JP6343135B2

JP6343135B2 - 血中のユビキノール活性化剤及び体内の酸化ストレス度低減剤

Info

Publication number: JP6343135B2
Application number: JP2013208048A
Authority: JP
Inventors: 田口　茂; 茂田口; 久美子田渕; 佳子海江田; 正記坂入; 興治増森
Original assignee: 株式会社Ｇｌａｒｔ
Priority date: 2013-10-03
Filing date: 2013-10-03
Publication date: 2018-06-13
Anticipated expiration: 2033-10-03
Also published as: JP2015071563A

Description

本発明は、体内のミトコンドリア機能の亢進作用をもたらす薬剤、酸化ストレスを低減する薬剤および抗老化作用をもたらす薬剤に関し、更に詳細には、乳酸を含有する体内のミトコンドリア機能亢進剤、酸化ストレス低減剤および抗老化剤に関する。

加齢、精神的ストレス、喫煙、飲酒などを含めた食環境などによる体内の活性酸素・フリーラジカルの増加は、ミトコンドリア機能を低下させ、生理的老化の原因になる。また、ミトコンドリア機能の低下は、内臓脂肪肥満（ＭＳ;metabolic syndromes）症候群・予備軍等の疾患を誘起する原因になる。

ミトコンドリア機能の低下による生理的老化を抑制する薬剤としては、カテキン類を有効成分とするもの（例えば、特許文献１）、丹参の水抽出物又は冠元顆粒を有効成分とするものがある（例えば、特許文献２）。ミトコンドリア機能の向上によってエネルギ消費や脂肪燃焼を促進させる薬剤としては、脂肪球皮膜成分を有効成分とするものがある（例えば、特許文献３）。

特開２００８−６３３１８号公報特開２００６−２８１５５号公報特開２０１１−１５７３２９号公報

本発明者らが、体内のミトコンドリア機能亢進や酸化ストレス低減あるいは抗老化に関して、天然由来で、食経験が豊富で、安全性が高い有効成分を探索する研究を行った結果、糖類を原料に乳酸菌を加えて発酵して産生したオリゴ乳酸に、体内のミトコンドリア機能亢進効果や酸化ストレス低減効果あるいは抗老化効果があることを見出した。

本発明が解決しようとする課題は、上述の知見に基づいて、体内のミトコンドリア機能亢進作用をもたらす安全性が高い薬剤、酸化ストレスを低減する安全性が高い薬剤、あるいは抗老化作用をもたらす安全性が高い薬剤を提供することである。

本発明によるミトコンドリア機能に亢進作用をもたらす薬剤は、Ｌ−乳酸を加熱縮合して得られたオリゴ乳酸を有効成分とする。

本発明による酸化ストレスを低減する薬剤は、Ｌ−乳酸を加熱縮合して得られたオリゴ乳酸を有効成分とする。

本発明による体内の抗老化作用をもたらす薬剤は、Ｌ−乳酸を加熱縮合して得られたオリゴ乳酸を有効成分とする。

本発明による薬剤は、Ｌ−乳酸を加熱縮合して得られたオリゴ乳酸を有効成分としているから、細胞内のミトコンドリア機能を亢進し、体内の酸化ストレスを低減し、抗老化（アンチエイジング）作用により、長寿に向けて健全な身体を保つことに大きな効果を奏する。

ＣｏＱＨ活性の変化量を示すグラフ。ｔｏｔａｌ（ＣｏＱＨ＋ＣｏＱ_１０）活性の変化量を示すグラフ。ｄ−ＲＯＭｓの変化量を示すグラフ。ＢＡＰの変化量を示すグラフ。

本発明による体内のミトコンドリア機能に亢進作用をもたらす薬剤、酸化ストレスを低減する薬剤、あるいは抗老化作用をもたらす薬剤は、Ｌ−乳酸を加熱縮合して得られたオリゴ乳酸を有効成分としている。

Ｌ−乳酸は、糖類を天然発酵させて産生したものと、化学的合成法によって製造したものとの何れであってもよく、好ましくは、甘藷（サトウダイコン）、とうもろこし等の天然の単糖類を原料に、乳酸菌を加えて発酵して産生した単糖類由来のＬ−乳酸である。発酵産生するための乳酸菌としては、Ｌ−乳酸のみを生成するものが好ましい。

オリゴ乳酸は、このようなＬ−乳酸を一定条件下で加熱縮合することにより得られる乳酸縮合物であり、加熱縮合によってＬ−乳酸がエステル結合したオリゴマーである。

本発明による薬剤の有効成分であるオリゴ乳酸は、別の面からみれば、特許第３６５２８６５号に記載の乳酸縮合物の混合物であり、乳酸を加熱縮合することにより得られ、下記の条件で高速液体クロマトグラフィーを行なった時に総ピーク面積に対して乳酸のピーク面積が２０％以下となり、且つ、溶出開始後３分経過する時点から２０分経過する時点までの間に現れる全分画のピーク面積が３０％以上となる組成を有する乳酸縮合物の混合物である。

［高速液体クロマトグラフィーの条件］
（１）カラム：内径４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍのＯＤＳカラムを用いる。
（２）溶離液：トリフルオロ酢酸を０．００２重量％の割合で溶解した蒸留水（Ａ液）とアセトニトリル（Ｂ液）を組み合わせて用いる。
（３）溶出プログラム：溶出開始（０分）から５分経過する時点まではＡ液／Ｂ液＝７５容量％／２５容量％の一定比率で溶離液を流し、溶出開始後５分経過する時点から３５分経過する時点まではＡ液／Ｂ液＝７５容量％／２５容量％からＡ液／Ｂ液＝０容量％／１００容量％に変化するリニアグラジュエント溶出を行ない、溶出開始後３５分経過する時点から４０分経過する時点まではＡ液／Ｂ液＝０容量％／１００容量％の一定比率で溶離液を流す。
（４）溶離液の流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
（５）検出：２１０ｎｍの紫外波長を用いた紫外吸光法により検出する。

本発明薬剤のＭＳ・予備軍の日本人男性に対するミトコンドリア機能の亢進作用、その亢進作用に関連する酸化ストレス度及び抗酸化力の変動について臨床試験によって検証した。

この臨床試験は、麹町クリニック（東京都千代田区麹町）の倫理審査委員会（ＩＲＢ）で承認を受けた試験の倫理性、試験方法の妥当性等を遵守した上で、被験者には「ヘルシンキ宣言」の精神を遵守し、試験内容を事前に十分に説明後、文書による本試験参加の同意を得て「壮年期日本男性（５５歳〜６４歳）の内臓脂肪肥満予備軍に対するオリゴ乳酸の二重盲検比較試験」についてとして、当該医院で実施した。

試験対象者は，有限会社カンズ研究開発（東京都渋谷区）が会員募集したMS予備軍を自覚する以外は特に健康上の問題ない健常な５５歳〜６４歳（年齢は被験剤の非摂食・スクリーニング検査時の同意取得日のものとする）の壮年期日本人男性（各群２０名、計４０名）から試験スケジュールに基づき選定された２２名を対象に、試験剤（オリゴ乳酸摂取）群及び対照剤（プラセボ錠：株式会社ＧＬＡＲＴ製造）群の２群を、３ケ月間（３００ｍｇ相当/日）連続摂取での比較試験を行った。本試験での中止、脱落者はいなかった。３００ｍｇ相当/日は、Ｌ−乳酸を加熱縮合して得られたオリゴ乳酸を３７.５ｍｇ含有した裸錠（ＧＬ−１２０８：株式会社ＧＬＡＲＴ製造）８錠/日（朝晩４錠毎２回）を３ヶ月間連続摂取する。

内臓脂肪肥満（ＭＳ）は、脂質代謝異常、高血圧症や糖尿病と内臓脂肪肥満などの複合病症候群で、臨床試験の計画立案が基本的に困難であるため、各症を均等に割り振ったＭＳ予備軍（母集団）を無作為に割り付け、オリゴ乳酸摂取の試験剤群と非摂取のプラセボ群の２群で、症例数を極力少なく設定し、二重盲検（並行群間）比較試験とした。症例数が（1群１１１例、２群比較）少ないことによる統計的過誤を想定し、パラメトリック・ノンパラメトリック検定法など種々の探索的統計解析を行った。

３群以上の比較対象で検定すると、帰無仮説が複数個になり、検定の多重性の問題が生じるため、多重性を配慮した二標本のｔ検定を行った。
（１）二標本検定（分散分析、ｔ検定、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定）；群間比較
（２）二標本検定（一元配置の分散分析、平均値のt検定）；群内比較

壮年期（５５歳〜６４歳）ＭＳの健常日本人に、オリゴ乳酸３００ｍｇ相当/日の３ヶ月間連続摂取と同一条件による同プラセボ群の摂取との二重盲検並行群間比較試験を実施し、一般の血液検査（肝臓器機能、腎臓機能、血糖値及び血圧ほか）に加えて、ミトコンドリア機能試験として血中のＣｏＱＨ（ユビキノール；ＣｏＱ_１０の前駆体）とＣｏＱ_１０（ユビキノン）の活性測定により、両者活性の総和活性を検討することでミトコンドリア機能を表現できることから主要評価試験とした。また、細胞内の酸化ストレス度測定（ｄ−ＲＯＭｓテスト）及び抗酸化力（ＢＡＰテスト）の変動を測定してオリゴ乳酸摂取による影響を検討した。試験スケジュールは表１に示されている。

この臨床試験の結果は、以下の通りである。
（１）２標本検定（分散分析、ｔ検定、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定）；群間比較では、ミトコンドリア機能の亢進度合いを示すＣｏＱＨ活性およびｔｏｔａｌ（ＣｏＱＨ＋ＣｏＱ_１０）活性が、各々図１および図２に示されているように、有意（ｐ＜０．０５）に向上することを示した。表２はＣｏＱＨ活性の変化量を、表３はｔｏｔａｌの変化量を各々示している。

（２）２標本検定（一元配置の分散分析、平均値のt検定）；群内比較では、ｄ−ＲＯＭｓ(酸化ストレス度測定)が、図３に示されているように、有意（ｐ＜０．０５）に低下することを示した。表４はｄ−ＲＯＭｓの変化量を示している。

ｄ−ＲＯＭｓ（ＲｅａｃｔｉｖｅＯｘｙｇｅｎＭｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ;酸化ストレス度測定）法とは、「生体の酸化反応と抗酸化反応のバランスが崩れ酸化状態に傾き、生体が酸化的障害を起こすこと」で、臨床試験に適応される本試験の「ｄ−ＲＯＭｓ」は、活性酸素・フリーラジカルにより酸化反応を受けた脂質・たんぱく質・アミノ酸・核酸の総称で、検体中のヒドロペルオキシド（ＲＯＯＨ）濃度を測定し、生体の酸化ストレス度を求める試験法である。

（３）ＢＡＰ（抗酸化力測定）は、図４および表５に示されているように、有意変動を示さなかった。

ＢＡＰ（ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔＰｏｔｅｎｔｉａｌ；抗酸化力測定）法とは、「生体の血漿中には、内因性抗酸化物質と植物性抗酸化物質等の外因性抗酸化物質があり、試験検体の抗酸化力（ＢＡＰ）の有無・強度を判断する測定法」で、臨床試験に適応されている。

以上より、当該オリゴ乳酸は、ＭＳ・予備軍の日本人男性に対するミトコンドリア機能の亢進により、酸化ストレス度（体内の活性酸素・フリーラジカル除去作用＝アンチエイジングの抗老化作用）の低下を惹き起こすことが立証された。しかし、当該オリゴ乳酸にはトコフェロール、アスコルビン酸、カロテン、フラボノイド、ポリフェノールのような抗酸化力はないことも併せて立証された。

結論として、試験結果から、ＣｏＱＨ活性およびｔｏｔａｌ（ＣｏＱＨ＋ＣｏＱ_１０）活性が向上したことが分かり、ミトコンドリア機能が亢進したと考えられる。また、このミトコンドリア機能亢進が（ｄ−ＲＯＭｓ試験による）酸化ストレス度を有意に低下したと考えられる。これらのことによりオリゴ乳酸は、ＭＳ・予備軍の日本人男性に対するミトコンドリア機能の亢進が、酸化ストレス度の低下（活性酸素・フリーラジカルの除去）作用を惹き起こし、抗老化（アンチエイジング）作用により、生活習慣病のＭＳ肥満症の改善・予防に寄与することが期待される。

Claims

Ｌ−乳酸の縮合物であるオリゴ乳酸を有効成分とする血中のユビキノール活性化剤。
Ｌ−乳酸の縮合物であるオリゴ乳酸を有効成分とする体内の酸化ストレス度低減剤。