JP6533037B2 - Flowering control method of citrus - Google Patents
Flowering control method of citrus Download PDFInfo
- Publication number
- JP6533037B2 JP6533037B2 JP2014117322A JP2014117322A JP6533037B2 JP 6533037 B2 JP6533037 B2 JP 6533037B2 JP 2014117322 A JP2014117322 A JP 2014117322A JP 2014117322 A JP2014117322 A JP 2014117322A JP 6533037 B2 JP6533037 B2 JP 6533037B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- flowering
- citrus
- abscisic acid
- branch
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 title claims description 139
- 241000207199 Citrus Species 0.000 title claims description 110
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 title claims description 92
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 38
- JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N (+)-Abscisic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\[C@@]1(O)C(C)=CC(=O)CC1(C)C JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N 0.000 claims description 344
- FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N desoxyabscisic acid Natural products OC(=O)C=C(C)C=CC1C(C)=CC(=O)CC1(C)C FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 176
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 77
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 62
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 44
- 101150054603 ft gene Proteins 0.000 claims description 32
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 26
- 108091005721 ABA receptors Proteins 0.000 claims description 23
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 15
- 230000035784 germination Effects 0.000 claims description 13
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 10
- 241001672694 Citrus reticulata Species 0.000 claims description 9
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 claims description 8
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 claims description 8
- 230000005094 fruit set Effects 0.000 claims description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 7
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 claims description 7
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 claims description 7
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 102000016680 Dioxygenases Human genes 0.000 claims 1
- 108010028143 Dioxygenases Proteins 0.000 claims 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 46
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 43
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 39
- 102100020720 Calcium channel flower homolog Human genes 0.000 description 30
- 101000932468 Homo sapiens Calcium channel flower homolog Proteins 0.000 description 30
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 28
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 27
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 25
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 24
- 241000555678 Citrus unshiu Species 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 14
- 230000008859 change Effects 0.000 description 13
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 13
- 101150043797 NCED3 gene Proteins 0.000 description 12
- 150000003529 abscisic acid derivatives Chemical class 0.000 description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 12
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 12
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 12
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 11
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 11
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 11
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 11
- 241000894007 species Species 0.000 description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 9
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 8
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 8
- 108010069442 abscisic acid 8'-hydroxylase Proteins 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 7
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 6
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 6
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 6
- 238000011419 induction treatment Methods 0.000 description 6
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 108010080953 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase Proteins 0.000 description 5
- 240000002319 Citrus sinensis Species 0.000 description 5
- 235000005976 Citrus sinensis Nutrition 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 4
- GJSDYQXOSHKOGX-UHFFFAOYSA-N pyrabactin Chemical compound C12=CC=CC=C2C(Br)=CC=C1S(=O)(=O)NCC1=CC=CC=N1 GJSDYQXOSHKOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IVHKSUMLZQXFPR-UHFFFAOYSA-N 1-(4-methylphenyl)-n-(2-oxo-1-propyl-3,4-dihydroquinolin-6-yl)methanesulfonamide Chemical compound C=1C=C2N(CCC)C(=O)CCC2=CC=1NS(=O)(=O)CC1=CC=C(C)C=C1 IVHKSUMLZQXFPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 ASn compound Chemical class 0.000 description 3
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100079509 Oncidium hybrid cultivar NCED gene Proteins 0.000 description 3
- 235000000404 Poncirus trifoliata Nutrition 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 3
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 3
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YNWVFADWVLCOPU-MDWZMJQESA-N (1E)-1-(4-chlorophenyl)-4,4-dimethyl-2-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)pent-1-en-3-ol Chemical compound C1=NC=NN1/C(C(O)C(C)(C)C)=C/C1=CC=C(Cl)C=C1 YNWVFADWVLCOPU-MDWZMJQESA-N 0.000 description 2
- XHLHPRDBBAGVEG-UHFFFAOYSA-N 1-tetralone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)CCCC2=C1 XHLHPRDBBAGVEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 2
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 2
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 2
- 244000183685 Citrus aurantium Species 0.000 description 2
- 235000007716 Citrus aurantium Nutrition 0.000 description 2
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 2
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 2
- 241001522083 Citrus trifoliata Species 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 235000017317 Fortunella Nutrition 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940122439 Hydroxylase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- QXKHYNVANLEOEG-UHFFFAOYSA-N Methoxsalen Chemical compound C1=CC(=O)OC2=C1C=C1C=COC1=C2OC QXKHYNVANLEOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 2
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101710173432 Phytoene synthase Proteins 0.000 description 2
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 2
- 239000004213 Violaxanthin Substances 0.000 description 2
- SZCBXWMUOPQSOX-LOFNIBRQSA-N Violaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C12OC1(C)CC(O)CC2(C)C)C=CC=C(/C)C=CC34OC3(C)CC(O)CC4(C)C SZCBXWMUOPQSOX-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 2
- PCWZKQSKUXXDDJ-UHFFFAOYSA-N Xanthotoxin Natural products COCc1c2OC(=O)C=Cc2cc3ccoc13 PCWZKQSKUXXDDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- FBOUIAKEJMZPQG-BLXFFLACSA-N diniconazole-M Chemical compound C1=NC=NN1/C([C@H](O)C(C)(C)C)=C/C1=CC=C(Cl)C=C1Cl FBOUIAKEJMZPQG-BLXFFLACSA-N 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 230000006203 ethylation Effects 0.000 description 2
- 238000006200 ethylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 2
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229960004469 methoxsalen Drugs 0.000 description 2
- SQBBOVROCFXYBN-UHFFFAOYSA-N methoxypsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C(OC)=CC2=CC2=C1OC=C2 SQBBOVROCFXYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 108010001545 phytoene dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 2
- 235000021018 plums Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 235000019245 violaxanthin Nutrition 0.000 description 2
- SZCBXWMUOPQSOX-PSXNNQPNSA-N violaxanthin Chemical compound C(\[C@@]12[C@](O1)(C)C[C@H](O)CC2(C)C)=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(\C)/C=C/C=C(\C)/C=C/[C@]1(C(C[C@@H](O)C2)(C)C)[C@]2(C)O1 SZCBXWMUOPQSOX-PSXNNQPNSA-N 0.000 description 2
- 108010031403 zeaxanthin epoxidase Proteins 0.000 description 2
- BIWLELKAFXRPDE-UHFFFAOYSA-N zeta-Carotene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C BIWLELKAFXRPDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLIDBLDQVAYHNE-LXGGSRJLSA-N 2-cis-abscisic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\C1(O)C(C)=CC(=O)CC1(C)C JLIDBLDQVAYHNE-LXGGSRJLSA-N 0.000 description 1
- SNMLHWKCAMEYHB-UHFFFAOYSA-N 2-naphthalen-1-ylacetic acid;sodium Chemical compound [Na].C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 SNMLHWKCAMEYHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- PGYAYSRVSAJXTE-FTLOKQSXSA-N 9'-cis-neoxanthin Chemical compound C(\[C@]12[C@@](O1)(C)C[C@@H](O)CC2(C)C)=C/C(/C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)C=C=C1C(C)(C)C[C@H](O)C[C@@]1(C)O PGYAYSRVSAJXTE-FTLOKQSXSA-N 0.000 description 1
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000004936 Bromus mango Nutrition 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 244000068645 Carya illinoensis Species 0.000 description 1
- 235000009025 Carya illinoensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000951471 Citrus junos Species 0.000 description 1
- 244000175448 Citrus madurensis Species 0.000 description 1
- 244000276331 Citrus maxima Species 0.000 description 1
- 235000001759 Citrus maxima Nutrition 0.000 description 1
- 240000004307 Citrus medica Species 0.000 description 1
- 244000080335 Citrus x limonia Species 0.000 description 1
- 244000295848 Citrus x nobilis Species 0.000 description 1
- 235000017102 Citrus x nobilis Nutrition 0.000 description 1
- 240000000560 Citrus x paradisi Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- GLPZEHFBLBYFHN-UHFFFAOYSA-N Ethychlozate Chemical compound C1=CC(Cl)=CC2=C(CC(=O)OCC)NN=C21 GLPZEHFBLBYFHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical class CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- YTZIWAULTIDEEY-UHFFFAOYSA-N Isomeres zeta-Carotin Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC=C(C)CCC=C(C)C YTZIWAULTIDEEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000758791 Juglandaceae Species 0.000 description 1
- 108030000403 Lycopene epsilon-cyclases Proteins 0.000 description 1
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 1
- 240000007228 Mangifera indica Species 0.000 description 1
- 235000014826 Mangifera indica Nutrition 0.000 description 1
- 244000179970 Monarda didyma Species 0.000 description 1
- 235000010672 Monarda didyma Nutrition 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101150053185 P450 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000025272 Persea americana Species 0.000 description 1
- 235000008673 Persea americana Nutrition 0.000 description 1
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 1
- 240000006711 Pistacia vera Species 0.000 description 1
- 241001523486 Poncirus Species 0.000 description 1
- 244000202052 Poncirus trifoliata Species 0.000 description 1
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 1
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 1
- 235000006029 Prunus persica var nucipersica Nutrition 0.000 description 1
- 244000017714 Prunus persica var. nucipersica Species 0.000 description 1
- 244000294611 Punica granatum Species 0.000 description 1
- 235000014360 Punica granatum Nutrition 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 241000219492 Quercus Species 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 description 1
- 235000009184 Spondias indica Nutrition 0.000 description 1
- 240000006909 Tilia x europaea Species 0.000 description 1
- MLDWSQWMXACHHN-SNAWJCMRSA-N abamine Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1CN(CC(=O)OC)C\C=C\C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 MLDWSQWMXACHHN-SNAWJCMRSA-N 0.000 description 1
- 238000003811 acetone extraction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- HUTDUHSNJYTCAR-UHFFFAOYSA-N ancymidol Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(O)(C=1C=NC=NC=1)C1CC1 HUTDUHSNJYTCAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000035613 defoliation Effects 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- BIWLELKAFXRPDE-PCYOLSTGSA-N di-cis-zeta-carotene Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(\C)CCC=C(C)CCC=C(C)C BIWLELKAFXRPDE-PCYOLSTGSA-N 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004883 flower formation Effects 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N gibberellin A3 Chemical compound C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 108060004506 lycopene beta-cyclase Proteins 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000005822 methylenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007248 oxidative elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 235000020233 pistachio Nutrition 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000009790 rate-determining step (RDS) Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 230000009417 vegetative reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013466 vegetative reproduction Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 230000003245 working effect Effects 0.000 description 1
- BIWLELKAFXRPDE-XXKNMTJFSA-N zeta-Carotene Natural products C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)\C)(\C=C\C=C(/CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)\C)/C BIWLELKAFXRPDE-XXKNMTJFSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Cultivation Of Plants (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
本発明は、カンキツの連年安定生産を目的とした着果管理技術に関する。詳しくは、カンキツ植物の発育枝におけるアブシシン酸受容シグナルに着目した着花制御技術及びこれを利用した着果制御技術に関する。 BACKGROUND OF THE INVENTION Field of the Invention The present invention relates to a fruit set management technique aimed at stable annual production of citrus fruits. More specifically, the present invention relates to a flowering control technique focusing on abscisic acid acceptance signal in a developmental branch of a citrus plant and a fruit control technique using the same.
・カンキツの隔年結果の問題
カンキツは、豊作と不作を繰り返す隔年結果性の強い果樹である。この隔年結果の問題は、当年の着果条件が翌年の花数に影響するために引き起こされる現象である。
そのため、カンキツの栽培現場においては、隔年結実を抑制し、高品質果実を連年に渡って安定的に生産することが重要な課題となる。
・ A problem of the biennial result of citrus Citrus fruit is a fruit tree with a strong biennial result, repeating good harvest and poor crop. The problem of this biennial result is a phenomenon that is caused because the fruiting conditions of the present year affect the number of flowers of the next year.
Therefore, in a citrus cultivation site, it is important to stably produce high-quality fruits over successive years by suppressing alternate annual fruiting.
カンキツにおける当該隔年結実の問題を回避するためには、着果数を適切に管理することが不可欠であるところ、実際の生産現場においては、人手を要する人的な摘花作業及び摘果作業によって、着果数の制御を行っているのが現状である。
このような農家の人的作業は、多くの労力を要することから、生産現場での負担が大き過ぎる問題がある。この問題は、カンキツ生産事業及び農家にとって経営規模拡大を阻害する深刻な要因となっている。
In order to avoid the problem of biennial fruiting in citrus fruits, it is essential to properly manage the number of fruits, but in actual production sites, it is necessary to manually attach flowers by manual flower cutting and picking operations. Currently, the control of the number of fruits is being performed.
The labor of such farmers requires a lot of labor, and there is a problem that the burden on the production site is too large. This problem is a serious factor that impedes the expansion of the scale of business for citrus production and farmers.
そこで、このような人的作業の負担軽減の観点から、化学物質を用いたカンキツの摘果剤の開発が行われ、エチクロゼート乳剤、1−ナフタレン酢酸ナトリウム水溶剤などの摘果剤が実用化されている。
しかし、‘摘果剤’を用いた管理技術は、高気温などの環境条件により過剰な落果を引き起こして、生産量に大きな損害が出るリスクがある。
また、摘果剤による管理は、翌年の着果量の減少抑制を回避するために行う長期的な処理であるため、より前段階での直接的且つ効率的な管理制御が可能となる「着花量」の制御技術が、生産現場では求められてきた。
Therefore, from the viewpoint of alleviating the burden of such human work, the development of citrus fruit picking agents using chemical substances is carried out, and the fruit pickers such as ethychlozate emulsion and 1-naphthaleneacetic acid sodium water solvent are put to practical use .
However, there is a risk that management technology using a 'fruit removal agent' causes excessive fruit loss due to environmental conditions such as high temperature, resulting in significant damage to production.
In addition, since management by a fruiting agent is a long-term treatment that is performed to avoid suppression of the decrease in fruiting amount in the next year, direct and efficient management control at earlier stages becomes possible. Control technology of quantity has been required at production sites.
・従来の着花制御技術
このようなカンキツ栽培現場の課題を踏まえて、現在、カンキツの着花制御技術に使用可能な薬剤として、ジベレリン(GA)が農薬登録されている。
着花過多が予想される場合、花芽分化期にジベレリンを散布することによって着花量を抑制して樹勢を維持するために使用される。これにより、着果量を管理することが可能となる。
しかし、ジベレリン散布技術の根本的な問題として、ジベレリンで直接的制御が可能なのは着花量の抑制制御のみであり、「着花量の増加制御」を直接的に行うことができないという問題がある。
-Conventional flowering control technology Based on the problems of the citrus cultivation site as described above, Gibberellin (GA) is currently registered as a pesticide as a drug that can be used for flowering control technology of citrus fruits.
When excessive flowering is expected, it is used to maintain flowering by suppressing flowering amount by spraying gibberellin during flower bud differentiation. This makes it possible to manage the fruiting amount.
However, as a fundamental problem of the gibberellin scattering technology, only the control for suppressing the amount of flowering can be directly controlled by gibberellin, there is a problem that "the control for increasing the amount of flowering" can not be directly performed. .
・FT遺伝子について
着花(花成誘導及び花芽形成)を促進する花成誘導遺伝子として、FT(Flowering Locus T)遺伝子が知られており、シロイヌナズナではFT遺伝子に関連した花成メカニズムの研究が盛んに行われている。カンキツ植物からもFT遺伝子の相同遺伝子である「CiFT(Citrus FT)遺伝子」が報告されており、花成誘導に関与していることが知られている(非特許文献1,2 参照)。
しかし、カンキツ植物でCiFT遺伝子の発現を誘導するためには、遺伝子導入法による強制発現を行うことが必要であるところ、カンキツ植物種の各種で遺伝子導入法の確立は十分でない。また、通常の栽培現場におけるカンキツ(樹木)に遺伝子導入を行う場合、現在栽培されている樹木を遺伝子導入個体に置き換えて栽培する必要がある。また、収穫した果実は遺伝子導入作物となるため、消費者の自然志向と合致しない。
従って、カンキツ栽培現場においてCiFT遺伝子の発現を誘導して着花を促進する有効な手段は、その導入法自体が容易でなく、さらに現実的な手法とは言えない。
About the FT gene The FT (Flowing Locus T) gene is known as a flowering induction gene that promotes flowering (flowering induction and flowering), and in Arabidopsis thaliana, research on flowering mechanisms related to the FT gene is active. It has been done. "CiFT (Citrus FT) gene", which is a homologous gene of the FT gene, has also been reported from citrus plants, and is known to be involved in the induction of flowering (see non-patent documents 1 and 2).
However, in order to induce CiFT gene expression in citrus plants, it is necessary to perform forced expression by the gene introduction method, but establishment of the gene introduction method is not sufficient for various citrus plant species. In addition, when a gene is introduced into a citrus (tree) in a usual cultivation site, it is necessary to replace the currently grown tree with a transgenic individual for cultivation. In addition, harvested fruits are transgenic crops, which are not consistent with consumers' natural preferences.
Therefore, an effective means for inducing the expression of the CiFT gene at a citrus cultivation site to promote flowering is not easy to introduce the method itself and can not be said to be a more realistic method.
また、CiFT遺伝子の内生的な発現上昇ではなく、組み換え蛋白質として調製したCiFT蛋白質自体を植物体外から人為的に投与する方法が報告されているが(特許文献1:WO2011/059051号公報 参照)、当該技術はまだ実験段階の報告であり実用には至っていない。また、人為的なFT蛋白質の調製には、組み換え蛋白質技術を用いた調製が必要であるため、製造コストや製品の保存管理等の点で課題があるものと認められる。 Also, a method has been reported in which the CiFT protein itself prepared as a recombinant protein is artificially administered from outside the plant instead of the endogenous expression increase of the CiFT gene (see Patent Document 1: WO 2011/059051). The said technology is a report of the experimental stage and has not yet come to practical use. In addition, artificial preparation of FT protein requires preparation using recombinant protein technology, and therefore, it is recognized that there are problems in terms of manufacturing cost, storage management of products, and the like.
このように、現在において、カンキツの栽培現場で施用可能な技術として、着花量を直接的に効率良く増加させる技術が確立されていないのが現状である。
Thus, at present, as a technology that can be applied at a citrus cultivation site, a technology that directly and efficiently increases the amount of flowering has not been established.
本発明は、上記課題を解決し、カンキツ栽培現場において施用可能である、直接的且つ効率的な新規着花制御技術を提供することを目的とする。具体的に、本発明により、着花の抑制制御に加えて着花の直接的な促進制御(樹勢維持による間接的着花量維持ではない直接的な促進制御)を可能とする、新規着花制御技術を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to solve the above-mentioned problems and to provide a direct and efficient novel flowering control technique which can be applied at a citrus cultivation site. Specifically, the present invention is a novel flowering that enables direct acceleration control of flowering (direct acceleration control, not indirect flower amount maintenance by maintaining a tree trend) in addition to suppression control of flowering. It aims to provide control technology.
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、カンキツ植物において、発育枝のアブシシン酸受容シグナルを増加させることによって、CiFT遺伝子の発現誘導がおこり、花成誘導及び花芽形成(着花)が促進可能であることを見出した。一方、発育枝のアブシシン酸受容シグナルを減少させることによって、CiFT遺伝子の発現は誘導されず、花成誘導及び花芽形成(着花)が抑制可能であることを見出した。 As a result of intensive studies, the present inventors in Citrus plants increase the abscisic acid acceptance signal of the developing branch to induce the expression of the CiFT gene and promote the induction of flowering and flowering (flowering). I found it possible. On the other hand, by reducing the abscisic acid acceptance signal of the developmental branch, it was found that the expression of the CiFT gene was not induced and that flowering induction and flowering (flowering) could be suppressed.
本発明は、カンキツ植物において新規に見出した上記知見に基づいて想到されたものである。
即ち、[請求項1]に係る発明は、カンキツ属(Citrus)に属する植物に対して、下記(A)又は(B)に記載のいずれかの手段を用いて着花数を制御することを特徴とする、カンキツの着花制御方法に関する。
(A):発育枝のアブシシン酸受容シグナルの増加による着花数の増加制御手段。
(B):発育枝のアブシシン酸受容シグナルの減少又は消失による着花数の減少制御手段。
また、[請求項2]に係る発明は、カンキツ属(Citrus)に属する植物に対して、下記(C)又は(D)に記載のいずれかの手段を用いて着花数を制御することを特徴とする、カンキツの着花制御方法に関する。
(C):発育枝へのアブシシン酸, 又は, アブシシン酸受容体アゴニスト, の外生的使用による着花数の増加制御手段。
(D):発育枝へのアブシシン酸受容体アンタゴニストの外生的使用による着花数の減少制御手段。
また、[請求項3]に係る発明は、カンキツ属(Citrus)に属する植物に対して、下記(E)又は(F)に記載のいずれかの手段を用いて着花数を制御することを特徴とする、カンキツの着花制御方法に関する。
(E):発育枝のアブシシン酸含有量の増加による着花数の増加制御手段。
(F):発育枝のアブシシン酸含有量を減少による着花数の減少制御手段。
また、[請求項4]に係る発明は、カンキツ属(Citrus)に属する植物に対して、下記(G)又は(H)に記載のいずれかの手段を用いて着花数を制御することを特徴とする、カンキツの着花制御方法に関する。
(G):発育枝へのアブシシン酸分解酵素阻害剤の外生的使用による着花数の増加制御手段。
(H):発育枝へのアブシシン酸合成酵素阻害剤の外生的使用による着花数の減少制御手段。
また、[請求項5]に係る発明は、カンキツ属(Citrus)に属する植物に対して、下記(I)又は(J)に記載のいずれかの手段を用いて着花数を制御することを特徴とする、カンキツの着花制御方法に関する。
(I):発育枝へのアブシシン酸−8’−水酸化酵素阻害剤の外生的使用による着花数の増加制御手段。
(J):発育枝への9−シス−エポキシカロテノイドジオキシゲナーゼ阻害剤の外生的使用による着花数の減少制御手段。
また、[請求項6]に係る発明は、カンキツ属(Citrus)に属する植物を、4〜20℃の気温条件にて実質的に栽培することを特徴とする、カンキツ植物体における発育枝のアブシシン酸含有量向上方法に関する。
また、[請求項7]に係る発明は、アブシシン酸、アブシシン酸受容体アゴニスト、又はアブシシン酸−8’−水酸化酵素阻害作用を有する化合物、を有効成分として含有してなることを特徴とする、カンキツ属(Citrus)に属する植物の着花促進剤に関する。
また、[請求項8]に係る発明は、アブシシン酸受容体アンタゴニスト、又は、9−シス−エポキシカロテノイドジオキシゲナーゼ阻害作用を有する化合物、を有効成分として含有してなることを特徴とする、カンキツ属(Citrus)に属する植物の着花抑制剤に関する。
また、[請求項9]に係る発明は、カンキツ属(Citrus)に属する植物に対して、請求項1〜5のいずれかに記載の方法を使用することを特徴とする、カンキツ果実の着果制御方法に関する。
The present invention is conceived based on the above-mentioned findings newly found in citrus plants.
That is, the invention according to [Claim 1] controls the number of flowering of plants belonging to the genus Citrus using any of the means described in the following (A) or (B): The present invention relates to a method for controlling the flowering of citrus which is characterized.
(A): A means for controlling the increase in flowering number by increasing the abscisic acid acceptance signal of the developing branch.
(B): A means for controlling the decrease in the number of flowers by decreasing or eliminating the abscisic acid receiving signal of the developing branch.
Moreover, the invention which concerns on [Claim 2] controls a flowering number with respect to the plant which belongs to a citrus genus (Citrus) using either means as described in the following (C) or (D). The present invention relates to a method for controlling the flowering of citrus which is characterized.
(C): A means for controlling the increase in the number of flowering by exogenous use of abscisic acid or abscisic acid receptor agonist on the developmental branch.
(D): A control means for decreasing the number of flowers by exogenous use of an abscisic acid receptor antagonist to the developmental branch.
Moreover, the invention which concerns on [Claim 3] controls a flowering number with respect to the plant which belongs to citrus genus (Citrus) using either means as described in the following (E) or (F). The present invention relates to a method for controlling the flowering of citrus which is characterized.
(E): Means for controlling the increase in the number of flowering by increasing the abscisic acid content of the developing branch.
(F): A control means for decreasing the number of flowering by decreasing the abscisic acid content of the developing branch.
Moreover, the invention which concerns on [Claim 4] controls a flowering number with respect to the plant which belongs to citrus genus (Citrus) using either means as described in the following (G) or (H). The present invention relates to a method for controlling the flowering of citrus which is characterized.
(G): A means for controlling the increase in the number of flowering by exogenous use of an abscisic acid decomposing enzyme inhibitor to the developmental branch.
(H): A control means for decreasing the number of flowers by exogenous use of an abscisic acid synthetase inhibitor to the developmental branch.
Moreover, the invention which concerns on [Claim 5] controls a flowering number with respect to the plant which belongs to a citrus genus (Citrus) using either means as described in the following (I) or (J). The present invention relates to a method for controlling the flowering of citrus which is characterized.
(I): A means for controlling the increase in the number of flowers by exogenous use of an abscisic acid-8'-hydroxylase inhibitor to the developmental branch.
(J): A control means for decreasing the number of flowers by exogenous use of 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase inhibitor in the developmental branch.
Moreover, the invention which concerns on [Claim 6] is abscissin of the growth branch in a citrus plant characterized by substantially cultivating a plant belonging to a citrus genus (Citrus) under a temperature condition of 4 to 20 ° C. It relates to a method for improving the acid content.
The invention according to [claim 7] is characterized in that it comprises abscisic acid, abscisic acid receptor agonist, or a compound having abscisic acid-8'-hydroxylase inhibitory activity as an active ingredient. And a flowering promoter of a plant belonging to the genus Citrus.
The invention according to [Claim 8] is characterized by comprising an abscisic acid receptor antagonist or a compound having a 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase inhibitory activity as an active ingredient. The present invention relates to an agent for suppressing flowering of a plant belonging to (Citrus).
The invention according to [claim 9] is characterized by using the method according to any one of claims 1 to 5 for a plant belonging to the genus Citrus, wherein the fruit set of citrus fruit is characterized. It relates to a control method.
・特許文献2について
なお、ここで、特許文献2(特表2013-515501号公報)について触れておく。当該特許文献2には、‘アデノシン等’の核酸関連の天然代謝物を用いて着花度を増加させて、多年生作物に関して、隔年結実を抑制する方法が記載されている。ここで、多年生作物としては、葡萄類、苺類、胡桃類、ピスタチオ類、シトラス(ネーブルオレンジ等の列挙)、アボカド類、野苺類、桃類、プラム類、ネクタリン類、チェリー類、プラム類、アプリコット類、桃類(※重複記載)、西洋梨類、ペカン類、リンゴ類、マンゴー類、およびアーモンド類が、列挙記載されている(特許文献2段落[0032]参照)。
Patent Document 2 Here, Patent Document 2 (Japanese Patent Application Publication No. 2013-515501) will be described. Patent Document 2 describes a method for suppressing biennial fruiting in perennial crops by increasing the flowering degree using nucleic acid-related natural metabolites such as 'adenosine etc.'. Here, as perennial crops, there are mosses, mosses, walnuts, pistachios, citrus (listing such as navel oranges), avocados, wild moths, peaches, plums, nectarines, cherries, plums , Apricots, peaches (* duplicate description), pears, pecans, apples, mangoes, and almonds are listed (see Patent Document 2, paragraph [0032]).
しかしながら、当該特許文献2の発明の概要では、「マンダリン(カンキツの一種)では、アブシシン酸等の‘蓄積’が萌芽抑制の原因となること」(段落[0039])、;「アブシシン酸等の比率(サイトカイニンに対する)が‘低下’すると、花成経路遺伝子にも影響が及び、着花度(花芽シュートおよび花数)が増加すること」(段落[0039])、;「アブシシン酸等の比率(サイトカイニンに対する)が‘増大’すると萌芽が抑制されること」(段落[0040])、;「アブシシン酸等の‘蓄積’(とサイトカイニン濃度の低下)が、春の花芽の萌芽の抑制を引き起こすこと(段落0042)」、などが記載されている。
これらの記載は、カンキツ種の花芽形成に関する植物ホルモンについて、本願発明の特徴とは全く逆の知見である。即ち、特許文献2には、本願発明の技術的特徴である「カンキツ発育枝のアブシシン酸含量上昇が、着花誘導を直接的に促進する」という創作性に対する「阻害事由」が、全文に渡って明記されている。
従って、引用文献2は、本願発明の新規性及び進歩性を否定する引用文献とはなり得ない刊行物と認められる。
However, in the outline of the invention of Patent Document 2, “in 'Mandarin (a kind of citrus),' accumulation 'of abscisic acid or the like causes sprouting suppression” (paragraph [0039]); “abscisic acid or the like When the ratio (to cytokinin) is 'decreased', the flowering pathway gene is also affected, and the flowering degree (flower shoot and number of flowers) is increased ”(paragraph [0039]);“ ratio of abscisic acid etc. That 'increase' (to cytokinin) suppresses sprouting ”(paragraph [0040]);“ 'accumulation' of abscisic acid etc. (and reduction of cytokinin concentration) causes suppression of spring flower bud sprouting (Paragraph 0042) and the like are described.
These descriptions are the findings completely opposite to the features of the present invention with respect to plant hormones related to flower bud formation of citrus species. That is, in the patent document 2, the "inhibition reason" for creativity such as "the abscisic acid content increase in citrus growth branches directly promotes flowering induction", which is a technical feature of the present invention, is the whole text. Is clearly stated.
Therefore, Reference Document 2 is recognized as a publication that can not be a cited document that denies the novelty and inventive step of the present invention.
本発明は、カンキツ栽培現場において施用可能である、直接的且つ効率的な新規着花制御技術を提供する。具体的に、本発明により、着花の抑制制御に加えて着花の直接的な促進制御(樹勢維持による間接的着花量維持ではない直接的な促進制御)を可能とする、新規着花制御技術を提供する。
The present invention provides a direct and efficient novel flowering control technology that can be applied at a citrus cultivation site. Specifically, the present invention is a novel flowering that enables direct acceleration control of flowering (direct acceleration control, not indirect flower amount maintenance by maintaining a tree trend) in addition to suppression control of flowering. Provide control technology.
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
本発明は、カンキツ植物の発育枝におけるアブシシン酸受容シグナルに着目した着花制御技術及び着果制御技術に関する。
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail.
The present invention relates to a flowering control technique and a fruit setting control technique focusing on an abscisic acid acceptance signal in a developmental branch of a citrus plant.
[カンキツ植物]
本発明に係る技術の適用対象であるカンキツ植物とは、具体的にはカンキツ属に属する植物を指すものである。
ここで「カンキツ属(Citrus、別名ミカン属)」とは、ミカン科ミカン連に属する柑橘類の一属であり、進化的に単一の共通祖先から分岐した一群の種からなる分類群である。
カンキツ属(genus Citrus)に属する種は、分類上は‘種(species)’とされる場合もあるが、変異発生した単一樹から栄養生殖によって栽培種として分布拡大した例が多く、実質的な遺伝子的な差異は、変種・品種レベル程度の遺伝的差異しかない場合も多い。近年の遺伝子型を比較した研究では、カンキツ属の原種は、わずか4種程度で、それ以外のほとんど種は、雑種であるという説が有力である。
この点、カンキツ属は、比較的種間雑種(交配)や接ぎ木が容易な分類群であり、遺伝子的背景(植物種としての基本的性質)がお互いに近い種で構成されている分類群である。
[Citrus plants]
Citrus plants to which the technology according to the present invention is applied specifically refer to plants belonging to the genus Citrus.
Here, "Citrus (aka Citrus genus)" is a genus of citrus fruits belonging to the family Ritaceae, and is a taxonomic group consisting of a group of species branched from a single common ancestor in evolution.
Species belonging to the genus genus Citrus are sometimes classified as 'species', but there are many cases where the distribution as a cultivar has been expanded by vegetative reproduction from a mutagenized single tree. Genetic differences often occur only at the level of variation and breed. In recent research comparing genotypes, it is strongly suggested that only about four citrus species are native species, and most other species are hybrids.
In this respect, citrus genus is a taxonomic group which is relatively easy for interspecific hybrid (crossing) and grafting, and is a taxonomic group in which genetic background (basic property as a plant species) is composed of species close to each other. is there.
カンキツ属の果実は、食用・食材として供される重要な農産物資源となる場合が多い。果実の特徴は、果皮の内側に、果肉が詰まった小袋が放射状に並んだ構造で構成されている。
カンキツ属の植物体は、常緑性の低木(樹木)であり落葉はしない。熱帯から亜熱帯にかけてその起源があり、温暖地域での栽培に適した性質を有する。
Citrus fruits are often an important agricultural resource for food and food. The characteristic of the fruit is that the inside of the peel is a structure in which the sachets filled with pulp are arranged in a row.
Plants of the genus Citrus are evergreen shrubs (trees) and do not fall off leaves. It originates from the tropics to the subtropics and has properties suitable for cultivation in warm regions.
また、カンキツ属に属する種において、特に重要な特徴は、‘低温’を経験することによって、樹木の花成誘導が誘起されるという性質である。当該性質は、ウンシュウミカン、オレンジ、ライムなど、カンキツ属の多くの種において、共通する現象であることが知られている。
カンキツ属に属する種間の遺伝的の近さを考慮すると、カンキツ属では「低温栽培によって花成が誘導される」という共通の花成誘導メカニズムが存在するものと、当該技術分野では一般的に認識されており、カンキツに関する総括的な書籍で報告がされている(Spiegel-Roy, P. and Goldschmidt, E.E. (1996). Biology of Citrus. Cambridge University Press, New York)。
In addition, among the species belonging to the genus Citrus, a particularly important feature is the property that inducing flowering of trees is induced by experiencing 'low temperature'. This property is known to be a common phenomenon in many citrus species such as Satsuma mandarin orange, lime and the like.
Given the closeness of genetics among species belonging to the genus Citrus, Citrus has a common floral induction mechanism that "flowering is induced by low temperature cultivation", and it is generally accepted in the art that It is recognized and reported in a comprehensive book on citrus (Spiegel-Roy, P. and Goldschmidt, EE (1996). Biology of Citrus. Cambridge University Press, New York).
一方、キンカン属(Fortunella)やカラタチ属(Poncirus)等のミカン科植物は、カンキツ属と比較的近い関係にあるとされているが、高温条件下(初夏)に花成誘導がおこる(Nishikawa et al. (2011), Bull. Natl. Inst. Fruit Tree Sci. 12: p27-32)。
具体的に、キンカン(Kumquat)では、‘初夏’に花芽誘導がおこり夏に花芽が開花する。また、カラタチ(trifoliate orange)では、‘初夏’に花芽誘導がおこるが、形成された花芽は冬を越して翌春に開花する(※図8 参照)。
従って、キンカン属やカラタチ属等のミカン科植物においては、カンキツ属とは異なる誘導制御による花成誘導メカニズムが存在するものと認められる。
当該知見は、カンキツ属における「低温による花成誘導系の上流制御機構」は、カンキツ属の種における独自の花成制御機構であることを示していると認められる。
On the other hand, Citrusaceae plants such as Fortunella and Poncirus are considered to be relatively close to citrus species, but induction of flowers occurs under high temperature conditions (early summer) (Nishikawa et al. al. (2011), Bull. Natl. Inst. Fruit Tree Sci. 12: p27-32).
Specifically, in Kumquat, flower bud induction occurs in 'early summer' and flower buds flower in summer. In addition, flower bud induction occurs in 'early summer' in trifoliate orange, but the formed flower buds flower in the next spring over winter (see FIG. 8).
Therefore, it is recognized that there is a flowering induction mechanism by induction control different from that of citrus in Citrus plants such as Quercus and Trifoliata.
The above findings are considered to indicate that the "upstream control mechanism of low temperature flowering induction system" in Citrus genus is a unique flowering control mechanism in citrus species.
カンキツ属(Citrus)に属する種としては、伝統的な田中長三郎の分類によると、160前後の種分類が可能であるとされているが、近年の遺伝子型を比較した研究では、これらカンキツ属のほとんどの種は遺伝的に近縁であり、雑種形成により誕生したという説が有力である。特に、真正柑橘亜属とされる種どうしは極めて近縁であると認められる。
いずれにしろ、これらは種は、お互いに雑種形成が可能であるほど近縁種であり、分類に捕らわれることなく、いずれもカンキツ属に属する植物であると認められる。
As a species belonging to Citrus (Citrus), according to the classification of Nagasaburo Tanaka, it is said that classification of around 160 is possible, but in recent studies comparing genotypes, these citrus Most species are genetically related, and the theory is that they are born by hybridization. In particular, it is recognized that the species considered to be true citrus subgenus are closely related.
In any case, they are closely related so that they are capable of hybridizing to each other, and are not considered to be classified and all are considered to be plants belonging to the genus Citrus.
具体的には、ウンシュウミカン、ポンカン、マンダリンオレンジ、タチバナ、キシュウミカン、サクラジマミカン、カラマンシー、カラーマンダリン、マンダリンオレンジ、バレンシアオレンジ、ネーブルオレンジ、サワーオレンジ、ブラッドオレンジ、クレメンタイン、グレープフルーツ、コウジ、オランジェロ、レモン、ライム、ベルガモット、スダチ、カボス、サンボウカン、シークワーサー(シークワーシャ、ヒラミレモン)、ユズ、ハナユ、ダイダイ、シトロン、ブッシュカン、ナツミカン、ハッサク、ヒュウガナツ、デコポン、カクテルフルーツ、スウィーティー、ジャバラ、キノット、イヨカン、タンカン、タンゴール、セミノール、タンゼロ、ブンタン、などは、いずれもカンキツ属に属するものである。 Specifically, Satsuma mandarin orange, Ponkan, mandarin orange, tachibana, pomegranate mandarin orange, cherry zami mandarin orange, karamanshi, color mandarin, mandarin orange, Valencia orange, navel orange, navel orange, sour orange, blood orange, clementine, grapefruit, orange, orange , Lemon, lime, bergamot, sudachi, kabosu, sambokan, shikuwasa (shikuwasha, lice lemon), yuzu, hanayu, daidai, citron, bush can, nut cane, hassatsu, hyuga natsu, deukopon, cocktail fruit, sweetie, jabala, kinot, yoyokan , Tangan, tangor, seminol, tan zero, buntan, etc. are all belonging to the genus Citrus.
[アブシシン酸(ABA)による着花制御]
本発明は、カンキツ植物の発育枝におけるアブシシン酸受容シグナルに着目した着花制御技術である。
[Flow control by abscisic acid (ABA)]
The present invention is a flowering control technology focusing on abscisic acid acceptance signals in the developmental branch of citrus plants.
ここで、「アブシシン酸」とは、ABA(abscisic acid)と表記される植物ホルモンの一種である。別名、アブシジン酸、アブサイシン酸とも呼ばれる化合物である。CAS登録番号は21293-29-8である。構造的にはセスキテルペンに属する。当該化合物の構造式を下記式(i)に示す。 Here, “abscisic acid” is a type of plant hormone denoted as ABA (abscisic acid). Also known as abscisic acid or abscisic acid. The CAS registration number is 21293-29-8. Structurally, it belongs to sesquiterpenes. The structural formula of the compound is shown in the following formula (i).
アブシシン酸の機能としては、これまでのシロイヌナズナ等のモデル植物をはじめ、カンバやカエデ等の樹木を含む多くの植物種の研究から、低温乾燥等の刺激によって植物の休眠誘導、生長抑制、発芽抑制などを誘起する機能であることが知られている。
また、花芽形成に関する報告例は少ないが、例えば特許文献2には、アブシシン酸の蓄積が花芽形成を‘抑制’することが記載されている。
Abscisic acid functions from the research of many plant species including trees such as birch and maple etc. including model plants such as Arabidopsis thaliana so far, and induction of plant dormancy, growth suppression and germination suppression by stimulation such as low temperature drying It is known that it is a function to induce and the like.
Although there are few reports on flower bud formation, for example, Patent Document 2 describes that accumulation of abscisic acid 'suppresses' flower bud formation.
本発明の花成制御技術は、これまで報告されている既知の植物種からの知見とは全く逆の新規知見に基づく制御技術である。具体的には、「カンキツ植物においては、アブシシン酸受容シグナルを増加させることによって、FT遺伝子の発現が誘導され、花成誘導(着花)が促進される」という、本発明者らが新規解明した花成誘導メカニズムに着目して開発された技術である(※図7 参照)。
カンキツ植物におけるアブシシン酸受容シグナルの当該現象は、分子レベルの花成メカニズムが著しく研究されているシロイヌナズナやイネだけでなく、他の植物からも、全く報告されていない。この点を踏まえると、当該現象はカンキツ属において、特有の現象であると認められる。
The flowering control technology of the present invention is a control technology based on a novel finding that is completely contrary to the findings from known plant species so far reported. Specifically, the present inventors elucidated that "in the case of citrus plants, the expression of the FT gene is induced and the induction of flowering (flowering) is promoted by increasing the abscisic acid acceptance signal". This technology was developed focusing on the flowering induction mechanism (see Figure 7).
The phenomenon of abscisic acid receptive signal in citrus plants has not been reported at all from other plants, as well as from Arabidopsis thaliana and rice, for which molecular level flowering mechanisms have been extensively studied. Based on this point, it is recognized that the phenomenon is a unique phenomenon in citrus species.
[着花数の制御手段]
本発明においては、発育枝のアブシシン酸受容シグナルに着目することによって、花成誘導を促進又は抑制し、着花数を制御することを可能とする技術である。これにより、カンキツの着花数の増加・減少を直接制御することを可能とする。
[Control means of the number of flowering]
In the present invention, attention is directed to the abscisic acid acceptance signal of the developmental branch, thereby promoting or suppressing flowering and controlling the number of flowering. This makes it possible to directly control the increase and decrease in the number of citrus flowers.
・FT遺伝子
本発明に係る制御技術は、内生的なFT遺伝子の発現制御を介して達成される技術である。本発明の当該アブシシン酸受容シグナルは、発育段階にある枝(発育枝)において制御されることを要する。当該発育枝でのアブシシン酸受容シグナルの増加によって、茎の細胞でのFT遺伝子の発現が誘導され、花成誘導が促進される。
FT gene The control technology according to the present invention is a technology achieved through endogenous FT gene expression control. The abscisic acid acceptance signal of the present invention needs to be controlled in the developmental branch (developmental branch). The increase in abscisic acid acceptance signal in the developmental branch induces the expression of the FT gene in stem cells and promotes the induction of flowering.
ここで、「FT(Flowering locus T)遺伝子」とは、シロイヌナズナにおける花成メカニズムの研究で発見された花成誘導を司る遺伝子である(Kobayashi et al. (1999); Science 286 p1960-1962)。
カンキツには、CiFT1〜3という配列類似性が極めて高い3種類のFT遺伝子の相同遺伝子が存在する。これらの共通祖先遺伝子とシロイヌナズナのFT遺伝子とは、お互いに順系相同(オーソログ)の関係にある。CiFT1〜3の3種類の遺伝子は、いずれもカンキツの樹木全体の花成誘導を促進する機能を発揮している(非特許文献1:Endo et al.2005、非特許文献2:Nishikawa et al. 2007)。
Here, the “FT (Flowering locus T) gene” is a gene responsible for induction of flowering found in the study of the flowering mechanism in Arabidopsis thaliana (Kobayashi et al. (1999); Science 286 p1960-1962).
In citrus, there are homologous genes of three kinds of FT genes with extremely high sequence similarities of CiFT1 to 3. These common ancestor genes and the FT gene of Arabidopsis thaliana have an orthologous relationship with each other. All three types of genes of CiFT1 to 3 exert a function to promote flowering induction of whole citrus trees (Non-patent document 1: Endo et al. 2005, Non-patent document 2: Nishikawa et al. 2007).
なお、カンキツ樹木(植物体)全体で花成誘導がおこるメカニズムとしては、シロイヌナズナでのFT遺伝子研究により説明することができる。具体的には、茎葉の維管束師部細胞での‘FT遺伝子’の発現によって‘FT蛋白質’が生成された後、FT蛋白質が維管束を通して植物体全体に移動して、頂芽や側芽で他の花成誘導遺伝子の蛋白質(FD蛋白質)と協働して、花成誘導を行っているものと考えられる(Abe el al. (2005); Science 309 (5737): 1052-1056など)。
当該シロイヌナズナの知見は、カンキツ発育枝でのCiFT遺伝子の発現上昇の後に、カンキツ樹木(植物体)全体で花成誘導されるという知見と一致している。この点、‘FT遺伝子より下流以降’の花成制御については、カンキツ植物においてもシロイヌナズナと共通した分子機構が存在するものと認められる。
The mechanism of induction of flowering in the whole citrus tree (plant body) can be explained by FT gene research in Arabidopsis thaliana. Specifically, after 'FT protein' is produced by the expression of 'FT gene' in stem and leaf vasculature cells, the FT protein moves through the vascular bundle throughout the plant body and is apical bud or lateral bud. It is thought that flower induction is performed in cooperation with proteins of other flower induction genes (FD protein) (Abe el al. (2005); Science 309 (5737): 1052-1056, etc.).
The finding of Arabidopsis thaliana is consistent with the finding that flowering is induced in the entire citrus tree (plant body) after the expression of the CiFT gene in the citrus developmental branch is increased. In this respect, it is recognized that a molecular mechanism common to Arabidopsis thaliana exists in citrus plants for the control of flowering 'from downstream of the FT gene'.
・対象植物体
また、当該技術は、個体が幼若相(発芽から5年以上、好ましくは8年以上、より好ましくは10年以上、さらに好ましくは12年以上、特に好ましくは15年以上)を経過して、成熟相にある樹木に対して施用する。あまりに早い樹齢段階で当該技術を適用しても、個体が成熟相に達していなければ花成誘導は起こらない。
また、当該技術は、成熟期にある枝を台木に接ぎ木したカンキツの苗木に対しても、施用することが可能である。
-Target plant body Further, according to the technique, an individual is juvenile phase (5 years or more, preferably 8 years or more, more preferably 10 years or more, still more preferably 12 years or more, particularly preferably 15 years or more). Apply to trees in the mature phase. Even if the technology is applied at an early age stage, floral induction does not occur unless the individual has reached the mature phase.
In addition, the technology can also be applied to the saplings of citrus fruits obtained by grafting a branch in mature stage to a stock.
当該技術におけるアブシシン酸受容シグナルの制御は、発育段階にある枝において行われることが好適である。発育枝でのアブシシン酸受容シグナルを増加させた場合、‘FT遺伝子発現’を上昇させ、樹木全体の花成誘導を誘起することが可能となるからである。
ここで「発育枝」とは、発育段階(生長・生育段階)にある維管束師部細胞(FT遺伝子が高発現する組織)を含む枝を指すものである。
特には、休眠芽から発芽生育中の1年生の栄養枝であることが好適である。(※ここで、「1年生の栄養枝」とは、枝芽が発芽・発育中の1年目の枝であることを指す園芸学用語である。翌年以降になると、当該枝から次の枝芽が発芽する。1年で枯れる枝という意味ではない。)
また、FT遺伝子発現を効率良く誘導するためには、枝が発芽伸長し硬化した後であり且つ発育段階にあるものが望ましい。特に好ましくは、低温休眠後に発芽して伸長した枝(即ち、春枝)が硬化し且つ発育段階にある枝が好適である。
Regulation of the abscisic acid receptor signal in the art is preferably performed at the developmental branch. This is because when the abscisic acid acceptance signal in the developmental branch is increased, it is possible to increase 'FT gene expression' and induce flowering induction of the whole tree.
Here, "developmental branch" refers to a branch including vascular phloem cells (tissue in which the FT gene is highly expressed) in a developmental stage (growth and growth stage).
In particular, it is preferable that it is a one-year-old vegetative branch during germination and growth from dormant sprouts. (※ Here, “1 year-old vegetative branch” is a horticultural term that indicates that the shoot is a branch of the first year during germination and development. From the next year onwards, the next branch from the branch concerned The buds germinate, not a branch that withers in one year.)
Also, in order to efficiently induce FT gene expression, it is desirable that the branches be after sprouting and elongation, and in a developmental stage. Particularly preferably, a branch which is sprouted after cold dormancy and in which the elongated branch (i.e., the spring branch) hardens and is in a developmental stage is preferred.
・外生的使用
なお、本発明における制御を実現するための手段として、目的物質を外生的に使用する手段を採用する場合がある。
ここで、「外生的に使用」とは、外因性の(施用対象である植物体外からの)物質を植物体に投与して使用する行為を指す。
具体的には、施用対象のカンキツ植物体に対して、目的物質を吸収、摂取させる行為を指す。ここで、吸収、摂取させる行為とは、茎、葉、根などの表面(又は傷をつけた部分)からの吸収によって、目的物質を含む液体を植物体内に摂取させる行為を指す。
Exogenous Use In addition, as a means for realizing the control in the present invention, a means of exogenously using the target substance may be adopted.
Here, "use exogenously" refers to an action of administering an exogenous substance (from outside the plant to which the substance is to be applied) to a plant and using it.
Specifically, it refers to an action of absorbing and ingesting a target substance in a citrus plant to be applied. Here, the act of absorbing and ingesting refers to the act of ingesting the liquid containing the target substance into the plant body by absorption from the surface (or a damaged part) such as stems, leaves, and roots.
(1) 具体例としては、例えば、目的物質を人為的に散布、噴霧、スプレー、塗布等する行為を挙げることができる。当該行為では、目的物質を含む液体を微細な液滴にして、吹き付け等の操作によって植物体表面に付着させる。この場合、植物体の表面から、目的物質が植物体内に取り込ませることが可能となる。
(2) また、目的物質を含む液体を含む脱脂綿、布、スポンジ等を利用して、植物体の表面(又は傷をつけた部分)から、目的物質を含む液体を吸収摂取させる行為も挙げることができる。また、植物体表面を(カミソリ等で)傷をつけて、より積極的に目的物質を含む溶液を植物体内に取り込ませることも好適である。
(3) また、ゲル化剤、粘性剤、崩壊剤等を利用して、植物体表面から長期的に接触しえる状態を維持して、継続的に取り込みを行わせることも可能である。
(4) また、脱脂綿、布、スポンジ等に目的物質を含む液体を浸み込ませて、植物体表面に塗布する行為を挙げることができる。この場合、研磨剤と一緒に用いることで、植物体表面の傷から積極的に取り込みを行うことが可能である。
(5) また、シリンジ針等を用いて、より積極的に目的物質を含む溶液を植物体内に注入して取り込ませる行為を挙げることもできる。
(6) また、根からの吸水によって、目的物質を取り込ませることも可能である。
(1) As a specific example, there can be mentioned, for example, an act of artificially spraying, spraying, spraying, applying, etc. a target substance. In the action, a liquid containing a target substance is formed into fine droplets and attached to the surface of a plant by an operation such as spraying. In this case, the target substance can be taken into the plant from the surface of the plant.
(2) In addition, use the absorbent cotton, cloth, sponge, etc. containing the liquid containing the target substance to also act to absorb and ingest the liquid containing the target substance from the surface (or the damaged part) of the plant. Can. In addition, it is also preferable to scratch the surface of the plant (with a razor or the like) to more positively introduce a solution containing the target substance into the plant.
(3) In addition, it is also possible to carry out continuous uptake while maintaining a long-term contact from the plant surface by using a gelling agent, a viscosity agent, a disintegrant and the like.
(4) In addition, it can be used to impregnate a liquid containing the target substance into absorbent cotton, cloth, sponge or the like and apply it to the surface of a plant. In this case, by using together with the abrasive, it is possible to positively take in from the wound of the plant surface.
(5) In addition, it is also possible to cite an action of injecting a solution containing the target substance into the plant body more positively by using a syringe needle or the like and taking in the solution.
(6) It is also possible to take up the target substance by water absorption from the root.
当該外生的使用行為は、植物体のいずれの部位に対して行うことが可能であるが、好ましくは、上記発育段階にある枝(発育枝)に直接行う行為によって、当該発育枝にそのまま吸収摂取されるようにすることが好適である。 The exogenous use act can be performed on any part of the plant body, but preferably, it is absorbed as it is by the act directly performed on the branch (growth branch) at the above developmental stage. It is preferable to be ingested.
また、当該外生的使用は、継続的に又は連続的に行うことが効果的である。例えば、数時間〜数日おきに溶液散布したり、連続的に吸収できる態様で植物体に摂取吸収させることが好適である。 In addition, it is effective to carry out the exogenous use continuously or continuously. For example, it is preferable that the solution be sprayed every several hours to several days, or that the plants be ingested and absorbed in such a manner that they can be absorbed continuously.
[アブシシン酸受容シグナルの増加手段]
本発明においては、当該制御技術におけるアブシシン酸受容シグナルの増加手段(増強手段、増大手段)としては、具体的に以下に示す手段を用いることが可能である。
[Means for increasing abscisic acid acceptance signal]
In the present invention, the means specifically shown below can be used as a means for increasing the abscisic acid receptor signal (means for enhancing, means for increasing) in the control technique.
(1)アブシシン酸の外生的使用
本発明に係る制御技術においては、アブシシン酸を外生的に使用することによって、発育枝中におけるアブシシン酸受容シグナルを人為的に増加させることが可能である。
当該外生的使用により、発育枝の組織内及び細胞内に、アブシシン酸を取り込ませて、アブシシン酸受容シグナルを人為的に増加させることが可能となる。
当該増加した受容シグナルによって、FT遺伝子の発現が強く誘導され、花成誘導が促進される。
(1) Exogenous use of abscisic acid In the control technique according to the present invention, it is possible to artificially increase the abscisic acid receptive signal during the developmental branch by using abscisic acid exogenously .
The exogenous use makes it possible to incorporate abscisic acid into tissues and cells of the developmental branch to artificially increase the abscisic acid receptive signal.
The increased receptor signal strongly induces the expression of the FT gene and promotes the induction of flowering.
当該手段においては、‘アブシシン酸’(上記式(i)の化合物)として、天然型のS-(+)-アブシシン酸を用いることが好適であるが、光学異性体を含むものであっても良い。また、これらはその塩として用いることも可能である。 In this means, it is preferable to use natural S-(+)-abscisic acid as the 'abscisic acid' (the compound of the above formula (i)), although it may contain optical isomers. good. Also, they can be used as their salts.
アブシシン酸の使用においては、植物体(樹勢や果実等)への悪影響がでない範囲であり且つ所望の効果が期待できる濃度で使用すれば良い。例えば、アブシシン酸の濃度を1μM〜10mM、好ましくは10μM〜5mM、さらに好ましくは50μM〜2mM、より好ましくは100〜1mM、特に好ましくは200〜800mM、に調製した水溶液を用いることが望ましい。
また、溶液としては、水溶液として調製することが好適であるが、低濃度の塩、緩衝成分などを含ませることも可能である。
In the use of abscisic acid, it may be used at such a concentration that an adverse effect on plants (trees, fruits, etc.) is not generated and a desired effect can be expected. For example, it is desirable to use an aqueous solution prepared to have a concentration of abscisic acid of 1 μM to 10 mM, preferably 10 μM to 5 mM, more preferably 50 μM to 2 mM, more preferably 100 to 1 mM, and particularly preferably 200 to 800 mM.
The solution is preferably prepared as an aqueous solution, but it is also possible to include low concentration salts, buffer components and the like.
(2)アブシシン酸受容体アゴニストの外生的使用
本発明に係る制御技術においては、アブシシン酸受容体アゴニスト(作動体)を外生的に使用することによって、発育枝中におけるアブシシン酸受容シグナルを人為的に増加させることが可能である。
当該外生的使用により、発育枝の組織内及び細胞内に、当該アゴニストを取り込ませて、アブシシン酸受容シグナルを人為的に増加させることが可能となる。
当該増加した受容シグナルによって、FT遺伝子の発現が強く誘導され、花成誘導が促進される。
(2) Exogenous Use of Abscisic Acid Receptor Agonist In the control technology according to the present invention, the abscisic acid receptor signal during developmental branch can be obtained by using abscisic acid receptor agonist (activator) exogenously. It is possible to artificially increase.
The exogenous use makes it possible to incorporate the agonist into tissues and cells of the developmental branch to artificially increase the abscisic acid receptive signal.
The increased receptor signal strongly induces the expression of the FT gene and promotes the induction of flowering.
ここで、‘アブシシン酸受容体アゴニスト’(作動体)としては、アブシシン酸の受容体(レセプター)である「PYR(Pyrabactin resistance)蛋白質及び/又はその相同蛋白質群」と結合して、アブシシン酸受容シグナルを増加させる機能する化合物を、好適に用いることができる。 Here, as the 'abscisic acid receptor agonist' (agonist), it binds to "PYR (Pyrabactin resistance) protein and / or its homologous protein group," which is the abscisic acid receptor (receptor), to receive abscisic acid Compounds that function to increase the signal can be suitably used.
このような化合物として、具体的には、アブシシン酸と同様の生理機能(アブシシン酸受容シグナルを誘起する作用)を発揮する‘アブシシン酸の誘導体’を用いることができる。当該アブシシン酸誘導体とは、アブシシン酸の一部の官能基を、他の官能基に置換したものであって、アブシシン酸の生理機能が担保されたものを挙げることができる。
当該アブシシン酸誘導体として、具体的には、ABA-8'-水酸化酵素の分解を回避してABA受容シグナルの持続性を向上できる構造の誘導体を挙げることができる。具体的には、8'-メトキシ化アブシシン酸、8'-アルキル化アブシシン酸、8'-アセチル化アブシシン酸、8'-メトキシアルキル化アブシシン酸、8'-メトキシアセチル化アブシシン酸、8’-フッ素化アブシシン酸、などを挙げることができる(特表2000-502107、特開平7-300443、等 参照)。ここで、アルキル化又はアセチル化は、炭素数2以下の低級のもの(メチル化、エチル化、メチレン化、エチレン化)であることが好適である。
また、2',3'-ジヒドロキシル化アブシシン酸、4'-デオキシ化アブシシン酸、なども挙げることができる。
これらの誘導体は、天然アブシシン酸と同じの光学異性体の立体構造関係にあるものが好適であるが、その光学異性体を含むものであっても良い。また、当該アブシシン酸誘導体は、その塩を用いることも可能である。
As such a compound, specifically, 'a derivative of abscisic acid' which exerts the same physiological function as abscisic acid (action to induce an abscisic acid receiving signal) can be used. The said abscisic acid derivative is what substituted the one functional group of abscisic acid by the other functional group, Comprising: The thing by which the physiological function of abscisic acid is ensured can be mentioned.
As the abscisic acid derivative, there can be mentioned specifically a derivative having a structure capable of avoiding the degradation of ABA-8′-hydroxylase to improve the persistence of the ABA receptor signal. Specifically, 8'-methoxylated abscisic acid, 8'-alkylated abscisic acid, 8'-acetylated abscisic acid, 8'-methoxyalkylated abscisic acid, 8'-methoxyacetylated abscisic acid, 8'- Examples thereof include fluorinated abscisic acid and the like (see, for example, JP-A-2000-502107 and JP-A-7-300443). Here, it is preferable that the alkylation or acetylation be a lower one having 2 or less carbon atoms (methylation, ethylation, methylenation, ethylation).
Other examples include 2 ', 3'-dihydroxylated abscisic acid, 4'-deoxy abscisic acid, and the like.
These derivatives preferably have the same stereoisomeric relationship of optical isomers as natural abscisic acid, but may contain those optical isomers. Moreover, it is also possible to use the salt for the said abscisic acid derivative.
また、アブシシン酸アゴニストとしては、アブシシン酸と類似構造を有さない化合物も好適に用いることができる。例えば、キナバクチン(Quinabactin)、ピラバクチン(Pyrabactin)、テトラロンアブシシン酸(tetralone abscisic acid)、などを用いることができる。また、これらの化合物の誘導体(化合物の一部の官能基を他の官能基に置換したもの)であって、同様の生理機能が担保された化合物を用いることもできる。
特には、作動特性の効果及び難分解特性の観点から、キナバクチンを用いることが好適である(Okamoto et al., 2013, PNAS vol.110 no.29, p12132-12137)。
また、これらの化合物は、その塩を用いることも可能である。
Moreover, as an abscisic acid agonist, the compound which does not have an analogous structure with abscisic acid can also be used suitably. For example, quinabactin (Quinabactin), pyrabactin (Pyrabactin), tetralone abscisic acid (tetralone abscisic acid), etc. can be used. In addition, derivatives of these compounds (having some of the functional groups of the compound replaced with other functional groups), which have similar physiological functions, can also be used.
In particular, it is preferable to use quinabactin from the viewpoint of the effect of the working property and the non-degradable property (Okamoto et al., 2013, PNAS vol. 110 no. 29, p12132-12137).
Moreover, these compounds can also use the salt.
これらアゴニスト化合物の使用においては、植物体(樹勢や果実等)への悪影響がでない範囲であり且つ所望の効果が期待できる濃度で使用すれば良い。例えば、化合物濃度を0.1μM〜1mM、好ましくは0.5〜500μM、より好ましくは1〜200μM、特に好ましくは10〜100μM、に調製した水溶液として調製して用いることができる。
また、溶液としては、水溶液として調製することが好適であるが、低濃度の塩、緩衝成分などを含ませることも可能である。
In the use of these agonist compounds, they may be used at such a concentration that an adverse effect on plants (trees, fruits, etc.) is not generated and a desired effect can be expected. For example, it can be prepared and used as an aqueous solution prepared to have a compound concentration of 0.1 μM to 1 mM, preferably 0.5 to 500 μM, more preferably 1 to 200 μM, and particularly preferably 10 to 100 μM.
The solution is preferably prepared as an aqueous solution, but it is also possible to include low concentration salts, buffer components and the like.
(3)アブシシン酸分解酵素阻害剤の外生的使用
本発明に係る制御技術においては、アブシシン酸分解酵素阻害剤を外生的に使用することによって、発育枝中におけるアブシシン酸受容シグナルを人為的に増加させることが可能である。
当該外生的使用により、発育枝の組織内及び細胞内にアブシシン酸分解酵素阻害剤を取り込ませて、植物体の内生アブシシン酸含有量を増加させることが可能となり、これによりアブシシン酸受容シグナルを人為的に増加させることが可能となる。
当該増加した受容シグナルによって、FT遺伝子の発現が強く誘導され、花成誘導が促進される。
(3) Exogenous use of abscisic acid decomposing enzyme inhibitor In the control technology according to the present invention, the abscisic acid receptive signal during developmental branch is artificially used by using abscisic acid decomposing enzyme inhibitor exogenously It is possible to increase
The exogenous use makes it possible to incorporate the abscisic acidase inhibitor into the tissues and cells of the developmental branch to increase the endogenous abscisic acid content of the plant body, thereby abscisic acid receptive signal. Can be artificially increased.
The increased receptor signal strongly induces the expression of the FT gene and promotes the induction of flowering.
‘アブシシン酸分解酵素阻害剤’としては、カンキツにおいてアブシシン酸の分解に関与する酵素を阻害する作用を有する化合物であれば、如何なるものを用いることができる。具体的には、アブシシン酸の分解に直接関与するアブシシン酸−8’−水酸化酵素(ABA 8'-hydroxylase:A8OX)の阻害作用を有する化合物を好適に用いることができる(※図7 参照)。 As the 'abscisic acid decomposing enzyme inhibitor', any compound can be used as long as it is a compound having an activity of inhibiting an enzyme involved in the decomposition of abscisic acid in citrus. Specifically, a compound having an inhibitory action on abscisic acid-8'-hydroxylase (A8OX) directly involved in the decomposition of abscisic acid can be suitably used (see FIG. 7). .
ここで、アブシシン酸−8’−水酸化酵素の阻害作用を有する化合物(ABA-8'-水酸化酵素阻害剤の有効成分)としては、アゾール系のP450阻害剤を用いることができる。(なお、当該記載は、非アゾール系のものを排除する記載ではない。)
具体的には、アブシナゾールE2B(Abscinazole-E2B)、アブシナゾールE1(Abscinazole-E1)、アブシナゾールF1(Abscinazole-F1)、ジニコナゾール(Diniconazole)、ウニコナゾール(Uniconazole)、アシミドール(Ancymidol)、などを挙げることができる。また、これらの誘導体(化合物の一部の官能基を他の官能基に置換したもの)であって、同様の生理機能が担保された化合物を用いることもできる。
特に、ABA 8'-水酸化酵素に対して選択性が高く植物の生長に悪影響を与えにくいアブシナゾールE2B(特開2013-231014)、アブシナゾールE1(Okazaki et al. 2011, Bioorg.Med.Chem., vol.19 1 p406-413)、アブシナゾールF1(Todoroki et al. 2009, Bioorg.Med.Chem., Vol.17 15 p6620-6630))、などを用いることが好適である。特に、アブシナゾールE2Bが好適である。
Here, as a compound having the inhibitory action of abscisic acid-8'-hydroxylase (an active ingredient of ABA-8'-hydroxylase inhibitor), an azole-based P450 inhibitor can be used. (Note that this description does not exclude non-azoles.)
Specifically, there may be mentioned abcinazole E2B (Abscinazole-E2B), abcinazole E1 (Abscinazole-E1), abcinazole F1 (Abscinazole-F1), diniconazole (Diniconazole), uniconazole (Uniconazole), asymidol (Ancymidol), etc. . In addition, it is also possible to use a compound of these derivatives (one having some functional group of the compound substituted by another functional group), in which the same physiological function is secured.
In particular, abcinazole E2B (Japanese Patent Laid-Open No. 2013-231014), which is highly selective for ABA 8'-hydroxylase and less likely to adversely affect plant growth, abcinazole E1 (Okazaki et al. 2011, Bioorg. Med. Chem., vol. 19 1 p406-413), abcinazole F 1 (Todoroki et al. 2009, Bioorg. Med. Chem., Vol. 17 15 p 6620-6630)), etc. are preferably used. In particular, abcinazole E2B is preferred.
当該阻害剤の使用においては、植物体(樹勢や果実等)への悪影響がでない範囲であり且つ所望の効果が期待できる濃度で使用すれば良い。例えば、化合物濃度を0.1μM〜1mM、好ましくは0.5〜500μM、より好ましくは1〜200μM、特に好ましくは10〜100μM、に調製した水溶液として調製して用いることができる。
また、溶液としては、水溶液として調製することが好適であるが、低濃度の塩、緩衝成分などを含ませることも可能である。
In the use of the inhibitor, it may be used at such a concentration that an adverse effect on plants (trees, fruits, etc.) is not generated and a desired effect can be expected. For example, it can be prepared and used as an aqueous solution prepared to have a compound concentration of 0.1 μM to 1 mM, preferably 0.5 to 500 μM, more preferably 1 to 200 μM, and particularly preferably 10 to 100 μM.
The solution is preferably prepared as an aqueous solution, but it is also possible to include low concentration salts, buffer components and the like.
(4)低温栽培処理
本発明に係る制御技術においては、カンキツ植物体を低温栽培することによって、生育枝における内生アブシシン酸含有量を、人為的に高めることが可能である。当該低温栽培を行うことが、発育枝のアブシシン酸含有量が顕著に高くなり、アブシシン酸受容シグナルを増加させることが可能となる。
(4) Low temperature cultivation treatment In the control technique according to the present invention, it is possible to artificially increase the endogenous abscisic acid content in the growing branch by low temperature cultivation of citrus plants. By carrying out the low temperature cultivation, the abscisic acid content of the developing branch becomes remarkably high, and it becomes possible to increase the abscisic acid acceptance signal.
当該低温栽培は、個体が幼若相(発芽から5年以上、好ましくは8年以上、より好ましくは10年以上、さらに好ましくは12年以上、特に好ましくは15年以上)を経過して、成熟相にある樹木に対して行うことが好ましい。特には、春枝(低温休眠後に発芽により伸長した枝)が硬化し且つ発育段階にある状態の個体に対して行うことが好適である。
また、当該技術は、成熟相にある枝を台木に接ぎ木したカンキツの苗木に対しても、施用することが可能である。
また、当該低温栽培は、施用対象の樹木が十分な葉を付けた状態で行うことが好ましい。
The low temperature cultivation is matured after the individual passes juvenile phase (5 years or more, preferably 8 years or more, more preferably 10 years or more, still more preferably 12 years or more, particularly preferably 15 years or more). It is preferable to carry out on the trees in phase. In particular, it is preferable that the method is performed on an individual in a state in which the spring branch (branch expanded by germination after cold dormancy) hardens and is in a developmental stage.
In addition, the technology can also be applied to a sapling of a citrus in which a branch in a mature phase is grafted on a rootstock.
Moreover, it is preferable that the said low temperature cultivation is performed in the state which the tree of application object attached enough leaves.
ここで、「低温栽培」とは、カンキツの内生アブシシン酸合成を促す温度での栽培を指す。具体的には、カンキツ地上部の気温が、次の温度範囲になるように栽培すればよい。
低温の上限としては、20℃以下、好ましくは19℃以下、より好ましくは18℃以下、さらに好ましくは17℃以下、特に好ましくは16℃以下であれば、カンキツにとっての低温と感知されて好適である
一方、下限としては、植物体が栽培障害を起こさない程度であれば良いが、例えば、4℃以上、好ましくは5℃以上、より好ましくは6℃以上、さらに好ましくは7℃以上、特に好ましくは8℃以上、一層好ましくは9℃以上、より好ましくは10℃以上、を挙げることができる。
当該低温栽培では、「実質的に」当該温度範囲に属する温度帯の栽培にあれば、本発明に属する範囲内の低温栽培の効果が担保される。例えば、1日の平均気温が当該範囲内の温度であれば、当該範囲を超える時間帯があったとしても、低温栽培の効果は担保される。
Here, "low temperature cultivation" refers to cultivation at a temperature that promotes endogenous abscisic acid synthesis of citrus. Specifically, it may be cultivated so that the temperature of the top part of the citrus is in the following temperature range.
The upper limit of the low temperature is preferably 20 ° C. or less, preferably 19 ° C. or less, more preferably 18 ° C. or less, still more preferably 17 ° C. or less, particularly preferably 16 ° C. or less. On the other hand, the lower limit may be such that the plant does not cause cultivation problems, for example, 4 ° C. or more, preferably 5 ° C. or more, more preferably 6 ° C. or more, still more preferably 7 ° C. or more, particularly preferably Of 8 ° C. or more, more preferably 9 ° C. or more, more preferably 10 ° C. or more.
In the low temperature cultivation, if the cultivation of the temperature zone which belongs to the “substantially” temperature range is carried out, the effect of the low temperature cultivation within the range which belongs to the present invention is secured. For example, if the daily average temperature is a temperature within the range, the effect of low temperature cultivation is secured even if there is a time zone exceeding the range.
当該低温栽培は、5日以上、好ましくは10日以上、より好ましくは12日以上、さらに好ましくは15日以上行うことで、アブシシン酸含有量の増加を促す作用が発揮される。なお、低温栽培の期間中に、数日程度(例えば3日以下、好ましくは2日以下、より好ましくは1日以下)の低温栽培の中断があったとしても、栽培時間を積算して当該期間の低温栽培を行うことで、アブシシン酸含量の増加作用が期待できる。 The low temperature cultivation is performed for 5 days or more, preferably 10 days or more, more preferably 12 days or more, and further preferably 15 days or more, whereby the effect of promoting the abscisic acid content is exhibited. In addition, even if low temperature cultivation is interrupted for several days (for example, 3 days or less, preferably 2 days or less, more preferably 1 day or less) during the low temperature cultivation period, the cultivation time is integrated and the cultivation period concerned Low temperature cultivation can be expected to increase the abscisic acid content.
[アブシシン酸受容シグナルの減少手段]
本発明においては、当該制御技術におけるアブシシン酸受容シグナルの減少手段としては、具体的に以下に示す手段を用いることが可能である。また、強い手段を講じることで、当該受容シグナルを完全に又は一時的に消失させることも可能である。
[Means for reducing abscisic acid acceptance signal]
In the present invention, the means specifically shown below can be used as a means for reducing the abscisic acid acceptance signal in the control technique. It is also possible to eliminate the receptor signal completely or temporarily by taking strong measures.
(1)アブシシン酸合成酵素阻害剤の外生的使用
本発明に係る制御技術においては、アブシシン酸合成酵素阻害剤を外生的に使用することによって、発育枝中におけるアブシシン酸受容シグナルを人為的に減少させることが可能である。
発育枝の組織内及び細胞内にアブシシン酸分解酵素阻害剤を取り込ませて、植物体の内生アブシシン酸含有量を減少させることにより、アブシシン酸受容シグナルを人為的に減少させることが可能となる。当該減少した受容シグナルによってFT遺伝子の発現が抑制され、花成誘導が抑制される。
(1) Exogenous use of abscisic acid synthetase inhibitor In the control technique according to the present invention, the abscisic acid acceptor signal during development is artificially used by using abscisic acid synthetase inhibitor exogenously. It is possible to reduce
It is possible to artificially reduce the abscisic acid receptor signal by incorporating the abscisic acidase inhibitor into the tissues and cells of the developing branch and reducing the endogenous abscisic acid content of the plant body. . The decreased receptor signal suppresses the expression of the FT gene and suppresses the induction of flowering.
ここで、‘アブシシン酸合成酵素阻害剤’としては、カンキツにおいてアブシシン酸の合成に関与する酵素を阻害する作用を有する化合物であれば、如何なるものを用いることができる。具体的には、アブシシン酸合成系の律速段階に関与する9−シス−エポキシカロテノイドジオキシゲナーゼ(NCED、ネオキサンチン酸化開裂酵素)の阻害作用を有する化合物を好適に用いることができる(※図7 参照)。
当該NCEDは、ビオラキサンチン(カロテノイド)を2分子裂開させることで、キサントキシン(ABA前駆体)合成に関与する酵素であり、アブシシン酸生合成系の律速酵素である。
Here, as the 'abscisic acid synthetase inhibitor', any compound can be used as long as it is a compound having an action of inhibiting an enzyme involved in the synthesis of abscisic acid in citrus. Specifically, a compound having the inhibitory action of 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase (NCED, neoxanthine oxidative cleavage enzyme) involved in the rate-limiting step of abscisic acid synthesis system can be suitably used (see FIG. 7). ).
The NCED is an enzyme involved in the synthesis of xanthotoxin (ABA precursor) by cleaving two molecules of violaxanthin (carotenoid), and is a rate-limiting enzyme of abscisic acid biosynthetic system.
ここで、9−シス−エポキシカロテノイドジオキシゲナーゼの阻害作用を有する化合物(NCED阻害剤の有効成分)としては、具体的には、ノルジヒドログアヤレチック酸(NDGA)、アバミン(abamine)などを挙げることができる。また、これらの誘導体(化合物の一部の官能基を他の官能基に置換したもの)であって、同様の生理機能が担保された化合物を用いることもできる。 Here, specific examples of the compound having an inhibitory action on 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase (an active ingredient of the NCED inhibitor) include nordihydroguayretic acid (NDGA) and abamine. be able to. In addition, it is also possible to use a compound of these derivatives (one having some functional group of the compound substituted by another functional group), in which the same physiological function is secured.
当該化合物の使用においては、植物体(樹勢や果実等)への悪影響がでない範囲であり且つ所望の効果が期待できる濃度で使用すれば良い。例えば、化合物濃度を0.1μM〜1mM、好ましくは0.5〜500μM、より好ましくは1〜200μM、特に好ましくは10〜100μM、に調製した水溶液として調製して用いることができる。
また、溶液としては、水溶液として調製することが好適であるが、低濃度の塩、緩衝成分などを含ませることも可能である。
In the use of the compound, it may be used at such a concentration that an adverse effect on plants (trees, fruits, etc.) is not generated and a desired effect can be expected. For example, it can be prepared and used as an aqueous solution prepared to have a compound concentration of 0.1 μM to 1 mM, preferably 0.5 to 500 μM, more preferably 1 to 200 μM, and particularly preferably 10 to 100 μM.
The solution is preferably prepared as an aqueous solution, but it is also possible to include low concentration salts, buffer components and the like.
(2)アブシシン酸受容体アンタゴニストの外生的使用
本発明に係る制御技術においては、アブシシン酸受容体アンタゴニスト(拮抗体)を外生的に使用することによって、発育枝中におけるアブシシン酸受容シグナルを人為的に減少させることが可能である。
当該外生的使用により、発育枝の組織内及び細胞内に、当該アンタゴニストを取り込ませて、アブシシン酸受容シグナルを人為的に減少させることが可能となる。
当該減少した受容シグナルによってFT遺伝子の発現が抑制され、花成誘導が抑制される。
(2) Exogenous use of abscisic acid receptor antagonist In the control technology according to the present invention, the abscisic acid receptor signal in the developmental branch is obtained by using abscisic acid receptor antagonist (antagonist) exogenously. It is possible to reduce artificially.
The exogenous use makes it possible to incorporate the antagonist into tissues and cells of the developmental branch and artificially reduce the abscisic acid receptive signal.
The decreased receptor signal suppresses the expression of the FT gene and suppresses the induction of flowering.
ここで、‘アブシシン酸受容体アンタゴニスト’(拮抗体)としては、アブシシン酸の受容体(レセプター)である「PYR(Pyrabactin resistance)蛋白質及び/又はその相同蛋白質群」と結合して、アブシシン酸受容シグナルを減少又は消失させる機能する化合物を、好適に用いることができる。 Here, as the 'abscisic acid receptor antagonist' (antagonist), it binds to "PYR (Pyrabactin resistance) protein and / or its homologous protein group," which is the abscisic acid receptor (receptor), to receive abscisic acid Functional compounds that reduce or eliminate the signal can be suitably used.
このような化合物として、アブシシン酸誘導体であっても構造的に類似しない化合物であっても良いが、具体的には、下記構造式(ii)に示すASn化合物を挙げることができる。(※構造式(ii)におけるnは、n=5〜12の整数を示す。)
ここで、ASn化合物は、アブシシン酸誘導体の一種である。当該化合物の3’側鎖の硫黄原子より先の炭素数が、5〜12であるAS5〜AS12(構造式(ii) n=5〜12)を、アブシシン酸受容体のアンタゴニストとして好適に用いることができる。
特にはAS6〜10(構造式(ii) n=6〜10)、さらにはAS6〜8(構造式(ii) n=6〜8)、さらにはAS6〜7(構造式(ii) n=6〜7)、さらにはAS6(構造式(ii) n=6)、が好適である(Takeuchi et al. Nature Chemical Biology 10, 477-482 (2014))。
また、AS化合物は、天然アブシシン酸と同じの光学異性体の立体構造関係にあるものが好適であるが、その光学異性体を含むものであっても良い。また、当該化合物は、その塩を用いることも可能である。
As such a compound, although it may be an abscisic acid derivative or a compound which is not structurally similar, an ASn compound shown in the following structural formula (ii) can be specifically mentioned. (* N in Structural Formula (ii) represents an integer of n = 5 to 12)
Here, the ASn compound is a kind of abscisic acid derivative. Preferably, AS5 to AS12 (Structural formula (ii) n = 5 to 12) in which the number of carbon atoms ahead of the sulfur atom of the 3 'side chain of the compound is 5 to 12 are preferably used as an abscisic acid receptor antagonist Can.
In particular, AS 6 to 10 (structural formula (ii) n = 6 to 10), further AS 6 to 8 (structural formula (ii) n = 6 to 8), and further AS 6 to 7 (structural formula (ii) n = 6 ~ 7), and further AS6 (Structural formula (ii) n = 6), are preferred (Takeuchi et al. Nature Chemical Biology 10, 477-482 (2014)).
The AS compound is preferably one having the same stereoisomer relationship of optical isomers as natural abscisic acid, but may contain the optical isomers. Moreover, it is also possible to use the salt for the said compound.
これらアンタゴニスト化合物の使用においては、植物体(樹勢や果実等)への悪影響がでない範囲であり且つ所望の効果が期待できる濃度で使用すれば良い。例えば、化合物濃度を0.1μM〜1mM、好ましくは0.5〜500μM、より好ましくは1〜200μM、特に好ましくは10〜100μM、に調製した水溶液として調製して用いることができる。
また、溶液としては、水溶液として調製することが好適であるが、低濃度の塩、緩衝成分などを含ませることも可能である。
In the use of these antagonist compounds, they may be used at such a concentration that an adverse effect on plants (trees, fruits, etc.) is not caused and a desired effect can be expected. For example, it can be prepared and used as an aqueous solution prepared to have a compound concentration of 0.1 μM to 1 mM, preferably 0.5 to 500 μM, more preferably 1 to 200 μM, and particularly preferably 10 to 100 μM.
The solution is preferably prepared as an aqueous solution, but it is also possible to include low concentration salts, buffer components and the like.
[着花制御剤]
本発明においては、上記した「外生的使用」に用いることが可能な各化合物について、それぞれを有効成分とする着花制御剤とすることが可能となる。
具体的には、「アブシシン酸」、「アブシシン酸受容体アゴニスト」、又は「アブシシン酸分解酵素阻害作用を有する化合物」、については、着花促進剤の有効成分とすることできる。また、これらに属する化合物を2以上含む混合剤とすることもできる。
一方、「アブシシン酸受容体アンタゴニスト」、「アブシシン酸合成酵素阻害作用を有する化合物」については、着花抑制剤の有効成分とすることができる。また、これらに属する化合物を2以上含む混合剤とすることもできる。
[Flow control agent]
In the present invention, each compound that can be used for the above-mentioned "exogenous use" can be used as a flowering control agent containing each as an active ingredient.
Specifically, “abscisic acid”, “abscisic acid receptor agonist”, or “compound having abscisic acid degrading enzyme inhibitory activity” can be used as an active ingredient of a flowering promoter. Moreover, it can also be set as the mixing agent which contains two or more compounds which belong to these.
On the other hand, “abscisic acid receptor antagonist” and “compound having abscisic acid synthetase inhibitory activity” can be used as an active ingredient of a flowering inhibitor. Moreover, it can also be set as the mixing agent which contains two or more compounds which belong to these.
剤形態としては、上記した‘外生的使用’に適した剤形態であれば、如何なる形態を採用することも可能である。ただし、最終使用時において溶液状態とすることが可能な剤形態であることが好ましい。
例えば、液状、アンプル状、濃縮液状などの液体状の剤形態を挙げることができる。また、粉末状、顆粒状、粘土状、練物状、ペースト状などの固体状又は半固体状の剤形態を挙げることができる。
また、賦型剤等と混ぜて固形にした形態、カプセルに充填する形態などを採用することができる。
また、ゲル化剤、粘性剤、崩壊剤、乳化剤、色素、抗酸化剤、緩衝成分等を含む形態とすることも可能である。
As the agent form, any form can be adopted as long as it is an agent form suitable for the above-mentioned 'exogenous use'. However, it is preferable that it is an agent form which can be put into a solution state at the time of final use.
For example, liquid agent forms such as liquid, ampoule, and concentrated liquid can be mentioned. In addition, solid or semi-solid forms such as powder, granules, clays, pastes, and the like can be mentioned.
Moreover, the form solidified by mixing with an excipient etc., the form filled with a capsule, etc. are employable.
Moreover, it is also possible to make it the form containing a gelling agent, a viscosity agent, a disintegrant, an emulsifier, a pigment, an antioxidant, a buffer component and the like.
[果実の着果制御、隔年結果制御]
本発明においては、上記着花制御手段を用いることによって、当該技術を施用した樹木がつける果実の着果量(着果数)を、直接的に制御することが可能となる。
具体的には、着花数の減少制御により、果実の着果量を減らして樹勢を維持する制御が可能となる。また、着花数の増加制御により、果実の着果量を直接的に増やす制御が可能となる。
[Control of fruit set, every year result control]
In the present invention, by using the above-mentioned flowering control means, it becomes possible to directly control the amount of fruit setting (the number of fruit setting) of the fruits which the tree to which the technology is applied carries.
Specifically, the control to reduce the number of flowering allows control to reduce the amount of fruit set on the fruit and maintain the vigor. In addition, by controlling the increase in the number of flowering, it is possible to control to directly increase the amount of fruit setting of fruits.
本発明では、当該着花制御技術を利用して結実量を直接的に制御することで、カンキツの隔年結果の問題を解消して、カンキツの連年安定生産を実現することが可能となる。
In the present invention, by directly controlling the fruiting amount using the flowering control technology, it becomes possible to solve the problem of the result of every two years of citrus and to realize the continuous annual production of citrus.
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の範囲はこれらにより限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described by way of examples, but the scope of the present invention is not limited by these.
[試験例1]『低温栽培処理実験』
ウンシュウミカンの苗木に低温栽培処理を行った場合において、茎中のABA含量及びCiFT遺伝子発現量、並びに、苗木の着花数との関係を評価した。
[Test Example 1] "Low temperature cultivation treatment experiment"
When low-temperature cultivation was applied to seedlings of Satsuma mandarin orange, the relationship between the ABA content in the stem and the amount of CiFT gene expression, and the number of flowering seedlings was evaluated.
・1-1 )「実験手順及び条件」
(1) 低温栽培処理(花成誘導処理)
ウンシュウミカン(品種:興津早生)の1年生接ぎ木苗(10本以上の側枝をつけたポット植え個体:1サンプリングにつき3個体×5サンプリング分)を準備し、春枝が硬化した後である2011年6月22日に「低温栽培処理」を開始した。当該低温処理は、苗を自然光の採光が可能なガラス室に移動して、室温15℃に調整した恒温条件で栽培することにより行った。(※ ウンシュウミカン(C. unshiu)が属するカンキツ属の植物は、気温15℃程度での低温状態の栽培を行うことで、花成が誘導される。)
・ 1-1) "Experimental procedure and conditions"
(1) Low temperature cultivation treatment (flowering induction treatment)
A year-round grafted tree seedling (planted individual with 10 or more side branches: 1 plant 3 x 5 samplings per sampling) of Satsuma mandarin orange (variety: Okitsu early life), 2011 after the spring branch hardens "Low temperature cultivation processing" was started on the 22nd. The low temperature treatment was carried out by transferring the seedlings to a glass room capable of natural light, and cultivating them under a constant temperature condition adjusted to a room temperature of 15 ° C. (※ Citrus plants to which Satsuma mandarin orange (C. unshiu) belongs flowering is induced by cultivating at a low temperature of about 15 ° C.)
(2) サンプリング
低温処理開始日から0.5ヶ月毎に、3つの苗木を回収した。そして、RNA抽出用及びABA含量測定用の試料として、各苗木から2〜3本の側枝を丸ごと採取及び切断し、計3苗木分の側枝をまとめて液体窒素で凍結し、粉砕後に−80℃で保存した。
(2) Sampling Three seedlings were collected every 0.5 months from the start of the low temperature treatment. Then, as samples for RNA extraction and ABA content measurement, 2 to 3 side branches are collected and cut out from each seedling in total, side branches for a total of 3 seedlings are collected together, frozen with liquid nitrogen, and crushed at -80 ° C. Saved with.
(3) 25℃恒温栽培処理(花芽形成)及び花成誘導能の評価
側枝を切断した後の苗木は、3個体とも全摘葉し(葉を全部摘んで)、室温25℃の恒温条件にて約4週間(※ 発芽数がプラトーに達しこれ以上発芽しなくなる期間)栽培し、枝の節ごとの発芽日、芽数、芽の種類(葉芽、直花、有葉花)を記録した。
そして、これらの観察結果を基に、「発芽が観察された1節」あたりの「花芽形成数(着花数=直花数+有葉花数)」の平均値を算出した。
(3) Evaluation of 25 ° C. constant temperature cultivation treatment (flower bud formation) and flowering inducibility All three seedlings of the seedlings after cutting the side branches are defoliated (all the leaves are picked) under constant temperature conditions of room temperature 25 ° C. The plants were cultivated for about 4 weeks (※ period in which the number of sprouts reached a plateau and no longer sprouting), and the sprouting date, number of sprouts and type of sprouts (leaf sprouts, straight flowers, leafy flowers) for each node of branches were recorded.
And based on these observation results, the average value of "the number of flower bud formation (number of flowerings = number of direct flowers + number of leafed flowers)" per one node where germination was observed was calculated.
(4) ABA含量の測定
上記(2)で採取した凍結試料に対して、重水素標識したABA(D-ABA, [2H6]ABA)を内部標準として加えたアセトンを抽出溶媒として使用して、アセトン抽出を行った。次に、ロータリーエバポレーターで減圧濃縮して得られた残渣に対して、超純水および酢酸エチル-ヘキサン混合液(1:1)を等量ずつ加えて、固形分を溶解させた。
減圧濃縮した後、塩酸と水飽和酢酸エチルを加えて懸濁し、遠心分離を行って有機層を分離した。当該有機層を減圧濃縮してメタノールに溶解させた。
メチル化処理後、GC-MS機器(QP2010, 島津社製)を用いて、内部標準(D-ABA)をベースとして、湿重1gあたりのABA含量(ng/gFW)を測定した。
(4) Measurement of ABA content Acetone obtained by adding deuterium labeled ABA (D-ABA, [2H6] ABA) as an internal standard to the frozen sample collected in (2) above is used as an extraction solvent, Acetone extraction was performed. Next, to the residue obtained by vacuum concentration with a rotary evaporator, equal amounts of ultrapure water and an ethyl acetate-hexane mixed solution (1: 1) were added to dissolve the solid content.
After concentration under reduced pressure, hydrochloric acid and water-saturated ethyl acetate were added and suspended, and centrifugation was performed to separate the organic layer. The organic layer was concentrated under reduced pressure and dissolved in methanol.
After the methylation treatment, the ABA content (ng / gFW) per 1 g wet weight was measured based on an internal standard (D-ABA) using a GC-MS instrument (QP2010, manufactured by Shimadzu Corporation).
(5) CiFT遺伝子の発現定量(定量的RT-PCR)
上記(2)で得た凍結試料から、ISOGEN(Wako社製)及びRNeasy Plant(QIAGEN社製)を使用して、total RNA(全RNA)を抽出した。得られたRNAを鋳型として、Quantitect Reverse Transcription kit(QIAGEN社製)を用いて、cDNA(相補鎖DNA)を合成した。
(5) Determination of CiFT gene expression (quantitative RT-PCR)
From the frozen sample obtained in (2) above, total RNA (total RNA) was extracted using ISOGEN (manufactured by Wako) and RNeasy Plant (manufactured by QIAGEN). CDNA (complementary strand DNA) was synthesized using the obtained RNA as a template and using Quantitect Reverse Transcription kit (manufactured by QIAGEN).
各試料からのcDNAを用いて、リアルタイムPCR法により、CiFT遺伝子の定量的RT-PCRを行った。
CiFT遺伝子の増幅プライマーとしては、配列表の配列番号1(CiFT-f)及び配列番号2(CiFT-r)に示す塩基配列からなるDNAプライマーセットを用いた。なお、ここで使用するCiFT遺伝子用のプライマーセットは、ウンシュウミカンで単離された類似する3種類のCiFT1〜3(CiFT1 配列番号23 アクセション番号AB027456;、CiFT2 配列番号24 アクセション番号AB301934;、CiFT3 配列番号25 アクセション番号AB301935)、の全ての共通配列をターゲットとしたプライマーセットである(非特許文献2:Nishikawa et al. 2007 参照)。
また、内部標準遺伝子としてはEF1α遺伝子を採用し、その増幅プライマーとしては、配列表の配列番号3(QTEF1a-f)及び配列番号4(QTEF1a-r)に示す塩基配列からなるDNAプライマーセットを用いた。
リアルタイムPCRは、Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR system(Applied Biosystems社製)を分析装置として用いて行った。PCR反応は、Power SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems)を使用し、上記鋳型cDNAとプライマーセットを用いて、アニーリング温度60℃でのPCR反応を行った。PCR反応中の増幅産物の蛍光強度をリアルタイムで経時的に測定した。
当該反応は3反復反応行い、測定対象である「CiFT増幅プライマーを用いたPCR反応の測定値(平均値)」を、内部標準である「EF1α増幅プライマーを用いたPCR反応の測定値(平均値)」で除した値を求め、CiFT遺伝子の発現量として算出した。
Quantitative RT-PCR of CiFT gene was performed by real-time PCR using cDNA from each sample.
As an amplification primer of the CiFT gene, a DNA primer set consisting of the nucleotide sequences shown in SEQ ID NO: 1 (CiFT-f) and SEQ ID NO: 2 (CiFT-r) in the sequence listing was used. The primer set for the CiFT gene used here is three similar CiFT1 to 3 (CiFT1 SEQ ID NO: 23 accession number AB027456; and CiFT2 SEQ ID NO: 24 accession number AB301934; CiFT3 is a primer set targeting all common sequences of SEQ ID NO: 25 accession number AB 301935) (see Non-Patent Document 2: Nishikawa et al. 2007).
In addition, the EF1α gene is adopted as an internal standard gene, and as an amplification primer thereof, a DNA primer set consisting of the nucleotide sequences shown in SEQ ID NO: 3 (QTEF1a-f) and SEQ ID NO: 4 (QTEF1a-r) in the sequence listing is used It was.
Real-time PCR was performed using Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR system (manufactured by Applied Biosystems) as an analyzer. The PCR reaction was performed at an annealing temperature of 60 ° C. using Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), using the template cDNA and the primer set. The fluorescence intensity of the amplification product in the PCR reaction was measured over time in real time.
The reaction is performed in triplicate, and "measurement value (average value) of PCR reaction using CiFT amplification primer" to be measured is measured value of PCR reaction using internal standard "EF1α amplification primer (average value The value obtained by dividing by “)” was determined and calculated as the expression level of the CiFT gene.
・1-2 )「結果」
その結果、図1に示すように、ウンシュウミカン苗木に15℃の低温栽培処理(花成誘導処理)を開始することによって、茎中のABA含量が著しく上昇し、当該低温栽培処理開始から約0.5ヶ月後に、ABA含量が最大となることが示された(図1(A) 参照)。
また、茎中のABA含量の上昇と相関するように、茎中のCiFT遺伝子の発現量も上昇し、当該低温栽培処理開始から1〜1.5ヶ月後に、遺伝子発現量が最大になることが示された(図1(A) 参照)。
そして、茎中のFT遺伝子の上昇と相関して苗木の花芽形成能も上昇し、当該低温栽培処理開始から1.5〜2ヶ月後の苗木では、発芽が観察された節あたり0.7〜1個もの着花が可能な状態(花成誘導がされた状態)、となることが示された(図1(B) 参照)。
・ 1-2) "Result"
As a result, as shown in FIG. 1, by starting low temperature cultivation treatment (flowering induction treatment) at 15 ° C. for Satsuma mandarin orange saplings, the ABA content in the stem increases remarkably, and approximately 0.5 from the start of the low temperature cultivation treatment. After the month, it was shown that the ABA content became maximum (see FIG. 1 (A)).
In addition, the expression level of the CiFT gene in the stem also increases, correlating with the increase in the ABA content in the stem, and it is shown that the gene expression level is maximized 1 to 1.5 months after the start of the low temperature cultivation treatment. (See Figure 1 (A)).
And, the flower bud formation ability of the seedling is also increased in correlation with the rise of the FT gene in the stem, and in the seedling 1.5 to 2 months after the start of the low temperature cultivation treatment, 0.7 to 1 attachment per node where germination was observed It has been shown that the flower is ready (flower induced) (see FIG. 1 (B)).
[試験例2]『低温栽培処理実験(試験例1の追試)』
試験例1の実験年度(2011年)とは異なる年度(2013年)において、低温栽培処理実験の追試を行って、再現性を確認した。
[Test Example 2] "Low-temperature cultivation treatment experiment (additional test of Test Example 1)"
In a year (2013) different from the experimental year (2011) of Test Example 1, a repeat test of the low temperature cultivation treatment experiment was conducted to confirm the reproducibility.
・2-1 )「実験手順及び条件」
ウンシュウミカン(品種:興津早生)の1年生接ぎ木苗(10本以上の側枝をつけたポット植え個体:1サンプリングにつき3個体×5サンプリング分)を準備し、春枝が硬化した後である2013年7月3日に、(1)「低温栽培処理」(花成誘導処理)を開始した。その後、(2) サンプリング、(3) 25℃恒温栽培処理及び花成誘導能の評価、(4) ABA含量の測定、(5) CiFT遺伝子の発現定量(定量的RT-PCR)を行った。(※ 基本的な実験操作等は、試験例1に記載した方法と同様にして行った。)
なお、(2) 花成誘導能の評価については、苗木全体にどのくらいの花芽が形成されたかも評価するため、「苗木の全春枝上の1節」あたりの「花芽形成数(着花数=直花数+有葉花数)」の平均値も算出した。
・ 2-1) "Experimental procedure and conditions"
We prepare year-round grafted tree seedling (plant planted individual with 10 or more side branches: 1 plant 3 × 5 sampling per sampling) of Satsuma mandarin orange (variety: Okitsu early life), and it is after curing the spring branch 7 2013 On March 3, (1) "low temperature cultivation treatment" (flowering induction treatment) was started. Thereafter, (2) sampling, (3) 25 ° C. constant temperature cultivation treatment and evaluation of flowering ability, (4) measurement of ABA content, and (5) quantification of expression of CiFT gene (quantitative RT-PCR) were performed. (※ Basic experimental operation etc. were carried out in the same manner as the method described in Test Example 1.)
(2) Regarding the evaluation of flowering inducibility, in order to evaluate how many flower buds were formed in the whole seedling, the “number of flower buds formed per one node on the whole spring branch of the seedling (number of flowering = The average value of "the number of direct flowers + the number of leafy flowers)" was also calculated.
・2-2 )「結果」
その結果、図2に示すように、ウンシュウミカン苗木に15℃の低温栽培処理(花成誘導処理)を開始することによって、茎中のABA含量が著しく上昇し、当該低温栽培処理開始から約0.5ヶ月後に、ABA含量が最大となることが示された(図2(A) 参照)。
また、茎中のABA含量の上昇と相関するように、茎中のCiFT遺伝子の発現量も上昇し、当該低温栽培処理開始から1.5ヶ月から2ヶ月後にかけて、遺伝子発現量が急激に上昇することが示された(図2(A) 参照)。
そして、茎中のFT遺伝子の上昇と相関して苗木の花芽形成能も上昇し、当該低温栽培処理開始から2ヶ月後の苗木では、発芽が観察された節あたり約0.7個もの着花が可能な状態(花成誘導がされた状態)、となることが示された(図2(B) 参照)。
また、当該2ヶ月後の苗木では、「苗木全体(発芽節と未発芽節の両方を含んだ場合)」で見た場合においても、1節あたり約0.3個もの着花が可能な状態であることが示された(図2(C) 参照)。
・ 2-2) "Result"
As a result, as shown in FIG. 2, by starting low temperature cultivation treatment (flowering induction treatment) at 15 ° C. for Satsuma mandarin orange saplings, the ABA content in the stem increases remarkably, and approximately 0.5 from the start of the low temperature cultivation treatment. After the month, it was shown that the ABA content became maximum (see FIG. 2 (A)).
In addition, the expression level of the CiFT gene in the stem is also increased in correlation with the increase in the ABA content in the stem, and the gene expression level is rapidly increased from 1.5 months to 2 months after the start of the low temperature cultivation treatment. Was shown (see FIG. 2 (A)).
And, the flower bud formation ability of the seedling is also increased in correlation with the rise of the FT gene in the stem, and in the seedling two months after the start of the low temperature cultivation treatment, about 0.7 flowers can be formed per node where germination was observed. It was shown that it was in the normal state (the state in which flowering was induced) (see FIG. 2 (B)).
In addition, in the sapling after 2 months concerned, even when it is seen in "the whole seedling (when both sprouted nodes and ungerminated nodes are included)", about 0.3 flowers can be set per one node. Was shown (see FIG. 2 (C)).
当該試験例の結果から、試験例1の結果(カンキツ苗木の低温栽培⇒ABA含量上昇⇒FT遺伝子発現上昇・花成誘導がおこる現象)に、再現性があることが確認された。
また、ここで誘導された花芽の着花量は、苗木全体で見た場合でも十分な量であることが確認された。
From the results of the test example, it was confirmed that the results of Test Example 1 (low temperature cultivation of citrus seedlings ⇒ ABA content increase 現象 phenomenon in which FT gene expression increase and flowering induction occur) are reproducible.
In addition, it was confirmed that the flowering amount of flower buds induced here is a sufficient amount even when seen in the whole seedling.
[試験例3]『全摘葉した苗木での低温栽培処理実験(比較実験)』
ウンシュウミカンの苗木を全摘葉した場合における低温栽培処理の影響を調べた。
[Test Example 3] "Low-temperature cultivation treatment experiment with totally defoliated seedlings (comparative experiment)"
The effects of low temperature cultivation treatments were investigated when whole seedlings of Satsuma mandarin orange were defoliated.
・3-1 )「実験手順及び条件」
ウンシュウミカン(品種:興津早生)の1年生接ぎ木苗(10本以上の側枝をつけたポット植え個体:1サンプリングにつき3個体×5サンプリング分)を準備し、春枝が硬化した後である2011年6月22日に全個体の全ての葉を摘む作業(全摘葉)を行った。そして同日に、(1)「低温栽培処理」(花成誘導処理)を開始した。その後、(2) サンプリング、(3) 25℃恒温栽培処理及び花成誘導能の評価、(4) ABA含量の測定、(5) CiFT遺伝子の発現定量(定量的RT-PCR)を行った。(※ 基本的な実験操作等は、試験例1に記載した方法と同様にして行った。)
・ 3-1) "Experimental procedure and conditions"
A year-round grafted tree seedling (planted individual with 10 or more side branches: 1 plant 3 x 5 samplings per sampling) of Satsuma mandarin orange (variety: Okitsu early life), 2011 after the spring branch hardens The work (total defoliation) of picking all the leaves of all individuals was performed on the 22nd. Then, on the same day, (1) "low temperature cultivation treatment" (flowering induction treatment) was started. Thereafter, (2) sampling, (3) 25 ° C. constant temperature cultivation treatment and evaluation of flowering ability, (4) measurement of ABA content, and (5) quantification of expression of CiFT gene (quantitative RT-PCR) were performed. (※ Basic experimental operation etc. were carried out in the same manner as the method described in Test Example 1.)
・3-2 )「結果」
その結果、図3に示すように、葉を全摘葉した苗木では、15℃の低温栽培処理(花成誘導処理)を開始した場合であっても、茎中のABA含量の上昇は全く起らなかった(図3(A) 参照)。また、茎中のCiFT遺伝子の発現量も全く上昇することなく(図3(A) 参照)、苗木は着花が可能な苗木(花成誘導がされた状態)には「ならない」ことが示された(図3(B) 参照)。
当該結果が示すように、低温栽培処理による花成誘導シグナル発生には、葉が必要であることが示された。
3-2) "Result"
As a result, as shown in FIG. 3, even in the case where the low temperature cultivation treatment (flowering induction treatment) was started at 15 ° C., the increase in the ABA content in the stem occurred at all in the seedlings whose leaves were completely defoliated. There was no (see FIG. 3 (A)). In addition, the expression level of the CiFT gene in the stem did not increase at all (see Fig. 3 (A)), and it was shown that the seedling "is not a seedling capable of flowering (in a state where flowering is induced)". (See Figure 3 (B)).
As the result shows, it was shown that the leaf is necessary for the flower induction signal generation by the low temperature cultivation treatment.
[試験例4]『ABA含量と花成誘導能との相関』
茎中のABA含量が、CiFT遺伝子の発現量及び苗木の花形成誘導能と相関関係を有するかを検証した。
[Test Example 4] "Correlation between ABA content and flower inducibility"
It was verified whether the ABA content in the stem had a correlation with the expression level of the CiFT gene and the ability to induce flower formation of the seedlings.
・4-1 )「茎中のABA含量とCiFT遺伝子発現量との相関」
試験例1〜3の栽培実験(及び2012年に行った同様の実験)のデータを用いて、茎中のABA含量とCiFT遺伝子発現量との相関を調べた。
グラフの横軸に、低温栽培処理開始後の「茎中ABA含量の最大値」を、グラフの縦軸に「茎中CiFT遺伝子発現量の最大値」をプロットして、散布図における当該2項目のデータ群間の相関を調べ、寄与率(R2)を算出した。
(※ ここで、‘寄与率’とは、相関係数「R」の二乗を示す値であり、最大値は1.0となる。寄与率が0.7〜1.0の範囲にある場合、対比する2つのデータ群の間に、強い相関があると認められる。)
・ 4-1) “Correlation between ABA content in stem and CiFT gene expression level”
Using the data of the cultivation experiments of Experiment Examples 1 to 3 (and the same experiment performed in 2012), the correlation between the ABA content in the stem and the CiFT gene expression level was examined.
Plot the “maximum value of ABA content in stem” after the start of low-temperature cultivation treatment on the horizontal axis of the graph and “maximum value of CiFT gene expression level in the stem” on the vertical axis of the graph, The correlation between the data groups in was examined to calculate the contribution rate (R 2 ).
(* Here, 'contribution factor' is a value indicating the square of the correlation coefficient “R”, and the maximum value is 1.0. When the contribution factor is in the range of 0.7 to 1.0, two data to be compared There is a strong correlation between the groups.)
その結果、図4(A)が示すように、寄与率(R2)が0.8973という高い値となり、「茎中のABA含量の最大値(横軸)」と「茎中のCiFT遺伝子発現量の最大値(縦軸)」の間には、強い相関関係(正の相関)があることが示された。 As a result, as shown in FIG. 4 (A), the contribution rate (R 2 ) becomes a high value of 0.8973, and “the maximum value of ABA content in the stem (horizontal axis)” and “the expression amount of CiFT gene in the stem It was shown that there is a strong correlation (positive correlation) between the “maximum values (vertical axis)”.
・4-2 )「茎中のABA含量と花成誘導能との相関」
上記と同様にして、茎中のABA含量と発芽節あたりの着花数との相関を調べた。グラフの横軸に、低温栽培処理開始後の「茎中ABA含量の最大値」、グラフの縦軸に「苗木を25℃恒温栽培処理した際の発芽節あたりの着花数(苗木の花成誘導能を表す値)」をプロットして、散布図における当該2項目のデータ群間の相関を調べた。
4-2) "Correlation between ABA content in stem and flower induction ability"
Similar to the above, the correlation between the ABA content in the stem and the number of flowerings per sprouting node was examined. On the horizontal axis of the graph, “maximum of ABA content in stem after start of low temperature cultivation treatment”, on the vertical axis of the graph, “number of flowering per sprouting node when seedlings are subjected to constant temperature cultivation at 25 ° C. The values representing inducibility were plotted to examine the correlation between the two data groups in the scatter plot.
その結果、図4(B)が示すように、寄与率(R2)が0.9498という高い値であり、「茎中のABA含量の最大値(横軸)」と「苗木を25℃恒温栽培処理した際の発芽節あたりの着花数(縦軸)」の間には、強い相関関係(正の相関)があることが示された。
As a result, as shown in FIG. 4 (B), the contribution rate (R 2 ) is a high value of 0.9498, and “maximum value of ABA content in stem (horizontal axis)” and “temperature-controlled cultivation of seedlings at 25 ° C. It was shown that there is a strong correlation (positive correlation) between the number of flowerings per sprouting node (vertical axis) at the time of germination.
[試験例1〜4からの考察]
試験例1〜4の結果が示すように、低温により花成誘導が誘起されるカンキツ種(カンキツ属に属する植物種)では、低温栽培処理を行うことにより、低温状態であることがシグナルとして感知され、発育枝の茎中のABA含量が著しく上昇し、これによりFT遺伝子発現が上昇することが明らかになった。
また、茎中ABA含量とFT遺伝子発現量との間、茎中ABA含量と苗木の花成誘導能との間には、それぞれ強い相関関係(正の相関)があることが明らかになった。
以上から、低温により花成誘導が誘起されるカンキツ種(カンキツ属に属する植物種)では、「ABA含量上昇が花成誘導を促進する花成誘導機構」が存在することが明らかになった。
[Discussion from Test Examples 1 to 4]
As the results of Test Examples 1 to 4 indicate, in the case of citrus species (plant species belonging to the genus Citrus) in which flowering induction is induced by low temperature, the low temperature cultivation process senses that the low temperature state is a signal. It became clear that the ABA content in the stem of the developmental branch was significantly increased, which led to an increase in FT gene expression.
In addition, it was revealed that there is a strong correlation (positive correlation) between the ABA content in the stem and the FT gene expression level, and between the ABA content in the stem and the flowering inducibility of the seedlings.
From the above, it has become clear that in the citrus species (plant species belonging to the genus Citrus) in which flowering induction is induced by low temperature, there is a "flowering induction mechanism in which an increase in ABA content promotes flowering induction".
[試験例5]『外生ABA処理によるCiFT遺伝子発現量の制御』
外生ABA処理を行うことによって、茎中CiFT遺伝子発現量の制御が可能かを調べた。
・5-1 )「実験手順及び条件」
ウンシュウミカン(品種:興津早生)の1年生接ぎ木苗(10本以上の側枝をつけたポット植え個体:1処理区につき3個体×2処理区)を準備し、自然光の採光が可能なガラス室に移動して、室温25℃に調整した恒温条件(低温にならない条件:内在的花成誘導を回避する条件)で栽培した。
500μM ABA((±)-ABA)水溶液を苗木に散布し、散布直後(0時間)及び散布から24時間経過後に、側枝と葉を別々に採取し切断した。これらを苗木ごとに別々に凍結粉砕して−80℃で保存した。
対照として、500μM ABA水溶液の代わりに純水を散布し、同様にして24時間経過後に側枝を採取して切断し、凍結粉砕して−80℃で保存した。
その後、各試料を用いて、CiFT遺伝子発現量の定量を行った。(※ 基本的な実験手順は、試験例1に記載と同様にして行った。)
[Test Example 5] "Control of CiFT gene expression level by exogenous ABA treatment"
By performing exogenous ABA treatment, it was examined whether control of CiFT gene expression level in the stem was possible.
・ 5-1) "Experimental procedure and conditions"
Prepare annual freshwood graft (seed planted individuals with 10 or more side branches: 3 individuals × 2 treatment areas per treatment area) of Satsuma mandarin orange (variety: Okitsu early life), in a glass room where natural light can be collected It moved and cultivated under constant temperature conditions (conditions which do not become low temperature: conditions which avoid an intrinsic flowering induction) adjusted to room temperature 25 ° C.
An aqueous solution of 500 μM ABA ((±) -ABA) was sprayed on the seedlings, and side branches and leaves were separately collected and cut immediately after spraying (0 hour) and 24 hours after spraying. These were separately freeze-crushed for each sapling and stored at -80 ° C.
As a control, pure water was sprayed instead of 500 μM ABA aqueous solution, and after 24 hours similarly, the side branch was collected, cut, frozen and stored at -80 ° C.
Thereafter, each sample was used to quantify the amount of CiFT gene expression. (※ The basic experimental procedure was the same as described in Test Example 1.)
・5-2 )「結果」
その結果、図5に示すように、外生ABAを散布した処理区の苗木では、茎及び葉のCiFT遺伝子の発現量が急激に上昇することが示された。特に「茎」においては、処理前の約6.5倍と急激に上昇することが示された(図5(A) 参照)。
当該結果から、ABAが茎中FT遺伝子発現量の上昇作用を有する物質であることが、実験的に確認された。
また、重要な点であるが、当該結果から、外生ABAの添加によって茎中のABA含量を制御することで、FT遺伝子の発現量が人為的に制御可能となることが確認された。
・ 5-2) "Result"
As a result, as shown in FIG. 5, it was shown that the expression amount of CiFT gene in stems and leaves was rapidly increased in the seedlings of the treated section sprayed with exogenous ABA. In particular, in the “stem”, it was shown to rise sharply to about 6.5 times that before treatment (see FIG. 5 (A)).
From the results, it was experimentally confirmed that ABA is a substance having an action of increasing the amount of FT gene expression in stems.
Also, it is important to note that from the results, it is possible to artificially control the expression level of the FT gene by controlling the ABA content in the stem by the addition of exogenous ABA.
[試験例6]『ABA含量に関与する酵素』
茎中ABA含量の制御を可能とする酵素群の探索を行った。
[Test Example 6] "enzyme involved in ABA content"
We searched for enzymes that could control ABA content in stems.
・6-1 )「実験手順及び条件」
試験例1で調製した凍結試料について、ABAの合成分解代謝に関与する酵素群の各遺伝子について、定量的RT-PCR法による発現解析を行った。
当該実験においては、各代謝酵素遺伝子の発現量の推移を調べることによって、それらの遺伝子発現により生成される「各代謝酵素含量の推移」を把握することが可能となる。(※ 当該合成系に関与する酵素遺伝子の発現量が、遺伝子産物である酵素の活性により生成される反応生成物量と相関があるという事実が報告されている(Kato et al. (2004); Plant Physiology 134: p824-837、Kato et al. (2006); Journal of Experimental Botany 57: p2153-2164)。
· 6-1) "Experimental procedure and conditions"
The frozen samples prepared in Test Example 1 were subjected to quantitative RT-PCR expression analysis for each gene of enzymes involved in the synthetic degradation metabolism of ABA.
In the said experiment, it becomes possible by grasping | ascertaining transition of the expression level of each metabolic enzyme gene to grasp | ascertain "transition of each metabolic enzyme content" produced | generated by those gene expression. (* It has been reported that the expression level of the enzyme gene involved in the synthesis system is correlated with the amount of reaction product produced by the activity of the enzyme that is the gene product (Kato et al. (2004); Plant Physiology 134: p824-837, Kato et al. (2006); Journal of Experimental Botany 57: p2153-2164).
実験手順として、具体的には、カロテノイド代謝に関する酵素として、PSY(phytoene synthase), PDS(phytoene desaturase), ZDS(ζ-carotene desturase), LCYe(lycopene ε-cyclase), LCYb(lycopene β-cyclase), HYb(β-ring hydroxylase), ZEP(zeaxanthin epoxidase)に注目して、各遺伝子発現量の定量を行った。
また、ビオラキサンチン(カロテノイド)からキサントキシン(ABA前駆体)の合成に関与するNCED3(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase 3:ABA合成系の律速酵素)及びABA分解に直接関与するA8OX(ABA 8'-hydroxylase:ABA分解酵素)について、遺伝子発現量の定量を行った。
RT-PCRに用いたプライマーとしては、表2に示した組み合わせの各プライマーセットを用いた。表中の「-f」はforward primer、「-r」はreverse primerを示す。(※ 基本的な実験操作等は、試験例1に記載した方法と同様にして行った。)
As an experimental procedure, specifically, as enzymes related to carotenoid metabolism, PSY (phytoene synthase), PDS (phytoene desaturase), ZDS (ζ-carotene desturase), LCYe (lycopene ε-cyclase), LCYb (lycopene β-cyclase) The amount of each gene expression was quantified focusing on HYb (β-ring hydroxylase) and ZEP (zeaxanthin epoxidase).
In addition, NCED3 (9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase 3: rate-limiting enzyme of ABA synthetic system) involved in the synthesis of xanthotoxin (ABA precursor) from violaxanthin (carotenoid) and A8OX (ABA 8'-) directly involved in ABA degradation The amount of gene expression was quantified for hydroxylase (ABA degrading enzyme).
As a primer used for RT-PCR, each primer set of the combination shown in Table 2 was used. In the table, "-f" indicates a forward primer and "-r" indicates a reverse primer. (※ Basic experimental operation etc. were carried out in the same manner as the method described in Test Example 1.)
・6-2 )「結果」
その結果、図6に示すように、「ABA含量」の推移は、ABA合成酵素である「NCED3含量」の推移との間では、正の相関が認められた。また、ABA分解酵素である「A8OX含量」の推移とは、負の相関が認められた。
・ 6-2) "Result"
As a result, as shown in FIG. 6, a positive correlation was recognized between the transition of “ABA content” and the transition of “NCED3 content”, which is an ABA synthetase. Moreover, a negative correlation was recognized with the transition of "A8OX content" which is an ABA degrading enzyme.
(1) NCED3(ABA合成酵素)の推移
低温栽培処理の開始(※試験例1の栽培実験)によってABA含量が上昇している苗木(低温栽培処理開始0.5ヶ月後)の茎では、「NCED3」の発現量も上昇していることが示された。そして、ABA含量が減少に転じている苗木では(低温栽培処理開始1〜2ヶ月後)では、「NCED3」の発現量も減少に転じていることが示された(図6(A),(C) 参照)。
また、全摘葉した苗木に低温栽培処理(※試験例3の栽培実験)を行った場合、ABA含量は減少する傾向を示したが、「NCED3」の発現量も同様に減少する傾向を示していた(図6(B),(D))。
これらの結果が示すように、ABA合成酵素である「NCED3」の遺伝子発現パターンは、ABA含量の推移と完全に一致する挙動を示すことが確認された。
以上から、茎中の「ABA含量」の推移は、ABA合成酵素である「NCED3酵素の含量」の推移と、正の相関があると認められた。
(1) Transition of NCED3 (ABA synthetase) In the stems of seedlings (0.5 months after the start of low temperature cultivation treatment), the content of ABA is increased by the start of low temperature cultivation treatment (* experiment example 1 experiment of cultivation). It has been shown that the expression level of is also increased. And it was shown that the expression amount of "NCED3" also turned to a decrease in the seedlings having a decrease in ABA content (one to two months after the start of the low temperature cultivation treatment) (Fig. 6 (A), ( C) see).
Moreover, when low temperature cultivation treatment (* experiment of cultivation of * experiment example 3) was performed to the whole-leaved sapling, the ABA content showed the tendency to decrease, but the expression amount of "NCED3" also has the tendency to decrease similarly. (FIG. 6 (B), (D)).
As these results show, it was confirmed that the gene expression pattern of “NCED3”, which is an ABA synthetase, shows a behavior that completely matches the transition of ABA content.
From the above, it was recognized that the transition of the “ABA content” in the stem had a positive correlation with the transition of the “content of the NCED3 enzyme” which is an ABA synthetase.
(2) A8OX(ABA分解酵素)の推移
一方、「A8OX」の発現は、低温栽培処理の開始(※試験例1の栽培実験)を行った場合、ABA含量が上昇している苗木(低温栽培処理開始0.5ヶ月後)の茎では、その発現量は低い値であった。ところが、ABA含量が減少に転じている苗木では(低温栽培処理開始1〜2ヶ月後)では、「A8OX」の発現量は上昇に転じていることが示された(図6(A),(E) 参照)。
また、全摘葉した苗木に低温栽培処理(※試験例3の栽培実験)を行った場合、ABA含量は緩やかに減少する傾向を示したところ、「A8OX」の発現量は緩やかに上昇することが示された(図6(B),(F) 参照)。
これらの結果が示すように、ABA分解酵素である「A8OX」の遺伝子発現パターンは、ABA含量の推移とは、完全に逆の挙動を示すことが確認された。
以上から、茎中の「ABA含量」の推移は、ABA分解酵素である「A8OX酵素の含量」の推移と、負の相関があると認められた。
(2) Transition of A8OX (ABA degrading enzyme) On the other hand, the expression of "A8OX" shows that the ABA content is rising when the low temperature cultivation treatment is started (cultivation experiment of * Experiment example 1) (low temperature cultivation The expression level was low at the stem after 0.5 months of treatment initiation. However, in the seedlings whose ABA content turned to decrease (1 to 2 months after the start of low-temperature cultivation treatment), it was shown that the expression level of "A8OX" turned to increase (Fig. 6 (A), ( E) see).
Moreover, when low temperature cultivation treatment (* experiment of cultivation of * Experiment example 3) was performed to the defoliated sapling, the ABA content showed the tendency to decrease gradually, and the expression level of "A8OX" may rise moderately. It is shown (see FIG. 6 (B), (F)).
As these results show, it was confirmed that the gene expression pattern of "A8OX", which is an ABA degrading enzyme, completely reverses the behavior of ABA content.
From the above, it was recognized that the transition of "ABA content" in the stem was negatively correlated with the transition of "A8OX enzyme content", which is an ABA degrading enzyme.
(3) その他のカロテノイド代謝酵素の推移
NCED3及びA8OX以外のカロテノイド代謝酵素遺伝子は、ABA含量の推移と関係性が認められる発現パターンを示さなかった(表3 参照)。
即ち、ABA前駆体より上流の生合成系(カロテノイド代謝)に関与する酵素群においては、ABA含量と相関を示す酵素の存在は確認できなかった。
(3) Changes in other carotenoid metabolism enzymes
Carotenoid metabolism enzyme genes other than NCED3 and A8OX did not show an expression pattern that was found to be related to the transition of ABA content (see Table 3).
That is, in the enzymes involved in the biosynthesis system (carotenoid metabolism) upstream of the ABA precursor, the presence of an enzyme correlated with the ABA content could not be confirmed.
[試験例5,6からの考察]
試験例5の結果から、FT遺伝子発現量(花成誘導による苗木の着花数)の制御は、茎中のABA含量の増減の調整により人為的に可能であることが示された。
また、試験例6の結果から、「NCED3(ABA合成酵素)含量」及び/又は「A8OX(ABA分解酵素)含量」の制御により、茎中のABA含量の制御が可能となることが示された。
[Discussion from Test Examples 5 and 6]
From the results of Test Example 5, it was shown that control of the FT gene expression level (number of flowering of seedlings by induction of flowering) is artificially possible by adjusting the increase or decrease of ABA content in the stem.
Also, from the results of Test Example 6, it was shown that control of the ABA content in the stem becomes possible by controlling the "NCED3 (ABA synthetase) content" and / or the "A8OX (ABA degrading enzyme) content". .
以上から、低温により花成誘導が誘起されるカンキツ種(カンキツ属に属する植物種)の苗木に対して、外生的に「ABA」を使用することによって、FT遺伝子発現量の増加制御が可能となることが示された。
また、外生的に「NCED3(ABA合成酵素)の阻害剤」を使用することによって、FT遺伝子発現量の減少を介した着花数の減少制御が可能となることが示された。
また、外生的に「A8OX(ABA分解酵素)の阻害剤」を使用することによって、FT遺伝子発現量の増加を介した着花数の増加制御が可能となることが示された。
From the above, it is possible to control the increase of FT gene expression level by using “ABA” exogenously to the seedlings of citrus species (plant species belonging to citrus genus) in which flowering induction is induced by low temperature It was shown that
In addition, it was shown that by using "an inhibitor of NCED3 (ABA synthetase)" exogenously, it is possible to control the decrease in the number of flowering via reduction of FT gene expression level.
In addition, it was shown that by using "an inhibitor of A8OX (ABA degrading enzyme)" exogenously, it is possible to control the increase in the number of flowering via an increase in FT gene expression level.
本発明により、カンキツの着果管理及び隔年結果回避を効率的に行うことが可能となり、カンキツの連年安定生産を目的とした着果管理技術となることが期待される。
According to the present invention, it is possible to efficiently perform fruit set management of a citrus and avoid biennial results, and it is expected that it will be a fruit set management technique aiming at the continuous stable production of citrus.
1. 発育枝(発育段階にある枝)
2. 発芽した有葉花
3. 発芽した葉芽
1. Developmental branch (branch in developmental stage)
2. Germinated leafy flowers 3. Sprouted leaf bud
Claims (3)
下記(A)に記載の手段を用いて着花数を制御することを特徴とする、カンキツの着花制御方法であって、前記植物がウンシュウミカンである前記方法:
(A):休眠芽が発芽伸長し硬化した後の1年目の発育枝の茎中アブシシン酸受容シグナルの増加による着花数の増加制御手段であって、
前記増加制御手段が、前記発育枝へのアブシシン酸、アブシシン酸受容体アゴニスト、アブシシン酸分解酵素阻害剤、又はアブシシン酸−8’−水酸化酵素阻害剤の外生的使用であり、
前記発育枝が、発育段階にある維管束師部細胞を含む発育枝である。 For plants belonging to the genus Citrus of the property that induction of flowering is induced by the increase in the expression of the FT gene by low temperature cultivation at 15 ° C.
A method for controlling flowering of a citrus, characterized by controlling the number of flowering using the means described in the following (A) , wherein the plant is an orange mandarin orange :
(A): It is a means for controlling the increase in the number of flowering by increasing the abscisic acid acceptance signal in the stem of the developmental branch of the first year after germination and elongation and hardening of the dormant bud,
The increase control means, abscisic acid to the development branch, abscisic acid receptor agonists, abscisic acid degrading enzyme inhibitor, or abscisic acid 8'Ri exogenous use der hydroxide enzyme inhibitors,
The developmental branch is a developmental branch including vascular phloem cells in a developmental stage .
下記(B)に記載の手段を用いて着花数を制御することを特徴とする、カンキツの着花制御方法であって、前記植物がウンシュウミカンである前記方法:
(B):休眠芽が発芽伸長し硬化した後の1年目の発育枝の茎中アブシシン酸受容シグナルの減少又は消失による着花数の減少制御手段であって、
前記減少制御手段が、前記発育枝へのアブシシン酸受容体アンタゴニスト、アブシシン酸合成酵素阻害剤、又は9−シス−エポキシカロテノイドジオキシゲナーゼ阻害剤の外生的使用であり、
前記発育枝が、発育段階にある維管束師部細胞を含む発育枝である。 For plants belonging to the genus Citrus of the property that induction of flowering is induced by the increase in the expression of the FT gene by low temperature cultivation at 15 ° C.
A method for controlling flowering of a citrus, characterized in that the number of flowering is controlled using the means described in (B) below , wherein the plant is an orange mandarin orange :
(B): A control means for controlling the decrease in the number of flowers by decreasing or eliminating the abscisic acid reception signal in the stem of the developmental branch of the first year after germination and elongation and hardening of the dormant bud,
The reduction control means, abscisic acid receptor antagonist to the growth branch, abscisic acid synthase inhibitor, or 9-cis - Ri exogenous use der epoxy dioxygenase inhibitor,
The developmental branch is a developmental branch including vascular phloem cells in a developmental stage .
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014117322A JP6533037B2 (en) | 2014-06-06 | 2014-06-06 | Flowering control method of citrus |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014117322A JP6533037B2 (en) | 2014-06-06 | 2014-06-06 | Flowering control method of citrus |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015228842A JP2015228842A (en) | 2015-12-21 |
JP6533037B2 true JP6533037B2 (en) | 2019-06-19 |
Family
ID=54885994
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014117322A Active JP6533037B2 (en) | 2014-06-06 | 2014-06-06 | Flowering control method of citrus |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6533037B2 (en) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113348938B (en) * | 2021-03-30 | 2023-07-07 | 云南省农业科学院茶叶研究所 | Method for improving hybridization maturing rate of double clone tea trees |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3065720B2 (en) * | 1991-02-04 | 2000-07-17 | 三共株式会社 | Flowering promotion method |
-
2014
- 2014-06-06 JP JP2014117322A patent/JP6533037B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2015228842A (en) | 2015-12-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Rai et al. | Biotechnological advances in guava (Psidium guajava L.): recent developments and prospects for further research | |
Moradi et al. | Micropropagation of strawberry by multiple shoots regeneration tissue cultures | |
Li et al. | The process of embryo abortion of stenospermocarpic grape and it develops into plantlet in vitro using embryo rescue | |
Tuwo et al. | Improvement of orchid Vanda hybrid (Vanda limbata Blume X Vanda tricolor Lindl. var. suavis) by colchicines treatment in vitro | |
Hamadina | The control of yam tuber dormancy: a framework for manipulation | |
Dhage et al. | Development of an efficient in vitro regeneration protocol for fig (Ficus carica L.). | |
Mumo et al. | In vitro regeneration of selected Kenyan papaya (Carica papaya L.) lines through shoot tip culture | |
Li et al. | A method for micropropagation of Cornus wilsoniana: an important biofuel plant | |
RU2487532C1 (en) | Method of potato microclonal propagation | |
Tchokponhoué et al. | Regeneration ability and seedling growth in the miracle plant Synsepalum dulcificum (Schumach. & Thonn.) Daniell | |
Carneros et al. | Effect of different cryoprotectant procedures on the recovery and maturation ability of cryopreserved Pinus pinea embryogenic lines of different ages | |
JP6533037B2 (en) | Flowering control method of citrus | |
Huang et al. | Melatonin-induced rhizome proliferation, differentiation, and rooting during rapid propagation of Cymbidium goeringii and Cymbidium faberi | |
Ryynänen et al. | Recovery of cryopreserved silver birch shoot tips is affected by the pre-freezing age of the cultures and ammonium substitution | |
Widoretno et al. | Clonal propagation of Vetiveria zizanioides L. through tissue culture technique | |
Singh et al. | Effect of gamma irradiation on African marigold (Tagetes erecta L.) cv. Pusa Narangi Gainda | |
WO2012116475A1 (en) | Seedling-raising and root-shaping agent for inserting into plate of rice seeding machine and application method thereof | |
Boyaci et al. | Rootstock usage in eggplant: Actual situation and recent advances | |
Liu et al. | In vitro induction of octoploid plants from tetraploid Actinidia arguta | |
Budiarto | In vitro regeneration of three gladiolus cultivars using cormel explants | |
Paiva Neto et al. | Involvement of ethylene in the rooting of seedling shoot cultures of Bixa orellana L. | |
Martin et al. | High frequency in vitro propagation of Trichopus zeylanicus subsp. travancoricus using branch–petiole explants | |
Yasodha et al. | Anatomical and biochemical changes associated with in vitro rhizogenesis in Dendrocalamus giganteus | |
KR100849651B1 (en) | Method for decreasing biomass of plant and the plant obtained thereby | |
Onyeulo et al. | Antioxidant capabilities of three varieties of Elaeis gunineesis Jacq. on different basal media |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170418 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20171220 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180109 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180307 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180307 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180905 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181101 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20181101 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190508 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190523 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6533037 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |