in the above-mentioned water-soluble solvent even if it is allowed to stand without stirring. Further, from the viewpoint of adjusting the pH to promote dissolution, an acid or a base may be administered and mixed. However, in this case, it is desirable to confirm that the low-molecular-weight proanthocyanidin has not been denatured or decomposed by an analyzer such as high-performance liquid chromatography.
（ライチ由来のポリフェノールについて）
ライチ果実由来の低分子化ポリフェノールとして、商品名「オリゴノール」（Oligonol：商標）が挙げられる。これはライチ果実の種皮からポリマーを抽出し、低分子ポリマーとしたものである。低分子化によりbioavailabilityが向上し、抗炎症・抗酸化作用、脂肪代謝促進・蓄積予防作用、及び、運動との組み合わせで抗肥満効果をアシストする作用がある、とされる。
(About lychee-derived polyphenols)
As a low molecular weight polyphenol derived from litchi fruit, “Oligonol” (trade name) can be given. This is a low molecular weight polymer obtained by extracting a polymer from the seed coat of litchi fruit. It is said that the bioavailability is improved by the low molecular weight, and has an anti-inflammatory / antioxidant action, a fat metabolism promoting / accumulating preventive action, and an action of assisting an anti-obesity effect in combination with exercise.
（マンゴスチンエキスについて）
マンゴスチンエキスとして、マンゴスチンの生果皮又は乾燥果実から抽出されるエキスが挙げられる。エキス内にαマンゴスチン又はγマンゴスチンが含まれ、一般的に抗炎症作用、抗酸化作用・抗がん作用、インスリン抵抗性改善・脂肪代謝促進作用を有することが知られている。本発明においては、マンゴスチンエキスの主成分として含まれるポリフェノール、特にキサントン誘導体が、抗肥満作用、或いはアディポネクチン分泌促進作用を有する活性成分であると考えられる。
(About mangosteen extract)
Examples of the mangosteen extract include extracts extracted from the raw peel or dried fruits of mangosteen. It is known that the extract contains α-mangosteen or γ-mangostin, and generally has an anti-inflammatory effect, an antioxidant effect / anti-cancer effect, an insulin resistance improving / fatty metabolism promoting effect. In the present invention, polyphenols, particularly xanthone derivatives, contained as a main component of the mangosteen extract are considered to be active ingredients having an anti-obesity effect or an adiponectin secretion promoting effect.
（ライチ由来のポリフェノールとマンゴスチンエキスとの併用による抗肥満効果）
ライチ由来のポリフェノールとマンゴスチンエキスとはそれぞれ単体で抗肥満効果を有する素材であるため、これらを共に有する組成剤であっても抗肥満効果を有すると想定される。しかし実際には、マンゴスチンエキスの配合量、或いは前記両者の配合比率によっては、血中アディポネクチン分泌を促進させないか、或いは逆に低下させてしまうことが、以下のヒト細胞試験（図１〜図３）、及びマウス試験（図４〜図８ｃ）により確認された。これは、ライチ由来ポリフェノールとマンゴスチンエキスとを配合させる場合における、マンゴスチンエキスの過剰摂取又は過剰配合バランスに基づく細胞障害性が発現したためと考えられる。
(Anti-obesity effect of combined use of lychee-derived polyphenol and mangosteen extract)
Since lychee-derived polyphenol and mangosteen extract are each a material having an anti-obesity effect alone, it is assumed that a composition having both of them has an anti-obesity effect. However, actually, depending on the amount of the mangosteen extract or the ratio of the two, the secretion of adiponectin in the blood is not promoted or reduced, but the following human cell test (FIG. 1 to FIG. 3) ) And the mouse test (FIGS. 4 to 8c). This is considered to be due to the expression of cytotoxicity based on the overdose or overmixed balance of the mangosteen extract when the lychee-derived polyphenol and the mangosteen extract are combined.
＜ヒト細胞試験＞（図１〜図３）
マンゴスチン果皮抽出物、および各種成分（αマンゴスチンとγマンゴスチン）のヒト脂肪細胞に対するアディポネクチン分泌促進効果試験を行った。アディポネクチンエキス、αマンゴスチン、γマンゴスチンそれぞれの分泌量の推移を、図１：マンゴスチン果皮抽出物、図２：
αマンゴスチン、図３：γマンゴスチンとして示す。図１〜図３いずれも上段は投与後４８時間、下段は９６時間後のコントロールと比較した際のアディポネクチン分泌比率である。図１〜図３のいずれにおいても、低容量で有意にアディポネクチン促進を認めるが、高容量では逆に分泌低下が認められた。
<Human cell test> (FIGS. 1 to 3)
An adiponectin secretion promoting effect test on human adipocytes of the mangosteen peel extract and various components (α-mangostin and γ-mangostin) was performed. Changes in the secretion amounts of adiponectin extract, α-mangostin, and γ-mangostin are shown in FIG. 1: Mangosteen peel extract, FIG.
α-mangostin, FIG. 3: shown as γ-mangostin. 1 to 3, the upper row shows the adiponectin secretion ratio as compared with the control at 48 hours after administration and the lower row at 96 hours after administration. In all of FIGS. 1 to 3, the promotion of adiponectin was significantly observed at a low dose, whereas the secretion was decreased at a high dose.
（使用細胞）
使用した細胞はヒト脂肪組織由来幹細胞(Adipose Derived Stem Cell; ADSC)である。3名の肥満患者の肥満外科手術時に採取された脂肪細胞を用いてアディポネクチン分泌促進効果の評価が可能かどうかを試みた。尚、本研究は大阪大学医学部附属病院倫理員会の承認のもと、インフォームドコンセントを得て行った。
(Used cells)
The cells used are human adipose tissue-derived stem cells (Adipose Derived Stem Cell; ADSC). We examined whether it was possible to evaluate the effect of promoting adiponectin secretion using adipocytes collected during bariatric surgery in three obese patients. This study was conducted with the informed consent of the approval of Osaka University Hospital Hospital Ethics Committee.
（細胞培養）
腹腔鏡下胃袖状切除術(Lap Sleeve Gastrectomy : LSG)で採取された余剰皮下脂肪組織をリン酸緩衝生理食塩水(nacalai
tesque) で数回洗浄し、血管を取り除きながらハサミを用いで細断し、0.1％コラゲナーゼｔｙｐｅＩＩ溶液(Sigma-Aldric)へ加える。37℃で撹拌しながら1時間インキュベートした。その後cell
strainerでろ過し、遠心分離した。遠心分離により得られたADSCをPreadipocyte Medium (PM-1, Zen-bio Inc)を用い、37℃,5％ CO2インキュベータで培養した。
(Cell culture)
Surplus subcutaneous adipose tissue collected by laparoscopic gastric sleeve resection (Lap Sleeve Gastrectomy: LSG) was washed with phosphate buffered saline (nacalai
tesque), cut with scissors while removing blood vessels, and added to 0.1% collagenase type II solution (Sigma-Aldric). Incubated for 1 hour with shaking at 37 ° C. Then cell
Filtered through a strainer and centrifuged. ADSC obtained by centrifugation was cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. using Preadipocyte Medium (PM-1, Zen-bio Inc).
（プロトコール）
９６well plateに播種後、コンフルエントまで増殖したADSCをAdipocyte Differentiation Medium:DM-2(Zen-bio Inc)で処理し脂肪細胞に分化させた。DM-2処理8日後(day8)からは10% fetal bovine
serum(Equitech-Bio)を含むD-MEM/Ham’ F-１２(nacalai tesque)を用いて培養した。各種サンプルはday8及びその４８時間後(day10)に投与し、day10及びday8より９６時間後(day１２)に細胞上清を回収し、上清中アディポネクチン濃度をAlphaLISA human adiponectin assay(Perkinelmer社製)を用いて測定した。
(Protocol)
After seeding in a 96-well plate, ADSCs grown to confluence were treated with Adipocyte Differentiation Medium: DM-2 (Zen-bio Inc) to differentiate into adipocytes. 8 days after DM-2 treatment (day 8), 10% fetal bovine
The cells were cultured using D-MEM / Ham'F-12 (nacalai tesque) containing serum (Equitech-Bio). Various samples were administered on day 8 and 48 hours later (day 10), and the cell supernatant was collected 96 hours after day 10 and day 8 (day 12), and the adiponectin concentration in the supernatant was measured using an AlphaLISA human adiponectin assay (Perkinelmer). It measured using.
（マンゴスチン等の試薬調整）
マンゴスチン等の試薬調整は既存の方法により行った。
（マンゴスチン果皮抽出物の調整）
マンゴスチンの果皮を５０％エタノールで８０℃で２回抽出した後、６０℃で減圧濃縮後、得られた抽出液を遠心分離し、沈殿物を得た。この沈殿物を５０％エタノールに再度溶解させた後、６０℃で減圧濃縮を行い、得られた沈殿物を真空乾燥させ、マンゴスチン抽出物を得た。
（α−マンゴスチン、γ−マンゴスチンの調製）
マンゴスチンの未乾燥果皮１ｋｇを１０Ｌのメタノールに浸漬し、２４時間室温下抽出した。濾過後、濾液をエバポレーターで減圧乾燥し、８０ｇの抽出物を得
た。得られた抽出物８０ｇを３５０ｍｌの酢酸エチルに溶解後、２００ｍｌの水で２回洗浄した。酢酸エチル画分をエバポレーターで溶媒を溜去させ２０ｇの乾
燥物を得た。この乾燥物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。溶出はヘキサン−酢酸エチル系で漸次、極性をあげるグラジエント溶出を行い、３つの画分を得た。最初に得られた画分（５ｇ）を再度、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、１０：９０→３０：７０→５０：５０）
で精製し、黄色結晶状の試料としてα−マンゴスチン２ｇを得た。２つめの画分（２ｇ）を再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、
３０：７０→５０：５０、続いて酢酸エチルのみ、最後に酢酸エチル−メタノール、５０：５０）で精製し、黄色非結晶状の試料としてγ−マンゴスチン
５００ｍｇを得た。
(Preparation of reagents such as mangosteen)
Preparation of reagents such as mangosteen was performed by an existing method.
(Preparation of mangosteen peel extract)
The mangosteen peel was extracted twice with 50% ethanol at 80 ° C. and concentrated under reduced pressure at 60 ° C., and the obtained extract was centrifuged to obtain a precipitate. The precipitate was redissolved in 50% ethanol, concentrated under reduced pressure at 60 ° C., and the obtained precipitate was dried in vacuum to obtain a mangosteen extract.
(Preparation of α-mangostin and γ-mangostin)
1 kg of undried mangosteen peel was immersed in 10 L of methanol and extracted at room temperature for 24 hours. After filtration, the filtrate was dried under reduced pressure with an evaporator to obtain 80 g of an extract. After dissolving 80 g of the obtained extract in 350 ml of ethyl acetate, the extract was washed twice with 200 ml of water. The solvent was distilled off from the ethyl acetate fraction using an evaporator to obtain 20 g of a dried product. This dried product was purified by silica gel column chromatography. The elution was carried out in a hexane-ethyl acetate system, and gradient elution was performed gradually to obtain three fractions. The fraction (5 g) obtained first is again subjected to silica gel column chromatography (hexane-ethyl acetate, 10: 90 → 30: 70 → 50: 50).
To obtain 2 g of α-mangosteen as a yellow crystalline sample. The second fraction (2 g) was again subjected to silica gel column chromatography (hexane-ethyl acetate,
30: 70 → 50: 50, followed by ethyl acetate only, and finally ethyl acetate-methanol, 50:50) to obtain 500 mg of γ-mangostin as a yellow amorphous sample.
＜マウスへの高脂肪食負荷肥満試験＞（図４〜図８）
また、図４に示す５群のマウスについて、１２週間の高脂肪食負荷による、血中パラメータ評価、mRNA発現量評価、及び体重・摂餌量評価を行った。その結果、図５に示すように、マウスにおいてマンゴスチン配合比率（対全体配合量又は対オリゴノール配合比）が高すぎるとアディポネクチンを低下させる効果があることが確認された。
（１） 試験期間
２０１２年５月９日から２０１２
年９月１４日
（２）使用動物
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス(雄、５週齢)
（３）評価サンプル
１）オリゴノール：Ｏｌｉｇｏｎｏｌ（ＯＬＧ，Ｌｏｔ
Ｎｏ. ＯＬＦ１１０８Ｓ）
２）マンゴスチンエキス（ＭＧＳ， ロッテ健康産業株式会社提供， Ｌｏｔ Ｎｏ． ＧＭＥ４０−１１１２０１）
（４）群分け
下記の５群に群分けした。
群１）Ｎｏｒｍａｌ: 通常食（ラボＭＲ
ストック）（ｎ＝９ 注：飼育中、一匹死亡したことによる。）
群２）Ｃｏｎｔｒｏｌ: 高脂肪食（Ｄ１２４９２）（ｎ＝１０）
群３）オリゴノールＯＬＧ（１００ｍｇ／ｋｇ）: 高脂肪食（Ｄ１２４９２）（ｎ＝１０）
群４）マンゴスチンエキスＭＧＳ（１００ｍｇ／ｋｇ）: 高脂肪食（Ｄ１２４９２）（ｎ＝１０）
群５）オリゴノールＯＬＧ＋マンゴスチンエキスＭＧＳ
（１００ｍｇ／ｋｇ＋１００ｍｇ／ｋｇ）: 高脂肪食（Ｄ１２４９２）（ｎ＝１０）
（５）飼育および解剖
マウスへの給餌は、通常食としてラボＭＲストック粉末飼料（日本農産工業社、２．３ｋｃａｌ／ｇ）、高脂肪食としてD１２４92 粉末飼料（リサーチダイエット社、５．２ｋｃａｌ／ｇ）を３ヵ月間（１２週間）自由摂取させた。各サンプルは設定用量になるように混餌して投与し、Ｎｏｒｍａｌ群、Ｃｏｎｔｒｏｌ群に関しては、餌のみを投与した。飼育期間中、2~3 日おきに体重測定並びに摂餌量の測定を行い、その推移を記録した。１２週間の飼育後、解剖に先立ち２４時間の絶食を行った。尚、その際、水は自由摂取とした。絶食終了後、エーテル麻酔下で心臓採血を行い、各組織（肝臓、精巣周囲白色脂肪、肩甲骨周囲褐色脂肪）の摘出を行った。採取した血液は遠心分離により血清のみを回収し下記評価項目の測定に供した。各組織は秤量後、ＲＮＡｌａｔｅｒ
に漬け一時凍結保存をした。
（６）結果
図５に示す血中アディポネクチン量は、高脂肪食負荷により有意に増加していた（２群）。ＯＬＧ群では大きな変化は見られなかった（３群）が、ＭＧＳ群（４群）および等量併用群（５群）ではＣｏｎｔｒｏｌ群（２群）と比較して有意に減少していることが確認された。
また、図６上図に示す体重変化及び総カロリー摂取量において、群５）ＨＦ＋Ｏ＋Ｍ群において有意な体重増加抑制が観測された。摂取カロリーに大きな差は無い。図７に示す各脂肪重量において、群５）のオリゴノールとマンゴスチンエキスの併用により、精巣周囲白色脂肪細胞量を著しく抑制することが観測された。また図８左から順に示す総コレステロール、血糖値、トリグリセリドの各血中パラメータにおいて、各パラメータいずれにおいてもＨＤＦ負荷により増加し、特に群５）において改善が見られた。
<High fat diet load obesity test on mice> (FIGS. 4 to 8)
In addition, with respect to the mice in the five groups shown in FIG. 4, blood parameter evaluation, mRNA expression level evaluation, and body weight / feeding amount evaluation were performed under a 12-week high fat diet load. As a result, as shown in FIG. 5, it was confirmed that if the mixing ratio of mangosteen (total mixing amount or oligonol mixing ratio) is too high in mice, there is an effect of lowering adiponectin.
(1) Testing period May 9, 2012 to 2012
September 14, 2002 (2) Animal C57BL / 6J mouse (male, 5 weeks old)
(3) Evaluation sample 1) Oligonol: Oligonol (OLG, Lot
No. OLF1108S)
2) Mangosteen extract (MGS, provided by Lotte Health Industry Co., Ltd., Lot No. GME40-111201)
(4) Grouping It was divided into the following five groups.
Group 1) Normal: Normal diet (Lab MR)
(Stock) (n = 9 Note: One animal died during rearing.)
Group 2) Control: high fat diet (D12492) (n = 10)
Group 3) Oligonol OLG (100 mg / kg): High fat diet (D12492) (n = 10)
Group 4) Mangosteen extract MGS (100 mg / kg): high fat diet (D12492) (n = 10)
Group 5) Oligonor OLG + Mangosteen extract MGS
(100 mg / kg + 100 mg / kg): High fat diet (D12492) (n = 10)
(5) Breeding and dissection Feeding to mice is carried out using a laboratory MR stock powder feed (Nippon Nosansan Co., Ltd., 2.3 kcal / g) as a normal diet and a D12492 powder feed (Research Diet, 5.2 kcal / g) as a high fat diet. ) For 3 months (12 weeks). Each sample was mixed and administered so as to have a set dose, and only the food was administered to the Normal group and the Control group. During the breeding period, body weight and food consumption were measured every two to three days, and the changes were recorded. After breeding for 12 weeks, the animals were fasted for 24 hours prior to dissection. At that time, water was freely taken. After the fasting, heart blood was collected under ether anesthesia, and each tissue (liver, white fat around the testis, brown fat around the scapula) was extracted. From the collected blood, only serum was collected by centrifugation and used for measurement of the following evaluation items. After weighing each tissue, RNAlater
And freeze-preserved.
(6) Results The amount of adiponectin in blood shown in FIG. 5 was significantly increased by the high fat diet load (2 groups). Although no significant change was observed in the OLG group (group 3), it was significantly reduced in the MGS group (group 4) and the combined use group (group 5) compared to the control group (group 2). confirmed.
In the body weight change and total caloric intake shown in the upper part of FIG. 6, significant suppression of body weight increase was observed in group 5) HF + O + M group. There is no big difference in calorie intake. At each fat weight shown in FIG. 7, it was observed that the combined use of the group 5) oligonol and the mangosteen extract significantly suppressed the amount of white adipocytes around the testis. In addition, in each blood parameter of total cholesterol, blood sugar level, and triglyceride shown in order from the left in FIG. 8, each of the parameters increased by the HDF load, and improvement was particularly observed in group 5).
＜配合比率の調整試験＞
しかして本発明者は、平均BMI30前後の女性9名を下記3群に分けて8週間の介入を行った。マンゴスチン4分の１の群Ａでは、図９に示すように、同量程度の投与を行った群Ｃと比べて５０％以上のアディポネクチン分泌量の増加が認められた。
群Ａ）OLG200ｍｇ＋MNG46.8ｍｇ（配合比率（４．０〜４．５）：１）
群Ｂ）OLG200ｍｇ＋MNG93.8ｍｇ（配合比率（２．０〜２．５）：１）
群Ｃ）OLG200ｍｇ＋MNG187.5ｍｇ（配合比率（１．０〜１．１）：１）
<Adjustment test of compounding ratio>
Thus, the present inventor divided nine women with an average BMI of around 30 into the following three groups and performed an intervention for 8 weeks. As shown in FIG. 9, in the group A of mangosteen a quarter, an increase in adiponectin secretion by 50% or more was observed as compared with the group C to which the same amount was administered.
Group A) 200 mg OLG + 46.8 mg MNG (combination ratio (4.0-4.5): 1)
Group B) OLG 200 mg + MNG 93.8 mg (combination ratio (2.0 to 2.5): 1)
Group C) OLG 200 mg + MNG 187.5 mg (combination ratio (1.0 to 1.1): 1)
上記より、少なくとも群Ｃを除く程度の有意な配合比率の値〔（１．１超５．０未満）：１〕をもってマンゴスチンエキスの固形粉末をオリゴノールの固形粉末よりも少量となるよう配合することで、内臓脂肪の減少効果とアディポネクチンの分泌量の促進効果とを同時に得られることができることが確認された。また群Ｃを除く形態についてさらに詳しく言えば、低分子プロアントシアニジンの、マンゴスチンエキスに対する固形成分配合比率が１．０６以下であることが好ましいといえる。
さらに好ましくは、低分子プロアントシアニジンの固形成分配合量が、マンゴスチンエキスの固形成分配合量よりも２．０倍以上の配合量比をもって有意に多く配合されることで、上記群Ａ，Ｂを包含する体重増加抑制効果を得ることができる。
またさらに好ましくは、群Ａの配合比率に基づき、低分子プロアントシアニジン粉末の、マンゴスチンエキス粉末に対する配合比率が（４．０〜４。５）：１の範囲内であることが好ましい。またさらに好ましくは、マンゴスチンエキスの固形成分配合量の、固形組成物全体重量に対する全体配合比率が８０％を超えないことが好ましい。
（体組成計の説明）
なお使用した体組成計は、ＢＩＡ法で体組成を測定している。なおＢＩＡ法は、身体の電気抵抗値（生体インピーダンス）を測定して、体脂肪率を脂肪とそれ以外の組織の割合として推測するものである。使用した体組成計では、体脂肪率や脂肪量、年齢、性別などから内臓脂肪面積を推定している。この推定結果は、ＣＴによる内臓脂肪面積の評価と良好な相関関係を示しており、ウエスト周囲径よりも正確であることがわかっている。推定結果は、内臓脂肪レベル１〜５９の６０段階で示されており、レベル１０が内臓脂肪面積１００Ｃ平方メートルに相当する。レベル１０〜１４がやや過剰、レベル１５が内臓脂肪面積１５０Ｃ平方メートルに相当し、１５を超えると「過剰」と判定される。
その他、上記各実施例ではヒトを生体物の主対象とする体従属化抑制剤として説明しているが、他に広く血液腺を有する生体物（ペット又は家畜として飼育される動物）を対象とした製剤又は機能的食品を得ることも出来る。
From the above, the solid powder of the mangosteen extract is blended in a smaller amount than the solid powder of the oligonol with a value of the significant blending ratio [(more than 1.1 and less than 5.0): 1] at least excluding Group C. Thus, it was confirmed that the effect of reducing the visceral fat and the effect of promoting the secretion amount of adiponectin can be simultaneously obtained. Further, in more detail regarding the form excluding group C, it can be said that the low-molecular weight proanthocyanidin preferably has a solid component blend ratio of 1.06 or less with respect to the mangosteen extract.
More preferably, the low molecular weight proanthocyanidin solid component is incorporated in a significantly larger amount with a compounding ratio of 2.0 times or more than the solid component content of the mangosteen extract, so that the above groups A and B are included. Weight gain suppressing effect can be obtained.
Still more preferably, based on the compounding ratio of Group A, the compounding ratio of the low molecular weight proanthocyanidin powder to the mangosteen extract powder is preferably in the range of (4.0 to 4.5): 1. Still more preferably, the total blending ratio of the solid component of the mangosteen extract to the total weight of the solid composition does not exceed 80%.
(Explanation of body composition meter)
The body composition meter used here measures body composition by the BIA method. In the BIA method, the electrical resistance value (biological impedance) of the body is measured, and the body fat percentage is estimated as the ratio of fat to other tissues. The body composition meter used estimates the visceral fat area from the body fat percentage, fat mass, age, sex, and the like. This estimation result shows a good correlation with the evaluation of the visceral fat area by CT, and is known to be more accurate than the waist circumference. The estimation results are shown in 60 levels of visceral fat levels 1 to 59, with level 10 corresponding to 100 C square meters of visceral fat area. Levels 10 to 14 are slightly excessive, and level 15 is equivalent to 150 C square meters of visceral fat area.
In addition, in each of the above-described embodiments, humans are described as body-dependent agents that are the main target of living organisms. However, other living organisms having blood glands (animals raised as pets or livestock) are also targeted. Formulations or functional foods can also be obtained.
（作用効果）
以上に説明する本発明の各実施例の生体物の体重増加抑制剤又は機能性食品によれば、低分子プロアントシアニジンに対するマンゴスチンエキスの配合量又は配合比を調節しており、細胞毒性を発揮しない範囲でさらにアディポネクチン分泌効果を促進させることができるため、生体物の体重増加抑制剤としての機能を確実に得ることができるものとなった。
(Effects)
According to the body weight gain inhibitor or the functional food of the biological material of each embodiment of the present invention described above, the amount or ratio of the mangosteen extract to the low molecular weight proanthocyanidin is adjusted, and does not exhibit cytotoxicity. Since the adiponectin secretion effect can be further promoted within the range, the function of the biological substance as a weight gain inhibitor can be reliably obtained.
また本発明は、シナモン、低分子プロアントシアニジン、及びマンゴスチンエキスの３種の特定成分を含有することにより、デカン酸を含有しなくても前記効果を発揮するものとなった。但し前記特定成分に加えてデカン酸を投与することにより、更なる効果を期待することもできるため、デカン酸を投与する態様を本発明から除外するものではない。 Further, the present invention has the above-mentioned effect even without decanoic acid by containing three specific components of cinnamon, low molecular weight proanthocyanidin and mangosteen extract. However, by administering decanoic acid in addition to the specific component, a further effect can be expected. Therefore, an embodiment of administering decanoic acid is not excluded from the present invention.
また従来、オリゴノールなどの低分子プロアントシアニジンは渋味が強く風味が損なわれるために生体物の体重増加抑制剤及び機能性食品として好ましくなかったという課題があったが、本発明では、低分子プロアントシアニジンを含有しているにもかかわらずその渋味が改善された口腔衛生改善活性を有する生体物の体重増加抑制剤又は機能性食品を得ることができる。 Conventionally, low-molecular proanthocyanidins such as oligonol have a problem that they are not preferable as a body weight gain inhibitor and a functional food for biological substances because of strong astringency and impaired flavor. A body weight increase inhibitor or a functional food of a biological material having oral hygiene improving activity with improved astringency despite containing proanthocyanidin can be obtained.
本発明は、内臓脂肪の抑制効果を有することから、医療行為を除く製剤加工の分野のほか、機能的食品又は機能的飲料として食品、飲料の分野に利用することができる。また血液アディポネクチンの分泌促進剤を提供することによって、メタボリックシンドロームなどの生活習慣病を含む様々なヘルスケア領域でも更なる発展が期待される。 INDUSTRIAL APPLICABILITY Since the present invention has an effect of suppressing visceral fat, it can be used in the field of foods and beverages as functional foods or functional drinks in addition to the field of pharmaceutical processing except medical practice. Further, by providing a blood adiponectin secretagogue, further development is expected in various healthcare fields including lifestyle-related diseases such as metabolic syndrome.
Claims (7)
前記マンゴスチンエキスは、マンゴスチンの果皮をエタノールで抽出してから減圧濃縮し、得られた抽出液を遠心分離して沈殿物を生成し、得られた沈殿物をエタノールに再度溶解させてから減圧濃縮し、さらに得られた沈殿物を真空乾燥させて得られる乾燥エキスであり、
低分子プロアントシアニジンの固形成分配合量が、マンゴスチンエキスの固形成分配合量の２．０倍〜４．５倍の範囲内にあり、
マンゴスチンエキスの固形成分配合量の、固形組成物全体重量に対する全体配合比率が８０％を超えない固形組成物からなる、生体物の体重増加抑制剤。 A low-molecular-weight proanthocyanidin derived from litchi fruit , and a mangosteen extract as a mangosteen peel extract , comprising a solid composition containing two specific components at a predetermined solid component blending ratio,
The mangosteen extract is obtained by extracting mangosteen skin with ethanol and then concentrating under reduced pressure, centrifuging the resulting extract to produce a precipitate, dissolving the obtained precipitate in ethanol again, and then concentrating under reduced pressure. And a dried extract obtained by vacuum drying the obtained precipitate,
The solid component blending amount of the low molecular weight proanthocyanidin is in the range of 2.0 times to 4.5 times the solid component blending amount of the mangosteen extract,
An agent for suppressing weight gain of a biological substance, comprising a solid composition in which the total blending ratio of the solid component of the mangosteen extract to the total weight of the solid composition does not exceed 80% .
生体物への口腔摂取によって血液に含まれるアディポネクチンの分泌を促進する、血中アディポネクチン分泌促進剤。 The oral intake per serving is 200 mg or less of low molecular weight proanthocyanidins, and is adjusted to be 100 mg or less of mangosteen extract, comprising the solid composition according to any one of claims 1 to 6,
A blood adiponectin secretagogue that promotes the secretion of adiponectin contained in blood by oral ingestion into living organisms .
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015014860A JP6676278B2 (en) | 2015-01-28 | 2015-01-28 | Inhibitor of weight gain of biological material, and adibonectin secretagogue in blood |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015014860A JP6676278B2 (en) | 2015-01-28 | 2015-01-28 | Inhibitor of weight gain of biological material, and adibonectin secretagogue in blood |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2016136908A JP2016136908A (en) | 2016-08-04 |
| JP6676278B2 true JP6676278B2 (en) | 2020-04-08 |
Family
ID=56558567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015014860A Active JP6676278B2 (en) | 2015-01-28 | 2015-01-28 | Inhibitor of weight gain of biological material, and adibonectin secretagogue in blood |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6676278B2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7105536B2 (en) * | 2016-10-05 | 2022-07-25 | ポッカサッポロフード＆ビバレッジ株式会社 | PCSK9 inhibitor and food composition for improving cholesterol metabolism |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014034562A (en) * | 2012-08-10 | 2014-02-24 | Lotte Kenko Sangyo:Kk | Adiponectin production promoting agent |
| JP6511604B2 (en) * | 2013-07-10 | 2019-05-15 | 和久 前田 | Method for producing metabolic syndrome therapeutic agent |
-
2015
- 2015-01-28 JP JP2015014860A patent/JP6676278B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2016136908A (en) | 2016-08-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8828955B2 (en) | Glutathione production enhancer, prophylactic/therapeutic agent for diseases caused by glutathione deficiency, and food, beverage and feed | |
| CA2854281C (en) | A muscle atrophy inhibitor | |
| JP4726022B2 (en) | Antiallergic and anti-inflammatory agents and pharmaceutical compositions, quasi-drugs, cosmetics, foods and animal feeds containing the same | |
| EP3132692A1 (en) | Compositions comprising small molecular inhibitors suitable to inhibit and stimulate signaling pathways in a manner leading to prevention of muscle atrophy | |
| JP5725649B2 (en) | Composition containing tomorrow chalcone and isoflavone | |
| JP7333815B2 (en) | COMPOSITION FOR IMPROVING LIVER FUNCTION | |
| JP5389434B2 (en) | Adiponectin expression decrease inhibitor and use thereof | |
| AU2006347122B2 (en) | Antiobesity composition containing component originating in the bark of tree belonging to the genus Acacia | |
| JP6676278B2 (en) | Inhibitor of weight gain of biological material, and adibonectin secretagogue in blood | |
| JP2007291081A (en) | Composition having bone resorption inhibition-related effect | |
| JPWO2013129334A1 (en) | Motor effect mimicking agent and AMPK and PPARδ co-activator | |
| US10183048B2 (en) | Composition for promoting the activity of peroxisome proliferator-activated receptor-delta | |
| JP7185990B2 (en) | Adiponectin secretion promoter, adipocyte differentiation promoter, and pharmaceutical composition, food and feed containing them | |
| JP5783552B2 (en) | Body fat reducing agent and body fat reducing food | |
| US8124138B2 (en) | Composition for prevention and/or treatment of pruritus containing acacia bark derivative | |
| KR101719015B1 (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating obesity or metabolic disease comprising prunetin as an active ingredient | |
| EP4167978B1 (en) | Use of juniper (juniperus communis) berries extract, deoxypodophyllotoxin and agathadiol, as positive allosteric modulators of cannabinoid type 1 receptor for treating neuropathic pain and inflammatory pain | |
| JP2010215544A (en) | Vascularization inhibitor, medicine containing the same, antiflatuent for producing vascularization inhibitor and method for administering vascularization inhibitor | |
| KR101929388B1 (en) | Composition for prevention, treatment or improvement of liver disease comprising italian ryegrass extraction fraction as an active ingredient | |
| WO2006106705A1 (en) | Oil/fat-containing composition for suppression of cancer development | |
| CN118119387A (en) | AMPK activator, motor function improver, muscle endurance improver, and muscle atrophy inhibitor | |
| JP2023149277A (en) | Rage inhibitor compositions | |
| WO2023068209A1 (en) | Ampk activator, motor function improving agent, muscular endurance improving agent, and muscle atrophy preventing agent | |
| KR20230143490A (en) | Colored wheat extract exhibiting anti-obesity function and food composition containing the extract | |
| JP2023069459A (en) | Cyclic AMP phosphodiesterase activity inhibitor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180125 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20181122 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190122 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190320 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190813 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191113 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20191122 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200128 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200312 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6676278 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |