JP6369752B2 - Polyphenol derivative exhibiting keratin increasing action and process for producing the same - Google Patents
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Description
この発明はケラチン増加作用を呈するポリフェノール誘導体及びその製造方法に関するものである。 The present invention relates to a polyphenol derivative exhibiting an action of increasing keratin and a method for producing the same.
ケラチンは上皮組織の細胞と組織を形成する細胞外タンパク質であり、髪や皮膚の角質などに存在する。構成アミノ酸としてシステインを多く含んでいる特徴がある。また、ケラチンは細胞質中の原形質流動や糖質の分解酵素、脂肪の蓄積にも関与する。 Keratin is an extracellular protein that forms tissue with cells of epithelial tissue, and is present in hair and skin stratum corneum. It is characterized by containing a lot of cysteine as a constituent amino acid. Keratin is also involved in cytoplasmic flow in the cytoplasm, carbohydrate degrading enzymes, and fat accumulation.
さらに、ケラチンは皮膚の表皮細胞や内臓の上皮細胞にも豊富であり、細胞内情報伝達系の調節にも関与している。特に、チロシンキナーゼやプロテインキナーゼの働きの制御にも関与している。 Furthermore, keratin is abundant in skin epidermis cells and visceral epithelial cells, and is also involved in the regulation of the intracellular signal transduction system. In particular, it is involved in the control of tyrosine kinase and protein kinase functions.
このケラチンは加齢とともに減少し、皮膚のハリや皮膚の再生の遅延にも関係している。ケラチンには数種類のタイプが存在しており、特に、皮膚の表皮細胞に含有されるケラチンが豊富であり、美容領域や皮膚科学領域でケラチンが注目され、研究されている。 This keratin decreases with age and is also associated with skin firmness and delayed skin regeneration. There are several types of keratin, and particularly keratin contained in the epidermis cells of the skin is abundant, and keratin is attracting attention and researched in the field of beauty and dermatology.
ケラチンに関する発明としては適用後に超分子ポリマーを形成する化粧品用組成物の発明があり、ここではケラチン作用を呈する化学物質が提案されている。しかし、この発明は化学物質であり、副作用に関する記載はない(例えば、特許文献1参照。)。 As an invention related to keratin, there is an invention of a cosmetic composition that forms a supramolecular polymer after application, and here, a chemical substance exhibiting a keratin action has been proposed. However, since this invention is a chemical substance, there is no description about a side effect (for example, refer patent document 1).
また、化粧品に使用される乳化系のケラチンの利用に関する発明がある(例えば、特許文献2参照。)。ここでは、ケラチン皮膚組織に対する化粧品の利用について説明されているものの、ケラチンの増加に関する技術としては軽度である。 There is also an invention relating to the use of emulsified keratin used in cosmetics (see, for example, Patent Document 2). Here, although the use of cosmetics for keratin skin tissue is described, the technique relating to the increase of keratin is mild.
また、少なくとも一つのVDRリガンドとレチノイドの共同的混合物をベースとする新規組成物の発明がある(例えば、特許文献3参照。)。ここでは、ケラチン細胞を利用した技術が説明されているが、ケラチンそのものを増加させる方法ではない。 There is also an invention of a novel composition based on a joint mixture of at least one VDR ligand and a retinoid (see, for example, Patent Document 3). Here, a technique using keratin cells is described, but it is not a method of increasing keratin itself.
しかし、医療領域、皮膚領域や美容領域でケラチンを増加させる方法、成分や物質に関する発明はない。 However, there are no inventions relating to methods, ingredients or substances for increasing keratin in the medical area, skin area or cosmetic area.
このようにケラチンを増加させる物質が化学物質である場合には、副作用が発生する危険性があり、産業上の利用が限定される。 Thus, when the substance which increases keratin is a chemical substance, there exists a danger that a side effect will occur and industrial use is limited.
そこで天然物由来でかつ、ケラチンを増加させる物質が望まれている。 Therefore, a substance derived from a natural product and increasing keratin is desired.
前記したように既存の天然物によるケラチン増加作用は軽度であり、産業上への利用が限定されるという課題があり、また、化学合成された物質では安全性に問題があり、利用が限られている。 As described above, the effect of increasing keratin by existing natural products is mild, and there is a problem that the industrial use is limited. Also, there is a problem in safety with chemically synthesized substances, and the use is limited. ing.
そこで、副作用が弱く優れたケラチン増加作用を呈する天然物ならびにそれを効率良く製造する製造方法が望まれている。 Therefore, a natural product that exhibits an excellent keratin increasing effect with weak side effects and a production method for efficiently producing the natural product are desired.
上記の目的を達成するために、請求項1に記載の発明は下記の式(1)に示されるケラチン増加作用を呈するポリフェノール誘導体に関するものである。 In order to achieve the above object, the invention described in claim 1 relates to a polyphenol derivative exhibiting a keratin increasing action represented by the following formula (1).
上記の目的を達成するために、請求項2に記載の発明は、ケラチン増加作用を呈する請求項1記載の式(1)で示されるポリフェノール誘導体の製造方法に関するものである。 In order to achieve the above object, the invention described in claim 2 relates to a method for producing a polyphenol derivative represented by the formula (1) described in claim 1 exhibiting an action of increasing keratin.
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。 Since this invention is comprised as mentioned above, there exist the following effects.
請求項1に記載の誘導体によれば、優れたケラチン増加作用を発揮することができる。 According to the derivative according to claim 1, it is possible to exhibit an excellent keratin increasing action.
請求項2に記載の製造方法によれば、効率良くケラチン増加作用を呈するポリフェノール誘導体を製造することができる。 According to the manufacturing method of Claim 2, the polyphenol derivative which exhibits a keratin increase effect | action efficiently can be manufactured.
以下、この発明を具体化した実施形態について詳細に説明する。 Hereinafter, embodiments embodying the present invention will be described in detail.
まず、下記の式(1)に示されるケラチン増加作用を呈するポリフェノール誘導体はポリフェノールの1分子とポリフェノールの1分子とシステインの1分子からなる。 First, the polyphenol derivative exhibiting the keratin increasing action represented by the following formula (1) is composed of one molecule of polyphenol, one molecule of polyphenol, and one molecule of cysteine.
この誘導体のポリフェノール部分はイソフラボン分子であり、分子内に酸素元素を2個含有している。 The polyphenol part of this derivative is an isoflavone molecule and contains two oxygen elements in the molecule.
ポリフェノール分子の側鎖のベンゼン環にアルギニンのカルボキシル基が結合している。このアルギニンはL型である。アルギニンのグアニジン側鎖とアミノ基はそのままフリーで存在している。 The carboxyl group of arginine is bonded to the benzene ring in the side chain of the polyphenol molecule. This arginine is L-type. The guanidine side chain and amino group of arginine exist as they are.
このアルギニンのグアニジン側鎖は一酸化窒素を産生する能力があることから、好ましい。すなわち、内在性の一酸化窒素合成酵素はアルギニンから一酸化窒素を産生させる。 The guanidine side chain of arginine is preferred because it has the ability to produce nitric oxide. That is, endogenous nitric oxide synthase produces nitric oxide from arginine.
産生された一酸化窒素は血管の平滑筋細胞に働き、弛緩させることにより、血管が拡張する。これにより血流が増加して血圧を低下させる。また、肌の血流量を増加させ、老廃物の排泄と栄養素の供給が増加することは好ましい。 The produced nitric oxide acts on the smooth muscle cells of the blood vessels and relaxes, thereby expanding the blood vessels. This increases blood flow and lowers blood pressure. It is also preferable to increase skin blood flow and increase waste excretion and nutrient supply.
また、ポリフェノールの母核にアデニンが結合している。アデニンの9位の窒素元素との結合である。 In addition, adenine is bonded to the mother nucleus of polyphenol. This is a bond with the 9th-position nitrogen element of adenine.
このポリフェノール誘導体は母核部分が疎水性であることから細胞膜を通過し、細胞内に到達することが可能である。また、水酸基を有することから水溶性でもあり、両親媒性を呈することから細胞内に浸透後、水溶性のケラチン合成酵素に直接働きかけることから好ましい。 This polyphenol derivative can pass through the cell membrane and reach the cell because the mother nucleus is hydrophobic. Moreover, since it has a hydroxyl group, it is also water-soluble, and since it exhibits amphiphilic properties, it is preferable because it directly permeates the water-soluble keratin synthase after penetrating into the cell.
このポリフェノール誘導体はケラチン合成酵素の活性中心を活性化してケラチン合成を活性化する。活性化の様式は、可逆的であり、このポリフェノール誘導体が存在しなくなることによりその活性化は停止する。 This polyphenol derivative activates the active center of keratin synthase to activate keratin synthesis. The mode of activation is reversible and its activation is stopped by the absence of the polyphenol derivative.
ケラチン合成酵素の活性化が可逆的であることは、安全性の面から好ましい。すなわち、このポリフェノール誘導体が分解されれば、その働きは停止する。 It is preferable from the viewpoint of safety that the activation of keratin synthase is reversible. That is, if this polyphenol derivative is decomposed, its function stops.
ポリフェノール誘導体にはポリフェノールが含有され、水酸基が存在していることから紫外線による活性酸素の産生を抑制できる。紫外線や活性酸素はケラチンを切断してしまうことから、この活性酸素を除去できる点は好ましい。 Since the polyphenol derivative contains polyphenol and has a hydroxyl group, production of active oxygen due to ultraviolet rays can be suppressed. Since ultraviolet rays and active oxygen cut keratin, it is preferable that this active oxygen can be removed.
このポリフェノール誘導体は皮膚細胞や皮下組織の細胞に浸透しやすいことから好ましい。つまり、両親媒性の性質を有していることは好ましい性質である。 This polyphenol derivative is preferable because it easily penetrates into skin cells and cells in subcutaneous tissue. That is, having an amphiphilic property is a preferable property.
ポリフェノールには元来、酵素反応を調整する働きがある。酵素の触媒反応を調整することにより阻害作用や活性化作用、アロステリック作用などを発揮する。 Polyphenols originally have the function of regulating enzyme reactions. Inhibiting, activating, and allosteric effects are achieved by adjusting the catalytic reaction of the enzyme.
ここに示したポリフェノール誘導体はケラチン合成酵素を活性化する働きを呈する。その働きの特徴は可逆的であり、活性化のタイプは拮抗型であるという点である。拮抗型の特徴として働きが一時的であり、可逆的であるため、副作用が生じにくいという長所がある。 The polyphenol derivative shown here has a function of activating keratin synthase. The feature of the action is reversible, and the activation type is antagonistic. As an antagonistic feature, the work is temporary and reversible, so there is an advantage that side effects are unlikely to occur.
ケラチン合成酵素は全身の組織や細胞に分布する酵素であり、肝臓、脂肪組織、血液などに存在してする。 Keratin synthase is an enzyme distributed in tissues and cells throughout the body, and is present in liver, adipose tissue, blood, and the like.
このポリフェノール誘導体の抽出方法または製造方法としては発酵法、酵素反応法や化学合成法などのいずれかの方法が用いられる。 As a method for extracting or producing this polyphenol derivative, any method such as a fermentation method, an enzyme reaction method or a chemical synthesis method is used.
このポリフェノール誘導体の抽出方法としては大豆やプラセンタから抽出することができる。この抽出方法ではプロテアーゼやリパーゼなどの消化酵素を利用することは抽出効率が高められることから好ましい。 The polyphenol derivative can be extracted from soybeans or placenta. In this extraction method, it is preferable to use digestive enzymes such as protease and lipase because the extraction efficiency is enhanced.
また、酵素反応法の場合、ポリフェノールを含有する植物から抽出することができる。または、発酵により微生物に生合成させることができる。 Moreover, in the case of an enzyme reaction method, it can extract from the plant containing a polyphenol. Alternatively, it can be biosynthesized by microorganisms by fermentation.
さらに、精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。 Furthermore, as a purification method, it is preferable to use a purification operation such as a separation resin.
例えば、分離用担体または樹脂により分離され、分取されることは好ましい。分離用担体または樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。0.1〜300μmの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。 For example, it is preferably separated and separated by a separation carrier or resin. As the separation carrier or resin, porous polysaccharides, silicon oxide compounds, polyacrylamide, polystyrene, polypropylene, styrene-vinylbenzene copolymers, etc., whose surfaces are coated as described later, are used. Those having a particle size of 0.1 to 300 μm are preferred. The finer the particle size, the higher the accuracy of the separation, but the longer the separation time.
例えば、逆相担体または樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、疎水性の高い物質の分離に利用される。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。特異的な抗体をコーティングした場合には、特異的な物質のみを分離するアフィニティ担体または樹脂として利用される。 For example, a reverse phase carrier or resin whose surface is coated with a hydrophobic compound is used for separation of a highly hydrophobic substance. Those coated with a cationic substance are suitable for the separation of anionically charged substances. Also, those coated with an anionic substance are suitable for separating a cationically charged substance. When a specific antibody is coated, it is used as an affinity carrier or resin for separating only a specific substance.
アフィニティ担体または樹脂は、抗原抗体反応を利用して抗原の特異的な調製に利用される。分配性担体または樹脂は、シリカゲル(メルク社製)等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、それらの物質の単離に利用される。 The affinity carrier or resin is used for specific preparation of an antigen using an antigen-antibody reaction. A partitionable carrier or resin is used for isolation of a substance such as silica gel (manufactured by Merck) if there is a difference in partition coefficient between the substance and the solvent for separation.
これらのうち、製造コストを低減することができる点から、吸着性担体または樹脂、分配性担体または樹脂、分子篩用担体または樹脂及びイオン交換担体または樹脂が好ましい。さらに、分離用溶媒に対して分配係数の差異が大きい点から、逆相担体または樹脂及び分配性担体または樹脂はより好ましい。 Among these, an adsorbent carrier or resin, a dispersible carrier or resin, a molecular sieve carrier or resin, and an ion exchange carrier or resin are preferable from the viewpoint of reducing production costs. Furthermore, the reverse phase carrier or resin and the dispersible carrier or resin are more preferable because the difference in the distribution coefficient with respect to the separation solvent is large.
分離用溶媒として有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒に耐性を有する担体または樹脂が用いられる。また、医薬品製造または食品製造に利用される担体または樹脂は好ましい。これらの点から吸着性担体としてダイヤイオン(三菱化学(株)社製)及びXAD−2またはXAD−4(ロームアンドハース社製)、分子篩用担体としてセファデックスLH−20(アマシャムファルマシア社製)、分配用担体としてシリカゲル、イオン交換担体としてIRA−410(ロームアンドハース社製)、逆相担体としてDM1020T(富士シリシア社製)がより好ましい。 When an organic solvent is used as the separation solvent, a carrier or resin having resistance to the organic solvent is used. Moreover, the carrier or resin used for pharmaceutical manufacture or food manufacture is preferable. From these points, Diaion (Mitsubishi Chemical Co., Ltd.) and XAD-2 or XAD-4 (Rohm and Haas) are used as the adsorptive carrier, and Sephadex LH-20 (Amersham Pharmacia) is used as the molecular sieve carrier. Silica gel as the distribution carrier, IRA-410 (Rohm and Haas) as the ion exchange carrier, and DM1020T (Fuji Silysia) as the reverse phase carrier are more preferable.
これらのうち、ダイヤイオン、セファデックスLH−20及びDM1020Tはさらに好ましい。 Of these, Diaion, Sephadex LH-20 and DM1020T are more preferred.
得られた抽出物は、分離前に分離用担体または樹脂を膨潤化させるための溶媒に溶解される。その量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して1〜40倍量が好ましく、4〜20倍量がより好ましい。分離の温度としては物質の安定性の点から4〜30℃が好ましく、10〜25℃がより好ましい。 The obtained extract is dissolved in a solvent for swelling the carrier for separation or the resin before separation. The amount thereof is preferably 1 to 40 times the weight of the extract from the viewpoint of separation efficiency, and more preferably 4 to 20 times. The separation temperature is preferably 4 to 30 ° C., more preferably 10 to 25 ° C. from the viewpoint of the stability of the substance.
分離用溶媒には、水、または、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒が用いられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。 As the separation solvent, water or a lower alcohol containing water, a hydrophilic solvent, or a lipophilic solvent is used. As the lower alcohol, methanol, ethanol, propanol and butanol are used, and ethanol used for food is preferable.
セファデックスLH−20を用いる場合、分離用溶媒には低級アルコールが好ましい。シリカゲルを用いる場合、分離用溶媒にはクロロホルム、メタノール、酢酸またはそれらの混合液が好ましい。 When Sephadex LH-20 is used, a lower alcohol is preferable as the separation solvent. When silica gel is used, the separation solvent is preferably chloroform, methanol, acetic acid or a mixture thereof.
ダイヤイオン及びDM1020Tを用いる場合、分離用溶媒はメタノール、エタノール等の低級アルコールまたは低級アルコールと水の混合液が好ましい。 When Diaion and DM1020T are used, the separation solvent is preferably a lower alcohol such as methanol or ethanol or a mixed solution of lower alcohol and water.
また、活性を含む画分を採取して乾燥または真空乾燥により溶媒を除去し、粉末または濃縮液として得ることは溶媒による影響を除外できることから、好ましい。 In addition, it is preferable to collect a fraction containing the activity and remove the solvent by drying or vacuum drying to obtain a powder or a concentrated liquid because the influence of the solvent can be excluded.
このポリフェノール誘導体は人の皮膚や皮膚細胞に存在する細胞に直接作用してケラチンを生合成し、美肌作用や皮膚再生作用を呈する。 This polyphenol derivative directly acts on cells existing in human skin and skin cells to biosynthesize keratin, and exhibits skin beautification and skin regeneration.
ポリフェノール誘導体に油脂を添加することは、得られる活性部分が油の中で安定に維持することから好ましい。例えば、大豆油、米ぬか油、グレープシード油、オリーブ油、ホホバ油で抽出することは好ましい。 It is preferable to add fats and oils to the polyphenol derivative because the resulting active part is stably maintained in the oil. For example, extraction with soybean oil, rice bran oil, grape seed oil, olive oil or jojoba oil is preferred.
医薬品として注射剤または経口剤または塗布剤などの非経口剤として利用され、医薬部外品としては、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、塗布剤、ゲル剤、歯磨き粉等に配合されて利用される。 It is used as an injectable or parenteral agent such as an oral agent or a coating agent as a pharmaceutical, and as a quasi-drug, it is used in a tablet, capsule, drink, soap, coating agent, gel, toothpaste, etc. The
経口剤としては錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記の錠剤及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いることができる。前記の錠剤は、シェラックまたは砂糖で被覆することもできる。 Examples of oral preparations include tablets, capsules, powders, syrups, and drinks. When mixed with the above-mentioned tablets and capsules, it can be used together with a binder, excipient, swelling agent, lubricant, sweetener, flavoring agent and the like. The tablets can also be coated with shellac or sugar.
また、前記のカプセル剤の場合には、上記の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることができる。前記のシロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤等を添加することができる。 Moreover, in the case of the said capsule, liquid carriers, such as fats and oils, can be further contained in said material. In the case of the above syrup and drink, sweeteners, preservatives, pigment flavoring agents and the like can be added.
非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に、注射剤が挙げられる。外用剤の基材としては、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等が用いられ、通常の方法によって軟膏剤やクリーム剤等とすることができる。 Examples of parenteral preparations include injections in addition to external preparations such as ointments, creams, and liquids. Vaseline, paraffin, fats and oils, lanolin, macro gold, etc. are used as a base material for external preparations, and can be made into ointments, creams, and the like by ordinary methods.
注射剤には、液剤があり、その他、凍結乾燥剤がある。これは使用時、注射用蒸留水や生理食塩液等に無菌的に溶解して用いられる。 Injections include liquids, and other lyophilization agents. This is used aseptically dissolved in distilled water for injection or physiological saline at the time of use.
食品製剤として美容を目的とした美容食品、美容を目的とした食品、健康的な細胞の維持を目的とした細胞賦活剤などに利用される。また、保健機能食品として栄養機能食品や特定保健用食品に利用することは好ましい。 It is used as a food preparation for beauty foods intended for beauty, foods intended for beauty, and cell activators intended to maintain healthy cells. Moreover, it is preferable to use as a health functional food for a nutritional functional food or a food for specified health use.
得られた食品製剤をイヌやネコなどのペットや家畜動物に利用する場合、皮膚や組織の健康を維持する目的として、飼料やペット用サプリメントとして利用される。 When the obtained food preparation is used for pets and livestock animals such as dogs and cats, it is used as a feed or a supplement for pets for the purpose of maintaining the health of the skin and tissues.
化粧料として常法に従って界面活性化剤、溶剤、増粘剤、賦形剤等とともに用いることができる。例えば、クリーム、毛髪用ジェル、洗顔剤、美容液、化粧水等の形態とすることができ、ケラチンの産生を促進する化粧料となる。 As a cosmetic, it can be used together with a surfactant, a solvent, a thickener, an excipient and the like according to a conventional method. For example, it can be in the form of cream, gel for hair, facial cleanser, beauty essence, lotion, etc., and becomes a cosmetic that promotes the production of keratin.
化粧料の形態は任意であり、溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状または粉末状として用いることができる。 The form of the cosmetic is arbitrary, and can be used as a solution, cream, paste, gel, gel, solid or powder.
次に、プラセンタと大豆を添加し、納豆菌により発酵させた発酵液に分岐シクロデキストリンを添加してプロテアーゼ処理を行う工程からなるケラチン増加作用を呈する式(1)で示されるポリフェノール誘導体の製造方法について説明する。 Next, a method for producing a polyphenol derivative represented by the formula (1) having a keratin increasing action comprising a step of adding a placenta and soybeans and adding a branched cyclodextrin to a fermentation broth fermented with Bacillus natto and subjecting to a protease treatment Will be described.
ここでいう式(1)で示されるポリフェノール誘導体はポリフェノールの1分子とアルギニンの1分子とアデニンの1分子からなる。 The polyphenol derivative represented by the formula (1) here is composed of one molecule of polyphenol, one molecule of arginine and one molecule of adenine.
この誘導体のポリフェノール部分はイソフラボン分子であり、酸素分子を2分子含有している。 The polyphenol part of this derivative is an isoflavone molecule and contains two oxygen molecules.
ポリフェノール分子の側鎖のベンゼン環にアルギニンのカルボキシル基が結合している。このアルギニンはL型である。アルギニンのグアニジン側鎖とアミノ基はそのままフリーで存在している。 The carboxyl group of arginine is bonded to the benzene ring in the side chain of the polyphenol molecule. This arginine is L-type. The guanidine side chain and amino group of arginine exist as they are.
このアルギニンのグアニジン側鎖は一酸化窒素を産生する能力があることから、好ましい。すなわち、内在性の一酸化窒素合成酵素の働きにより、一酸化窒素を産生させる。 The guanidine side chain of arginine is preferred because it has the ability to produce nitric oxide. That is, nitric oxide is produced by the action of endogenous nitric oxide synthase.
一酸化窒素は血管の平滑筋細胞に働き、弛緩させることにより、血管が拡張する。これにより血流が増加して血圧を低下させる。また、肌の血流量を増加させ、老廃物の排泄と栄養素の供給が増加することは好ましい。 Nitric oxide acts on the smooth muscle cells of blood vessels and relaxes them, thereby dilating the blood vessels. This increases blood flow and lowers blood pressure. It is also preferable to increase skin blood flow and increase waste excretion and nutrient supply.
また、ポリフェノールの母核にアデニンが結合している。アデニンの9位の窒素元素との結合である。 In addition, adenine is bonded to the mother nucleus of polyphenol. This is a bond with the 9th-position nitrogen element of adenine.
この製造方法はプラセンタと大豆を添加し、納豆菌により発酵させた発酵液に分岐シクロデキストリンを添加してプロテアーゼ処理を行う工程からなる。 This production method comprises a step of adding a placenta and soybeans, adding a branched cyclodextrin to a fermentation broth fermented with Bacillus natto, and subjecting it to protease treatment.
原料となる物質はプラセンタ、大豆、納豆菌、分岐シクロデキストリン及びプロテアーゼである。 The raw materials are placenta, soybean, natto, branched cyclodextrin and protease.
プラセンタとは動物の胎盤のことであり、ブタ、ウシ、ウマ、羊などの食用の動物のプラセンタは品質的に良質であることから、好ましい。 The placenta is the placenta of animals, and the placenta of edible animals such as pigs, cows, horses, and sheep is preferable because of its high quality.
この原産国は日本、アジア、アメリカ、ヨーロッパなどいずれも利用できる。特に、日本内のプラセンタは品質も良好であり、ポリフェノールとの結合に優れていることから好ましい。 This country of origin can be used in Japan, Asia, America, Europe, etc. In particular, placenta in Japan is preferable because of its good quality and excellent bonding with polyphenols.
原料となる大豆は、日本産、中国産、アメリカ産、ロシア産などいずれの産地の大豆でも利用できるが、トレーサビリティーが確実であり、生産者が明確である日本産が好ましい。 The soybean used as a raw material can be any soybean from Japan, China, the United States, Russia, etc., but it is preferable that the soybean is traceable and the producer is clear.
このうち、有機栽培や無農薬で栽培された大豆は有害な農薬や金属を含有しないことから、さらに好ましい。 Of these, soybeans cultivated organically or without agricultural chemicals are more preferred because they do not contain harmful agricultural chemicals or metals.
大豆は使用に際して、株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機DPTH−40、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライVD−7、VD−20、中山技術研究所製DM−6などの粉砕機で粉砕される。これにより発酵の工程が効率的に進行されやすい。 When using soybeans, Nara Machinery Co., Ltd. free mill, super free mill, sample mill, goblin, super clean mill, micros, small vacuum dryer manufactured by Toyo Riko as vacuum dryer, small size manufactured by Matsui Co., Ltd. It is pulverized by a pulverizer such as a vacuum heat transfer dryer DPTH-40, clean dry VD-7, VD-20 manufactured by AKM Kyushu Technos Co., Ltd., DM-6 manufactured by Nakayama Technical Research Institute. Thereby, the process of fermentation tends to advance efficiently.
用いる納豆菌は学名バチルス サブチリスであり、納豆の製造に利用される有用な微生物である。納豆素本舗の粉末の納豆菌は品質が良好で発酵に適していることから好ましい。 The Bacillus natto used is the scientific name Bacillus subtilis, which is a useful microorganism used in the production of natto. Natto bacteria, a powder of Natto Motopo, is preferable because of its good quality and suitable for fermentation.
分岐シクロデキストリンは環状ブドウ糖の一つであり、ブドウ糖が環状に結合し、食品や化粧料に利用されることから好ましい。この分岐シクロデキストリンは内腔に疎水性部分を有することから疎水性の高い物質を吸着しやすい。塩水港精糖社製の分岐シクロデキストリンは品質が高いことから好ましい。 A branched cyclodextrin is one of cyclic glucose, and is preferable because glucose is bound cyclically and used in foods and cosmetics. Since this branched cyclodextrin has a hydrophobic portion in the lumen, it is easy to adsorb highly hydrophobic substances. Branched cyclodextrins manufactured by Shimizu Minato Sugar Co., Ltd. are preferred because of their high quality.
用いるプロテアーゼとしては天野エンザイム社製の食品加工用プロテアーゼであるプロテアーゼA「アマノ」SD、プロテアーゼM「アマノ」SDまたはプロテアーゼP「アマノ」3SDの品質が安定し、使用実績が豊富なことから好ましい。 As the protease to be used, the quality of protease A “Amano” SD, protease M “Amano” SD or protease P “Amano” 3SD, which are food processing proteases manufactured by Amano Enzyme, is preferable because of its stable use.
まず、プラセンタは粉砕機やミキサーなどにより粉砕にされる。粉砕されることにより、加工がしやすくなる。大豆は粉砕機により粉砕され、清浄な水を添加して懸濁される。プラセンタ100gに対して大豆は50〜300g添加され、清浄な容器の中で精製水などの水と1リットル〜10リットルとともに攪拌される。 First, the placenta is pulverized by a pulverizer or a mixer. By being pulverized, it becomes easy to process. The soybeans are pulverized by a pulverizer and suspended by adding clean water. 50 to 300 g of soybean is added to 100 g of placenta, and stirred with water such as purified water and 1 to 10 liters in a clean container.
プラセンタと大豆は煮沸滅菌され、発酵タンクに添加される。滅菌することにより雑菌の混入が防御され、納豆菌による発酵が進行する。 Placenta and soybeans are sterilized by boiling and added to the fermentation tank. By sterilization, contamination with various bacteria is prevented, and fermentation with Bacillus natto proceeds.
発酵は静置法または撹拌法のいずれでも良いが、発酵を短時間で実施できる点から撹拌法が好ましい。発酵は39〜45℃で23時間から71時間行われることが好ましい。温度が低く、時間が短い場合には発酵が進まず、温度が高く、時間が長い場合には目的とするポリフェノール誘導体が分解されてしまうおそれがある。 Fermentation may be either a stationary method or a stirring method, but a stirring method is preferred because fermentation can be performed in a short time. Fermentation is preferably performed at 39 to 45 ° C. for 23 to 71 hours. When the temperature is low and the time is short, fermentation does not proceed, and when the temperature is high and the time is long, the target polyphenol derivative may be decomposed.
この発酵液は濾過布などにより濾過されることは以下の工程を容易に行えることから好ましい。 The fermentation broth is preferably filtered with a filter cloth or the like because the following steps can be easily performed.
このろ液に分岐シクロデキストリンが添加される。分岐シクロデキストリンは環状ブドウ糖の一つであり、ブドウ糖が環状に結合し、食品や化粧料に利用されることから好ましい。この分岐シクロデキストリンは内腔に疎水性部分を有することから疎水性の高い物質を吸着しやすい。塩水港精糖社製の分岐シクロデキストリンは品質が高いことから好ましい。 Branched cyclodextrin is added to the filtrate. A branched cyclodextrin is one of cyclic glucose, and is preferable because glucose is bound cyclically and used in foods and cosmetics. Since this branched cyclodextrin has a hydrophobic portion in the lumen, it is easy to adsorb highly hydrophobic substances. Branched cyclodextrins manufactured by Shimizu Minato Sugar Co., Ltd. are preferred because of their high quality.
添加される分岐シクロデキストリンはプラセンタ100gに対して分岐シクロデキストリンの40gから400gが好ましい。この分岐シクロデキストリンによりプラセンタのペプチドやアデニンが大豆のポリフェノールと結合して誘導体が生成される。 The added branched cyclodextrin is preferably 40 to 400 g of branched cyclodextrin with respect to 100 g of placenta. With this branched cyclodextrin, placenta peptides and adenine are combined with soybean polyphenols to produce derivatives.
この分岐シクロデキストリンとの懸濁液は攪拌されることが好ましい。 The suspension with the branched cyclodextrin is preferably stirred.
この懸濁液にプロテアーゼが添加される。添加されるプロテアーゼは発酵液100gに対して0.001gから0.2gが好ましい。このプロテアーゼは精製水に懸濁して添加されることは反応が進むことから好ましい。 Protease is added to this suspension. The protease to be added is preferably 0.001 to 0.2 g per 100 g of the fermentation broth. It is preferable that the protease is suspended in purified water because the reaction proceeds.
この懸濁液は反応を促進するために加温され、攪拌されることは好ましい。加温としては37〜44℃が好ましい。また、攪拌は1分間当り10〜30回が好ましい。時間は1時間から6時間が好ましい。 This suspension is preferably warmed and stirred to promote the reaction. As heating, 37-44 degreeC is preferable. Moreover, stirring is preferably 10 to 30 times per minute. The time is preferably 1 to 6 hours.
このプロテアーゼ反応液は濾過される。濾紙やメンブランフィルターを用いることにより効率良くろ過される。ろ過してろ液を得ることにより反応していない成分や原料を排除できることから好ましい。 This protease reaction solution is filtered. Efficient filtration is achieved by using filter paper or membrane filter. It is preferable because unreacted components and raw materials can be excluded by filtering to obtain a filtrate.
得られた反応物は煮沸滅菌され、プロテアーゼを失活させることは好ましい。 The obtained reaction product is sterilized by boiling to inactivate the protease.
得られた反応物は、凍結乾燥することにより粉末化され、用いられる。 The obtained reaction product is pulverized by lyophilization and used.
前記の反応物から、目的とするポリフェノール誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。 Separating and purifying the target polyphenol derivative from the reaction product is preferable from the viewpoint that the intake can be reduced as a highly pure substance. As a purification method, it is preferable to use a purification operation such as a separation resin.
例えば、分離用担体または樹脂により分離され、分取されることにより目的とするポリフェノール誘導体が得られる。分離用担体または樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。0.1〜300μmの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。 For example, the desired polyphenol derivative can be obtained by separation with a separation carrier or resin and fractionation. As the separation carrier or resin, porous polysaccharides, silicon oxide compounds, polyacrylamide, polystyrene, polypropylene, styrene-vinylbenzene copolymers, etc., whose surfaces are coated as described later, are used. Those having a particle size of 0.1 to 300 μm are preferred. The finer the particle size, the higher the accuracy of the separation, but the longer the separation time.
例えば、逆相担体または樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、疎水性の高い物質の分離に利用される。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。特異的な抗体をコーティングした場合には、特異的な物質のみを分離するアフィニティ担体または樹脂として利用される。 For example, a reverse phase carrier or resin whose surface is coated with a hydrophobic compound is used for separation of a highly hydrophobic substance. Those coated with a cationic substance are suitable for the separation of anionically charged substances. Also, those coated with an anionic substance are suitable for separating a cationically charged substance. When a specific antibody is coated, it is used as an affinity carrier or resin for separating only a specific substance.
アフィニティ担体または樹脂は、抗原抗体反応を利用して抗原の特異的な調製に利用される。分配性担体または樹脂は、シリカゲル(メルク社製)等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、それらの物質の単離に利用される。 The affinity carrier or resin is used for specific preparation of an antigen using an antigen-antibody reaction. A partitionable carrier or resin is used for isolation of a substance such as silica gel (manufactured by Merck) if there is a difference in partition coefficient between the substance and the solvent for separation.
これらのうち、製造コストを低減することができる点から、吸着性担体または樹脂、分配性担体または樹脂、分子篩用担体または樹脂及びイオン交換担体または樹脂が好ましい。さらに、分離用溶媒に対して分配係数の差異が大きい点から、逆相担体または樹脂及び分配性担体または樹脂はより好ましい。 Among these, an adsorbent carrier or resin, a dispersible carrier or resin, a molecular sieve carrier or resin, and an ion exchange carrier or resin are preferable from the viewpoint of reducing production costs. Furthermore, the reverse phase carrier or resin and the dispersible carrier or resin are more preferable because the difference in the distribution coefficient with respect to the separation solvent is large.
分離用溶媒として有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒に耐性を有する担体または樹脂が用いられる。また、医薬品製造または食品製造に利用される担体または樹脂は好ましい。 When an organic solvent is used as the separation solvent, a carrier or resin having resistance to the organic solvent is used. Moreover, the carrier or resin used for pharmaceutical manufacture or food manufacture is preferable.
これらの点から吸着性担体としてダイヤイオン(三菱化学(株)社製)及びXAD−2またはXAD−4(ロームアンドハース社製)、分子篩用担体としてセファデックスLH−20(アマシャムファルマシア社製)、分配用担体としてシリカゲル、イオン交換担体としてIRA−410(ロームアンドハース社製)、逆相担体としてDM1020T(富士シリシア社製)がより好ましい。 From these points, Diaion (Mitsubishi Chemical Co., Ltd.) and XAD-2 or XAD-4 (Rohm and Haas) are used as the adsorptive carrier, and Sephadex LH-20 (Amersham Pharmacia) is used as the molecular sieve carrier. Silica gel as the distribution carrier, IRA-410 (Rohm and Haas) as the ion exchange carrier, and DM1020T (Fuji Silysia) as the reverse phase carrier are more preferable.
これらのうち、ダイヤイオン、セファデックスLH−20及びDM1020Tはさらに好ましい。 Of these, Diaion, Sephadex LH-20 and DM1020T are more preferred.
得られた抽出物は、分離前に分離用担体または樹脂を膨潤化させるための溶媒に溶解される。その量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して1〜32倍量が好ましく、5〜19倍量がより好ましい。分離の温度としては物質の安定性の点から4〜30℃が好ましく、10〜26℃がより好ましい。 The obtained extract is dissolved in a solvent for swelling the carrier for separation or the resin before separation. The amount is preferably from 1 to 32 times, more preferably from 5 to 19 times the weight of the extract from the viewpoint of separation efficiency. The separation temperature is preferably 4 to 30 ° C., more preferably 10 to 26 ° C. from the viewpoint of the stability of the substance.
分離用溶媒には、水、または、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒が用いられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。 As the separation solvent, water or a lower alcohol containing water, a hydrophilic solvent, or a lipophilic solvent is used. As the lower alcohol, methanol, ethanol, propanol and butanol are used, and ethanol used for food is preferable.
セファデックスLH−20を用いる場合、分離用溶媒には低級アルコールが好ましい。シリカゲルを用いる場合、分離用溶媒にはクロロホルム、メタノール、酢酸またはそれらの混合液が好ましい。 When Sephadex LH-20 is used, a lower alcohol is preferable as the separation solvent. When silica gel is used, the separation solvent is preferably chloroform, methanol, acetic acid or a mixture thereof.
ダイヤイオン及びDM1020Tを用いる場合、分離用溶媒はメタノール、エタノール等の低級アルコールまたは低級アルコールと水の混合液が好ましい。 When Diaion and DM1020T are used, the separation solvent is preferably a lower alcohol such as methanol or ethanol or a mixed solution of lower alcohol and water.
ポリフェノール誘導体を含む画分を採取して乾燥または真空乾燥により溶媒を除去し、目的とするポリフェノール誘導体を粉末または濃縮液として得ることは溶媒による影響を除外できることから、好ましい。 It is preferable to collect the fraction containing the polyphenol derivative and remove the solvent by drying or vacuum drying to obtain the target polyphenol derivative as a powder or a concentrated liquid because the influence of the solvent can be excluded.
また、このポリフェノール誘導体を粉末化することは防腐の目的から好ましい。 Further, it is preferable to powder this polyphenol derivative for the purpose of preserving.
以下、前記実施形態を実施例及び試験例を用いて具体的に説明する。なお、これらは一例であり、素材、原料や検体の違いに応じて常識の範囲内で条件を変更させることが可能である。 Hereinafter, the embodiment will be specifically described with reference to examples and test examples. These are merely examples, and conditions can be changed within the range of common sense according to differences in materials, raw materials, and specimens.
北海道産のブタ由来プラセンタ10kgを購入した。これを水洗後、粉砕機(株式会社奈良機械製作所製のスーパー自由ミル)に精製水とともに懸濁して懸濁物9kgを得た。 Purchased 10 kg of hog-derived placenta from Hokkaido. This was washed with water and then suspended in a pulverizer (Super Free Mill manufactured by Nara Machinery Co., Ltd.) together with purified water to obtain 9 kg of a suspension.
なお、ブタは検疫された食品としての衛生検査に合格したものを用い、プラセンタは凍結され、保管されたものを用いた。 In addition, the pig used what passed the hygiene inspection as quarantined food, and the placenta used frozen and stored.
さらに、日本産の大豆10kgを生活の木より購入して用いた。これを洗浄後、粉砕機により粉砕し、粉砕物を得た。 Furthermore, 10 kg of soybeans from Japan were purchased from the tree of life and used. This was washed and then pulverized by a pulverizer to obtain a pulverized product.
プラセンタの懸濁物5kgと大豆粉末2kgを清浄なステンレス製の寸胴に移し、20リットルの精製水を添加して懸濁した。 5 kg of the placenta suspension and 2 kg of soybean powder were transferred to a clean stainless steel cylinder, and 20 liters of purified water was added and suspended.
これを95〜97℃で1時間煮沸して滅菌した。これらを100kg容量の横河電機社製の撹拌式発酵タンク(FP211)に移し、滅菌した精製水20リットルを添加した。 This was sterilized by boiling at 95-97 ° C. for 1 hour. These were transferred to a stirred fermentation tank (FP211) manufactured by Yokogawa Electric Corporation with a capacity of 100 kg, and 20 liters of sterilized purified water was added.
これに納豆菌本舗である有限会社高橋祐蔵研究所製造の粉末納豆菌10gを購入した。この納豆菌を滅菌水100gに懸濁し、これに粉末大豆粉を添加し、37℃で1時間加温して前培養した。 To this, 10 g of powdered Bacillus natto manufactured by Takahashi Yuzo Laboratory Co., Ltd., the natto bacillus main office, was purchased. This Bacillus natto was suspended in 100 g of sterilized water, powdered soybean powder was added thereto, and the mixture was heated at 37 ° C. for 1 hour and precultured.
この納豆菌液を前記の撹拌式発酵タンクに添加して40〜42℃で42時間発酵させた。発酵の状態は大豆の粉末の分解性及び溶解したタンパク質の定量(ビューレット法)によりモニタリングした。 The natto fungus solution was added to the agitated fermentation tank and fermented at 40 to 42 ° C. for 42 hours. The state of fermentation was monitored by degradability of soybean powder and quantification of dissolved protein (Burelet method).
発酵後、得られた発酵液の上清を濾過布により粗濾過してろ液を得た。 After fermentation, the supernatant of the obtained fermentation broth was roughly filtered through a filter cloth to obtain a filtrate.
このろ液10リットルを清浄なタンクに移してこれに塩水港精糖社製の分岐シクロデキストリン(イソエリート)500gを添加して十分に攪拌した。 10 liters of this filtrate was transferred to a clean tank, and 500 g of branched cyclodextrin (Iso Elite) manufactured by Shisui Minato Seika Co., Ltd. was added thereto and stirred sufficiently.
さらに、天野エンザイム製のプロテアーゼM「アマノ」SDの10gを添加し、37℃に加温して攪拌した。 Furthermore, 10 g of protease M “Amano” SD manufactured by Amano Enzyme was added, and the mixture was heated to 37 ° C. and stirred.
攪拌は攪拌装置を用いて室温で6時間実施した。この反応液を煮沸滅菌し、酵素を失活させた。得られた反応液を東洋濾紙の濾紙(No.2)により吸引ろ過してろ液を得た。 Stirring was performed at room temperature for 6 hours using a stirrer. The reaction solution was sterilized by boiling to deactivate the enzyme. The obtained reaction liquid was subjected to suction filtration with Toyo filter paper (No. 2) to obtain a filtrate.
この溶液を凍結乾燥機(タイテック社製のフリーズトラップVA−140S)により凍結乾燥させて目的とする粉末199gを得た。これを検体1とした。 This solution was freeze-dried with a freeze dryer (freeze trap VA-140S manufactured by Taitec Co., Ltd.) to obtain 199 g of the desired powder. This was designated as Sample 1.
得られた検体1の粉末70gを精製水200mLに懸濁して5%エタノールで膨潤させたダイアイオン(三菱化学製)500gに供した。5%エタノール700mLで洗浄後、50%エタノールでさらに、洗浄した。 70 g of the obtained powder of the specimen 1 was suspended in 200 mL of purified water and subjected to 500 g of Diaion (manufactured by Mitsubishi Chemical) swollen with 5% ethanol. After washing with 700 mL of 5% ethanol, it was further washed with 50% ethanol.
これに、80%エタノール500mLを添加し、目的とするポリフェノール誘導体を分画した。得られた分画を減圧乾燥器により乾燥し、粉末21gを得た。この粉末を検体2とした。 To this, 500 mL of 80% ethanol was added to fractionate the desired polyphenol derivative. The obtained fraction was dried with a vacuum dryer to obtain 21 g of powder. This powder was designated as Sample 2.
以下に、ポリフェノール誘導体の構造解析に関する試験方法及び結果について説明する。
(試験例1)
Below, the test method regarding the structural analysis of a polyphenol derivative and a result are demonstrated.
(Test Example 1)
上記のように得られた検体2を精製水に溶解し、濾過後、質量分析器付き高速液体クロマトグラフィ(HPLC、島津製作所)で分析した。 The specimen 2 obtained as described above was dissolved in purified water, filtered, and analyzed by high performance liquid chromatography with a mass spectrometer (HPLC, Shimadzu Corporation).
さらに、核磁気共鳴装置(NMR、ブルカー製、AC−250)で解析した。構造解析の結果、検体2からイソフラボンとアルギニンとアデニンが結合した誘導体が検出された。 Furthermore, it analyzed with the nuclear magnetic resonance apparatus (NMR, the Bruker make, AC-250). As a result of structural analysis, a derivative in which isoflavone, arginine, and adenine were bound was detected from specimen 2.
その結合は1分子ずつの結合であった。 The bond was one molecule at a time.
また、アルギニンのグアニジン側鎖とアミノ基はフリーであった。 Moreover, the guanidine side chain and amino group of arginine were free.
以下に、ヒト皮膚由来表皮細胞を用いたケラチン産生の確認試験について述べる。
(試験例2)
The confirmation test for keratin production using human skin-derived epidermal cells is described below.
(Test Example 2)
東洋紡ライフサイエンス事業部よりヒト皮膚由来表皮細胞(HEK細胞)を購入して用いた。この表皮細胞を専用の基本培地にて37℃、5%炭酸ガス下で培養した。増殖期にある細胞をトリプシン含有培地にて剥離した。まず、生細胞数をトリパンブルー色素排除法により顕微鏡下で計数した。 Human skin-derived epidermal cells (HEK cells) were purchased from Toyobo Life Science Division. The epidermal cells were cultured in a dedicated basic medium at 37 ° C. under 5% carbon dioxide gas. Cells in the growth phase were detached with trypsin-containing medium. First, the number of viable cells was counted under a microscope by trypan blue dye exclusion method.
細胞数を1mLあたり1000個に調整して5mLずつ培養シャーレに播種してさらに、37℃、5%炭酸ガス下で培養した。これを紫外線照射装置(ロックタイト、出力88MH)により紫外線を照射して細胞にダメージを与えた。照射はシャーレの蓋を外して1時間実施した。 The number of cells was adjusted to 1000 per mL, seeded in 5 mL culture dishes, and further cultured at 37 ° C. under 5% carbon dioxide gas. This was irradiated with ultraviolet rays by an ultraviolet irradiation device (Loctite, output 88 MH) to damage the cells. Irradiation was carried out for 1 hour with the petri dish lid removed.
この紫外線照射により表皮細胞が障害を受け、この障害に対する回復を試験した。なお、この方法は皮膚領域では試験物質の評価に実施される方法である。 The epidermal cells were damaged by this ultraviolet irradiation, and recovery from this damage was tested. In addition, this method is a method implemented for evaluation of a test substance in the skin region.
ここに試験物質として検体2及び対照物質としてヒトEGF(フナコシ製)をいずれも生理食塩液に懸濁し、希釈して最終濃度で0.1mg/mLになるように添加した。 Specimen 2 as a test substance and human EGF (manufactured by Funakoshi) as a test substance were both suspended in physiological saline, diluted and added to a final concentration of 0.1 mg / mL.
なお、溶媒対照として生理食塩液を用いた。これを37℃で3日間培養して生細胞数を顕微鏡下で計数した。さらに、細胞を精製水に分散して超音波破砕機により細胞分散液を得た。この細胞分散液中に含まれるケラチン量をELISA法(コスモ・バイオ株式会社)により定量した。 Note that physiological saline was used as a solvent control. This was cultured at 37 ° C. for 3 days, and the number of viable cells was counted under a microscope. Further, the cells were dispersed in purified water, and a cell dispersion was obtained using an ultrasonic crusher. The amount of keratin contained in the cell dispersion was quantified by ELISA (Cosmo Bio Inc.).
その結果、溶媒対照の細胞数を100%として検体2の添加により表皮細胞数は235%に増加した。一方、EGFでは140%となり。検体2の方が優れていた。 As a result, the number of epidermal cells increased to 235% by adding Sample 2 with the cell number of the solvent control as 100%. On the other hand, EGF is 140%. Sample 2 was superior.
ケラチン量については溶媒対照の値を100%として検体2の添加によりケラチン量は388%に増加した。一方、EGFでは211%となり、検体2の方がケラチン産生に優れていた。 Regarding the amount of keratin, the value of the solvent control was set to 100%, and the amount of keratin increased to 388% by adding Sample 2. On the other hand, EGF was 211%, and Sample 2 was superior in keratin production.
本発明で得られるポリフェノール誘導体はケラチン増加作用を呈し、かつ、副作用が少ないことから、皮膚病の治療や予防に利用され、国民のQOLを改善できる。 Since the polyphenol derivative obtained in the present invention exhibits keratin-increasing action and has few side effects, it is used for the treatment and prevention of skin diseases and can improve the national QOL.
本発明で得られるポリフェノール誘導体の製造方法は食品としても利用できることから、食品業界の発展に寄与する。 Since the method for producing the polyphenol derivative obtained in the present invention can also be used as a food, it contributes to the development of the food industry.
本発明で得られるポリフェノール誘導体は化粧料としても皮膚改善に利用され、化粧品業界の発展に寄与する。 The polyphenol derivative obtained in the present invention is also used as a cosmetic for skin improvement and contributes to the development of the cosmetic industry.
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