JP6464308B1 - Test specimen for immunochromatography - Google Patents
Test specimen for immunochromatography Download PDFInfo
- Publication number
- JP6464308B1 JP6464308B1 JP2018181825A JP2018181825A JP6464308B1 JP 6464308 B1 JP6464308 B1 JP 6464308B1 JP 2018181825 A JP2018181825 A JP 2018181825A JP 2018181825 A JP2018181825 A JP 2018181825A JP 6464308 B1 JP6464308 B1 JP 6464308B1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- test piece
- porous membrane
- immunochromatographic
- detection
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 148
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 title claims description 18
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 153
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 143
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 83
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims abstract description 63
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 59
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 23
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 20
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 claims description 19
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 5
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 5
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 5
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 77
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 102100036859 Troponin I, cardiac muscle Human genes 0.000 description 11
- 101710128251 Troponin I, cardiac muscle Proteins 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 8
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 7
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 4
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 3
- 102400000667 Brain natriuretic peptide 32 Human genes 0.000 description 3
- 101800002247 Brain natriuretic peptide 45 Proteins 0.000 description 3
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 3
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N nesiritide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 229920002972 Acrylic fiber Polymers 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 239000003154 D dimer Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 229920001131 Pulp (paper) Polymers 0.000 description 2
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 description 2
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 2
- 108010072035 antithrombin III-protease complex Proteins 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 108010036385 plasmin-plasmin inhibitor complex Proteins 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 2
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001393 triammonium citrate Substances 0.000 description 2
- 235000011046 triammonium citrate Nutrition 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 description 1
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 102000030914 Fatty Acid-Binding Human genes 0.000 description 1
- 102000004641 Fetal Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010003471 Fetal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010058861 Fibrin Fibrinogen Degradation Products Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 108091022862 fatty acid binding Proteins 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000208 fibrin degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000010030 laminating Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 108010071584 oxidized low density lipoprotein Proteins 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012123 point-of-care testing Methods 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920006267 polyester film Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002964 rayon Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002759 woven fabric Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
【課題】イムノクロマト試験片におけるいわゆる白抜け現象の発生を回避し、より視認性に優れた検出ができる試験片を提供することを課題とする。また、テストラインの検出値のばらつきを防止できるイムノクロマト試験片の提供も課題とする。【解決手段】少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、特異的結合性物質が固定化された検出部を有するイムノクロマト試験片であって、検出部は多孔性メンブレンの表面に固定化されており、前記多孔性メンブレンの裏面に不透明基材が配置されていることを特徴とする前記試験片により前記課題を解決する。【選択図】図１An object of the present invention is to provide a test piece capable of avoiding a so-called white spot phenomenon in an immunochromatographic test piece and performing detection with higher visibility. Another object of the present invention is to provide an immunochromatographic test piece that can prevent variations in the detection value of the test line. An immunochromatographic test piece including at least a porous membrane and having a sample supply part, a development part, and a detection part on which a specific binding substance is immobilized, the detection part being immobilized on the surface of the porous membrane. The object is solved by the test piece, wherein an opaque base material is disposed on the back surface of the porous membrane. [Selection] Figure 1
Description
本発明はイムノクロマト用試験片および当該試験片を利用したイムノクロマト検出方法に関する。 The present invention relates to an immunochromatographic test piece and an immunochromatographic detection method using the test piece.
患者のそばで処置するというＰＯＣＴ（ポイントオブケア）の普及に伴い、抗原抗体反応を利用した簡易な免疫測定として、ニトロセルロースメンブレン等の試験片を用いたラテラルフロー式のイムノクロマト検出法が広く普及している。 With the spread of point-of-care (POCT) treatment near patients, lateral flow immunochromatography detection using a test piece such as a nitrocellulose membrane has become widespread as a simple immunoassay using antigen-antibody reaction. doing.
イムノクロマトグラフィー用の試験片（以下単にイムノクロマト試験片ということがある）は、一般に、サンプル供給部、展開部、検出部とを備えた多孔性体からなるメンブレンであって、検出対象物に対する標識抗体が、検体（サンプル）との接触後に展開部を通過して検出部に到達できるよう、展開部の展開開始部位に溶出可能に保持され、さらに検出用の抗体が展開部の一部に固定化され検出部を構成する構造となっている。 A test strip for immunochromatography (hereinafter sometimes simply referred to as an immunochromatographic test strip) is generally a membrane made of a porous body having a sample supply section, a development section, and a detection section, and is a labeled antibody against a detection target. However, after contact with the specimen (sample), it can be eluted at the development start site of the development part so that it can pass through the development part and reach the detection part, and the detection antibody is immobilized on a part of the development part. Thus, the detection unit is structured.
ここで、検体がサンプル供給部に滴下されると、検体中に検出対象物が含まれていた場合、検出対象物が標識抗体と特異的に結合して複合体を形成し、該複合体は、展開部を下流方向に向かって展開して行き、検出部で検出用の固定化抗体に結合する。したがって、検出部において、標識抗体、検出対象物及び固定化抗体によるサンドイッチ型複合体を検出することで、検出対象物を定性または定量分析することが可能である。 Here, when the specimen is dropped onto the sample supply unit, if the specimen includes a detection target, the detection target specifically binds to the labeled antibody to form a complex, and the complex The developing part is developed in the downstream direction, and the detection part binds to the immobilized antibody for detection. Therefore, the detection target can be qualitatively or quantitatively analyzed by detecting the sandwich type complex of the labeled antibody, the detection target and the immobilized antibody in the detection unit.
上記構成のイムノクロマト試験片の検出部において、被検出物質とコンジュゲートとの複合体を検出する方法として、標識体に由来する反射光の強度を測定して吸光度（反射吸光度）を算出する方法がある。反射吸光度は、例えば、検出部における被検出物質の検出ラインとその近傍の２部位の反射光強度を測定し、その比を用いて算出するが、該方法を使用する際、上記複合体が検出される検出部の上流側又は下流側付近の反射光強度が非特異的に上昇して測定波形に乱れがみられることがある。この場合、被検出物質が低濃度の場合は、測定波形の乱れを無視してベースラインを引くことができないため、特異的シグナル（ピーク）を正確に検出することができず、測定自体が不可能となることがある。 As a method for detecting the complex of the substance to be detected and the conjugate in the detection part of the immunochromatographic test strip having the above-described configuration, there is a method for calculating the absorbance (reflection absorbance) by measuring the intensity of the reflected light derived from the label. is there. The reflected absorbance is calculated, for example, by measuring the reflected light intensity of the detection line of the substance to be detected in the detection unit and the two portions in the vicinity thereof, and using the ratio. When using this method, the complex is detected. The reflected light intensity on the upstream side or the vicinity of the downstream side of the detection unit to be detected increases non-specifically, and the measurement waveform may be disturbed. In this case, if the substance to be detected is at a low concentration, the baseline cannot be drawn ignoring the disturbance in the measurement waveform, so the specific signal (peak) cannot be detected accurately, and the measurement itself is not possible. It may be possible.
このような測定波形の乱れの発生頻度と測定波形の乱れの程度は一定ではないため、測定の再現性が低下したり、測定の都度適切な測定値への補正を行うこと（いいかえれば測定波形の確認）が必要であった。 Since the frequency of occurrence of such measurement waveform disturbances and the degree of measurement waveform disturbances are not constant, the reproducibility of the measurement is reduced, or correction to an appropriate measurement value is performed each time measurement is performed (in other words, measurement waveform Confirmation) was necessary.
白色のメンブレンを用いる通常のイムノクロマト検出法において、前記測定波形の乱れは、メンブレンにおける該当部位の色がその周辺の色よりも相対的に白く、色が抜けているように見える現象（いわゆる、白抜け現象、以下単に白抜けということがある）として目視でも観察されるため、標識体に由来する呈色を目視判定する際にも妨げとなり、判定結果の正確さを欠く原因となっていた。 In a normal immunochromatography detection method using a white membrane, the disturbance of the measured waveform is a phenomenon in which the color of the relevant part of the membrane is relatively white compared to the surrounding color (so-called white color). Since this phenomenon is also observed visually as a missing phenomenon (hereinafter, sometimes simply referred to as white spot), it also hinders the visual determination of the coloration derived from the marker, causing a lack of accuracy in the determination result.
このような白抜けが発生する原因は定かではないが、試験片の製造ロット間の違い、試験片の保管状態の違い、試験片の前処理条件などの製造条件の違いなどが予想される。
このような白抜け現象を解消するための方法として以下の文献が知られている。
特許文献１は、イムノクロマト試験片を長期間保管した場合に観察されることの多い白抜けを防止するためにメタノールを添加したサンプル希釈液を用いたアッセイが開示されている。
The reason why such white spots occur is not clear, but a difference between production lots of test pieces, a difference in storage state of test pieces, a difference in production conditions such as pretreatment conditions of test pieces, and the like are expected.
The following documents are known as methods for eliminating such white spots.
Patent Document 1 discloses an assay using a sample diluent added with methanol in order to prevent white spots that are often observed when immunochromatographic test strips are stored for a long period of time.
特許文献２には、イムノクロマト試験片の抗体固定化メンブレンをｎーオクチルーβーＤーグルコシドなどの特定の界面活性剤で処理することで白抜けや測定波形の乱れを防止する方法が開示されている。 Patent Document 2 discloses a method for preventing white spots and measurement waveform disturbance by treating an antibody-immobilized membrane of an immunochromatographic test piece with a specific surfactant such as n-octyl-β-D-glucoside.
本発明の課題は、上記先行技術とは全く別のアプローチによりイムノクロマト試験片におけるいわゆる白抜け現象の発生を回避し、より視認性に優れた検出ができる試験片を提供することを課題とする。本発明は、また、テストラインの検出値のばらつきを防止できるイムノクロマト試験片の提供も課題とする。 An object of the present invention is to provide a test piece that can be detected with higher visibility by avoiding the occurrence of a so-called white spot phenomenon in an immunochromatographic test piece by an entirely different approach from the above prior art. Another object of the present invention is to provide an immunochromatographic test piece that can prevent variations in the detection value of the test line.
本発明者らは、上記課題を解決するためにイムノクロマト試験片の様々な要素の変更を試みたところ、驚くべきことに、多孔性メンブレンを含むイムノクロマト試験片において、抗体などの特異的結合性物質を表面に固定化した多孔性メンブレンの裏面に不透明基材を設けることによって、テストライン付近の白抜けが回避でき、また、検出値のばらつきを防止できることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の構成を有する。
（１）少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、検出部とを有するイムノクロマト試験片であって、前記検出部は多孔性メンブレンの表面に固定化されており、前記多孔性メンブレンの裏面に不透明基材が配置されていることを特徴とする前記試験片。
（２）前記不透明基材が多孔性メンブレンの裏打ちのための部材である（１）に記載の試験片。
（３）前記不透明基材が白色基材である（１）又は（２）に記載のイムノクロマト試験片。
（４）前記サンプル供給部を担うサンプルパッド、及び金コロイド又は着色ラテックスで標識された異的結合性物質を含むコンジュゲートパッドを含む（１）〜（３）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片。
（５）特異的結合性物質が抗体である（１）〜（４）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片。
（６）前記多孔性メンブレンの下にバッキングシートが配置されている（１）〜（５）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片。
（７）光学的手段で検出するための試験片である、（１）〜（６）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片。
（８）（１）〜（７）のいずれかに記載のイムノクロマト試験片を含むイムノクロマト検出キット。
（９）イムノクロマト検出方法であって、以下の試験片を用いることを特徴とする前記方法；
少なくとも検出部を有する多孔性メンブレンを含み、前記多孔性メンブレンの裏側に不透明基材が配置されているイムノクロマト試験片。
（１０）前記不透明基材が多孔性メンブレンの裏打ちのための部材である（９）に記載のイムノクロマト検出方法。
（１１）不透明基材が白色基材である（９）または（１０）に記載のイムノクロマト検出方法。
（１２）前記試験片は、前記サンプル供給部を担うサンプルパッド、及び金コロイド又は着色ラテックスで標識された特異的結合性物質を含むコンジュゲートパッドを含む（９）〜（１１）のいずれかに記載のイムノクロマト検出方法。
（１３）特異的結合性物質が抗体である（９）〜（１２）のいずれかに記載のイムノクロマト検出方法。
（１４）前記試験片は、前記多孔性メンブレンの下にバッキングシートが配置されている（９）〜（１３）のいずれかに記載のイムノクロマト検出方法。
（１５）光学的手段により標識物質に由来する光学的パラメータを検出する工程を含む、（９）〜（１４）のいずれかに記載のイムノクロマト検出方法。
（１６）目視観察により標識物質に由来する呈色を判定する工程を含む、（９）〜（１５）のいずれかに記載のイムノクロマト検出方法。
（１７）イムノクロマト検出方法における測定値のばらつきを低減する方法であって、
以下の試験片を用いることを特徴とする前記方法；
少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、検出部を有するイムノクロマト試験片であって、前記検出部は多孔性メンブレン表面に固定化されており、
前記多孔性メンブレンの裏側に不透明基材が配置されている試験片。
（１８）試験片を用いたイムノクロマト検出方法における、試験片の白抜けを低減する方法であって、以下の試験片を用いることを特徴とする前記方法；
少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、検出部を有するイムノクロマト試験片であって、前記検出部は多孔性メンブレン表面に固定化されており、
前記多孔性メンブレンの裏側に不透明基材が配置されている試験片。
In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors tried to change various elements of an immunochromatographic test piece. Surprisingly, in an immunochromatographic test piece including a porous membrane, a specific binding substance such as an antibody was used. It was found that by providing an opaque base material on the back surface of the porous membrane with the surface immobilized on the surface, white spots in the vicinity of the test line can be avoided and variation in detection values can be prevented, and the present invention has been completed. . That is, the present invention has the following configuration.
(1) An immunochromatographic test piece including at least a porous membrane and having a sample supply unit, a developing unit, and a detection unit, wherein the detection unit is fixed on the surface of the porous membrane, The said test piece characterized by the above-mentioned.
(2) The test piece according to (1), wherein the opaque base material is a member for lining the porous membrane.
(3) The immunochromatographic test piece according to (1) or (2), wherein the opaque base material is a white base material.
(4) The immunochromatographic test strip according to any one of (1) to (3), including a sample pad that bears the sample supply unit, and a conjugate pad that includes a foreign binding substance labeled with gold colloid or colored latex. .
(5) The immunochromatographic test piece according to any one of (1) to (4), wherein the specific binding substance is an antibody.
(6) The immunochromatographic test piece according to any one of (1) to (5), wherein a backing sheet is disposed under the porous membrane.
(7) The immunochromatographic test piece according to any one of (1) to (6), which is a test piece for detection by optical means.
(8) An immunochromatographic detection kit comprising the immunochromatographic test piece according to any one of (1) to (7).
(9) An immunochromatographic detection method, wherein the following test piece is used;
An immunochromatographic test strip comprising a porous membrane having at least a detection part, and an opaque base material disposed on the back side of the porous membrane.
(10) The immunochromatographic detection method according to (9), wherein the opaque base material is a member for lining the porous membrane.
(11) The immunochromatographic detection method according to (9) or (10), wherein the opaque substrate is a white substrate.
(12) The test piece includes a sample pad serving as the sample supply unit, and a conjugate pad including a specific binding substance labeled with gold colloid or colored latex. The immunochromatographic detection method as described.
(13) The immunochromatographic detection method according to any one of (9) to (12), wherein the specific binding substance is an antibody.
(14) The immunochromatographic detection method according to any one of (9) to (13), wherein the test piece has a backing sheet disposed under the porous membrane.
(15) The immunochromatographic detection method according to any one of (9) to (14), comprising a step of detecting an optical parameter derived from the labeling substance by an optical means.
(16) The immunochromatographic detection method according to any one of (9) to (15), including a step of determining a coloration derived from the labeling substance by visual observation.
(17) A method for reducing variations in measured values in an immunochromatographic detection method,
Said method characterized in that the following test piece is used;
An immunochromatographic test piece including at least a porous membrane, having a sample supply part, a development part, and a detection part, wherein the detection part is immobilized on the porous membrane surface,
The test piece by which the opaque base material is arrange | positioned at the back side of the said porous membrane.
(18) In the immunochromatography detection method using a test piece, the method for reducing white spots on the test piece, wherein the following test piece is used;
An immunochromatographic test piece including at least a porous membrane, having a sample supply part, a development part, and a detection part, wherein the detection part is immobilized on the porous membrane surface,
The test piece by which the opaque base material is arrange | positioned at the back side of the said porous membrane.
本発明によれば、テストライン付近の白抜けが回避できることから目視による検出時の視認性に優れ、また、光学的手段による測定値のばらつきの少ないイムノクロマト試験片を提供することができる。 According to the present invention, white spots in the vicinity of the test line can be avoided, so that an immunochromatographic test piece having excellent visibility at the time of visual detection and having little variation in measured values by optical means can be provided.
（イムノクロマト試験片）
本発明のイムノクロマト試験片は、少なくとも「サンプル供給部」、「展開部」、「検出部」とを備えた多孔性のメンブレンを含み、検出対象物に結合する標識された特異的結合性物質が、検体との接触後に展開部を通過して検出部に到達できるよう、展開部の展開開始部位に溶出可能に保持され、さらに検出用の特異的結合性物質が展開部の一部に固定化され検出部を構成している。
(Immunochromatographic specimen)
The immunochromatographic test strip of the present invention includes a porous membrane having at least a “sample supply unit”, a “development unit”, and a “detection unit”, and a labeled specific binding substance that binds to a detection target is present. In order to be able to reach the detection part after passing through the development part after contact with the specimen, it is retained so that it can be eluted at the development start part of the development part, and a specific binding substance for detection is immobilized on a part of the development part. And constitutes a detector.
これらを具現化する一例として、サンプル供給部を担うサンプルパッド、検出対象物に結合する標識された特異的結合性物質が溶出可能に保持され、展開部の一部を担うコンジュゲートパッド、検出用の特異的結合性物質が一部に固定化され、展開部および検出部を担う多孔性のメンブレンを含む試験片が挙げられる。すなわち、本発明の典型的なイムノクロマトグラフィー用試験片は以下の構成を有する。 As an example that embodies these, a sample pad that serves as a sample supply unit, a conjugate pad that retains a labeled specific binding substance that binds to a detection target substance so that it can be eluted, and serves as a part of a development unit, and for detection And a test piece including a porous membrane in which a specific binding substance is immobilized on a part thereof and serves as a development part and a detection part. That is, a typical test piece for immunochromatography of the present invention has the following configuration.
（１）検体が供給されるサンプルパッド
（２）サンプルパッドの下流に配置され、金コロイド表面に第一の特異的結合性物質が感作されたコンジュゲートが溶出可能に保持されたコンジュゲートパッド
（３）コンジュゲートパッドの下流に配置され、コンジュゲートと検出対象物との複合体と結合する第二の特異的結合性物質が固定化された検出部を表面に有する多孔性のメンブレンであって、裏側には、不透明基材が配置されている前記多孔性メンブレン
(1) Sample pad to which analyte is supplied (2) Conjugate pad arranged downstream of the sample pad and in which the conjugate sensitized with the first specific binding substance is retained on the surface of the gold colloid so as to be eluted (3) A porous membrane that is arranged downstream of the conjugate pad and has a detection portion on the surface on which a second specific binding substance that binds to the conjugate-conjugate complex is immobilized. The porous membrane has an opaque substrate disposed on the back side.
ここで、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、多孔性のメンブレンはそれぞれが別々の担体を構成する場合、あるいは２つが１つの担体を構成する場合もあり、上流から下流に向かって、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、多孔性のメンブレンの順序で構成されるものであればいずれの態様も含まれる。
イムノクロマト試験片は、上記構成のほかに、吸収パッド、３ｒｄパッドのいずれか一以上をさらに配置装着されたものも含む。
該試験片は、通常、プラスチック製粘着シートのような固相支持体上（以下、バッキングシートということがある）に配列させる。
Here, the sample pad, the conjugate pad, and the porous membrane may each constitute a separate carrier, or the two may constitute one carrier, and the sample pad, the conjugate may be formed from upstream to downstream. Any embodiment is included as long as it is composed of a pad and a porous membrane.
In addition to the above-described configuration, the immunochromatographic test piece also includes an immunochromatographic test piece further provided with one or more of an absorption pad and a 3rd pad.
The test piece is usually arranged on a solid support (hereinafter sometimes referred to as a backing sheet) such as a plastic adhesive sheet.
また、特異的結合性物質が固定化された多孔性のメンブレンの機械的強度を上げ、かつアッセイ中の水分の蒸発（乾燥）を防ぐ目的でポリエステルフィルムなどを試験片にラミネート加工することもある。 In addition, a polyester film or the like may be laminated to the test piece in order to increase the mechanical strength of the porous membrane on which the specific binding substance is immobilized and to prevent evaporation (drying) of moisture during the assay. .
本発明のイムノクロマト試験片を用いた検出方法は、以下のように行われる。
検体がサンプル供給部に滴下されると、検体中に検出対象物が含まれていた場合、検出対象物は、標識された特異的結合性物質と特異的に結合して複合体を形成する。該複合体は、展開部を下流方向に向かって展開し、検出部に固定化された特異的結合性物質と結合する。検出部では、標識された特異的結合性物質、検出対象物及び固定化された特異的結合性物質によるサンドイッチ型複合体が形成されるため、これを検出することで、検出対象物を定性または定量分析することが可能である。検出は、目視観察による呈色の判定のほか、標識体に由来する光学的パラメーターを光学的手段により検出する方法が挙げられる。光学的手段を使う場合は、手動のほか、自動化もでき、また連続測定もできる。
The detection method using the immunochromatographic test strip of the present invention is performed as follows.
When the specimen is dropped onto the sample supply unit, when the detection target is contained in the specimen, the detection target specifically binds to the labeled specific binding substance to form a complex. The complex develops the development part in the downstream direction and binds to the specific binding substance immobilized on the detection part. In the detection unit, a sandwich-type complex is formed by the labeled specific binding substance, the detection target and the immobilized specific binding substance. By detecting this, the detection target is qualitatively or Quantitative analysis is possible. In addition to the determination of coloration by visual observation, the detection includes a method of detecting an optical parameter derived from the label by an optical means. When using optical means, it can be automated as well as manual, and continuous measurement is also possible.
（サンプルパッド）
本発明において、「サンプルパッド」とは、サンプルを受け入れるサンプル供給部を担う部位であり、パッドに成型された状態で液体のサンプルを吸収し、液体と検出対象物の成分とが通り抜けることができる物質及び形態であればいずれのものをも含む。
本発明のサンプルパッドには、透水性の改善のために前処理をすることができる。
また、全血を測定する場合には、赤血球凝集剤を含ませておくこともできる。この場合、サンプルパッドの少なくとも一部に含まれていればよく、全体に含ませておくこともできる。
(Sample pad)
In the present invention, a “sample pad” is a part that bears a sample supply unit that receives a sample, absorbs a liquid sample in a state of being molded in the pad, and allows the liquid and the component of the detection object to pass through. Any substance and form are included.
The sample pad of the present invention can be pretreated to improve water permeability.
In addition, when measuring whole blood, a hemagglutinating agent can be included. In this case, it should just be contained in at least one part of a sample pad, and can also be contained in the whole.
サンプルパッドに適した材料の具体例として、ガラス繊維（グラスファイバー）、アクリル繊維、親水性ポリエチレン材、乾燥紙、紙パルプ、織物等が含まれるが、これらに限定されない。好適には、グラスファイバー製パッドが用いられる。該サンプルパッドには、後述するコンジュゲートパッドの機能を併せ持たせることも出来る。また、サンプルパッドには、本発明の目的を逸脱せず、反応系に影響のない範囲において、必要に応じ通常使用されるブロッキング試薬を含ませることもできる。 Specific examples of materials suitable for the sample pad include, but are not limited to, glass fiber (glass fiber), acrylic fiber, hydrophilic polyethylene material, dry paper, paper pulp, and fabric. Preferably, a fiberglass pad is used. The sample pad can also have the function of a conjugate pad described later. In addition, the sample pad may contain a blocking reagent that is usually used as necessary without departing from the object of the present invention and without affecting the reaction system.
（コンジュゲート）
本発明においてコンジュゲートとは、標識体に、検出対象物に結合する特異的結合性物質又はコントロール用物質が固定化されたものをいう。
本発明に用いる標識体は、抗体などの特異的結合性物質を感作（固定化）させてコンジュゲートを構成することができ、サンプルと接触させてサンプル中の対象物（抗原など）を検出する方法において標識体としての役割を担うことができるようなものであればいずれでもよく、金コロイド粒子、白金コロイド粒子、カラーラテックス粒子、磁性粒子などが挙げられ、このうちでも金コロイドや着色ラテックスが望ましく、金コロイドがよりいっそう望ましい。これらの粒子径は、それぞれの種類に応じて、測定対象物の所望の検出感度が得られるように調整すればよく、例えば、金コロイド粒子の粒径は、２０〜１００ｎｍが好ましく、より好ましくは３０〜１００ｎｍであり、特に６０ｎｍが好ましい。
本発明のコンジュゲートは、金コロイド等の表面において特異的結合性物質が結合していない領域をブロッキング剤によりブロッキングすることもできる。
(Conjugate)
In the present invention, the conjugate refers to a label in which a specific binding substance or a control substance that binds to a detection target is immobilized.
The label used in the present invention can be sensitized (immobilized) with a specific binding substance such as an antibody to form a conjugate, and is contacted with a sample to detect an object (such as an antigen) in the sample. As long as it can play a role as a label in the method to be performed, gold colloid particles, platinum colloid particles, color latex particles, magnetic particles, and the like can be mentioned. And colloidal gold is even more desirable. These particle sizes may be adjusted so as to obtain the desired detection sensitivity of the measurement object according to each type. For example, the particle size of the gold colloid particles is preferably 20 to 100 nm, more preferably. It is 30-100 nm, and 60 nm is particularly preferable.
The conjugate of the present invention can also block a region where a specific binding substance is not bound on the surface of a colloidal gold or the like with a blocking agent.
コンジュゲートの存在様式としては、コンジュゲートパッドとして存在する様式、すなわち、サンプルパッド、サードパッド、多孔性メンブレン以外の専用のパッド（コンジュゲートパッド）に含浸された状態で存在してもよいし（タイプＡ）、サンプルパッドの一部にコンジュゲート部として存在してもよい（タイプＢ）。さらには、試験片とは別に、検体と混合されるように個別のコンジュゲート試薬として存在してもよい（タイプＣ）。 Conjugates may exist as a conjugate pad, that is, in a state where the conjugate pad is impregnated in a dedicated pad (conjugate pad) other than a sample pad, a third pad, or a porous membrane ( Type A) may be present as a conjugate part in a part of the sample pad (Type B). Furthermore, it may exist as a separate conjugate reagent so as to be mixed with the specimen separately from the test piece (type C).
以下、コンジュゲートの存在様式が上記タイプＡの試験片の典型例について説明する。
サンプルの流れ方向の上流より下流に向かって、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、サードパッド、多孔性メンブレンの順で配置され、それぞれ上下の層と少なくとも一部が重複するように配置される。このような配置例の試験片を図４に示す。
Hereinafter, a typical example of a test piece of type A in which the conjugate is present will be described.
The sample pad, the conjugate pad, the third pad, and the porous membrane are arranged in this order from the upstream to the downstream in the sample flow direction, and are arranged so that at least a part of the upper and lower layers overlap each other. A test piece of such an arrangement example is shown in FIG.
このような試験片のサンプルパッドに、検出対象物を含有するサンプルが供給されると、検出対象物はサンプルパッドを通過して下流側のコンジュゲートパッドへと流れる。コンジュゲートパッドでは、検出対象物とコンジュゲートが接触して複合体を形成しながら当該パッドを通過する。その後、複合体はコンジュゲートパッドの下面に接触して配置されたサードパッドを通過し、多孔性メンブレンへと展開される。 When a sample containing an object to be detected is supplied to the sample pad of such a test piece, the object to be detected flows through the sample pad to the conjugate pad on the downstream side. In the conjugate pad, the detection target and the conjugate come into contact with each other and pass through the pad while forming a complex. The composite is then passed through a third pad placed in contact with the bottom surface of the conjugate pad and deployed into a porous membrane.
多孔性メンブレンには、その一部に検出対象物に結合する特異的結合性物質が固定化されているため、該複合体がここで結合して固定化されることになる。固定化された複合体は、標識物質に由来する吸光度、反射光、蛍光、磁気等を検出する手段により検出される。 Since a specific binding substance that binds to the detection target is immobilized on a part of the porous membrane, the complex is bound and immobilized here. The immobilized complex is detected by means for detecting absorbance, reflected light, fluorescence, magnetism and the like derived from the labeling substance.
次に、コンジュゲートの存在様式がタイプＢの試験片について説明する。
上記タイプＡの試験片との違いは、サンプルパッドとコンジュゲートパッドが一体になった点であり、つまり、サンプルパッドの一部にサンプル供給部およびコンジュゲート部が構成されている点である。
上記サンプル供給部は、検出対象物を含有するサンプルを供給する部位であり、上記コンジュゲート部は、コンジュゲートを含有する部位であり、サンプル供給部がコンジュゲート部の上流側となる。
Next, a test piece of which type of conjugate is type B will be described.
The difference from the type A test piece is that the sample pad and the conjugate pad are integrated, that is, the sample supply part and the conjugate part are formed in a part of the sample pad.
The sample supply part is a part for supplying a sample containing a detection target, the conjugate part is a part containing a conjugate, and the sample supply part is on the upstream side of the conjugate part.
次に、コンジュゲートの存在様式がタイプＣの試験片について説明する。
上記タイプＡの試験片との違いは、コンジュゲートパッドが試験片として存在せず、コンジュゲートは個別のコンジュゲート試薬として存在する点である。例えば、フィルター中にコンジュゲートが内蔵されたフィルターチップが挙げられる。このようなフィルターチップを使って、検体をフィルターろ過させることでフィルター内に保持されたコンジュゲートと検出対象物が結合し、複合体（凝集体）を形成する。これをコンジュゲートパッドを有さないこと以外はタイプＡと同一の前記試験片に供給することで、検出対象物を検出することができる。
Next, a specimen having a type C conjugate will be described.
The difference from the type A test strip is that the conjugate pad is not present as a test strip and the conjugate is present as a separate conjugate reagent. For example, a filter chip in which a conjugate is incorporated in a filter can be mentioned. By using such a filter chip, the sample is filtered and the conjugate held in the filter and the detection target are combined to form a complex (aggregate). By supplying this to the same test piece as type A except that it does not have a conjugate pad, the detection target can be detected.
（検出試薬）
本発明において、「検出試薬」とは具体的には少なくともコンジュゲートを含有する溶液である。
検出試薬は、コンジュゲートを安定な状態に保ち、サンプルと混合されたときにコンジュゲートに固定化された抗体などの特異的結合性物質が検出対象物と特異的に反応するのを促進する、あるいはコンジュゲートを迅速かつ効果的に溶解、流動化する目的で、例えば１種類以上の安定化剤、溶解補助剤等を含み得る。該安定化剤、溶解補助剤等としては、例えばウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、スクロース、カゼイン、アミノ酸類などをあげることができる。
(Detection reagent)
In the present invention, the “detection reagent” is specifically a solution containing at least a conjugate.
The detection reagent keeps the conjugate in a stable state and promotes a specific binding substance such as an antibody immobilized on the conjugate to react specifically with the detection target when mixed with the sample. Alternatively, for the purpose of rapidly and effectively dissolving and fluidizing the conjugate, for example, one or more kinds of stabilizers, solubilizing agents and the like may be included. Examples of the stabilizer and solubilizing agent include bovine serum albumin (BSA), sucrose, casein, amino acids and the like.
また、検出試薬は、検出感度の向上を目的とし必要に応じて公知の増感剤やキレート剤であるＥＤＴＡやＥＧＴＡなども含み得る。
なお、本明細書において、「検出」又は「測定」という用語は、検出対象の存在の証明及び／又は定量などを含めて最も広義に解釈する必要があり、いかなる意味においても限定的に解釈してはならない。
The detection reagent may also contain EDTA or EGTA, which are known sensitizers or chelating agents, as necessary for the purpose of improving detection sensitivity.
In this specification, the term “detection” or “measurement” must be interpreted in the broadest sense including proof and / or quantification of the existence of the detection target, and is limitedly interpreted in any sense. must not.
（サンプル希釈液）
本発明において、検体中の検出対象物の濃度に応じて、検体の希釈が必要な場合は、希釈液を用いることがある。希釈液は、検出対象物と特異的結合性物質との反応を著しく阻害したり、または反対に著しく反応を促進して標識体が過凝集するために毛細管現象における展開不良を起こしたり、検出対象物の濃度に応じた検出対象物と特異的結合性物質との反応のシグナル検出が可能な範囲で、いずれの組成の希釈液を用いても良い。
(Sample diluent)
In the present invention, a diluent may be used when the sample needs to be diluted depending on the concentration of the detection target in the sample. The diluted solution significantly inhibits the reaction between the detection target and the specific binding substance, or conversely accelerates the reaction significantly, causing the label to overaggregate, resulting in poor development in the capillary phenomenon, or the detection target. Diluents of any composition may be used as long as signal detection of the reaction between the detection target and the specific binding substance according to the concentration of the substance is possible.
（コンジュゲートパッド）
本発明において、「コンジュゲートパッド」とは、検出対象物と特異的に反応する検出試薬を後述のコンジュゲートパッドに適した材料に含浸させて乾燥させたものである。コンジュゲートパッドは、サンプルが該コンジュゲートパッドを通過する際、検出試薬と検出対象物とが複合体を形成する機能を有する。該コンジュゲートパッドは、それ単独で特異的結合性物質が固定化された多孔性メンブレンに接するように配置されていてもよい。あるいは、前記サンプルパッドと接触して配置され、毛細管流によってサンプルパッドを通過した検体を受入れ、引き続き該検体を毛細管流によって前記サンプルパッドとの接触面とは異なる面で接触する３ｒｄ Ｐａｄに移送するように配置してもよい。
(Conjugate pad)
In the present invention, the “conjugate pad” is obtained by impregnating a detection reagent that specifically reacts with a detection target with a material suitable for a conjugate pad described later and drying it. The conjugate pad has a function of forming a complex between the detection reagent and the detection target when the sample passes through the conjugate pad. The conjugate pad may be arranged so as to be in contact with a porous membrane on which a specific binding substance is immobilized. Alternatively, the specimen that has been placed in contact with the sample pad and that has passed through the sample pad by capillary flow is received, and then the specimen is transferred to the 3rd Pad that is in contact with the surface different from the contact surface with the sample pad by capillary flow. You may arrange as follows.
該コンジュゲートパッドに適した材料として、紙、セルロース混合物、ニトロセルロース、ポリエステル、アクリロニトリルコポリマー、ガラス繊維またはレーヨンのような不織繊維が挙げられるが、これらに限定されない。好適には、グラスファイバー製パッドが用いられる。 Suitable materials for the conjugate pad include, but are not limited to, paper, cellulose blend, nitrocellulose, polyester, acrylonitrile copolymer, glass fiber or non-woven fiber such as rayon. Preferably, a fiberglass pad is used.
該コンジュゲートパッドには、必要に応じて、イムノクロマト検出法の信頼性を担保するための「コントロール試薬」、例えば、標識体で標識された検体成分とは反応しない抗体や標識体で標識されたＫＬＨ（スカシ貝ヘモシアニン）などの高抗原性タンパク質などを含み得る。これらのコントロール試薬は、サンプル中に存在する可能性が考えられない成分（物質）であり、適宜に選択可能である。 If necessary, the conjugate pad is labeled with a “control reagent” for ensuring the reliability of the immunochromatographic detection method, for example, an antibody or a label that does not react with a sample component labeled with a label. High antigenic proteins such as KLH (Scattle hemocyanin) may be included. These control reagents are components (substances) that are unlikely to exist in the sample, and can be appropriately selected.
（３ｒｄ Ｐａｄ）
本発明において、３ｒｄ Ｐａｄとは、検体と検出試薬との反応成分のうち、検出対象物の検出に不要な成分を除去し、反応に必要な成分が、特異的結合性物質が固定化された多孔性メンブレンをスムーズに展開できるようにすることを目的としてサンプルパッドと多孔性メンブレンの間に配置させることができる。例えば、血球や不溶性の血球破砕物などは、検出に不要な成分として除去されることが望ましい。また、この３ｒｄ Ｐａｄには、測定対象物と特異的結合性物質との反応により生成する凝集体のうち、特異的結合性物質が固定化されたメンブレンに移動し、スムーズに展開できない位に大きくなった凝集体をあらかじめ除去するという付加的な効果を併せ持たせることも可能である。
(3rd Pad)
In the present invention, 3rd Pad is a reaction component between a specimen and a detection reagent, in which a component unnecessary for detection of a detection target is removed, and a specific binding substance is immobilized as a component necessary for the reaction. The porous membrane can be disposed between the sample pad and the porous membrane for the purpose of enabling smooth development. For example, it is desirable to remove blood cells, insoluble blood cell fragments and the like as components unnecessary for detection. Also, the 3rd Pad has an aggregate that is generated by the reaction between the object to be measured and the specific binding substance, and moves to the membrane on which the specific binding substance is immobilized, so that it cannot be expanded smoothly. It is also possible to have an additional effect of previously removing the aggregates.
３ｒｄ Ｐａｄとしては、液体と検出対象の成分、および検出試薬とが通り抜けることができるどんな物質及び形態をも含む。具体例として、ガラス繊維（グラスファイバー）、アクリル繊維、親水性ポリエチレン材、乾燥紙、紙パルプ、織物等が含まれるが、これらに限定されない。３ｒｄ Ｐａｄは、血球を分離する目的で使用される場合は、血球分離膜と呼ばれることもある。本発明において、全血を検体とする場合は、サンプルパッドのみでは除去しきれなかった血球をより確実に分離除去するため、血球分離膜を用いることが望ましい。 3rd Pad includes any substance and form that allows the liquid, the component to be detected, and the detection reagent to pass through. Specific examples include, but are not limited to, glass fiber (glass fiber), acrylic fiber, hydrophilic polyethylene material, dry paper, paper pulp, and woven fabric. 3rd Pad is sometimes called a blood cell separation membrane when used for the purpose of separating blood cells. In the present invention, when whole blood is used as a specimen, it is desirable to use a blood cell separation membrane in order to more reliably separate and remove blood cells that could not be removed using only the sample pad.
（赤血球凝集剤）
本発明において、全血を検体とする場合は、上記３ｒｄ Ｐａｄの使用以外に、赤血球凝集剤や赤血球結合成分を併用することが望ましい。併用する赤血球凝集剤や赤血球結合成分は特に限定されないが、公知の例示としてレクチン、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の他に、ポリカチオン性の赤血球凝集剤が使用できる。公知のポリカチオン性の赤血球凝集剤としてはポリブレンやポリリジン、ポリアクリルアミン、ポリアラニンなどが例示できるが、なかでもポリブレンが好ましい。ポリブレンは、その化学名を臭化ヘキサジメトリンといい、ＣＡＳ番号２８７２８−５５−４が付与されたカチオン性ポリマーの１種である。
(Hemagglutinating agent)
In the present invention, when whole blood is used as a specimen, it is desirable to use a hemagglutinating agent and an erythrocyte binding component in addition to the use of the 3rd Pad. The hemagglutinating agent and erythrocyte binding component to be used in combination are not particularly limited, but as a known example, a polycationic hemagglutinating agent can be used in addition to a lectin, a polyclonal antibody, and a monoclonal antibody. Examples of known polycationic hemagglutinating agents include polybrene, polylysine, polyacrylamine, polyalanine and the like, among which polybrene is preferred. Polybrene, whose chemical name is called hexadimethrin bromide, is a kind of cationic polymer to which CAS number 28728-55-4 is assigned.
赤血球凝集剤や赤血球結合成分の使用態様としては、検体を希釈する希釈液に添加したり、検体に直接添加する態様のほか、イムノクロマト試験片のサンプル供給部（サンプルパッド）に含ませておくことができる。このような使用態様により、全血中の赤血球が凝集される。 The usage mode of the hemagglutinating agent and the red blood cell binding component should be added to the dilution solution for diluting the sample, or added directly to the sample, and included in the sample supply part (sample pad) of the immunochromatographic test strip. Can do. According to such a use mode, red blood cells in whole blood are aggregated.
（多孔性メンブレン）
本発明のイムノクロマト試験片に用いられる多孔性メンブレンは、その表面に検出用の特異的結合性物質が固定化されており、裏面には、不透明な基材が配置されていることを特徴とする。
(Porous membrane)
The porous membrane used in the immunochromatographic test piece of the present invention is characterized in that a specific binding substance for detection is immobilized on the surface, and an opaque base material is disposed on the back surface. .
多孔性メンブレンの裏面に配置される本発明の不透明な基材は、メンブレンが多孔性であるため、メンブレンの裏打ちのために配置される部材であり、不透水性のフィルムなどが用いられる。このような本発明の不透明な基材は、いわゆる「裏打ち部材」と呼ばれることもある。当該基材は多孔性メンブレンの裏面に貼り合わせることによって裏打ちするか、あるいは、あらかじめ不透水性のフィルム上面に多孔性メンブレンを積層させることにより形成することができる。
本発明の不透明基材は、多孔性メンブレンの裏側に配置されていればよく、接着剤層を介して接してもよいし、接着性が担保されれば接着剤層を介さずに接していてもよい。なお、後述するバッキングシートを設ける場合は、本発明の不透明基材（裏打ち部材）の下側に配置する。
本発明は、この多孔性メンブレンの裏面の基材を、従来透明であったところ、不透明な基材にすることによって、メンブレンの該当部位の色がその周辺の色よりも白く、色が抜けているように見えるいわゆる「白抜け現象」（以下、単に白抜けということがある）を回避することができた。
The opaque base material of the present invention disposed on the back surface of the porous membrane is a member disposed for lining the membrane because the membrane is porous, and an impermeable film or the like is used. Such an opaque base material of the present invention is sometimes called a so-called “lining member”. The base material can be backed by bonding to the back surface of the porous membrane, or can be formed by previously laminating the porous membrane on the upper surface of the water-impermeable film.
The opaque base material of the present invention may be disposed on the back side of the porous membrane, may be in contact with the adhesive layer, or may be in contact without the adhesive layer as long as the adhesiveness is ensured. Also good. In addition, when providing the backing sheet mentioned later, it arrange | positions under the opaque base material (backing member) of this invention.
In the present invention, the base material on the back surface of the porous membrane is conventionally transparent, but by making the base material opaque, the color of the corresponding part of the membrane is whiter than the surrounding color, and the color is lost. It was possible to avoid the so-called “white spot phenomenon” (hereinafter, simply referred to as white spot).
不透明とは、透明ではないこと、向こう側が透けて見えないことを言い、完全な不透明までは要求しないが、より好ましくは完全な不透明である。
不透明な基材としては、多孔性メンブレンと同系色の基材がよく、多孔性メンブレンが白色の場合は、本発明の基材も白色に近いクリーム色やグレーなどが望ましく、そのうちでも白色が最も好ましい。
不透明な基材としては、不透水性で不透明な基材であればいずれでもよく、任意の材質のものが使用できる。例えば、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエステル、ナイロン類等が挙げられる。
Opaque means that it is not transparent and the other side cannot be seen through, and does not require complete opacity, but is more preferably completely opaque.
As the opaque base material, a base material having the same color as the porous membrane is preferable, and when the porous membrane is white, the base material of the present invention is preferably a cream or gray color close to white, among which white is the most preferable.
The opaque base material may be any base material that is impermeable and opaque, and any material can be used. Examples thereof include polyethylene, polyethylene terephthalate, polyester, and nylons.
また、多孔性メンブレンの裏面に本発明の不透明基材を設けることでテストラインにおける測定値のばらつきも抑えることができた。この理由は定かではないが、メンブレン表面と裏面の色合いが一致することで、表面成分(ニトロセルロース)の外観的な不均一性の減少及びメンブレンの下層に配置されるバッキングシートの光学的手段による反射光の影響が回避されることなどにより同時再現性が向上すると推測される。 Further, by providing the opaque base material of the present invention on the back surface of the porous membrane, it was possible to suppress variations in measured values in the test line. The reason for this is not clear, but it is due to the appearance of the surface component (nitrocellulose) being reduced in uniformity and the optical means of the backing sheet placed on the lower layer of the membrane because the colors of the membrane surface and the back surface match. It is estimated that simultaneous reproducibility is improved by avoiding the influence of reflected light.
多孔性メンブレン（以下、単にメンブレンと記載することがある）としては、任意の材質のものが使用できる。例えば、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ナイロン類、ガラス、セルロースやセルロース誘導体などの多糖類あるいはセラミックス等などの多孔性のメンブレンが挙げられるがこれらに限定されない。具体的には、メルクミリポア社、東洋濾紙社、GEヘルスケア社などより販売されているガラス繊維ろ紙やニトロセルロースメンブレンなどをあげることができる。また、この多孔性メンブレンの孔径と構造を適宜選択することにより、標識された特異的結合性物質と検出対象物との免疫複合体がメンブレン中を流れる速度を制御することが可能である。メンブレン中を流れる速度の制御により、メンブレンに固定化された上記特異的結合性物質に結合する標識された特異的結合性物質量を調節することができるため、メンブレンの孔径と構造は、本発明のイムノクロマト試験片のほかの構成材料との組み合わせを考慮して最適化することが望ましい。 As a porous membrane (hereinafter sometimes simply referred to as a membrane), any material can be used. Examples thereof include, but are not limited to, porous membranes such as polyethylene, polyethylene terephthalate, nylons, glass, polysaccharides such as cellulose and cellulose derivatives, and ceramics. Specific examples include glass fiber filter paper and nitrocellulose membrane sold by Merck Millipore, Toyo Roshi, GE Healthcare and the like. In addition, by appropriately selecting the pore size and structure of the porous membrane, it is possible to control the flow rate of the immune complex of the labeled specific binding substance and the detection target through the membrane. Since the amount of the labeled specific binding substance that binds to the specific binding substance immobilized on the membrane can be adjusted by controlling the flow rate in the membrane, the pore size and structure of the membrane can be adjusted according to the present invention. It is desirable to optimize the immunochromatographic test piece in consideration of the combination with other constituent materials.
（特異的結合性物質の多孔性メンブレンへの固定化）
本発明の検出対象物に対する抗体などの特異的結合性物質の多孔性メンブレンへの固定化は、一般に周知の方法で実施することができる。例えば、フロースルー式の場合、上記の特異的結合性物質を所定の濃度に調整し、その液を一定量、点あるいは＋など特定のシンボル状に、多孔性メンブレンに塗布する。またこの際、イムノクロマト検出法の信頼性を担保するため、コンジュゲートと結合できるタンパク質あるいは化合物を、検出対象物に結合する特異的結合性物質とは異なる位置に固定化して「コントロールライン」とすることが一般的である。また、前記のコントロール試薬に結合する特異的結合性物質を検出対象物に結合する特異的結合性物質とは異なる位置に固定化して「コントロールライン」とすることもできる。
(Immobilization of specific binding substance to porous membrane)
Immobilization of a specific binding substance such as an antibody against the detection target of the present invention on the porous membrane can be generally performed by a well-known method. For example, in the case of the flow-through type, the specific binding substance described above is adjusted to a predetermined concentration, and the liquid is applied to the porous membrane in a certain amount, such as a specific symbol such as a dot or +. At this time, in order to ensure the reliability of the immunochromatographic detection method, a protein or compound that can bind to the conjugate is immobilized at a position different from the specific binding substance that binds to the detection target to be a “control line”. It is common. In addition, the specific binding substance that binds to the control reagent can be immobilized at a position different from the specific binding substance that binds to the detection target to form a “control line”.
ラテラルフロー式の場合には、上記の特異的結合性物質を所定の濃度に調整しその液をノズルから一定の速度で吐出しながら水平方向に移動させることのできる機構を有する装置などを用いて、ライン状に多孔性メンブレンに塗布することにより行われる。この際、特異的結合性物質の濃度は０．１〜５ｍｇ／ｍＬが好ましく、０．５〜３ｍｇ／ｍＬがさらに好適である。また、特異的結合性物質の多孔性メンブレンへの固定化量は、フロースルー式の場合には多孔性メンブレンに滴下する塗付量を調節することによって最適化でき、ラテラルフロー式の場合には上記の装置のノズルからの吐出速度を調節することによって最適化できる。特に、ラテラルフロー式の場合、０．５〜２μＬ／ｃｍが好適である。
なお、本発明において、「フロースルー式メンブレンアッセイ」という場合は、検体液等が多孔性メンブレンに対して垂直に通過するように展開する方式を指し、「ラテラルフロー式メンブレンアッセイ」という場合は、検体液等が多孔性メンブレンに対して並行方向に移動するように展開する方式を指す。
In the case of the lateral flow type, a device having a mechanism that can move the specific binding substance to a predetermined concentration and move the liquid in a horizontal direction while discharging the liquid from the nozzle at a constant speed is used. It is performed by applying the porous membrane in a line shape. At this time, the concentration of the specific binding substance is preferably 0.1 to 5 mg / mL, and more preferably 0.5 to 3 mg / mL. In addition, the amount of specific binding substance immobilized on the porous membrane can be optimized by adjusting the amount applied to the porous membrane in the case of the flow-through type, and in the case of the lateral flow type. It can be optimized by adjusting the discharge speed from the nozzle of the above apparatus. In particular, in the case of the lateral flow type, 0.5 to 2 μL / cm is preferable.
In the present invention, the term “flow-through membrane assay” refers to a method in which a sample solution or the like is developed so as to pass perpendicularly to the porous membrane, and the term “lateral flow membrane assay” This refers to a method in which the sample liquid or the like is developed so as to move in a parallel direction with respect to the porous membrane.
また、本発明において、対象物に結合特異的結合性物質の多孔性メンブレンへの塗付位置については、ラテラルフロー式の場合、コンジュゲートパッドから、上記検出試薬が毛細管現象によって展開し、それぞれの特異的結合性物質が塗付されたラインを順に通過するように配置されれば良い。好ましくは検出対象物に結合する特異的結合性物質の塗付されたラインが上流にあり、コントロール特異的結合性物質の塗付されたラインはその下流に位置するように配置するのが好ましい。この際、それぞれのライン間の距離は標識体のシグナル検出が可能であるように十分の距離をとることが望ましい。フロースルー式の場合にも、対象物に結合する特異的結合性物質の塗付位置は標識体のシグナル検出が可能であるように配置されていれば良い。 In the present invention, the position of application of the binding-specific binding substance to the target object on the porous membrane is the lateral flow type, and the detection reagent is developed from the conjugate pad by capillary action in the case of the lateral flow type. What is necessary is just to arrange | position so that a specific binding substance may pass through the coated line in order. It is preferable to arrange so that the line to which the specific binding substance that binds to the detection target is applied is upstream, and the line to which the control specific binding substance is applied is located downstream thereof. At this time, it is desirable that the distance between the lines is sufficiently long so that the signal of the label can be detected. Even in the case of the flow-through type, the application position of the specific binding substance that binds to the target may be arranged so that the signal of the label can be detected.
上記の多孔性メンブレンへ塗付する特異的結合性物質液は、通常所定の緩衝液を用いて調製することができる。その緩衝液の種類としては、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、グッド緩衝液など通常使用される緩衝液を挙げることができる。緩衝液のｐＨは、６．０〜９．５の範囲が好ましく、使用する特異的結合性物質の性質に応じ適宜設定すれば良い。例えば、後述の抗ｃＴｎＩ抗体ではｐＨ８．０の緩衝液が使用できる。緩衝液には、さらにＮａＣｌなどの塩類、スクロースなどの安定剤や保存剤、プロクリンなどの防腐剤等を含んでもよい。塩類はＮａＣｌなどのようにイオン強度の調整のために含ませるもののほか、水酸化ナトリウムなど緩衝液のｐＨを調整する工程で添加するようになるものも含まれる。多孔性メンブレンに特異的結合性物質を固定化した後、さらに、通常使用されるブロッキング剤を溶液あるいは蒸気状にして特異的結合性物質固定化部位以外を被覆し、ブロッキングを行うこともできる。本明細書では、上記のように特異的結合性物質が固定化された多孔性メンブレンを「特異的結合性物質固定化メンブレン」ということがある。 The specific binding substance solution to be applied to the porous membrane can usually be prepared using a predetermined buffer solution. Examples of the buffer solution include a buffer solution usually used such as a phosphate buffer solution, a Tris buffer solution, and a Good buffer solution. The pH of the buffer is preferably in the range of 6.0 to 9.5, and may be set as appropriate according to the nature of the specific binding substance used. For example, a pH 8.0 buffer can be used for the anti-cTnI antibody described below. The buffer may further contain salts such as NaCl, stabilizers such as sucrose, preservatives, preservatives such as procrine, and the like. In addition to salts such as NaCl that are added to adjust the ionic strength, salts such as sodium hydroxide that are added in the step of adjusting the pH of the buffer solution are also included. After the specific binding substance is immobilized on the porous membrane, blocking can also be carried out by coating a portion other than the specific binding substance immobilization site with a normally used blocking agent in the form of a solution or vapor. In the present specification, a porous membrane on which a specific binding substance is immobilized as described above may be referred to as a “specific binding substance-immobilized membrane”.
（吸収パッド）
本発明において、吸収パッドとは、多孔性メンブレンを移動・通過した検体を吸収することにより、検体の展開を制御する液体吸収性を有する部位である。ラテラルフロー式においては、試験片の最下流に設ければよく、フロースルー式においては、例えば特異的結合性物質固定化メンブレンの下部に設ければよい。該吸収パッドとしては、例えば、ろ紙を用いることができるが、これに限定されない。
(Absorption pad)
In the present invention, the absorption pad is a part having liquid absorbency that controls the development of the specimen by absorbing the specimen that has moved and passed through the porous membrane. In the lateral flow type, it may be provided at the most downstream side of the test piece, and in the flow through type, for example, it may be provided at the lower part of the specific binding substance-immobilized membrane. As the absorbent pad, for example, filter paper can be used, but is not limited thereto.
（バッキングシート）
本発明において、バッキングシートとは、試験片を支持するための固相であり、プラスチック製のシートに粘着材が付着したものが通常用いられる。バッキングシートの材質としては、ポリスチレン、ポリエステル、ポリプロピレン、塩化ビニルなどが挙げられるがこれに限定されない。バッキングシートの色は特に問わないが、メンブレンと同色であることが好ましく、メンブレンが白色である場合は、バッキングシートも白色であることが望ましい。
(Backing sheet)
In the present invention, the backing sheet is a solid phase for supporting a test piece, and a sheet in which an adhesive material is attached to a plastic sheet is usually used. Examples of the material for the backing sheet include, but are not limited to, polystyrene, polyester, polypropylene, and vinyl chloride. The color of the backing sheet is not particularly limited, but is preferably the same color as the membrane. When the membrane is white, the backing sheet is also preferably white.
(トップフィルム）
本発明において、トップフィルムとは、試験片の最上面を被覆するシート状部材のことをいい、特異的結合性物質が固定化された多孔性のメンブレンの機械的強度を上げたり、アッセイ中の水分の蒸発（乾燥）を防ぐ目的で用いられる。トップフィルムの材質としては、前記目的が達成できる材質であればいずれでもよく、ポリエステルなどが挙げられ、粘着材により試験片上に被覆することもできるし、ラミネート加工することもできる。本発明において、トップフィルムを試験片に被覆することで強まる白抜け現象が、メンブレンの裏打ち部材を不透明にすることで当該現象を弱めることができることが判明した。したがって、トップフィルムを設けた試験片では本発明の効果がより顕著なものとなる。
(Top film)
In the present invention, the top film refers to a sheet-like member that covers the uppermost surface of a test piece, and increases the mechanical strength of a porous membrane on which a specific binding substance is immobilized, Used to prevent moisture evaporation (drying). As the material of the top film, any material can be used as long as the object can be achieved. Examples thereof include polyester, and the top film can be coated on the test piece with an adhesive material or can be laminated. In the present invention, it has been found that the white spot phenomenon strengthened by covering the test piece with the top film can be weakened by making the membrane backing member opaque. Therefore, the effect of the present invention becomes more remarkable in the test piece provided with the top film.
（検出デバイス）
本発明のイムノクロマト用試験片は、試験片の大きさや、検体の添加方法・位置、特異的結合性物質固定化メンブレンにおける特異的結合性物質の固定化位置、シグナルの検出方法などを考慮した適当な容器（ハウジング）に格納・搭載して使用することができ、このように格納・搭載された状態を「デバイス」という。
(Detection device)
The immunochromatographic test strip of the present invention is suitable in consideration of the size of the test strip, the addition method / position of the specimen, the specific binding substance immobilization position on the specific binding substance immobilization membrane, the signal detection method, etc. It can be stored and mounted in a simple container (housing), and the state stored and mounted in this way is called a “device”.
（その他）
本明細書において、「多孔性メンブレン」を「固相」、抗原や抗体などの特異的結合性物質を多孔性メンブレンに物理的あるいは化学的に担持させることあるいは担持させた状態を「固定」、「固定化」、「固相化」、「感作」、「吸着」と表現することがある。
(Other)
In the present specification, “porous membrane” is “solid phase”, and a specific binding substance such as an antigen or an antibody is physically or chemically supported on the porous membrane, or the state in which the porous membrane is supported is “fixed”, It may be expressed as “immobilization”, “solid phase”, “sensitization”, “adsorption”.
（検体）
本発明の検出方法において検出対象物を含む「検体」とは、血液、尿、痰、唾液、鼻汁、鼻腔拭い液、咽頭拭い液、その他の体液、糞便等の生体試料等をいう。生体試料は、そのまま検体として用いてもよく、適宜希釈液によって希釈したり、抽出および／または濾過したものも本発明の検体に含まれる。血液検体は、全血のほか、赤血球、血漿、血清等が挙げられる。
また、血液検体には、採血時にＥＤＴＡやヘパリンなどの抗凝固剤を添加した採血管により採血した検体も含まれる。
(Sample)
In the detection method of the present invention, the “specimen” including the detection target refers to blood, urine, sputum, saliva, nasal discharge, nasal wiping liquid, pharyngeal wiping liquid, other body fluids, biological samples such as feces, and the like. A biological sample may be used as a specimen as it is, and a specimen diluted as appropriate with a diluent, extracted and / or filtered is also included in the specimen of the present invention. Blood samples include whole blood, red blood cells, plasma, serum and the like.
The blood sample also includes a sample collected by a blood collection tube to which an anticoagulant such as EDTA or heparin is added at the time of blood collection.
（検出対象物）
本発明の検出対象物としては、血液（全血）、赤血球、血清、血漿、尿、唾液又は喀痰などの生物検体中に存在する物質で、例えば、ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク）、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭなどの炎症関係マーカー、フィブリン分解産物（例えばＤダイマー）、可溶性フィブリン、ＴＡＴ（トロンビン−アンチトロンビン複合体）、ＰＩＣ（プラスミン−プラスミンインヒビター複合体）などの凝固・線溶マーカー、酸化ＬＤＬ、ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）、Ｈ−ＦＡＢＰ（心臓型脂肪酸結合タンパク）、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）などの循環関連マーカー、アディポネクチンなどの代謝関連マーカー、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＡＦＰ（α−フェトプロテイン）、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）などの腫瘍マーカー、ＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、クラミジアトラコマティス、淋菌などの感染症関連マーカー、アレルゲン特異ＩｇＥ（免疫グロブリンＥ）、ホルモン、薬物などが例示される。これらの中でも、検体として全血を使用したいとする要望が高い、Ｄダイマー、ＣＲＰ、ＢＮＰ、Ｈ−ＦＡＢＰ、ｃＴnＩなどがより好ましい。
(Detection target)
The detection target of the present invention is a substance present in a biological sample such as blood (whole blood), red blood cells, serum, plasma, urine, saliva or sputum, such as CRP (C-reactive protein), IgA, IgG. Inflammation-related markers such as IgM, fibrin degradation products (for example, D dimer), soluble fibrin, TAT (thrombin-antithrombin complex), PIC (plasmin-plasmin inhibitor complex) and other coagulation / fibrinolytic markers, oxidized LDL, Circulation-related markers such as BNP (brain natriuretic peptide), H-FABP (cardiac fatty acid binding protein), cardiac troponin I (cTnI), metabolism-related markers such as adiponectin, CEA (carcinoembryonic antigen), AFP (α-) Fetoprotein), CA19-9, CA125, PSA (prostate specific antigen) Tumor markers, HBV of (B hepatitis virus), HCV (C hepatitis virus), Chlamydia trachomatis, infections associated markers, such as Neisseria gonorrhoeae, allergen-specific IgE (immunoglobulin E), hormones, such as a drug is exemplified. Among these, D dimer, CRP, BNP, H-FABP, cTnI, and the like, which are highly desired to use whole blood as a specimen, are more preferable.
（特異的結性合物質）
本発明において、金コロイドなどの不溶性担体粒子や多孔性メンブレンに担持される測定対象物質に対する特異的結合性物質としては、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、糖質、ＤＮＡ、ＲＮＡ、受容体、ハプテンなどが挙げられ、分子量の高低および天然、合成といった由来に特に制限はないが、例えば、免疫反応を利用する免疫学的測定法に使用され得る抗体または抗原が挙げられる。
(Specific binding compound)
In the present invention, specific binding substances for insoluble carrier particles such as colloidal gold and a measurement target substance supported on a porous membrane include proteins, peptides, amino acids, lipids, carbohydrates, DNA, RNA, receptors, haptens. There are no particular restrictions on the molecular weight, natural or synthetic origin, and examples include antibodies or antigens that can be used in immunological assays utilizing immune reactions.
（本発明で用いられる抗体）
本発明に用いられる検出対象物に対する抗体は、検出対象物に対して特異的に反応する抗体であれば、作製する方法によって何ら限定されるものではなく、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。より好ましくは、モノクローナル抗体である。一般的に当該抗体を産生するハイブリドーマは、ＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ、第２５６巻４９５頁（１９７５年）参照）に準じ、検出対象物を免疫原として免疫した動物の脾臓細胞と同種のミエローマ細胞（骨髄腫細胞）とを細胞融合して作製することができる。
(Antibodies used in the present invention)
The antibody to the detection target used in the present invention is not limited in any way as long as it is an antibody that reacts specifically with the detection target, and even a polyclonal antibody is a monoclonal antibody. May be. More preferably, it is a monoclonal antibody. In general, a hybridoma producing the antibody is a myeloma of the same kind as the spleen cell of an animal immunized with the detection target as an immunogen according to the method of Kohler and Milstein (see Nature, Vol. 256, page 495 (1975)). Cells (myeloma cells) can be produced by cell fusion.
本発明の抗体としては、抗体分子全体のほかに抗原抗体反応活性を有する抗体の機能性断片を使用することも可能である。一般的な動物（マウス、ヤギ、ヒツジなど）への免疫工程を経て得られたもののほか、遺伝子組み換え技術等により免疫原（測定対象物質）を免疫する動物とは異なる動物種のアミノ酸配列に変化させた抗体（キメラ特異的結合性物質、ヒト化抗体、又は完全ヒト化抗体等）であってもよい。抗体の機能性断片としては抗原抗体反応活性を有する断片であるＦ（ａｂ'）2、Ｆａｂ'や一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）などが挙げられる。これらの抗体の機能性断片は前記のようにして得られた抗体をタンパク質分解酵素（例えば、ペプシンやパパインなど）で処理することにより製造できる。 As the antibody of the present invention, a functional fragment of an antibody having antigen-antibody reaction activity can be used in addition to the whole antibody molecule. In addition to those obtained through the immunization process for general animals (mouse, goat, sheep, etc.), the amino acid sequence of the animal species is different from the animal immunized with the immunogen (substance to be measured) by genetic recombination technology. It may be an antibody (such as a chimera-specific binding substance, a humanized antibody, or a fully humanized antibody). Examples of the functional fragment of the antibody include F (ab ′) 2 , Fab ′, and single chain antibody (scFv), which are fragments having antigen-antibody reaction activity. Functional fragments of these antibodies can be produced by treating the antibody obtained as described above with a proteolytic enzyme (for example, pepsin or papain).
ここで、いわゆるサンドイッチの形成により検出対象物を検出する測定法において用いられる抗体がモノクローナル抗体の場合、標識体固定化用抗体（第一の抗体）と多孔性メンブレン固定化用抗体（第二の抗体）の関係は、第一の抗体のエピトープが一価の場合は第二の抗体のエピトープは第一の抗体と異なるものが用いられ、第一の抗体のエピトープが多価の場合は第二の抗体のエピトープは第一の抗体と同じであってもよいし、異なるものであってもよい。 Here, when the antibody used in the measurement method for detecting a detection target by so-called sandwich formation is a monoclonal antibody, an antibody for immobilizing a labeled body (first antibody) and an antibody for immobilizing a porous membrane (second antibody) The relationship of the antibody) is such that when the epitope of the first antibody is monovalent, the epitope of the second antibody is different from that of the first antibody, and when the epitope of the first antibody is multivalent, The epitope of the antibody may be the same as or different from the first antibody.
（キット）
本発明のイムノクロマト試験片を利用した検出キットは、少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、抗体が固定化された検出部を有するイムノクロマト試験片であって、検出部は多孔性メンブレンの表面に固定化されており、前記多孔性メンブレンの裏面に不透明基材が配置されていることを特徴とする前記試験片を含むものであればよい。
本検出キットは、他に検出に必要な試薬（例えばコンジュゲートを含む検出試薬）、検体の希釈液、試験用チューブ、便採取用の綿棒、取扱い説明書、試験片格納用のハウジングなどを含んでもよい。
以下、本発明の具体的な実施例を記載するが例示にすぎず本発明はこれらに限定されるものではない。
(kit)
The detection kit using the immunochromatographic test strip of the present invention is an immunochromatographic test strip including at least a porous membrane, and having a sample supply section, a developing section, and a detection section on which an antibody is immobilized, wherein the detection section is a porous membrane. What is necessary is just to include the said test piece characterized by being fixed to the surface of this and the opaque base material being arrange | positioned at the back surface of the said porous membrane.
This detection kit includes other reagents necessary for detection (for example, detection reagents including conjugates), specimen dilutions, test tubes, swabs for stool collection, instruction manuals, housings for specimen storage, etc. But you can.
Hereinafter, specific examples of the present invention will be described, but they are merely illustrative and the present invention is not limited thereto.
〔試験例１〕白抜け現象回避効果の確認試験
本発明の白色基材で裏打ちされた抗体固定化メンブレンを用いた場合の白抜け現象回避効果を従来の透明基材で裏打ちされた場合と比較した。
[Test Example 1] Confirmation test of whitening phenomenon avoidance effect Comparison of whitening phenomenon avoidance effect when using an antibody-immobilized membrane lined with a white base material of the present invention compared with a case where a white background is lined with a conventional transparent base material did.
１．本発明のイムノクロマト検出デバイスの作製
１）金コロイド標識抗ｃＴｎＩモノクローナル抗体（抗ｃＴｎＩ抗体コンジュゲート）の調製
（ｉ）金コロイド溶液の調製（６０ｎｍ）
９３℃に加温した５０００ｍＬの精製水に対し、７％（ｗ／ｖ）クエン酸三アンモニウム水溶液を１０ｍＬ添加して攪拌混合した。続いて、５％（ｗ／ｖ）テトラクロロ金（ＩＩＩ）酸水溶液を１０ｍＬ添加し、攪拌しながら１０分間反応させた後、反応液を沸騰させた。この後、氷水中で冷却し、平均粒子径が６０ｎｍの金コロイドの溶液を調製した。この平均粒子径が６０ｎｍの金コロイドの溶液を、精製水にて、金コロイドの極大吸収波長での吸光度で１ ＯＤ／ｍＬに調整した。
1. Preparation of immunochromatographic detection device of the present invention 1) Preparation of colloidal gold labeled anti-cTnI monoclonal antibody (anti-cTnI antibody conjugate) (i) Preparation of colloidal gold solution (60 nm)
To 5000 mL of purified water heated to 93 ° C., 10 mL of 7% (w / v) triammonium citrate aqueous solution was added and mixed with stirring. Subsequently, 10 mL of 5% (w / v) tetrachloroauric (III) acid aqueous solution was added and reacted for 10 minutes with stirring, and then the reaction solution was boiled. Thereafter, the mixture was cooled in ice water to prepare a colloidal gold solution having an average particle size of 60 nm. This gold colloid solution having an average particle diameter of 60 nm was adjusted to 1 OD / mL with purified water at an absorbance at the maximum absorption wavelength of the gold colloid.
（ｉｉ）抗ｃＴｎＩ抗体コンジュゲートの調製
上記１ ＯＤ／ｍＬの６０ｎｍ金コロイド溶液（ｐＨ８．０）２００ｍＬに対し、２ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で６９．３μｇ／ｍL希釈した抗ｃＴｎＩモノクローナル抗体を１０ｍＬ添加し、室温で１０分間撹拌した。当該金コロイドと抗体との混合液に対し、０．５％（ｗ／ｖ）のＮｅｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓａｖｅｒ（東洋紡社、Ｎｏ．ＮＰＳ−３０１）を含む精製水を１０ｍL添加し、室温で５分間攪拌した。その後、１０℃にて、１１９００×ｇで４５分間遠心した。上清を除去した後、得られた沈渣に、０．２％（ｗ／ｖ）のＮｅｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓａｖｅｒ水溶液を１０ｍＬ添加してコンジュゲートを懸濁し、抗ｃＴｎＩ抗体コンジュゲートを得た。
(Ii) Preparation of anti- cTnI antibody conjugate Anti- cTnI diluted 69.3 μg / mL with 2 mM Tris-HCl buffer (pH 7.0) with respect to 200 mL of the above 1 OD / mL 60 nm colloidal gold solution (pH 8.0) 10 mL of monoclonal antibody was added and stirred at room temperature for 10 minutes. 10 mL of purified water containing 0.5% (w / v) Neo Protein Saver (Toyobo, No. NPS-301) was added to the mixture of the colloidal gold and the antibody, and the mixture was stirred at room temperature for 5 minutes. . Then, it centrifuged at 11900xg for 45 minutes at 10 degreeC. After removing the supernatant, 10 mL of 0.2% (w / v) Neo Protein Saver aqueous solution was added to the resulting precipitate to suspend the conjugate to obtain an anti-cTnI antibody conjugate.
（ｉｉｉ）金コロイド溶液の調製（４０ｎｍ）
７３℃に加温した５０００ｍＬの精製水に対し、５％（ｗ／ｖ）クエン酸三アンモニウム水溶液を１０ｍＬ添加して攪拌混合した。続いて、５％（ｗ／ｖ）テトラクロロ金（ＩＩＩ）酸水溶液を１０ｍＬ添加し、攪拌しながら１０分間反応させた後、反応液を沸騰させた。この後、氷水中で冷却し、平均粒子径が４０ｎｍの金コロイドの溶液を調製した。この平均粒子径が４０ｎｍの金コロイドの溶液を、精製水にて、金コロイドの極大吸収波長での吸光度で１ ＯＤ／ｍＬに調整した。
(Iii) Preparation of colloidal gold solution (40 nm)
To 5000 mL of purified water heated to 73 ° C., 10 mL of 5% (w / v) aqueous triammonium citrate solution was added and mixed with stirring. Subsequently, 10 mL of 5% (w / v) tetrachloroauric (III) acid aqueous solution was added and reacted for 10 minutes with stirring, and then the reaction solution was boiled. Then, it cooled in ice water and prepared the gold colloid solution whose average particle diameter is 40 nm. This gold colloid solution having an average particle diameter of 40 nm was adjusted to 1 OD / mL with purified water at an absorbance at the maximum absorption wavelength of the gold colloid.
（ｉｖ）コントロールライン用金コロイド標識ＫＬＨ（ＫＬＨコンジュゲート）の調製
上記１ ＯＤ／ｍＬの４０ｎｍ金コロイド溶液（ｐＨ６．１）２００ｍＬに対し、２ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ６．１）で３７５μg／ｍＬとなるよう溶解したＫＬＨ（シグマ社製）を２．６７ｍＬ添加し、室温で１０分間撹拌した。当該金コロイドとＫＬＨとの混合液に対し、１０％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）水溶液を２０ｍＬ添加し、室温で５分間攪拌した。その後、１０℃にて、４５分間遠心し、上清を除去した後、得られた沈渣に、Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｃｒｉｐｐｓ社）を１０．７ｍＬ添加してコンジュゲートを懸濁し、ＫＬＨコンジュゲートを得た。
(Iv) Preparation of gold colloid-labeled KLH (KLH conjugate) for control line 375 μg / mL with 2 mM phosphate buffer (pH 6.1) with respect to 200 mL of 40 nm gold colloid solution (pH 6.1) of the above 1 OD / mL 2.67 mL of KLH (manufactured by Sigma) dissolved so as to be added was added and stirred at room temperature for 10 minutes. 20 mL of 10% bovine serum albumin (BSA) aqueous solution was added to the mixture of the gold colloid and KLH, and the mixture was stirred at room temperature for 5 minutes. Thereafter, the mixture is centrifuged at 10 ° C. for 45 minutes, and the supernatant is removed. Then, 10.7 mL of Conjugate Dilution Buffer (Scripps) is added to the resulting precipitate to suspend the conjugate, thereby obtaining a KLH conjugate. It was.
２）コンジュゲートパッドの作製
抗ｃＴｎＩ抗体コンジュゲート３ ＯＤ、ＫＬＨコンジュゲートを０．７５ ＯＤ、０．５％ ＬｉｐｉｄｕｒｅＢＬ−１３０１、０．２５ｍｇ／ｍｌ Ｈｅｔｅｒｏｂｌｏｃｋ、２．４％ ラクトース、２．０％ ＮＰＳ、２０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）、全量に対し６分の１量のＣｏｎｊｕｇａｔｅ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒを混合してコンジュゲート溶液を作製し、一定体積のグラスファイバー製パッド（メルクミリポア社）に該パッド体積の１．２倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で７０℃、４５分間加温することにより乾燥させ、コンジュゲートパッドとした。
2) Preparation of conjugate pad Anti-cTnI antibody conjugate 3 OD, KLH conjugate 0.75 OD, 0.5% Lipidure BL-1301, 0.25 mg / ml Heteroblock, 2.4% lactose, 2.0% NPS , 20 mM MOPS (pH 7.2), and 1/6 of Conjugate Dilution Buffer are mixed to make a conjugate solution, and a fixed volume of glass fiber pad (Merck Millipore) is added to 1 of the pad volume. .. Doubled in volume. The conjugate pad was dried by heating in a dry oven at 70 ° C. for 45 minutes.
３）抗ｃＴｎＩモノクローナル抗体固定化メンブレン（抗体固定化メンブレン）の作製
テストライン用に抗ｃＴｎＩモノクローナル抗体を２．５％スクロースを含む１０ｍＭ ＰＢ（０．０９％ＮａＮ３入り）（ｐＨ８．０）で３ｍｇ／ｍＬに希釈調製した。
また、コントロールライン用に、ウサギ抗ＫＬＨポリクローナル抗体（Ｂｅｔｈｙｌ社製）を２．５％スクロースを含む１０ｍＭ ＰＢ（０．０９％ＮａＮ３入り）（ｐＨ７．２）で１ｍｇ／ｍＬに希釈調製した。
表１に示す透明あるいは白色の基材で裏打ちされたニトロセルロースメンブレンの短辺の一端の内側の位置に上記抗ｃＴｎＩモノクローナル抗体をイムノクロマト用ディスペンサー「ＸＹＺ３０５０」（ＢＩＯ ＤＯＴ社）を用いて１μＬ／ｃｍとなるよう設定し、ライン状に塗布し、テストラインを形成した。テストラインの位置から約４ｍｍの間隔をあけて抗ＫＬＨポリクローナル抗体を同様に塗布し、コントロールラインを形成した。ドライオーブン内で７０℃、４５分乾燥し、抗体固定化メンブレンとした。
3) Preparation of anti-cTnI monoclonal antibody-immobilized membrane (antibody-immobilized membrane) Anti-cTnI monoclonal antibody for test line was prepared with 10 mM PB (containing 0.09% NaN 3 ) (pH 8.0) containing 2.5% sucrose. Dilute to 3 mg / mL.
For control lines, a rabbit anti-KLH polyclonal antibody (Bethyl) was diluted to 1 mg / mL with 10 mM PB (containing 0.09% NaN 3 ) (pH 7.2) containing 2.5% sucrose.
Using the immunochromatographic dispenser “XYZ3050” (BIO DOT), the above-mentioned anti-cTnI monoclonal antibody is placed at a position inside one end of the short side of the nitrocellulose membrane lined with a transparent or white substrate shown in Table 1 at 1 μL / cm. Was applied to form a test line. An anti-KLH polyclonal antibody was similarly applied at a distance of about 4 mm from the position of the test line to form a control line. The membrane was dried in a dry oven at 70 ° C. for 45 minutes to obtain an antibody-immobilized membrane.
４）サンプルパッドの作製
０．５％ラクトース、２％ポリブレン、を含む２０ｍＭ ＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）を調整し、サンプルパッド前処理溶液とした。
グラスファイバー製パッド（Ｌｙｄａｌｌ社）を適宜必要な大きさにカットして、サンプルパッド前処理溶液を該パッド体積の１．５倍容量浸み込ませ、ドライオーブン内で７０℃、４５分乾燥したものをサンプルパッドとして用いた。
4) Preparation of sample pad 20 mM MOPS (pH 7.2) containing 0.5% lactose and 2% polybrene was prepared to prepare a sample pad pretreatment solution.
A glass fiber pad (Lydall) was appropriately cut to the required size, soaked the sample pad pretreatment solution by 1.5 times the pad volume, and dried in a dry oven at 70 ° C. for 45 minutes. A sample was used as a sample pad.
５）イムノクロマト試験片の作製
バッキングシート（ａ）に上記各基材（ｂ−２）で裏打ちされた抗体固定化多孔性メンブレン（ｂ−１）を貼り、展開上流部側に抗ｃＴｎＩ抗体（ｃ）、次いで抗ＫＬＨ抗体（ｄ）の順になるように塗布部が配置されており、さらにメンブレンの上に血球分離膜（３ｒｄ Ｐａｄ）（ｅ）を装着した。次いで、上記２）で作製したコンジュゲートパッド（ｆ）を配置装着し、さらにこのコンジュゲートパッドに重なるように上記４）で作製したサンプルパッド（ｇ）を配置装着し、反対側の端には吸収パッド（ｈ）を配置装着した。最後に、吸収パッドと抗体固定化メンブレンの表面を、抗体固定化メンブレンの一部が露出するようにトップフィルム（i）で被覆した。このように各構成要素を重ね合わせた構造物に切断してイムノクロマト試験片を作製した。該試験片は、アッセイの際、プラスチック性の専用のハウジング（サンプル添加窓部及び検出窓部を有する、図４中図示せず）に格納・搭載し、イムノクロマトテスト検出デバイスの形態にしてもよい。図４にイムノクロマト試験片の模式構成図を示した。
5) Preparation of immunochromatographic test piece The antibody-immobilized porous membrane (b-1) lined with each of the substrates (b-2) above is attached to the backing sheet (a), and the anti-cTnI antibody (c ), And then the coating part was arranged in the order of anti-KLH antibody (d), and a blood cell separation membrane (3rd Pad) (e) was mounted on the membrane. Next, the conjugate pad (f) prepared in 2) above is placed and mounted, and the sample pad (g) prepared in 4) above is placed and mounted so as to overlap this conjugate pad, and the opposite end is placed on the opposite end. An absorbent pad (h) was placed and mounted. Finally, the surfaces of the absorption pad and the antibody-immobilized membrane were covered with a top film (i) so that a part of the antibody-immobilized membrane was exposed. Thus, the immunochromatographic test piece was produced by cutting each structural element into a superposed structure. In the assay, the test piece may be stored and mounted in a dedicated plastic housing (having a sample addition window and a detection window, not shown in FIG. 4) to form an immunochromatographic test detection device. . FIG. 4 shows a schematic configuration diagram of an immunochromatographic test piece.
２．イムノクロマト法による検出又は測定
０〜１０ｎｇ／ｍＬの範囲内で何れかの濃度の心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）を含む血漿検体液１２０μＬを上記で作成したイムノクロマトテスト検出デバイスのサンプルパッド窓部に添加し、１５分後にテストライン付近を目視観察し、白抜けの有無を評価した。結果を表１に示す。
＜白抜け評価基準＞
目視でサンプルを１２もしくは２０個評価し、１個でも白抜けを認めた場合に白抜け「有り」とし、０個の場合を白抜け「無し」とした。
2. Detection or measurement by immunochromatography method 120 μL of plasma specimen solution containing any concentration of cardiac troponin I (cTnI) within the range of 0 to 10 ng / mL is added to the sample pad window of the immunochromatographic test detection device prepared above, After 15 minutes, the vicinity of the test line was visually observed to evaluate the presence or absence of white spots. The results are shown in Table 1.
<Outline evaluation criteria>
Twelve or twenty samples were visually evaluated. When even one of the samples was recognized as white, “white” was judged as “existing”, and when zero, “white” was judged as “no”.
３．結果
透明基材で裏打ちされたニトロセルロースメンブレンを抗体固定化メンブレンとして用いた場合は、いずれもテストラインの少し前で白抜けの現象が観察されたが、本発明の白色基材で裏打ちされたニトロセルロースメンブレンを抗体固定化メンブレンとして用いた場合は、白抜けの現象が見られなかった。したがって、イムノクロマト試験の目視評価において視認性が向上することにより、より正しい評価が可能となる。
また、今回は、目視観察により白抜けを判定・評価したが、仮に装置による光学的な測定の場合には、波形の乱れが回避されベースラインを正しく設定することが可能となる。
3. Results When using a nitrocellulose membrane lined with a transparent substrate as an antibody-immobilized membrane, white spots were observed just before the test line, but they were lined with the white substrate of the present invention. When a nitrocellulose membrane was used as an antibody-immobilized membrane, no white spots were observed. Therefore, more accurate evaluation becomes possible by improving the visibility in the visual evaluation of the immunochromatographic test.
In addition, this time, white spots are determined and evaluated by visual observation. However, in the case of optical measurement by an apparatus, the waveform is prevented from being disturbed and the baseline can be set correctly.
〔試験例２〕ＣＶ低減効果の確認試験
本発明の白色基材で裏打ちされた抗体固定化メンブレンを用いて光学測定した場合の測定値のばらつきを従来の透明基材で裏打ちされた場合と比較した。
[Test Example 2] Confirmation test of CV reduction effect Comparison of measured values when optically measured using an antibody-immobilized membrane lined with a white base material of the present invention is compared with a case where a conventional transparent base material is lined. did.
１．イムノクロマトデバイスの製造
透明基材で裏打ちされたメンブレン２種類（ＨＦ１８０、ＣＮ１４０）と本発明の白色基材で裏打ちされた多孔性メンブレン（ＣＮ１５０）を使用した以外は試験例１と同様にしてイムノクロマト試験片を製造した。
1. Production of immunochromatographic device Immunochromatographic test in the same manner as in Test Example 1 except that two types of membranes lined with a transparent substrate (HF180, CN140) and a porous membrane lined with a white substrate of the present invention (CN150) were used. Pieces were produced.
２．イムノクロマト法による検出又は測定
４０又は６０ｐｇ／ｍＬの心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）を含む血漿検体液１２０μＬを上記で作成したイムノクロマトテストデバイスのサンプルパッド窓部に添加し、１５分後にイムノクロマトリーダーラピッドピア（積水メディカル社）を用いてテストラインの呈色量（吸光度）を測定し、それらのＣＶ値（バラツキ）をそれぞれ算出した。ＣＶは変動係数（Coefficient of Variation) のことであり、標準偏差を平均値で割ることにより求めることができる。結果を図１に示す。
2. Detection or measurement by immunochromatography method 120 μL of plasma specimen solution containing 40 or 60 pg / mL myocardial troponin I (cTnI) was added to the sample pad window of the immunochromatographic test device prepared above, and 15 minutes later, immunochromato reader rapid peer (Sekisui) The color amount (absorbance) of the test line was measured using a medical company, and the CV value (variation) thereof was calculated. CV is a coefficient of variation and can be obtained by dividing the standard deviation by the average value. The results are shown in FIG.
３．結果
本発明の白色基材で裏打ちされた多孔性メンブレンを抗体固定化メンブレンとして用いた場合は、透明基材で裏打ちされたメンブレンを抗体固定化メンブレンとした場合に比べてＣＶ値が減少し、測定の再現性が向上した。
3. Results When the porous membrane lined with the white base material of the present invention is used as the antibody-immobilized membrane, the CV value is reduced as compared with the case where the membrane lined with the transparent base material is used as the antibody-immobilized membrane. Improved measurement reproducibility.
〔試験例３〕ＣＶ低減効果の確認試験（低濃度側）
被検出物質が低濃度の場合であっても試験例２のバラツキ低減効果が現われるかどうか試験を行った。
[Test Example 3] CV reduction effect confirmation test (low concentration side)
A test was conducted to determine whether or not the variation reduction effect of Test Example 2 appears even when the substance to be detected is at a low concentration.
１．イムノクロマトデバイスの製造
透明基材で裏打ちされたメンブレン（ＣＮ１４０）と本発明の白色基材で裏打ちされた多孔性メンブレン（ＣＮ１５０）の２ロットを用いたこと以外は試験例１と同様にしてイムノクロマト試験片を製造した。
1. Production of immunochromatographic device Immunochromatographic test in the same manner as in Test Example 1 except that two lots of a membrane (CN140) lined with a transparent substrate and a porous membrane (CN150) lined with a white substrate of the present invention were used. Pieces were produced.
２．イムノクロマト法による検出又は測定
１５ｐｇ／ｍＬの心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）を含む血漿検体液を用いた以外は試験例２同様に測定し、ＣＶ値（バラツキ）をそれぞれ算出した。結果を図２に示す。
2. Detection or measurement by immunochromatography The measurement was performed in the same manner as in Test Example 2 except that a plasma sample solution containing 15 pg / mL myocardial troponin I (cTnI) was used, and CV values (variation) were calculated. The results are shown in FIG.
３．結果
本発明の白色基材で裏打ちされた多孔性メンブレンを抗体固定化メンブレンとして用いた場合は、被検出対象の濃度が低濃度であっても、透明基材で裏打ちされたメンブレンを抗体固定化メンブレンとした場合に比べてＣＶ値が減少し、測定の再現性が向上した。また、異なるロット２種類で行っても同様の結果が得られた。
3. Results When the porous membrane lined with the white base material of the present invention is used as the antibody-immobilized membrane, the membrane lined with the transparent base material is immobilized with the antibody even when the concentration of the target to be detected is low. Compared to the membrane, the CV value decreased, and the reproducibility of the measurement was improved. Similar results were obtained even when two different lots were used.
〔試験例４〕ＣＶ低減効果の確認試験（高濃度側）
被検出物質が高濃度の場合であっても試験例２のバラツキ低減効果が現われるかどうか試験を行った。
[Test Example 4] Confirmation test of CV reduction effect (high concentration side)
A test was conducted to determine whether the variation reducing effect of Test Example 2 appears even when the substance to be detected is at a high concentration.
１．イムノクロマトデバイスの製造
透明基材で裏打ちされたメンブレン（ＣＮ１４０）と本発明の白色基材で裏打ちされた多孔性メンブレン（ＣＮ１５０）を用いたこと以外は試験例１と同様にしてイムノクロマト試験片を製造した。
1. Manufacture of an immunochromatographic device An immunochromatographic test piece was manufactured in the same manner as in Test Example 1 except that a membrane backed by a transparent substrate (CN140) and a porous membrane backed by a white substrate of the present invention (CN150) were used. did.
２．イムノクロマト法による検出又は測定
４００ｐｇ／ｍＬの心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）を含む血漿検体液を用いた以外は試験例２と同様に測定し、ＣＶ値（バラツキ）をそれぞれ算出した。結果を図３に示す。
2. Detection or measurement by immunochromatography The measurement was performed in the same manner as in Test Example 2 except that a plasma sample solution containing 400 pg / mL of cardiac troponin I (cTnI) was used, and CV values (variation) were calculated. The results are shown in FIG.
３．結果
本発明の白色基材で裏打ちされた多孔性メンブレンを抗体固定化メンブレンとして用いた場合は、被検出対象の濃度が高濃度であっても、透明基材で裏打ちされた多孔性メンブレンを抗体固定化メンブレンとした場合に比べてＣＶ値が大幅に減少し、測定の再現性が大幅に向上した。
3. Results When the porous membrane lined with the white base material of the present invention is used as the antibody-immobilized membrane, the porous membrane lined with the transparent base material is used as the antibody even if the concentration of the detection target is high. Compared to the case of using an immobilized membrane, the CV value was greatly reduced, and the reproducibility of the measurement was greatly improved.
本発明の少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、特異的結合性物質が固定化された検出部を有するイムノクロマト試験片であって、検出部は多孔性メンブレンの表面に固定化されており、前記多孔性メンブレンの裏面に不透明基材が配置されている試験片によれば、テストライン付近の白抜けが回避できる。 An immunochromatographic test piece comprising at least a porous membrane of the present invention, and having a sample supply part, a development part, and a detection part on which a specific binding substance is immobilized, wherein the detection part is immobilized on the surface of the porous membrane. According to the test piece in which the opaque base material is disposed on the back surface of the porous membrane, white spots near the test line can be avoided.
また、測定値のばらつきの少ないイムノクロマト試験片を提供することができる。
本発明によれば、試験片の白抜け回避により目視判定における視認性が向上することはもちろんのこと、光学測定における測定値のばらつきも低減されるため、いずれの検出方法においてもより正確な測定が実現できる。
In addition, an immunochromatographic test strip with little variation in measured values can be provided.
According to the present invention, the visibility in the visual determination is improved by avoiding white spots in the test piece, and also the variation in the measured value in the optical measurement is reduced. Therefore, more accurate measurement is possible in any detection method. Can be realized.
（ａ）バッキングシート
（ｂ）抗体固定化メンブレン
（ｂ−１）多孔性メンブレン
（ｂ−２）裏打ち基材
（ｃ）抗ｃＴｎＩ抗体（テストライン）
（ｄ）抗ＫＬＨ抗体（コントロールライン）
（ｅ）血球分離膜（３ｒｄ Ｐａｄ）
（ｆ）コンジュゲートパッド
（ｇ）サンプルパッド
（ｈ）吸収パッド
（ｉ）トップフィルム
(A) backing sheet (b) antibody-immobilized membrane (b-1) porous membrane (b-2) backing substrate (c) anti-cTnI antibody (test line)
(D) Anti-KLH antibody (control line)
(E) Blood cell separation membrane (3rd Pad)
(F) Conjugate pad (g) Sample pad (h) Absorbent pad (i) Top film
Claims (14)
少なくとも検出部を有する多孔性メンブレンを含み、前記多孔性メンブレンの裏側に当該多孔性メンブレンの裏打ちのための不透明基材が配置され、さらに、前記不透明基材の下にバッキングシートが配置されているイムノクロマト試験片。 An immunochromatographic detection method, wherein the following test piece is used;
A porous membrane having at least a detection portion; an opaque base material for backing the porous membrane is disposed on the back side of the porous membrane; and a backing sheet is further disposed under the opaque base material Immunochromatographic test piece.
以下の試験片を用いることを特徴とする前記方法；
少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、検出部を有するイムノクロマト試験片であって、前記検出部は多孔性メンブレン表面に固定化されており、
前記多孔性メンブレンの裏側に当該多孔性メンブレンの裏打ちのための不透明基材が配置され、さらに、前記不透明基材の下にバッキングシートが配置されている試験片。 A method for reducing variations in measured values in an immunochromatographic detection method,
Said method characterized in that the following test piece is used;
An immunochromatographic test piece including at least a porous membrane, having a sample supply part, a development part, and a detection part, wherein the detection part is immobilized on the porous membrane surface,
The porous opaque substrate for backside backing of those porous membranes of the membrane is disposed, further, a test piece backing sheet is disposed under the opaque substrate.
少なくとも多孔性メンブレンを含み、サンプル供給部、展開部、検出部を有するイムノクロマト試験片であって、前記検出部は多孔性メンブレン表面に固定化されており、
前記多孔性メンブレンの裏側に不透明基材が配置されている試験片。 In the immunochromatography detection method using a test piece, the method for reducing white spots in the test piece, wherein the following test piece is used;
An immunochromatographic test piece including at least a porous membrane, having a sample supply part, a development part, and a detection part, wherein the detection part is immobilized on the porous membrane surface,
The test piece by which the opaque base material is arrange | positioned at the back side of the said porous membrane.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018181825A JP6464308B1 (en) | 2018-09-27 | 2018-09-27 | Test specimen for immunochromatography |
| EP19864035.1A EP3859334A4 (en) | 2018-09-27 | 2019-09-26 | Test piece for immunochromatography |
| US17/277,880 US20210349085A1 (en) | 2018-09-27 | 2019-09-26 | Immunochromatographic test strip |
| CN201980061831.0A CN112740039A (en) | 2018-09-27 | 2019-09-26 | Immunochromatographic test piece |
| PCT/JP2019/037748 WO2020067233A1 (en) | 2018-09-27 | 2019-09-26 | Test piece for immunochromatography |
| KR1020217011183A KR20210064268A (en) | 2018-09-27 | 2019-09-26 | Specimens for Immunochromatography |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018181825A JP6464308B1 (en) | 2018-09-27 | 2018-09-27 | Test specimen for immunochromatography |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019000726A Division JP2020052028A (en) | 2019-01-07 | 2019-01-07 | Immunochromatography test piece |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP6464308B1 true JP6464308B1 (en) | 2019-02-06 |
| JP2020051910A JP2020051910A (en) | 2020-04-02 |
Family
ID=65270456
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018181825A Active JP6464308B1 (en) | 2018-09-27 | 2018-09-27 | Test specimen for immunochromatography |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6464308B1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021117862A1 (en) * | 2019-12-12 | 2021-06-17 | デンカ株式会社 | Immunoassay method and immunoassay device |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001004629A (en) * | 1999-06-18 | 2001-01-12 | Fuji Photo Film Co Ltd | Dry analysis method and dry analysis element |
| JP2009244231A (en) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Fujifilm Corp | Immunological detecting method |
| WO2009136476A1 (en) * | 2008-05-07 | 2009-11-12 | パナソニック株式会社 | Biosensor manufacturing method and biosensor |
| JP2010523996A (en) * | 2007-04-10 | 2010-07-15 | インバーネス・メデイカル・スウイツツアーランド・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | Assay device |
| WO2011032278A1 (en) * | 2009-09-17 | 2011-03-24 | Neoventures Biotechnology Limited | A method and apparatus for lateral flow determination of analyte concentration |
| WO2015012384A1 (en) * | 2013-07-25 | 2015-01-29 | 古河電気工業株式会社 | Test strip for immunochromatography, developing fluid used therefor, and immunochromatography using same |
| JP2017186262A (en) * | 2016-04-03 | 2017-10-12 | アーク・リソース株式会社 | Test monoclonal antibody, and diagnosis kit using this |
-
2018
- 2018-09-27 JP JP2018181825A patent/JP6464308B1/en active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001004629A (en) * | 1999-06-18 | 2001-01-12 | Fuji Photo Film Co Ltd | Dry analysis method and dry analysis element |
| JP2010523996A (en) * | 2007-04-10 | 2010-07-15 | インバーネス・メデイカル・スウイツツアーランド・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | Assay device |
| JP2009244231A (en) * | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Fujifilm Corp | Immunological detecting method |
| WO2009136476A1 (en) * | 2008-05-07 | 2009-11-12 | パナソニック株式会社 | Biosensor manufacturing method and biosensor |
| WO2011032278A1 (en) * | 2009-09-17 | 2011-03-24 | Neoventures Biotechnology Limited | A method and apparatus for lateral flow determination of analyte concentration |
| WO2015012384A1 (en) * | 2013-07-25 | 2015-01-29 | 古河電気工業株式会社 | Test strip for immunochromatography, developing fluid used therefor, and immunochromatography using same |
| JP2017186262A (en) * | 2016-04-03 | 2017-10-12 | アーク・リソース株式会社 | Test monoclonal antibody, and diagnosis kit using this |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| イムノクロマト法試薬用 バッキングシート・トップカバーテープ 製品カタログ, JPN6018048952, 7 March 2017 (2017-03-07) * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021117862A1 (en) * | 2019-12-12 | 2021-06-17 | デンカ株式会社 | Immunoassay method and immunoassay device |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2020051910A (en) | 2020-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4846573B2 (en) | Lateral flow assay device and method with natural analyte as reference | |
| KR101959574B1 (en) | Test strip for immunochromatography, and process for production thereof | |
| JP6168529B2 (en) | Conjugate for measuring multivalent antigen, immunochromatographic test strip for measuring multivalent antigen using the same, and immunochromatographic measuring method | |
| JP6247741B2 (en) | Detection method based on immunochromatography capable of determining sample-unadded sample as unsuitable sample and test strip used therefor | |
| JP5753942B2 (en) | Immunochromatographic test strip and detection method using immunochromatography for detecting an object in a sample containing red blood cells | |
| CN107430120B (en) | Immunoassay method and test strip therefor | |
| EP3872491B1 (en) | Test specimen for immunochromatography | |
| JP6399632B2 (en) | Immunochromatographic test strip for detecting an object in a red blood cell-containing sample, and immunochromatography using the test strip | |
| WO2020067233A1 (en) | Test piece for immunochromatography | |
| JP2020020724A (en) | Test piece for immunochromatography and immunochromatographic detection kit | |
| JP5723484B2 (en) | Immunochromatographic test strip and detection method using immunochromatography for detecting an object in a sample containing red blood cells | |
| WO2016098177A1 (en) | Test strip for use in immunochromatography for detecting analyte in sample containing red blood cells, and immunochromatography using said test strip | |
| WO2020105567A1 (en) | Immuno-chromatography test strip and immuno-chromatography detection kit | |
| JP6464308B1 (en) | Test specimen for immunochromatography | |
| JP2020052028A (en) | Immunochromatography test piece | |
| CN113015905B (en) | Immunochromatography test strip and immunochromatography detection kit | |
| JP7137168B2 (en) | Test piece for immunochromatography | |
| JP2017026591A (en) | Immunological detection method | |
| JP2003254975A (en) | Immunity measuring method, and kit and device used therefor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20181011 |
|
| A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20181011 |
|
| A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20181022 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181024 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181113 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181212 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190107 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6464308 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |