JP6656598B2 - Confocal microscope system - Google Patents
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Description
本発明は、共焦点顕微鏡システムに関し、特に、小型化により設置スペースの改善を図った共焦点顕微鏡システムに関するものである。 The present invention relates to a confocal microscope system, and more particularly, to a confocal microscope system in which an installation space is improved by downsizing.
図2は特許文献1に記載されている従来の共焦点顕微鏡システムの一例を示す構成説明図であり、(a)は平面図、(b)は拡大正面図である。図2において、共焦点顕微鏡システム1は、保護筐体2によって覆われている。保護筐体2の内部には温度調節可能な温調チャンバー3が設けられており、温調チャンバー3の内部はほぼ一定温度(たとえば30℃)になるように調節されている。保護筐体2は図2(a)の右側面が前面とされ、温調チャンバー3の右側面が保護筐体2の前面に沿うように配置されている。 FIGS. 2A and 2B are explanatory diagrams illustrating an example of a conventional confocal microscope system described in Patent Literature 1, wherein FIG. 2A is a plan view, and FIG. 2B is an enlarged front view. In FIG. 2, the confocal microscope system 1 is covered by a protective housing 2. A temperature control chamber 3 capable of controlling the temperature is provided inside the protective housing 2, and the inside of the temperature control chamber 3 is controlled so as to have a substantially constant temperature (for example, 30 ° C.). The protection housing 2 is disposed such that the right side surface of FIG. 2A is the front surface, and the right side surface of the temperature control chamber 3 is along the front surface of the protection housing 2.
温調チャンバー3の内部には前面側にXY駆動装置4が配置され、このXY駆動装置4上にはXY方向に駆動される移動テーブル5が設けられている。この移動テーブル5には試料が収められたガラスボトムディッシュ6を有する試料カセット7および光源8が装着され、試料カセット7は移動テーブル5の移動にしたがってXY駆動装置4上をXY方向に移動する。 An XY driving device 4 is arranged on the front side inside the temperature control chamber 3, and a moving table 5 driven in the XY directions is provided on the XY driving device 4. A sample cassette 7 having a glass bottom dish 6 containing a sample and a light source 8 are mounted on the moving table 5, and the sample cassette 7 moves on the XY driving device 4 in the XY directions as the moving table 5 moves.
試料カセット7の上方には試料カセット7に対向するようにコンデンサレンズ19と光源8が配置され、下方には試料カセット7に対向するように対物レンズ10が配置されている。対物レンズ10は、駆動ユニット11により矢印のZ方向に駆動される。 A condenser lens 19 and a light source 8 are arranged above the sample cassette 7 so as to face the sample cassette 7, and an objective lens 10 is arranged below the sample cassette 7 so as to face the sample cassette 7. The objective lens 10 is driven by the drive unit 11 in the Z direction indicated by the arrow.
XY駆動装置4の左側には、スキャナ部12が配置されている。スキャナ部12は、マイクロレンズディスク13とピンホールディスク14がハブ15により連結されたものであって、モータ16により回転駆動される。なお、スキャナ部12を構成するマイクロレンズディスク13とピンホールディスク14の間には、ダイクロイックミラー17が配置されている。 The scanner unit 12 is disposed on the left side of the XY driving device 4. The scanner unit 12 includes a microlens disk 13 and a pinhole disk 14 connected by a hub 15, and is rotated by a motor 16. Note that a dichroic mirror 17 is arranged between the microlens disk 13 and the pinhole disk 14 constituting the scanner unit 12.
対物レンズ10の下方にはミラー18が配置され、このミラー18とスキャナ部12の間には結像レンズ19が配置されている。 A mirror 18 is arranged below the objective lens 10, and an imaging lens 19 is arranged between the mirror 18 and the scanner unit 12.
スキャナ部12に設けられているダイクロイックミラー17により奥行方向に反射される光軸に沿って、リレーレンズ20とミラー21が配置されている。 A relay lens 20 and a mirror 21 are arranged along an optical axis reflected in a depth direction by a dichroic mirror 17 provided in the scanner section 12.
ミラー21で左方向に反射される光軸に沿って、モータ22により回転駆動されるフィルターホィール23と、リレーレンズ24と、撮影装置としてのCCD25およびレーザユニット26が配置されている。なお、リレーレンズ24は、温調チャンバー3内に配置されている。 A filter wheel 23, which is rotationally driven by a motor 22, a relay lens 24, and a CCD 25 and a laser unit 26 as a photographing device are arranged along an optical axis reflected leftward by the mirror 21. In addition, the relay lens 24 is disposed in the temperature control chamber 3.
レーザ発振器が搭載されたレーザユニット26は、温調チャンバー3の前面から見た奥行方向に、スキャナ部12と対向するように配置されている。 The laser unit 26 on which the laser oscillator is mounted is disposed so as to face the scanner unit 12 in the depth direction as viewed from the front of the temperature control chamber 3.
このように構成される共焦点顕微鏡システムは、レーザユニット26と、レーザユニット26から出力されるレーザ光を走査するスキャナ部12と、スキャナ部12で走査されたレーザ光を試料カセット7に投射して試料を励起する投射光学系と、対物レンズ10に対向して配置された試料カセット7をテーブル上でXY駆動させるXY駆動装置4と、励起された試料から発光される蛍光のうち再びスキャナ部12を通過した光を分離する分離光学系と、分離された蛍光を再び結像させる結像光学系と、結像光学系の結像面に配置された撮影装置を備えたものであり、生物やバイオテクノロジーなどの分野における生きた細胞の生理反応観察や形態観察、あるいは半導体市場におけるLSIの表面観察などに使用されている。 The confocal microscope system configured as described above projects the laser unit 26, the scanner unit 12 that scans the laser beam output from the laser unit 26, and the laser beam scanned by the scanner unit 12 onto the sample cassette 7. A projection optical system for exciting the sample, an XY driving device 4 for XY driving a sample cassette 7 arranged opposite to the objective lens 10 on a table, and a scanner unit for emitting fluorescence from the excited sample again. A separation optical system that separates the light that has passed through 12, an imaging optical system that forms an image of the separated fluorescence again, and a photographing device that is disposed on an imaging surface of the imaging optical system. It is used for observing the physiological response and morphology of living cells in fields such as field and biotechnology, or for observing the surface of LSI in the semiconductor market.
しかし、このような従来の共焦点顕微鏡システムにおいては、レーザユニット26から出力されるレーザ光と試料に投射される励起光が直線上に並んでおり、また試料からの蛍光が再びスキャナ部12を通過するための光路が必要であることから、装置全体の奥行が非常に大きくなり、装置全体を収納するためにかなり大きなスペースが必要になるという問題があった。 However, in such a conventional confocal microscope system, the laser light output from the laser unit 26 and the excitation light projected on the sample are arranged in a straight line, and the fluorescence from the sample again scans the scanner unit 12. The necessity of an optical path for passing the light causes a problem that the depth of the entire apparatus becomes very large, and a considerably large space is required to store the entire apparatus.
本発明は、このような課題を解決するものであって、その目的は、コンパクトで広い設置場所を必要としない小型の共焦点顕微鏡システムを実現することにある。 The present invention solves such a problem, and an object of the present invention is to realize a compact confocal microscope system that is compact and does not require a large installation space.
このような課題を達成するために、本発明のうち第1の態様は、
マイクロレンズディスクとピンホールディスクで構成されレーザ光を走査するスキャナ部と、
レーザユニットと第1ミラーとを備えて構成され、前記スキャナ部にレーザ光を投光する投光光学系と、
第2ミラーと結像レンズと対物レンズとを備えて構成され、前記スキャナ部で走査されたレーザ光を試料に投射して試料を励起する励起光学系と、
リレーレンズとフィルターホイールと第3ミラーとを備えて構成され、前記試料から発光される蛍光のうち再び前記スキャナ部を通過した光を分離して撮影装置へ結像させる結像光学系を含む共焦点顕微鏡システムにおいて、
前記投光光学系と励起光学系と結像光学系が、それぞれの光軸が平面視で平行になるように配置されたことを特徴とする共焦点顕微鏡システムである。
In order to achieve such an object, a first aspect of the present invention provides:
A scanner unit configured by a microlens disk and a pinhole disk to scan laser light,
A projection optical system configured to include a laser unit and a first mirror and projecting a laser beam to the scanner unit;
An excitation optical system configured to include a second mirror, an imaging lens, and an objective lens, and to project a laser beam scanned by the scanner unit onto the sample to excite the sample;
An image-forming optical system configured to include a relay lens, a filter wheel, and a third mirror, and to separate light of fluorescence emitted from the sample that has passed through the scanner unit again to form an image on an imaging device; In a focus microscope system,
A confocal microscope system, wherein the light projecting optical system, the excitation optical system, and the imaging optical system are arranged such that their optical axes are parallel in plan view.
第2の態様は、第1の態様の共焦点顕微鏡システムにおいて、
前記第1ミラーと前記第2ミラーとは折り曲げミラーとして機能し、前記スキャナ部を構成するマイクロレンズディスクとピンホールディスクの間にダイクロイックミラーが配置されていることとを特徴とする。
A second aspect is the confocal microscope system according to the first aspect,
The first mirror and the second mirror function as bending mirrors, and a dichroic mirror is arranged between a microlens disk and a pinhole disk constituting the scanner unit.
第3の態様は、第1の態様の共焦点顕微鏡システムにおいて、
前記第1ミラーが、前記投光光学系の出射光軸を前記スキャナ部に対して調整することを特徴とする。
A third aspect is the confocal microscope system according to the first aspect,
The first mirror adjusts an emission optical axis of the light projecting optical system with respect to the scanner unit.
第4の態様は、第1の態様の共焦点顕微鏡システムにおいて、
前記第3ミラーが、前記結像光学系の光軸を前記撮影装置に対して調整するために前記撮影装置の入射側に配置されていることを特徴とする。
A fourth aspect is the confocal microscope system according to the first aspect,
The third mirror is arranged on an incident side of the photographing device for adjusting an optical axis of the imaging optical system with respect to the photographing device.
これらにより、広い設置場所を必要としない小型でコンパクトな共焦点顕微鏡システムを実現できる。 As a result, a compact and compact confocal microscope system that does not require a large installation space can be realized.
以下、本発明の実施の形態について、図面を用いて詳細に説明する。図1は本発明の一実施例を示す構成説明図であって、(a)は平面図、(b)は主要部の正面図であり、図2と共通する部分には同一の符号を付けている。図1において、共焦点顕微鏡システム1は保護筐体2によって覆われている。なお、保護筐体2は、図1(a)の下辺が前面になる。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the drawings. FIGS. 1A and 1B are explanatory diagrams showing the configuration of an embodiment of the present invention, in which FIG. 1A is a plan view, FIG. 1B is a front view of a main part, and portions common to FIG. ing. In FIG. 1, the confocal microscope system 1 is covered by a protective housing 2. In addition, the lower side of FIG.
保護筐体2の内部中央の奥行方向にはXY駆動装置27が設けられ、このXY駆動装置27上にはXY方向に駆動される移動テーブル28が設けられている。移動テーブル28には、試料を収めることができ、試料は移動テーブル28の移動にしたがってXY駆動装置27上をXY方向に移動する。 An XY drive device 27 is provided in the depth direction at the center of the inside of the protective housing 2, and a moving table 28 driven in the XY directions is provided on the XY drive device 27. The sample can be stored in the moving table 28, and the sample moves on the XY driving device 27 in the XY directions as the moving table 28 moves.
試料に対向するように対物レンズ29が配置されている。対物レンズ29は、従来と同様に駆動ユニット30により矢印Z方向に駆動される。 An objective lens 29 is arranged to face the sample. The objective lens 29 is driven in the arrow Z direction by the drive unit 30 as in the conventional case.
XY駆動装置27の左側手前には、従来と同様にマイクロレンズディスク31とピンホールディスク32がハブ33により連結されてモータ34により回転駆動されるスキャナ部35が配置されている。 On the left side of the XY driving device 27, a scanner unit 35, which is connected to a microlens disk 31 and a pinhole disk 32 by a hub 33 and is driven to rotate by a motor 34, is arranged in the same manner as in the related art.
対物レンズ29の下方には従来と同様にミラー36が配置され、このミラー36とスキャナ部35の間には結像レンズ37が配置されている。スキャナ部35を構成するマイクロレンズディスク31とピンホールディスク32の間には、従来と同様にダイクロイックミラー38が配置されている。 A mirror 36 is disposed below the objective lens 29 in the same manner as in the related art, and an imaging lens 37 is disposed between the mirror 36 and the scanner unit 35. A dichroic mirror 38 is arranged between the microlens disk 31 and the pinhole disk 32 constituting the scanner unit 35 as in the related art.
スキャナ部35に設けられているダイクロイックミラー38により右方向に反射される光軸上には、リレーレンズ39と、モータ40により回転駆動されるフィルターホィール41と、リレーレンズ41と、ミラー43が配置されている。 A relay lens 39, a filter wheel 41 rotationally driven by a motor 40, a relay lens 41, and a mirror 43 are arranged on an optical axis reflected rightward by a dichroic mirror 38 provided in the scanner unit 35. Have been.
XY駆動装置27の右手奥側にはCCDやCMOSなどを撮像素子とするカメラ44が配置されていて、このカメラ44にはミラー43の反射光が入射される。 A camera 44 having a CCD, CMOS, or the like as an image sensor is arranged on the far right side of the XY drive device 27, and the light reflected by the mirror 43 is incident on the camera 44.
フィルターホィール41の手前側には、レーザユニット45が配置されている。レーザユニット45の出力光は、ミラー46を介してスキャナ部35に設けられているダイクロイックミラー38に入射されて透過し、さらにミラー47で反射されて結像レンズ37に入射される。これらミラー43、46および47は、光軸を折り曲げるミラーとして機能する。 A laser unit 45 is disposed in front of the filter wheel 41. The output light of the laser unit 45 is incident on a dichroic mirror 38 provided in the scanner unit 35 via a mirror 46 and is transmitted, is further reflected by a mirror 47 and is incident on an imaging lens 37. These mirrors 43, 46 and 47 function as mirrors for bending the optical axis.
ここで、ミラー47と結像レンズ37と対物レンズ29は励起光学系を構成し、ダイクロイックミラー38は分離光学系として機能し、リレーレンズ39,42とフィルターホィール41とミラー43は結像光学系を構成し、レーザユニット45とミラー46は投光光学系を構成する。 Here, the mirror 47, the imaging lens 37, and the objective lens 29 constitute an excitation optical system, the dichroic mirror 38 functions as a separation optical system, and the relay lenses 39 and 42, the filter wheel 41, and the mirror 43 include the imaging optical system. , And the laser unit 45 and the mirror 46 constitute a light projecting optical system.
これら投光光学系と励起光学系と結像光学系は、それぞれの光軸が平行になるように配置されている。 The light projecting optical system, the excitation optical system, and the imaging optical system are arranged so that their optical axes are parallel.
ミラー46の傾きを変えることによりレーザユニット45から出力されるレーザ光の光軸調整を行うことができ、ミラー43の傾きを変えることによりカメラ44に入射される蛍光の光軸をZ軸としたときのXY方向の光軸調整を行うことができる。 The optical axis of the laser beam output from the laser unit 45 can be adjusted by changing the tilt of the mirror 46, and the optical axis of the fluorescent light incident on the camera 44 is changed to the Z axis by changing the tilt of the mirror 43. The optical axis adjustment in the X and Y directions at the time can be performed.
なお、カメラ44のθ方向については、カメラ44を回転させることで調整できる。 Note that the θ direction of the camera 44 can be adjusted by rotating the camera 44.
レーザユニット45から出射される励起光束は、スキャナ部35のマイクロレンズディスク31で集光されてダイクロイックミラー38を透過し、ピンホールディスク32を通過してミラー47で反射され、結像レンズ37によって平行光となる。 The excitation light beam emitted from the laser unit 45 is condensed by the microlens disk 31 of the scanner unit 35, passes through the dichroic mirror 38, passes through the pinhole disk 32, is reflected by the mirror 47, and is reflected by the imaging lens 37. It becomes parallel light.
ミラー36で反射された平行光は対物レンズ29により収束され、移動テーブル28に配置された試料に照射される。試料は、平行光が照射されることにより、蛍光信号を発生する。 The parallel light reflected by the mirror 36 is converged by the objective lens 29 and is applied to the sample placed on the moving table 28. The sample generates a fluorescence signal when irradiated with parallel light.
試料から発生した蛍光信号は、対物レンズ29により集光されて平行光となってミラー36で反射され、結像レンズ37で収束されて結像面に蛍光像を結ぶ。スキャナ部35を構成するピンホールディスク32は、ピンホール面が結像面に一致するように配置されているので、蛍光像は共焦点像となる。 The fluorescent signal generated from the sample is condensed by the objective lens 29, becomes parallel light, is reflected by the mirror 36, is converged by the image forming lens 37, and forms a fluorescent image on an image forming surface. Since the pinhole disk 32 constituting the scanner unit 35 is arranged so that the pinhole surface coincides with the image forming surface, the fluorescent image is a confocal image.
共焦点像はダイクロイックミラー38に入射されて反射され、リレーレンズ39と42を介してミラー43に入射されて反射された後、カメラ44に結像される。ここで、ダイクロイックミラー38は、所定の蛍光の波長を透過させる。具体的には、フィルタホィール41に搭載されたバンドパスフィルタによって透過特性が切り替えられ、励起光束の波長に対応した蛍光の波長帯域のみを透過させる。 The confocal image is incident on and reflected by the dichroic mirror 38, is incident on the mirror 43 via the relay lenses 39 and 42, is reflected, and is then formed on the camera 44. Here, the dichroic mirror 38 transmits a predetermined fluorescence wavelength. Specifically, transmission characteristics are switched by a band-pass filter mounted on the filter wheel 41, and only the fluorescence wavelength band corresponding to the wavelength of the excitation light flux is transmitted.
このように構成される共焦点顕微鏡システムは、分離光学系を中心に、投光光学系、結像光学系、励起光学系の三系統の光軸が平行になるように配置されることにより、保護筐体2の幅を狭くすることができ、設置スペース効率を改善できる。 The confocal microscope system thus configured is arranged such that the optical axes of the three systems of the projection optical system, the imaging optical system, and the excitation optical system are parallel to each other with the separation optical system at the center, The width of the protective housing 2 can be reduced, and the installation space efficiency can be improved.
そして、励起光学系の光軸調整用ミラー46を装置の前面に配置したので、スキャナ部35に入射されるレーザ光の調整を容易に行うことができる。 Since the mirror 46 for adjusting the optical axis of the excitation optical system is arranged on the front of the apparatus, the adjustment of the laser beam incident on the scanner unit 35 can be easily performed.
また、結像光学系の光軸調整用ミラー43を右面に配置することにより、保護筐体2の幅を小さくできるとともに、カメラ44に入る励起光の調整を容易に行うことができる。 Further, by arranging the optical axis adjusting mirror 43 of the imaging optical system on the right side, the width of the protective housing 2 can be reduced, and the adjustment of the excitation light entering the camera 44 can be easily performed.
さらに、カメラ44に入射される励起光の光軸調整にあたっては、XY方向はミラー43で行い、θ方向はカメラ44で行うように分離することができ、光軸調整を容易に行うことができる。 Further, the adjustment of the optical axis of the excitation light incident on the camera 44 can be performed by the mirror 43 in the X and Y directions and the camera 44 in the θ direction, so that the optical axis can be easily adjusted. .
以上説明したように、本発明によれば、光学調整の簡便化が図れ、調整後の外乱による影響を軽減できる共焦点顕微鏡システムが実現できる。 As described above, according to the present invention, a confocal microscope system that can simplify optical adjustment and reduce the influence of disturbance after adjustment can be realized.
1 共焦点顕微鏡システム
2 保護筐体
27 XY駆動装置
28 移動テーブル
29 対物レンズ
30 駆動ユニット
31 マイクロレンズディスク
32 ピンホールディスク
33 ハブ
34,40 モータ
35 スキャナ部
36,43,46,47 ミラー
37 結像レンズ
38 ダイクロイックミラー
39,42 リレーレンズ
41 フィルターホィール
44 カメラ
45 レーザユニット
48 結像レンズ
Reference Signs List 1 confocal microscope system 2 protective housing 27 XY drive device 28 moving table 29 objective lens 30 drive unit 31 microlens disk 32 pinhole disk 33 hub 34, 40 motor 35 scanner unit 36, 43, 46, 47 mirror 37 imaging Lens 38 Dichroic mirror 39, 42 Relay lens 41 Filter wheel 44 Camera 45 Laser unit 48 Imaging lens
Claims (3)
レーザユニットと第1ミラーとを備えて構成され、前記スキャナ部にレーザ光を投光する投光光学系と、
第2ミラーと結像レンズと対物レンズとを備えて構成され、前記スキャナ部で走査されたレーザ光を試料に投射して試料を励起する励起光学系と、
リレーレンズとフィルターホイールと第3ミラーとを備えて構成され、前記試料から発光される蛍光のうち再び前記スキャナ部を通過した光を分離して撮影装置へ結像させる結像光学系を含む共焦点顕微鏡システムにおいて、
前記投光光学系における前記レーザユニットと前記第1ミラーと、前記励起光学系における前記第2ミラーと前記結像レンズと前記対物レンズと、前記結像光学系における前記リレーレンズと前記フィルターホイールと前記第3ミラーとが、それぞれの光軸がいずれも直線上に並ばず平面視で平行になるように配置され、
前記第1ミラーと前記第2ミラーとは折り曲げミラーとして機能し、前記スキャナ部を構成するマイクロレンズディスクとピンホールディスクの間にダイクロイックミラーが配置されていることを特徴とする共焦点顕微鏡システム。 A scanner unit configured by a microlens disk and a pinhole disk to scan laser light,
A projection optical system configured to include a laser unit and a first mirror and projecting a laser beam to the scanner unit;
An excitation optical system configured to include a second mirror, an imaging lens, and an objective lens, and to project a laser beam scanned by the scanner unit onto the sample to excite the sample;
An image-forming optical system configured to include a relay lens, a filter wheel, and a third mirror, and to separate light of fluorescence emitted from the sample that has passed through the scanner unit again to form an image on an imaging device; In a focus microscope system,
The laser unit and the first mirror in the light projecting optical system, the second mirror, the imaging lens, and the objective lens in the excitation optical system, and the relay lens and the filter wheel in the imaging optical system. The third mirror is arranged such that the respective optical axes are not aligned on a straight line but are parallel in plan view .
A confocal microscope system, wherein the first mirror and the second mirror function as folding mirrors, and a dichroic mirror is arranged between a microlens disk and a pinhole disk constituting the scanner unit .
レーザユニットと第1ミラーとを備えて構成され、前記スキャナ部にレーザ光を投光する投光光学系と、 A projection optical system configured to include a laser unit and a first mirror, and projecting a laser beam to the scanner unit;
第2ミラーと結像レンズと対物レンズとを備えて構成され、前記スキャナ部で走査されたレーザ光を試料に投射して試料を励起する励起光学系と、 An excitation optical system configured to include a second mirror, an imaging lens, and an objective lens, and project the laser light scanned by the scanner unit onto the sample to excite the sample;
リレーレンズとフィルターホイールと第3ミラーとを備えて構成され、前記試料から発光される蛍光のうち再び前記スキャナ部を通過した光を分離して撮影装置へ結像させる結像光学系を含む共焦点顕微鏡システムにおいて、 An image forming optical system configured to include a relay lens, a filter wheel, and a third mirror, and to separate light of the fluorescence emitted from the sample that has passed through the scanner unit again to form an image on an imaging device; In a focus microscope system,
前記投光光学系における前記レーザユニットと前記第1ミラーと、前記励起光学系における前記第2ミラーと前記結像レンズと前記対物レンズと、前記結像光学系における前記リレーレンズと前記フィルターホイールと前記第3ミラーとが、それぞれの光軸がいずれも直線上に並ばず平面視で平行になるように配置され、 The laser unit and the first mirror in the light projecting optical system, the second mirror, the imaging lens and the objective lens in the excitation optical system, the relay lens and the filter wheel in the imaging optical system, The third mirror is arranged such that each optical axis is not aligned on a straight line but parallel in plan view;
前記第1ミラーが、前記投光光学系の出射光軸を前記スキャナ部に対して調整することを特徴とする共焦点顕微鏡システム。 A confocal microscope system, wherein the first mirror adjusts an emission optical axis of the light projecting optical system with respect to the scanner unit.
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