JP6548126B2 - Type III collagen production promoter - Google Patents
Type III collagen production promoter Download PDFInfo
- Publication number
- JP6548126B2 JP6548126B2 JP2016561957A JP2016561957A JP6548126B2 JP 6548126 B2 JP6548126 B2 JP 6548126B2 JP 2016561957 A JP2016561957 A JP 2016561957A JP 2016561957 A JP2016561957 A JP 2016561957A JP 6548126 B2 JP6548126 B2 JP 6548126B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- type iii
- peptide
- iii collagen
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
Description
本発明は、ＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤およびそれを含有する化粧品、医薬部外品または医薬に関するものである。 The present invention relates to a type III collagen production promoter and cosmetics, quasi-drugs or medicine containing the same.
加齢や紫外線等の外来ストレスにより生じる皮膚のしわやたるみの発生原因は様々であるが、その根本的な現象は皮膚繊維芽細胞のコラーゲン産生活性の低下、ヒアルロン酸合成活性の低下、紫外線によるコラゲナーゼ活性の上昇、紫外線や環境から生じる活性酸素による障害等による皮膚の保湿機能の低下や皮膚の構成成分の劣化、変性、減少等であると考えられている。ヒトの皮膚は、角層、表皮層、基底膜および真皮で構成されており、真皮はその中で最も広い領域を占める。真皮組織に存在するコラーゲンとしては、Ｉ型とＩＩＩ型が知られている。Ｉ型コラーゲンは弾力を保ち守る働きがあり、ＩＩＩ型コラーゲンは、みずみずしさを保ち柔軟性をサポートする働きがある。ＩＩＩ型とＩ型コラーゲンの割合は、乳児期には１対４であるのに対し、成人では１対１０になるといわれており、ＩＩＩ型コラーゲンは加齢に伴い急速に減少していくことが知られている。それゆえ、皮膚の弾力性の維持および回復には、Ｉ型コラーゲンのみではなく、ＩＩＩ型コラーゲンが重要な役割を担っている。また、ＩＩＩ型コラーゲンの合成不全が原因であると考えられる疾患として、エーラス・ダンロス症候群（Ehlers-Danlos Syndrome）の血管型（ＩＶ型）が知られている（非特許文献１）。さらに、ＩＩＩ型コラーゲンは創傷治癒促進効果があることも知られている（特許文献１）。 The causes of wrinkles and sags of the skin caused by aging and foreign stress such as ultraviolet rays vary, but the underlying phenomenon is the decrease in collagen production activity of skin fibroblasts, decrease in hyaluronic acid synthesis activity, ultraviolet rays It is thought that the increase in collagenase activity, the deterioration of the moisturizing function of the skin due to damage due to ultraviolet light and environmental active oxygen and the like, the deterioration, degeneration, and reduction of skin constituents. Human skin is composed of the stratum corneum, the epidermal layer, the basement membrane and the dermis, and the dermis occupies the largest area among them. Types I and III are known as collagen present in dermal tissue. Type I collagen works to keep elasticity and type III collagen works to keep freshness and support flexibility. The proportions of type III and type I collagen are said to be 1 to 10 in adults as opposed to 1 to 4 in infancy, and type III collagen may decrease rapidly with age Are known. Therefore, not only type I collagen, but type III collagen plays an important role in maintaining and restoring skin elasticity. In addition, a blood vessel type (type IV) of Ehlers-Danlos Syndrome (Type IV) is known as a disease that is considered to be caused by a deficiency in the synthesis of type III collagen (Non-patent Document 1). Furthermore, type III collagen is also known to have a wound healing promoting effect (Patent Document 1).
このように、ＩＩＩ型コラーゲンは加齢等による皮膚の老化を抑制する上で不可欠な成分であるとともに、ＩＩＩ型コラーゲンの合成不全を原因とする各種疾患を改善し、創傷治癒を促進する重要な成分であるといえる。したがって、ＩＩＩ型コラーゲンの産生を効果的に促進することができるＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の開発が望まれている。例えば、特許文献２には、オウギ等の生薬またはその抽出物を含有するＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤が開示されている（特許文献２）。 Thus, type III collagen is an essential component for suppressing skin aging due to aging etc., and it is important to improve various diseases caused by defective synthesis of type III collagen and to promote wound healing. It can be said that it is an ingredient. Therefore, development of a type III collagen production promoter capable of effectively promoting type III collagen production is desired. For example, Patent Document 2 discloses a type III collagen production promoter containing a herbal medicine such as ooki or an extract thereof (Patent Document 2).
一方、本発明者らは、細胞外基質の一種であるオステオポンチン（ＯＰＮ）内に存在する７アミノ酸（ＳＶＶＹＧＬＲ：配列番号７）からなるペプチドが、血管新生作用を有していることを明らかにし、その血管新生作用は、血管新生因子の中心的役割を担うＶＥＧＦと同等に高いものであることを見出している（特許文献３、非特許文献２、非特許文献３）。また、本発明者らは、該ペプチドが間葉系細胞の増殖促進作用を有すること（特許文献４）、心機能改善能を有すること（特許文献５）を見出している。しかし、該ペプチドが繊維芽細胞のＩＩＩ型コラーゲン産生を促進することは知られていない。 On the other hand, the present inventors clarified that a peptide consisting of 7 amino acids (SVVYGLR: SEQ ID NO: 7) present in osteopontin (OPN), which is a type of extracellular matrix, has an angiogenic action, It has been found that its angiogenic effect is as high as that of VEGF, which plays a central role in angiogenic factors (Patent Document 3, Non-Patent Document 2, Non-Patent Document 3). The present inventors have also found that the peptide has a growth promoting effect on mesenchymal cells (Patent Document 4) and that it has an ability to improve cardiac function (Patent Document 5). However, it is not known that the peptide promotes fibroblast type III collagen production.
本発明は、新規なＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤、並びにこれを含有する化粧品、医薬部外品および医薬品を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a novel type III collagen production promoter and cosmetics, quasi-drugs and medicines containing the same.
本発明は、上記課題を解決するために、以下の各発明を包含する。
［１］下記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩を含有することを特徴とするＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
（１）Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｘ５−Ｘ６（式中Ｘ１、Ｘ２、Ｘ５およびＸ６は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）
（２）Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（式中Ｘ２、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）
（３）Ｓｅｒ−Ｘ２−Ｘ３−（Ｔｙｒ／Ｐｈｅ／Ｔｒｐ）−Ｘ５−Ｘ６（式中Ｘ２、Ｘ３、Ｘ５およびＸ６は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）
（４）Ｘ２−Ｘ３−（Ｔｙｒ／Ｐｈｅ／Ｔｒｐ）−Ｘ５−Ｘ６−Ａｒｇ（式中Ｘ２、Ｘ３、Ｘ５およびＸ６は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）
［２］前記ペプチドが、前記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列をＮ末端およびＣ末端の少なくとも一方に有することを特徴とする前記［１］に記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
［３］前記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列が、配列番号１〜６のいずれかで示されるアミノ酸配列である前記［１］または［２］に記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
［４］前記ペプチドが、配列番号１、２もしくは７で示されるアミノ酸配列からなるペプチド、または配列番号１、２もしくは７で示されるアミノ酸配列を含むペプチドである前記［１］〜［３］のいずれかに記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
［５］前記ペプチドが、ヒトオステオポンチンのフラグメントである前記［１］〜［４］のいずれかに記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
［６］前記ペプチドが、配列番号１１で示されるアミノ酸配列またはその一部からなるペプチドである前記［５］に記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤。
［７］前記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を含有する化粧品。
［８］前記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を含有する医薬部外品。
［９］前記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を含有する創傷治癒促進用、皮膚萎縮改善用またはＩＩＩ型コラーゲン合成不全改善用医薬。
［１０］前記［１］〜［６］のいずれかに記載のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を含有する生体吸収性ゲル。The present invention includes the following inventions in order to solve the above-mentioned problems.
[1] A peptide comprising an amino acid sequence represented by the following formula (1), (2), (3) or (4) and containing a peptide having 200 or less total amino acid residues or a salt thereof III Type collagen production promoter.
(1) X 1 -X 2 -Val-Tyr-X 5 -X 6 (wherein, X 1 , X 2 , X 5 and X 6 are the same or different and represent any amino acid residue)
(2) X 2 -Val-Tyr-X 5 -X 6 -X 7 (wherein, X 2 , X 5 , X 6 and X 7 are the same or different and represent any amino acid residue)
(3) Ser-X 2 -X 3 - a (Tyr / Phe / Trp) -X 5 -X 6 ( wherein X 2, X 3, X 5 and X 6, same or different any amino acid residue Represent)
(4) X 2 -X 3 - a (Tyr / Phe / Trp) -X 5 -X 6 -Arg ( wherein X 2, X 3, X 5 and X 6, same or different any amino acid residue Represent)
[2] The above-mentioned [1] characterized in that the above-mentioned peptide has the amino acid sequence shown by the above-mentioned formula (1), (2), (3) or (4) in at least one of N-terminal and C-terminal Type III collagen production promoter described.
[3] The above [1] or [2], wherein the amino acid sequence represented by the formula (1), (2), (3) or (4) is an amino acid sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 1 to 6 The type III collagen production promoter described in 4.
[4] The above-mentioned [1] to [3], wherein the peptide is a peptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, 2 or 7 or a peptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID The type III collagen production promoter according to any of the above.
[5] The type III collagen production promoter according to any one of the above [1] to [4], wherein the peptide is a fragment of human osteopontin.
[6] The type III collagen production promoter according to [5] above, wherein the peptide is a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 11 or a portion thereof.
[7] A cosmetic comprising the type III collagen production promoter according to any one of the above [1] to [6].
[8] A quasi-drug comprising the type III collagen production promoter according to any one of the above [1] to [6].
[9] A medicine for promoting wound healing, for improving skin atrophy, or for improving failure of type III collagen synthesis, which comprises the type III collagen production promoter according to any one of the above [1] to [6].
[10] A bioabsorbable gel containing the type III collagen production promoter according to any one of the above [1] to [6].
本発明によれば、新規なＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することができる。本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、線維芽細胞によるＩＩＩ型コラーゲン産生を促進できるので、皮膚のしわやたるみを予防または改善するための化粧品、医薬部外品の成分として有用である。また、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、創傷治癒促進用、皮膚萎縮改善用またはＩＩＩ型コラーゲン合成不全改善用医薬の有効成分として有用である。 According to the present invention, a novel type III collagen production promoter can be provided. Since the type III collagen production promoter of the present invention can promote type III collagen production by fibroblasts, it is useful as a component of cosmetics and quasi-drugs for preventing or improving skin wrinkles and sags. In addition, the type III collagen production promoter of the present invention is useful as an active ingredient of a medicine for promoting wound healing, improving skin atrophy, or improving type III collagen synthesis failure.
本発明は、以下の式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩を含有するＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を提供する。
（１）Ｘ１−Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｘ５−Ｘ６（式中Ｘ１、Ｘ２、Ｘ５およびＸ６は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）
（２）Ｘ２−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（式中Ｘ２、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）
（３）Ｓｅｒ−Ｘ２−Ｘ３−（Ｔｙｒ／Ｐｈｅ／Ｔｒｐ）−Ｘ５−Ｘ６（式中Ｘ２、Ｘ３、Ｘ５およびＸ６は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）
（４）Ｘ２−Ｘ３−（Ｔｙｒ／Ｐｈｅ／Ｔｒｐ）−Ｘ５−Ｘ６−Ａｒｇ（式中Ｘ２、Ｘ３、Ｘ５およびＸ６は、同一または異なって任意のアミノ酸残基を表す。）The present invention provides a type III collagen production comprising an amino acid sequence represented by the following formula (1), (2), (3) or (4) and containing a peptide having 200 or less total amino acid residues or a salt thereof Provide an accelerator.
(1) X 1 -X 2 -Val-Tyr-X 5 -X 6 (wherein, X 1 , X 2 , X 5 and X 6 are the same or different and represent any amino acid residue)
(2) X 2 -Val-Tyr-X 5 -X 6 -X 7 (wherein, X 2 , X 5 , X 6 and X 7 are the same or different and represent any amino acid residue)
(3) Ser-X 2 -X 3 - a (Tyr / Phe / Trp) -X 5 -X 6 ( wherein X 2, X 3, X 5 and X 6, same or different any amino acid residue Represent)
(4) X 2 -X 3 - a (Tyr / Phe / Trp) -X 5 -X 6 -Arg ( wherein X 2, X 3, X 5 and X 6, same or different any amino acid residue Represent)
式（１）〜（４）において、Ｘ１は特に限定されないが、例えば、セリン、アラニン、アルギニン、リシン、ヒスチジン、トリプトファン、フェニルアラニンが好ましい。Ｘ２は特に限定されないが、例えば、バリン、アラニン、アルギニン、リシン、ヒスチジン、トリプトファン、フェニルアラニンが好ましい。Ｘ３は特に限定されないが、例えば、バリン、アラニン、アルギニン、リシン、ヒスチジン、トリプトファン、フェニルアラニンが好ましい。Ｘ５は特に限定されないが、例えば、グリシン、アラニン、アルギニン、リシン、ヒスチジン、トリプトファン、フェニルアラニンが好ましい。Ｘ６は特に限定されないが、例えば、ロイシン、アラニン、アルギニン、リシン、ヒスチジン、トリプトファン、フェニルアラニンが好ましい。Ｘ７は特に限定されないが、例えば、アルギニン、アラニン、リシン、ヒスチジン、トリプトファン、フェニルアラニンが好ましい。In the formulas (1) to (4), X 1 is not particularly limited, but for example, serine, alanine, arginine, lysine, histidine, tryptophan and phenylalanine are preferable. Although X 2 is not particularly limited, for example, valine, alanine, arginine, lysine, histidine, tryptophan and phenylalanine are preferable. Although X 3 is not particularly limited, for example, valine, alanine, arginine, lysine, histidine, tryptophan and phenylalanine are preferable. Although X 5 is not particularly limited, for example, glycine, alanine, arginine, lysine, histidine, tryptophan and phenylalanine are preferable. Although X 6 is not particularly limited, for example, leucine, alanine, arginine, lysine, histidine, tryptophan and phenylalanine are preferable. Although X 7 is not particularly limited, for example, arginine, alanine, lysine, histidine, tryptophan and phenylalanine are preferable.
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドは、上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列を有するものであればよく、これら以外のアミノ酸配列を有していてもよい。ペプチドが上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸配列を有する場合、ペプチドは上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列をＮ末端およびＣ末端の少なくとも一方に有することが好ましい。具体的には、上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列をＮ末端に有するペプチド、上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列をＣ末端に有するペプチド、または上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列をＮ末端とＣ末端の両方に有するペプチドが好ましい。また、上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列以外のアミノ酸配列を含まないが、上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列を連結したアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。連結するアミノ酸配列は、同一のアミノ酸配列でもよく、異なるアミノ酸配列でもよい。連結数は２以上であれば特に限定されない。 The peptide to be an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention may be one having an amino acid sequence represented by any of the above formulas (1) to (4), and has an amino acid sequence other than these. It may be When the peptide has an amino acid sequence other than the amino acid sequence represented by any of the above formulas (1) to (4), the peptide has the N-terminal amino acid sequence represented by any of the above formulas (1) to (4) It is preferable to have at least one of the C-terminals. Specifically, a peptide having an amino acid sequence represented by any of the above formulas (1) to (4) at the N-terminus, an amino acid sequence represented by any of the above formulas (1) to (4) at the C-terminus The peptide which it has, or the peptide which has the amino acid sequence shown by either of said Formula (1)-(4) in both N terminal and C terminal is preferable. In addition, an amino acid sequence which does not include an amino acid sequence other than the amino acid sequence represented by any one of the above formulas (1) to (4) but which is linked to the amino acid sequence represented by any one of the above formulas (1) to (4) It may be a peptide consisting of The linked amino acid sequences may be the same amino acid sequence or different amino acid sequences. The number of connections is not particularly limited as long as it is 2 or more.
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドの長さは特に限定されないが、総アミノ酸残基数が約２００以下であることが好ましく、約１７０以下であることがより好ましく、約１００以下であることがさらに好ましい。さらに、取り扱いの簡便さ、製造効率、抗原性等の副作用の観点から、総アミノ酸残基数が約５０以下であることが好ましく、約３０残基以下であることがより好ましく、約２０残基以下であることがさらに好ましく、約１０残基以下であることが特に好ましい。下限は６残基であり、好ましくは７残基以上である。 The length of the peptide to be an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention is not particularly limited, but the total number of amino acid residues is preferably about 200 or less, more preferably about 170 or less, and about More preferably, it is 100 or less. Furthermore, in view of ease of handling, production efficiency, and side effects such as antigenicity, the total number of amino acid residues is preferably about 50 or less, more preferably about 30 or less, and about 20 residues. The following is more preferable, and about 10 residues or less is particularly preferable. The lower limit is 6 residues, preferably 7 residues or more.
式（１）〜（４）で示されるアミノ酸配列として、好ましくは、以下の配列番号１〜６の配列が挙げられる。
Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ（配列番号１）
Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号２）
Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ（配列番号３）
Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号４）
Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ（配列番号５）
Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号６）As an amino acid sequence shown by Formula (1)-(4), Preferably, the sequence of following sequence number 1-6 is mentioned.
Ser-Val-Val-Tyr-Gly-Leu (SEQ ID NO: 1)
Val-Val-Tyr-Gly-Leu-Arg (SEQ ID NO: 2)
Ser-Val-Val-Phe-Gly-Leu (SEQ ID NO: 3)
Val-Val-Phe-Gly-Leu-Arg (SEQ ID NO: 4)
Ser-Val-Val-Trp-Gly-Leu (SEQ ID NO: 5)
Val-Val-Trp-Gly-Leu-Arg (SEQ ID NO: 6)
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドとしては、配列番号１〜６で示されるアミノ酸配列または以下の配列番号７〜９で示されるアミノ酸配列を有し、かつ総アミノ酸残基数が２０以下のペプチドが好ましい。
Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号７）
Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号８）
Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号９）
なかでも、配列番号１、２または７で示されるアミノ酸配列を含み、かつ総アミノ酸残基数が２０以下のペプチドがより好ましく、配列番号１、２または７で示されるアミノ酸配列からなるペプチドがさらに好ましい。The peptide to be an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention has the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 to 6 or the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7 to 9 below and total amino acid residues Peptides having a number of 20 or less are preferred.
Ser-Val-Val-Tyr-Gly-Leu-Arg (SEQ ID NO: 7)
Ser-Val-Val-Phe-Gly-Leu-Arg (SEQ ID NO: 8)
Ser-Val-Val-Trp-Gly-Leu-Arg (SEQ ID NO: 9)
Among them, a peptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, 2 or 7 and having a total amino acid residue number of 20 or less is more preferable, and the peptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, 2 or 7 is further preferable.
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドはヒトオステオポンチンのフラグメントであることが好ましい。ヒトオステオポンチンのアミノ酸配列は、例えば配列番号１０で示されるアミノ酸配列が挙げられるが、これに限定されない。ヒトオステオポンチンには配列番号７で示されるアミノ酸配列（ＳＶＶＹＧＬＲ）が含まれ、トロンビンは、配列番号７で示されるアミノ酸配列（ＳＶＶＹＧＬＲ）の直後でヒトオステオポンチンを切断することが知られている。例えば配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなるヒトオステオポンチンをトロンビンで切断すると、配列番号１１で示されるアミノ酸配列からなるフラグメント、すなわちヒトオステオポンチンのＮ末端を含み、Ｃ末端のアミノ酸配列がＳＶＶＹＧＬＲであるフラグメントが生成する。本発明者らは、配列番号１１で示されるアミノ酸配列からなるフラグメントが線維芽細胞に対してＩＩＩ型コラーゲン産生促進作用を有することを確認している（実施例１参照）。したがって、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドは、ヒトオステオポンチンをトロンビンで切断したＮ末端側の断片からなるペプチド、またはその一部からなり上記式（１）〜（４）のいずれかで示されるアミノ酸配列をＣ末端に有するペプチドであることがより好ましい。さらに好ましくは、配列番号１１で示されるアミノ酸配列またはその一部からなりＳＶＶＹＧＬＲ（配列番号７）またはＳＶＶＹＧＬ（配列番号１）を有するペプチドである。 The peptide to be an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention is preferably a fragment of human osteopontin. Examples of the amino acid sequence of human osteopontin include, but are not limited to, the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 10. Human osteopontin contains the amino acid sequence (SVVYGLR) shown in SEQ ID NO: 7, and thrombin is known to cleave human osteopontin immediately after the amino acid sequence (SVVYGLR) shown in SEQ ID NO: 7. For example, when human osteopontin consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10 is cleaved with thrombin, a fragment consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11 ie a fragment containing the N terminus of human osteopontin and whose C terminal amino acid sequence is SVVYGLR Generates. The present inventors have confirmed that a fragment consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 11 has an effect of promoting type III collagen production on fibroblasts (see Example 1). Therefore, the peptide serving as the active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention is a peptide consisting of an N-terminal fragment obtained by cleaving human osteopontin with thrombin, or a portion thereof, and the above formulas (1) to (4) It is more preferable that it is a peptide which has the amino acid sequence shown by either of C-terminal. More preferably, it is a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 11 or a portion thereof and having SVVYGLR (SEQ ID NO: 7) or SVVYGL (SEQ ID NO: 1).
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドを構成するアミノ酸は、側鎖が任意の置換基で修飾されたものでもよい。置換基は特に限定されないが、例えば、フッ素原子、塩素原子、シアノ基、水酸基、ニトロ基、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アミノ基などが挙げられる。好ましくは、トリプトファンまたはフェニルアラニンのベンゼン環が置換基で修飾されていることであり、より好ましくは、配列番号１〜９で示されるアミノ酸配列中のトリプトファンまたはフェニルアラニンのベンゼン環が置換基で修飾されていることである。 The amino acid which comprises the peptide used as the active ingredient of the type III collagen production promoter of this invention may be a side chain modified with any substituent. The substituent is not particularly limited, and examples thereof include a fluorine atom, a chlorine atom, a cyano group, a hydroxyl group, a nitro group, an alkyl group, a cycloalkyl group, an alkoxy group and an amino group. Preferably, the benzene ring of tryptophan or phenylalanine is modified with a substituent, and more preferably, the benzene ring of tryptophan or phenylalanine in the amino acid sequence shown in SEQ ID NOs: 1 to 9 is modified with a substituent It is that you are.
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドは、Ｃ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート(−ＣＯＯ−)、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れであってもよい。エステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ１−６アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−８シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ６−１２アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ１−２アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ１−２アルキル基などのＣ７−１４アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが挙げられる。アミド体としては、アミド、Ｃ１−６アルキル基の１つまたは２つで置換されたアミド、フェニル基で置換されたＣ１−６のアルキル基の１つまたは２つで置換されたアミド、アミド基の窒素原子を含んで５から７員環のアザシクロアルカンを形成するアミド等が挙げられる。本発明のペプチドがＣ末端以外にカルボキシル基またはカルボキシレートを有している場合、それらの基がアミド化またはエステル化されているものも本発明のペプチドに含まれる。Peptide comprising as an active ingredient of type III collagen production promoter of the present invention, C-terminal, carboxyl group (-COOH), a carboxylate (-COO -), in either an amide (-CONH 2) or an ester (-COOR) It may be. R in the ester is, for example, a C 1-6 alkyl group such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl or n-butyl, for example, a C 3-8 cycloalkyl group such as cyclopentyl or cyclohexyl, for example, phenyl, α - C 6-12 aryl group such as naphthyl, for example, benzyl, C 7 - 14 aralkyl such as α- naphthyl -C 1-2 alkyl group such as a phenyl -C 1-2 alkyl or α- naphthylmethyl such phenethyl In addition to the groups, pivaloyloxymethyl groups widely used as esters for oral use can be mentioned. The amides, amido, C 1-6 substituted with one or two amide, 1 or 2 with an amide substituted with a C 1-6 alkyl group substituted by a phenyl group of an alkyl group, The amide etc. which contain the nitrogen atom of an amide group and form a 5- to 7-membered ring azacycloalkane are mentioned. When the peptide of the present invention has a carboxyl group or a carboxylate at other than the C-terminus, those in which those groups are amidated or esterified are also included in the peptide of the present invention.
さらに、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドには、Ｎ末端のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチルなどのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチルなどのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているものも含まれる。Furthermore, in the peptide to be an active component of the type III collagen production promoter of the present invention, the amino group at the N-terminus is a protecting group (for example, a C 1-6 acyl such as a formyl group or a C 2-6 alkanoyl group such as acetyl). And the like, and the substituent on the side chain of the amino acid in the molecule is a suitable protecting group (eg, a C 1-6 acyl group such as a formyl group, a C 2-6 alkanoyl group such as acetyl, etc. Also includes those protected by).
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドは塩を形成していてもよく、その塩としては、薬学的に許容される塩が好ましい。薬学的に許容される塩としては、例えば、塩酸、硫酸、燐酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、リンゴ酸、クエン酸、オレイン酸、パルミチン酸などの酸との塩；ナトリウム、カリウム、カルシウムなどのアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属との塩、またはアルミニウムの水酸化物または炭酸塩との塩；トリエチルアミン、ベンジルアミン、ジエタノールアミン、ｔ−ブチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、アルギニンなどとの塩などが挙げられる。 The peptide to be an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention may form a salt, and as the salt, a pharmaceutically acceptable salt is preferable. Examples of pharmaceutically acceptable salts include salts with acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, lactic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, oxalic acid, malic acid, citric acid, oleic acid and palmitic acid; sodium , Salts with alkali metals or alkaline earth metals such as potassium and calcium, or salts with hydroxide or carbonate of aluminum; salts with triethylamine, benzylamine, diethanolamine, t-butylamine, dicyclohexylamine, arginine etc. Can be mentioned.
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドまたはその塩は、公知の一般的なペプチド合成のプロトコールに従って、固相合成法（Ｆｍｏｃ法、Ｂｏｃ法）または液相合成法により製造することができる。また、目的のペプチドをコードするＤＮＡを含有する発現ベクターを導入した形質転換体を用いて製造することができる。また、インビトロ転写・翻訳系を用いる方法により製造することができる。得られたペプチドがＩＩＩ型コラーゲン産生促進作用を有することは、例えば、実施例に示すように、培地にペプチドを添加して線維芽細胞を一定期間培養し、培地中にＩＩＩ型コラーゲンを測定して、ペプチドを添加していない線維芽細胞が産生したＩＩＩ型コラーゲン量と比較することにより確認することができる。 The peptide or a salt thereof, which is an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention, is produced by solid phase synthesis (Fmoc method, Boc method) or liquid phase synthesis according to a known general peptide synthesis protocol. be able to. Moreover, it can manufacture using the transformant which introduce | transduced the expression vector containing the DNA which codes the target peptide. Moreover, it can manufacture by the method of using in vitro transcription and translation system. That the obtained peptide has type III collagen production promoting activity can be determined, for example, by adding the peptide to the medium, culturing fibroblasts for a certain period of time, and measuring type III collagen in the medium, as shown in the examples. This can be confirmed by comparison with the amount of type III collagen produced by fibroblasts to which no peptide has been added.
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、線維芽細胞および角化細胞によるＩＩＩ型コラーゲン産生を促進できるので、皮膚のしわやたるみを予防または改善するための化粧品または医薬部外品として実施することができる。化粧品または医薬部外品として実施する場合、外皮に適用する化粧品または医薬部外品の形態で実施することが好ましい。例えば化粧水、乳液、ジェル、クリーム、美容液、日焼け止め用化粧料、パック、マスク、ハンドクリーム、ボディローション、ボディークリーム、ファンデーション等の形態で実施することができる。 Since the type III collagen production promoter of the present invention can promote type III collagen production by fibroblasts and keratinocytes, it should be practiced as a cosmetic or quasi-drug for preventing or improving skin wrinkles and sags. Can. When it implements as cosmetics or a quasi-drug, it is preferable to implement in the form of the cosmetics or quasi-drug applied to outer skin. For example, the present invention can be carried out in the form of a lotion, milk, gel, cream, cosmetic, sunscreen cosmetic, pack, mask, hand cream, body lotion, body cream, foundation or the like.
本発明の化粧品および医薬部外品は、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤以外に、化粧品または医薬部外品として一般に使用されている成分、例えば、界面活性剤、保湿剤、動植物由来油脂、シリコーン類、高級アルコール、低級アルコール、動植物由来抽出エキス、紫外線吸収剤、消炎剤、金属封鎖剤、ビタミン類、酸化防止剤、増粘剤、防腐剤、殺菌剤、ｐＨ調整剤、着色剤、各種香料などを目的に応じて適宜配合することができる。 The cosmetics and quasi-drugs of the present invention are components generally used as cosmetics or quasi-drugs other than the type III collagen production promoter of the present invention, such as surfactants, moisturizers, animal and vegetable-derived oils and fats, Silicones, higher alcohols, lower alcohols, extracts derived from animals and plants, UV absorbers, anti-inflammatory agents, metal sequestering agents, vitamins, antioxidants, thickeners, preservatives, bactericides, pH adjusters, coloring agents, various types A perfume etc. can be suitably mix | blended according to the objective.
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤は、線維芽細胞および角化細胞によるＩＩＩ型コラーゲン産生を促進できるので、創傷治癒促進用、皮膚萎縮改善用またはＩＩＩ型コラーゲン合成不全改善用の医薬として実施することができる。
創傷とは、外的、内的要因によって生じる物理的な損傷を意味する。具体的には、例えば、切創、裂創、刺創、咬創、擦過傷、銃創、挫傷、熱傷、褥瘡、糖尿病性潰瘍、化学損傷等が挙げられるが、これらに限定されない。創傷治癒とは、損傷した組織または細胞が、再生および／または修復するこという。本発明の医薬を創傷部位に適用することにより、創傷部位においてＩＩＩ型コラーゲン産生が促進され、創傷治癒を促進することができる。
皮膚萎縮とは、真皮厚が薄くなる、単位面積当たりの皮膚質量が低下して皮膚がやせる、皮膚の弾力性が失われる等の症状を意味する。本発明の医薬を皮膚萎縮部位に適用することにより、皮膚萎縮部位においてＩＩＩ型コラーゲン産生が促進され、真皮におけるＩＩＩ型コラーゲンの割合を回復させることにより皮膚萎縮を改善することができる。
ＩＩＩ型コラーゲンの合成不全を原因とする疾患としては、例えばエーラス・ダンロス症候群（Ehlers-Danlos Syndrome）の血管型（ＩＶ型）などが挙げられる。本発明の医薬によりＩＩＩ型コラーゲン産生を促進すれば、ＩＩＩ型コラーゲンの合成不全を原因とする疾患の症状を改善することができる。Since the type III collagen production promoter of the present invention can promote type III collagen production by fibroblasts and keratinocytes, it is carried out as a medicine for promoting wound healing, improving skin atrophy, or improving type III collagen synthesis failure. be able to.
The wound means physical damage caused by external or internal factors. Specifically, examples thereof include, but are not limited to, incisions, tears, stab wounds, bites, abrasions, gunshot wounds, bruises, bruises, bruises, pressure sores, diabetic ulcers, chemical damage and the like. Wound healing refers to the regeneration and / or repair of damaged tissue or cells. By applying the medicament of the present invention to a wound site, type III collagen production can be promoted at the wound site and wound healing can be promoted.
Skin atrophy refers to symptoms such as thinning of the dermis, reduction of the skin mass per unit area to make the skin thin, loss of elasticity of the skin, and the like. By applying the medicament of the present invention to the skin atrophy site, type III collagen production is promoted at the skin atrophy site, and skin atrophy can be improved by recovering the proportion of type III collagen in the dermis.
Examples of diseases caused by defective synthesis of type III collagen include the vascular type (type IV) of Ehlers-Danlos Syndrome. The promotion of type III collagen production by the medicament of the present invention can improve the symptoms of diseases caused by defective synthesis of type III collagen.
本発明の医薬は、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤に、薬学的に許容される担体または添加剤を適宜配合して製剤化することができる。具体的には錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤；注射剤、輸液、坐剤、軟膏、パッチ剤等の非経口剤とすることができる。担体または添加剤の配合割合については、医薬品分野において通常採用されている範囲に基づいて適宜設定すればよい。配合できる担体または添加剤は特に制限されないが、例えば、水、生理食塩水、その他の水性溶媒、水性または油性基剤等の各種担体；賦形剤、結合剤、ｐＨ調整剤、崩壊剤、吸収促進剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、香料等の各種添加剤が挙げられる。 The pharmaceutical agent of the present invention can be formulated by appropriately blending a pharmaceutically acceptable carrier or additive with the type III collagen production promoter of the present invention. Specifically, oral agents such as tablets, coated tablets, pills, powders, granules, capsules, solutions, suspensions, and emulsions; and parenteral agents such as injections, infusions, suppositories, ointments, patches and the like can do. The compounding ratio of the carrier or the additive may be appropriately set based on the range generally employed in the pharmaceutical field. Carriers or additives that can be incorporated are not particularly limited, but, for example, various carriers such as water, saline, other aqueous solvents, aqueous or oily bases, excipients, binders, pH adjusters, disintegrants, absorption Various additives such as accelerators, lubricants, coloring agents, flavoring agents, and perfumes may be mentioned.
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。Examples of additives that can be incorporated into tablets, capsules, etc. include, for example, gelatin, corn starch, tragacanth, binders such as gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid etc. Swelling agents, lubricants such as magnesium stearate, sweeteners such as sucrose, lactose or saccharin, and flavoring agents such as peppermint, akamono oil or cherry, and the like. When the dosage unit form is a capsule, it may further contain a liquid carrier such as fat and oil in the above-mentioned type of material. Sterile compositions for injection can be formulated according to the usual formulation practices such as dissolving or suspending active substance in vehicle such as water for injection, naturally occurring vegetable oil such as sesame oil, coconut oil and the like. As an aqueous solution for injection, for example, physiological saline, isotonic solution containing glucose and other adjuvants (eg, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride etc.) and the like are used, and a suitable solubilizer For example, it may be used in combination with alcohol (eg, ethanol), polyalcohol (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), nonionic surfactant (eg, Polysorbate 80TM , HCO-50) and the like. As an oily liquid, for example, sesame oil, soybean oil and the like are used, and may be used in combination with a solubilizer such as benzyl benzoate and benzyl alcohol. Also, buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer), soothing agents (eg, benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.), stabilizers (eg, human serum albumin, polyethylene glycol, etc.), preservation It may be blended with an agent (eg, benzyl alcohol, phenol etc.), an antioxidant and the like.
また、本発明は、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分であるペプチドをキャリアに結合した形態としてもよい。キャリアとしては、特に限定されるものではなく、人工臓器等に用いられる樹脂、タンパク質等の生体高分子などが挙げられる。なかでも、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分であるペプチドを含有する生体吸収性ゲルの形態で実施することが好ましい。 Furthermore, in the present invention, a peptide, which is an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention, may be bound to a carrier. The carrier is not particularly limited, and examples thereof include resins used for artificial organs and the like, biopolymers such as proteins, and the like. Among them, it is preferable to carry out in the form of a bioabsorbable gel containing a peptide which is an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention.
生体吸収性ゲルとしては、例えば公知の生体吸収性ハイドロゲルを好適に用いることができる。具体的には、例えば株式会社メドジェル製の徐放用ハイドロゲル「メドジェル（商品名）」などが挙げられる。この製品は、ゼラチンを架橋して水不溶化させたもので、ゼラチンとの静電的相互作用力などを中心とする分子間相互作用によりペプチドを保持することができる。このようなゼラチンハイドロゲルに、本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分であるペプチドを保持させて生体に適用すると、細胞から分泌されるコラゲナーゼなどの分解酵素によってゼラチンハイドロゲルが分解される。分解とともにペプチドが徐放され、分解物は生体に吸収される。生体吸収性ゲルの形状は特に限定されず、例えば、シート状、ディスク状、チューブ状、粒子状等の種々の形状で実施することができる。 As a bioabsorbable gel, a well-known bioabsorbable hydrogel can be used suitably, for example. Specifically, for example, a sustained-release hydrogel "Medgel (trade name)" manufactured by Medgel Co., Ltd., and the like can be mentioned. This product is obtained by crosslinking gelatin into water-insolubilization, and can hold the peptide by intermolecular interaction centering on electrostatic interaction with gelatin. When a peptide, which is an active ingredient of the type III collagen production promoter of the present invention, is held in such a gelatin hydrogel and applied to a living body, the gelatin hydrogel is degraded by degradation enzymes such as collagenase secreted from cells . Along with the degradation, the peptide is released slowly and the degradation product is absorbed into the living body. The shape of the bioabsorbable gel is not particularly limited. For example, the shape can be implemented in various shapes such as sheet, disc, tube, and particles.
本発明の生体吸収性ゲルは、化粧品、医薬部外品および医薬品のいずれの形態でも実施することができる。例えば、化粧品または医薬部外品として、しわやたるみを予防または改善しようとする皮膚に塗布または貼付して使用することができる。創傷治癒促進用の医薬として実施する場合は、生体表面または生体内部の創傷部位に塗布または貼付して使用することができる。皮膚萎縮改善用の医薬として実施する場合は、皮膚萎縮部位に塗布または貼付して使用することができる。ＩＩＩ型コラーゲン合成不全改善用の医薬として実施する場合は、ＩＩＩ型コラーゲン合成を促進したい臓器や組織に塗布または貼付して使用することができる。 The bioabsorbable gel of the present invention can be implemented in any form of cosmetics, quasi-drugs and medicines. For example, they can be used as cosmetics or quasi-drugs by applying or sticking on the skin where wrinkles and sags are to be prevented or improved. When implemented as a medicine for promoting wound healing, it can be used by applying or sticking to a wound surface on or in the living body. When it implements as a medicine for skin atrophy improvement, it can be used by applying or sticking on the skin atrophy site. When implemented as a medicine for improving type III collagen synthesis failure, it can be used by applying or sticking to an organ or tissue in which type III collagen synthesis is to be promoted.
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや他の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
本発明のＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を外皮に適用する化粧品、医薬部外品、医薬品として人に適用する場合、その使用方法は使用対象の皮膚の状態、年齢、性別などによって異なるが、例えば、１日数回（例えば１〜５回、好ましくは１〜３回）、１回当たり適量（例えば、約０．０５〜５ｇ）を皮膚に適用（塗布、噴霧、貼付など）すればよい。また、ＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤の有効成分となるペプチドまたはその塩の１日使用量が、例えば、約０．０００５〜０．０５ｇ、好ましくは０．００１〜０．０２ｇ、より好ましくは約０．００２〜０．０１ｇとなるように適用すればよい。また、塗布期間は、例えば、約２週間〜６ヶ月、好ましくは約１〜６ヶ月間とすればよい。Since the preparation thus obtained is safe and low in toxicity, it is administered, for example, to humans and other mammals (eg, rats, mice, rabbits, sheep, pigs, cattle, cats, dogs, monkeys, etc.) can do.
When applying the type III collagen production promoting agent of the present invention to a coat as cosmetics, quasi-drugs, or medicine as a person, the method of use varies depending on the condition, age, sex, etc. of skin to be used. The appropriate amount (for example, about 0.05 to 5 g) may be applied (applied, sprayed, attached, etc.) to the skin several times a day (for example, 1 to 5 times, preferably 1 to 3 times). In addition, the amount of the peptide or its salt used as an active ingredient of the type III collagen production promoter may be, for example, about 0.0005 to 0.05 g, preferably 0.001 to 0.02 g, more preferably about 0. It may be applied so as to be .002 to 0.01 g. The application period may be, for example, about 2 weeks to 6 months, preferably about 1 to 6 months.
本発明は、さらに以下の発明を包含する。
（ａ１）哺乳動物に対して、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩を投与することを特徴とするＩＩＩ型コラーゲンの産生促進方法。
（ａ２）哺乳動物に対して、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩を投与することを特徴とする皮膚のしわまたはたるみの予防または改善方法。
（ａ３）哺乳動物に対して、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩を投与することを特徴とする創傷治癒促進方法。
（ａ４）哺乳動物に対して、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩を投与することを特徴とする皮膚萎縮改善方法。
（ａ５）哺乳動物に対して、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩を投与することを特徴とするＩＩＩ型コラーゲン合成不全改善方法。
（ｂ１）ＩＩＩ型コラーゲン産生促進剤を製造するための、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩の使用。
（ｂ２）皮膚のしわまたはたるみの予防または改善用化粧品または医薬部外品を製造するための、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩の使用。
（ｂ３）創傷治癒促進用、皮膚萎縮改善用またはＩＩＩ型コラーゲン合成不全改善用医薬を製造するための、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩の使用。
（ｃ１）ＩＩＩ型コラーゲンの産生促進に使用するための、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩。
（ｃ２）皮膚のしわまたはたるみの予防または改善に使用するための、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩。
（ｃ３）創傷治癒促進、皮膚萎縮改善またはＩＩＩ型コラーゲン合成不全改善に使用するための、上記式（１）、（２）、（３）または（４）で示されるアミノ酸配列を含み、総アミノ酸残基数が２００以下のペプチドまたはその塩。The present invention further includes the following inventions.
(A1) A peptide or a salt thereof containing the amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) and having 200 or less total amino acid residues is administered to a mammal A method for promoting the production of type III collagen characterized by
(A2) A peptide comprising an amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) and having a total amino acid residue number of 200 or less or a salt thereof is administered to a mammal A method for preventing or ameliorating skin wrinkles or sag characterized by
(A3) A peptide or a salt thereof containing the amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) and having 200 or less total amino acid residues is administered to a mammal A method for promoting wound healing characterized by
(A4) A peptide comprising an amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) and having a total amino acid residue number of 200 or less or a salt thereof is administered to a mammal A method for improving skin atrophy characterized by
(A5) A peptide comprising an amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) and having a total amino acid residue number of 200 or less or a salt thereof is administered to a mammal A method for improving the deficiency in type III collagen synthesis, characterized in that
(B1) A peptide containing the amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) and having a total amino acid residue number of 200 or less for producing a type III collagen production promoter Or the use of its salt.
(B2) an amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) for producing a cosmetic or quasi-drug for preventing or improving skin wrinkles or sagging, Use of a peptide having a total amino acid residue number of 200 or less or a salt thereof.
(B3) The amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) for the purpose of promoting wound healing, for improving skin atrophy, or for producing a medicine for improving type III collagen synthesis failure Use of a peptide containing 200 or less total amino acid residues or a salt thereof.
(C1) a peptide containing the amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) and having a total amino acid residue number of 200 or less, for use in promoting the production of type III collagen Or its salt.
(C2) The amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4) for use in the prevention or improvement of skin wrinkles or sagging, wherein the total number of amino acid residues is 200 The following peptides or salts thereof:
(C3) A total amino acid comprising the amino acid sequence represented by the above formula (1), (2), (3) or (4), for use in promoting wound healing, improving skin atrophy or improving type III collagen synthesis failure A peptide having 200 or less residues, or a salt thereof.
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples, but the present invention is not limited thereto.
〔実施例１：ヒト心臓線維芽細胞におけるコラーゲン産生量の検討〕
（１）使用ペプチド
被験ペプチドとして、配列番号７で示されるアミノ酸配列からなるペプチド（以下「ＳＶ」）、全長オステオポンチン（配列番号１０、Accession: BAH58215、以下「ＯＰＮ」）、トロンビンで切断されたオステオポンチンのＮ末端側フラグメント（配列番号１１、以下「Ｎ−ＯＰＮ」）、トロンビンで切断されたオステオポンチンのＣ末端側フラグメント（配列番号１２、以下「Ｃ−ＯＰＮ」）、Ｎ−ＯＰＮからＳＶを欠失させたフラグメント（配列番号１３、以下「ΔＳＶ−ＯＰＮ」）、コントロールペプチド（配列番号１４、ＳＶペプチドと同一アミノ酸構成で配列が異なるペプチド、以下「ＣＯＮＴ」）を用いた。[Example 1: Examination of the amount of collagen production in human cardiac fibroblasts]
(1) Peptide used As a test peptide, a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 7 (hereinafter “SV”), full-length osteopontin (SEQ ID NO: 10, Accession: BAH58215, hereinafter “OPN”), osteopontin cleaved with thrombin N-terminal fragment of SEQ ID NO: 11 (hereinafter "N-OPN"), C-terminal fragment of thrombin-cleaved osteopontin (SEQ ID NO: 12 below "C-OPN"), deletion of SV from N-OPN A fragment (SEQ ID NO: 13 below, “ΔSV-OPN”) and a control peptide (SEQ ID NO: 14; a peptide having the same amino acid constitution as the SV peptide but different in sequence, hereinafter “CONT”) were used.
ＳＶおよびＣＯＮＴは、多種品目固相法自動ペプチド合成装置（PSSM-8; 島津製作所）を用いてＦｍｏｃ法により合成した。全長オステオポンチンには、市販のリコンビナントヒトオステオポンチン（ａｂｃａｍ）を使用した。
Ｎ−ＯＰＮ、Ｃ−ＯＰＮおよびΔＳＶ−ＯＰＮは、リコンビナントペプチドを作製して使用した。具体的には、ＯＰＮをコードするｃＤＮＡの塩基配列（配列番号１５、Accession: AB469789）に基づいて、Ｎ−ＯＰＮ、Ｃ−ＯＰＮおよびΔＳＶ−ＯＰＮをそれぞれコードするｃＤＮＡを取得し、ＧＳＴ融合タンパク質発現用ベクターｐＧＥＸ４Ｔ−２（ＧＥヘルスケア）に組み込んだ。得られた発現用ベクターをＢＬ２１大腸菌にトランスフォームし、ＬＢ培地を用いてＯＤ値が０．６−０．７になるまで大腸菌を培養し、ＩＰＴＧを０．５ｍＭになるように添加し、３７℃で３時間発現誘導を行った。培養液の１０分の１量のｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（50 mM Tris pH 8.0, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P-40）を加え、氷上で超音波破砕した。破砕液を遠心分離して上清を回収した。上清にグルタチオンセファロースビーズを加え、４℃で４時間ローテートを行い反応させた。グルタチオンセファロースビーズに結合したリコンビナントペプチドをｅｌｕｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ （1.2mM NaCl with Tris-HCL pH8.0）で溶出することにより精製した。精製した各リコンビナントペプチドについて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度および濃度を確認した。SV and CONT were synthesized by the Fmoc method using a multi-item solid phase method automatic peptide synthesizer (PSSM-8; Shimadzu Corporation). A commercially available recombinant human osteopontin (abcam) was used for full-length osteopontin.
N-OPN, C-OPN and ΔSV-OPN were used to make recombinant peptides. Specifically, based on the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 15, Accession: AB469789) of cDNA encoding OPN, cDNA encoding each of N-OPN, C-OPN and ΔSV-OPN is obtained to express GST fusion protein Was incorporated into the vector pGEX4T-2 (GE Healthcare). Transform the obtained expression vector into BL21 E. coli, cultivate E. coli using LB medium until the OD value becomes 0.6-0.7, add IPTG to 0.5 mM, Expression induction was performed for 3 hours at ° C. One tenth volume of the culture solution was added with lysis buffer (50 mM Tris pH 8.0, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P-40) and sonicated on ice. The disrupted solution was centrifuged to recover the supernatant. To the supernatant, glutathione sepharose beads were added, and rotation was performed at 4 ° C. for 4 hours for reaction. The recombinant peptide bound to glutathione sepharose beads was purified by elution with elution buffer (1.2 mM NaCl with Tris-HCL pH 8.0). The purity and concentration of each purified recombinant peptide were confirmed by SDS-PAGE.
（２）実験方法
線維芽細胞は、ヒト心臓線維芽細胞（Human normal cardiac fibroblasts: NHCF-V）をＬＯＮＺＡ社から購入して使用した。培地には、ＬＯＮＺＡが推奨するＦＧＭ−３ ＢｕｌｌｅｔＫｉｔを用いた。
無処理群、ＯＰＮ群、ＯＰＮ＋トロンビン群、Ｎ−ＯＰＮ群、ΔＳＶ−ＯＰＮ群、Ｃ−ＯＰＮ群、ＳＶ群およびＣＯＮＴ群の８群を設けた（各群ｎ＝４）。ＯＰＮ群、Ｎ−ＯＰＮ群、ΔＳＶ−ＯＰＮ群およびＣ−ＯＰＮ群には、ＯＰＮ、Ｎ−ＯＰＮ、ΔＳＶ−ＯＰＮおよびＣ−ＯＰＮをそれぞれ１μｇ／ｍＬになるように培地に添加した。ＳＶ群およびＣＯＮＴ群には、ＳＶおよびＣＯＮＴをそれぞれ１０ｎｇ／ｍＬになるように培地に添加した。ＯＰＮ＋トロンビン群には、１μｇ／ｍＬのＯＰＮと０．１２ユニットのトロンビン（BPS Bioscience）を添加した。１２０時間培養を続け、培養上清を回収した。Ｉ型コラーゲンまたはＩＩＩ型コラーゲンの産生量をＥＬＡＩＳＡにより測定した。Ｉ型コラーゲンの測定には、ELISA Kit for Collagen Type I (COL1) Homo sapiens (Human)（Uscn Life Science Inc.、製品コード：SEA571Hu）を使用し、ＩＩＩ型コラーゲンの測定には、ELISA Kit for Collagen Type III (COL3) Homo sapiens (Human)（Uscn Life Science Inc.、製品コード：SEA176Hu）を使用した。(2) Experimental method As fibroblasts, human cardiac fibroblasts (Human normal cardiac fibroblasts: NHCF-V) were purchased from LONZA and used. As the culture medium, FGM-3 Bullet Kit recommended by LONZA was used.
Eight groups of an untreated group, an OPN group, an OPN + thrombin group, an N-OPN group, a ΔSV-OPN group, a C-OPN group, an SV group and a CONT group were provided (each group n = 4). In the OPN group, the N-OPN group, the ΔSV-OPN group and the C-OPN group, OPN, N-OPN, ΔSV-OPN and C-OPN were respectively added to the medium to 1 μg / mL. In the SV group and the CONT group, SV and CONT were added to the medium to 10 ng / mL, respectively. To the OPN + thrombin group, 1 μg / mL OPN and 0.12 unit thrombin (BPS Bioscience) were added. The culture was continued for 120 hours, and the culture supernatant was collected. The amount of type I collagen or type III collagen produced was measured by ELAISA. For measurement of type I collagen, ELISA Kit for Collagen Type I (COL1) Homo sapiens (Human) (Uscn Life Science Inc., product code: SEA571Hu) is used, and for measurement of type III collagen, ELISA Kit for Collagen Type III (COL3) Homo sapiens (Human) (Uscn Life Science Inc., product code: SEA176Hu) was used.
ＩＩＩ型コラーゲンの結果を図１に、Ｉ型コラーゲンの結果を図２にそれぞれ示した。図１および図２において（−）は無処理群を示す（図４〜６も同じ）。産生量は平均値±ＳＤで示した。図１から明らかなように、Ｎ−ＯＰＮ群およびＳＶ群のＩＩＩ型コラーゲンの産生量は、無処理群と比較して有意に増加した（*: p<0.05、**: p<0.01）。一方、図２から明らかなように、いずれのペプチドを培地に添加しても、Ｉ型コラーゲン産生量は無処理群と同程度であった。 The results of type III collagen are shown in FIG. 1, and the results of type I collagen are shown in FIG. In FIG. 1 and FIG. 2, (-) shows an untreated group (the same applies to FIGS. 4 to 6). The amount of production is shown by mean value ± SD. As is clear from FIG. 1, the production amount of type III collagen in the N-OPN group and the SV group was significantly increased as compared with the non-treatment group (*: p <0.05, **: p <0.01). On the other hand, as apparent from FIG. 2, even when any peptide was added to the medium, the amount of type I collagen production was similar to that of the non-treatment group.
〔実施例２：ラット皮膚線維芽細胞におけるコラーゲン産生量の検討〕
実施例１のヒト心臓線維芽細胞に代えてラット皮膚線維芽細胞（Rat dermal fibroblasts: RDF）をＣｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ社から購入して使用した。培地には、Ｃｅｌｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓが推奨するＲａｔ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍを用いた。ペプチドには、実施例１で用いたＳＶおよびＮ−ＯＰＮを用いた。無処理群、ＳＶ群およびＮ−ＯＰＮ群の３群を設け（各群ｎ＝３）、実施例１と同じ方法でＩＩＩ型コラーゲンの産生量を測定した。[Example 2: Examination of the amount of collagen production in rat skin fibroblasts]
Rat dermal fibroblasts (RDF) were purchased from Cell Applications and used instead of human cardiac fibroblasts of Example 1. As culture medium, Rat Fibroblast Growth Medium recommended by Cell Applications was used. As the peptide, SV and N-OPN used in Example 1 were used. Three groups of an untreated group, an SV group and an N-OPN group were provided (each group n = 3), and the amount of type III collagen produced was measured in the same manner as in Example 1.
結果を図３に示した。産生量は平均値±ＳＤで示した。図３から明らかなように、Ｎ−ＯＰＮ群およびＳＶ群のＩＩＩ型コラーゲンの産生量は、無処理群と比較して有意に増加した（*: p<0.05）。 The results are shown in FIG. The amount of production is shown by mean value ± SD. As is clear from FIG. 3, the production amount of type III collagen in the N-OPN group and the SV group was significantly increased as compared with the non-treatment group (*: p <0.05).
〔実施例３：ヒト皮膚線維芽細胞における傷付け修復実験〕
実施例２と同じラット皮膚線維芽細胞を使用し、ペプチドには実施例１で用いたＳＶおよびＣＯＮＴを用いた。
無処理群、ＣＯＮＴ群、ＳＶ１０群およびＳＶ１００群の４群を設けた（各群ｎ＝４）。皮膚線維芽細胞を３５ｍｍ培養ディッシュに播種し、コンフルエントになるまで培養した。２００μｌ用ピペットチップを用いて、約２ｍｍ幅に細胞を剥離し、その後培地にペプチドを添加した。ＣＯＮＴ群およびＳＶ１０群は終濃度が１０ｎｇ／ｍＬになるように、ＳＶ１００群は終濃度が１００ｎｇ／ｍＬになるように、ペプチドを添加した。倒立型光学顕微鏡を用いて、細胞運動能によって修復される様子を経時的に観察し、細胞運動による溝の修復率を比較した。修復率（％）は以下の式で計算した。
修復率（％）＝（観察時の剥離部分の面積／０時間の剥離部分の面積）×１００[Example 3: Wound repair experiment in human skin fibroblasts]
The same rat dermal fibroblasts as in Example 2 were used, and SV and CONT used in Example 1 were used as peptides.
Four groups of untreated group, CONT group, SV10 group and SV100 group were provided (each group n = 4). Skin fibroblasts were seeded in 35 mm culture dishes and cultured until confluence. The cells were detached to a width of about 2 mm using a 200 μl pipette tip, and then the peptide was added to the culture medium. The peptides were added such that the final concentration of the CONT group and the SV10 group was 10 ng / mL, and the final concentration of the SV100 group was 100 ng / mL. Using an inverted light microscope, the state of repair by cell motility was observed over time, and the groove repair rate by cell motility was compared. The repair rate (%) was calculated by the following equation.
Repair rate (%) = (area of peeled part at observation / area of peeled part at 0 hour) x 100
結果を図４に示した。（Ａ）は各群の倒立型光学顕微鏡による観察結果であり、（Ｂ）は各群の経時的な修復率の結果である。修復率は平均値±ＳＤで示した。図４（Ａ）および（Ｂ）から明らかなように、ＳＶ１０群は、無処理群およびＣＯＮＴ群と比較して、細胞剥離２４、４８時間後において細胞運動による溝の修復率が高い傾向が認められ、４８時間後ではＣＯＮＴ群に対して有意差が認められた（vs CONT *: P<0.01）。ＳＶ１００群においては無処理群およびＣＯＮＴ群と比較して細胞剥離２４、４８、７２時間後に有意に高い修復率を示した（vs 無処理 ※: P<0.05、vs CONT *: P<0.05）。無処理群とＣＯＮＴ群間には有意差は認められなかった。 The results are shown in FIG. (A) is the observation result by the inverted light microscope of each group, (B) is a result of the repair rate over time of each group. The recovery rate is shown as mean ± SD. As apparent from FIGS. 4 (A) and 4 (B), the SV10 group tends to have a higher rate of cell repair due to cell movement at 24 and 48 hours after cell detachment compared with the untreated group and the CONT group. After 48 hours, a significant difference was observed with respect to the CONT group (vs CONT *: P <0.01). The SV100 group showed a significantly higher repair rate after 24 hours, 48 and 72 hours of cell detachment compared with the untreated and CONT groups (vs untreated *: P <0.05, vs CONT *: P <0.05). There was no significant difference between the untreated group and the CONT group.
〔実施例４：ヒト表皮角化細胞におけるコラーゲン産生量の検討〕
実施例１のヒト心室性心臓線維芽細胞に代えてヒト表皮角化細胞（Human Epidermal Keratinocytes、以下「ＨＥＫ」と略記する。）をＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から購入して使用した。培地には、Ｇｉｂｃｏ社の推奨するＭｅｄｉｕｍ１５４ ｆｏｒ Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ培地を用いた。ペプチドには、実施例１で用いたＳＶおよびＣＯＮＴを用いた。また、陽性対照として市販のＴＧＦβを用いた。無処理群、ＳＶ群、ＣＯＮＴ群およびＴＧＦβ群の４群を設け（各群ｎ＝６）、実施例１と同じ方法でＩＩＩ型コラーゲンの産生量を測定した。ＴＧＦβの添加量は、他のペプチドと同じ１０ｎｇ／ｍＬとした。[Example 4: Examination of the amount of collagen production in human epidermal keratinocytes]
Human epidermal keratinocytes (Human Epidermal Keratinocytes, hereinafter abbreviated as "HEK") were purchased from Thermo Fisher Scientific and used instead of human ventricular cardiac fibroblasts of Example 1. As medium, Medium 154 for Keratinocytes medium recommended by Gibco was used. As the peptide, SV and CONT used in Example 1 were used. In addition, commercially available TGFβ was used as a positive control. Four groups of untreated group, SV group, CONT group and TGFβ group were provided (each group n = 6), and the production amount of type III collagen was measured in the same manner as in Example 1. The amount of TGFβ added was 10 ng / mL, which is the same as other peptides.
結果を図５に示した。産生量は平均値±ＳＤで示した。図５から明らかなように、ＳＶ群のＩＩＩ型コラーゲンの産生量は、陽性対照のＴＧＦβ群と同様に、無処理群およびＣＯＮＴ群と比較して有意に増加した（vs 無処理 ※: P<0.05、vs CONT *: P<0.05）。 The results are shown in FIG. The amount of production is shown by mean value ± SD. As apparent from FIG. 5, the production amount of type III collagen in the SV group was significantly increased as compared with the non-treatment group and the CONT group, as in the positive control TGFβ group (vs no treatment *: P < 0.05, vs CONT *: P <0.05).
〔実施例５：ヒト表皮角化細胞における傷付け修復実験〕
実施例４と同じヒト表皮角化細胞を使用し、ペプチドには実施例１で用いたＳＶおよびＣＯＮＴを用いた。また、陽性対照として、実施例４と同じＴＧＦβを用いた。
無処理群、ＣＯＮＴ群、ＳＶ群およびＴＧＦβ群の４群を設けた（各群ｎ＝６）。ヒト表皮角化細胞を３５ｍｍ培養ディッシュに播種し、コンフルエントになるまで培養した。２００μｌ用ピペットチップを用いて、約２ｍｍ幅に細胞を剥離し、その後培地にペプチドまたはＴＧＦβを終濃度が１０ｎｇ／ｍＬになるように添加した。倒立型光学顕微鏡を用いて、細胞運動能によって修復される様子を経時的に観察し、細胞運動による溝の修復率を比較した（実施例３参照）。[Example 5: Wound repair experiment in human epidermal keratinocytes]
The same human epidermal keratinocytes as in Example 4 were used, and SV and CONT used in Example 1 were used as peptides. The same TGFβ as in Example 4 was used as a positive control.
Four groups were provided: untreated group, CONT group, SV group and TGFβ group (each group n = 6). Human epidermal keratinocytes were seeded in 35 mm culture dishes and cultured until confluence. The cells were detached to a width of about 2 mm using a pipette tip for 200 μl, and then peptide or TGFβ was added to the medium to a final concentration of 10 ng / mL. Using an inverted light microscope, the state of repair by cell motility was observed over time, and the groove repair rate by cell motility was compared (see Example 3).
結果を図６に示した。（Ａ）は各群の倒立型光学顕微鏡による観察結果であり、（Ｂ）は各群の経時的な修復率の結果である。修復率は平均値±ＳＤで示した。図６（Ａ）および（Ｂ）から明らかなように、ＳＶ群は１０時間目において陽性対照のＴＧＦβ群より修復率が高くなり、無処理群およびＣＯＮＴ群より有意に高い修復率を示した（vs 無処理 ※: P<0.05、vs CONT *: P<0.05）。ＳＶ群とＴＧＦβ群間、および無処理群とＣＯＮＴ群間には有意差は認められなかった。 The results are shown in FIG. (A) is the observation result by the inverted light microscope of each group, (B) is a result of the repair rate over time of each group. The recovery rate is shown as mean ± SD. As apparent from FIGS. 6 (A) and 6 (B), the SV group had a higher repair rate at 10 hours than the positive control TGFβ group, and showed a significantly higher repair rate than the untreated group and the CONT group (FIG. vs no treatment *: P <0.05, vs CONT *: P <0.05). There were no significant differences between the SV group and the TGFβ group, and between the untreated group and the CONT group.
なお本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。 The present invention is not limited to the above-described embodiments and examples, but various modifications are possible within the scope of the claims, and the technical means disclosed in each of the different embodiments may be combined as appropriate. The resulting embodiments are also included in the technical scope of the present invention. Also, all of the academic literature and patent literature described in the present specification are incorporated herein by reference.
Claims (5)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014240447 | 2014-11-27 | ||
| JP2014240447 | 2014-11-27 | ||
| PCT/JP2015/083380 WO2016084935A1 (en) | 2014-11-27 | 2015-11-27 | Collagen type iii production promoter |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2016084935A1 JPWO2016084935A1 (en) | 2017-10-19 |
| JP6548126B2 true JP6548126B2 (en) | 2019-07-24 |
Family
ID=56074481
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016561957A Active JP6548126B2 (en) | 2014-11-27 | 2015-11-27 | Type III collagen production promoter |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6548126B2 (en) |
| WO (1) | WO2016084935A1 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6912117B2 (en) | 2017-06-15 | 2021-07-28 | 国立大学法人大阪大学 | Skeletal muscle damage repair accelerator |
| CN111856026A (en) * | 2020-02-28 | 2020-10-30 | 安徽大千生物工程有限公司 | Kit for determining III C based on latex enhanced immunoturbidimetry and preparation and use methods thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2012172887A1 (en) * | 2011-06-13 | 2015-02-23 | 国立大学法人大阪大学 | Heart disease therapeutic agent and heart disease cell sheet |
| GB2493540A (en) * | 2011-08-10 | 2013-02-13 | Follicum Ab | Agents for stimulating hair growth in mammals |
-
2015
- 2015-11-27 JP JP2016561957A patent/JP6548126B2/en active Active
- 2015-11-27 WO PCT/JP2015/083380 patent/WO2016084935A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPWO2016084935A1 (en) | 2017-10-19 |
| WO2016084935A1 (en) | 2016-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2655116C (en) | Peptide fragments for inducing synthesis of extracellular matrix proteins | |
| CA2801010C (en) | Peptide and use thereof for treatment of cartilage damage and arthritis | |
| EP2938626A1 (en) | Self-assembled ultrashort peptides hydrogels for wound healing, skin care and cosmetics applications | |
| JP2008163044A (en) | New peptide and its medicinal use | |
| WO2023015533A1 (en) | Synthetic peptide, and cosmetic composition or pharmaceutical composition and application thereof | |
| US9115180B2 (en) | Use of peptides for promoting wound healing | |
| EP2913061B1 (en) | Use of peptides for promoting wound healing | |
| JP6548126B2 (en) | Type III collagen production promoter | |
| RU2458069C2 (en) | Recovered peptide for enhancing wound healing activity of keratinocytes, composition for wound healing in mammal and drug applied in wound healing in mammal | |
| KR20210018450A (en) | Composition for inhibiting the formation of thickening scars | |
| JP2003231695A (en) | New peptide and its medicinal use | |
| MXPA04007170A (en) | Synthetic peptides and uses thereof for the prevention and therapy of cancer invasion and metastasis. | |
| Choudhary et al. | Marine Collagen for Delivery of Therapeutics | |
| KR20170050633A (en) | Tripeptide with activities of growth and activation of skin keratinocyte stem cell and use thereof | |
| US20190099466A1 (en) | Peptide for promoting wound healing, its composition and method of using the same | |
| JP5940542B2 (en) | Skin introduction system and whitening agent combining cell introduction peptide and skin introduction accelerator | |
| KR20190056106A (en) | Use of a peptide as a therapeutic agent for wound healing | |
| KR20190056110A (en) | Use of a peptide as a therapeutic agent for wound healing | |
| KR20190085413A (en) | Use of a SIS-1 peptide as a therapeutic agent for wound healing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170605 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171128 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171128 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180814 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181012 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181019 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190326 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190521 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190604 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190614 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6548126 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |